CN103168691A - 一种富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法,包括以铁皮石斛种子、茎尖或根尖为外植体进行原球茎的诱导、原球茎增殖培养,其增殖培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,NAA0.2mg,KT1.0mg,蔗糖30g,亚硒酸钠0.3mg,三氯化铬0.35mg,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取诱导培养30~40d、种胚萌发、芝麻粒大小的原球茎,将其转接于增殖培养基中,每瓶约10颗;于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养。本发明的有益效果为:1、整个过程均在温室条件下进行,不受地区、季节及气候限制,无污染;2、培养过程工艺简单、易操作、周期短、后续投资少;3、铁皮石斛原球茎增殖能力强、产量高、对微量元素富集率高。
Description
技术领域
本发明涉及铁皮石斛原球茎的培养方法,具体涉及一种富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法。
背景技术
硒是人体和动物的一种必需微量元素,与机体健康密切相关,是一种强抗氧化剂,能将有毒的过氧化物还原为无害的物质,能分解过氧化氢,对细胞和组织有保护作用,使之免受过氧化物的损害,对细胞膜和细胞器(线粒体、微粒体、溶酶体)膜具有特殊的保护作用。早在上世纪50年代初,铬就被认为在糖代谢中能起到一定作用,当时被称为“葡萄糖耐量因子”。从体外和动物实验中发现,铬能改善胰岛素抵抗,促使胰岛素发挥最大的生物效应。动物实验和临床都证明,缺铬可引发糖尿病,而补充足够的铬,可使糖尿病症状减轻、血糖控制平稳、减少降糖药用量。有专家指出,糖尿病患者普遍缺铬,因此,补铬对防治糖尿病有利。
据统计,我国主要作物中含硒量低于0.05μg/g的县有785个,即约有2/3地区属国际上公认的缺硒地区,约72%的人口需要科学补硒;目前我国20岁以上的糖尿病患者达2000万以上,糖耐量低减病人不低于3000万,而且还在不断攀升,世界卫生组织预测,到2025年中国糖尿病人数将达5000万。这就使富硒、富铬产品形成了一个巨大的潜在市场。目前,国内一些发达城市的消费群体,尤其是南方一些城市正掀起一股补硒、补铬的热潮,尤其是对富硒、富铬食品、保健品特别亲睐。
硒、铬不能通过人体合成,必需通过膳食摄入,而我国传统的饮食结构中硒、铬含量低,并不能满足人体需求。营养学家推荐,正常人体硒摄入量为60~200μg/d,铬为50~200μg/d。硒、铬的低水平摄入对人体健康有着潜在的威胁,要保证人体健康,防治有关疾病,就应该有充足的硒、铬摄入。植物是人类和动物获取硒、铬的主要来源。研究发现,有机化合物的营养作用要大于无机化合物,植物来源要优于动物来源。目前,获取有机硒、铬的途径主要是依靠植物转化技术来实现,利用植物的生物转化提高有机硒、铬的含量,从而进入食物链供人和动物食用是目前的主要富硒技术。虽然硒、铬保健功效显著,但自然界中大多以无机态存在,摄入会产生一些副作用,而一般动植物食品中,有机硒、铬的含量甚微,难以满足人体需求,因此生物富集已成为人类对微量元素硒、铬开发利用的重要手段。
铁皮石斛(Dendrobium candidum)是传统名贵中草药,唐代医学经典《道藏》将其列为“中华九大仙草之首”,自唐宋以来,一直被列为皇室贡品。铁皮石斛具有独特的药用价值,以其茎入药,属补益药中的补阴药,具有益胃生津、滋阴清热之功效。含有丰富的石斛多糖,可增强机体免疫力、抗疲劳;铁皮石斛对脾胃病中常见的致病菌幽门螺杆菌有较好的抑制作用,能促进胃液的分泌,促进胃排空助消化;铁皮石斛有较好的护肝利胆作用,是治疗各种肝胆病的要药;铁皮石斛能够强筋健骨、润滑关节、抵御风湿;铁皮石斛可增强胰岛素活性,显著降低血糖水平;铁皮石斛具有较强的抗肿瘤活性,还能减轻放、化疗的副作用,提高生存质量,延长生存时间。此外,铁皮石斛还有滋阴养目、滋养肌肤、抗衰老之功效。最近,铁皮石斛原球茎正在进行新资源食品的申报,这必将使石斛市场进一步加温。
近年来,已经相继开发出众多的富硒、富铬产品,如富硒玉米、富硒水果、富硒酵母、富硒黑木耳、富硒铁皮石斛;富铬酵母、富铬黑小麦、富铬虫草等,不同生物生长条件不同,其微量元素富集培养方式也各不相同。铁皮石斛本身具有栽培难度高,生长缓慢等特点,而硒、铬元素对其生长又存在一些正面、及负面影响,所以目前研究较少,尤其是铁皮石斛原球茎富硒、富铬的研究,目前尚无报道。
发明内容
本发明的目的是克服上述技术的不足,而提供一种培养周期短、无污染、富集能力强、易于大规模生产的富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法,包括以铁皮石斛种子、茎尖或根尖为外植体进行原球茎的诱导、原球茎增殖培养,该方法具体步骤如下:
(一)、原球茎的诱导培养
(1)、种子为外植体的原球茎诱导培养:其培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,蔗糖30g,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取成熟未开裂的铁皮石斛蒴果,自来水冲洗表面污渍5min,无菌条件下,用75%的酒精消毒5~10min,然后用0.1~0.5%的升汞溶液消毒15~20min,最后用无菌水冲洗4~5次,并用无菌滤纸吸干水分;无菌条件下,用消过毒的刀片将果实剖开,用镊子夹起一半果实,于培养瓶口轻轻抖动,将种子均匀播撒在1/2MS培养基表面;于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养;
(2)、茎尖或根尖为外植体的原球茎诱导培养:其诱导培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,蔗糖30g,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取生长健壮的铁皮石斛无菌苗,用无菌刀小心切取茎尖和根尖的分生组织,分别接入诱导培养基,于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养;
