CN103110940B - 一种基于点击化学的肺炎多糖结合疫苗及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明利用“点击化学”的方法，将肺炎荚膜多糖以共价键的方式连接到破伤风类毒素上，制备出可用于预防肺炎链球菌感染的多糖结合疫苗。通过延长肺炎荚膜多糖与破伤风类毒素之间连接桥的长度，提高多糖结合疫苗的免疫原性。
Description
发明领域
本发明涉及生物医学领域的一种疫苗药物，具体地说涉及一种肺炎多糖结合疫苗；本发明还涉及其制备方法和免疫学评价。
背景技术
肺炎链球菌是革兰氏阳性囊状双球杆菌，可导致鼻窦炎、中耳炎、气管炎和肺炎等非侵袭性感染,也可导致脓毒症和脑膜炎等侵袭性感染。肺炎链球菌可通过病人和携带者的呼吸道分泌物传播，是导致婴幼儿、儿童和老人发病及死亡的主要原因之一。尽管可利用有效的抗生素治疗，但由该菌引起的呼吸系统疾病和侵袭性感染仍然构成重大的公共健康问题。据世界卫生组织（WHO）估计，每年约有数百万人死于肺炎链球菌感染。为保障人类健康，WHO主张接种疫苗来预防肺炎链球菌的感染。此外,随着日益广泛地使用抗生素，致使肺炎链球菌耐药菌株达96%以上，且呈现多重耐药性状况，尤其是对青霉素、头孢霉素、万古霉素、大环内酯类和氟奎诺酮类抗生素的耐药性，已成为全世界关注的严重问题之一,给治疗带来了困难。因此，通过免疫接种来预防肺炎链球菌的感染变得十分紧迫和重要。
荚膜多糖是肺炎链球菌的主要致病因子。根据荚膜的组分差异，肺炎链球菌可分成约90种血清型，但全球80%以上的感染性疾病是由约20种血清型的肺炎链球菌引起的。肺炎链球菌的保护性免疫机制主要是产生针对肺炎荚膜多糖的特异性抗体。目前上市的肺炎荚膜多糖疫苗有4价、13价及23价多糖疫苗。大多数健康成人接种肺炎荚膜多糖疫苗2～3周后,体内针对荚膜多糖的特异性抗体能升高2倍以上。但肺炎荚膜多糖是T细胞非依赖性抗原,2岁以下的儿童由于免疫系统尚未发育成熟,对大多数肺炎荚膜多糖的抗体应答反应较弱，接种剂不能达到抗体保护水平，且产生的抗体很快消失。
为解决这一问题，国内外学者转向对肺炎链球菌结合疫苗的研究，并已有7价结合疫苗上市。通过将肺炎荚膜多糖与某种载体蛋白质共价结合，使肺炎荚膜多糖转化成T细胞依赖性抗原，从而刺激婴幼儿的T细胞依赖性抗体的合成，并可产生加强应答，同时还能提高免疫球蛋白(IgG)的抗体比例。这种多糖结合疫苗不仅能够保护婴幼儿(2岁以下儿童)，还能够大大地增强抵抗力差的病人（如老人）对肺炎链球菌感染的抵抗力，因此具有十分广阔的应用前景。
细菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗最早出现在20世纪30年代，Goebel和Avery将3型肺炎球菌多糖连接到马血清球蛋白上，产生的偶联物能在动物身上产生多糖专一的抗体，同时提供相应的免疫保护。1987年，世界上第一个多糖蛋白结合疫苗，B型流感嗜血杆菌(HiB)多糖-破伤风类毒素(TT)结合疫苗被美国FDA批准进入市场。默克公司、辉瑞公司、赛诺菲-安万斯公司和诺华公司相继开发了HiB多糖-破伤风类毒素结合疫苗和流行性乙型脑膜炎多糖-破伤风类毒素结合疫苗，并成功上市。
目前唯一已上市的肺炎链球菌多糖结合疫苗为美国辉瑞公司研制的7价结合疫苗（PCV7,包含4、6B、9V、14、18C、19F和23F型；商品名：Prevenar）,已经在70多个国家获得了批准。PCV7结合疫苗可以帮助抵御系统和黏膜感染；阻止细菌在鼻咽部增殖，从而降低肺炎链球菌的流行。国内的细菌荚膜多糖结合疫苗也在起步当中，如兰州生物制品研究所、成都生物制品研究所和武汉生物制品研究所等单位在研发细菌荚膜多糖结合疫苗，包括流行性脑膜炎多糖结合疫苗和肺炎多糖结合疫苗。由于技术的限制，这些开发的产品还比较单一，结合工艺也是仿制欧美上世纪80年代的产品，产品缺乏自主知识产权。由于结合技术等原因，目前多糖结合疫苗的免疫原性和稳定性还需进一步提高，结合技术尚需进一步的改进和优化。
