CN103079567A - 用于疾病和病症的治疗和预防的氟取代的ω-羧基芳基二苯脲的合成代谢产物 - Google Patents

Abstract

式（I）化合物的合成代谢产物、其盐、其前药、包含这类合成代谢产物的药用组合物，以及这类化合物和组合物用于治疗由raf、VEGFR、PDGFR、p38和flt-3介导的疾病的用途。本发明描述的是式I化合物的M2、M3、M4和M5合成代谢产物，其中所述式I化合物以及所述M2、M3、M4和M5合成代谢产物的结构如说明书所示。

Description

用于疾病和病症的治疗和预防的氟取代的ω-羧基芳基二苯脲的合成代谢产物

技术领域

本发明涉及新的化合物、包含所述化合物的药用组合物以及这些化合物或组合物单独地或与抗癌药物结合地用于治疗由异常的VEGFR、PDGFR、raf、p38和/或flt-3激酶信号传导的疾病和病症的用途。

发明背景

ras信号转导通路的激活指示对细胞增殖、分化和转化有深远影响的事件级联。Raf激酶——ras的下游效应物——被认为是这些信号从细胞表面受体至到达细胞核的的关键介质（Lowy,D.R.;Willumsen,B.M.Ann.Rev.Biochem.1993,62,851;Bos,J.L.Cancer Res.1989,49,4682）。已经证明通过将灭活抗体给予raf激酶或者通过共表达显性负raf激酶或显性负MEK（raf激酶的底物）来抑制所述raf激酶信号通路，、从而抑制活性ras的影响，会导致转化细胞回复至正常生长表型（参见：Daum et al.Trends Biochem.Sci.1994,19,474-80;Fridman et al.J.Biol.Chem.1994,269,30105-8）。Kolch et al.（Nature1991,349,426-28）已经进一步显示通过反义RNA阻断膜相关的致癌基因中的细胞增殖可抑制raf的表达。相似地，还将raf激酶的（通过反义寡脱氧核苷酸）体内或体外抑制与各种人肿瘤类型生长的抑制关联起来（Monia et al.,Nat.Med.1996,2,668-75）。

为了支持超过1-2mm³大小的进行性肿瘤生长，意识到肿瘤细胞需要功能间质——由成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、细胞外基质蛋白质和可溶性因子组成的支持结构（Folkman,J.,Semin.Oncol.2002.29(6 Suppl 16),15-8）。肿瘤通过分泌可溶性生长因子（例如PDGF和转化生长因子-β（TGF-β））诱导间质组织的形成，所述可溶性生长因子刺激宿主细胞分泌互补因子，例如成纤维细胞生长因子（FGF）、表皮生长因子（EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）。这些刺激因子诱导新血管的形成（或血管生成），血管将氧气和营养带到肿瘤中且允许其生长且提供转移途径。人们相信一些用于抑制间质形成的疗法将抑制多种组织学类型的上皮肿瘤的生长（George,D.Semin.Oncol.2001.28(5 Suppl 17),27-33;Shaheen,R.M.,et al.,Cancer Res.2001,61(4),1464-8;Shaheen,R.M.,et al.Cancer Res.1999,59(21),5412-6）。但是，由于血管生成过程和肿瘤进展中涉及的复杂的性质和多种生长因子，靶向单一通路的药物可能具有有限的功效。需要提供针对被肿瘤利用以在宿主间质中诱导血管生成的多种关键信号传导通路的治疗。这些包括PDGF（一种有效的间质形成刺激物）（Ostman,A.and C.H.Heldin,Adv.Cancer Res.2001,80,1-38）、FGF（一种成纤维细胞和内皮细胞的化学引诱物以及有丝分裂原）和VEGF（一种有效的血管化作用调节剂）。

PDGF是间质形成的关键调节剂，其由许多肿瘤以旁分泌的方式分泌且被认为促进成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞的生长，促进间质形成和血管生成。PDGF最初被识别为猿肉瘤病毒的v-sis致癌基因产物（Heldin,C.H.，et al.,J.Cell.Sci.Suppl.1985,3,65-76）。生长因子由两个肽链组成，被称为A或B链，其主要的氨基酸序列有60%的同源性。所述链被二硫键交联以形成由AA、BB或AB同源或异源二聚体组成的30kDa成熟蛋白质。PDGF在血小板中被发现有较高的水平，且由内皮细胞和血管平滑肌细胞表达。另外，PDGF的产生在缺氧条件下（例如那些在血管化不良的肿瘤组织中发现的条件下）上调（Kourembanas,S.,et al.,Kidney Int.1997,51(2),438-43）。PDGF与PDGF受体以高亲和力结合，所述PDGF受体是1106个氨基酸的分子量124kDa的跨膜酪氨酸激酶受体（Heldin,C.H.,A.Ostman,andL.Ronnstrand,Biochim.Biophys.Acta 1998,1378(1),79-113）。已发现PDGFR是同源或异源二聚体的链，所述链在其整个氨基酸序列上有30%的同源性以及在其激酶结构域之间有64%的同源性（Heldin,C.H.,et al..Embo J.1988,7(5),1387-93）。PDGFR是具有分裂激酶结构域的酪氨酸激酶受体家族成员，包括VEGFR-2（KDR）、VEGFR-3（flt-4）、c-kit和flt-3。所述PDGF受体主要表达在成纤维细胞、平滑肌细胞、周细胞中以及在较小程度上表达在中枢神经系统的神经元、肾系膜细胞、莱氏细胞和许旺细胞中。在与所述受体结合时，PDGF诱导受体二聚化且经历酪氨酸残基的自身磷酸化和反式磷酸化（其增加受体的激酶活性），并通过SH2蛋白结合域的激活促进下游效应物的募集。多个信号传导分子与活化的PDGFR形成复合物，包括PI-3激酶、磷脂酶C-γ、src和GAP（p21-ras的GTP酶激活蛋白）（Soskic,V.,et al.Biochemistry 1999,38(6),1757-64）。通过PI-3激酶的激活，PDGF激活诱导细胞运动和迁移的Rho信号传导通路，且通过GAP的激活，通过p21-ras和MAPK信号传导通路的激活诱导有丝分裂发生。

在成人中，人们认为PDGF的主要功能是促进和增加创伤愈合的速率且维持血管稳态（Baker,E.A.and D.J.Leaper,Wound RepairRegen.2000,8(5),392-8,and Yu,J.,A.Moon,and H.R.Kim,Biochem.Biophys.Res.Commun.2001,282(3),697-700）。PDGF在血小板中被发现有较高的浓度，且是成纤维细胞、平滑肌细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的有效的化学引诱物。除其在创伤愈合中的作用外，还已知PDGF帮助维持血管稳态。在新血管的发育过程中，PDGF募集血管结构完整性所需要的周细胞和平滑肌细胞。PDGF被认为在肿瘤新血管形成中发挥相似的作用。作为其在血管生成中作用的一部分，PDGF控制组织间隙液压，通过其对结缔组织细胞和细胞外基质之间相互作用的调节而调节血管的通透性。抑制PDGFR的活性可降低组织间隙压力且促进细胞毒素流入肿瘤，改善这些试剂的抗肿瘤功效（Pietras,K.,et al. Cancer Res.2002,62(19),5476-84;Pietras,K.,et al.CancerRes.2001,61(7),2929-34）。

PDGF可通过间质细胞或肿瘤细胞上的PDGFR受体的旁分泌或自分泌刺激而直接促进肿瘤生长，或通过扩增所述受体或利用重组激活所述受体而促进肿瘤生长。过表达的PDGF可能是通过PDGF对间质形成和血管生成诱导的直接作用来转化人黑素瘤细胞和角化细胞——不表达PDGF受体的两种细胞类型（Forsberg,K.,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1993,90(2),393-7;Skobe,M.and N.E.Fusenig,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1998,95(3),1050-5）。这种肿瘤间质的旁分泌刺激还在结肠癌、肺癌、乳腺癌和前列腺癌中被观察到（Bhardwaj,B.,et al.Clin.Cancer Res.1996,2(4),773-82;Nakanishi,K.,et al.Mod.Pathol.1997,10(4),341-7;Sundberg,C.,et al.Am.J.Pathol.1997,151(2),479-92;Lindmark,G.,et al.Lab.Invest.1993,69(6),682-9;Vignaud,J.M.，et al,Cancer Res.1994,54(20),5455-63），其中所述肿瘤表达PDGF，但是不表达受体。肿瘤细胞生长的自分泌刺激——其中大部分所分析的肿瘤表达配体PDGF和所述受体——在恶性胶质瘤（Fleming,T.P.，et al.Cancer Res.1992,52(16),4550-3）、软组织肉瘤（Wang,J.,M.D.Coltrera,and A.M.Gown,Cancer Res.1994,54(2),560-4）、卵巢癌（Henriksen,R.,et al.Cancer Res.1993,53(19),4550-4）、前列腺癌（Fudge,K.,C.Y.Wang,and M.E.Stearns,Mod.Pathol.1994,7(5),549-54）、胰腺癌（Funa,K.,et al.Cancer Res.1990,50(3),748-53）和肺癌（Antoniades,H.N.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992,89(9),3942-6）中已有报道。已发现少量所述受体的非配体依赖性激活，但其在慢性粒细胞白血病（CMML）中已有报道，其中染色体易位事件在Ets样转录因子TEL和PDGF受体之间形成一个融合蛋白。另外，已在胃肠道间质瘤中发现PDGFR中的激活突变，其中不涉及c-kit的激活（Heinrich,M.C.,et al.,Science 2003,9,9）。

