CN103157104A - 猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液，其中，所述硫代硫酸钠稀释液为硫代硫酸钠水溶液，硫代硫酸钠浓度为10～50mg/ml。本发明的硫代硫酸钠水溶液还包括免疫增强剂，包括黄芪多糖、白介素-2、聚肌胞或SL-环糊精。猪瘟疫苗利用本发明的硫代硫酸钠水溶液稀释后，可以解决疫苗免疫后，疫苗抗体效价以及整齐度不高问题；通过与免疫增强剂的相互配合，可以进一步提高稀释后的猪瘟疫苗的效价。

Description

猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液

技术领域

本发明涉及一种猪瘟疫苗的疫苗稀释液，特别是指一种猪瘟疫苗硫代硫酸钠稀释液，属于兽用疫苗领域。

背景技术

猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一种高度接触性传染病，不同年龄、性别和品种的猪均能感染，死亡率高达80-90％。猪瘟被世界世界动物卫生组织划分为A类疾病，我国将其划分为一类疾病。中国学者培育成功的猪瘟兔化弱毒苗是目前世界上公认的安全和有效的疫苗，借助于C株疫苗密集接种和综合防制措施，有关国家已经有效地控制了猪瘟。

然而，猪瘟疫苗在使用时需要用疫苗稀释剂稀释，通常选用注射用水或生理盐水，但这样稀释出的疫苗，免疫效价整齐度不高，接种发病猪后有应激反应和过敏反应，影响了猪瘟疫苗的免疫效果。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液，以解决猪瘟疫苗免疫后，抗体效价降低以及疫苗效价整齐度不高问题。

技术方案

一种用于猪瘟疫苗的疫苗稀释液：硫代硫酸钠稀释液，其中，所述硫代硫酸钠稀释液为硫代硫酸钠水溶液。

优选地，本发明的疫苗稀释液为硫代硫酸钠水溶液，其中，水包括纯化水或注射用水。

优选地，本发明的硫代硫酸钠水溶液中硫代硫酸钠浓度为10～50mg/ml；更优选地，硫代硫酸钠浓度为20～40mg/ml；最优地，所述硫代硫酸钠浓度为35mg/ml。

通过本发明后续实施例，本发明的硫代硫酸钠水溶液可以提高稀释后的猪瘟疫苗的效价，并提高疫苗的效价的整齐度或批次间的稳定性。为了进一步提高稀释后猪瘟疫苗的效价，本发明的疫苗稀释剂还可以包括以下免疫增强剂，与本发明的硫代硫酸钠稀释剂配合，可以进一步增强疫苗的免疫力。即，优选地，本发明的硫代硫酸钠水溶液还包括免疫增强剂。

优选地，本发明的免疫增强剂包括黄芪多糖、白介素-2、聚肌胞或SL-环糊精。

优选地，本发明的作为免疫增强剂的黄芪多糖的含量为1～10mg/ml，更优选，所述黄芪多糖的含量为5mg/ml。

优选地，本发明的作为免疫增强剂的SL-环糊精含量为0.1～10mg/ml；更优选地，SL-环糊精含量为0.1～5mg/ml；最优选地，SL-环糊精含量为2mg/ml。

由上可以看出，猪瘟疫苗利用本发明的硫代硫酸钠水溶液稀释后，可以解决疫苗免疫后，疫苗抗体效价以及整齐度不高问题；通过与免疫增强剂的相互配合，可以进一步提高稀释后的猪瘟疫苗的效价。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行详述：

实施例1、用于猪瘟疫苗稀释剂的硫代硫酸钠水溶液的制备

试验例1

硫代硫酸钠(天津金汇太亚化学试剂有限公司公司分析纯)3.5g溶解与50ml纯化水中，用100ml量筒定容至100ml。0.22微米滤膜过滤，100℃灭菌30分钟。

试验例2

硫代硫酸钠1g配制方法同试验例1，区别仅在于称量硫代硫酸钠1g。

试验例3

硫代硫酸钠5g配制方法同试验例1，区别仅在于称量硫代硫酸钠5g。

试验例4

硫代硫酸钠2g配制方法同试验例1，区别仅在于称量硫代硫酸钠2g。

试验例5

硫代硫酸钠4g配制方法同试验例1，区别仅在于称量硫代硫酸钠4g。

试验例5

硫代硫酸钠(天津金汇太亚化学试剂有限公司公司分析纯)3.5g溶解与50ml纯化水中加入注射用黄芪多糖(天津赛诺制药有限公司)0.5g溶解于50ml纯化水中，用100ml量筒定容至100ml。0.22微米滤膜过滤，100℃灭菌30分钟。

试验例6硫代硫酸钠水溶液(含黄芪多糖)

硫代硫酸钠(天津金汇太亚化学试剂有限公司公司分析纯)3.5g溶解与50ml纯化水中加入注射用黄芪多糖(天津赛诺制药有限公司)1.0g解与50ml纯化水中，用100ml量筒定容至100ml。0.22微米滤膜过滤，100℃灭菌30分钟。

试验例7：SL-CD的制备

将4.5克β-环糊精(上海波以尔化工有限公司)样品溶于100毫升1∶1(v/v)的无水二甲基甲酰胺和无水吡啶的混合物中，然后通过将混合物加入分子筛(2A，MERCK，德国)并在室温下使混合物在封闭的容器中培养至少48小时中除去水。然后通过将无水混合物倾析入干燥容器而从分子筛中分离出无水混合物。