PCV7结合疫苗是用高碘酸钠氧化肺炎链球菌荚膜多糖的邻位羟基，氧化生成的醛基在还原剂硼氢氰化钠（NaCNBH3）的作用下与载体蛋白（白喉毒素，CRM197）的氨基发生胺还原反应，生成多糖-蛋白结合物。然而，该结合技术存在着以下不足之处：(1)氧化多糖产生的醛基与载体蛋白的氨基反应时间过长，需要5天以上，而且结合反应的效率较低；(2)某些多糖与载体蛋白的反应需要在较高的温度（如37°C）下进行，会影响到多糖与蛋白的结构稳定性；(3)多糖-蛋白结合疫苗的免疫原性有待进一步提高；多糖与载体蛋白的连接桥为甲氨基（-CH2-NH-），由于甲氨基的长度过短，载体蛋白的空间屏蔽作用会遮蔽多糖分子的抗原表位，从而影响其免疫原性。
肺炎链球菌荚膜多糖与载体蛋白的连接也可用己二酸二酰肼(ADH)为连接剂，这也是一种常用的多糖-蛋白结合技术。首先，需要将多糖的邻位顺式羟基与溴化氰在碱性条件下反应，生成氰酸酯，然后与ADH反应；氰酸酯与ADH一端的氨基发生加成反应，从而将酰肼基团引入多糖分子中；多糖衍生物在碳二亚胺(EDC)的介导下与载体蛋白形成稳定的结合物。该结合技术存在着以下不足之处：（1）溴化氰的反应活性太强，活化反应不易控制，导致制备工艺的批次稳定性差；（2）EDC在介导ADH衍化多糖与载体蛋白结合的同时，易引起多糖与载体蛋白的自身交联。这些不足之处会影响多糖结合疫苗的免疫原性和稳定性。
点击化学(click chemistry)是由诺贝尔化学奖获得者Sharpless教授于2001年首次提出，其中最主要的一类点击化学反应是由Cu(I)化合物催化叠氮化合物与炔基化合物反应生成1,2,3-三唑五元环化合物。点击化学能够将两种不同物质通过五元环共价结合起来。该方法具备产量高、效率高、副反应少、反应条件温和、分离提纯简单等优点，因而得到了广泛的应用。本发明拟提出基于点击化学的多糖-蛋白结合工艺，并通过延长多糖与蛋白之间的连接桥长度来进一步提高多糖结合疫苗的免疫原性。
发明内容
本发明利用“点击化学”的原理，在温和的反应条件下，对活化的肺炎荚膜多糖和载体蛋白（如破伤风类毒素）进行连接，制备肺炎荚膜多糖结合疫苗，提高多糖与载体蛋白的结合效率，增强多糖结合疫苗的免疫原性。
本发明以长链分子作为连接桥，增大了疫苗分子中肺炎荚膜多糖与载体蛋白的空间距离，减少了载体蛋白对肺炎荚膜多糖抗原表位的空间屏蔽作用，从而提高了结合疫苗的免疫原性。
以下是肺炎多糖结合疫苗的制备与纯化步骤：
1）肺炎荚膜多糖在50mM的醋酸钠缓冲液（pH4.7）中水解20-60分钟，水解温度为60-90℃；优化的条件为水解30分钟，水解温度为75℃。
2）将水解产物的pH值调至5.5-6.0，在高碘酸钠存在的情况下避光反应5-120分钟；优化的氧化条件为pH值为5.8，避光反应10分钟；透析除去高碘酸钠。高碘酸钠可将肺炎荚膜多糖中的邻位羟基氧化成醛基。
3）在还原剂氰基硼氢化钠存在的情况下，向氧化的多糖溶液中加入氨基乙炔，多糖与氨基乙炔的质量比为1:(0.5～5)；在20-40℃反应4-15小时，pH值为7-8；优化的条件为于37℃反应6小时，pH为7.4；优化的质量比为1:2，于37℃下反应6小时，pH值为7.4。随后，用超滤膜离心去除反应混合液中的氰基硼氢化钠及未参与反应的氨基乙炔。
4）制备短链叠氮化的破伤风类毒素：用叠氮-甲酰琥珀酰亚胺活化破伤风类毒素，其中叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与破伤风类毒素的摩尔比为(5-60)：1，活化反应的pH值为6.0-8.0，反应温度为2-15小时；优化的活化反应条件为摩尔比为20：1，活化反应的pH值为7.4，于室温下反应4小时。
