CN103173420A - 可分泌抗心肌肌钙蛋白i单抗的杂交瘤细胞及应用 - Google Patents
可分泌抗心肌肌钙蛋白i单抗的杂交瘤细胞及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种可快速简便的应用于hcTnI检测的可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞、其分泌的单克隆抗体及在检测心肌肌钙蛋白I领域的应用。该杂交瘤细胞，保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心（即中国典型培养物保藏中心），保藏号是CCTCC No：C201317。上述杂交瘤细胞的分泌产量高，其分泌得到的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点，可广泛应用在制备心肌肌钙蛋白I的检测领域，如检测试剂或检测设备的制备领域等，在特异性、灵敏度和检测率等方面较之传统的检测方法具有显著的优势。
Description
技术领域
本发明涉及心肌肌钙蛋白I免疫检测领域，尤其是涉及一种可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞及应用。
背景技术
20世纪80年代前，世界卫生组织(WHO)一直将心肌酶谱活性作为急性心肌梗死(AMI)的诊断标准之一。20世纪80年代末，科研人员发现，肌钙蛋白(troponin，Tn)的敏感性和特异性高于磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶和天冬氨酸氨基转移酶等生物标志物。心肌肌钙蛋白I（cTnI）仅存于心肌，是心肌细胞的标志物，其异常改变可影响心脏的舒缩功能，并可用于诊断心肌坏死，判断心肌损伤等，成为心肌细胞损伤敏感性和特异性最强的标志物之一，是公认的快速诊断AMI和急性冠脉综合征(acute coronarysyndromes，ACS)以及协助ACS危险分层和反映其预后的主要生化标志。
正常人血液中cTnI含量一般低于0.3μg/L。当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时，游离的cTnI可迅速透过细胞膜进入血流。因此，在发病初期快速、灵敏且准确的测定人血中的cTnI及其变化趋势对急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。然而传统的ELISA法存在测定周期偏长、灵敏度相对低、线性范围偏窄等诸多不足；化学发光法和酶联荧光分析法灵敏度高，特异性好，但是需要专用设备，使用不方便，投入也比较大。
单克隆抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系，生产出针对复杂生物混合物中的特定分子的抗体，可用于分离、分析及纯化该特定分子抗原；其试剂可用于临床诊断和治疗。研究发现，人cTnI(hcTnI)是一种全α型蛋白质，有五个螺旋区域，呈伸展式构型，其抗体识别相应抗原表位不依赖于蛋白质的三级结构，使其大部分氨基酸序列易被免疫系统识别。cTnI合成肽与多种单抗的反应表明，该蛋白质中绝大多数氨基酸序列具有抗原性，特别是N端和C端的序列抗原性非常强。因此，在cTnI的快速检测领域，研究开发适合于快速检测用的抗体具有重要意义。
发明内容
基于此，有必要提供一种可快速简便的应用于hcTnI检测的可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体。
此外，还有必要提供上述杂交瘤细胞或单克隆抗体在医学检测领域的应用。
一种可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞，保藏号为CCTCC No：C201317。
一种由上述可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
上述可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞可应用在制备心肌肌钙蛋白I的检测试剂或设备领域中。
上述单克隆抗体可应用在制备心肌肌钙蛋白I检测试剂或设备领域中。
一种心肌肌钙蛋白I的检测试纸，包括上述单克隆抗体。
在优选的实施例中，所述检测试纸包括支撑薄片、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、检测线及质控线，所述样品垫、所述金标垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸收垫从所述支撑薄片的一端向另一端依次设置在所述支撑薄片上，所述样品垫与所述金标垫部分重叠，所述金标垫与所述硝酸纤维素膜部分重叠，所述硝酸纤维素膜与所述吸收垫部分重叠，所述检测线及所述质控线设在所述硝酸纤维素膜上，且所述检测线设在靠近所述金标垫的一端，所述质控线设在靠近所述吸收垫的一端，所述金标垫上涂覆有所述单克隆单体包附胶体金颗粒形成胶体金标记的单克隆抗体，所述检测线为亲和纯化的抗心肌肌钙蛋白I的兔多抗，所述质控线为羊抗鼠IgG抗体。
