CN103125506A - 含嘧霉胺的杀菌剂组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含嘧霉胺的杀菌剂组合物，该杀菌剂组合物的活性成分由木霉菌素和嘧霉胺组成，木霉菌素和嘧霉胺质量比为1~50：99~50。进一步而言，杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：10~40%杀菌剂组合物的活性成分、10~20%溶剂、4~8%乳化剂、1~3%分散剂、1~3%抗冻剂、0.5%增稠剂、0.5~1.5%增效剂、1%稳定剂，余量为水；上述%为质量%。该杀菌剂组合物具有明显的增效作用，能解决上述两种药剂单独使用的不足之处，减少了施药次数、减少施药量以及消除木霉菌素单独施用对植物产生的药害，特别是对具有抗药性的病原菌具有很强的作用效果。

Description

含嘧霉胺的杀菌剂组合物

技术领域

本发明属于植物保护领域，特别是涉及一种具有改进性能的杀菌剂组合物以及制备方法和用途，具体地说是涉及一种包含木霉菌素和嘧霉胺的杀菌剂组合物及制备方法和该组合物的用途。

背景技术

灰霉病是保护地蔬菜的主要病害之一，病原菌是半知菌亚门葡萄孢属的真菌，主要有3个种：灰葡萄孢(Botrytis cinerer Pers．ex Fr．)、鳞葡萄孢(Botrytissquamosa Walker)和葱腐葡萄孢(Botrytis alliiMunn)，以灰葡萄孢的寄主范围最广，能够危害茄子、番茄、辣椒等多种蔬菜及果树、花卉等多种园艺植物的叶、花、果等。低温高湿环境利于该病发生，环境条件适宜时，可导致大量的果实腐烂，严重影响产品的产量和品质，对保护地蔬菜瓜果生产造成很大威胁。由于尚无抗灰霉病的材料或品种，长期以来灰霉病的防治主要依靠化学防治。由灰葡萄孢菌侵染所致的番茄、黄瓜灰霉病可引起20％～30％的损失，各地均有发生，保护地设施栽培更为严重。目前还未发现灰霉病抗源材料，因此难以通过抗病育种来防治，生产上主要通过化学药剂来控制病害的发生与流行。不合理用药、肓目用药促使病菌抗药性的迅速产生，如今灰霉病菌对多菌灵等苯并咪哇类杀菌剂已产生非常严重的抗性，该类杀菌剂已没有应用价值。

嘧霉胺（Pyrimethanil，N-（4,6-二甲基嘧啶-2-基）苯胺）属苯胺基嘧啶类合成杀菌剂，无色晶体或白色或白色带微黄色结晶，能溶于有机溶剂，微溶于水，室温下在水中溶解度为0.121g/L， 熔点96.3℃，蒸气压2.2×10-3Pa，在弱酸-弱碱性条件下稳定；其化学结构式如式1所示。嘧霉胺是传统农用杀菌剂，对黄瓜灰霉病、番茄灰霉病和枯萎病的防治活性较高，是目前防治灰霉病的当家品种。它作用机制独特，通过抑制病原菌浸染酶的产生来阻止病菌侵染，具有低毒、无致畸、致癌和致突变等特点。对作物具有保护和治疗作用，同时具有内吸和熏蒸作用，施药后迅速达到植株的花、幼果等喷雾无法达到的部位杀死病菌，尤其是加入卤族特效渗透剂后，可增加在叶片和果实附着时间和渗透速度，目前国内复配成功的有41%聚砹·嘧霉胺组合物。嘧霉胺对常用非苯胺基嘧啶类（苯并咪唑类及氨基甲酸脂类）杀菌剂已产生抗药性的灰霉病菌有强效，但由于嘧霉胺作用位点单一，加上许多农民习惯连年使用、一季喷洒多次和不合理的提高用药量，导致其成为高抗药性风险杀菌剂，国内外均有报道灰霉病对嘧霉胺产生了严重的抗药性。

式1

木霉菌素（化学结构式如式2所示）于1960S首次在短密木霉中被发现，是真核生物蛋白合成延伸与终止的优良抑制剂。葡萄穗霉菌stachybotrys,漆斑菌myrothecium,刺黑乌霉菌memnoniella, 肉棒菌属podostroma cornudamae ，哈茨木霉trichoderma. harzianum和紫杉木霉trichoderma. taxi等菌都能代谢产生木霉菌素，木霉菌素发现几十年来，后人研究重点将其作为一种单端孢霉烯真菌毒素，主要研究其抑制蛋白质合成的机制。后来研究发现，木霉菌素对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、稻梨孢菌（Pyricularia oryzae）、终极腐霉（Pythium ultimum）和尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp cucumber）等多种植物病原菌均具有很强的抑制活性，在弱酸或弱碱性环境下稳定，属高效低毒微生物源农药，对非靶标生物安全，而且对使用者和环境安全友好，作用时效持久，并且它的作用机制和嘧霉胺完全不相同。

