CN103114064B - 一株对多种植物病原菌具抑菌活性的海洋放线菌 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株对多种植物病原菌具有抑菌活性的海洋放线菌，属于微生物技术领域。所述海洋放线菌为链霉菌（Streptomycessp.）A3202，已于2012年7月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCCNo.6330。该菌株A3202对柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌、柑橘炭疽病菌、柑橘溃疡病菌、番茄早疫病菌、高粱炭疽病菌、棉花黄萎病菌、玉米穗腐病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、玉米青枯病菌和黄瓜枯萎病菌均具有拮抗作用。且对采后柑橘果实上柑橘青霉病、柑橘绿霉病和柑橘炭疽病具有较好的防治效果，具有被开发为生物农药的潜能。

Description

一株对多种植物病原菌具抑菌活性的海洋放线菌

技术领域

本发明涉及一株对多种植物病原菌具有抑菌活性的海洋放线菌，属于微生物技术领域。

背景技术

目前，对植物病害的防治主要以化学防治为主，然而化学农药的长期大量使用往往会导致环境污染、农药残留及致病菌产生抗药性等诸多问题，而生物农药以其高效、低毒、低残留、无污染、不易产生抗药性和原料易得等特性被人们公认为是21世纪理想的药剂。

微生物农药是生物农药的重要组成部分，主要包括微生物活体农药和微生物代谢产物农药。微生物农药的发现和运用已有半个多世纪，在此期间，国内外专家相继研究出了微生物农用杀虫剂、杀菌剂和除草剂等，并且部分产品已进入了市场，如苏云金芽孢杆菌作为微生物杀虫剂和枯草芽孢杆菌作为微生物杀菌剂等已在病虫害防治中得以广泛应用，在农业生产过程中发挥着重要的作用。用于制备微生物农药的微生物来源广泛，可从动植物体、土壤、水体等自然环境中分离获得。

放线菌作为一种资源丰富的微生物类群，是一类高G+C含量的革兰氏阳性细菌，因其具有独特的合成多种复杂结构的次生代谢产物的能力而引起了人们的广泛关注。许多放线菌的次生代谢产物具有医药和植物保护方面的用途，已被广泛开发用作抗细菌、抗真菌和抗肿瘤的药物。现在已发现的数万种微生物来源的生物活性物质中，约有70%是由放线菌所合成的。

目前分离得到的大多数放线菌都来源于土壤，陆生放线菌产生的抗生素占天然来源抗生素的三分之二以上。近年来，从陆地环境中分离新放线菌及从中获得先导化合物的数量越来越少，于是人们把目光投向了更为广阔的生境-海洋，海洋占地球面积的70%，海洋微生物无论从数量还是多样性方面来说都是巨大的。

与陆地环境相比，海洋环境具有高盐、高压、低温、无光照等特点，造就了微生物种类更丰富的多样性和特殊性。海洋放线菌作为海洋微生物中一个重要的类群，广泛分布在海洋各种环境中，如近岸、海滩、海洋动植物体内、海水和深海沉积物等。在这些所谓生命的极限环境中，海洋放线菌通常具有独特的代谢途径和遗传背景，不仅确保其在极端环境中生存，也使其具备了产生特殊结构和功能的活性物质的能力。因此，海洋环境将成为放线菌和放线菌代谢产物的重要新来源，从海洋环境中分离筛选对植物病原物具有拮抗活性的放线菌对于植物病害的生物防治具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一株对多种植物病原菌具抑菌活性的海洋放线菌，该菌株对柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌、柑橘炭疽病菌等多种植物病原菌具有明显的拮抗作用，具有被开发为生物农药的潜能。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供的一株海洋放线菌，为链霉菌（Streptomyces sp.）A3202，已于2012年7月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No. 6330。

本发明提供了所述的海洋放线菌的应用，即链霉菌（Streptomyces sp.）A3202在抑制植物病原菌中的应用，所述植物病原菌为柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌、柑橘炭疽病菌、柑橘溃疡病菌、番茄早疫病菌、高粱炭疽病菌、棉花黄萎病菌、玉米穗腐病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、玉米青枯病菌和黄瓜枯萎病菌。

本发明还提供了所述的海洋放线菌链霉菌（Streptomyces sp.）A3202在制备生物农药中的应用。

所述链霉菌（Streptomyces sp.）A3202是从浙江省台州市玉环县海山潮间带采集的鳞笠藤壶中分离获得，该菌株的培养特征、形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列和菌种分类结果如下：

