CN103181954B - 一种治疗神经退行性疾病的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药技术领域，具体提供了一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，原料药由黄芩、川芎和当归组成，其重量配比范围为黄芩25-40重量份，川芎18-30重量份，当归6-10重量份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和具体用途。本发明药物组合经药效实验证明能够试验组对小鼠痴呆模型、血管性大鼠痴呆模型、小鼠软脑膜微循环等模型的相关客观指标，对中枢神经系统退行性病变具有较好的治疗作用。

Description

一种治疗神经退行性疾病的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，尤其是涉及一种治疗和缓解老年痴呆、血管性痴呆或轻度认知障碍症的药物组合物及其制备方法和用途，属于中药技术领域。

背景技术

老年痴呆是指由于多种原因引起的，以认知功能缺损为主要临床表现的老年疾病，是一种临床综合征。近年来，随着世界各国人口的老龄化，老年痴呆症的发病率呈急剧上升趋势，其死亡率仅次于心脏病、肿瘤和中风而位居第4位。据统计，在我国60岁以上人口中患病率约5％，约600万，并随年龄增高而增加。老年性痴呆的病理变化，在形态上主要表现为大脑皮质明显萎缩，以额叶、颞叶、顶叶为主。脑回萎缩变窄，脑沟增宽，脑室扩大；主要的组织病理学变化是在大脑细胞外出现了由β-淀粉样蛋白的42个氨基酸肽的亚型(即Aβ42)聚集形成的淀粉样斑块(老年斑)(SP)，以及在神经元内出现了由细胞微管和过度磷酸化的Tau蛋白构成的神经纤维缠结（NFT）。由于β-淀粉样蛋白的产生增多或清除减少，聚集的β-淀粉样蛋白启动了一系列在神经退行性变性与痴呆发病中的病理过程，即淀粉样蛋白假说。Aβ42的聚集导致了淀粉样斑块的形成，并启动一系列与神经元和突触功能异常、炎性反应、Tau蛋白的过度磷酸化、神经纤维缠结形成、神经元死亡、神经递质异常相关的改变，最终导致痴呆的发生。老年性痴呆临床以意识模糊、记忆缺损、人格和语言障碍为主要表现。

现代医学对老年性痴呆的病因及发病机制已经进行了多年的研究，但因其病因复杂，至今对其具体环节尚未明了，目前对老年性痴呆的病因和发病机制的认识主要集中于遗传和环境因素所引起的脑内慢性炎症和胆碱能系统功能进行性下降，主要的较具代表性的学说有:胆碱能学说、自由基损伤学说、钙超载学说及中医的血流变学说等。在治疗时常常选用胆碱酯酶抑制剂、谷氨酸受体拮抗剂、脑血管扩张剂、脑代谢复活药物及中医中药进行综合治疗。

中医学对老年性痴呆病位、病因、病机已有全面认识，中医辨证论治理论认为无论血管性痴呆或阿尔茨海默病都主要表现为“神”的病变，认为痰浊、瘀血是加速脑衰老导致老年痴呆的重要因素，心肾不足、气虚血亏、阴损精衰是发病的核心，而痰瘀火邪的作用只是发病的重要因素。在治疗时常常选用滋补肝肾、活血化瘀和化痰通络的复方进行治疗。在临床上取得了满意的临床疗效，且具有毒副作用小的优势。

申请号201010217290.7中公布了一种治疗中枢神经系统退行性病变的药物组合物及制备方法和用途，其药物组合物包括黄芩、川芎和当归三味药。该专利申请根据临床常规生药用量，采用正交试验设计方案，认为黄芩、川芎、当归的配伍比例（15：10：10）是最佳比例，认为黄芪剂量恒定时，川芎和当归进行等比配伍时疗效最好；但是药物组方的疗效往往受剂量配比，疾病变异及机体对药物敏感性等因素的影响，故根据常规生药用量计算得到的最佳配比还有待进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种治疗中枢神经系统退行性病变的药物组合物，该药物组合物的配比能提高黄芩、川芎和当归三味药物的治疗作用而起到协同增效的作用。该药物组合物是由以下原料及重量比组成：黄芩25-40重量份，川芎18-30份，当归6-10份；优选地，黄芩30重量份，川芎18重量份，当归6重量份；优选地，黄芩30重量份，川芎20重量份，当归8重量份；优选地，黄芩35重量份，川芎20重量份，当归10重量份。