式2

生物源天然药物安全性好，是现代医药、农业中新药创制的重要途径，我国动植物、微生物资源丰富，在天然药物研制上具有得天独厚的优势，并且我国具有应用天然药物防治各种病虫害的传统。从植物内生真菌中研究开发防治植物病害的木霉菌素是一种高效低毒的、对环境友好的新型天然药物，为解决因抗药性发展、化学合成农药对环境、食品累积性污染等问题而带来的作物病害防治难的困局提供了替代药物，符合国家绿色食品生产的要求，因此产品国内外市场竞争力很强，应用前景十分广阔。新型真菌源生物农药木霉菌素在植物病害防治上具有良好的应用前景，特别适合防治保护地蔬菜瓜果真菌性病害，但由于其生产成本高，一定程度上限制了其大规模推广应用，特别是在低端农产品生产过程中的应用受到了极大的限制。

农药毒性及环境友好性越来越受到人们重视，选用高效低毒低残留的新型农药成为趋势。嘧霉胺为低毒低残留化学合成农药，近年来抗药性问题导致其使用受到限制，混用和复配是延长老品种农药的使用寿命、缓解靶标生物的抗药性、扩大防治谱、提高药剂防效和环境安全性的主要手段，通过不同作用机制药剂复配来延缓病原菌抗药性，同时可提高药剂防效。嘧霉胺进行复配有许多成功的经验，德国拜耳农科股份有限公司的P.多费特等[PCT/EP2002/011122002.9.17]将嘧霉胺和异菌脲以1:2-2:1的比例进行复配，扩大了杀菌剂嘧霉胺的抑菌谱，复配剂可治疗或预防性控制链格孢属、核盘菌属、从梗孢属、壳二孢属和球腔菌属造成的真菌性植物病害；江苏省农业科学院[200810195214.3]蔺经等发明人研制成功鲍曼菌液活性粗浸膏和嘧霉胺复配杀菌剂用于防治梨黑斑病；陕西标正作物科学有限公司的景辉等发明人研究成功一种含烟酰胺和嘧霉胺的农药杀菌剂组合物[200910023669.1]，有效组分烟酰胺和嘧霉胺质量比为5:1-1:5，并开发成可湿性粉剂和水分散剂两种剂型，该组合物可提高药效；江苏辉丰农化股份有限公司的仲汉良[200910032951.6]将咪鲜胺和嘧霉胺进行复配，可以显著提高药效，降低药剂的使用量；江苏省农业科学院的刘邮洲等将枯草芽孢杆菌和嘧霉胺进行复配[200910234937.4]，用于防治果树的黑斑病，充分发挥微生物和化学药剂的协同作用，减少了化学药效的使用量，提高了对病害的防效；青岛海利尔药业有限公司陆书桥等将氟啶胺和嘧霉胺以重量比为1-40:5-50进行复配[201010155192.5]，加工成可湿性粉剂、水分散剂和悬浮剂，用于防治禾谷类和瓜类、蔬菜等多种作物多种真菌引致的病害；吉林省八达农药有限公司孙永吉等[201210352520.X]将丁香菌酯和嘧霉胺两种作用机制不同的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂进行复配，减弱了病原菌对丁香菌酯的抗药性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种含嘧霉胺的杀菌剂组合物，该组合物包含作为有效成分的木霉菌素和嘧霉胺，该杀菌剂组合物具有明显的增效作用，能解决上述两种药剂单独使用的不足之处，减少了施药次数、减少施药量以及消除木霉菌素单独施用对植物产生的药害，特别是对具有抗药性的病原菌具有很强的作用效果，而且杀菌剂木霉菌素和嘧霉胺两种药剂之间没有明显的交互抗性。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种了含嘧霉胺的杀菌剂组合物，该杀菌剂组合物的活性成分由木霉菌素和嘧霉胺组成，木霉菌素和嘧霉胺质量比为1~50：99~50。

