CN103109813A - 一种4-h-苦皮藤素原药及其制备方法和质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种4-H-苦皮藤素原药及其水乳剂，以及它们的制备方法和质量检测方法。所述4-H-苦皮藤素原药，含有以下质量百分含量的活性成分：Angulateoid C15.0~18.0%，Angulateoid B4.0~12.0%，Angulateoid E13.0~21.0%，Angulatinoid I4.5~8.0%，Angulatinoid V4.5~7.0%，Angulatinoid II3.0~5.0%，Celahin B2.0~6.0%，Celahin C2.0~6.0%。4-H-苦皮藤素原药采用大孔吸附树脂法制备得到，质量检测方法采用IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术；本发明的4-H-苦皮藤素原药含量大幅提高，质量检测方法准确性和稳定性、重复性和可行性也较高。

Description

一种4-H-苦皮藤素原药及其制备方法和质量检测方法

技术领域

本发明属于植物源农药技术领域，具体地，涉及了一种4-H-苦皮藤素原药及其水乳剂，以及它们的制备方法和质量检测方法。 

背景技术

苦皮藤（Celastrus angulatus MaXim）系卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属(Celastrus)多年生藤状灌木植物，分布在河北、山东、河南、陕西、湖北、甘肃、江苏、安徽等省[中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.科学出版社,1999,45(3):102]。苦皮藤是我国特有的杀虫植物，它具有多种功效，对不同的害虫有不同的生理活性，性能稳定、使用安全、不杀伤天敌、无污染。目前，苦皮藤相关产品绝大多数采用根/皮[CN92113104.6；CN94103655.3；CN99109275.9；CN02122988.0]，由于挖根制药，资源开发的规模受到一定限制。 

研究发现，苦皮藤种子油对黄守瓜、菜青虫、28星瓢虫、缀叶丛螟、斜纹夜蛾、丝绵木金星、黄杨绢野螟等多种害虫显示出良好的拒食作用；对贮粮害虫赤拟谷盗有较强的忌避作用；对玉米象有明显致死和杀卵作用。种子油生物急性毒性很小，进入机体易被排体外。利用苦皮藤种子取代挖根制造农药，有利于植物资源的生态保护，减少水土流失，还可增加农民收入；以种子为原料生产的植物源农药在城乡推广应用，生产无公害食品或绿色食品，具有现实意义[柯治国，等.杀虫植物——苦皮藤种子的研究.第三届湖北湖南植保农药学术研讨会论文集，2004，94-300]。 

目前文献报道的苦皮藤种子的提取方法均为溶剂回流法，纯化方法大多为甲醇/乙醇萃取法。大孔吸附树脂（macroporous absorption resin）是近40余年来发展起来的一类有机高聚物吸附剂，利用其多 孔结构和选择性吸附功能可从中药提取液中分离精制有效成分或有效部位，最大限度地去粗取精，并可实现大规模工业化。目前大孔吸附树脂在植物源农药领域已有应用，但应用于苦皮藤种子相关产品的工业化生产和提取物的分离均未见报道。 

苦皮藤种子的品质不在于某个单一成分，其效果是多个成分协同配比的结果。研究证明苦皮藤中主要杀虫活性成分是以4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜骨架的多元醇酯化合物及其生物碱，统称4-H-苦皮藤素。苦皮藤素化学成分非常复杂，含有以苦皮藤种素C（Angulateoid C）为主的多种杀虫成分，但目前苦皮藤种子提取物及其产品中4-H-苦皮藤素组分的检测方法尚未建立。而针对单一成分进行定量分析的质量控制模式不能有效控制苦皮藤种子相关产品的内在质量，无法满足当前对于客观有效地评价和控制4-H-苦皮藤素产品质量的迫切要求。指纹图谱技术己成为国际公认的区别评价植物天然产物及其原料的最有效的手段[罗国安,等.中药指纹图谱的分类和发展.中国新药杂志,2002,11(1):46.]。目前关于苦皮藤种子相关产品的指纹图谱技术未见报道。 

IGD核磁共振碳谱偶联（IGD¹³C NMR coupling）指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，是在已研究多年的核磁共振氢谱（¹H NMR）指纹图谱技术[赵天增,等.¹HNMR指纹法鉴定植物中药.中草药，2000,31(11):868-870.]的基础上联合其他技术（例如目前应用最广泛的高效液相（HPLC）指纹图谱技术）提出的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。 

因此，若能开发出新的4-H-苦皮藤素产品，即原药及其制剂，并对它们的IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术进行研究与应用，不仅可以解决其中活性成分的定性问题，也为加强其内在成分研究的系统化与标准化，加快植物源农药4-H-苦皮藤素现代化的发展，实现与国际接轨提供了科学的保证。随着该技术在其他中药材及其提取物、 植物源农药中的推广应用，该技术的重大科学价值必将日趋突出。 

发明内容

为了解决植物源农药现有技术、质量等方面存在的问题，本发明的目的在于，提供一种优良的植物源农药4-H-苦皮藤素原药及其水乳剂。 

本发明的另一目的在于，提供一种所述4-H-苦皮藤素原药及其水乳剂的制备方法。 

本发明的又一目的在于，提供一种所述4-H-苦皮藤素原药及其水乳剂的质量检测方法。 

为了实现上述目的，本发明提供的一种4-H-苦皮藤素原药，其中含有以下质量百分含量的活性成分：苦皮藤种素C（Angulateoid C）15.0~18.0%，苦皮藤种素B（Angulateoid B）4.0~12.0%，苦皮藤种素E（Angulateoid E）13.0~21.0%，苦皮种素I（Angulatinoid I）4.5~8.0%，苦皮种素V（Angulatinoid V）4.5~7.0%，苦皮种素II（Angulatinoid II）3.0~5.0%，青江藤素B（Celahin B）2.0~6.0%，青江藤素C（Celahin C）2.0~6.0%。 

本发明4-H-苦皮藤素原药中的所述活性成分均为4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物。 

本发明所述4-H-苦皮藤素原药中各活性成分（4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物）总的质量百分含量不小于48%，优选不小于55%。 