一种检测试剂盒，包括上述心肌肌钙蛋白I的检测试纸。
上述杂交瘤细胞，命名为cTnI-C4，于2013年1月24日保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心（即中国典型培养物保藏中心），保藏号是CCTCC No：C201317。
上述杂交瘤细胞的分泌产量高，其分泌得到的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点，可广泛应用在制备心肌肌钙蛋白I的检测领域，如检测试剂或检测设备的制备领域等，在特异性、灵敏度和检测率等方面较之传统的检测方法具有显著的优势。
附图说明
图1为一实施方式的检测试纸的正面示意图；
图2为图1中检测试纸的纵截面示意图；
图3为检测试剂盒示意图。
具体实施方式
本实施方式的可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC No：C201317。该杂交瘤细胞可分泌出抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体。该杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体可用于制备心肌肌钙蛋白I的检测试剂或设备领域中。
一实施方式的心肌肌钙蛋白I的检测试剂盒包括壳体、检测试纸和其他检测试剂。
如图1和图2所示，本实施方式的检测试纸100包括支撑薄片110、样品垫120、金标垫130、硝酸纤维素膜140、吸收垫150、检测线160及质控线170。样品垫120、金标垫130、硝酸纤维素膜140及吸收垫150从支撑薄片110的一端向另一端依次设置在支撑薄片110上。样品垫120与金标垫130部分重叠，金标垫130与硝酸纤维素膜140部分重叠，硝酸纤维素膜140与吸收垫150部分重叠。检测线160及质控线170设在硝酸纤维素膜上，且检测线160设在靠近金标垫130的一端，质控线170设在靠近吸收垫150的一端。支撑薄片110采用不吸水的材料制作。样品垫120用于样品点样。单克隆单体包附胶体金颗粒形成胶体金标记的单克隆抗体均匀涂覆在金标垫130上。检测线160为亲和纯化的抗心肌肌钙蛋白I的兔多抗，质控线170为羊抗鼠IgG抗体。
如图3所示，检测试纸100可置于检测试剂盒的壳体200内。壳体200上开设有加样孔210及观察窗220。加样孔210对应样品垫120的位置。检测线160及质控线170裸露于观察窗220中，方便观察。
其他检测试剂可以根据需要直接在实验室制备。
上述检测试剂盒利用双抗体夹心法来检测被检材料中的心肌肌钙蛋白I。检测时，样品中所有的cTnI先和金标记抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体结合，由于毛细管作用，反应复合物沿硝酸纤维素膜140向前泳动，若样品中有cTnI，到达检测线160时，遇到包被在硝酸纤维素膜140上的抗心肌肌钙蛋白I的兔多抗，就会形成兔多抗-心肌肌钙蛋白I-金标记单克隆抗体复合物，从而富集在检测线160上，形成红色沉淀线；未结合cTnI的金标记单克隆抗体则通过检测线160，被羊抗鼠IgG抗体捕获，富集在质控线170上，形成红色沉淀线。当检测线160与质控线170上同时有红色沉淀线时判为阳性结果。若样品中不含有cTnI，反应复合物到达检测线160时，遇到捕获多抗就不会形成兔多抗-cTnI-金标记单克隆抗体复合物，反应复合物通过检测线160，仅富集在质控线170上形成红色沉淀线，此时判为阴性结果。
此外，在其他实施方式中，该检测试剂盒的结构不限于上文描述。上述单克隆抗体除应用在上述胶体金标记的单抗检测试剂盒外，还可以用于其他心肌肌钙蛋白I检测试剂盒或设备中。本领域技术人员可以理解，将本实施方式的单克隆抗体直接或间接结合其他信号基团（如磁性微球、辣根过氧化酶等），或将本实施方式的单克隆抗体作为包被抗体（例如ELISA），则可用于其他形式的心肌肌钙蛋白I检测试剂或设备。故本实施方式所制备得到的杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体可广泛适用于制备心肌肌钙蛋白I检测试剂或设备。
下面主要结合附图及具体实施例对可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞及相关应用作进一步详细的说明。
实施例1杂交瘤细胞的建立与抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备
1.抗原免疫
