CN1031170A - 耐逆境植物及其产生方法 - Google Patents

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Abstract

一种生产耐逆境植物的商业方法，采用的步骤是 由愈伤组织材料产生单细胞材料，然后将存活的材料 连续暴露于不断加强的逆境条件下以产生对逆境的 耐性。用耐逆境(突变)的单细胞材料产生愈伤组织， 再从中产生新品种的植株。使用了独特的物质以从 愈伤组织中产生突变的单细胞材料，随后从单细胞材 料产生愈伤组织，然后又产生植株。

Description

本发明涉及耐逆境植物的生产方法，更具体地说，涉及以商业规模生产耐逆境植物为目的而加速基因选择的方法。
众所周知，在植物组织培养中，可得到频率很高的基因变异。这样得到的基因中有些能够赋予植物具有商业意义的耐逆境特性。这些特性包括对于冷、热、pH、盐和病害的耐性。
几十年来，为了以商业规模生产耐逆境植物已作了广泛的努力。一个具体的例子是，已进行了大量工作以寻找产生耐寒植物的方法，而大部分工作是将组织培养物放在冷处，然后研究存活下来的细胞以确定影响抗冻性的不同细胞的差别。可以期望，利用众所周知的细胞培养技术，使大量植物组织培养物反复暴露于其水平不断上升的逆境中（即温度不断降低），能够以商业规模生产耐寒性增强的细胞，从而产生这样的植物。
但实际情况却不是这样。迄今为止，还没有设计出以商业规模生产耐寒植物的细胞培养技术。原因之一可能是基因表达及细胞间的不均一性，在细菌细胞培养中这种均一性是非常明显的。具体地说，迄今为止，还不可能得到这样的植物细胞培养，其中每一个细胞都处于相似的状态或分化阶段，正在表达相同的基因，并具有相等的分裂和分化能力。因此，植物特性一直是不可预测的，并且不能产生具有相同特性的后代。
因此，本发明的一般目的是提供一种能够以商业规模生产耐逆境植物的方法。
更具体地说，本发明进一步的目的是以商业规模生产对于冷、热、pH、盐和/或病害具有耐性的植物。
另一方面，本发明的目的是生产这样的耐逆境植物，其后代（不管如何产生）和果实（如果有的话）也表现出耐逆境的特性。
简而言之，本发明的这些目的和其他目的可通过下述连续步骤而达到：从所选择的植物中提取片段，由此片段产生具有异常单细胞的愈伤组织的增殖物，利用特殊养分由异常单细胞诱导出单细胞的增殖，将单细胞的增殖物放在选定的逆境条件下，取出一部分在逆境条件下存活的单细胞增殖物，使存活的单细胞材料增殖，反复暴露于不断增强的几个逆境条件下，直至几乎所有剩下的单细胞材料都能在所需的逆境水平下存活为止。这种存活的单细胞材料就是新的植物品种的起始材料，首先用它产生愈伤组织材料。然后对此愈伤组织材料进行特别培养，以得到偶尔产生的具有根叶的小植株。可对它们进行盆栽以提供生长迅速的新品种的苗圃植株，也可利用它们产生吸芽（Sucker）以导致进一步的繁殖而获得多个植株。
在本说明书的结束部分，特别指出了本发明的主题并清楚地提出了权利要求。不过，参阅下列详细说明并结合附属的权利要求书和附图，能够对本发明中操作的组织和方法作出最佳理解。在附图中：
图1是根据本发明的原理制备耐逆境植物方法的流程图;
图2是获得一种激素的方法的流程图，此激素适用于由愈伤组织增殖物中的异常单细胞诱导出单细胞增殖物。
在下述实例中，将描述根据本发明产生耐寒植物。本领域专业人员将认识到，能够以同样方式产生能忍耐其他逆境条件（如热、pH、盐和/或病害）的植物。
比如，常见植物（例如兰花、金桔、柏树或柑桔树等）的耐寒品种是按照下述方法产生的：
第一步是得到几种植物片段的起始材料。如果起始材料是木本植物，例如柏树或柑桔树，则从未授粉的花朵或胚珠中采集片段。如果植物是柑桔树，也可使用组织培养。如果植物是肉质植物，则可用未授粉的花朵、胚珠、组织培养或顶芽作为起始材料。图1的框Ⅰ中标明了起始材料的选择。