1、菌株A3202的培养特征和形态特征：菌株A3202在高氏一号培养基（图1）、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基、酵母精麦芽糖琼脂（ISP-2）培养基、燕麦粉琼脂（ISP-3）培养基和无机盐淀粉琼脂（ISP-4）培养基上生长良好，可产生较丰富的气生菌丝。而在葡萄糖天冬素琼脂（ISP-5）培养基和蛋白胨酵母铁琼脂（ISP-6）培养基上生长较弱，无气生菌丝产生。其中菌株在高氏一号培养基上可产生乳白色可溶性色素，而在上述其他培养基上无可溶性色素产生。菌株在不同培养基上的培养特征详见表1。光学显微镜下观察其孢子丝为开环钩形至松敞或紧密螺旋形，孢子呈椭圆形。

2、菌株A3202的生理生化特征：菌株A3202可使淀粉和纤维素水解，不能利用纤维素和七叶苷，无黑色素和H₂S产生，不能使明胶液化，可使牛奶凝固和胨化，对蔗糖、D-葡萄糖、D-木糖、L-肌醇、棉子糖、D-半乳糖、D-甘露醇、L-阿拉伯糖和D-果糖等碳源均有不同程度的利用能力，详见表2。

表1 菌株A3202的培养特征

    注：“∕”表示不确定，“－”表示无气生菌丝或可溶性色素产生。

表2 菌株A3202的生理生化特征

注：“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”表示测定结果为阳性，反应的强弱程度以此为弱、中强、很强；“－”表示测定结果为阴性。

3、菌株A3202的16S rDNA序列：菌株A3202的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。将所得序列于美国国立生物技术信息中心（NCBI）网站上进行Blast比对分析发现，该序列与GenBank中已登录的链霉菌属的Streptomyces costaricanus的4个分离物（GenBank登录号分别为JQ768261、JQ768262、JQ768263、JQ768264）的16S rDNA序列相似性为100%，而与Streptomyces costaricanus的模式菌株（GenBank登录号为NR_041414）的16S rDNA序列相似性仅为98.5%，与Streptomyces costaricanus的其他分离物的16S rDNA序列相似性为98.5%及以下，但其与GenBank中Streptomyces misionensis、Streptomyces phaeoluteichromatogenes、Streptomyces owasiensis等多个菌种的16S rDNA序列表现为99.6%以上的相似性。 

4、菌种分类结果：根据菌株A3202的形态特征、培养特征、生理生化特征及16S rDNA序列，可将其鉴定为放线菌的链霉菌属的菌种。所测的菌株A3202的16S rDNA序列与Streptomyces costaricanus的4个分离物的16S rDNA序列完全一致，但其与Streptomyces costaricanus的模式菌株及其他分离物的序列相似性相对较低，且其与Streptomyces misionensis、Streptomyces phaeoluteichromatogenes、Streptomyces owasiensis等多个不同菌种也表现为非常高的序列相似性。另外，菌株A3202的培养特征和生理生化特征（见表1和表2）也和Streptomyces costaricanus（Esnard J, Potter T L, Zuckerman B M. Streptomyces costaricanus sp. nov., isolated from nematode-suppressive soil[J]. International Journal of Systematic Bacteriologoy, 1995, 45(4): 775-779.）表现出较明显的差异。因此，根据已有研究结果不能鉴定菌株A3202为Streptomyces costaricanus，至于其具体为哪个菌种，尚待进一步研究确定。

因此将菌种命名为链霉菌（Streptomyces sp.）A3202，已于2012年7月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No. 6330。

所述链霉菌（Streptomyces sp.）A3202对柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌、柑橘炭疽病菌、柑橘溃疡病菌、番茄早疫病菌、高粱炭疽病菌、棉花黄萎病菌、玉米穗腐病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、玉米青枯病菌和黄瓜枯萎病菌均具有拮抗作用。

所述链霉菌（Streptomyces sp.）A3202对采后柑橘果实上柑橘青霉病、柑橘绿霉病和柑橘炭疽病具有较好的防治效果。

附图说明

图1为菌株A3202在高氏一号培养基上的培养特征。

图2为菌株A3202的粗提物对柑橘青霉病的防效结果。图中从上到下第一排为无菌水处理后接种病原菌的果实，第二排为菌株A3202粗提液处理后接种病原菌的果实，第三排为咪鲜胺处理后接种病原菌的果实。