将人重组心肌肌钙蛋白I抗原（1.5mg/ml，深圳市菲鹏生物股份有限公司生产，货号AG-CTNI-HP0005）与等体积的弗氏完全佐剂(外观：琥珀色细胞悬浮液；组份：Paraffin Oil85%，Mannide Monooleate15%，Mycobacterium smegmatis1mg/ml)混合，得到油状乳液。将该乳液以0.2ml的剂量皮下施给BALB/c小鼠（广州省实验动物中心，6周龄雌性，5只）背部位点，第一次免疫14天后腹腔增强免疫（抗原与等量弗氏不完全佐剂混合），增强免疫到四针后，采尾血进行效价检测，效价达到融合要求。
融合前3天，用相同剂量抗原腹腔注射追加免疫，免疫方法同上。
2.杂交瘤细胞的制备
（1）饲养细胞的制备
以BALB/c鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。在融合前1天，将BALB/c鼠拉颈处死并用75%酒精全身浸泡，在超净台内，无菌操作下用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI1640基础培养液5ml，反复冲洗，回收冲洗液，1000rpm，离心5分钟，留沉淀，用RPMI1640筛选培养液（含HAT的RPMI1640完全培养液中）重悬，调整细胞浓度1×105个/ml，加入96孔板，150μl/孔，在37℃、5%CO2环境中培养过夜。
（2）免疫脾细胞的制备
小鼠末次免疫后三天，在无菌条件下取出脾脏，置于平皿中，RPMI1640基础培养液冲洗一次，放于小烧杯的尼龙网上磨碎过滤，制成细胞悬液。离心，弃上清，RPMI1640基础培养液重悬，如此重复三次，得到免疫脾细胞，计数。
（3）骨髓瘤细胞的制备
将小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0（深圳市菲鹏生物股份有限公司保存）经8-氮鸟嘌呤筛选后，培养至对数生长期，取两大瓶制成细胞悬液，离心，弃上清，用RPMI1640基础培养液重悬，如些重复三次，得到骨髓瘤细胞，计数。
（4）细胞融合及HAT选择杂交瘤
将骨髓瘤细胞与免疫脾细胞按1:10的细胞数量比例混合，在50ml塑胶离心管内用RPMI1640基础培养液洗1次，在1200rpm下离心8分钟，弃上清，将细胞混匀，缓慢加入1ml50%的PEG1500融合，融合1分钟后加入15ml的RPMI1640基础培养液终止细胞融合。1000rpm，离心5分钟，弃上清，用50ml的RPMI1640筛选培养液轻轻混悬，平分于10块96孔板，50μl/孔，在37℃、5%CO2环境中培养。培养至第六天，换HT培养液（含HT的RPMI1640完全培养液）两次。
（5）抗体的检测
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释人重组心肌肌钙蛋白I抗原（深圳市菲鹏生物股份有限公司生产，货号AG-CTNI-HP0005），使其终浓度为8μg/ml。加入96孔聚苯乙烯板，每孔0.1ml，37℃2小时或4℃过夜。次日，用含10%小牛血清或1%脱脂奶粉的0.02M pH7.2PBS，0.15ml/孔，37℃封闭2小时，用于检测。重组融合后第七天，取细胞上清0.1ml于上述96孔检测板中，37℃30分钟，水洗六次后加入2000倍稀释的辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG（深圳市菲鹏生物股份有限公司生产，货号BA-PAB-MU0001），37℃30分钟同上洗后，每孔加入100μl含0.1%（M/V）邻苯二胺，0.1%（V/V）双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃15分钟，加入稀硫酸溶液，每孔50μl，测450nm吸收值。RPMI1640完全培养液作为阴性对照，以测定值与对照值得比≧2.0为阳性细胞孔。
分泌抗体阳性细胞孔以1个细胞/孔在96孔培养板上用有限稀释法克隆，筛选阳性孔依上法连续克隆三次，扩大培养后，用含10%DMSO的培养液冻存，细胞密度为106个/ml。细胞融合一次共获得1株能稳定分泌抗体的细胞株，即可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞，命名为cTnI-C4杂交瘤细胞，于2013年1月24日保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心（即中国典型培养物保藏中心），保藏号是CCTCC No：C201317。
3．单克隆抗体的制备
选6～8周健壮的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射0.5ml的降植烷；10天后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞。接种细胞7～10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，一般一只小鼠可获5～10ml腹水。收集腹水，离心取上清，放于-20℃冰箱保存。