图1的第二个框指出，对起始材料进行灭菌，直至大约25%的材料死亡。此过程产生一种没有细菌和真菌的培养物，它是一种标准的技术。最方便的是将材料置于培养皿中，向其中加入10%-30%（水中，重量比）漂白剂（例如次氯酸钠）溶液。在大约华氏75度的室温下，在大约5分钟内可观察到起始材料边缘的颜色发生变化（漂白）。
然后，在超净工作台中用镊子取出活的材料置于灭过菌的培养皿中。在培养皿中加入一种含有藻类的特殊养分，使愈伤组织生长增殖并产生异常单细胞。本领域的专业人员将会理解，将起始材料置于一种养分中并使之不受重力影响会导致愈伤组织的生长。愈伤组织的特征是一团含有叶绿素而没有根叶的东西。
特殊养分可以是标准的Knudsen配方，即溶于水中的镁、铁、硫、磷、氮和锰及如下所述的藻类添加剂。使愈伤组织的生长暴露于氧气中也是很重要的，搅动养分或使养分与琼脂混合可保证这一点。琼脂是一种常见物质，是海藻中的一种胶，它使养分悬浮，从而使愈伤组织的生长能够得到氧气。用显微镜观察可见，这一阶段的愈伤组织生长好象微小的绿色蘑茹。图1中的框Ⅲ标明了这一步骤。虽然，使用前将琼脂养分混合物加热是一种标准的操作，但我们使用相对少量的琼脂以仅仅产生轻度凝胶化的混合物，它在搅动下便会液化。
对于一个稍多于40升的批量来说，典型的Knudsen配方（包括琼脂）包括：
水    40升
糖    800克
琼脂    130克
Ca（NO3）2·4H2O 50克
（NH4）2SO425克
KH2PO412.5克
MgSO41.25克
FeSO41.25克
MnSO40.375克
大多数Knudsen养分的pH是5.4，但有些是5.5-6.0。调节pH前，先将混合的组份加热至9℃。加入大约12磅连皮一起捣碎的香蕉，使养分混合物的总体积达到大约43升，就本发明的目的而言，可加强此配方的效力。（已经发现，不加香蕉皮则收效较慢）。为方便起见，称此混合物为“改良的Knudsen养分”。
本方法正是在这一步，即产生异常单细胞的一步，与先有技术的思路发生了第一个根本分歧。以前，从这一步往下走，从来没有以商业规模生产出可预测和可重复的植物品种。其原因据信是愈伤组织的细胞聚集在一起，使得在愈伤组织阶段几乎不可能鉴别出异常细胞并使其分离。如果产生了这种异常细胞，它们很快被它们聚生于其中的细胞聚积体所覆盖。因此，可以认为本方法的以下各步骤是一种由愈伤组织增殖物产生和分离异常单细胞的技术，从而使细胞间达到一致的水平，正象用细菌培养所达到的那样。
以前，人们一直不知道可从愈伤组织材料中产生单细胞阶段的细胞，即使产生了也不知道它们可用于何种目的。不过已经发现，它们能够这样被产生，并确实能够用于某种目的。此目的即提供所要求的一致性，这在愈伤组织水平是非常难以达到的。但从愈伤组织材料产生单细胞的方法要求有一种以前未知的独特的营养制剂。从愈伤组织增殖物中取出异常单细胞，并再次置于含有藻类的特殊养分中。通过物理手段使单细胞在空间上分离，用显微镜很容易观察到其外观呈圆形并具有平滑的细胞壁。与此相反，愈伤组织细胞总是呈束状，并具有锯齿状边缘，表明它是有联络的组织。
如图2的框Ⅰ所示，用眼滴管从任一淡水塘中汲取藻类（它们在显微镜下象分离的很小的绿色卵形体），并采用特殊方法进行制备。用针尖挑起藻，然后在灭过菌的改良的Knudsen培养基表面划动。在华氏70-80度下保温大约1-2天后，沿着划线将不可避免地出现真菌污染物。真菌中存在有单细胞藻类，将它们挑出后置于装有灭过菌的改良的Knudsen培养基的培养皿中以促进增殖。图2的框Ⅲ和图1的框Ⅲ中指出了单细胞藻类的增殖。
然后如图2的框Ⅳ所示，用高速捣碎器（不用热或化学法）将单细胞藻破碎（以防止它们成为容器中的优势生物）以释放出酶（或激素）。必须注意要采用机械分离技术以使酶不受损害。在琼脂培养基上划线也是一种机械分离技术。
图1的框Ⅴ表明，将来自框Ⅳ步骤的愈伤组织增殖物分别置于许多个一加仑的玻璃罐中，它们含有来自藻类的酶（或激素）养分。这一步产生单细胞增殖物。