图3为菌株A3202的粗提物对柑橘绿霉病的防效结果，图中从上到下第一排为无菌水处理后接种病原菌的果实，第二排为菌株A3202粗提液处理后接种病原菌的果实，第三排为咪鲜胺处理后接种病原菌的果实。

图4为菌株A3202的粗提物对柑橘炭疽病的防效结果，图中从上到下第一排为无菌水处理后接种病原菌的果实，第二排为菌株A3202粗提液处理后接种病原菌的果实，第三排为咪鲜胺处理后接种病原菌的果实。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。

一株对多种植物病原菌具抑菌活性的海洋放线菌，其特征在于：菌种命名为A3202，分类命名：链霉菌（Streptomyces sp.），其保藏编号：CGMCC No. 6330，保藏日期：2012年07月12日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

实施例1：海洋放线菌的分离培养

1、生物材料及培养基：用于分离海洋放线菌的生物材料为采自浙江省台州市玉环县海山潮间带的海洋生物鳞笠藤壶（Tetraclita squamosa）、日本笠藤壶（Tetraclita japonica）、褶牡蛎（Ostrea plicatula）、日本宽板石鳖（Placihorella japonica）、泥螺（Bullacta exarata）和弹涂鱼（Boleophthalmus pectinirostris），共计29份样品。用于放线菌分离所用的培养基为高氏一号培养基（为保证分离放线菌的数量和种类，分离培养基以人工海水配制，配方为：可溶性淀粉20 g、KNO₃ 1 g、K₂HPO₄ 0.5 g、MgSO₄·7H₂O 0.5 g、FeSO₄·7H₂O 0.01 g、NaCl 0.5 g、琼脂 20 g、人工海水1000 mL，pH7.2-7.4；人工海水配方为：NaCl 24.477 g、MgCl₂·6H₂O 4.981 g、Na₂SO₄ 3.917 g、CaCl₂·2H₂O 1.102 g、KCl 0.664 g、NaHCO₃ 0.192 g、KBr 0.096 g、H₃BO₃ 0.026 g、SrCl₂ 0.024 g、NaF 0.0039 g、蒸馏水1000 mL。以下试验中放线菌常规培养所用培养基均以蒸馏水配制）。

2、样品处理：将上述新鲜采集的生物样品放于置有冰袋的泡沫箱内，带回实验室尽快处理。样品称重后，以无菌海水清洗3~5次，以去除表面附着的杂质；将清洗后的样品置于无菌研钵中，按1：8（W/V）加入无菌海水进行匀浆；吸取1 mL匀浆液于离心管中，55℃ 水浴加热6 min；吸取温浴后的样品以10的倍数梯度稀释，分别取各稀释液100 μL，涂布于不同分离培养基中，每个处理重复3次。

3、放线菌培养：将涂布匀浆液的分离培养基置于28℃恒温培养箱中倒置培养，培养7 d左右开始挑取培养基上生长的单菌落进行转接纯化。根据菌株的形态特征和培养特征，去除重复的菌株，最后共计分离获得25株不同的放线菌菌株。对已纯化的菌株，接种于高氏一号斜面培养基中，于28℃恒温培养箱中培养后置于4℃冰箱保存备用。

实施例2：拮抗海洋放线菌的筛选

1、供试菌株及培养基：以植物病原真菌柑橘青霉病菌（Penicillium italicum）、柑橘绿霉病菌（Penicillium digitatum）和柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）作为指示菌，测定所分离的25株放线菌对这些病原菌的抑菌活性，以从中筛选出抑菌活性最强的菌株。用于放线菌培养所用培养基为高氏一号培养基，（具体配方如实施例1中所述）；用于植物病原真菌培养所用培养基为马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基（配制方法为：称取200 g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000 mL煮沸半个小时，纱布过滤，再加20 g葡萄糖和20 g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装至锥形瓶或玻璃试管中，121℃，高压灭菌20 min）。

2、菌株的活化：按以上配方制备相应的培养基，将锥形瓶中的培养基加热溶解后倒入直径为9 cm培养皿中，制备得到培养基平板。挑取保存于4℃冰箱的高氏一号斜面培养基中的放线菌和PDA斜面培养基中的植物病原真菌，分别接种于高氏一号培养基平板和PDA培养基平板上，置于28℃恒温培养箱中培养活化3-5 d。