取腹水上清，用3倍体积的PBS稀释后滤纸过滤。将所得的滤液在1ml/min的流速下加到一个已用PBS平衡的蛋白G亲和层析柱（购自AmershamBiosciences公司）。然后用PBS以1ml/min的流速洗涤未被蛋白G吸附的物质直至在OD280nm下的吸附值达到基线为止。再用0.1M的甘氨酸洗脱液（pH2.5）洗脱并回收该抗体。所回收的溶液用0.1M TRIS（pH8.8）中和，通过超滤将抗体浓度调节到一个合适的浓度，-20℃分装冻存。
4．效价测定
以间接ELISA法检测，上述cTnI-C4杂交瘤细胞培养上清效价2.18×103，腹水抗体效价1.59×106。具体实验步骤如下：
（1）包被：将免疫的cTnI抗原稀释至8ug/ml，100ul/孔加至酶标板，37度2小时或者4度过夜；
（2）用洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最后拍干；
（3）用洗涤液洗去包被液，用封闭液封闭，每孔150ul，37度放置1.5h-2h；
（4）洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最后拍干；
（5）加样品：分别将稀释成不同梯度的细胞培养上清和腹水加入用cTnI包被好的酶标板，100ul/孔，37度反应1小时（同时做阴性对照孔和阳性对照孔）；
（6）洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最后拍干；
（7）加辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG（用封闭液稀释2000倍），100ul/孔，37度反应1小时；
（8）洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350ul，停留20秒；最后拍干；
（9）加显色液TMB：即用即配，100ul/孔，37度避光反应30分钟；
（10）终止反应：于各反应孔中加入2M的硫酸，50ul/孔；
（11）酶标仪读数：450nm，630nm波长测定，最终测定cTnI-C4杂交瘤细胞培养上清与重组cTnI抗原的反应效价为2.18×103，腹水抗体与重组cTnI抗原反应效价为1.59×106。
5.单克隆抗体鉴定
亲和力：上述cTnI-C4杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体以ELISA法检测，其亲和力常数（Kaff）为1.16×109。以下为具体测定cTnI-C4杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亲和力的过程：
以定量的小鼠IgG作标准品，用纯化羊抗鼠IgG抗体分别作包被抗体和酶标抗体，用双抗体夹心ELISA测定杂交瘤细胞培养上清中的单抗总蛋白浓度。然后将高度纯化的cTnI抗原（8ug/ml）以原倍、1:2和1:4三种倍比稀释度包板于微孔酶标板，加入已知浓度且进行倍比稀释的单抗上清液，反应后继续加酶标羊抗鼠IgG抗体。最后以各单抗不同浓度的对数值为横坐标，以其相应的OD492值为纵坐标，绘制出包不同浓度板抗原的三条反应曲线，取各曲线上部趋于平坦段的OD492值为OD-100，查出其OD-50点的单抗浓度[Ab]t，故可得[Ab]t，[Ab′]t和[Ab〞]t三个值，按下列Beatty等推导公式计算Kaff值：
当包被抗原浓度比为1:2时：
Kaff1=1/2（2[Ab′]t-[Ab]t）
或Kaff2=1/2（2[Ab〞]t-[Ab′]t）
1:4时：Kaff3=3/2（2[Ab〞]t-[Ab]t）
这样单抗每次测定可得三个Kaff值，平均值即其亲和力常数Kaff。
实施例2心肌肌钙蛋白I胶体金检测试纸的制备
1.硝酸纤维素膜的制备
包被缓冲液的配制：含6%甲醇、0.01M pH7.2PBS缓冲液为包被缓冲液，0.22μm膜滤过，置4℃备用，有效期一周。1000ml6%甲醇的0.01M pH7.2PBS缓冲液配方：NaCL8g、KCL0.2g、Na2HPO4·12H2O2.9g、KH2PO40.2g、甲醇60ml，双蒸去离子水定容至1000ml。
硝酸纤维素膜的制备：用包被缓冲液将抗心肌肌钙蛋白I兔多克隆抗体（深圳市菲鹏生物股份有限公司生产，货号PAB-CTNI-AP0002）稀释到1～5mg/ml，调整机器，划线为T线，即为检测线，T线靠近金标垫端，距金标垫端约5mm；用包被缓冲液将羊抗鼠IgG抗体（深圳市菲鹏生物股份有限公司生产，货号BA-PAB-MU0001）稀释到1～5mg/ml，调整机器，划线为C线，即为控制线，C线靠近吸收垫，距吸收垫约3mm。两线距离5～8mm，均匀。37℃烘干，封装备用。
2.胶体金、金标记单克隆抗体的制备
（1）溶液的配制