正是在此单细胞水平而不是在愈伤组织水平将所期望的特性输入植物品种中。这也是与先有技术思路不同的。如图1的框Ⅵ至Ⅹ所示，根据本发明的原理，使单细胞增殖物的存活细胞连续暴露于不断降低的温度下，例如，最终产生细胞之间具有足够一致性的材料，从而形成能够从其中以商业规模生产植物新品种的愈伤组织材料。
图1的框Ⅵ至Ⅹ具体地指出，使单细胞增殖物连续暴露于不断降低的测试温度下，在每一温度下的时间足以杀死大部分，但决不是全部的材料。每次暴露后，取出活的材料置于框Ⅳ和Ⅴ的含藻类激素的培养基中，以为了下一步更低的测试温度制备单细胞增殖物。重复这些步骤，直至在目的温度下100%的材料都保持存活为止。
此存活材料即是植物新品种的起始材料。此处又一次与先有技术的思路不同，这里是由此单细胞材料产生愈伤组织材料。在这个例子中，不仅使用了独特的含藻类激素的培养基，也不仅达到了出人意料的愈伤组织材料的产生，还使此愈伤组织材料能够产生具有独特特性的植物品种，此特性不仅很强，而且还能毫不减弱地传递至连续不断的后代中。真正令人惊奇的是，没有采用杂交便在单细胞水平产生了真正的植物突变。这一点通常一直被认为是不可能的。
由单细胞水平产生愈伤组织材料是这样完成的：在单细胞水平诱导愈伤组织发生变异，并将这些变异的组织置于另一种特别制备的具有特别组分的培养基中。将单细胞增殖物与柳树的形成层物质混合以产生愈伤组织材料。形成层（柳树皮、枝或根）在捣碎后，与单细胞材料具有高度相容性。混合物的组成大约为一份形成层加十份单细胞材料（体积）。形成层物质的制备如下：在10%次氯酸钠溶液中浸泡至大约25%的材料死亡。在大约华氏70-80度的温度下和大约21天内单细胞水平会产生愈伤组织变异。这一步骤示于图1的框Ⅺ中。
从单细胞材料中提取发生变异的愈伤组织并置于许多个玻璃罐中，其中的培养基含有同样比例的捣碎的形成层物质。柳树形成层中含有促进根叶形成的酶或激素。如框Ⅻ所示，愈伤组织水平材料的迅速增殖会偶尔导致带有根叶的小植株的形成。
当有些小植株大约1英寸高时，进行土壤盆栽，以产生新品种的快速生长的苗圃植株，它与起始材料的差别仅在于新品种具有耐寒性。其他植株保留在栽培木箱中的养分-酶明胶中，与进行标准的体外组织培养时完全一样。这些其他植株会产生吸芽，并导致以后的分裂而形成许多个植株。小植株的使用示于框ⅩⅢ中。
藻类是用于从愈伤组织材料产生单细胞材料的独特材料。它含有与高等植物相容的组分。该组分似乎是一种蛋白质，它是生长激素。在本申请中的激素是一种生长调节剂，它能使细胞迅速分裂。单细胞藻类的原生质的提取物（目前还未确定为何物）即是这样一种激素。将此提取物加至一种市售培养基中，例如溶于温水中的Knudsen配方，其中含有钙、镁和铁。如前述加入捣碎的带皮的熟香蕉。一旦将单细胞材料转移至许多个一加仑的玻璃罐中后，即提供市售的养分使之快速生长。必须注意，在琼脂培养基中使用了独特的材料作为添加剂以在愈伤组织增殖物中产生异常的单细胞，又在单细胞增殖物中产生愈伤组织的变异。在前一情况下用的是藻类激素;在后一种情况下用的是柳树的形成层。
如下所述，产生了一种耐寒的兰花：起始材料得自美国中部天然生长的附生植物兰花Brassovola    Nodossa。采集针头大小的一部分外分生组织（“外植体”）。该材料在超净工作台中被切下来。为了杀死霉菌或表面上的所有其他外源生物，用10%的漂白剂（例如次氯酸钠）水溶液对材料外部喷雾。注意不要使漂白液与脆弱的起始材料直接接触。
将外植体置于600毫升的三角瓶中，其中装有标准Knudsen配方的养分混合物，每升溶液中含有1-1/2只熟香蕉（包括皮）。在溶液中加入琼脂，使其达到稀薄的一经搅动便可再次液化的明胶稠度。达到此稠度每升大约需要2克琼脂。溶液pH调在5.5和6.0之间，用氢氧化钾升高pH，用Rangspur酸橙汁降低pH。三角瓶用棉花塞紧，使得空气能够通过但能消除污染。然后将三角瓶置于摇床上，放在适于生长的光下。