进一步地，苦皮藤原药中各活性成分总的质量百分含量为65.0~75.0%。 

本发明提供的4-H-苦皮藤素原药为固体状。 

本发明提供的4-H-苦皮藤素原药的制备方法包括：称取苦皮藤种子，粉碎，加入体积为2~6倍量、石油醚或90~95%的乙醇于60~80℃下回流或超声提取2~3次，每次提取1~2小时，过滤后合并滤液，减 压浓缩；取浓缩后的种子油，用其重量为1~2倍量的大孔吸附树脂装柱，先后以30~40%乙醇、55~65%乙醇、80~85%乙醇和90~95%乙醇冲柱，收集55~65%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得4-H-苦皮藤素原药。这里表示乙醇浓度的百分数均为质量比。 

进一步地，所述大孔吸附树脂的型号为HP-20、SP825、AB-8、D-101、D-201或SP-70，优选HP-20，D-101，SP825。 

进一步地，所述大孔吸附树脂的径高比为8:1~15:1，优选10~12:1。 

进一步地，苦皮藤种子粉碎后过10~24目筛。 

进一步地，用于冲柱的乙醇的体积为浓缩后滤液的20~90倍，优选四次冲柱的体积分别为30~40，80~90，30~40，20~30倍。 

苦皮藤种子中的活性成分，除了本发明4-H-苦皮藤素原药所述的成分外，还包括其他4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物，以及黄酮、氨基酸、三萜、脂肪酸等其他类别的成分。 

本发明提供的苦皮藤原药，可以制成水乳剂、水悬浮剂、可湿性粉剂等各种剂型用于植物源农药杀虫剂。 

本发明提供的一种4-H-苦皮藤素水乳剂，包含所述4-H-苦皮藤素原药。 

本发明提供的所述4-H-苦皮藤素水乳剂，包括以下重量份的成分：所述4-H-苦皮藤素原药7~9份，乳化剂8~12份，抗冻剂3~5份。 

本发明提供的所述4-H-苦皮藤素水乳剂，优选地，包括以下重量份的成分：所述4-H-苦皮藤素原药8~9份，乳化剂9~10份，抗冻剂5份。 

其中，所述乳化剂为：烷基芳基聚氧乙烯聚氧丙烯醚或烷基芳基聚氧乙烯聚氧乙烯醚，优选烷基芳基聚氧乙烯聚氧丙烯醚。 

其中，所述抗冻剂为：乙二醇或丙二醇，优选乙二醇。 

本发明提供的一种4-H-苦皮藤素水乳剂，还包括溶剂。 

其中，溶剂为水。 

本发明所述的4-H-苦皮藤素水乳剂，其中的辅料，即乳化剂、抗冻剂以及溶剂，也可以是本领域的常规种类及用量。还可以使用助剂，也是本领域的常规选择。 

本发明所述4-H-苦皮藤素水乳剂中各活性成分（4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物）的总的质量百分含量不小于4%。优选为5.0~7.0%。 

本发明提供的所述4-H-苦皮藤素水乳剂的制备方法，包括：将所述4-H-苦皮藤素原药与乳化剂、抗冻剂和溶剂按所述比例混合，即得。 

本发明提供的4-H-苦皮藤素原药的质量检测方法，包括以下步骤： 

1）取4-H-苦皮藤素原药直接作为4-H-苦皮藤素原药特征提取物； 

2）对4-H-苦皮藤素原药特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述4-H-苦皮藤素原药特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式（IGD核磁共振碳谱指纹图谱）测定出所述各活性成分相应的标准参照品的特征峰峰强度； 

3）通过定量分析手段测定得到4-H-苦皮藤素原药中所述标准参照品的绝对含量； 

4）利用所述特征峰峰强度（各活性成分特征峰峰强度及相应的标准参照品的特征峰峰强度）的比值和所述绝对含量，计算出4-H-苦皮藤素原药中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。 

其中，步骤1）中，4-H-苦皮藤素原药即为4-H-苦皮藤素特征提取物。 

4-H-苦皮藤素原药特征提取物检测方法如下：取4-H-苦皮藤素原药特征提取物，溶于CDCl₃中，作IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测。 

其中，步骤2）中，所述4-H-苦皮藤素原药特征提取物中的活性成分特征峰为：C-15吸收峰，其化学位移为δ_C60.0~66.0。 

其中，步骤2）中，所述峰强度，可以采用峰高法、面积积分法或重量法计算。 

其中，步骤3）中，所述标准参照品的绝对含量是指：用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素原药中标准参照品的质量百分含量。 

其中，所述定量分析手段为高效液相色谱（HPLC）法。 

进一步地，HPLC法的条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，流动相为(甲醇/乙腈):水=[(40/20):40]~[(47/23):30]的混合溶剂，流速为1mL/min，检测波长为231nm。(甲醇/乙腈):水优选（43/22）:35。 

其中，所述标准参照品为苦皮藤种素C（Angulateoid C）。 

本发明主要测定的是4-H-苦皮藤素原药中4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的含量。 

其中，4-H-苦皮藤素原药中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量计算是通过偶联计算公式将IGD核磁共振碳谱和定量分析手段偶联，即步骤4）中，计算各活性成分的含量的偶联公式为： 

$W_n=\frac{W_1{M}_n{h}_n}{M_1{h}_1};$ 其中： 

W₁为步骤3）用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量（质量百分含量）； 

M₁为所述某一活性成分对应的标准参照品的分子量； 

h₁为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中所述某一活性成分对应的标准参照品的特征峰峰强度； 

W_n为4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分的质量百分含量； 

M_n为某一活性成分的分子量； 

h_n为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分的特征峰峰强度。 

通过偶联公式还可计算4-H-苦皮藤素原药中各活性成分的系数和总系数。 

进一步地，所述系数的计算公式为： 

$F_n=\frac{M_n{h}_n}{M_1{h}_1};$

其中F_n为4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分与其对应的标准参照品质量百分含量的比值系数。M₁、h₁、M_n和h_n的含义同计算4-H-苦皮藤素原药中各活性成分含量偶联公式中的相应定义。总系数指各成分的系数之和。 