作为本发明的含嘧霉胺的杀菌剂组合物的改进：木霉菌素和嘧霉胺质量比为以下任意一种：

5:95、10:90、20:80或30:70。最优选为10:90。

作为本发明的含嘧霉胺的杀菌剂组合物的进一步改进：杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

杀菌剂组合物的活性成分  10~40%；

余量为水；

上述%为质量%。

作为本发明的含嘧霉胺的杀菌剂组合物的进一步改进：

溶剂为200#溶剂油、石油醚、二甲苯、甲苯或苯；优选的溶剂为200#溶剂油或二甲苯，最优选为200#溶剂油；

乳化剂为蓖麻油聚氧乙烯基醚乳化剂（亨斯迈TERMUL1284）、阴/非离子混合型乳化剂（亨斯迈TERMUL5030）、十二烷基苯磺酸钙、PO-EO嵌段聚醚、C13羰基醇乙氧基和C10脂肪醇乙氧基萘中的至少一种；本发明优选的乳化剂为蓖麻油聚氧乙烯基醚乳化剂（亨斯迈TERMUL1284）、阴/非离子混合型乳化剂（亨斯迈TERMUL5030）、PO-EO嵌段聚醚或C13羰基醇乙氧基，最优选为蓖麻油聚氧乙烯基醚乳化剂（亨斯迈TERMUL1284）和阴/非离子混合型乳化剂（亨斯迈TERMUL5030）；

分散剂为TamolNN8906（磺酸缩合物钠盐）；

抗冻剂为异丁醇、乙二醇或丙三醇，优选的抗冻剂为异丁醇或丙三醇，最优选为异丁醇；

增稠剂为黄原胶、聚乙烯醇或羧甲基纤维素钠，优选的增稠剂为黄原胶或羧甲基纤维素钠，最优选为黄原胶；

增效剂为乙氧基改性聚三硅氧烷；

稳定剂为2,6-二叔丁基对苯二酚（BHT）、叔丁基-4-羟基茄香醚(BHA)或叔丁基对苯二酚（TBHQ），优选为叔丁基对苯二酚（TBHQ）。

备注说明：

木霉菌素和嘧霉胺原药在常温下为固体，水溶性差，需要采用溶剂将原药制成常温下能稳定保存的溶液，本发明中所述的溶剂优选为200#溶剂油（主要含正庚烷、异庚烷和环庚烷等）。

乳化剂和分散剂是降低液体的表面和界面张力，将油相乳化成微小的油珠悬浮于水相中，形成相对稳定的乳状液体，并能保持水乳剂的粘度和低温稳定性。乳化能力、吸附能力、安全性、用量多少，与原药、溶剂和其它辅助材料有良好的相容性，对水质和温度的适应能力，是否有助于药剂在防治对象上的附着、润湿和渗透能力等等是乳化剂选择主要的指标。因此，乳化剂优选为聚氧乙烯基醚乳化剂（亨斯迈TERMUL1284）和阴/非离子混合型乳化剂（亨斯迈TERMUL5030）乳化剂，优选的分散剂为TamolNN8906。

本发明选用的增效剂为乙氧基改性三硅氧烷；它可以轻易湿润几乎所有种类的叶面，使药液到达难以润湿的地方(如叶片底部害虫)，促进药液快速吸收；具有极强的耐雨水冲刷及渗透能力，能显著提高农药的有效利用率，提高药效30-50%；超级扩展能力，扩展面积远大于普通液体，大大增加了药液接触捕杀目标的机会；可减少单位面积农药使用量和用水量，减少劳动量，降低人工成本。

作为本发明的含嘧霉胺的杀菌剂组合物的进一步改进：杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

余量为水。

作为本发明的含嘧霉胺的杀菌剂组合物的进一步改进：杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

余量为水。

备注说明：本发明的杀菌剂组合物有效成分可按需要添加不同的填料、增效剂以及其它辅助材料，从而加工成可以接受的剂型，如水乳剂。

本发明所提供的杀菌剂组合物的用途是防治植物灰霉病，特别是适用于抗药性区域使用。

本发明所述的杀菌剂组合物中嘧霉胺和木霉菌素之间不存在交互抗性，这为嘧霉胺和木霉菌素复配提供了理论基础。由于嘧霉胺为作用机制独特的化学合成药剂，具有低毒、无致畸、致癌和致突变以及生产成本低等特点，对作物具有保护和治疗作用，同时具有内吸和熏蒸作用，施药后迅速达到植株的花、幼果等喷雾无法达到的部位杀死病菌，但是近年来抗药性突变病原菌发展迅猛，导致嘧霉胺在许多地方无法有效使用。木霉菌素通过核糖体亚基上的结合位点而抑制肽转移酶活性进而阻止蛋白质合成，能抑制蛋白质合成过程中的起始、延伸和终止，长期使用病原菌对其也不易产生抗药性。木霉菌素为真菌源新型生物农药，作用机制和嘧霉胺完全不同，它和嘧霉胺的复配对于避免或延缓嘧霉胺的抗药性、延长老品种农药嘧霉胺的使用寿命、提高药剂防效、降低使用成本和环境安全性等方面具有重要的意义。此外，嘧霉胺在全球的使用量巨大，这也为这一复配制剂的推广应用提供了宽阔的平强。