(二)、原球茎的增殖培养:其增殖培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,NAA0.2mg,KT1.0mg,蔗糖30g,亚硒酸钠0.3mg,三氯化铬0.35mg,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取诱导培养30~40d、种胚萌发、芝麻粒大小的原球茎,将其转接于增殖培养基中,每瓶约10颗;于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养。
本发明的有益效果为:1、铁皮石斛原球茎作为富硒、富铬载体,整个过程均在温室条件下进行,不受地区、季节及气候限制,无污染,适合工厂化大规模生产;2、培养过程工艺简单、易操作、周期短、后续投资少;3、铁皮石斛原球茎增殖能力强、产量高、对微量元素富集率高(干品中有机硒2~5mg/kg,有机铬4~6mg/kg);4、以铁皮石斛原球茎为富集载体,将铁皮石斛保健功效与微量元素硒、铬的生理功能有机结合,使人们在服用铁皮石斛的同时补充硒、铬。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步阐述,实施例将帮助更好地理解本发明,但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
一:溶液配制
(1)大量元素母液:大量元素母液(5种):硝酸铵33g,硝酸钾38g,氯化钙8.8g,七水硫酸镁7.4g,磷酸氢二钾3.4g,分别用蒸馏水配成1L溶液。
(2)微量元素母液(1种):碘化钾0.166g,高锰酸钾4.46g,硫酸铜1.72g,氯化钴0.005g,硫酸锰4.46g,硫酸锌1.72g,硼酸1.24g,蒸馏水配成1L溶液。
(3)有机母液(1种):肌醇20g,烟酸0.1g,盐酸吡哆醇0.1g,盐酸硫胺素0.02g,甘氨酸0.4g,配成1L溶液。
(4)铁盐母液(1种):七水硫酸亚铁5.56g,EDTA7.46g,用蒸馏水配成1L溶液。
二:培养基配制
(1)1/2MS培养基:大量元素母液(5种)各5mL/L,微量元素母液10mL/L,有机母液10mL/L,铁盐母液10mL/L。
(2)种子为外植体的原球茎诱导培养基:1/2MS培养基,椰子汁100mL/L,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.6~5.8。
(3)茎尖或根尖为外植体的原球茎诱导培养:1/2MS培养基,椰子汁100mL/L,蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.6~5.8。
(4)原球茎增殖培养基:1/2MS培养基,椰子汁100mL/L,NAA0.2mg/L,KT1.0mg/L,蔗糖30g/L,亚硒酸钠200g/L,三氯化铬180g/L,琼脂8g/L,pH5.6~5.8。
三:铁皮石斛原球茎诱导及增殖方法
取成熟未开裂的铁皮石斛蒴果,自来水冲洗表面污渍5min,无菌条件下,用75%的酒精消毒5~10min,然后用0.1~0.5%的升汞溶液消毒15~20min,最后用无菌水冲洗4~5次,并用无菌滤纸吸干水分。无菌条件下,用消过毒的刀片将果实剖开,用镊子夹起一半果实,于培养瓶口轻轻抖动,将种子均匀播撒在1/2MS培养基表面。于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养。
选取诱导培养30~40d、种胚萌发、芝麻粒大小的原球茎,将其转接于增殖培养基中,每瓶约10颗。于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养50~60d后可收获。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的原理和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种富硒、富铬铁皮石斛原球茎的培养方法,其特征在于:包括以铁皮石斛种子、茎尖或根尖为外植体进行原球茎的诱导、原球茎增殖培养,该方法具体步骤如下:
(一)、原球茎的诱导培养
(1)、种子为外植体的原球茎诱导培养:其培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,蔗糖30g,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取成熟未开裂的铁皮石斛蒴果,自来水冲洗表面污渍5min,无菌条件下,用75%的酒精消毒5~10min,然后用0.1~0.5%的升汞溶液消毒15~20min,最后用无菌水冲洗4~5次,并用无菌滤纸吸干水分;无菌条件下,用消过毒的刀片将果实剖开,用镊子夹起一半果实,于培养瓶口轻轻抖动,将种子均匀播撒在1/2MS培养基表面;于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养;
(2)、茎尖或根尖为外植体的原球茎诱导培养:其诱导培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,蔗糖30g,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取生长健壮的铁皮石斛无菌苗,用无菌刀小心切取茎尖和根尖的分生组织,分别接入诱导培养基,于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养;
(二)、原球茎的增殖培养:其增殖培养基组成是在每1L的1/2MS培养基中含椰子汁100mL,NAA0.2mg,KT1.0mg,蔗糖30g,亚硒酸钠0.3mg,三氯化铬0.35mg,琼脂8g,pH5.6~5.8;选取诱导培养30~40d、种胚萌发、芝麻粒大小的原球茎,将其转接于增殖培养基中,每瓶约10颗;于25℃,1500~2000lux光照强度,光照时间1~16h/d的条件下培养。
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