5）制备长链叠氮化的破伤风类毒素：（a）用2-亚氨基硫烷在破伤风类毒素上引入巯基，其中破伤风类毒素与2-亚氨基硫烷反应的摩尔比为1:(10-60)，反应pH值为6.0-8.0，反应1-24小时，于室温下反应；优化的反应条件为摩尔比为1:20，反应pH为7.4，反应4小时；（b）叠氮-甲酰琥珀酰亚胺的琥珀酰亚胺基团与N-(2-氨乙基)马来酰亚胺的氨基基团反应，在叠氮-甲酰琥珀酰亚胺上引入马来酰亚胺基团，其中叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与N-(2-氨乙基)马来酰亚胺以摩尔比1:(0.5-4)的比例混合反应，反应pH值为6.0-8.0，反应0.5-4小时，于室温下反应；优化的反应条件为摩尔比为1:1，反应pH为7.4，反应1小时；（c）马来酰亚胺化的叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与巯基化的破伤风类毒素反应，在破伤风类毒素上引入叠氮基团；其中马来酰亚胺化的叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与巯基化的破伤风类毒素以摩尔比1:(10-60)混合反应，反应pH值为6.0-8.0，反应1-24小时，于室温下反应；优化的反应条件为摩尔比为1:20，反应pH为7.4，反应4小时。
6）在CuSO4和抗坏血酸存在的情况下，将乙炔化的肺炎荚膜多糖与叠氮化的破伤风类毒素进行混合，多糖与破伤风类毒素的质量比为(0.5～5):1；将溶液pH值调整为5.5-7.0，于室温下反应过夜；优化的质量比为2:1，溶液pH为6.0。
7）以Superdex200凝胶过滤柱对步骤6得到的结合产物进行纯化，洗脱液为20mM的磷酸缓冲液（pH7.4），收集产物的洗脱液。
本发明提供的肺炎荚膜多糖结合疫苗制备工艺，可以带来以下效果：
1）本发明提供的制备工艺，可有效地缩短多糖-蛋白结合反应的时间，将制备周期由传统方法的5-6天缩短为1-2天。
2）本发明提供了引入长链连接桥的结合方法，有可效增大结合疫苗中多糖与载体蛋白之间的空间距离，显著增强了肺炎荚膜多糖的免疫原性。
附图说明
图1短链肺炎荚膜多糖结合疫苗（S-PCV）的制备反应示意图
图2长链肺炎荚膜多糖结合疫苗（L-PCV）的制备反应示意图
图3凝胶过滤分析S-PCV和L-PCV。用分析型凝胶过滤柱Superdex200(1cm×30cm)检测S-PCV和L-PCV。分析条件：流动相为20mM的磷酸缓冲液(pH7.4),流速0.5毫升/分钟，检测波长为280纳米。
图41H-NMR分析S-PCV和L-PCV。1H-NMR分析由Bruker400MHz核磁共振仪完成。
图5L-PCV组和S-PCV组产生的多糖特异性抗体。图a为多糖特异性的IgM抗体滴度；图b为多糖特异性的IgG抗体滴度；图c为多糖特异性的IgG1抗体滴度；图d为多糖特异性的IgG2a抗体滴度。
图6肺炎荚膜多糖特异性抗体的特异性。
具体实施方案
本发明包括两种肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备、分离纯化及其免疫学性质的评价方法。
实施例1：短链肺炎荚膜多糖结合疫苗（S-PCV）的制备
短链肺炎荚膜多糖结合疫苗（S-PCV）的制备反应如图1所示。将5mg肺炎荚膜多糖溶于50mM的醋酸钠缓冲液（pH4.7）中，于75℃下水解30分钟。将水解产物的pH值调至5.8，在高碘酸钠存在的情况下室温避光反应10分钟。透析除去未反应的高碘酸钠。将预处理后的肺炎荚膜多糖溶液的pH调节到7.4，在氰基硼氢化钠存在的情况下，以多糖与氨基乙炔质量比以2:1的比例混合反应，37℃反应6小时。使用截留分子量为50kDa的滤膜于5000g下离心3次，除去未反应的氰基硼氢化钠和氨基乙炔。