在胚胎发育和一些血管生成依赖性疾病中血管生成和血管发生（vasculogenesis）的另一个主要调节剂是血管内皮生长因子（VEGF；也被称为血管通透因子，VPF）。VEGF代表由于可变RNA剪接而以同源二聚体形式存在的有丝分裂原的亚型家族。所述VEGF亚型对血管内皮细胞有高度特异性（综述参见：Farrara et al.Endocr.Rev.1992,13,18;Neufield et al.FASEB J.1999,13,9）。

VEGF的表达由缺氧诱导（Shweiki et al.Nature 1992,359,843），也由各种细胞因子和生长因子诱导，例如白细胞介素-1、白细胞介素-6、表皮生长因子和转化生长因子。至今，VEGF和VEGF家族成员已经被报道结合三个跨膜受体酪氨酸激酶中的一个或多个（Mustonenet al.J.Cell Biol.1995,129,895），包括VEGF受体-1（还被称为flt-1（fms-样酪氨酸激酶-1））、VEGFR-2（还被称为含激酶插入区的受体（KDR）；VEGFR-2的小鼠类似物被称为胎肝激酶-1（flk-1））、以及VEGFR-3（还被称为flt-4）。VEGFR-2和flt-1已经显示具有不同的信号转导特性（Waltenberger et al.J.Biol.Chem.1994,269,26988);Park et al.Oncogene 1995,10,135）。因此，VEGFR-2在完整的细胞中经历强的配体依赖性的酪氨酸磷酸化作用，然而flt-1显示较弱的应答。因此，与VEGFR-2的结合被认为是诱导所有VEGF介导的生物应答的关键要求。

在体内，VEGF在血管发生中发挥主要的作用并诱导血管生成和血管的透化。VEGF的表达失调导致许多疾病的发生，所述疾病特征在于异常的血管生成和/或高通透性过程。人们相信用一些试剂对VEGF介导的信号转导级联进行调节可提供对异常的血管生成和/或高通透性过程的有用的控制。肿瘤缺氧区内的致瘤细胞通过刺激VEGF产生作出应答，其引起静态内皮细胞的活化以刺激新血管的形成（Shweiki et al.Proc.Nat’l.Acad.Sci.1995,92,768）。另外，没有血管生成的肿瘤区中的VEGF产生可通过ras信号转导通路进行（Grugelet al.J.Biol.Chem.1995,270,25915;Rak et al.Cancer Res.1995,55,4575）。在原位杂交研究中已经显示VEGF mRNA在各种人肿瘤中强烈上调，所述人肿瘤包括肺癌（Mattern et al.Br.J.Cancer 1996,73,931）、甲状腺癌（Viglietto et al.Oncogene 1995,11,1569）、乳腺癌（Brown et al.Human Pathol.1995,26,86）、胃肠道癌（Brown et al.Cancer Res.1993,53,4727;Suzuki et al.Cancer Res.1996,56,3004）、肾脏和膀胱癌（Brown et al.Am.J.Pathol.1993,143I,1255）、卵巢癌（Olson et al.Cancer Res.1994,54,1255）和宫颈癌（Guidi et al.J.Nat’l Cancer Inst.1995,87,12137），以及血管肉瘤（Hashimoto et al.Lab.Invest.1995,73,859）和一些颅内肿瘤（Plate et al.Nature 1992,359,845;Phillips et al.Int.J.Oncol.1993,2,913;Berkman et al.J.Clin.Invest.1993,91,153）。VEGFR-2的中和单抗已经显示有效地阻断肿瘤血管生成（Kim et al.Nature 1993,362,841;Rockwell et al.Mol.Cell.Differ.1995,3,315）。

VEGF的过表达——例如在极限缺氧的情况下——可导致眼内血管生成、导致血管过度增殖、最终导致失明。如此的事件级联已在许多视网膜病中被观察到，包括糖尿病视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变（Aiello et al.New Engl.J.Med.1994,331,1480;Peer et al.Lab.Invest.1995,72,638），以及年龄相关的黄斑变性（AMD；参见Lopez et al.Invest.Opththalmol.Vis.Sci.1996,37,855）。

在类风湿性关节炎（RA）中，血管翳的向内生长可由血管生成因子的产生介导。免疫反应性的VEGF的水平在RA患者的滑液中较高，而VEGF水平在患有其他形式关节炎或退化性关节疾病的患者的滑液中较低（Koch et al.J.Immunol.1994,152,4149）。血管生成抑制剂AGM-170已经显示在大鼠胶原性关节炎模型中预防关节的新血管生成（Peacock et al.J.Exper.Med.1992,175,1135）。

增加的VEGF表达也已经在银屑病皮肤中以及与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病中被证实，所述大疱性疾病例如大疱性类天疱疮、多形性红斑和疱疹样皮炎（Brown et al.J.Invest.Dermatol.1995,104,744）。

血管内皮生长因子（VEGF、VEGF-C、VEGF-D）和其受体（VEGFR-2、VEGFR-3）不仅是肿瘤血管生成的关键调节剂，也是淋巴管生成的关键调节剂。VEGF、VEGF-C和VEGF-D在大多数肿瘤中表达，主要在肿瘤生长期间且通常以显著增加的水平表达。VEGF的表达由缺氧、细胞因子、致癌基因例如ras激发，或通过失活肿瘤抑制基因激发（McMahon,G.Oncologist 2000,5(Suppl.1),3-10;McDonald,N.Q.;Hendrickson,W.A.Cell 1993,73,42 1-424）。

VEGF的生物活性是通过与其受体的结合介导。VEGFR-3（也被称作flt-4）主要表达在正常成人组织的淋巴管内皮中。VEGFR-3的功能是新淋巴管的形成所需要的，但是不是维持已存在的淋巴管所需要的。VEGFR-3还在肿瘤中的血管内皮上上调。近来，VEGF-C和VEGF-D——VEGFR-3的配体——已经被鉴定为哺乳动物中淋巴管生成的调节剂。由肿瘤相关的淋巴管生成因子诱导的淋巴管生成可促进新血管生长到肿瘤中，使肿瘤细胞接入体循环。侵袭淋巴管的细胞可经由胸导管进入血流。肿瘤表达研究已允许直接比较VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表达和与原发肿瘤扩散能力直接相关的临床病理因素（例如，淋巴结转移、淋巴管浸润、继发性转移、无病生存率）。在许多情况下，这些研究显示了淋巴管生成因子的表达和原发性实体瘤的转移能力之间的统计学相关性（Skobe,M.et al.NatureMed.2001,7(2),192-198;Stacker,S.A.et al..Nature Med.2001,7(2),186-191;Makinen,T.et al.Nature Med.2001,7(2),199-205;Mandriota,S.J.et al.EMBO J.2001,20(4),672-82;Karpanen,T.et al.Cancer Res.2001,61(5),1786-90;Kubo,H.et al.Blood 2000,96(2),546-53）。

缺氧似乎是对恶性细胞中VEGF产生的重要刺激。p38 MAP激酶的激活是肿瘤细胞响应于缺氧而进行VEGF诱导所需要的（Blaschke,F.et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.2002,296,890-896;Shemirani,B.et al.Oral Oncology 2002,38,251-257）。除了通过对调节VEGF分泌而参与到血管生成中外，p38 MAP激酶还通过调节胶原酶活性和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物的表达促进恶性细胞的侵袭和不同肿瘤类型的迁移（Laferriere,J.et al.J.Biol.Chem.2001,276,33762–33772;Westermarck,J.et al.Cancer Res.2000,60,7156–7162;Huang,S.et al.J.Biol.Chem.2000,275,12266–12272;Simon,C.et al.Exp.Cell Res.2001,271,344–355）。

对有丝分裂原活化的蛋白激酶（MAPK）p38的抑制已被证明可在体外和/或在体内抑制细胞因子产生（例如，TNF、IL-1、IL-6、IL-8）和蛋白水解酶产生（例如，MMP-1、MMP-3）。所述有丝分裂原活化的蛋白（MAP）激酶p38参与到IL-1和TNF信号传导通路中（Lee,J.C.;Laydon,J.T.;McDonnell,P.C.;Gallagher,T.F.;Kumar,S.;Green,D.;McNulty,D.;Blumenthal,M.J.;Heys,J.R.;Landvatter,S.W.;Stricker,J.E.;McLaughlin,M.M.;Siemens,I.R.;Fisher,S.M.;Livi,G.P.;White,J.R.;Adams,J.L.;Yound,P.R.Nature 1994,372,739）。