该系数F_n也同样适用于计算4-H-苦皮藤素水乳剂中的活性成分及活性成分组。 

本发明提供的4-H-苦皮藤素水乳剂的质量检测方法，利用上述方法检测得到4-H-苦皮藤素原药中某个活性成分的含量，再推算出4-H-苦皮藤素水乳剂中各活性成分的质量百分含量。这里的4-H-苦皮藤素水乳剂是由4-H-苦皮藤素原药制备得到。 

其中，4-H-苦皮藤素水乳剂中各活性成分的含量计算公式为： 

X_n=X₁F_n；其中： 

X_n为4-H-苦皮藤素水乳剂中某一活性成分质量百分含量； 

X₁为用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素水乳剂中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量（质量百分含量）。 

其中，所述定量分析手段为上述的高效液相色谱法。 

4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂中该类活性成分的总含量就是同类的各活性成分的X_n相加之和，即活性成分组的含量，单个活性化合物系数F_n相加之和即4-H-苦皮藤素总系数。 

本发明的质量检测方法可以用来检测本发明的苦皮藤原药或其他浓度的苦皮藤原药，以及本发明的苦皮藤水乳剂或其他浓度的4-H-苦皮藤素水乳剂。 

本发明方法所述活性成分组，尤其是将苦皮藤药材进行提取后，得到的4-H-苦皮藤素原药和4-H-苦皮藤素水乳剂中的活性成分组。 

本发明的苦皮藤药材，是指苦皮藤植物的种子部位。 

本发明各活性成分的含量及该类活性成分的总含量的计算，是通 过偶联公式将IGD核磁共振碳谱和分析定量手段偶联。和现有技术相比，本发明采用IGD¹³C NMR偶联指纹图谱具有下面几个特点： 

①稳定性（重复性）：IGD¹³C NMR得到的化学位移数据为小数点后第二位，分辩性好，重复性好；HPLC、GC的非色谱条件（如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等）改变等，得到的保留时间数据变化很大，意味着整体色谱图形的变异，重复性不好。 

②整体性（全面性）：IGD¹³C NMR指纹图谱中包含样品中的每一个活性成分碳的相应谱峰；HPLC、GC、UV、IR、MS不存在这种关系。 

③可靠性（单一性）：IGD¹³C NMR谱峰与样品中不同活性成分及其不同基团上的碳是严格的一一对应关系；HPLC、GC、UV、IR、MS不存在这种关系。 

④可行性（易辨性）：IGD¹³C NMR指纹图谱规律性很强，一般情况下，可归属图谱中的每一个碳峰；HPLC、GC需要对照品；IR不易解析；UV信息量少；MS则有离子化程度和基质干扰等问题。 

本发明对苦皮藤种子提取物进行了深入、系统的研究，找到了一系列杀虫活性成分并确定了其化学结构，采用大孔吸附树脂法富集杀虫活性成分，得到的4-H-苦皮藤素原药与现有的苦皮藤种油相比，活性成分含量大幅提高，且杂质含量少；并且具有设备简单、指标可控、易操作、收率高、无环境污染等特点，适合工业化生产。 

并且，由本发明4-H-苦皮藤素原药配制的4-H-苦皮藤素水乳剂属于生产环境友好型农药，也是国际上剂型开发的趋势，环保性方面明显优于微乳剂和乳油。其拒食效果已超过1%印楝素，优点突出表现在污染小，且见效快、稳定性好、成本低。 

本发明针对4-H-苦皮藤素原药中活性成分的多样性、复杂性，及高效液相色谱指纹图谱和核磁共振氢谱（¹H NMR）指纹图谱的局限 性，构建IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，反映出4-H-苦皮藤素原药中含有哪些4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物，及其它们各自的含量、比例关系以及总含量，达到对4-H-苦皮藤素原药及其制剂质量检测和控制的目的。准确性和稳定性、重复性和可行性与现有技术相比有很大的提高。 

总之，本发明使得4-H-苦皮藤素原药及苦皮藤素制剂（尤其是水乳剂）成分明确、含量清楚、质量可控、性能稳定，可以有效控制4-H-苦皮藤素原药的内在质量，满足了当前对于客观有效地评价和控制苦皮藤产品质量的迫切要求，加强了4-H-苦皮藤素原药及其制剂内在成分研究的系统化与标准化。 

附图说明

图1-a为实施例1的4-H-苦皮藤素原药甲特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

图1-b为实施例1的4-H-苦皮藤素原药甲特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。 

图2-a为实施例2的4-H-苦皮藤素原药乙特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

图2-b为实施例2的4-H-苦皮藤素原药乙特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。 

图3-a为实施例3的4-H-苦皮藤素原药丙特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

图3-b为实施例3的4-H-苦皮藤素原药丙特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。 

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步地详细描述，但本发明的保护范围并不局限于此。 

1、4-H-苦皮藤素原药、水乳剂的制备方法 

（1）4-H-苦皮藤素原药 

称取阴干的苦皮藤种子粉碎（过10~24目筛），加入体积为2~6倍量、石油醚或90~95%的乙醇于60~80℃下回流或超声提取2~3次，每次均提取1~2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩；取浓缩后的油状液体（即种子油），用其重量为1~2倍量的大孔吸附树脂装柱，先后以30~40%乙醇、55%~65%乙醇、80%~85%乙醇和95%乙醇冲柱，收集55%~65%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得4-H-苦皮藤素原药。大孔吸附树脂的型号为HP-20、SP825、AB-8、D-101、D-201或SP-70；大孔吸附树脂的径高比为8:1~15:1；用于冲柱的乙醇的体积为浓缩后滤液的20~90倍。大孔吸附树脂HP20为三菱DIAION系列，D-101购自南开大学化工厂。 

（2）4-H-苦皮藤素水乳剂 

4-H-苦皮藤素水乳剂混合比例如下：4-H-苦皮藤素原药8~9份，乳化剂9~10份，抗冻剂（乙二醇）5份，溶剂（水）补足余量。这里的百分号“%”为质量百分比。其中，乳化剂采用烷基芳基聚氧乙烯聚氧丙烯醚，购自：山东天道生物工程有限公司。 

