CN103173416A - 小鼠抗人ck19单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株 - Google Patents
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Abstract
一种小鼠抗人CK19单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所述的分泌CK19单克隆抗体的杂交瘤细胞株克隆号为11F5,保藏编号为CGMCC No.6913。本发明还提供了所述杂交瘤细胞株11F5产生的单克隆抗体。该抗体包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9,轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10。本发明还提供了一种DNA分子SEQ ID NO:7,它编码重链可变区氨基酸序列SEQ IDNO:9;一种DNA分子SEQ ID NO:8,它编码轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:10。该抗体可用于科研或临床免疫组化检测CK19表达。
Description
技术领域
本发明涉及以原核表达的CK19蛋白免疫小鼠获得的分泌CK19单克隆抗体的杂交瘤细胞株11F5,属于生物工程技术领域。
背景技术
CK即细胞角蛋白(Cytokeratin),是细胞骨架蛋白之一中间丝多基因家族中的一种,为上皮细胞主要的结构蛋白和分化的早期标志物。细胞角蛋白由30种不同的基因编码,这些基因可以转录成分子量不同的20种多肽,分别命名为CK1~CK20。细胞角蛋白又可根据等电点的不同分为酸性(I类)蛋白,包括CK9~CK20;及碱性(II类)蛋白,包括CK1~CK8。一般而言,相对分子质量小的细胞角蛋白总是与大的细胞角蛋白配对,而酸性细胞角蛋白总是与碱性细胞角蛋白配对。细胞分化的不同阶段及不同类型上皮细胞表达不同的细胞角蛋白。
CK19属于酸性(I类)细胞角蛋白,分子量约40kDa,是相对分子质量最小的细胞角蛋白,存在于正常上皮和各种上皮来源的肿瘤中,特别是单层上皮细胞和间皮;在肝细胞和角膜为阴性表达,在子宫上皮、羊膜的上皮和间质中呈阳性表达。
CK19在肝细胞中不表达但存在于胆管上皮和胆管癌,由于这一特性,CK19是目前诊断肝内胆管细胞癌(ICC)的主要免疫组化标志物。作为上皮源性细胞特异性标志基因,CK19也是早期癌症微转移研究中运用最多的分子标志之一,主要用于腺癌的诊断以及转移性腺癌和肝癌的鉴别诊断。
目前,国内外已经获得了多种CK19的单克隆抗体,但一直以来都需要表达量更多,亲和性更好,稀释度更高,具有更多优良特性的单克隆抗体。获得活性高的CK19的单克隆抗体对于临床诊断和科学研究具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种高亲和性的、可用于科研或临床免疫组化检测CK19表达的小鼠抗人CK19单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
(1)根据CK19的基因序列(BC002539.2)的编码框,设计一对特异引物,Trizol Reagent试剂提取人脂肪组织总RNA,将总RNA逆转录成cDNA并以cDNA为模板PCR扩增CK19基因,构建重组表达载体PET28a-CK19,转化大肠杆菌BL21感受态,IPTG诱导蛋白表达并亲和纯化蛋白作为抗原。
(2)采用经典的细胞融合技术制备CK19单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白, SDS-PAGE测定抗体纯度,直接ELISA法测定纯化抗体的滴度。
(3)通过免疫组织化学分析CK19单克隆抗体染色人甲状腺乳头状癌、结肠腺癌和肝脏胆管组织石蜡切片。
(4)根据抗体基因的恒定区序列合成特异性引物,PCR扩增单克隆抗体CK19重链可变区和轻链可变区,回收目的片段,克隆到pGEM-T载体中,转化大肠杆菌TGl细胞后筛选阳性克隆,抽提质粒后测序确定了单克隆抗体CK19的重链和轻链可变区序列。
本发明提供的以原核表达的CK19蛋白为抗原、免疫小鼠获得的分泌CK19单克隆抗体的杂交瘤细胞株,名称为11F5,分类命名为小鼠抗人CK19杂交瘤细胞系,该细胞株11F5已于2012年11月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所),保藏编号为CGMCCNo.6913。
本发明还提供了所述杂交瘤细胞株11F5,CGMCC No.6913产生的单克隆抗体。该抗体包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9,轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10。
本发明还提供了一种DNA分子SEQ ID NO:7和DNA分子SEQ ID NO:8,DNA分子SEQ ID NO:7编码重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:9;DNA分子SEQ ID NO:8编码轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:10。