本发明的目的还在于提供一种制备本发明药物组合物制备方法，它包括以下步骤：

S1：按组分及重量比称取原料；

S2：将原料混合均匀后，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

本发明的药物组合物可以根据制药领域的常规方法制备成任何一种药剂学上所述的剂型；药物组合物可以通过口服、吸入或肠外给药等方式施用于患者。

所述的药学上常用的药物制剂类型包括：口服给药时使用的片剂、泡腾片、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆、口服液等；在肠外给药时使用的冻干粉针及注射液等。

所述的药用辅料包括：淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

该药物组合物用于在制备治疗和缓解中枢神经系统退行性病变药物中的用途。

该药物组合物用于在制备治疗和缓解老年痴呆、血管性痴呆或认知障碍症药物中的用途。

本发明药物组合物经过药效学验证的有益效果是：

本发明药物组合物的剂量配比能提高黄芩、川芎和当归三味药物的疗效而起到协同增效的作用，该剂量范围与现有的剂量配比相比其疗效更为优越，且克服了常规用药剂量的偏见。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1

称取原料黄芩250g，川芎180g，当归60g，加入辅料淀粉500g制粒，硬脂酸镁10g，糊精250g、微晶纤维素250g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例2

称取原料黄芩300g，川芎180g，当归60g，加入辅料淀粉500g制粒，硬脂酸镁10g，糊精250g、微晶纤维素250g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例3

称取原料黄芩300g，川芎200g，当归80g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁12g，糊精260g、微晶纤维素260g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例4

称取原料黄芩350g，川芎200g，当归100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁15g，糊精280g、微晶纤维素280g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例5

称取原料黄芩400g，川芎300g，当归100g，加入辅料淀粉800g制粒，硬脂酸镁20g，糊精300g、微晶纤维素300g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例6

称取原料黄芩250g，川芎180g，当归60g，加入辅料淀粉500g制粒，硬脂酸镁10g，糊精250g、微晶纤维素250g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例7

称取原料黄芩300g，川芎180g，当归60g，加入辅料淀粉500g制粒，硬脂酸镁10g，糊精250g、微晶纤维素250g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例8

称取原料黄芩300g，川芎200g，当归80g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁12g，糊精260g、微晶纤维素260g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例9

称取原料黄芩350g，川芎200g，当归100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁15g，糊精280g、微晶纤维素280g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例10

称取原料黄芩400g，川芎300g，当归100g，加入辅料淀粉800g制粒，硬脂酸镁20g，糊精300g、微晶纤维素300g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

下面通过具体的药学试验来证明本发明的有益效果：

一、本发明药物对抗东莨菪碱致拟痴呆小鼠的试验

1实验材料

1.1实验动物

KM小鼠70只，体重20±2g，鼠龄45～50天，雌雄各半，均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物许可证号：SCXK(川)2008-24，在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

1.2药品与试剂

安理申（盐酸多奈哌齐片），卫材（中国）药业有限公司生产，批号080709。氢溴酸东莨菪碱液（SCOP），上海禾丰制药有限公司生产，批号6A18007。ACHE试剂盒，南京建成生物工程所，批号20090606。

1.3实验主要仪器及试剂：

DT-200小鼠跳台测试仪（及测试箱），成都泰盟科技有限公司

BA-200自动避暗测试仪（及测试箱），成都泰盟科技有限公司

2实验方法

2.1分组及处理

KM小鼠，雌雄各半，按体重及性别随机分为正常对照组、模型对照组、安理申阳性对照组、试验A组（黄芩:川芎:当归＝15：10：10）、试验B组（黄芩:川芎:当归＝30：18：6）、试验C组（黄芩:川芎:当归＝30：20：8）、试验D组（黄芩:川芎:当归＝35：20：10）。各组动物按0.2ml/10g体重/天ig给药。避暗、跳台实验组各组小鼠分别于第14日给药后50min，除空白对照组外，其余各组小鼠在避暗训练、跳台训练前10min，ip给予SCOP2mg/kg体重（0.1ml/10g体重），造成小鼠记忆获得障碍模型。空白对照组ip等量的N.S。各组小鼠在行为学试验结束时，立刻取脑组织，制备脑匀浆，按AchE试剂盒步骤说明测定各组小鼠全脑AchE活性。