3、平板对峙培养：以无菌打孔器在上述培养的放线菌和植物病原真菌菌落边缘，分别打取直径为5 mm的菌饼，将放线菌菌饼置于PDA培养基平板或高氏一号培养基平板中央，将植物病原真菌菌饼置于距平板中心约3 cm处的放线菌菌饼的四周（1个放线菌菌饼周围放置同一种植物病原菌菌饼6个），每个放线菌菌株重复3次，同时设立只加植物病原菌菌饼而不加放线菌菌饼的平板作为对照，置于28℃恒温培养箱中培养，待对照中植物病原菌长满整个培养皿时测量放线菌的抑菌带宽度（放线菌菌落边缘至植物病原菌菌落边缘的距离），比较各放线菌菌株抑菌带的大小，从中筛选出对植物病原菌抑菌能力最强的菌株。

通过以上方法，从分离获得的25株放线菌中筛选出一株对植物病原真菌柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌和柑橘炭疽病菌的抑菌能力均较强的菌株，将其命名为A3202。

实施例3：菌株A3202抑菌谱的测定

1、供试菌株及培养基：供试放线菌菌株为上述筛选到的对柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌和柑橘炭疽病菌的均具有抑菌活性的菌株A3202；供试植物病原真菌包括：柑橘青霉病菌（Penicillium italicum）、柑橘绿霉病菌（Penicillium digitatum）、柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）敏感菌株J3（对甲基硫菌灵敏感）、柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）敏感菌株J8（对甲基硫菌灵敏感）、柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）抗性菌株J4（对甲基硫菌灵具抗药性）、柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）抗性菌株W1（对甲基硫菌灵具抗药性）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）、高粱炭疽病菌（Colletotrichum graminicola）、棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae）、玉米穗腐病菌（Fusarium moniliforme）、小麦赤霉病菌（Gibberella zeae）、黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）、西瓜炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare）、玉米青枯病菌（Fusarium gramincarum）和黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerium）；供试植物病原细菌为柑橘溃疡病菌（Xanthomonas axonopodis pv. citri）。用于放线菌培养所用培养基为高氏一号培养基，其具体配方如实施例1中所述；用于植物病原真菌培养所用培养基为马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，其具体配方如实施例2中所述；用于植物病原细菌培养所用培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂（NA）培养基（配方为：牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、琼脂15 g、蒸馏水1000 ml， pH7.0-7.2，121℃，高压灭菌20 min）。

2、菌株的活化：按以上配方制备相应的培养基，将锥形瓶中的培养基加热溶解后倒入直径为9 cm培养皿中，制备得到培养基平板。挑取保存于4℃冰箱的高氏一号斜面培养基中的放线菌、PDA斜面培养基中的植物病原真菌和NA斜面培养基中的植物病原细菌的菌块，分别接种于高氏一号培养基平板、PDA培养基平板和NA培养基平板上，置于28℃恒温培养箱中培养活化3-5 d。

3、抑菌活性的测定：放线菌A3202对植物病原真菌的抑菌活性通过平板对峙培养法在PDA和高氏一号培养基上进行测定，具体方法如实施例2所述；对植物病原细菌的抑菌活性通过抑菌圈法进行测定，具体操作为：用无菌水洗脱NA培养基平板上生长的植物病原细菌，然后调整菌悬液浓度为1.0×10⁶ spores/mL；取1 mL悬浮液加入到20 mL溶解后的NA培养基中混合均匀，然后将混合液倒入到灭菌后的培养皿中；待NA培养基凝固后，以打孔器打取直径5 mm的纯化培养5 d左右的放线菌A3202的菌饼接种于培养皿中心；然后置于28℃恒温培养箱中倒置培养。以只接种靶标植物病原菌的NA平板作为阴性对照。每个处理重复3次。待对照靶标菌长满培养皿时，测处理后的NA平板中放线菌A3202的抑菌圈直径。另外，对于易产生孢子的柑橘青霉病菌和柑橘绿霉病菌，也用此方法再进行一次测定。测量菌株A3202对各植物病原菌的抑菌带宽度，利用SAS软件邓肯新复极差法（DMRT）法对各抑菌带宽度进行显著性差异分析。

