CN103131653A - 以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基 - Google Patents

Abstract

本发明公开了甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，包括（1）基础生长培养基；（2）液体生产培养基；（3）菌落计数培养基。本发明以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基及其使用方法，该液体生产培养基的成本约为40~50元/吨，比目前常见市售芽孢杆菌液体生产培养基（约200元/吨）的成本低廉，因此，本发明为实现芽孢杆菌的规模化培养奠定了基础。

Description

以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基

技术领域

本发明涉及以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基。

背景技术

因芽孢杆菌可产生淀粉酶 、蛋白酶和脂肪酶等多种胞外水解酶，可将养殖水体中的生物残体、残饵和其他有机物降解为小分子有机物，同时还对养殖水体中的氨氮、亚硝酸态氮、硝酸态氮和COD等可能存在明显的降解作用，因此，芽孢杆菌制剂是防止养殖水体老化和富营养化的主要微生物制剂之一。

在芽孢杆菌规模化培养中主要以淀粉、大豆蛋白和酵母粉等为主要原料，以这些原料为主要成分建立的培养基对芽孢杆菌规模化培养后，活菌浓度也可达到工业化生产的要求，但培养基成本每吨为200元以上。为了进一步降低芽孢杆菌规模化培养的成本，寻找一种经济廉价且来源广泛的培养基原料并建立以该原料为主要成分的芽孢杆菌培养基是当前亟待解决的重要问题。

甘蔗是我国主要的经济农作物之一，甘蔗制糖的副产物----糖蜜含有葡萄糖、蔗糖和果糖等多种糖类以及丰富的维生素、无机盐与其它高能量的非糖物质，是多种细菌工业化生产的重要培养基成分。

发明内容

本发明的目的是提供了经济廉价且来源广泛的甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，同时建立其科学、合理的使用方法；按此使用方法，这些培养基可满足芽孢杆菌规模化培养的要求。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，包括：

（1）基础生长培养基 (/L)：甘蔗糖蜜 5~10g，麸皮 4~8g，K₂HPO₄ 1g，MnSO₄·H₂O  0.03g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min；

（2）液体生产培养基(/L)：甘蔗糖蜜7~15g，麸皮4~8g，玉米粉 2g，K₂HPO₄2g，MnSO₄·H₂O  0.05g，MgSO₄·7H₂O  0.1g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min；

（3）菌落计数培养基(/L)：甘蔗糖蜜7~15g，麸皮4~8g，玉米粉 2g，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄·H₂O  0.05g，MgSO₄·7H₂O  0.1g，琼脂16g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min。

本发明以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基的使用方法：

（1）挑取芽孢杆菌单菌落至100ml基础生长培养基中，于37℃、180r/min条件下培养24h；

（2）吸取1ml基础生长培养基菌液转接至新鲜的液体生产培养基中，于37℃、180r/min条件下培养20h。

本发明的优点：

1、本发明充分利用甘蔗制糖的副产物----糖蜜，首次建立以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，为今后开展芽孢杆菌规模化培养提供了良好的廉价培养基配方，具有良好的应用前景。

2、本发明为甘蔗糖蜜的高值化利用提供了一条有效途径，可明显增加甘蔗制糖的附加值，同时减少了该工业对环境的污染。

3、本发明建立了以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基及其使用方法，该液体生产培养基的成本约为40~50元/吨，比目前常见市售芽孢杆菌液体生产培养基（约200元/吨）的成本低廉，因此，本发明为实现芽孢杆菌的规模化培养奠定了基础。

附图说明

图1是芽孢杆菌的芽孢；图中箭头所示为芽孢，呈绿色、椭圆或卵圆型、端生或中生、大小多为0.7~0.9μm×1.0~1.5μm；营养体呈红色，杆状、大小多为0.8~1.2μm×2.5~4.5μm。

图2是菌落计数培养基上的芽孢杆菌菌落形态。图中箭头所示为菌落，形态扁平、灰白色、边缘不整齐、扩散生长、皱褶、不透明、d=2~4mm。

具体实施方式

实施案例一

以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，按下列步骤对-80℃条件下保存1年的枯草芽孢杆菌进行规模化培养测试，具体如下：