临床研究已经将肿瘤坏死因子（TNF）的产生和/或信号传导与许多疾病（包括类风湿性关节炎）相联系（Maini.J.Royal Coll.PhysiciansLondon 1996,30,344）。另外，TNF的过量水平涉及各种炎性和/或免疫调节性疾病，包括急性风湿热（Yegin et al.Lancet 1997,349,170）、骨吸收（Pacifici et al.J.Clin.Endocrinol.Metabol.1997,82,29）、绝经后骨质疏松症（Pacifici et al.J.Bone Mineral Res.1996,11,1043）、脓毒症（Blackwell et al.Br.J.Anaesth.1996,77,110）、革兰氏阴性脓毒症（Debets et al.Prog.Clin.Biol.Res.1989,308,463）、感染性休克（Tracey et al.Nature 1987,330,662;Girardin et al.New England J.Med.1988,319,397）、内毒素休克（Beutler et al.Science 1985,229,869;Ashkenasi et al.Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 1991,88,10535）、中毒性休克综合征（Saha et al.J.Immunol.1996,157,3869;Lina et al.FEMSImmunol.Med.Microbiol.1996,13,81）、全身炎性反应综合征（Anon.Crit.Care Med.1992,20,864）、炎性肠病（Stokkers et al.J.Inflamm.1995-6,47,97）（包括克罗恩氏病（van Deventer et al.Aliment.Pharmacol.Therapeu.1996,10(Suppl.2),107;van Dullemen et al.Gastroenterology 1995,109,129）和溃疡性结肠炎（Masuda et al.J.Clin.Lab.Immunol.1995,46,111））、赫尔斯海默尔反应（Jarisch-Herxheimer reactions）（Fekade et al.New England J.Med.1996,335,311）、哮喘（Amrani et al.Rev.Malad.Respir.1996,13,539）、成人呼吸窘迫综合征（Roten et al.Am.Rev.Respir.Dis.1991,143,590;Suter et al.Am.Rev.Respir.Dis.1992,145,1016）、急性肺纤维化疾病（Pan et al.Pathol.Int.1996,46,91）、肺结节病（Ishiokaet al.Sarcoidosis Vasculitis Diffuse Lung Dis.1996,13,139）、过敏性呼吸系统疾病（Casale et al.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.1996,15,35）、矽肺病（Gossart et al.J.Immunol.1996,156,1540;Vanhee et al.Eur.Respir.J.1995,8,834）、煤工尘肺（Borm et al.Am.Rev.Respir.Dis.1988,138,1589）、肺泡损伤（Horinouchi et al.Am.J.Respir.CellMol.Biol.1996,14,1044）、肝衰竭（Gantner et al.J.Pharmacol.Exp.Therap.1997,280,53）、急性炎症期间的肝脏疾病（Kim et al.J.Biol.Chem.1997,272,1402）、严重酒精性肝炎（Bird et al.Ann.Intern.Med.1990,112,917）、疟疾（Grau et al.Immunol.Rev.1989,112,49;Taverne et al.Parasitol.Today 1996,12,290）（包括恶性疟原虫疟疾（Perlmann et al.Infect.Immunit.1997,65,116）和脑型疟疾（Rudin etal.Am.J.Pathol.1997,150,257））、非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM;Stephens et al.J.Biol.Chem.1997,272,971;Ofei et al.Diabetes 1996,45,881）、充血性心力衰竭（Doyama et al.Int.J.Cardiol.1996,54,217;McMurray et al.Br.Heart J.1991，66,356）、心脏病后损伤（Malkielet al.Mol.Med.Today 1996,2,336）、动脉粥样硬化（Parums et al.J.Pathol.1996,179,A46）、阿尔茨海默病（Fagarasan et al.Brain Res.1996,723,231;Aisen et al.Gerontology 1997,43,143）、急性脑炎（Ichiyama et al.J.Neurol.1996,243,457）、脑损伤（Cannon et al.Crit.Care Med.1992,20,1414;Hansbrough et al.Surg.Clin.N.Am.1987,67,69;Marano et al.Surg.Gynecol.Obstetr.1990,170,32）、多发性硬化（M.S.;Coyle.Adv.Neuroimmunol.1996,6,143;Matusevicius etal.J.Neuroimmunol.1996,66,115）（包括在多发性硬化中的脱髓鞘作用和少突胶质细胞损失（Brosnan et al.Brain Pathol.1996,6,243））、晚期癌症（MucWierzgon et al.J.Biol.Regulators Homeostatic Agents1996,10,25）、淋巴恶性肿瘤（Levy et al.Crit.Rev.Immunol.1996,16,31）、胰腺炎（Exley et al.Gut 1992,33,1126）（包括急性胰腺炎中的全身并发症（McKay et al.Br.J.Surg.1996,83,919））、在感染、炎症和癌症中的伤口愈合不良（Buck et al.Am.J.Pathol.1996,149,195）、骨髓增生异常综合征（Raza et al.Int.J.Hematol.1996,63,265）、系统性红斑狼疮（Maury et al.Arthritis Rheum.1989,32,146）、胆汁性肝硬变（Miller et al.Am.J.Gasteroenterolog.1992,87,465）、肠坏死（Sun et al.J.Clin.Invest.1988,81,1328）、牛皮癣（Christophers.Austr.J.Dermatol.1996,37,S4）、辐射损伤（Redlich et al.J.Immunol.1996,157,1705）以及在给予单克隆抗体例如OKT3后的毒性（Brod etal.Neurology 1996,46,1633）。TNF的水平也已经与宿主抗移植物反应（Piguet et al.Immunol.Ser.1992,56,409）关联，包括缺血再灌注损伤（Colletti et al.J.Clin.Invest.1989,85,1333）和同种异体移植物排斥（包括肾脏（Maury et al.J.Exp.Med.1987,166,1132）、肝脏（Imagawa et al.Transplantation 1990,50,219）、心脏（Bolling et al.Transplantation 1992,53,283）和皮肤（Stevens et al.Transplant.Proc.1990,22,1924）中的那些）、肺同种异体移植物排斥（Grossman et al.Immunol.Allergy Clin.N.Am.1989,9,153）（包括慢性肺同种异体移植物排斥（闭塞性支气管炎;LoCicero et al.J.Thorac.Cardiovasc.Surg.1990,99,1059））以及由于全髋关节置换导致的并发症（Cirinoet al.Life Sci.1996,59,86）。TNF也与传染性疾病相联系（综述：Beutler et al.Crit.Care Med.1993,21,5423;Degre.Biotherapy 1996,8,219），包括肺结核（Rook et al.Med.Malad.Infect.1996,26,904）、在消化性溃疡疾病期间的幽门螺杆菌感染（Beales et al.Gastroenterology 1997,112,136）、克氏锥虫感染导致的查加斯病（Chandrasekar et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.1996,223,365）、大肠杆菌感染导致的志贺样毒素作用（Harel et al.J.Clin.Invest.1992,56,40）、葡萄球菌感染导致的肠毒素A作用（Fischer et al.J.Immunol.1990,144,4663）、脑膜炎双球菌感染（Waage et al.Lancet1987,355;Ossege et al.J.Neurolog.Sci.1996,144,1）以及来自伯氏疏螺旋体的感染（Brandt et al.Infect.Immunol.1990,58,983）、梅毒螺旋体的感染（Chamberlin et al.Infect.Immunol.1 989,57,2872）、巨细胞病毒的感染（CMV;Geist et al.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.1997,16,31）、流感病毒的感染（Beutler et al.Clin.Res.1986,34,491a）、仙台病毒的感染（Goldfield et al.Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 1989,87,1490）、泰勒脑脊髓炎病毒的感染（Sierra et al.Immunology 1993,78,399）以及人免疫缺陷病毒的感染（HIV;Poli.Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 1990,87,782;Vyakaram et al.AIDS 1990,4,21;Badley et al.J.Exp.Med.1997,185,55）。

许多疾病被认为是由过量或不需要的基质破坏性金属蛋白酶（MMP）的活性介导或由MMP与金属蛋白酶（TIMP）的组织抑制剂之间的比例不平衡介导。这些疾病包括骨关节炎（Woessner et al.J.Biol.Chem.1984,259,3633）、类风湿性关节炎（Mullins et al.Biochim.Biophys.Acta 1983,695,117;Woolley et al.Arthritis Rheum.1977,20,1231;Gravallese et al.Arthritis Rheum.1991,34,1076）、脓毒性关节炎（Williams et al.Arthritis Rheum.1990,33,533）、肿瘤转移（Reich et al.Cancer Res.1988,48,3307;Matrisian et al.Proc.Nat'l.Acad.Sci.,USA 1986,83,9413）、牙周病（Overall et al.J.PeriodontalRes.1987,22,81）、角膜溃疡（Burns et al.Invest.Opthalmol.Vis.Sci.1989,30,1569）、蛋白尿（Baricos et al.Biochem.J.1988,254,609）、动脉粥样硬化斑块破裂导致的冠状动脉血栓形成（Henney et al.Proc.Nat'l.Acad.Sci.,USA 1991,88,8154）、动脉瘤主动脉疾病（Vine et al.Clin.Sci.1991,81,233）、节育（Woessner et al.Steroids 1989,54,491）、营养不良型大疱性表皮松解症（Kronberger et al.J.Invest.Dermatol.1982,79,208）、创伤性关节损伤后退行性软骨损失、由MMP活性介导的骨质减少、颞下颌关节疾病以及神经系统的脱髓鞘疾病（Chantryet al.J.Neurochem.1988,50,688）。