本发明的优点和有益效果:
本发明应用重组人的CK19蛋白为免疫抗原,免疫Balb/c小鼠,采用经典的细胞融合技术,通过ELISA筛选,获得一株能稳定分泌抗CK19的杂交瘤细胞株,命名为11F5,
亚型鉴定为IgG1,将杂交瘤细胞株扩大培养后收集上清,采用Protein A亲和层析法对CK19单抗进行纯化。SDS-PAGE结果显示,纯化后抗体纯度在95%以上;ELISA滴度测定结果显示,单抗的滴度均在1∶10000以上。人甲状腺乳头状癌、结肠腺癌和肝脏胆管组织石蜡切片经抗CK19抗体免疫组化染色,可于光镜下观察到胞浆内出现呈均匀着色的棕黄色颗粒,背景清晰,无非特异性着色。从实验结果上来看,本发明制备了高效价,高特异性的CK19单克隆抗体,用该抗体检测证实,其对细胞中的CK19蛋白具有高识别能力,可用于科研或临床免疫组化检测CK19表达。
附图说明
图1SDS-PAGE分析纯化后的CK19单克隆抗体。
图2ELISA法测定CK19单克隆抗体滴度。
图3是免疫组织化学检测分析CK19单克隆抗体染色人甲状腺乳头状癌石蜡切片。
图4是免疫组织化学检测分析CK19单克隆抗体染色人结肠腺癌石蜡切片。
图5是免疫组织化学检测分析CK19单克隆抗体染色人肝脏胆管组织石蜡切片。
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常施方法。
实施例1:杂交瘤细胞株11F5及其产生的单克隆抗体的获得
1、抗原制备
(1)获得目的基因
在该实施例中,根据CK19的基因序列(BC002539.2)的编码框,设计1对特异引物:
引物1:5′-GGATCCATGACTTCCTACAGCTATCGCC-3′(SEQ ID NO:1)
引物2:5′-CTCGAGTCAGAGGACCTTGGAGGCAG-3′;(SEQ ID NO:2)
Trizol Reagent试剂提取人脂肪组织总RNA,将总RNA逆转录成cDNA并以cDNA为模板PCR扩增CK19基因。
(2)构建重组表达载体
将步骤(1)获得的PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入表达载体PET28a,构建重组质粒PET28a-CK19。
(3)获得含重组表达质粒的表达菌种
将步骤(2)获得的连接产物转化大肠杆菌BL21感受态,用含有硫酸卡那霉素的固体培养基筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
(4)诱导表达和蛋白纯化
将步骤(2)提取的质粒转化BL21感受态,用含有硫酸卡那霉素的固体培养基筛选,挑选单克隆至10ml含有硫酸卡那霉素的LB液体培养基中培养,37℃,220rpm培养10h,取5ml液体培养基转移至250ml的大瓶中继续培养,培养至OD值为0.8,加入0.2mMIPTG诱导表达,16℃诱导过夜,收集菌液超声,取上清用Ni-NTA琼脂糖亲和层析法纯化CK19蛋白。
2、单抗的制备和纯化
(1)、免疫动物
一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行三次免疫注射。
首次免疫。纯化的重组蛋白CK19(用适量生理盐水稀释)+完全弗氏佐剂,100μg/只,颈背部皮下多点注射;
二次免疫(间隔两周)。纯化的重组蛋白CK19(用适量生理盐水稀释)+不完全弗氏佐剂,100μg/只,颈背部皮下多点注射;
三次免疫(间隔两周)。纯化的重组蛋白CK19(用适量生理盐水稀释),不完全弗氏佐剂,100μg/只,颈背部皮下多点注射;
三次免疫后7~10天采血,用建立的ELISA法检测效价,选择效价最高者用于细胞融合。
加强免疫(融合前3天),用纯化的重组蛋白50μg腹腔注射。3天后,取脾脏融合。
(2)、细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾细胞按一定比例混合(1∶5~1∶10),并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。采用HAT选择性培养基,进行杂交瘤细胞的选择性培养和筛选。
用ELISA方法检测杂交瘤细胞培养上清:以纯化的CK19蛋白(10μg/ml)包被酶标板,每孔100μl,4℃包板过夜。甩掉包被液,加入200μl5%的脱脂奶粉,37℃封闭1h后,洗涤3次,加杂交瘤细胞培养检测上清100μl(阴性对照为PBS100μl),37℃孵育1小时。洗涤3遍后,加酶标记二抗(羊抗鼠IgG-HRP),37℃孵育1小时,去掉酶标二抗,洗涤3遍,加底物显色剂50μl,室温静置5分钟,加终止液50μl。用酶标仪检测450nm波长处的OD值。OD值明显高于阴性对照2倍以上者定为阳性。最后筛选得到一株分泌性能最佳的抗CK19杂交瘤细胞株,命名为11F5,亚型鉴定为IgG1。
将选出的阳性杂交瘤细胞株11F5克隆化培养(有限稀释法),获得能产生高效价单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆。将杂交瘤细胞株扩大培养,并冻存保种。所述的阳性杂交瘤细胞为抗人CK19杂交瘤细胞系11F5,该细胞系已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.6913。