2.2小鼠学习记忆能力测试

2.2.1避暗法

（1）避暗训练：避暗试验组小鼠于实验第14日ig给药或蒸馏水50min后，除空白对照组外，其余各组小鼠ip.SCOP造模，造模后10min后将动物背对洞口放入避暗箱明室，适应3min，通36V交流电，即刻计时，记录5min内各动物的潜伏期和错误次数。

（2）避暗测试：避暗组小鼠于实验第15日（避暗训练24小时后）ig给药或N.S60min后，同上法将小鼠放入避暗箱明室，同时通36V交流电、计时，记录5min内各动物的潜伏期和错误次数。

2.2.2跳台法

（1）跳台训练：跳台试验组小鼠于实验第14日ig给药或N.S50min后，采用与避暗实验相同的方法造小鼠记忆获得障碍模型，10min后将各组小鼠放跳台上，适应3min，然后给予32V交流电，即刻计时，记录动物5min内的潜伏期和错误次数。

（2）跳台测试：跳台组小鼠于实验第15日（跳台训练24小时后），ig给药或N.S60min后，同上法将小鼠放于跳台上，同时给予32V交流电、并计时，记录动物5min内的潜伏期和错误次数。

2.3统计学处理

应用SPSS15.0统计软件进行数据统计处理。

3.结果

3.1对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响（避暗法）

表1药物对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响（避暗法）

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由表1可知，与模型对照组比较，药物各剂量组、安理申组能显著延长小鼠的潜伏期（p<0.05），并减少5min内小鼠的错误次数（p<0.05），其中试验B组的疗效最为显著。

3.2配伍组方（SZ）对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响（跳台法）

表2药物组方对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响（跳台法）

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由表2可知，与模型对照组比较，药物各剂量组、安理申组能显著延长小鼠的潜伏期（p<0.05），并减少5min内小鼠的错误次数（p<0.05），其中试验B组疗效最为显著。

3.3对记忆获得障碍小鼠脑组织AchE活性的影响

表3药物组方对SCOP致记忆障碍模型小鼠脑内AchE活性的影响

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由见表3可知，与模型对照组比较，药物各剂量组、安理申组能显著降低AchE活性（p<0.05）。

4结论

本发明药物组合物能显著提高东莨菪碱所致拟痴呆小鼠学习记忆能力，降低脑组织ACHE活性，其中试验B、C、D组的疗效优于试验A组的疗效。

二、本发明药物组合物抗血管性痴呆模型的试验

1实验材料

1.1实验动物：

SD大鼠，雌雄各半，SPF级，350-500g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物许可证号：SCXK(川)2008－24，在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

1.2药品与试剂：

尼莫地平片，江苏聚荣制药集团有限公司制造，批号080218;MDA、MAO试剂盒，南京建成生物工程所，批号20091106、20091107。

1.3实验主要仪器：

MT-200水迷宫，成都泰盟科技有限公司

2实验方法

2.1模型制备

大鼠采用2-VO法永久性结扎双侧颈总动脉，空白组只分离双侧颈总动脉，不结扎，术后每只大鼠每天im注射用青霉素钠10万单位抗感染，共3天，术中注意补水，术后注意保温，术后自由饲养一月后动物进行分组给药。

2.2分组与给药

造模大鼠SD大鼠60只，按体重分层随机分为模型对照组、尼莫地平阳性对照组、试验A组（黄芩:川芎:当归＝15：10：10）、试验B组（黄芩:川芎:当归＝30：18：6）、试验C组（黄芩:川芎:当归＝30：20：8）、试验D组（黄芩:川芎:当归＝35：20：10），另取10只同批大鼠作为空白对照组，各组动物按1ml/100g体重/天ig给药，模型对照组、空白对照组给予等量生理盐水，连续给药15日，于实验第11日给药后开始进行水迷宫行为学试验，前4天进行定位航行实验，第5天去平台进行空间搜索实验。

2.3Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力

MT-200水迷宫水池平分为4个象限，平台位于SW象限中央，水温24℃，水面高于平台1.5cm，水中加牛奶至不透明，大鼠每日于SW象限中间位置面向池壁入水，实验时间为120s，前4天定位航行，由仪器自动记录其潜伏期，平台停留时间、平台停留距离，经过平台次数，若大鼠在120s未找到平台，计为120s，实验后所有大鼠均台上停10s以增强记忆；实验共5天，第五天去平台，进行空间搜索实验，时间为120s，空间搜索中，手动记录其潜伏期，并由仪器自动记录其经过平台次数、平台停留时间、平台停留距离。结果见表4。