载体蛋白与叠氮-甲酰琥珀酰亚胺以摩尔比为1：20的比例混合反应，缓冲液为20mM的磷酸缓冲液（pH7.4），于室温下反应4小时。此步骤中，叠氮-甲酰琥珀酰亚胺上的琥珀酰亚胺会与载体蛋白上的伯胺发生反应。使用截留分子量为50kDa的滤膜于5000g下离心3次，除去未反应的叠氮-甲酰琥珀酰亚胺。在CuSO4和抗坏血酸存在的情况下，将活化肺炎荚膜多糖与活化载体蛋白以质量比2:1混合反应，pH为5.8，室温反应过夜。
实施例2：长链肺炎荚膜多糖结合疫苗（L-PCV）的制备
长链肺炎荚膜多糖结合疫苗（L-PCV）的制备反应如图2所示。将5mg肺炎荚膜多糖溶于50mM的醋酸钠缓冲液（pH4.7）中，于75℃下水解30分钟。将水解产物的pH值调至5.8，在高碘酸钠存在的情况下于室温避光反应10分钟。透析除去未反应的高碘酸钠。将预处理后的肺炎荚膜多糖溶液pH调节到7.4，在氰基硼氢化钠存在的情况下，以多糖与氨基乙炔质量比以2:1的比例混合反应，37℃反应6小时。使用截留分子量为50kDa的滤膜于5000g下离心3次，除去未反应的氰基硼氢化钠和氨基乙炔。
载体蛋白与2-亚氨基硫烷以摩尔比1:20混合反应，缓冲液为20mM的磷酸缓冲液（pH7.4），于室温下反应4小时，使用截留分子量为50kDa的滤膜于5000g下离心3次，除去未反应的2-亚氨基硫烷。叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与N-(2-氨乙基)马来酰亚胺以摩尔比1:1的比例混合反应生成长链分子，溶液的pH值为7.4，室温反应1小时。载体蛋白与生成的长链分子以摩尔比1:20混合反应，溶液的pH值为7.4，于室温下反应4小时。使用截留分子量为50kDa的滤膜于5000g下离心3次，除去未反应的化学试剂。在CuSO4和抗坏血酸存在的情况下，将活化肺炎荚膜多糖与活化载体蛋白以质量比2:1混合反应，pH为5.8，室温反应过夜。
实施例3：L-PCV和S-PCV的纯化与表征
将实施例1和2中所涉及的结合产物，用Superdex200凝胶过滤柱（2.6cm×60cm）进行分离纯化，洗脱液为20mM的磷酸缓冲液（pH7.4），流速为3毫升/分钟。分别收集对应于L-PCV和S-PCV的洗脱峰。
以Superdex200凝胶过滤柱（1.0cm×30cm）对纯化产品进行鉴定，洗脱液为20mM的磷酸缓冲液（pH7.4），流速为0.5毫升/分钟。如图3所示，与载体蛋白相比，L-PCV和S-PCV的出峰时间明显提前。这表明载体蛋白与肺炎荚膜多糖结合后，分子量显著增加。
用1H-NMR进行检测L-PCV和S-PCV。如图4所示，与肺炎多糖分子相比，S-PCV在0-1.0ppm处出现了蛋白的特征峰，在5.0-5.5ppm处出现了含有C=C键的五元杂环特征峰。这表明肺炎多糖分子通过点击化学成功地偶联了载体蛋白。与S-PCV相比，L-PCV在7.1ppm处出现了琥珀酰亚胺的特征峰，这表明L-PCV的连接桥中含有琥珀酰亚胺。这进一步说明L-PCV的连接桥分子要大于S-PCV的连接桥。
实施例4：L-PCV和S-PCV的免疫原性测定
选取15只5周龄的雌性Blab/C小鼠，体重为15-22克。随机分为3组，即肺炎荚膜多糖组、L-PCV组和S-PCV组。腹腔注射，每只每次注射含有5微克多糖，每周注射1次，共注射3次。21天后眼眶取血。用ELISA法检测小鼠血浆中抗肺炎荚膜多糖的IgM、IgG、IgG1和IgG2a。如图5所示，与肺炎荚膜多糖组进行比较，S-PCV组的抗体滴度提高明显，其中IgM、IgG、IgG1和IgG2a的抗体滴度分别是多糖组的9倍、577倍、457倍和100倍。L-PCV组的抗体滴度要显著高于S-PCV组，其中IgM、IgG、IgG1和IgG2a的抗体滴度分别分别是S-PCV组的1.4倍、1.3倍、1.4倍和1.4倍。
实施例5：肺炎荚膜多糖特异性抗体的特异性和亲合性