12周内，瓶中充满了初生愈伤组织（象苔藓）。在超净工作台中（保证无菌环境）将愈伤组织材料转移至另外几个罐中，直至产生了500加仑愈伤组织材料为止。
将绿藻（Nortoc种）与培养液以50-50的比例在捣碎器中磨碎，然后加至愈伤组织材料中，以在所形成的愈伤组织增殖物中产生异常的单细胞。异常单细胞在3周内出现。
将异常单细胞转移至500个一加仑的玻璃罐中，然后在其中加入含有藻类的培养基。玻璃罐用单孔橡皮塞塞紧，孔中塞有作为呼吸用塞子的不吸水的棉花。玻璃罐置于旋转摇床上，加以每天16小时的生长用光照，使玻璃罐每10分钟转完一周。材料维持在大约华氏75-80度。90天内，玻璃罐中充满了单细胞培养物（每瓶大约5×109个细胞）。
作为起始材料来源的兰花，其正常杀死温度是华氏26度。因此，将玻璃罐置于华氏16度下的冰冻器中24小时。然后，玻璃罐在每天16小时的生长用光照下置于其生长位置60天，罐子每10分钟旋转一圈。
发现了很少量（每瓶中痕量）的存活体。将存活体转移至新的罐中，在含有藻的培养基中再培养18周，直至500个罐子被再度充满。然后，再次将罐子于华氏16度下置于冰冻器中24小时。观察到的死亡率低于5%。
然后使玻璃罐暴露于华氏6度的温度下24小时。这一次存活了几百个异常单细胞。将此材料转移至新的罐中，再培养大约18周，使其总量达到500罐。使玻璃罐再次置于华氏负6度的冰冻器中24小时。所有的材料都存活。
在本方法的这一步，已经得到了耐寒的突变兰花品种，其耐寒性远远优于其亲本材料，但此品种还只在单细胞水平。
将新的耐寒材料再次置于改良的Knudsen培养基中（包括上述的香蕉和皮），其中，以每升养分混合物10立方厘米的比例加入捣碎的黑柳树（Salix    Nigra品种）形成层。
作为对于所存在的柳树物质的反应，8周内在单细胞材料中出现异常。在此期间，将材料再次置于旋转摇床上，并暴露于每天16小时的光照下。在24周内，500罐单细胞材料的数量产生大约200个小植株。
将小植株转移至生长栽培箱中，暴露于每天16小时的生长用光照下。24周内，每箱具有大约100个小植株的50个栽培箱共产生5，000个小植株。所得到的植株和它们的花都具有耐寒性。
根据本发明的原理，使一种快速生长的柏树（落羽杉，Baldyprus    taxodium    destichum）也具有了耐寒性，此树产于美国东南部的洪水冲积平原（其北部邻接于伊利诺斯州之南）。有些生长更快的柏树通常在华氏0度下结冰，正是由这种形式的柏树得到的一个样本被变成了耐寒性的。
柏树是雌雄同株的。就是说，雄花和雌花分别形成但存在于同一植株上。花在秋天形成，但直到早春才具有受精的功能。在冬天的任一时间，未成熟的雌花和其未受精的胚珠（种子）均可用作外植体。用20个这种外植体开始进行组织培养。
在这种情况下，一个外植体就是一个孢子叶球，由其中埋有胚珠（种子的前身）的鳞片组成。孢子叶球是天然密封的，不含有任何可能感染组织培养基的污染生物。但其外表面如上述在超净工作台上进行灭菌。用蒸馏水洗涤孢子叶球，干燥后在培养皿中切成小块，然后置于600毫升的玻璃瓶中，其中含有Knudsen配方的培养基、藻类、香蕉（带皮）和琼脂。培养基混合物稍呈粘性，因此在搅动下就能够液化。瓶子用不吸水的棉花塞紧，使材料能够进行呼吸。
然后，将瓶子置于低速摇床上（每10分钟旋转一圈），加以每天16小时的生长光照。愈伤组织在24周后开始生长，再过去6周后，则充满了带有异常单细胞的增殖物。
取出材料置于一加仑的玻璃瓶中，再加入藻类养分。通过挑取部分液体并在显微境下观察材料而取出异常的单细胞。观察到分离的小“绿卵”并分批取出置于500个一加仑的玻璃瓶中。