将具有不同作用机制的药剂，尤其是具有负交互抗药性的药剂进行复配是进行抗药性治理和延缓药剂抗药产生的一项重要措施。本发明复配杀菌组合物具有以下优点：

1）、该杀菌组合物将作用位点单一的嘧霉胺和多个作用位点的木霉菌素进行复配，为避免或延缓嘧霉胺的抗药性、延长低成本的老品种农药嘧霉胺使用寿命和提高药剂防治效果具有重大意义；

2）、木霉菌素为真菌源新型生物农药，具有高效低毒、对环境友好的优点，符合国家绿色食品生产的要求，适合防治保护地蔬菜瓜果真菌性病害，应用前景十分广阔，但由于其生产成本高，一定程度上限制了其大规模推广应用，特别是在低端农产品生产过程中的应用受到了极大的限制。嘧霉胺和木霉菌素的复配可以显著降低生产和使用成本，为木霉菌素的大范围推广应用提供了基础条件。

本发明所提供一种增效明显的杀菌剂组合物为水乳剂时，外观为不透明的灰白色乳状液体，平均粒径为1.0-3.0微米，与乳油剂相比，由于水乳剂以水代替了大量的有机溶剂，减少了对环境的污染，同时可以大大提高生产、贮运和使用的安全性。

相比与现有技术，本发明所述的木霉菌素和嘧霉胺复配组合物水乳剂具有如下优点：

1、提高了药效、延长老品种药剂的使用寿命：木霉菌素和嘧霉胺的复配，提高了嘧霉胺药剂在抗药性区域的防治效果。由于嘧霉胺作用位点单一，加上长时间、不合理的用药，嘧霉胺抗药性已经非常严重。

2、减少新农药开发费用、降低使用成本：嘧霉胺为低毒高效的化学合成农药，延长期使用寿命相当于减少新型农药开发的费用。

木霉菌素为新型真菌源生物农药，生产成本相对较高，嘧霉胺和木霉菌素的复配降低了制剂的生产成本，同时也降低了农业生产的使用成本

3、提高安全性、降低环境污染：由于用水代替大量有机溶剂，提高了农药的生产、贮存、运输和使用等环节的安全性，减少了药剂施用时有机溶剂对环境的释放量，符合绿色环保的发展要求。

综上所述，本发明为了充分发挥嘧霉胺和木霉菌素两种不同类型杀菌剂所具有的优点，通过系列研究证明，嘧霉胺和木霉菌素在一定的比例范围内进行复配使用增效作用明显，可有效提高对病害的防治效果，降低抗性菌株对嘧霉胺的抗药性，延长嘧霉胺的使用寿命，降低农药的使用成本。通过大量文献查证，有关嘧霉胺和木霉菌素的复配研究目前国内外均未见报道。

传统的农药剂型主要是乳油和可湿性粉剂，乳油在加工的过程中需要大量的有机溶剂，如甲苯、二甲苯和苯等，有机溶剂的大量使用不仅造成化工原料的浪费，同时还会给环境和人类健康带来了很大的危害；可湿性粉剂在加工和使用过程中存在粉尘污染严重，对环境和人体健康有很大的危害，而且还具有利用率低、药效持久性短等缺点。创制高效、低毒、低残留的新品种农药是生产研究领域的重点，在应用领域推广使用与环境相容性好的农药新剂型也是当前农药发展的重要方向。目前在国际上剂型研究主要有水基化制剂、粒状化制剂、高浓度乳油、高含量粉体制剂和植物油型悬乳剂。水基化制剂以水取代有机溶剂作为主要载体，主要剂型有：水剂(AS)、水乳剂(EW)、微乳剂(ME)和水悬浮剂(SC)。水基化制剂无疑是环保型的剂型，但环保型的剂型不一定能生产出环保型的制剂产品，由于以水基代替了油基，使农药原药与靶标的亲合力有所下降，如果没有相应助剂的配合，会使药效明显降低，不仅造成原料的浪费，而且还会造成一定程度的农药污染。没有防效作保障的水基化制剂不能称得上是真正的环保型产品，因此我们在剂型研制加工过程中，着重考虑制剂的有效成组分的物理化学稳定性及多功能性助剂的应用，在高效低毒的剂型方面做文章。