因为p38的抑制导致对TNF产生和MMP产生的抑制，因此人们相信对有丝分裂原活化的蛋白（MAP）激酶p38酶的抑制可提供治疗上文列出的疾病的方法，所述疾病包括骨质疏松症和炎性障碍例如类风湿性关节炎和慢性阻塞性肺病（COPD）（Badger,A.M.;Bradbeer,J.N.;Votta,B.;Lee,J.C.;Adams,J.L.;Griswold,D.E.J.Pharm.Exper.Ther.1996,279,1453）。

缺氧似乎是对恶性细胞中VEGF生成的重要刺激。p38 MAP激酶的激活是肿瘤细胞响应于缺氧而进行VEGF的诱导所需要的（Blaschke,F.et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.2002,296,890-896;Shemirani,B.et al.Oral Oncology 2002,38,251-257）。除其通过调节VEGF分泌而参与到血管生成中外，p38 MAP激酶还通过调节胶原酶活性和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物的表达而促进恶性细胞的侵袭和不同肿瘤类型的迁移（Laferriere,J.et al.J.Biol.Chem.2001,276,33762–33772;Westermarck,J.et al.Cancer Res.2000,60,7156–7162;Huang,S.et al.J.Biol. Chem.2000,275,12266–12272;Simon,C.et al.Exp.Cell Res.2001,271,344–355）。因此，对p38激酶的抑制也被期望通过干扰与血管生成和恶性细胞侵袭相关的信号传导级联而影响肿瘤生长。

某些脲（ureas）已经被描述为具有如丝氨酸-苏氨酸激酶和/或酪氨酸激酶抑制剂的活性。特别地，已经证明了某些脲在用于治疗癌症、血管生成疾病、炎性障碍的药物组合物中作为活性成分的用途。

对于癌症和血管生成，参见：

Smith et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，2775-2778.

Lowinger et al.，Clin.Cancer Res.2000，6(suppl.)，335.

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Riedl et al.，Book of Abstracts，92nd AACR Meeting，New Orleans，LA，USA，abstract 4956.

Khire et al.，Book of Abstracts，93rdAACR Meeting，San Francisco，CA，USA，abstract 4211.

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Carter et al.，Book of Abstracts，92ndAACR Meeting，New Orleans，LA，USA，abstract 4954.

Vincent et al.，Book of Abstracts，38th ASCO Meeting，Orlando，FL，USA，abstract 1900.

Hilger et al.，Book of Abstracts，38th ASCO Meeting，Orlando，FL，USA，abstract 1916.

Moore et al.，Book of Abstracts，38th ASCO Meeting，Orlando，FL，USA，abstract 1816.

Strumberg et al.，Book of Abstracts，38th ASCO Meeting，Orlando，FL，USA，abstract 121.

对于p38介导的疾病，包括炎性障碍，参见：

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Dumas et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，2047-2050.

Dumas et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，2051-2054.

Ranges et al.，Book of Abstracts，220th ACS National Meeting，Washington，DC，USA，MEDI 149.

Dumas et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.2002，12，1559-1562.

Regan et al.，J.Med.Chem.2002，45，2994-3008.

Pargellis et al.，Nature Struct.Biol.2002，9(4)，268-272.

Madwed J.B.，Book of Abstracts，Protein Kinases：Novel Target Identification andValidation for Therapeutic Development，San Diego，CA，USA，March 2002.

Pargellis C.et al.，Curr.Opin.Invest.Drugs 2003，4，566-571.

Branger J.et al.，J.Immunol.2002，168，4070-4077.

Branger J.et al.，Blood 2003，101，4446-4448.

ω-羧基芳基二苯脲公开于WO00/42012（2000年7月20日公开）；

WO00/41698（2000年7月20日公开）；以下公开的美国申请：

US2002-0165394-A1，2002年11月7日公开，

US2001-003447-A1，2001年10月25日公开，

US2001-0016659-A1，2001年8月23日公开，

US2002-013774-A1，2002年9月26日公开，

以及未决的美国申请：

09/758,547，申请日2001年1月12日，

09/889,227，申请日2001年7月12日，

09/993,647，申请日2001年11月27日，

10/042,203，申请日2002年1月11日和

10/071,248，申请日2002年2月11日，

发明内容

已经发现下文的式I的ω-羧基芳基二苯脲的合成代谢产物是raf激酶、VEGFR激酶、p38激酶和PDGFR激酶的有效抑制剂，其是用于治疗和预防骨质疏松症、炎性障碍、过度增殖性障碍和血管生成障碍（包括癌症）的所有目的分子靶点。

本发明提供，例如，

（i）新的所述式（I）化合物的合成代谢产物、其盐、其前药以及其代谢产物，

（ii）包含所述化合物的药用组合物，以及

（iii）所述合成代谢产物或组合物作为单独制剂或与细胞毒性治疗结合用于治疗由raf、VEGFR、PDGFR、flt-3和p38介导的疾病和病症的用途。

下文的所述式I化合物、其盐、其前药以及其代谢产物统称作“本发明化合物”。式I如下：

本发明化合物的合成代谢产物包括式I的被氧化的衍生物，其中一个或多个脲氮被羟基取代。本发明化合物的合成代谢产物还包括下述类似物，其中所述式I化合物的甲基酰胺基被羟基化，然后通过代谢降解去甲基化。本发明化合物的合成代谢产物进一步包括下述被氧化的衍生物，其中吡啶的氮原子是N-氧化物的形式（例如，带有羟基取代基），形成这些在本领域中被称作1-氧代-吡啶和1-羟基-吡啶的结构。

本文使用的化合物、盐等词的复数形式也被采用表示单一的化合物、盐等。

特别地，本发明涉及所述式I化合物的M2、M3、M4和M5代谢产物的合成形式，其结构显示如下：

上文提及的合成代谢产物与式I的母体化合物的关系在图1中说明。

特别优选所述式I化合物的M2和M5代谢产物。

代谢产物M-2

代谢产物M-5

作为本发明的一个实施方案，用肝微粒体和肝细胞对所述式I化合物的生物转化进行体外研究，且在一些物种的血浆中进行体内研究。在人类中，所述N-氧化物（M-2）和去甲基化N-氧化物（M-5）具有重要意义。合成形式的两种代谢产物以160 mg的剂量在3周服用/1周停用的I期研究中在患者中显示与瑞格非尼（regorafenib）（母体化合物）相似的稳态全身性暴露（曲线下面积[AUC]，mg*h/L）。

所述式I化合物的合成代谢产物（特别是所述M-2和M-5代谢产物）的药理活性也有意义。在体外，生物化学和细胞激酶磷酸化测定显示式I化合物的合成代谢产物是广谱激酶抑制剂。在体内的临床前模型中，所述代谢产物可有效抵抗肿瘤生长和进一步抑制肿瘤血管。所述合成代谢产物还显示在药效动力学的大鼠模型中对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的低血压的急性作用。

术语“合成的”是本领域公认的，且指的是通过体外化学或酶促合成而生产。

本文使用的术语“分离的”表示所引用的物质被从其天然环境中（例如细胞或组织）或从机体中移除。因此，分离的代谢产物可不含有一些或所有的细胞组分，即所述天然物质自然存在于其中的细胞组分（例如，细胞质或膜组分，例如微粒体）。

本文使用的术语“纯化的”指的是已在减少或消除无关物质（即污染物）的存在的条件下被分离的物质，包括从中获得该物质的前体物质。例如，纯化的代谢产物优选地基本上不含有其他的代谢产物或衍生所述纯化代谢产物的前体化合物。本文使用的术语“基本上不含有”可使用在对所述物质的分析测试的上下文中。优选地，基本上不含有污染物的纯化物质是至少50%纯；更优选地，至少90%纯，更优选地至少99%纯。纯度可通过色谱法、凝胶电泳法、HPLC、NMR或质谱分析、成分分析、生物测定以及其他本领域中已知的方法评价。

盐

所述式I的合成代谢产物的可药用盐也在本发明的范围内。术语“可药用盐”指的是本发明化合物的相对无毒的无机或有机酸加成盐。例如，参见S.M.Berge,et al.“Pharmaceutical Salts,”J.Pharm.Sci.1977,66,1-19。