将6.6克月桂酰氯(MERCK，德国)加到溶解的环糊精样品，使反应混合物在60℃下培养6小时，然后在15-22℃温度下培养18小时。

用上述方法得到了L-环糊精溶液。

然后将0.6克氯磺酸(MERCK，德国)加到10毫升，无水二甲基甲酰胺/吡啶中。将该混合物加入L-环糊精溶液。这样得到的反应混合物然后在15-22℃温度下反应24小时。反应液后通过在60℃下低压(200毫pa)蒸发1-2小时从反应混合物中部培养后通过在60℃下低压(200毫pa)蒸发1-2小时从反应混合物中部分除去溶剂。用等渗磷酸盐缓冲液盐水(每升水溶液由8g氯化钠、0.2g氯化钾和1.15g磷酸氢二钠组成，其PH为7.3)能截下10,000道尔顿分子的再生纤维素的膜(SPECTRA/POR)深度透析进一步除去溶剂，接着再用超纯水透祈，直至在滤液中监测不到溶剂。渗透液(PBS或超纯水)的体积与用于透析的残留物的体积比保持在＞10∶1(V/V)。透析过程至少进行10天，透析液一天换至少一次。在室温下内压低于0.1毫巴，冷冻器低于-25℃冻干残留物得到了干燥产品2.9gSL-环糊精(SL-CD)。

试验例7硫代硫酸钠水溶液(含SL-CD)

硫代硫酸钠(天津金汇太亚化学试剂有限公司公司分析纯)3.5g溶解与50ml纯化水中加入的SL-CD(由试验例6方法制备获得)0.2g溶解于50ml纯化水中，用100ml量筒定容至100ml。0.22微米滤膜过滤，100℃灭菌30分钟。

实施例2硫代硫酸钠水溶液稀释的猪瘟疫苗免疫试验

1.材料

(1)疫苗：猪瘟活疫苗(细胞源)批号0803042中牧实业股份有限公司江西生物药厂；猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒(批号：08615)购自深圳绿诗源生物技术有限公司；.

(2)实验用猪：选用符合国家实验动物标准的饲养场或定点猪场供应，8周龄断奶易感仔猪，体重为18～25kg。

(3)疫苗稀释剂实施例1中试验例1制备的稀释剂，试验例6制备的稀释剂、试验例7制备的稀释剂

2.猪瘟疫苗免疫试验

将50头仔猪随机分为5组，每组10头，做好编号。免疫前1d每头仔猪前腔静脉采血2ml，分离血清测定猪瘟母源抗体水平。试验组于第2d每头注射混合的按照表1注射猪瘟疫苗，14d后采血测定猪瘟抗体水平，测定方法参照试剂盒说明书。结果判定标准为：OD值＜0.2为抗体阴性，0.2～0.4之间为可疑，OD值＞0.4时为抗体阳性，试验数据采用spss软件作T检验，进行显著性分析。

表1.试验组猪瘟疫苗所用稀释剂及注射方法

3.试验结果见表2

表2.各试验组免疫前后猪瘟抗体水平

试验结果表明：4组试验结果试验前母源抗体已经降到可接受范围(OD值在0.2～0.4之间)抗体水平接近阴性，各组之间差异不显著，免疫后实验组1、实验组2实验组3和试验组4与实验组5免疫后的抗体，差异显著，且均高于试验组5，实验组1和试验组2差异不显著实验组3和实验组4差异不显著，试验组3高于试验组2且差异显著。标准差显示试验组5差较大，大于其它试验组的标准差。

试验结论：选用硫代硫酸钠水溶液为的猪瘟疫苗稀释剂相对于生理盐水稀释剂，能够提高稀释后疫苗免疫猪的抗体水平，提高免疫的整齐度，而添加免疫增加剂的硫代硫酸钠水溶液可进一步提高免疫后抗体水平。

4.疫苗安全性试验

8周龄断奶易感仔猪分别注射表1稀释剂稀释后的疫苗，免疫剂量为3倍(即3ml)和5倍剂量(即5ml)的疫苗，同时设立对照组，不注射疫苗，免疫后进行跟踪观察5天，观察记录猪的体温，采食、精神状况及生长发育情况，记录相对于对照组正常的的和异常的猪，试验结果见表3。

表3疫苗安全性试验结果

正常：无体温升高，采食、精神状况及生长发育情况均正常，

试验结果表明，试验组5注射5倍量注射的情况下会有部分猪相对于对照组出现副反应，其它组相对于对照组均无副反应；因此说明选用硫代硫酸钠水溶液为的猪瘟疫苗稀释剂相对于生理盐水稀释剂，可以在免疫水平更高的基础上，对猪体的刺激更小。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠稀释液为硫代硫酸钠水溶液。

2.根据权利要求1所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠水溶液中硫代硫酸钠浓度为10～50mg/ml。

3.根据权利要求1所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠水溶液中硫代硫酸钠浓度为20～40mg/ml。

4.根据权利要求1所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠水溶液中硫代硫酸钠浓度为35mg/ml。

5.根据权利要求1所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠水溶液包括纯化水或注射用水。

6.根据权利要求1所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述硫代硫酸钠水溶液还包括免疫增强剂。

7.根据权利要求6所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述免疫增强剂包括黄芪多糖、白介素-2、聚肌胞或SL-环糊精。

8.根据权利要求7所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述黄芪多糖的含量为1～10mg/ml。

9.根据权利要求7所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述的SL-环糊精含量为0.1～10mg/ml。

10.根据权利要求7所述的硫代硫酸钠稀释液，其特征在于，所述的SL-环糊精含量为0.1～5mg/ml。