2.4大鼠海马、血清MDA含量、MAO活性的测定

各组动物学习记忆行为学试验测试结束后，立即取海马组织冻存备用，取血并分离血清，按试剂盒说明进行大鼠海马、血清MDA含量与MAO活性的检测。结果见表5和表6。

3实验结果

3.1药物对鼠空间搜索能力的影响

表4药物组方对VD模型大鼠空间学习记忆能力的影响

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由表4可知，与模型对照组比较，药物各剂量组能显著缩短大鼠的逃避潜伏期（p<0.01），并增加120s内大鼠的经过平台次数（p<0.05）、平台停留时间（p<0.05）、平台停留距离（p<0.05）。3.2对大鼠海马组织、血清MDA含量、MAO活性的影响

表5对大鼠海马组织MDA含量、MAO活性的影响

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

表6对大鼠血清MDA含量、MAO活性的影响

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由表5和表6可知，与模型对照组比较，药物各剂量组、尼莫地平组能显著降低大鼠海马组织、血清MDA含量、MAO活性（p<0.05；p<0.01）。

4、结论

本发明药物组合物可以显著提高血管性痴呆模型的学习记忆能力，降低海马组织和血清中MDA及MAO的活性，其中试验B、C、D组的疗效优于试验A组的疗效，试验B组的疗效最为显著。

三、本发明药物组合物对小鼠软脑膜微循环试验

1实验材料

1.1实验动物：

KM小鼠60只，体重20±2g，鼠龄45～50天，雌雄各半，均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物许可证号：SCXK(川)2008-24，在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

1.2药品与试剂：

尼莫地平片，江苏聚荣制药集团有限公司制造，批号080218;重酒石酸去甲肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司出品，批号：0360602；

1.3实验主要仪器及试剂：

XTW-CTV微循环彩色电视显微镜，北京泰克仪器有限公司生产；

2实验方法

取小鼠72只，分为6组，即空白对照组、尼莫地平对照组、试验A组（黄芩:川芎:当归＝15：10：10）、试验B组（黄芩:川芎:当归＝30：18：6）、试验C组（黄芩:川芎:当归＝30：20：8）、试验D组（黄芩:川芎:当归＝35：20：10），每组12只。连续给药7天后，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉后，腹卧位头部固定，颅顶正中皮肤“T”型切开，以矢状缝外3mm，冠状缝下3mm为中心，用手术刀片掀开颅骨，暴露软脑膜，形成一个直径约5mm的颅窗，加入生理盐水20ul,术后稳定30min后开始试验，整个试验过程保持动物体温37℃。将实验动物置于微循环显微镜下选择直径为30～50um微动脉血管，稳定30min，测管径大小，再滴加0.1％NA10ul，用XTW-CTV微循环彩色电视显微镜借助于JS接目测微计连续观察滴加NA后3、9min时微动脉血管管径大小的变化。同时观察正常软脑膜及滴加0.1％NA后微循环的血色、每视野交织网点数目。结果见表7、8。

3实验结果

3.1药物对小鼠软脑膜微动脉血管管径的影响

表7对小鼠软脑膜微动脉血管管径的影响

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

表8对小鼠软脑膜微血管交织网点数目的影响（每视野

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表7～8可见药物试验A组、试验B组、试验C组及试验D组相对于空白对照组而言均可不同程度改善由去甲肾上腺素所致的大鼠软脑膜局部微循环障碍，使微动脉血管扩张，血流增快，每视野交织网点数增多。但是试验B组、试验C组及试验D组的治疗效果明显优于试验A组，其中试验B组的治疗效果最好。

综上所述，单纯的增加或减少黄芩、川芎和当归三者之间剂量时，其疗效较差，当在川芎剂量恒定时，增加黄芪的剂量，同时需减少当归的剂量，且在上述配比范围内其疗效最佳。

四、本发明药物组合物抗Aβ海马注射痴呆大鼠模型的试验

1.实验部分

1.1仪器、试药和动物

根据前述试验选用最佳配比黄芩:川芎:当归＝30：18：6的比例制作本发明药物组合物，每片含4.5g原生药，成人每次2片，tid，自制，批号：20100304；盐酸多奈哌齐（安理申），卫材（中国）制药有限公司生产，批号：100319A。SPF级SD大鼠，3～4月龄，♀♂兼用各半，体重200±20g[四川省医学科学院实验动物研究所，动物许可证号：SCXK(川)2008-24；实验场地为国家中医药管理局成都中医药大学中药药理三级实验室，编号：TCM2032043]。大鼠均在室温22～24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。淀粉样蛋白片段(Aβ_25-35，SIGMA公司)；MT-200Morris水迷宫（成都泰盟科技有限公司）。