加入藻类养分后，在与上述相同的条件和时间下产生单细胞增殖物。使增殖物以上述方式连续暴露于华氏0度（其正常损伤温度）、华氏-20度（留下5%拇婊钐澹⒒?30度，最后反复暴露在华氏-40度的温度下。每一次在新的更低的温度下时有大约5%的存活率。最后，所有的单细胞材料都在华氏-40度下存活，因此根据前述本发明的原理，提供了突变材料以进行至愈伤组织水平。
用加有如上所述的捣碎的柳树皮的养分处理单细胞材料，产生大量也具有耐害性的愈伤组织材料。愈伤组织材料中含有偶尔产生的小植株，将其转移至盆中，在28周内生长至4英尺大小。随机取10个小植株置于华氏-20度的冰冻器中24小时。没有发生死亡。
从前面的描述明显可见，植物培养中的细胞均一性是通过这样一种出人意外的步骤而达到的，即，使起始的植物培养物成为单细胞水平，从而提供了一种材料使其经受不断加强的逆境水平。正是在此单细胞水平上，能够将选定的耐逆境的特征赋予所选择的起始材料的衍生物-这一结果是以前从未用植物达到过的。我们认为，不仅是认识到应在单细胞水平上连续暴露于不断加强的逆境水平下，还有单细胞水平的存在，达到单细胞水平的方法和用以达到此目的的养分，用以返回愈伤组织水平的养分，以及产生耐逆境植物的整个方法都是新颖和出人意料之外的。
同样明显可见的是，所公开的方法和培养基一般适用于在任何植物中诱导任何一种耐逆境特征，而不仅仅是耐寒性。因此，能以类似方式诱导耐热性，即将单细胞材料的连续增殖物置于温度不断上升的炉子中。同样，将单细胞材料的连续增殖物置于pH水平逐渐上升（或下降）的培养基中可产生耐pH的植物。使单细胞材料的连续增殖物经受具有不同水平盐分的培养基可诱导出耐盐性。同样，在单细胞水平能够诱导对于病害（真菌或病毒）的抗性。成功的关键在于，虽然诱导耐性的方式与先有技术相同，但却是在单细胞水平引入的。
除了耐逆境的特征之外，所产生的植株在各方面都等同于其亲本。没有改变基因，没有加入化学物质，没有使用细菌。只是使用了材料选择法，但加速了自然选择进程，使得在大约3年的期间内，能够产生大量具有耐受选定的逆境这种特征的植株。
可选用无籽植物作为起始材料。在这种情况下，产生的是具有耐逆境特性的无籽植物。另一方面，起始材料也可是有籽植物。在这种情况下，产生的植株也将包括种籽，这些种籽在被播种以后，将会产生（通过有性生殖）具有被诱导出的逆境耐性特征的植株。
利用所公开的方法，已经产生了能够在华氏10度的温度下存活的耐寒金桔。金桔是柑桔类植物的代表。因此，利用所公开的方法，能够产生例如无核或有核的桔子或柚子树。利用本技术产生的任何植物如果具有带籽的果实，则将由这些种籽产生（通过有性生殖）具有同样耐逆境特征的后代。因此，这些种子本身就是独特的。
已经描述了金桔、柏树和兰花作为柑桔类、木材类和花卉植物的代表。在每一种情况下，都导致了致死温度的显著下降。而且，就带有果实的植株而言，在显著低于使一般的类似植物的果实受损害的温度下，这种植株的果实却留在植株上而不受伤害。
下表显示了天然生长的植物和根据本发明的原理产生的耐寒品种之间的比较。很清楚，耐寒性得到了显著改善。
植物    成分    正常致伤温度    耐寒品种的致伤温度
金桔    叶    26°F    10°F
（now）    和果实    26°F    10°F
枝    21°F    4°F
干    15°F    0°F
一般柑桔    叶    26°F    10°F
和果实    26°F    10°F
枝    21°F    4°F
干    15°F    0°F
柏树    叶
（大型s.Fla    和果实
品种）    枝
干    10°F    -20°F
红兰    叶    32°F    19°F
和果实
枝    32°F    19°F
干    30°F    17°F
Brassabola    叶    20°F    10°F
Orchid    和果实
nodossa    枝    9°F