2、4-H-苦皮藤素原药IGD核磁共振碳谱指纹图谱质量检测方法 

（1）4-H-苦皮藤素原药IGD核磁共振碳谱指纹图谱质量检测方法研究步骤 

1）特征提取物获取程序研究 

准确称取4-H-苦皮藤素原药，作为4-H-苦皮藤素原药特征提取物。 

2）特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测 

取上述4-H-苦皮藤素原药特征提取物55~65mg，溶于0.5mLCDCl₃中，作IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

3）特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析 

①鉴别 

特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱中，应清楚地显示4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的特征信号，且全部或大部分含有Angulateoid C、Angulateoid B、Angulateoid E、Angulatinoid I、Angulatinoid III、Angulatinoid IV、Angulatinoid V信号。 

具体数据如下： 

δ_C71.0-79.5，22.0-24.0或69.0-70.0，26.0-32.0，32.0-34.0或39.0-40.5，86.0-93.0分别为A环1，2，3，4，5位脂环碳信号；32.0-37.0或74.0-79.0，47.0-54.0，69.0-79.5或34.0-35.0，69.0-80.0，48.5-55.0分别为B环6,7,8,9,10位脂环碳信号，80.0-83.0为4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物C-11碳信号，29.0-32.0，22.5-26.5，14.0-19.0为4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物C-12、C-13、C-14甲基碳信号，61.0-66.0为4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物C-15亚甲基碳信号。 

②4-H-苦皮藤素原药特征提取物中各活性成分特征峰选取 

由于特征提取物中含有一系列活性成分4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物，碳峰交叉得较多，为了测定各活性成分的比例，必须选择化学位移差别较大的相应峰作为特征峰。为此，经实际考察，选择了δ_C60.0~66.0左右一组C-15峰。其原因为：一般情况下，C-15峰作为连氧碳，易于辨认；而且C-15位不同化合物之间化学位移差别较大。 

③标准参照品的选择 

Angulateoid C是杀虫植物苦皮藤种子的主要杀虫活性成分之一，其特征峰的化学位移为δ_C61.6左右，与其他主要活性成分特征峰在此没有重叠。因此，选择Angulateoid C作为标准参照品。 

4）采用HPLC测定4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂中Angulateoid C的含量 

①HPLC检测 

i)色谱条件 

仪器：岛津LC-20AT 

流动相：(甲醇/乙腈):水=(43:22):35 

流速：1mL/min 

色谱柱:Agilent C₁₈（安捷伦十八烷基键合硅胶）4.6*250mm 

检测器：紫外 

波长：231nm 

进样量：10μL； 

ii)标准参照品溶液的配制 

精确称取Angulateoid C5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀后即得标准参照品溶液（Angulateoid C100μg/mL）。 

iii)标准曲线和检出限 

浓度范围：1~200μg/mL（ppm）；标准参照品浓度分别为：1μg/mL、5μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL。 

在上述色谱条件下，进行HPLC分析，Angulateoid C总峰面积Y对浓度C的线性回归方程为：Y=12377X-5305.5（n=5,R=0.9999）。 

检出限为：0.5ug/mL(S/N=3)。 

根据标准曲线图,在所选的浓度范围内，Angulateoid C的标准溶液的工作曲线线性关系良好。 

iv)供试品溶液的制备 

准确称取4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂200mg于100mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，超声振荡后稀释至刻度，摇匀后即得4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂供试品溶液。 

v)精密度测定 

供试品溶液重复进样3次，峰面积相对标准偏差RSD=1.66%，保留时间相对标准偏差RSD=0.35%。 

vi)供试品的测定 

吸取各供试品溶液，进样，测其峰面积，求得Angulateoid C含量。 

vii)回收率测定 

采用标准加入方法，在供试品1中加标100μg/mL，平均回收率在102.3％，RSD为2.12％。 

②Angulateoid C绝对含量计算 

i)由下式计算供试品溶液中Angulateoid C质量浓度 

$C_X=C_R\×\frac{A_X}{A_R}$

C_X：4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂供试品溶液中Angulateoid C质量浓度（ug/mL）； 

C_R：标准参照品（Angulateoid C）溶液质量浓度（ug/mL）； 

A_X：由HPLC测定的4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂供试品溶液中Angulateoid C的峰面积； 

A_R：由HPLC测定的标准参照品溶液中Angulateoid C的峰面积。 

ii)由下式计算4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂中Angulateoid C质量百分含量 

W_{Angulateoid C}(%)：4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂中Angulateoid C质量百分含量，即标准参照品Angulateoid C的绝对含量（质量百分含量）； 

C_X：4-H-苦皮藤素原药或4-H-苦皮藤素水乳剂供试品溶液中Angulateoid C质量浓度(ug/mL)； 

m_供试品：称取的4-H-苦皮藤素原药或4%4-H-苦皮藤素水乳剂质量(mg)。 

5）通过偶联公式计算4-H-苦皮藤素原药中主要活性成分含量 

$W_n=\frac{W_1{M}_n{h}_n}{M_1{h}_1}$

W_n（%）：4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分质量百分含量%； 

W₁（%）：4-H-苦皮藤素原药中Angulateoid C质量百分含量%，即标准参照品Angulateoid C的绝对含量（质量百分含量）； 

M₁：Angulateoid C（标准参照品）分子量； 

h₁：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中Angulateoid C（标准参照品）特征峰峰强度（峰高）； 

M_n：4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分分子量； 

h_n：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分特征峰峰强度（峰高）。 

总量即W_n之和。 

6）通过偶联公式计算4-H-苦皮藤素原药中主要单个活性成分系数与总系数 

i）系数计算公式 

$F_n=\frac{M_n{h}_n}{M_1{h}_1}$

F_n：4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分与Angulateoid C（标准参照品）质量百分含量的比值系数； 

M₁：Angulateoid C（标准参照品）分子量； 

h₁：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中Angulateoid C（标准参照品）特征峰峰强度（峰高）； 