本发明的实际使用方法和用量为：在灰霉病发生初期施第一次药，之后每隔7天再施用一次，一般用药3-4次。施用时将组合物稀释至有效成分（即杀菌剂组合物的活性成分）浓度为150~250 mg/l （例如为200mg/l），亩施用量约为50公斤（稀释后的重量），施用时应在阴天或晴天，若施药后1小时内就下雨应进行补施。施用时不得与其它碱性或强酸性药剂混合使用。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是处理1~处理4对番茄灰霉病离体叶片防效对比图；

ck：空白对照，即处理4；

trichodermin  100：木霉菌素10%水乳剂稀释到有效成分终浓度为100mg/l，即处理1；

pyrimethanil  400：嘧霉胺40%悬浮液稀释到有效成分终浓度为400mg/l，即处理2；

T:P=1:9  400：木霉菌素:嘧霉胺10:90混剂（10%的有效成份）稀释到有效成分终浓度为400mg/l，处理3。

具体实施方式

实施例1 嘧霉胺和木霉菌素的联合毒力测试

1.供试药剂：

木霉菌素：可由浙江大化生物科技股份有限公司提拱；

嘧霉胺：可由德国拜耳（中国）公司拜耳作物科学提供。

2. 供试菌株：

嘧霉胺抗药性菌株，灰葡萄孢菌Botrytis cinerea Pers（蕃茄灰霉病菌），浙江大学生物技术研究所马忠华教授提供。

3. 培养基：

马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar，PDA）330126197404302310

4.方法

采用菌丝生长速率法测试木霉菌素、嘧霉胺及其复配药剂对抗药性灰霉病菌的毒力系数。复配药剂为木霉菌素和嘧霉胺的质量比分别为1:99、5:95、10:90、20:80、30:70、50:50、70:30、80:20、90:10，将各供试药剂分别用无菌水稀释成系列梯度浓度后加入PDA培养基，制成最终浓度（为有效成份）分别是250、125、62.5、31.3、15.6、7.8、3.9、1.95、0.98和0.49 mg/L的含药平板。每个梯度3个重复，并设以无菌水为空白（CK）对照。直径5mm不锈钢打孔器在病原菌菌落边缘打取菌饼，并将菌饼反接于培养皿中央。25 ℃培养至对照皿菌丝生长接近培养皿边缘时，用十字交叉法测量各药剂处理皿的菌落扩展直径。用下式计算抑制率：

利用DPS统计软件，采用剂量对数-抑菌率机值法计算求得半抑制浓度（EC₅₀）及毒力回归方程。

4.复配制剂的联合共毒系数评价

根据各药剂测定结果，采用剂量对数-抑菌率机值法计算求得半抑制浓度（EC50），利用Y.P.Sun和E.R.Johnson方法计算复配剂的共毒系数，并根据共毒系数大小来评价复配剂增效作用，并确定最佳配比。

毒力指数(TI)=标准杀菌剂EC50/供试药剂EC50×100；

复配制剂实际毒力指数(ATI)=标准药剂EC50/混剂EC50；

复配制剂理论毒力指数(TTI)=单剂A的TI×PA+单剂B的TI×PB，(PA和PB分别是混剂中单剂A和单剂B有效成分的百分含量)；

复配制剂共毒系数(CTC)=混剂的实际毒力指数ATI/混剂的理论毒力指数TTI；

增效作用判断：CTC>120时为增效作用；CTC<80时为拮抗作用；80≤CTC≤120时为相加作用。

从测试分析数据可以看出，灰霉病菌对嘧霉胺具有明显的抗药性，对木霉菌素敏感。利用Y.P.Sun和E.R.Johnson计算方法，木霉菌素与嘧霉胺质量比为1:99、5:95和10:90进行复配时，复配药剂的共毒系数分别为130.0、144.9和171.7，大大高于120的标准值，具有显著的增效作用，其它各配比共毒系数(CTC)均在80-120之间，无明显的增效或拮抗，作用表现为相加。

表1、木霉菌素与嘧霉胺复配制剂的毒力系数

注：表中木霉菌素简称T，嘧霉胺简称P，以下相同。

实施例2 复配制剂药效离体试验

1 供试药剂：

复配药剂：木霉菌素和嘧霉胺质量比为10:90（实施例1中联合毒力测试结果表明，木霉菌素与嘧霉胺10:90的质量比进行复配共毒系数为171.7，增效显著，综合药剂成本和增效比率，木霉菌素与嘧霉胺10:90为最佳配比，因此下面的药效测试均以木霉菌素与嘧霉胺10:90的质量比进行复配）。