所述本发明化合物的代表性盐包括常规的无毒盐，例如通过本领域众所周知的方法获自无机或有机酸的盐。例如，这类酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐（pectinate）、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐。

所述式I化合物的盐或前药可包含一个或多个不对称中心。不对称碳原子可以以（R）或（S）构型或（R，S）构型存在。在环上的取代基也可以以顺式或反式形式存在。欲使所有这类构型（包括对映异构体和非对映异构体）都包括在本发明的范围内。优选的同分异构体是那些具有产生更多所需要生物活性的构型的异构体。本发明所述化合物的分离的、纯的或部分纯化的同分异构体或外消旋混合物也包括在本发明的范围内。所述同分异构体的纯化以及所述异构体混合物的分离可通过本领域已知的标准技术完成。

在本发明实施方案中使用的所述合成代谢产物的制备中利用的具体方法记载在实施例4中。所述式（I）的合成代谢产物的盐形式在实施例中描述。

使用方法

本发明提供能调节一种或多种信号转导通路（涉及raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3激酶）的化合物。Raf是重要的信号传导分子，参与到许多关键细胞过程（包括细胞生长、细胞存活和侵袭）的调节中。其是Ras/raf/MEK/ERK通路的成员。该通路存在于大多数肿瘤细胞中。VEGFR、PDGFR和flt-3是跨膜受体分子，其当被合适的配体激发时触发所述Ras/raf/MEK/ERK细胞信号传导通路，引起细胞事件的级联。每个所述受体分子都具有酪氨酸激酶活性。

所述VEGFR受体被血管内皮生长因子（VEGF）激发，且在内皮细胞的发育和功能的调节中是重要的控制点。PDGF-β受体在许多细胞类型（包括间充质细胞）中调节细胞增殖和存活。Flt-3是FL配体的受体。其在结构上与c-kit相似，且调节多能造血细胞的生长，影响T细胞、B细胞和树突细胞的发育。

raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3的任意基因或异构体（包括野生型和突变体形式）可根据本发明来调节。Raf或raf-1激酶是丝氨酸/苏氨酸激酶家族，其包括至少三种家族成员：a-raf、b-raf和c-raf或raf-1。参见，例如Dhillon and Kolch,Arch.Biochem.Biophys.2002,404,3-9。c-raf和b-raf是本发明化合物的优选的靶点。激活的b-raf突变（例如V599E突变体)已在各种癌症（包括黑素瘤）中被识别，且本文所述的化合物可被利用以抑制其活性。

术语“调节”表示所述通路（或其组分）的功能活性与在所述化合物不存在时的正常活性相比被改变。这种作用包括任意质量或程度的调节，包括增加（increasing）、促效（agonizing）、增加（augmenting）、增强（enhancing）、促进、激发、减少（decreasing）、阻断、抑制、减少（reducing）、降低（diminishing）、拮抗等。

所述本发明化合物还可调节一种或多种下文的过程，包括但不限于例如细胞生长（包括，例如分化、细胞存活和/或扩散）、肿瘤细胞生长（包括，例如分化、细胞存活和/或扩散）、肿瘤消退、内皮细胞生长（包括，例如分化、细胞存活和/或扩散）、血管生成（血管生长）、淋巴管生成（淋巴管生长）和/或造血作用（例如，T细胞和B细胞发育、树突细胞发育等）。

不愿受限于任何理论和作用机制，已发现本发明化合物具有调节激酶活性的能力。但是，本发明所述方法不限于任何具体机制或所述化合物如何实现其治疗作用。术语“激酶活性”表示催化活性，其中来自三磷酸腺苷（ATP）的γ-磷酸盐被转移至在蛋白质底物中的氨基酸残基（例如，丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸）中。所述化合物可调节激酶活性，例如通过与ATP直接竞争激酶的ATP结合囊而抑制激酶活性，通过在影响其活性的酶结构中产生构象变化（例如，通过干扰生物活性的三维结构）而抑制激酶活性等。

激酶活性通常可使用常规的测定方法确定。激酶测定一般包括激酶、底物、缓冲液以及检测系统的组件。常规的激酶测定涉及蛋白激酶与肽底物和ATP（例如32P-ATP）反应以制备磷酸化的最终产物（例如，当使用肽底物时的磷蛋白）。所得到的最终产物可使用任意合适的方法检测。当利用放射性的ATP时，可使用亲和膜或凝胶电泳法将放射性标记的磷蛋白从未反应的γ-32P-ATP中分离出，然后在凝胶上使用放射自显影法来显影或用闪烁计数器检测。还可使用非放射性的方法。方法可利用抗体，所述抗体识别磷酸化底物，例如抗磷酸酪氨酸的抗体。例如，激酶可与底物在ATP和激酶缓冲液的存在下在使所述酶可有效磷酸化所述底物的条件下孵育。所述反应混合物可例如以电泳方法分离，然后所述基质的磷酸化可被测量，例如，通过使用抗磷酸酪氨酸的抗体的蛋白印迹法（Western blotting）测量。所述抗体可用可检测的标签（例如，酶（例如HRP、亲和素或生物素）、化学发光试剂等）标记。其他方法可利用酶联免疫吸附测定（ELISA）格式、亲和膜分离法、荧光偏振测定法、发光测定法等。

放射性格式的代替方案是时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）。该方法在标准激酶反应之后进行，其中底物例如生物素化的聚（GluTyr）在ATP的存在下被蛋白激酶磷酸化。然后，最终产物用铕螯合物磷酸特异性抗体（抗磷酸酪氨酸或抗磷酸丝氨酸/苏氨酸）以及链霉亲和素-APC检测出，所述链霉亲和素-APC结合所述生物素化的底物。这两个组分在结合时在空间上连接在一起，且从所述磷酸特异性抗体至所述受体（SA-APC）的能量转移产生同种格式的荧光读数。

本发明所述化合物可被用于治疗和/或预防由一种或多种涉及raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3激酶的细胞信号转导通路介导的任意疾病或病症。术语“治疗”以常规方式使用，例如目的为打击（combating）、减轻（alleviating）、减少（reducing）、缓解（relieving）、改善疾病或障碍的病症等的对受试者的治疗或照顾。所述化合物还可被描述为用于治疗和/或预防由信号传导分子介导的疾病和/或病症。术语“介导的”表示例如所述信号传导分子是在所述疾病和/或病症中异常或被干扰的通路的一部分。

可被治疗的疾病和病症包括上下文提及的任意疾病，以及：

Raf相关的疾病包括，例如细胞增殖障碍、癌症、肿瘤等；

VEGFR-2相关的疾病包括，例如癌症、肿瘤生长、炎性疾病、类风湿性关节炎、视网膜病变、牛皮癣、肾小球肾炎、哮喘、慢性支气管炎、动脉粥样硬化、移植排斥、涉及血管生成的病症等；

VEGFR-3相关的疾病包括，例如癌症、角膜疾病、发炎的角膜（例如Hamrah,Am.J.Path.2003,163,57-68）、角膜移植（Cursiefen et al.，Cornea 2003,22,273-81）、淋巴增生、涉及淋巴管生成的病症等；

PDGFR-β相关的疾病包括，例如特征为细胞增殖、细胞基质产生、细胞运动和/或细胞外基质产生的疾病或病症。具体的例子包括例如肿瘤、恶性肿瘤、癌症、转移、慢性粒细胞白血病、炎症、肾脏疾病、糖尿病性肾病、系膜增生性肾小球肾炎、纤维化病症、动脉粥样硬化、再狭窄、高血压相关的动脉硬化、静脉旁路移植动脉硬化、硬皮病、间质性肺疾病、滑膜障碍、关节炎、白血病、淋巴瘤等；

flt-3相关的疾病包括，例如免疫相关的障碍、血液细胞障碍、涉及造血细胞发育（例如T细胞、B细胞、树突细胞）的病症、癌症、贫血、HIV、获得性免疫缺陷综合征等。

p38相关的疾病包括炎性障碍、免疫调节障碍以及与异常的细胞因子（特别是TNF-α）的产生或异常的MMP活性相关联的其他障碍。这些障碍包括但不限于类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺病（COPD）、骨质疏松症、克罗恩氏病和牛皮癣。

另外，本发明的化合物可被用于治疗在美国专利No.6,316,479中公开的病症和障碍，例如肾小球硬化、间质性肾炎、间质性肺纤维化、动脉粥样硬化、伤口结疤和硬皮病。

本发明所述化合物还具有广泛的治疗活性以治疗或预防广泛的疾病进展，所述疾病例如炎性病症、冠状动脉再狭窄、肿瘤相关的血管生成、动脉粥样硬化、自身免疫性疾病、炎症、某些与肾小球系膜细胞的增殖相关的某些肾脏疾病以及与视网膜血管增生相关的眼部疾病、牛皮癣、肝硬化、糖尿病、动脉粥样硬化、再狭窄、血管移植物再狭窄、支架内再狭窄、血管生成、眼睛疾病、肺纤维化、闭塞性细支气管炎、肾小球肾炎、类风湿性关节炎。