向200倍稀释的L-PCV组和S-PCV组小鼠血浆中加入不同量的肺炎荚膜多糖，用ELISA方法检测小鼠血浆中抗肺炎荚膜多糖的抗体水平。如图6所示，随着多糖加入量的增加，多糖特异性抗体结合96孔板中多糖的能力逐渐降低。当加入的多糖达到150μg时，抗体结合多糖的能力丧失。这表明小鼠产生的抗体能够特异性地结合肺炎荚膜多糖。
用硫氰酸铵法测定抗肺炎荚膜多糖的抗体亲合性。肺炎荚膜多糖组的多糖特异性抗体亲和指数为1.43mol/L，而L-PCV组和S-PCV组的抗体亲和指数分别为3.90mol/L和3.67mol/L。这表明结合载体蛋白能显著提高多糖特异性抗体的亲合性，而长链连接桥能进一步提高多糖特异性抗体的亲合性。
Claims (14)
1.一种肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，制备的步骤包括：(1)肺炎荚膜多糖在酸性条件下水解；(2)由高碘酸钠氧化肺炎荚膜多糖，多糖中的邻位羟基氧化成醛基；(3)向氧化的肺炎荚膜多糖引入乙炔基团；(4)向破伤风类毒素引入叠氮基团；(5)将乙炔化的肺炎荚膜多糖与叠氮化的破伤风类毒素进行共价结合。
2.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，肺炎荚膜多糖在50mM和pH 4.7的醋酸钠缓冲液中水解20-60分钟，水解温度为60-90℃。
3.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，高碘酸钠氧化肺炎荚膜多糖的pH值为5.5-6.0，避光反应5-120分钟。
4.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，由结构式为H2N-R-C≡CH的试剂来衍化高碘酸钠氧化的肺炎荚膜多糖，引入乙炔基团，其中，R是碳数在0-20之间的烷基。
5.如权利要求4所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，结构式为H2N-R-C≡CH的试剂为氨基乙炔，其衍化高碘酸钠氧化的肺炎荚膜多糖的反应条件为：在氰基硼氢化钠存在的情况下，氧化的多糖与氨基乙炔在20-40℃反应4-15小时，pH为7-8。
6.如权利要求4所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，结构式为H2N-R-C≡CH的试剂为氨基乙炔，其衍化高碘酸钠氧化的肺炎荚膜多糖的过程中，氧化多糖与氨基乙炔的质量比为1:(0.5～5)。
7.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，用叠氮-甲酰琥珀酰亚胺活化破伤风类毒素，同时引入叠氮基团。
8.如权利要求7所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与破伤风类毒素的摩尔比为(5～60)：1，活化反应的pH值为6.0-8.0，反应温度为2-15小时。
9.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，向破伤风类毒素引入叠氮基团的步骤包括：(1)用2-亚氨基硫烷在破伤风类毒素上引入巯基；(2)叠氮-甲酰琥珀酰亚胺的琥珀酰亚胺基团与N-(2-氨乙基)马来酰亚胺的氨基基团反应，在叠氮-甲酰琥珀酰亚胺上引入马来酰亚胺基团；(3)马来酰亚胺化的叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与巯基化的破伤风类毒素反应，在破伤风类毒素上引入叠氮基团。
10.如权利要求9所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，破伤风类毒素与2-亚氨基硫烷反应的摩尔比为1:(10-60)，反应pH值为6.0-8.0，反应1-24小时，于室温下反应。