M_n：4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分分子量； 

h_n：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分特征峰峰强度（峰高）。 

总系数为F_n的加和。 

该系数F_n也同样适用于计算4-H-苦皮藤素水乳剂中的活性成分及活性成分组。 

7）4-H-苦皮藤素水乳剂中主要活性成分含量及总量计算 

X_n（%）=X₁（%）F_n

X_n：4-H-苦皮藤素水乳剂中某一活性成分质量百分含量%； 

X₁：4-H-苦皮藤素水乳剂中Angulateoid C质量百分含量%，即标准参照品Angulateoid C的绝对含量。 

2、仪器、试剂与材料 

核磁共振波谱仪Bruker DPX400型。 

质谱仪：Waters Micromass Q-Tof MicroTM型。 

半制备高效液相色谱仪：Waters600型。 

高效液相色谱仪：Agilent1200型。 

2000mL蒸馏烧瓶、5000mL蒸馏烧瓶、球型冷凝管、2000mL分液漏斗。 

DE-52AA旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。 

DEF-6020型真空干燥箱：上海精宏实验设备有限公司。 

柱层析硅胶G和薄层层析硅胶H：青岛海洋化工厂。 

硅胶层析柱6cm×70cm（直径×高度）。 

苦皮藤种子药材（湖北恩施，2010年11月、2011年11月收购自当地）、苦皮藤种子药材（湖北武汉，2011年11月收购自当地），均经河南省农业大学朱长山教授鉴定。 

Angulateoid C，标准参照品，实验室自制（经光谱数据鉴定）。 

试剂：色谱纯（甲醇，天津市四友精细化学品有限公司）及分析纯（天津市化学试剂一厂）。 

3、基础研究 

（1）分离提取流程 

称取阴干的苦皮藤种子500g，粉碎，用6倍量(体积)石油醚回流提取3次，滤液合并后60℃减压浓缩，回收溶剂至油状。按此方法共提取苦皮藤种子粉末2.5kg，总共得浸膏825g。种油用1倍量(体积)纯度 90%的甲醇萃取1次，90%甲醇层过滤后减压浓缩，回收溶剂得浸膏（110g）。取此浸膏用硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯（10：1~4：6）溶剂体系进行梯度洗脱，每500mL收集1份，合并相同馏分。第61份经制备色谱纯化，得Angulateoid C（25mg）；第80-81份得Angulatinoid I纯品（90mg）；第111-112份得Angulateoid B纯品（80mg）；第202份经制备色谱纯化，得Angulatinoid II（25mg）；第215份经制备色谱纯化，得Angulatinoid III（25mg）；第325份经制备色谱纯化，得Angulatinoid IV（20mg）和Angulatinoid V（60mg）。 

（2）4-H苦皮藤原药及水乳剂中主要活性成分的结构及核磁共振碳谱数据 

Angulateoid C:R₁=R₄=R₈=OAc,R₂=R₅=R₆=R₇=H,R₃=OBz 

Angulateoid B:R₁=R₄=R₇=R₈=OAc,R₂=R₅=H,R₃=OBz,R₆=H 

Angulateoid E:R₁=ONiC,R₂=R₅=H,R₃=OBz,R₄=OAc,R₆=R₇=H,R₈=OiBu 

Angulatinoid I：R₁=R₃=R₈=OAc,R₂=R₅=R₆=R₇=H,R₄=OBz 

Angulatinoid II:R₁=R₅=R₇=R₈=OAc,R₂=R₄=R₆=H,R₃=OBz 

Angulatinoid III:R₁=R₅=R₇=R₈=OAc,R₂=R₄=R₆=H,R₃=OBz 

Angulatinoid IV:R₁=ONiC,R₂=R₄=R₇=H,R₃=R₅=OBz,R₆=R₈=OAc 

Angulatinoid V:R₁=ONiC,R₂=R₅=H,R₃=OBz,R₄=R₇=R₈=OAc,R₆=H 

Angulatinoid VI：R₁=R₆=R₇=OAc,R₂=R₄=H,R₃=R₈＝OBz,R₅=ONic 

Angulatinoid VII：R₁=R₃=R₈=OAc,R₂=R₄=R₆=R₇=H,R₃=OBz 

Celahin B：R₁=R₆=R₇=R₈=OAc,R₂=R₄=R₅=H,R₃=OBz 

Celahin C：R₁=R₆=R₇=OAc,R₂=R₄=R₅=H,R₃=OBz,R₈=OH 

Angulateoid C（苦皮藤种素C） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:78.25(C-1)，22.76(C-2),26.46(C-3),39.81(C-4)，88.21(C-5)，36.25(C-6)，47.08(C-7)，75.66(C-8)，76.00(C-9)，50.06(C-10),81.65(C-11),30.78(C-12)，24.45(C-13)，16.94(C-14)，61.59(C-15) 

OAC:170.04,170.61,170.65,20.98,21.05,21.50 

OBz:165.63,129.86,129.46,128.58,133.14 

Angulateoid B（苦皮藤种素B） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:75.53*(C-1)，69.12*(C-2),31.92(C-3),39.18(C-4)，87.85(C-5)，36.11(C-6)，47.18(C-7)，76.21*(C-8)，76.27*(C-9)，50.59(C-10),81.90(C-11),30.72(C-12)，24.44(C-13)，18.47(C-14)，61.76(C-15)(*归属可互换) 

OAC:169.73,169.86,170.43,170.59,20.56,20.99,21.34,21.51 

OBz:165.70,129.73,129.48,128.61,133.20 

Angulateoid E（苦皮藤种素E）[Liu JK,et al.Phytochemistry1993,32(2):379.] 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:73.4*(C-1)，26.7(C-2),22.9(C-3),40.0(C-4)，88.2(C-5)，36.7(C-6)，47.8(C-7)，78.4(C-8)*，76.3*(C-9)，50.5(C-10),81.9(C-11),30.8(C-12)，24.6(C-13)，17.1(C-14)，63.1(C-15) 

OAC:169.9,21.0 

OiBu:176.2,34.3,18.6,18.7 

OBz:165.6**,130.1,129.5,128.6,133.1 

ONiC:165.5**,125.9,123.7,137.1,151.2,153.9 

(*，**归属可互换) 

Angulatinoid I（苦皮种素I） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:76.31(C-1)，69.17(C-2),31.00(C-3),39.14(C-4)，87.69(C-5)，36.38(C-6)，47.21(C-7)，75.37(C-8)，76.31(C-9)，50.58(C-10),82.07(C-11),30.64(C-12)，24.47(C-13)，18.64(C-14)，63.38(C-15) 