本发明还提供用于在人和/或其他哺乳动物中治疗、预防、调节等一种或多种以下的病症：视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变以及年龄相关的黄斑变性；类风湿性关节炎、牛皮癣或与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病，包括大疱性类天疱疮、多形性红斑或疱疹样皮炎、风湿热、骨吸收、绝经后骨质疏松症、脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、感染性休克、内毒素休克、中毒性休克综合征、全身炎性反应综合征、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、赫尔斯海默尔反应、哮喘、成人呼吸窘迫综合症、急性肺纤维化疾病、肺结节病、过敏性呼吸系统疾病、矽肺病、煤工尘肺、肺泡损伤、肝衰竭、急性炎症期间的肝脏疾病、严重酒精性肝炎、疟疾（恶性疟原虫疟疾和脑型疟疾）、非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）、充血性心力衰竭、心脏病后损伤、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性脑炎、脑损伤、多发性硬化（在多发性硬化中的脱髓鞘作用和少突胶质细胞损失）、晚期癌症、淋巴恶性肿瘤、胰腺炎、在感染、炎症和癌症中的伤口愈合不良、骨髓增生异常综合征、系统性红斑狼疮、胆汁性肝硬化、肠坏死、辐射损伤、在给予单克隆抗体后的毒性、宿主抗移植物反应（缺血再灌注损伤以及肾脏、肝脏、心脏和皮肤的同种异体移植物排斥）、肺同种异体移植物排斥（闭塞性支气管炎）、或由于全髋关节置换导致的并发症，以及传染性疾病，选自包括肺结核、在消化性溃疡疾病期间的幽门螺杆菌感染、克氏锥虫感染导致的查加斯病、大肠杆菌感染导致的志贺样毒素作用、葡萄球菌感染导致的肠毒素A作用、脑膜炎双球菌感染以及来自伯氏疏螺旋体的感染、梅毒螺旋体的感染、巨细胞病毒的感染、流感病毒的感染、泰勒脑脊髓炎病毒的感染以及人免疫缺损病毒（HIV）的感染、乳头状瘤、成胶质细胞瘤(blastoglioma)、卡波西氏肉瘤、黑素瘤、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、星形细胞瘤、头癌、颈癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金氏病、伯基特氏病(Burkitt’s disease)、关节炎、类风湿性关节炎、糖尿病视网膜病变、血管生成、再狭窄、支架内再狭窄、血管移植物再狭窄、肺纤维化、肝硬化、动脉粥样硬化、肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、栓塞性微血管病变综合症(thrombicmicoangiopathy syndrome)、移植排斥、牛皮癣、糖尿病、伤口愈合、炎症和神经退行性疾病、超免疫失调、血管瘤、心肌血管生成、冠状动脉和脑侧支血管化、局部缺血、角膜疾病、潮红、新生血管性青光眼、早产儿视网膜病变、黄斑变性、伤口愈合、溃疡螺杆菌相关的疾病、骨折、子宫内膜异位症、糖尿病病症、猫抓热、甲状腺增生、烧伤后哮喘或水肿、创伤、慢性肺疾病、中风、息肉、囊肿、滑膜炎、慢性和过敏性炎症、卵巢过度刺激综合征、肺和脑水肿、瘢痕疙瘩、纤维化、肝硬化、腕管综合征、成人呼吸窘迫综合征、腹水、眼部病症、心血管病症、Crow-Fukase（POEMS）病、克罗恩氏病、肾小球性肾炎、骨关节炎、多发性硬化症、移植排斥、莱姆病、脓毒症、脑视网膜血管瘤病(von Hippel Lindau disease)、类天疱疮、畸形性骨炎、多囊性肾病、结节病、甲状腺炎、高粘滞综合征、奥斯勒－韦伯－朗迪(Osler-Weber-Rendu disease)、慢性闭塞性肺病、辐射、缺氧、先兆子痫、月经过多、子宫内膜异位症、单纯疱疹病毒的感染、缺血性视网膜病变、角膜血管生成、带状疱疹、人免疫缺陷病毒、副痘病毒、原生动物、弓形体病、肿瘤相关渗液和水肿。

本发明所述化合物可具有多于一种的所提及的活性，且因此可以靶向许多信号转导通路。因此，这些化合物可实现治疗和预防效果，所述效果通常仅当使用不同化合物的组合时获得。例如，使用单一的化合物抑制新血管形成（例如，与VEGFR-2和VEGFR-3功能相关的）（例如，血液和/或淋巴）和细胞增殖（例如，与raf和PDGFR-β功能相关的）的能力在治疗癌症以及可由新血管形成促进的其他细胞增殖障碍方面尤其有益。因此本发明特别涉及至少具有抗细胞增殖和抗血管生成（即抑制血管生成）活性的化合物。可从抑制血管生长和细胞增殖中受益的任意障碍或病症均可根据本发明治疗。使用单一的化合物也是有益的，因为其活性范围可被更精确地限定。

如上文显示的，本发明涉及治疗和/或预防与raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3相关的疾病和病症的方法；和/或调节一个或多个与raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3相关的通路、多肽、基因、疾病、病症等的方法。这些方法通常涉及给药有效量的本发明化合物，其中的有效量是可用于实现所需要的结果的量。化合物可以以任意有效的形式通过有效的途径给药，如在下文更详细讨论的。

方法包括调节肿瘤细胞增殖，包括抑制细胞增殖。后者表示肿瘤细胞的生长和/或分化减少（reduced）、减少（decreased）、降低（diminished）、减慢等。术语“增殖”包括与细胞生长和分裂相关的任意过程且包括分化和凋亡。如上文讨论的，raf激酶在涉及细胞增殖、分化和凋亡的细胞质信号传导级联的活化中发挥关键作用。例如，研究发现通过反义寡核苷酸抑制c-raf可阻断细胞增殖（参见上文）。任意的抑制量均被认为有疗效。

包括在本发明方法中的是使用上文描述的化合物（式I的化合物）的合成代谢产物（包括其盐、前药和组合物）治疗哺乳动物过度增殖障碍的方法，包括将对治疗所述障碍有效的量的本发明化合物的合成代谢产物、其可药用盐以及组合物给药至哺乳动物（包括需要其的人）。过度增殖障碍包括但不限于实体瘤，例如乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器癌、消化道癌、尿路癌、眼球癌、肝脏癌、皮肤癌、头癌和颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌和其远处转移。这些障碍还包括淋巴瘤、肉瘤以及白血病。

可治疗任意肿瘤或癌症，包括但不限于，在raf、ras和/或flt-3中及其作为一部分的信号传导通路的任何下游或上游成员中具有一个或多个突变的癌症。如前文描述的，可用本发明化合物治疗癌症而不考虑作为其原因的机制。可治疗任意器官的癌症，包括但不限于，例如结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肝癌、肾癌、肺癌、睾丸癌、皮肤癌、胰腺癌、胃癌、结肠直肠癌、肾细胞癌、肝细胞癌、黑素瘤等。

乳腺癌的实例包括但不限于浸润性导管癌、浸润性小叶癌、原位管癌以及原位小叶癌。

呼吸道癌的实例包括但不限于小细胞和非小细胞肺癌以及支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。

脑癌的实例包括但不限于脑干和下丘脑神经胶质瘤（hypophtalmic glioma）、小脑和大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤，以及神经外胚层和松果体肿瘤。

男性生殖器官肿瘤包括但不限于前列腺癌和睾丸癌。女性生殖器官肿瘤包括但不限于子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌以及子宫肉瘤。

消化道肿瘤包括但不限于肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌和唾液腺癌。

尿道肿瘤包括但不限于膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌和尿道癌。

眼球癌包括但不限于眼内黑素瘤和成视网膜细胞瘤。

肝癌的实例包括但不限于肝细胞癌（有或没有纤维板层变种的肝细胞癌）、胆管癌（肝内胆管癌）以及混合的肝细胞胆管癌。

皮肤癌包括但不限于鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、恶性黑素瘤、默克尔细胞皮肤癌以及非黑素瘤皮肤癌。

头颈癌包括但不限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌和/或口咽癌、唇癌和口腔癌。

淋巴瘤包括但不限于AIDS-相关的淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤的T细胞淋巴瘤、霍奇金氏病以及中枢神经系统的淋巴瘤。

肉瘤包括但不限于软组织的肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤、横纹肌肉瘤。

白血病包括但不限于急性髓细胞性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性粒细胞性白血病、毛细胞白血病。

除抑制肿瘤细胞增殖外，本发明的化合物还可引起肿瘤消退，例如肿瘤尺寸的减小，或在机体内癌的范围减小。

本发明还涉及在包括细胞的系统中调节血管生成和/或淋巴管生成的方法，包括将有效量的本文所述化合物给药至所述系统。包括细胞的系统可以是体内系统，例如在患者、分离的器官、组织或细胞中的肿瘤，体外系统（CAM、BCE等），动物模型（例如体内、皮下、癌症模型）、需要治疗的宿主（例如，患有具有血管生成和/或淋巴管生成组分的疾病（例如癌症）的患者）等。