菌株A3202对各植物病原菌的抑菌效果见表3。可以看出，菌株A3202对多种植物病原真菌和1种植物病原细菌（柑橘溃疡病菌）均表现出较强的抑制作用。其中，对柑橘青霉病菌和柑橘绿霉病菌的抑菌效果最好，而对黄瓜枯萎病菌的抑菌效果较差。对于同一种植物病原菌，在PDA和高氏一号培养基上菌株A3202表现出相似的抑菌效果。但对于黄瓜灰霉病菌和玉米青枯病菌，菌株A3202除在两种培养基上均可产生抑菌带外，在PDA培养基上还表现出融解真菌菌丝的现象。

表3 菌株A3202对供试植物病原菌的抑菌效果

    注：数据后标有不同字母表示在P=0.05水平差异显著。

实施例4：菌株A3202粗提物对采后柑橘果实的病害防效

1、菌株A3202粗提物的制备：取于高氏一号固体培养基上活化的菌株A3202，接种到高氏一号液体发酵培养基（100 mL培养基/250 mL锥形瓶，配方同高氏一号固体培养基，不含琼脂）中，28℃下摇床200 rpm/min振荡培养6 d后，取发酵液经由无菌滤纸抽滤，分别获得上清液和菌丝体。取上清液，用乙酸乙酯萃取3 次，合并萃取液，得上清液的乙酸乙酯萃取液。菌丝体用80%丙酮水溶液浸泡过夜后，用超声波破碎提取3 次，合并提取液，将提取液减压浓缩至无丙酮后，所得水相再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，得菌丝体的乙酸乙酯萃取液。将上清液和菌丝体的乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩至干，得到该菌株的乙酸乙酯萃取物。

2、菌株A3202粗提物对病害的防效测定：将所得粗提物以无菌水稀释配制成浓度为200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L的溶液。取新鲜柑橘果实（品种为温州蜜柑和甜橙），先用解剖刀于果实腰部刺一伤口（3  mm×3 mm），在伤口处预先滴加15 μL的菌株A3202的粗提物溶液进行处理，以无菌水处理作为阴性对照，以咪鲜胺药液（浓度为400 mg/L）处理作为阳性对照，将各处理后的果实置于保险盒内，于室温放置24 h后，再分别接种15 μL的柑橘青霉病菌、柑橘绿霉病菌和柑橘炭疽病菌的分生孢子悬浮液（以无菌水洗脱培养基上生长的各病原菌的菌落，调整其最终浓度为10⁶ spore/mL），塑料袋密封保鲜盒后置于28℃下保湿培养。每次试验每个菌株对应处理12个果实，重复3次试验。在接种病原菌后的第7 d和第14 d，根据以下分级标准统计柑橘果实发病情况，并按以下公式计算病情指数和防效，利用SAS软件邓肯新复极差法（DMRT）法对病害防效进行显著性差异分析。

柑橘果实发病情况分级标准：

0级———无病；

1级———病斑占果表面积的5%以下；

3级———病斑占果表面积的6%~10%；

5级———病斑占果表面积的11%~25%；

7级———病斑占果表面积的26%~50%；

9级———病斑占果表面积的51%以上。

 

菌株A3202的粗提物对病害的防治效果见表4和图2、3、4。可以看出，菌株A3202的粗提物对柑橘青霉病、柑橘绿霉病和柑橘炭疽病均具有较好的防治效果，其中对柑橘青霉病和柑橘绿霉病的防效稍优于对柑橘炭疽病的防效。其防效随着粗提物浓度的升高而增强，浓度为800 mg/L的菌株A3202粗提物的防效具有与浓度为400 mg/L的咪鲜胺药液相当的防效，接种后7 d浓度为800 mg/L的菌株A3202的粗提物和浓度为400 mg/L的咪鲜胺药液处理的柑橘果实均未有发病。

表4 菌株A3202粗提物对采后柑橘果实病害的防治效果

注：数据后标有不同字母表示在P=0.05水平差异显著。

实施例5：菌株A3202的形态特征、培养特征及生理生化特征

1、菌株A3202的形态特征：将菌株A3202在高氏一号培养基上用无菌接种环划线接种，然后将灭菌后的盖玻片（1 cm×1 cm）斜插入培养基内，于28℃培养箱内培养5 d后，取出盖玻片置于光学显微镜下观察菌株的孢子和菌丝形态。在光学显微镜下可观察到菌株A3202的孢子丝为开环钩形至松敞或紧密螺旋形，孢子呈椭圆形。