①氯金酸的配制：用双蒸去离子水溶解氯金酸，配成1%溶液，置4℃备用，有效期四个月。1000ml1%氯金酸溶液配方：10g氯金酸：双蒸去离子水定容至1000ml。
②柠檬酸三钠的配制：用双蒸去离子水溶解柠檬酸钠，配成1%溶液，0.22μm膜滤过，置4度备用，有效期容至1000ml。
③0.1M碳酸钾的配制：用双蒸去离子水配制，0.22μm膜滤过，置4度备用，有效期四个月。1000ml0.1M碳酸钾溶液配方：13.8g碳酸钾；双蒸去离子水定容至1000ml。
④2%PEG-20000的配制：用双蒸去离子水配制，0.22μm膜滤过，置4℃备用，有效期四个月。1000ml2%PEG-20000溶液配方：20g PEG-20000；双蒸去离子水定容至1000ml。
⑤标记洗涤保存液的配制：2%牛血清白蛋白（BSA），0.05%叠氮钠（NaN3），0.01M pH7.2PBS溶液，0.22μ膜滤过，置4℃备用，有效期四个月。1000ml标记洗涤保存液配方：20g BSA，0.5g NaN3、0.01M pH7.2PBS溶液定容至1000ml。
(2)胶体金的制备：
用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01%，置电炉煮沸，按每100ml0.01%氯金酸加入2ml1%柠檬酸三钠，继续煮沸，直到液体呈亮红色即停止加热，冷却至室温后补足失水。制备好的胶体金外观应纯净、透亮、无沉淀和漂浮物，有效期一周。
(3)胶体金标记单克隆抗体的制备：
用0.1M碳酸钾调胶体金的pH值至8.2，按8～10μg抗体/ml胶体金加入实施例1中制备得到的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体，磁力搅拌器混匀30min，搅拌下加入BSA至终浓度为1%静置1小时。13000rpm、4℃离心30min，弃上清，沉淀用标记洗涤保存液洗涤两次，用十分之一初始胶体金体积的标记洗涤保存液将沉淀重悬，置4℃备用，有效期一周。
3.金标垫的制备
(1)封闭液的配制：
2%BSA，0.1%TritonX-100、0.05%NaN3，0.01M pH7.2PBS溶液，0.22μm膜滤过，置4度备用，有效期四个月。1000ml封闭液配方：20g BSA，0.5g NaN3、1ml TritonX-100、0.01M pH7.2PBS溶液定容至1000ml。
(2)金标垫的制备：
将金标垫浸泡于封闭液中30min后，于37℃烘干。然后将制备好的金标记抗体均匀的铺在金标垫上，每毫升溶液铺20平方厘米，冷冻干燥，封装，置4℃备用。
4.试纸条样品垫的制备
(1)封闭液的配制：
2%BSA，0.1%TrtionX-100、0.05%NaN3，0.01M pH7.2PBS溶液，0.22μm膜滤过，置4度备用，有效期四个月。1000ml封闭液配方：20g BSA，0.5g NaN3、1ml TrtionX-100、0.01M pH7.2PBS溶液定容至1000ml。
(2)样品垫的制备：
将样品垫浸泡于封闭液中30min后，于37℃烘干，封装，置4℃备用。
5.检测试纸的组装
将吸收垫（购自Millipore公司）、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫设置在不吸水的支撑薄片上，切成3mm宽的小条。每十小条一包，加入干燥剂，真空封装，得到所述检测试纸。
实施例3检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒
1.快速检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒包括：实施例2制作的检测试纸及样品稀释液。
其中，样品稀释液为8%NaCl溶液。配制方法：80gNaCl，加蒸馏水定容至1000ml。
2.胶体金法心肌肌钙蛋白I的检测
（1）直接吸取120μl采集好的人血清或血浆加入到试纸卡加样孔，等待15min后即可观察结果。
（2）结果判定：当试纸条出现肉眼可见的红色质控线，没有出现肉眼可见的红色检测线，结果判为阴性；当试纸条出现肉眼可见的红色质控线，同时也出现肉眼可见的红色检测线，结果判为阳性。检测线颜色越深说明被检测样品的心肌肌钙蛋白I水平越高。当试纸条没有出现肉眼可见的紫红色质控线，不管有没有出现肉眼可见的紫红色检测线，结果都判为检测试纸条失效，应废弃。
实施例4快速诊断心肌肌钙蛋白I试剂盒的应用
以罗氏心肌肌钙蛋白I诊断试剂盒（Troponin I STAT）检出的阳性样本和阴性样本作为本试剂盒的检测样本，其中205例心肌肌钙蛋白I检测阳性样本，800例检出阴性样本，检测结果见表1。结果表明，本试剂盒检出阳性标本201份，相对灵敏度为98.05%；800份阴性样本检出771份，其中29份为假阳，相对特异性为96.38%。该结果与罗氏心肌肌钙蛋白I检测试剂盒的结果符合率为96.72%。说明实施例3制作的检测试剂盒完全可以用于常规的心肌肌钙蛋白I快速诊断。