血管生成的不恰当和异位表达可对生物有害。许多病理学病症与无关血管的生长相关。这些病症包括，例如糖尿病视网膜病变、新生血管性青光眼、牛皮癣、晶状体后纤维素增生、血管纤维瘤、炎症等。另外，与癌症和肿瘤组织相关的血液供给增加鼓励生长、导致快速的肿瘤扩大和转移。另外，在肿瘤中新的血管和淋巴管的生长为反叛细胞（renegade cells）提供了逃脱路径，鼓励转移和癌症的最终扩散。

可用于测量血管生成和/或或淋巴管生成以及其抑制的系统包括，例如肿瘤外植体的新血管化（例如美国专利No.5,192,744;6,024,688）、鸡绒毛膜尿囊的膜（CAM）测定（例如Taylor and Folkman,Nature1982,297,307-312;Eliceiri et al.,J.Cell Biol.1998,140,1255-1263）、牛毛细血管内皮（BCE）细胞测定（例如美国专利No.6,024,688;Polverini,P.J.et al.,Methods Enzymol.1991,198,440-450）、迁移测定以及HUVEC（人类脐带血管内皮细胞）生长抑制测定（例如美国专利No.6,060,449）以及使用兔耳模型（例如Szuba et al.,FASEB J.2002,16(14),1985-7）。

血管生成的调节可通过任意其他的方法确定。例如，组织血管分布的程度通常是通过评估给定样品中存在的血管的数量和密度确定。例如，微脉管密度（MVD）可通过计算在高倍显微镜视野中内皮簇的数量估算，或通过检测微血管内皮的特定标记或者其他生长中或已建立的血管的标记（例如CD31，也称为血小板内皮细胞粘附分子或PECAM））估算。CD31抗体可应用在常规的免疫组化方法中以免疫染色组织切片，例如美国专利No.6,017,949;Dellas et al.，Gyn.Oncol.1997,67,27-33；以及其他文献中所描述。血管生成的其他标记包括例如Vezf1（例如Xiang et al.,Dev.Bio.1999,206,123-141）、血管生成素、Tie-1和Tie-2（例如Sato et al.,Nature 1995,376,70-74）。

另外，本发明涉及筛选患者以确定其对本发明化合物的敏感性的方法。例如，本发明涉及确定病症是否可用本文公开的化合物调节的方法，包括测量在包括细胞或细胞提取物的样品中raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的表达或活性，其中所述样品获自具有所述病症的细胞或受试者。当测定的结果表明所提及的基因（和/或其编码的多肽）的一种或多种与正常状态不同时，这确定所述病症可用本发明化合物治疗，即当所述的表达或活性在所述病症中与正常的对照相比增加时，则所述障碍或病症可通过所述化合物调节。所述方法可进一步包括将样品中的表达与正常对照比较，或与从正常或未受影响的组织中获得的样品中的表达比较的步骤。比较可针对一个电子形式的标准（例如针对数据库）等手工完成。正常对照可以是提供用于测定的标准样品，其可从同一患者的邻近但未受影响的组织获得，或者其可以是预先确定的值等。基因表达、蛋白质表达（例如细胞中的丰度）、蛋白质活性（例如激酶活性）等可被确定。

例如，可测定来自癌症患者的活组织检查样本中raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的存在情况、数量和/或活性。raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3中一个或多个的表达或活性增加可表明所述癌症可用本发明化合物靶向治疗。例如，如在下文的实施例中描述的，raf的活性可通过其启动级联的能力来监控，所述级联导致ERK磷酸化（即raf/MEK/ERK），获得磷酸化-ERK。在癌症样本中增加的磷酸化-ERK水平表明其raf活性的提高，表明本发明化合物治疗此癌症的用途。

测量表达包括确定或检测存在于细胞中或由其脱落的所述多肽的量，以及测量使其形成的mRNA，其中存在的mRNA的量被认为反映由细胞制造的多肽的量。另外，可分析raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的基因以确定是否存在导致异常的表达或多肽活性的基因缺陷。

多肽检测可通过任意可用的方法进行，例如，通过蛋白质印迹法、ELISA、斑点印迹法、免疫沉淀、放射免疫法（RIA）、免疫组织化学法等。例如，可制备组织切片并用特异性抗体（间接或直接的）标记，且用显微镜观察。可不经观察而定量多肽的量，例如，通过制备目的样品的裂解物，然后用ELISA或蛋白质印迹法确定单位组织量的多肽量。可使用抗体和其他特异性结合试剂。没有限定检测是怎样进行的。

可利用允许定量样品中的靶核酸（例如raf、VEGFR、PDGFR、p38和/或flt-3的基因、mRNA等）和/或检测样品中的靶核酸存在/不存在的测定法。测定可在单一细胞水平下进行，或在包括许多细胞的样品中进行，其中所述测定在所述样品中存在的细胞和组织的完整集合上“平均”表达。可使用任意合适的测定格式，包括但不限于例如DNA印迹分析、RNA印迹分析、聚合酶链式反应（“PCR”）（例如Saiki et al.,Science 1988,241,53;美国专利No.4,683,195、4,683,202和6,040,166;PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications,Innis et al.,eds.,Academic Press,New York,1990）、逆转录聚合酶链式反应（“RT-PCR”）、锚式PCR、cDNA末端快速扩增（“RACE”）（例如Schaefer in Gene Cloning and Analysis:Current Innovations,第99-115页,1997）、连接酶链式反应（“LCR”）（EP 320 308）、单边PCR（Ohara et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1989,86,5673-5677）、索引方法（例如美国专利No.5,508,169）、原位杂交、差异显示（例如Liang et al.,Nucl.Acid.Res.1993,21,3269 3275;美国专利No.5,262,311、5,599,672和5,965,409;WO97/18454;Prashar and Weissman,Proc.Natl.Acad.Sci.,93:659-663,以及美国专利No.6,010,850和5,712,126;Welsh et al.,Nucleic Acid Res.,20:4965-4970,1992,以及美国专利No.5,487,985）以及其他的RNA指纹技术、基于核酸序列的扩增（“NASBA”）以及其他基于转录的扩增系统（例如美国专利No.5,409,818和5,554,527;WO 88/10315）、多核苷酸阵列（例如美国专利No.5,143,854、5,424,186、5,700,637、5,874,219和6,054,270;PCTWO 92/10092;PCT WO 90/15070）、Qbeta复制酶（PCT/US87/00880）、链置换扩增（“SDA”）、修复链式反应（“RCR”）、核酸酶保护测定、基于减除的方法、快速扫描等。另外有用的方法包括但不限于例如基于模板的扩增方法、竞争PCR（例如美国专利No.5,747,251）、基于氧化还原反应的测定（例如美国专利No.5,871,918）、基于Taqman的测定（例如Holland et al.,Proc.Natl.Acad,Sci.1991,88,7276-7280;美国专利No.5,210,015和5,994,063）、基于实时荧光的监测（例如美国专利No.5,928,907）、分子能量转移标记物（例如美国专利No.5,348,853、5,532,129、5,565,322、6,030,787和6,117,635;Tyagi andKramer,Nature Biotech.,14:303-309,1996）。可使用适于对基因或蛋白质表达的单细胞分析的任意方法，包括原位杂交、免疫细胞化学、MACS、FACS、流式细胞术等。对于单细胞测定，表达产物可使用抗体、PCR或其他类型的核酸扩增来测定（例如Brady et al.,MethodsMol.& Cell.Biol.1990,2,17-25;Eberwine et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1992,89,3010-3014;U.S.Pat.No.5,723,290）。这些以及其他的方法可以常规方式进行，例如在所提及的出版物中描述的。raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的活性可以常规方法测定，例如在下文的实施例中描述的，或使用用于激酶活性的标准测定法。

本发明还提供评价本发明化合物在治疗障碍方面的功效的方法，包括以任意有效顺序的一个或多个下文的步骤，例如给药一定量的化合物，测量raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的表达或活性（参见上文），确定所述化合物对所述表达或活性的效果。例如，活组织检查样本可取自已用本发明化合物治疗的患者，然后对所提及的信号传导分子的存在和/或活性进行测定。相似地，如上文描述的，磷酸化-ERK的水平在癌组织中降低（例如，与正常组织或治疗前相比）表明所述化合物发挥体内功效且有治疗效果。所述方法可被用于确定合适的剂量和给药方案，例如给药多少化合物以及给药的频率是什么。通过监控其对所述组织中信号传导分子的效果，临床医生可确定合适的治疗方案以及其是否实现需要的效果，例如调节或抑制所述信号转导通路。

本发明化合物还可用作标记以确定raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3在包括生物材料的样品中存在和数量。这包括以任意有效顺序的一个或多个下文的步骤：（i）将所述包括生物材料的样品与本发明化合物接触，和（ii）确定所述化合物是否与所述材料结合。所述化合物可被标记，或其可用作经标记的化合物（例如经标记的ATP）的竞争物。

本发明还提供用于哺乳动物中疾病和病症的治疗、预防、调节等的方法，包括给药本发明化合物以及所述信号转导通路的另一种调节剂，所述信号转导通路包括但不限raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR、p38和/或flt-3。这些可存在于相同的组合物中或在分别的制剂或剂量单位中。给药可以是相同或不同的途径，且可以是同时的或惯序的。

下文的出版物涉及VEGFR-3的调节，且其关于由VEGFR-3介导的疾病状态以及确定所述活性的测定的说明纳入本文。

WO95/33772       Alitalo，et.al.