2、菌株A3202的培养特征：采用国际通用的5种培养基，包括2种合成培养基：无机盐淀粉琼脂（ISP-4，配方为：可溶性淀粉 10 g、K₂HPO₄ 1 g、MgSO₄·7H₂O 1 g、NaCl 1 g、(NH₄)₂SO₄ 2 g、CaCO₃ 2 g、FeSO₄·7H₂O 0.001g、MnCl₂·7H₂O 0.001 g、ZnSO4·7H₂O 0.001g、琼脂 20 g、蒸馏水 1000 mL，pH7.0-7.4）和葡萄糖天冬素琼脂（ISP-5，配方为：L-天门冬氨酸 1 g、甘油 10 g、K₂HPO₄ 1 g、微量元素溶液 1 mL、琼脂 20 g、蒸馏水 1000 mL，pH 7.2，微量元素溶液：FeSO₄·7H₂O 0.1 g、MnCl₂·4H₂O 0.1 g、ZnSO₄·7H₂O 0.1 g）；2种有机培养基：燕麦粉琼脂（ISP-3，配方为：燕麦粉 20 g、微量元素溶液 1 mL，pH 7.2，微量元素：FeSO₄·7H₂O 0.1 g、MnCl₂·4H₂O 0.1 g、ZnSO₄·7H₂O 0.1 g）和酵母精麦芽糖琼脂（ISP-2，配方为：酵母膏 4 g、麦芽汁 10 g、葡萄糖 4 g、琼脂 20 g、蒸馏水 1000 mL，pH 7.0）； 1种产黑色素培养基：蛋白胨酵母铁琼脂培养基（ISP-6，配方为：蛋白胨 20 g、柠檬酸铁 0.5 g、K₂HPO₄ 1 g、酵母浸粉 1 g、琼脂粉 20 g、蒸馏水 1000 mL，pH7.2），以及PDA培养基（配方如实施例2所述）和高氏一号培养基（配方如实施例1所述），将菌株A3202接种到以上培养基上，然后置于28℃恒温倒置培养，1~3周后观察菌株A3202的气生菌丝、基内菌丝的生长情况及可溶性色素的产生情况。

通过观察发现，菌株A3202在高氏一号培养基、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基、酵母精麦芽糖琼脂（ISP-2）培养基、燕麦粉琼脂（ISP-3）培养基和无机盐淀粉琼脂（ISP-4）培养基上生长良好，可产生较丰富的气生菌丝。而在葡萄糖天冬素琼脂（ISP-5）培养基和蛋白胨酵母铁琼脂（ISP-6）培养基上生长较弱，无气生菌丝产生。其中菌株在高氏一号培养基上可产生乳白色可溶性色素，而在上述其他培养基上无可溶性色素产生。菌株在不同培养基上的培养特征详见表1。

3、菌株A3202的生理生化特征：参照《放线菌快速鉴定与系统分类》（阮继生，黄英. 放线菌快速鉴定与系统分类[M]. 北京：科学出版社，2011）和《链霉菌鉴定手册》（中国科学院微生物研究所放线菌分类组. 链霉菌鉴定手册[M]. 北京：科学出版社，1975）中所述的方法，对菌株A3202的生理生化特性如碳源利用、黑色素产生、H₂S产生、七叶苷利用、纤维素利用、明胶液化、淀粉水解、牛奶凝固及冻化、纤维素水解、硝酸盐还原等指标进行测定。

测定结果表明，菌株A3202可使淀粉和纤维素水解，不能利用纤维素和七叶苷，无黑色素和H₂S产生，不能使明胶液化，可使牛奶凝固和胨化，对蔗糖、D-葡萄糖、D-木糖、L-肌醇、棉子糖、D-半乳糖、D-甘露醇、L-阿拉伯糖和D-果糖等碳源均有不同程度的利用能力。具体见表2。

<110> 浙江省柑桔研究所

<120> 一株对多种植物病原菌具抑菌活性的海洋放线菌

<160> 1

<170> PatentIn Version 3.3

<210> 1

<211> 1307

<212> DNA

<213> 链霉菌（Streptomycessp.）

<400> 1

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Claims (1)

1.一株海洋放线菌，为链霉菌（Streptomycessp.）A3202，已于2012年7月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No. 6330。

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