2供试作物：

番茄品种为上海番茄研究所上海长征良种实验场提供的合作903大红番茄，市售，批号20091106。番茄种经高锰酸钾浸种消毒，在28℃培养箱中催芽48h，然后在育苗盘中育苗，待三叶一心移栽至直径10cm的花盆中，每盆一株，五叶期用于试验。

3方法

试验共设4个处理：

处理1：木霉菌素10%水乳剂，稀释1000倍；

处理2：嘧霉胺40%悬浮液，  稀释1000倍；

处理3：木霉菌素:嘧霉胺1:9复配剂（10%的有效成份）， 稀释250倍；

木霉菌素:嘧霉胺1:9复配剂（10%的有效成份）的具体配方为：木霉菌素1%，嘧霉胺9%，200#溶剂油15%，蓖麻油聚氧乙烯基醚乳化剂2%，阴/非离子混合型乳化剂2%，萘磺酸缩合物钠盐2%，异丁醇2%，黄原胶0.5%，叔丁基对苯二酚1%，乙氧基改性三硅氧烷1.0%，余量为水。

处理4：清水空白对照。

选取番茄植株相同部位叶片，在相应的药剂溶液中浸泡5-10s后取出自然凉干，每处理20片。将处理后的叶片正面朝上，放置在滤纸覆盖的培养皿中，滤纸上滴加配制好并灭菌的营养液，将直径为5mm的对嘧霉胺具有抗药性的灰霉病菌菌饼反接于叶片中央，在湿度≥95%，25℃的人工气候箱中，滴加营养液保持叶片湿润。72h后调查发病情况，用卡尺测量病斑直径，根据病斑扩散直径计算病情指数和防效。试验重复3次，利用DPS统计软件以Duncan法检验差异显著性（下同）。

离体药效测试结果表明，木霉菌素与嘧霉胺10:90复配剂稀释成有效浓度为400mg/L时防效达到86.6%，明显高于相同浓度嘧霉胺的药效，与100mg/L的木霉菌素防效差异不明显（图1）。

表 2 木霉菌素和嘧霉胺10:90复配剂离体防效

（Table 2 In vitro control efficacies of the trichodermin-pyrimethanil complex preparation (10:90) on tomato leaves  against tomato grey mold）

注：英文字母小写、大写分别代表5%、1%显著水平的差异显著性（Note: The capitalization and the small letter stand for the 1% and 5% significant level, respectively.）。

实施例3 复配制剂盆栽药效试验

1 供试药剂：

复配药剂：木霉菌素和嘧霉胺质量比为10:90。

2供试作物：

番茄品种为上海番茄研究所上海长征良种实验场提供的合作903大红番茄，市售，批号20091106。番茄种经高锰酸钾浸种消毒，在28℃培养箱中催芽48h，然后在育苗盘中育苗，待三叶一心移栽至直径10cm的花盆中，每盆一株，五叶期用于试验。

3方法：

实验共设4个处理

处理1：木霉菌素10%水乳剂，稀释1000倍；

处理2：嘧霉胺40%悬浮液，  稀释1000倍；

处理3（同实施例2的处理3）：木霉菌素：嘧霉胺10:90混剂（10%的有效成份），稀释250倍；

处理4：空白对照。

木霉菌素与嘧霉胺复配混剂药效盆栽试验于2010年3月-6月在浙江大学华家池校区温室内进行。选取长势基本相同，5叶期的番茄植株为测试材料。采用喷雾接种法将对嘧霉胺具有抗药性灰霉菌孢子液均匀地喷撒于叶片表面（灰霉病孢子液浓度为1-5×10⁶个/ml，添加0.5%的吐温-20），待叶片表面基本无水珠后再用高压喷雾器喷撒试验药剂溶液（将药液均匀的喷洒在整个植株上，喷洒至叶面开始滴液为止），每处理10盆，设3个重复。7d后调查和记录每个处理的病斑总数及病斑面积，并进行第二次施药；二次施药7d和14d再进行病情调查，计算病情指数和防治效果，试验调查及分级标准参照农药田间效试验准则（一）。

第一次施药7d后病情调查发现，木霉菌素与嘧霉胺10:90复配剂稀释成有效浓度为400mg/L时的防效明显高于相同浓度的嘧霉胺单独使用，第二次施药14d后复配剂防效达到86.3%，与木霉菌素的防效相当，比单独使用嘧霉胺防效高24.4%，复配剂增效明显。试验中发现10%木霉菌素水乳剂对植株有药害，而嘧霉胺悬浮液和木霉菌素与嘧霉胺复配剂对植株没有药害。