1.2方法与结果

1.2.1Aβ老化处理与模型制备

Aβ_25-35溶入生理盐水（终浓度为2μg·μL^－1），37℃恒温箱孵育72h老化备用。将大鼠用0.3%戊巴比妥钠麻醉（30mg·kg^－1，ip）后，备皮，将大鼠固定在脑立体定位仪上，用碘伏和75%酒精常规消毒头皮后，用无菌手术刀在大鼠头皮正中线处切开一长约1.5cm纵行切口，暴露前囟，钝性分离皮下组织及骨膜，然后根据大鼠脑立体定位图谱，先在大鼠前囟后3.0mm，右侧2.0mm处用无菌牙科钻钻开颅骨，用5μL微量进样器自颅骨开孔处进入大鼠右侧海马背部，进针深度3.3mm，缓慢匀速注射5μL凝聚态Aβ_25-35，注射速度为1ul·min^－1，5min注射完毕，留针2min，缓慢撤针；同样方法在左侧海马背部注射5μL凝聚态Aβ_25-35，造成拟痴呆大鼠模型。术后缝合创口，消毒，假手术组注射等容积的生理盐水，术后自由饲养一周。

1.2.2分组及给药

将存活的50只模型动物按照体重随机均分为5组，即模型对照组、安里申阳性组（1.4mg·kg^－1）和本发明药物高剂量组（7.56g生药·kg^－1）、中剂量组（3.78g生药·kg^－1）和低剂量组（1.89g生药·kg^－1），另取同批次10只正常大鼠，同样操作方法，两侧海马背部各注射5μL生理盐水作为空白对照组。除空白对照组和模型对照组大鼠ig给予等体积的生理盐水外，其余各组大鼠ig相应的药物，给药体积为10ml·kg^－1体重，qd，连续ig给药90d。

1.2.3Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力

定向航行和空间探索参考文献进行，分别记录2min内的逃避潜伏期和第一相限停留时间、平台停留时间及经过平台次数，结果见表9和表10。

表9本发明药物组合物对Aβ注射模型逃避潜伏期的影响

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

表10本发明药物组合物对Aβ注射模型空间探索的影响

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

由表9和表10可知：模型组与空白组比较，逃避潜伏期和第三象限时间均显著延长，第一相限时间和有效区停留时间均显著缩短，有显著的统计学意义（P<0.05）；给药组与模型组比较，本发明药物组合物高、中、低剂量组逃避潜伏期训练第3天和第5天较模型对照组显著缩短，第三象限时间较模型对照组显著缩短，第一相限时间和有效区停留时间则显著延长，有显著的统计学意义（P<0.05）。提示本发明药物组合物具有改善模型大鼠学习记忆的功能的作用。

五、本发明药物组合物对Aβ海马注射痴呆大鼠突触素表达的影响试验

1实验材料

1.1实验药物

根据前述试验选用最佳配比黄芩:川芎:当归＝30：18：6的比例制作本发明药物组合物，4.5g原生药/片，成人2片/次，3次/日，由本课题组自制，制剂为中试样品，批号：20100304；盐酸多奈哌齐（安理申），卫材（中国）制药有限公司生产，批号：100319A。

1.2实验动物

SD大鼠，SPF级，3～4月龄，雌雄各半，体重200±20g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK(川)2008-24;实验场地为国家中医药管理局成都中医药大学中药药理三级实验室，编号：TCM2032043。大鼠均在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

1.3实验试剂

淀粉样蛋白片段(Aβ_25-35)，SIGMA公司产品；SYP一抗：bs-3501R，兔抗大鼠IgG，北京博奥森生物技术有限公司；二抗、三抗和DAB显示试剂盒均由北京中山金桥生物有限公司生产。