OAC:169.71,169.83,170.51,20.61,21.33,20.88 

OBz:165.55,129.55,129.42,128.60,133.24 

Angulatinoid II（苦皮种素II） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:71.08(C-1)，69.80(C-2),30.89(C-3),39.10(C-4)，86.09(C-5)，36.39(C-6)，48.24(C-7)，71.72(C-8)，68.60(C-9)，51.53(C-10),82.34(C-11),31.00(C-12)，25.04(C-13)，18.82(C-14)，64.42(C-15) 

OAC:169.39,169.96,169.96,170.55,20.33,20.88,21.34,21.41 

OBz:165.79,129.17,130.27,128.29,133.38 

Angulatinoid III（苦皮种素III） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:77.17(C-1)，69.82(C-2),31.41(C-3),39.26(C-4)，87.77(C-5)，32.13(C-6)，48.23(C-7)，69.80(C-8)，73.70(C-9)，49.32(C-10),80.61(C-11),29.85(C-12)，23.07(C-13)， 18.38(C-14)，61.97(C-15) 

OAC:169.94,170.01,169.96,170.55,20.52,21.34*,21.11*,21.58 

OBz:164.86,129.64,129.54,128.53,133.27 

Angulatinoid IV（苦皮种素IV） 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:79.22(C-1)，23.30(C-2),26.60(C-3),33.53(C-4)，90.44(C-5)，75.24(C-6)，52.83(C-7)，71.67(C-8)，73.16(C-9)，51.31(C-10),81.50(C-11),30.57(C-12)，24.60(C-13)，16.04(C-14)，62.28(C-15) 

OAC:170.12,169.82,20.83,20.88 

OBz:166.23,164.93,129.23,129.59,129.48,129.68,128.09,128.47,132.87,133.31 

ONiC:165.41,151.40,125.53,137.39,123.05,153.40 

Angulatinoid V（1β,2β,8α-triacetoxy-9β-benzoyloxy-15-nicotinoyloxy-β-dihydroagaran,苦皮种素V）[Tu Y Q,et al.Chin Chem Lett1993,4(3):219] 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:76.31(C-1)，69.17(C-2),31.00(C-3),39.14(C-4)，87.69(C-5)，36.38(C-6)，47.21(C-7)，75.37(C-8)，76.31(C-9)，50.58(C-10),82.07(C-11),30.64(C-12)，24.47(C-13)，18.64(C-14)，63.38(C-15) 

OAC:169.71,169.83,170.51,20.61,21.33,20.88 

OBz:165.55,129.55,129.42,128.60,133.24 

ONiC:165.35,150.89,125.75,137.27,123.83,153.68 

Angulatinoid VI（苦皮种素VI）[Tu Y Q,et al.J Nat Prod1993,56(1):126.] 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:79.0*(C-1)，23.4(C-2),26.7(C-3),39.9(C-4)，88.5(C-5)，32.0(C-6)，48.0(C-7)，74.3*(C-8)，79.0(C-9)，49.0(C-10),80.5(C-11),29.9(C-12)，22.9(C-13)，16.1(C-14)，61.2(C-15)(*归属可互换) 

OAC:169.8,170.5,170.8,20.7,20.9,21.5 

OBz:165.3,128.4-133.1 

Angulatinoid VII（1β,9β-bisbenzoyloxy-2β,6α,15-triacetoxy-8β-nicotinoyloxy-β-dihydroagaran，苦皮种素VII）[Tu Y Q,et al.J Nat Prod1997,60(2):178.] 

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:77.4(C-1)，69.3(C-2),31.3(C-3),32.9(C-4)，90.3(C-5)，74.7(C-6)，53.4(C-7)，72.5(C-8)，71.6(C-9)，51.7(C-10),81.2(C-11),30.3(C-12)，24.6(C-13)，16.6(C-14)，61.1(C-15) 

OAC:169.4,169.6,170.7,21.1,21.1,21.3 

OBz:164.8**,148.6,132.7,132.6,129.5,129.2,128.0,127.7,129.5,128.9 

ONiC:165.0**,126.1,123.2,137.1,151.0,153.6 

(*,**归属可互换) 

Celahin B（青江藤素B）[Kou Y H,et al.Phytochemistry,1996,41(2):549.] 

¹³C NMR(75.47MHz,CDCl₃)δ_C:¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ_C:71.5(C-1),69.5(C-2),30.8(C-3),33.1(C-4),89.2(C-5),78.1(C-6),48.8(C-7),34.8(C-8),69.4(C-9),53.3(C-10),82.7(C-11),30.3(C-12),25.9(C-13),17.8(C-14),65.4(C-15); 

OA_C-1:169.3,170.0,170.0,170.6,20.4,21.3,21.3,21.4; 

OBz:165.3,129.1,130.1,128.3,133.5.(*归属可互换)。 

Celahin C（青江藤素C）[Kou Y H,et al.Phytochemistry,1996,41(2):549.] 

¹³C NMR(75.47MHz,CDCl₃)δ_C:69.6*(C-1)，73.3*(C-2),29.7(C-3),33.1(C-4)，89.3(C-5)，78.3(C-6)，48.8(C-7)，34.3(C-8)，69.3*(C-9)，54.6(C-10),82.6(C-11),31.9(C-12)，26.0(C-13)，17.9(C-14)， 65.2(C-15) 

OAC:170.0,170.5,171.4,14.1,21.4,21.7；OBz:165.4,129.5,129.5,128.6,133.1 

实施例1 

（1）4-H-苦皮藤素原药甲制备方法 

将筛分后符合规定的湖北恩施（2010）苦皮藤种子（24目），依次加入体积为3︰3︰3倍量的石油醚，于80℃下回流提取3次，每次均提取2h，过滤，合并三次滤液，减压浓缩至种子油。取该种油，用它重量为1倍量的HP20树脂装柱（径高比：10:1），先后以40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇和95%乙醇冲柱（冲柱的乙醇的体积分别浓缩后滤液的40，90，40和20倍），收集60%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得4-H-苦皮藤素原药甲。 