(3)单克隆抗体的大量制备与纯化
将步骤(2)获得的细胞株11F5接种至Balb/c小鼠腹腔,制备腹水,然后从腹水中提取抗体。
单克隆抗体CK19的纯化:采用Protein A亲和层析法。首先制备protein A亲和柱,用PBS平衡柱子后,取抗CK19的腹水过柱,然后用PBS洗至OD值接近于零,以50mmol/LPH2.5的甘氨酸-HCl溶液(PH)洗脱,收集峰值区的洗脱液,经透析浓缩后备用。SDS-PAGE结果显示,纯化后抗体纯度在95%以上(参见图1)。
(4)直接ELISA法测定纯化抗体的滴度
以纯化的CK19蛋白(10μg/ml)包被酶标板,每孔100μl,4℃包板过夜。甩掉包被液,加入200μl5%的脱脂奶粉,37℃封闭1h后,洗涤3次,将纯化的抗体按1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400,1∶12800进行稀释,以每孔100μl加入酶标板中(阴性对照为PBS100μl),37℃孵育1小时。洗涤3遍后,加酶标记二抗(羊抗鼠IgG-HRP),37℃孵育1小时,去掉酶标二抗,洗涤3遍,加底物显色剂50μl,室温静置5分钟,加终止液50μl。用酶标仪检测450nm波长处的OD值。ELISA滴度测定结果显示,单抗的滴度均在1∶10000以上(参见图2)。
实施例2:单克隆抗体应用
免疫组化应用检测
用CK19单抗,按常规法作病理切片,对人甲状腺乳头状癌、结肠腺癌及肝脏胆管组织石蜡切片进行免疫组化染色。
具体方法为:
(1)脱蜡
切片依次置于二甲苯I、II、III脱蜡每次5分钟,移至无水乙醇I、II中各浸泡4分钟,移至95%酒精中浸泡4分钟,移至85%酒精中浸泡4分钟,再移至70%酒精中浸泡4分钟,流水冲洗2分钟。
(2)抗原修复
将已冲洗干净组织切片放入高压锅内,加入约3000ml左右的柠檬酸盐抗原修复液(pH6.0),高火加热煮沸后调至低火保持沸腾喷气3分钟,关掉电磁炉开关,两分钟后将高压锅移至冷水中冷却,待高压锅内抗原修复液完全冷却后,打开高压锅将组织切片用流水冲洗干净移至蒸馏水中浸泡2分钟。
(3)阻断
3%H2O2中浸泡10分钟,流水冲洗蒸馏水冲洗。取出切片,擦干组织周围的水,用免疫组化笔在组织块周围画一圆圈注意圈接头要接好,防止抗体跑出圈外造成假阴性。PBS缓冲液冲洗。
(4)滴加一抗
甩去待测组织切片上多余的PBS,滴加一抗,其中一抗为实施例1步骤(3)制备并纯化的CK19单克隆抗体,稀释度为1∶1500。放置在孵育盒内4℃冰箱中过夜孵育约12小时。
(5)滴加二抗
将孵育盒从冰箱取出,恢复至室温后取出切片,用PBS洗3次,每次5分钟。滴加通用型二抗-HRP聚合物。将切片放入孵育湿盒中,盖上盖子,连孵育盒一起放入37℃恒温箱中孵育30分钟。
(6)显色、衬染、封片
取出切片,擦掉组织周围的多余的PBS,加入DAB显色液中显色3~5分钟,在显微镜下控制染色的强度。待强度适中后将切片置自来水中终止显色,再用流水冲洗5~10分钟,苏木素染液复染1分钟,0.5%盐酸酒精分化3秒钟,流水冲洗5~10分钟,脱水、透明、封片、镜检。
结果判定:按照国外学者对组织中CK19的判定标准,CK19蛋白阳性反应为黄到棕黄色细小颗粒,定位于胞浆。人甲状腺乳头状癌(参见图3)、结肠腺癌(参见图4)及肝脏胆管组织(参见图5)经抗CK19抗体免疫组化染色,可于光镜下观察到胞浆内出现呈均匀着色的棕黄色颗粒,背景清晰,无非特异性着色,说明此CK19小鼠单克隆抗体可以特异性的应用于免疫组织化学实验。
实施例3:单克隆抗体可变区测序
根据抗体基因的恒定区序列合成以下引物:
zh085′-GGGGATATCCACCATGRACTTCGGGYTGAGCTKGGTTTT-3′(SEQID NO:3)
zhr115′-GACHGATGGGGSTGTYGTGCTAGCTGNRGAGACDGTGA-3′(SEQID NO:4)
zl025′-GGGGATATCCACCATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAG-3′(SEQIDNO:5)
zlr055′-GGATACAGTTGGTGCAGTCGACTTACGTTTKATTTCCARCTT-3′(SEQID NO:6)
Trizol Reagent试剂分别提取5×106杂交瘤细胞3G7的总RNA,将总RNA逆转录成cDNA。用zh08和zhr11为引物进行PCR扩增单克隆抗体β-Tubulin重链可变区,用zl01和zlr05为引物进行PCR扩增单克隆抗体β-Tubulin轻链可变区,PCR反应均采用热启动,反应条件:94℃5分钟;94℃45秒,60℃45秒,72℃1分10秒,30个循环;72℃7分钟。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离后回收纯化目的片段(轻链长度391bp,重链长度420bp)。克隆到pGEM-T(Promega)载体中,转化大肠杆菌TGl细胞后在IPTGIX-gal平板上进行筛选,取白色菌斑接种于含有氨韦青霉素的LB液体培养基中扩增。筛选阳性克隆,用QIAGEN的质粒抽提试剂盒抽提质粒并进行测序,确定了单克隆抗体β-Tubulin的重链和轻链可变区序列。