表 3木霉菌素和嘧霉胺10:90复配剂对番茄灰霉病盆栽防效

注：英文字母小写、大写分别代表5%、1%显著水平的差异显著性（Note: The capital letters and small letters stand forthe 1% and 5% significant level, respectively）。

根据上述实施例1、2和3，能说明本发明的杀菌剂组合物对抗药性病原菌具有很好的效果。

实施例4、木霉菌素和嘧霉胺组合物剂型的研究：

所设置的9种杀菌组合物（水乳剂）的成分和含量如表4所示，%为质量百分比。

表4

本发明所述的木霉菌素和嘧霉胺组合物水乳剂组成为木霉菌素1-4%、嘧霉胺9-36%、溶剂10-20%、乳化剂4-8%、分散剂1-3%、抗冻剂1-3%、增稠剂0.5%、增效剂0.5-1.5%和稳定剂1%，余量为水。在前期的工作基础上，200#溶剂油为溶剂，蓖麻油聚氧乙烯基醚（亨斯迈TERMUL1284）和阴/非离子混合物（亨斯迈TERMUL5030）为乳化剂，TamolNN8906为分散剂，异丁醇为抗冻剂、黄原胶为增稠剂、叔丁基对苯二酚为抗氧化稳定剂、乙氧基改性三硅氧烷为增效剂，其它用水补足。

按照上表4给出的配方，制备方法如下：

先用200#溶剂油溶解木霉菌素和嘧霉胺原药，然后加入乳化剂蓖麻油聚氧乙烯基醚（亨斯迈TERMUL1284）和阴/非离子混合物（亨斯迈TERMUL5030），分散剂TamolNN8906，抗冻剂异丁醇、增稠剂黄原胶、抗氧化稳定剂叔丁基对苯二酚构成油相，接着在搅拌（转速为15000r/min）的状态下慢慢加入水，体系逐渐变稠，当达到最稠时（转相点，此时加入的水量约为总用水量的30-40%），减缓搅拌速度（转速为3000r/min），最后将余下的水补足，加入增效剂乙氧基改性三硅氧烷，高剪切力分散乳化机剪切1小时（转速为15000r/min），即得水乳剂，所得水乳剂各项检测结果如表5所述。

为了得到更理想的配比，设计了如上表4所述的系列配方进行验证，根据一般农药悬浮剂、乳剂的基本要求，进行外观、有效成分含量、pH值范围、倾倒性试验、稳定性试验、低温及热贮试验和药效等指标测试，优选最佳配方。

外观是直观反映产品质量的指标，外观应为均匀的乳白色或淡黄色乳状液，无明显可见杂质，在存放过程中可能会出现少量水层，经手摇应恢复原状，不应有结块现象。

有效成分含量与农药的生物活性、田间试验防治效果、安全性及经济性等因素直接相关，应达到合适的制剂有效成分含量。以乙腈+水（用磷酸盐调节酸度值为3）为流动相，使用C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器(检测波长分别为193nm和300nm)，对制剂的木霉菌素和嘧霉胺含量进行检测，采用外标法定量；

pH应满足农药稳定性要求，过酸或过碱会影响产品的使用效果，pH值范围应在5-7之间。按GB/T1601中“进行pH计”法进行。

倾倒性能的好坏直接影响农药计量的准确性，从而影响使用效果。为使农药使用时易于准确计量，依据表产品的特性制定倾倒后残余物X₁≤5.0%和洗涤后残余物X₂≤1.0%两项控制标准。

乳化稳定性能的好坏影响农药在水中分散的均匀性，要求药液稀释200倍，在规定的时间内上无浮油下无沉淀即为合格，试验方法按GB/T1603进行试验。

低温稳定性能的好坏影响农药的保存和使用，样品在（0±2）℃贮存条件下放置7d后，100ml的试样的离心管底部离析物的体积≤0.3ml为合格。

热贮稳定性能的好坏影响农药的保存和使用，样品在（54±2）℃条件下处理14d后，相对分解率不大于5%为合格。

水基化制剂无疑是环保型的剂型，但环保型的剂型不一定能生产出环保型的制剂产品，由于以水基代替了油基，使农药原药与靶标的亲合力有所下降，如果没有相应助剂的配合，会使药效明显降低，不仅造成原料的浪费，而且还会造成一定程度的农药污染，没有防效作保障的水基化制剂不能称得上是真正的环保型产品，药效的好坏是一个制剂的关键所在，总而言之，药效是评判制剂是否优良的主要指标，因此需要对各种配方进行防效测试，最终选定最佳配比。各种试验复配制剂药效测试步骤如下所述：