（2）4-H-苦皮藤素原药甲质量检测方法 

①特征提取物制备 

取4-H-苦皮藤素原药甲直接作为4-H-苦皮藤素原药甲特征提取物。 

②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测 

取上述特征提取物65mg，溶于0.5mL CDCl₃中，作IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析 

1）鉴别 

4-H-苦皮藤素原药甲特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹图谱中，清楚地显示4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的特征信 号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证8个4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物Angulateoid C、Angulateoid B、Angulateoid E、Angulatinoid I、Angulatinoid II、Angulatinoid V、Celahin B、Celahin C在IGD核磁共振碳谱指纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图1-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图1-b。 

2）4-H-苦皮藤素原药甲各活性成分比例测定结果如下： 

3）4-H-苦皮藤素原药甲中Angulateoid C浓度含量测定结果如下： 

4-H-苦皮藤素原药甲中Angulateoid C质量百分含量

17.21%

4）4-H-苦皮藤素原药甲含量测定结果如下： 

实施例2 

（1）4-H-苦皮藤素原药乙的制备方法 

将筛分后符合规定的湖北武汉（2011）苦皮藤种子（24目），依次加入体积为3︰2︰2倍量、质量比为95%的乙醇，于60℃下回流提取3次，每次均提取1.5h，过滤，合并三次滤液，减压浓缩至种子油。取该种油，用它重量为1.2倍量的D-101树脂装柱（径高比10:1），先后以35%乙醇、65%乙醇、80%乙醇和90%乙醇冲柱（冲柱的乙醇的体积分别浓缩后滤液的40，90，40和20倍），收集65%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得4-H-苦皮藤素原药乙。 

（2）4-H-苦皮藤素原药乙质量检测方法 

①特征提取物制备 

取4-H-苦皮藤素原药乙直接作为4-H-苦皮藤素原药乙特征提取物。 

②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测 

同实施例1。 

③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析 

1）鉴别 

4-H-苦皮藤素原药乙特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹图谱中，清楚地显示4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的特征信号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证8个4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物Angulateoid C、Angulateoid B、Angulateoid E、Angulatinoid I、Angulatinoid II、Angulatinoid V、Celahin B、Celahin C在IGD核磁共振碳谱指纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图2-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图2-b。 

2）4-H-苦皮藤素原药乙各活性成分比例测定结果如下： 

3）4-H-苦皮藤素原药乙中Angulateoid C浓度含量测定结果如下： 

4-H-苦皮藤素原药乙中Angulateoid C质量百分含量

15.02%

4）4-H-苦皮藤素原药乙含量测定结果如下： 

实施例3 

（1）4-H-苦皮藤素原药丙制备方法 

将筛分后符合规定的湖北恩施（2011）苦皮藤种子（10目），依次加入体积为6︰6倍量的石油醚，于60℃下超声提取2次，每次均提取1h，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至种子油。取该种油，用它重量为1倍量的HP20树脂装柱（径高比：12:1），先后以40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇和95%乙醇冲柱（冲柱的乙醇的体积分别浓缩后滤液的30，90，40和20倍），收集75%乙醇洗脱液，减压蒸干，即 得4-H-苦皮藤素原药丙。 

（2）4-H-苦皮藤素原药丙质量检测方法 

①特征提取物制备 

取4-H-苦皮藤素原药丙直接作为4-H-苦皮藤素原药丙特征提取物。 

②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测 

取上述特征提取物60mg，溶于0.5mL CDCl₃中，作IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图谱。 

③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析 

1）鉴别 

4-H-苦皮藤素原药丙特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹图谱中，清楚地显示4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的特征信号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证8个4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物Angulateoid C、Angulateoid B、Angulateoid E、Angulatinoid I、Angulatinoid II、Angulatinoid V、Celahin B、Celahin C在IGD核磁共振碳谱指纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图3-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图3-b。 

2）4-H-苦皮藤素原药丙各活性成分比例测定结果如下： 

3）4-H-苦皮藤素原药丙中Angulateoid C浓度含量测定结果如下： 

4-H-苦皮藤素原药丙中Angulateoid C质量百分含量

16.69%

4）4-H-苦皮藤素原药丙含量测定结果如下： 

实施例4 

（1）4-H-苦皮藤素水乳剂配制 

将检测合格的4-H-苦皮藤素原药置于反应釜中，按照配比量加入下表中的辅料（乳化剂和抗冻剂），搅拌，再加溶剂至规定含量，搅拌至完全溶解，得到4-H-苦皮藤素水乳剂。配制比例见下表。 

（2）4-H-苦皮藤素水乳剂对小菜蛾拒食活性研究 

1）供试药剂 

4-H-苦皮藤素水乳剂（上面表格中含4-H-苦皮藤素原药甲5.70% 的水乳剂），1%印楝素（光明印楝产业开发股份有限公司）。 

2）供试害虫 

从田间采回小菜蛾（Plutella xylostella L）幼虫,经饲养2-3天，并确定不带病毒的三至四龄幼虫供试验。 

3）活性测定方法 

拒食活性测定，用打孔器（D=1.8cm）将花椰菜（Brassica oleracea L.var.botrytis L）打成叶圆片，将其浸入不同浓度的处理液中，5s后取出，晾干后放入垫有滤纸的培养皿(D=9cm)中。每皿放入处理和对照各3片，交错排列，然后接入已饥饿24h的3龄幼虫10头，每处理重复3次，以清水处理为对照。分别于接虫后8、16、24h采用透明坐标胶片测定各叶被食面积，由此计算其选择性拒食率。 

非选择性拒食活性测定方法同上，仅在1个培养皿内全部放入处理叶，而另1个培养皿内全部放入对照叶，每皿同样放入6片圆叶。 

选择性拒食率=[(CK组取食量-处理组取食量)/(CK组取食量+处理组取食量)]×100% 

非选择性拒食率=[(CK组取食量-处理组取食量)/CK组取食量]×100% 

4）实验结果：4-H-苦皮藤素水乳剂稀释成1000~2000倍效果较好，其药后8h的防治效果为85.6%~99.6%；明显优于对照药剂1%印楝素对水稀释1000倍防效。 