至此，已经用说明性具体方案清楚地描述了本发明的原理，但非常明显的是，在不偏离这些原理的前提下，本领域专业人员可对本发明的实施过程中所用的结构、安排、比例、元件、材料和成分等进行多种改进，以适应特定环境和操作的要求。

Claims (19)

1、一种生产对于给定的逆境条件具有耐性的选定的植物品种的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
A、从选定的植物中提取后段作为起始材料；
B、用一种培养基培养起始材料，从而产生具有异常单细胞的愈伤组织增殖物；
C、由异常单细胞诱导出单细胞增殖物；
D、将单细胞增殖物暴露于给定逆境条件的特殊水平下，直至大部分，但不是所有单细胞增殖物死亡；
E、对步骤D所得到的存活的单细胞材料进行诱导使之增殖；
F、在不断加强的逆境水平下重复步骤D和E，直至达到逆境的目的水平；
G、以步骤F得到的存活的单细胞材料为起点，将存活的单细胞材料反复暴露于目的水平的逆境下，并且每一次都对存活的单细胞材料进行诱导使之增殖，直至几乎所有被测试的增殖物都保持存活时为止；
H、对步骤G得到的存活的单细胞增殖物进行诱导产生异常的愈伤组织；
I、对步骤H所得到的异常愈伤组织进行诱导使之增殖，以期偶尔产生小植株。
2、权利要求1的方法，其特征在于，该方法还包括随后的由小植株栽培成耐逆境植株的步骤。
3、权利要求1的方法，其特征在于，步骤B所用的培养基包括由藻类提取的生长激素。
4、权利要求1的方法，其特征在于，在步骤I中使用了一种含有柳树形成层的养分以促进愈伤组织增殖。
5、权利要求3的方法，其特征在于，在步骤B中所用的养分包括捣碎的香焦和香蕉皮。
6、权利要求4的方法，其特征在于，在步骤I中所用的养分包括捣碎的香焦和香焦皮。
7、权利要求3的方法，其特征在于，由藻类提取的生长激素是根据包括下述步骤的方法提取的：
B1：收集藻类;
B2：在一种培养基的表面上用划线法对所收集的藻类进行机械分离;
B3：使培养基和藻类在某一温度下保留一段时间，以产生带有单细胞藻类斑点的真菌线;
B4：将单细胞藻类置于装有灭过菌的培养基的培养皿中，以使单细胞藻类增殖;
B5：机械破碎单细胞藻类以释放生长激素。
8、权利要求7的方法，其特征在于，所用的培养基含有琼脂。
9、一种根据权利要求1的方法所得到的植物。
10、根据权利要求1的方法所得到的植物的后代。
11、根据权利要求1的方法所得到的植物的果实。
12、根据权利要求1的方法所得到的植物的种子。
13、根据权利要求1的方法所得到的植物的花。
14、权利要求1的方法，其特征在于，起始材料是从包括所选定植物的未授粉的花、胚珠组织培养或顶芽这一组材料中选出来的。
15、一种根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14的方法，其特征在于，给定的逆境条件是寒害。
16、一种根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14的方法，其特征在于，给定的逆境条件是热害。
17、一种根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的方法，其特征在于，给定的逆境条件是盐害。
18、一种根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的方法，其特征在于，给定的逆境条件是pH水平。
19、一种根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的方法，其特征在于，给定的逆境条件是病害。
CN88103832A 1987-06-24 1988-06-24 耐逆境植物及其产生方法 Pending CN1031170A (zh)

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