1.4实验仪器

MT-200Morris水迷宫，由成都泰盟科技有限公司生产。Image-ProPlus6.0图像分析系统，美国MediaCybernetics,Inc.。

2.实验方法

2.1模型制备

2.1.1Aβ老化处理

Aβ_25-35溶入0.9%生理盐水（终浓度为2μg/μL），37℃恒温箱孵育72小时老化备用。

2.1.2模型制备

将大鼠用0.3%戊巴比妥钠腹腔内麻醉（30mg/kg，ip）后，备皮，将大鼠固定在脑立体定位仪上，用碘伏和75%酒精常规消毒头皮后，用无菌手术刀在大鼠头皮正中线处切开一长约1.5cm纵行切口，暴露前囟，钝性分离皮下组织及骨膜，然后根据大鼠脑立体定位图谱，先在大鼠前囟后3.0mm，右侧2.0mm处用无菌牙科钻钻开颅骨，用5μL微量进样器自颅骨开孔处进入大鼠右侧海马背部，进针深度3.3mm，缓慢匀速注射5μL凝聚态Aβ25-35，注射速度为1ul/min，于5min注射完毕，留针2min，缓慢撤针；同样方法在左侧海马背部注射5μL凝聚态Aβ_25-35，造成拟痴呆大鼠模型。术后缝合创口，消毒，假手术组注射等容积的生理盐水，术后自由饲养一周。

2.2分组及给药

将存活的模型动物按照体重随机分为5组，即模型对照组、安里申阳性对照组和本发明药物组合物高、中、低剂量组，每组10只，另取同批次10只正常大鼠，同样操作方法，海马背部注射5μL生理盐水作为空白对照组。除空白对照组和模型对照组大鼠灌胃给予等体积的生理盐水外，其余各组大鼠灌胃相应的药物，给药体积为10ml/kg体重，每天1次，连续灌胃给药90天。

2.3Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力

定向航行和空间探索参考文献进行，分别记录逃避潜伏期和第一相限停留时间、平台停留时间及经过平台次数，结果见表11和表12。

2.4标本制备和突触素表达水平检测

末次给药24h后，处死大鼠，无菌条件下取出脑组织，常规固定，泡蔗糖溶液后，行连续冠状切片，片厚约20～30μm，每隔5片取2片，切片反复漂洗后SP法行免疫组织化学反应。具体方法参照说明书进行。选取海马切片采用Image-ProPlus6.0图像分析系统进行图像分析，每例标本测5张切片，每张切片的每个测定部位随机选取三个视野，取平均值。所有平均光密度（AOD）值测定均在相同的光学条件下完成。阳性：棕黄色-黄色表达于细胞浆，阴性细胞核为蓝色，结果见表13。

2.5统计学分析

数据以“均数±标准差”

表示，各组数据呈正态分布进行单因素方差分析（one-wayANOVA），方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t’检验。

3实验结果

3.1本发明药物组合物对AD模型学习记忆能力的影响

表11本发明药物组合物对Aβ注射模型逃避潜伏期的影响

注：与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01

表12本发明药物组合物对Aβ注射模型空间探索的影响逃避潜伏期的影响

注：与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01

由表11和表12可知，模型对照组与空白对照组比较，逃避潜伏期显著延长，第一相限时间和平台停留时间显著缩短，经过平台次数显著减少，有显著的统计学意义（P<0.05）；给药组与模型组比较，本发明药物组合物高、中、低剂量组逃避潜伏期较模型对照组显著缩短，经过平台次数显著增多，第一相限时间和平台停留时间显著延长，有显著的统计学意义（P<0.05），提示本发明药物组合物具有改善模型大鼠学习记忆的功能的作用。

3.2.2本发明药物组合物对AD模型海马突触素平均光密度的影响

表13本发明药物组合物对Aβ注射模型海马突触素平均光密度的影响

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表13可知，与空白对照组比较，模型对照组SYP平均光密度值显著降低，有显著的统计学意义（P<0.05）；本发明药物组合物高、中、低剂量组与与模型对照组比较，各组平均光密度值均较模型组显著增高（P<0.01），各剂量组间无统计学意义（P>0.05），提示本发明药物组合物有促进突触重塑的作用。

Claims (1)

1.一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于：它是由以下原料及重量比组成：黄芩30重量份，川芎18重量份，当归6重量份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物中加入药学上可接受的药用辅料，所述药用辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

3.根据权利要求1所述的一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物中加入药学上可接受的药用辅料制备成片剂、泡腾片、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂或口服液。

4.根据权利要求1所述的一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物在制备治疗神经退行性疾病药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于：所述神经退行性疾病为老年痴呆、血管性痴呆或认知障碍症。