按照本实施例配制的其他水乳剂和上述给出活性试验的水乳剂效果相似，以上述给出活性试验的水乳剂为最优。 

实施例5 

（1）4-H-苦皮藤素水乳剂苦皮藤素系数计算 

取实施例1、2、3的4-H-苦皮藤素原药甲、乙、丙苦皮藤素总系数实际值分别作为4-H-苦皮藤素原药甲、乙、丙苦皮藤素总系数。 

计算结果如下： 

	4-H-苦皮藤素原药苦皮藤素总系数
		含4-H-苦皮藤素原药甲	4.22
含4-H-苦皮藤素原药乙	3.81
		含4-H-苦皮藤素原药丙	3.94

（2）4-H-苦皮藤素水乳剂Angulateoid C浓度含量测定结果如下： 

（3）4-H-苦皮藤素水乳剂苦皮藤素含量计算 

Claims (15)

1.一种4-H-苦皮藤素原药，含有以下质量百分含量的活性成分：Angulateoid C15.0~18.0%，Angulateoid B4.0~12.0%，AngulateoidE13.0~21.0%，Angulatinoid I4.5~8.0%，Angulatinoid V4.5~7.0%，Angulatinoid II3.0~5.0%，Celahin B2.0~6.0%，CelahinC2.0~6.0%；所述活性成分均为4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物。

2.根据权利要求1所述的4-H-苦皮藤素原药，其特征在于，4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物总的质量百分含量不小于48%，优选不小于55%，更优选65.0~75.0%。

3.权利要求1或2所述的4-H-苦皮藤素原药的制备方法，包括：称取苦皮藤种子，粉碎，加入体积为2~6倍量、石油醚或90~95%的乙醇于60~80℃下回流或超声提取2~3次，每次提取1~2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩；取浓缩后的种子油，用其重量为1~2倍量的大孔吸附树脂装柱，先后以30~40%乙醇、55~65%乙醇、80~85%乙醇和90~95%乙醇冲柱，收集55~65%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得4-H-苦皮藤素原药。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂的型号为HP-20、SP825、AB-8、D-101、D-201或SP-70，所述大孔吸附树脂的径高比为8:1~15:1。

5.一种4-H-苦皮藤素水乳剂，包含权利要求1或2所述的4-H-苦皮藤素原药。

6.根据权利要求5所述的4-H-苦皮藤素水乳剂，其特征在于，包括以下重量份的成分：所述4-H-苦皮藤素原药7~9份，乳化剂8~12份，抗冻剂3~5份；优选地，包括以下重量份的成分：所述4-H-苦皮藤素原药8~9份，乳化剂9~10份，抗冻剂5份。

7.根据权利要求6所述的4-H-苦皮藤素水乳剂，其特征在于，所述乳化剂为：烷基芳基聚氧乙烯聚氧丙烯醚或烷基芳基聚氧乙烯聚氧乙烯醚，所述抗冻剂为：乙二醇或丙二醇，优选乙二醇。

8.根据权利要求5~7任意一项所述的4-H-苦皮藤素水乳剂，其特征在于，该4-H-苦皮藤素水乳剂中4-H-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的总的质量百分含量不小于4%，优选为5.0~7.0%。

9.一种权利要求1或2所述的4-H-苦皮藤素原药的质量检测方法，包括以下步骤：

1）取4-H-苦皮藤素原药直接作为4-H-苦皮藤素原药特征提取物；

2）对4-H-苦皮藤素原药特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述4-H-苦皮藤素原药特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式（IGD核磁共振碳谱指纹图谱）测定出所述各活性成分相应的标准参照品的特征峰峰强度；

3）通过定量分析手段测定得到4-H-苦皮藤素原药中所述标准参照品的绝对含量；

4）利用所述特征峰峰强度（各活性成分特征峰峰强度及相应的标准参照品的特征峰峰强度）的比值和所述绝对含量，计算出4-H-苦皮藤素原药中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。

10.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于，步骤2）中，所述4-H-苦皮藤素原药特征提取物中的活性成分特征峰为：C-15吸收峰，其化学位移为δ_C60.0~66.0。

11.根据权利要求9或10所述的质量检测方法，其特征在于，步骤3）中，所述标准参照品的绝对含量是指：用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素原药中标准参照品的质量百分含量，所述定量分析手段为高效液相色谱法。

12.根据权利要求9~11任意一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述标准参照品为Angulateoid C。

13.根据权利要求9~12任意一项所述的质量检测方法，其特征在于，步骤4）中，计算各活性成分的含量的偶联公式为：

$W_n=\frac{W_1{M}_n{h}_n}{M_1{h}_1};$ 其中：

W₁为步骤3）用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量；

M₁为所述某一活性成分对应的标准参照品的分子量；

h₁为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中所述某一活性成分对应的标准参照品的特征峰峰强度；

W_n为4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分的质量百分含量；

M_n为某一活性成分的分子量；

h_n为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的4-H-苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分的特征峰峰强度。

14.根据权利要求13所述的质量检测方法，其特征在于，计算4-H-苦皮藤素原药中各活性成分的系数和总系数的公式为：

$F_n=\frac{M_n{h}_n}{M_1{h}_1};$

其中F_n为4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分与其对应的标准参照品质量百分含量的比值系数；M₁、h₁、M_n和h_n的含义同权利要求13中的相应定义，总系数指各成分的系数F_n之和。

15.一种权利要求5~8任意一项所述的4-H-苦皮藤素水乳剂的质量检测方法，利用权利要求9~14任意一项所述方法检测得到4-H-苦皮藤素原药中某个活性成分的含量，再利用以下公式推算出4-H-苦皮藤素水乳剂中各活性成分的质量百分含量：X_n=X₁F_n；其中：

X_n为4-H-苦皮藤素水乳剂中某一活性成分质量百分含量；

X₁为用定量分析手段测定的4-H-苦皮藤素水乳剂中某一活性成分对应的标准参照品的绝对含量；

F_n为权利要求14所述的4-H-苦皮藤素原药中某一活性成分与其对应的标准参照品质量百分含量的比值系数；

4-H-苦皮藤素水乳剂中活性成分组的含量为各活性成分X_n相加之和；该4-H-苦皮藤素水乳剂由4-H-苦皮藤素原药制备得到。

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