11.如权利要求9所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与N-(2-氨乙基)马来酰亚胺以摩尔比1:(0.5～4)的比例混合反应，反应pH值为6.0-8.0，反应0.5-4小时，于室温下反应。
12.如权利要求9所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，马来酰亚胺化的叠氮-甲酰琥珀酰亚胺与巯基化的破伤风类毒素以摩尔比1:(10～60)混合反应，反应pH值为6.0-8.0，反应1-24小时，于室温下反应。
13.如权利要求1所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，在CuSO4和抗坏血酸存在的情况下，将乙炔化的肺炎荚膜多糖与叠氮化的载体蛋白以质量比(0.5～5):1混合反应。
14.一种肺炎荚膜多糖结合疫苗，其特征在于，所述的肺炎荚膜多糖结合疫苗由根据权利要求1-13任一项所述的制备方法制得。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106397537B (zh) * | 2016-10-13 | 2020-01-07 | 李红臣 | 一种高效快速的多糖蛋白结合疫苗纯化分析方法 |
| CN110845587B (zh) * | 2019-10-15 | 2021-06-29 | 康希诺生物股份公司 | 一种定点突变的载体蛋白及其在制备疫苗中的用途 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1899609A (zh) * | 2005-07-19 | 2007-01-24 | 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 | 肺炎球菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法 |
| CN101374549A (zh) * | 2005-12-23 | 2009-02-25 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 缀合疫苗 |
| CN102671638A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-19 | 华南理工大学 | 一种仿生物特异性免疫吸附材料及其制备方法与应用 |
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- 2013-02-06 CN CN201310047502.5A patent/CN103110940B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1899609A (zh) * | 2005-07-19 | 2007-01-24 | 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 | 肺炎球菌多糖蛋白偶联疫苗及其制备方法 |
| CN101374549A (zh) * | 2005-12-23 | 2009-02-25 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 缀合疫苗 |
| CN102671638A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-19 | 华南理工大学 | 一种仿生物特异性免疫吸附材料及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103110940A (zh) | 2013-05-22 |
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