1、用40℃的温水将-80℃条件下保存1年的枯草芽孢杆菌快速解冻，吸取1ml解冻的菌悬液至100ml基础生长培养基中，于37℃、180r/min条件下培养24h；

2、吸取1ml培养24h后的基础生长培养基菌液至100ml液体生产培养基中，于37℃、180r/min条件下培养20h；

3、吸取1ml液体生产培养基菌液，梯度稀释为10^-6、10^-7、10^-8的菌液，吸取0.1ml上述各梯度稀释菌液于菌落计数培养基上涂布、计数；设3个平行组。具体结果见表1。

表1

*，菌落过多，无法有效计数。

结果表明，本发明建立的以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基并按其使用方法对-80℃条件下保存1年的枯草芽孢杆菌进行规模化培养后，活菌浓度为7.1×10⁹CFU/ml。

实施案例二

以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，按下列步骤对市面上常见的枯草芽孢杆菌固体产品进行规模化培养测试，具体如下：

1、无菌操作称取1g枯草芽孢杆菌固体产品至100ml基础生长培养基中，于37℃、200r/min条件下培养24h；

2、吸取1ml培养24h后的基础生长培养基菌液至100ml液体生产培养基中，于37℃、180r/min条件下培养20h；

 3、吸取1ml液体生产培养基菌液，梯度稀释为10^-6、10^-7、10^-8的菌液，吸取0.1ml上述各梯度稀释菌液于菌落计数培养基上涂布、计数；设3个平行组。具体结果见表2。

表2

结果表明，本发明建立的以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基并按其使用方法对市面上常见的枯草芽孢杆菌固体产品进行规模化培养后，活菌浓度为4.4×10⁹CFU/ml。

实施案例三

以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，按下列步骤对地衣芽孢杆菌活菌进行规模化培养测试，具体如下：

1、挑取LB固体培养基（/L：蛋白胨10g，酵母粉 5g，琼脂 15g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min）上纯化的地衣芽孢杆菌的单菌落至100ml基础生长培养基中，于37℃、180r/min条件下培养24h；

2、吸取1ml培养24h后的基础生长培养基菌液至100ml液体生产培养基中，于37℃、180r/min条件下培养20h；

3、吸取1ml液体生产培养基菌液，梯度稀释为10^-6、10^-7、10^-8的菌液；吸取0.1ml上述各梯度稀释菌液于菌落计数培养基上涂布、计数；设3个平行组。具体结果见表3。

表3

*，菌落长满整个平板，无法有效计数。

结果表明，本发明建立的以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基并按其使用方法对地衣芽孢杆菌活菌单菌落进行规模化培养后，活菌浓度为1.1×10¹⁰CFU/ml。

图1是芽孢杆菌的芽孢；图中箭头所示为芽孢，呈绿色、椭圆或卵圆型、端生或中生、大小多为0.7~0.9μm×1.0~1.5μm；营养体呈红色，杆状、大小多为0.8~1.2μm×2.5~4.5μm。

图2是菌落计数培养基上的芽孢杆菌菌落形态。图中箭头所示为菌落，形态扁平、灰白色、边缘不整齐、扩散生长、皱褶、不透明、d=2~4mm。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (1)

1.以甘蔗糖蜜为主要原料的芽孢杆菌培养基，其特征在于包括：

（1）基础生长培养基 (/L)：甘蔗糖蜜 5~10g，麸皮 4~8g，K₂HPO₄ 1g，MnSO₄·H₂O  0.03g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min；

（2）液体生产培养基(/L)：甘蔗糖蜜7~15g，麸皮4~8g，玉米粉 2g，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄·H₂O  0.05g，MgSO₄·7H₂O  0.1g，pH7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min；

（3）菌落计数培养基(/L)：甘蔗糖蜜7~15g，麸皮4~8g，玉米粉 2g，K₂HPO₄ 2g，MnSO₄·H₂O  0.05g，MgSO₄·7H₂O  0.1g，琼脂16g，pH 7.2，灭菌海水1000ml，121℃灭菌20min。

Images