表1 实施例3的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒的检测结果
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞，保藏号为CCTCC No：C201317。
2.权利要求1所述的可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞在制备心肌肌钙蛋白I检测试剂或设备中的应用。
3.一种由权利要求1所述的可分泌抗心肌肌钙蛋白I单抗的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
4.权利要求3所述的单克隆抗体在制备心肌肌钙蛋白I检测试剂或设备中的应用。
5.一种心肌肌钙蛋白I的检测试纸，其特征在于，包括如权利要求3所述的单克隆抗体。
6.如权利要求5所述的心肌肌钙蛋白I的检测试纸，其特征在于，包括支撑薄片、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、检测线及质控线，所述样品垫、所述金标垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸收垫从所述支撑薄片的一端向另一端依次设置在所述支撑薄片上，所述样品垫与所述金标垫部分重叠，所述金标垫与所述硝酸纤维素膜部分重叠，所述硝酸纤维素膜与所述吸收垫部分重叠，所述检测线及所述质控线设在所述硝酸纤维素膜上，且所述检测线设在靠近所述金标垫的一端，所述质控线设在靠近所述吸收垫的一端，所述金标垫上涂覆有所述单克隆单体包附胶体金颗粒形成胶体金标记的单克隆抗体，所述检测线为亲和纯化的抗心肌肌钙蛋白I的兔多抗，所述质控线为羊抗鼠IgG抗体。
7.一种检测试剂盒，包括如权利要求5或6所述的心肌肌钙蛋白I的检测试纸。
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Legal Events
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Address after: 518000 Guangdong city of Shenzhen province Nanshan District Xili liuxiandong Zhongshan Road No. 1001 TCL Science Park building D2 building 6 floor Applicant after: FAPON BIOTECH Inc. Address before: 518000, Shenzhen, Guangdong, Nanshan District Zhongshan road 1001, TCL international E City, D2 building, 6 floor Applicant before: Shenzhen Feipeng Biological Co.,Ltd. |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: SHENZHEN FAPON BIOTECH INC. TO: FAPON BIOTECH CORP. |
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| GR01 | Patent grant | ||
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Denomination of invention: Hybridoma cell capable of secreting anti-cardiac troponin I monoclonal antibodies and applications thereof Effective date of registration: 20200313 Granted publication date: 20150715 Pledgee: Shenzhen hi tech investment small loan Co.,Ltd. Pledgor: FAPON BIOTECH Inc. Registration number: Y2020980000699 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20210616 Granted publication date: 20150715 Pledgee: Shenzhen hi tech investment small loan Co.,Ltd. Pledgor: FAPON BIOTECH Inc. Registration number: Y2020980000699 |
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