单克隆抗体β-Tubulin可变区的DNA序列和氨基酸序列:
单克隆抗体β-Tubulin重链可变区DNA序列(5′→3′,336bp)(SEQ ID NO:7);
单克隆抗体β-Tubulin的轻链可变区DNA序列(5′→3′,387bp)(SEQ 1D NO:8);
单克隆抗体β-Tubulin重链可变区的推断氨基酸序列(112氨基酸)(SEQ ID NO:9);
单克隆抗体β-Tubulin轻链可变区的推断氨基酸序列(128氨基酸)(SEQ10ID NO:10)。
Claims (5)
1.一种以原核表达的CK19蛋白免疫小鼠获得的分泌CK19单克隆抗体的杂交瘤细胞株11F5,保藏编号为CGMCC No.6913。
2.一种由权利要求1所述的杂交瘤细胞株11F5产生的单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体,包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9,轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10。
4.一种DNA分子SEQ ID NO:7,它编码权利要求3中所述的重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:9。
5.一种DNA分子SEQ ID NO:8,它编码权利要求3中所述的轻链可变区氨基酸序列SEQ ID NO:10。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109734805A (zh) * | 2019-01-03 | 2019-05-10 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck20蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN111410690A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-07-14 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck19蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN114560923A (zh) * | 2022-03-13 | 2022-05-31 | 广州臻美生物科技研究有限公司 | 一种肿瘤标志物单克隆抗体及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101891815A (zh) * | 2009-05-22 | 2010-11-24 | 中国科学院上海生命科学研究院 | Ck19单克隆抗体、其制备方法及用途 |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101891815A (zh) * | 2009-05-22 | 2010-11-24 | 中国科学院上海生命科学研究院 | Ck19单克隆抗体、其制备方法及用途 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109734805A (zh) * | 2019-01-03 | 2019-05-10 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck20蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN109734805B (zh) * | 2019-01-03 | 2021-09-10 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck20蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN111410690A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-07-14 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck19蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN111410690B (zh) * | 2020-04-09 | 2021-08-06 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗ck19蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
CN114560923A (zh) * | 2022-03-13 | 2022-05-31 | 广州臻美生物科技研究有限公司 | 一种肿瘤标志物单克隆抗体及其应用 |
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