1 供试药剂：

木霉菌素：可由浙江大化生物科技股份有限公司提拱；

嘧霉胺：可由德国拜耳（中国）公司拜耳作物科学提供。

复配药剂：木霉菌素和嘧霉胺复配试验制剂（配方1-9）

2供试作物：

番茄品种为上海番茄研究所上海长征良种实验场提供的合作903大红番茄，市售，批号20091106。番茄种按照常规育种，然后在育苗盘中育苗，待三叶一心移栽至直径10cm的花盆中，每盆一株，五叶期用于试验。

3方法：

实验共设12个处理

对照处理1：木霉菌素10%水乳剂，稀释1000倍液，有效成份浓度为100mg/l；

对照处理2：嘧霉胺40%悬浮液，稀释1000倍，有效成份浓度为400mg/l；

处理1-9：木霉菌素和嘧霉胺复配试验配方药剂（配方1-9），稀释后的药液有效成份浓度均为400mg/l；

空白对照。

木霉菌素与嘧霉胺复配混剂药效田间试验于2011年2月-3月在福建省顺昌县元坑镇福丰村大棚蔬菜园进行，试验地海拔116.5m，土质为沙壤土，肥力中等，排灌方便。2011年2月7日，在番茄开花座果期（为番茄灰霉病发生初期），按设计用药要求均匀施第一次药；2月14日和2月21日分别施第二、三次药。试验期间一共喷药三次，每次间隔7天。稀释后的药液用量为50公斤，对照片喷等量的清水。试验每小区面积为15平方米，做4次重复，施药所用喷雾器为利农HD-400型喷雾器。试验期间日平均气温为4.2-20.6℃，最高气温7.1-30.4℃，最低气温1.8-15.2℃，施期当天均为晴天，无影响试验结果的恶劣气候条件。第一次施药前调查病情基数，调查总叶数、病叶数及病叶级数，第二次施药前、第三次施药前及第三次药后10天（3月3日）调查番茄的总叶数、发病叶数和病叶级数，计算病情指数、病指减退率和校正防效。调查方法：调查时每小区采用5点取样法，每点调查株，即每小区查10株，每株按上、中、下调查10片叶，调查叶片的同时调查病果数，每小区调查50个果，计算病叶率、病果率、病情指数、病情增长率和校正防效。

病叶分级标准：以叶为单位

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个叶面积的5%以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的6-10%；

5级：病斑面积占整个叶面积的11-20%；

7级：病斑面积占整个叶面积的21-50%；

9级：病斑面积占整个叶面积的50%以上；

药效计算方法

；

进行田间药效测试的同时观察对植物有没有药害，对其它非靶标生物有无不良影响。

表5各配方水乳剂测试结果

从药效分析数据来看，配方3、配方6和配方9低温稳定性不合格，会有沉淀和油析出，稀释200倍表面有油滴析出，不符合水乳剂的质量要求；配方1-配方9的药效均比对照处理2（40%嘧霉胺悬浮剂）好，特别是配方5的药效最好，起效快，持效长，各项检测指标都符合要求，从施用量和生产成本综合来考虑，配方5最为经济。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (6)

1.含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：该杀菌剂组合物的活性成分由木霉菌素和嘧霉胺组成，所述木霉菌素和嘧霉胺质量比为1~50：99~50。

2.根据权利要求1所述的含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：所述木霉菌素和嘧霉胺质量比为以下任意一种：

5:95、10:90、20:80或30:70。

3.根据权利要求1或2所述的含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：所述杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

杀菌剂组合物的活性成分  10~40%；

余量为水；

上述%为质量%。

4.根据权利要求3所述的含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：

溶剂为200#溶剂油、石油醚、二甲苯、甲苯或苯；

乳化剂为蓖麻油聚氧乙烯基醚乳化剂、阴/非离子混合型乳化剂、十二烷基苯磺酸钙、PO-EO嵌段聚醚、C13羰基醇乙氧基和C10脂肪醇乙氧基萘中的至少一种；

分散剂为TamolNN8906；

抗冻剂为异丁醇、乙二醇或丙三醇；

增稠剂为黄原胶、聚乙烯醇或羧甲基纤维素钠；

增效剂为乙氧基改性聚三硅氧烷；

稳定剂为2,6-二叔丁基对苯二酚、叔丁基-4-羟基茄香醚或叔丁基对苯二酚。

5.根据权利要求4所述的含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：所述杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

余量为水。

6.根据权利要求4所述的含嘧霉胺的杀菌剂组合物，其特征是：所述杀菌剂组合物由以下质量含量的成分组成：

余量为水。

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