WO95/33050       Charnock-Jones，et.al..

WO96/39421       Hu，et.al.

WO98/33917       Alitalo，et.al.

WO02/057299      Alitalo，et.al.

WO02/060950      Alitalo，et.al.

WO02/081520      Boesen，et.al.

下文的出版物涉及VEGFR-2的调节，且其关于由VEGFR-2介导的疾病状态和确定所述活性的测定的说明纳入本文。

EP0882799        Hanai，et.al.

EP1167384        Ferraram，et，al.

EP1086705        Sato，et.al.

EP11300032       Tesar，et.al.

EP1166798        Haberey，et.al.

EP1166799        Haberey，et.al.

EP1170017        Maini，et.al.

EP1203827        Smith

WO02/083850      Rosen，et.al.

下文的出版物涉及flt-3的调节，且其关于flt-3介导的疾病状态和确定所述活性的测定的说明纳入本文。

2002/0034517     Brasel，et.al.

2002/0107365     Lyman，et.al.

2002/0111475     Graddis，et.al.

EP0627487        Beckermann，et.al.

WO9846750        Bauer，et.al.

WO9818923        McWherter，et.al.

WO9428391        Beckermann，et al.

WO9426891        Birnbaum，et.al.

下文的出版物涉及PDGF/PDGFR的调节，且其关于PDGFR-β介导的疾病状态和确定所述活性的测定的说明纳入本文。

5,094,941        Hart，et.al.

5,371,205        Kelly，et.al.

5,418,135        Pang

5,444,151        Vassbotn，et.al.

5,468,468        LaRochelle，et.al.

5,567,584        Sledziewski，et.al.

5,618,678        Kelly，et.al.

5,620,687        Hart，et.al.

5,648,076        Ross，et.al.

5,668,264        Janjic，et.al.

5,686,572        Wolf，et.al.

5,817,310        Ramakrishnan，et.al.

5,833,986        LaRochelle，et.al.

5,863,739        LaRochelle，et.al.

5,872,218        Wolf，et.al.

5,882,644        Chang，et.al.

5,891,652        Wolf，et.al.

5,976,534        Hart，et.al.

5,990,141        Hirth，et.al.

6,022,854        Shuman

6,043,211        Williams，et.al.

6,110,737        Escobedo，et.al.

6,207,816B1      Gold，et.al.

6,228,600B1      Matsui，et.al.

6,229,002B1      Janjic，et.al.

6,316,603B1      McTigue，et.al.

6,372,438B1      Williams，et.al.

6,403,769B1      La Rochelle，et.al.

6,440,445B1      Nowak，et.al.

6,475,782B1      Escobedo，et.al.

WO02/083849    Rosen，et.al.

WO02/083704    Rosen，et.al.

WO02/081520    Boesen，et.al.

WO02/079498    Thomas，et.al.

WO02/070008    Rockwell，et.al.

WO09959636     Sato，et.al.

WO09946364     Cao，et.al.

WO09940118     Hanai，et.al.

WO9931238      Yabana，et.al.

WO9929861      Klagsbrun，et.al.

WO9858053      Kendall，et.al.

WO9851344      Maini，et.al.

WO9833917      Alitalo，et.al.

WO9831794      Matsumoto，et.al.

WO9816551      Ferrara，et.al.

WO9813071      Kendall，et al.

WO9811223      Martiny-Baron，et.al.

WO9744453      Chen，et.al.

WO9723510      Plouet，et.al.

WO9715662      Stinchcomb，et.al.

WO9708313      Ferrara，et.al.

WO9639515      Cao，et.al.

WO9623065      Smith，et.al.

WO9606641      Fleurbaaij，et.al.

WO9524473      Cao，et.al.

WO9822316      Kyowa

WO9521868      Rockwell，et.al.

WO02/060489    Xia，et.al.

PDGFR-β

EP0869177      Matsui，et.al.

WO09010013     Matsui，et.al.

WO9737029      Matsui，et.al.

PDGFR-α

EP1000617    Lammers，et.al.

EP0869177    Matsui，et.al.

EP0811685    Escobedo，et.al.

以本发明所述化合物为基础的药用组合物。

本发明还涉及包含本发明化合物以及其可药用盐的药用组合物。这些组合物可被用于通过给药至需要其的患者来实现需要的药理效果。对于本发明的目的，患者是需要治疗特定病症或疾病的哺乳动物，包括人。因此，本发明包括含有可药用载体以及药用有效量的本发明化合物或其盐的药用组合物。术语“可药用载体”表示任何这样的载体，即所述载体在与所述活性成分的有效活性相符的浓度下对患者相对无毒且无害，以使所述载体引起的任何副作用均不损害所述活性成分的有益效果。化合物的药用有效量是对待治疗的特定病症产生结果或发挥影响的量。本发明所述化合物可与本领域中公知的可药用载体一起使用任意有效的常规剂量单位形式给药，所述常规剂量单位形式包括速释、缓释和定时释放制品，通过口服、肠胃外、局部、鼻、眼（ophthalmically）  、眼（optically）、舌下、直肠、阴道等给药。

对于口服给药，所述化合物可被配制成固体或液体制品，例如胶囊剂、丸剂、片剂、糖锭、锭剂、熔剂、粉末剂、溶液剂、悬液剂或乳剂，且可根据本领域已知的用于制造药用组合物的方法制备。所述固体单位剂型可以是胶囊，所述胶囊可以是包含例如表面活性剂、润滑剂以及惰性填料（例如乳糖、蔗糖、钙磷酸盐和玉米淀粉）的普通硬壳或软壳明胶类型的胶囊。

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可用以下物质配制成片剂：常规的片剂基质（例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉）与以下物质的组合：粘合剂（例如阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶）、旨在帮助给药后的片剂崩解和溶出的崩解剂（例如马铃薯淀粉、海藻酸、玉米淀粉、瓜尔豆胶、黄蓍胶、阿拉伯树胶）、旨在改进片剂颗粒的流动且防止片剂材料与片剂模具和冲压器表面粘附的润滑剂（例如滑石、硬脂酸或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌）、染料、着色剂以及芳香剂（例如薄荷芳香剂、冬青油芳香剂或樱桃芳香剂），其旨在增加所述片剂的美学特征且使其更被患者接受。用于口服液体剂型中的合适的赋形剂包括磷酸二钙和稀释剂（例如水和醇类，例如乙醇、苯甲醇和聚乙烯醇），加入或不加入可药用表面活性剂、悬浮剂或乳化剂均可。各种其他材料可以包衣形式存在或用于修饰所述剂量单位的物理形式。例如可用虫胶、糖或两者包衣片剂、丸剂或胶囊剂。

分散的粉末和颗粒适于制备水性悬液。其提供所述活性成分以及分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂的实例为已经在上文提及的那些。还可存在另外的赋形剂，例如上文描述的那些甜味剂、芳香剂和着色剂。

本发明所述药用组合物还可以是水包油乳剂的形式。所述油相可以是植物油例如液体石蜡或植物油的混合物。合适的乳化剂可以是（1）天然存在的树胶例如阿拉伯树胶和黄蓍胶，（2）天然存在的磷脂例如大豆和卵磷脂，（3）来源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如失水山梨糖醇单油酸酯，（4）所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。所述乳剂还可包含甜味剂和芳香剂。

油悬浮剂可通过将所述活性成分悬浮在植物油（例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油）中，或在矿物油（例如液体石蜡）中制备。所述油悬浮剂可包含增稠剂例如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。所述悬浮剂还可包含一种或多种防腐剂（例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯）、一种或多种着色剂、一种或多种芳香剂，以及一种或多种甜味剂例如蔗糖或糖精。

糖浆和酏剂（elixir）可用甜味剂（例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖）配制。所述制剂还可包含缓和剂和防腐剂（例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯），以及芳香剂和着色剂。

本发明所述化合物还可肠胃外给予，即皮下、静脉、眼内、滑膜内、肌内或腹膜内给药，形式为所述化合物溶于生理学上可接受的稀释剂中的可注射剂型，含有无菌液体或液体混合物形式的药用载体（例如水、盐水、葡萄糖水溶液和相关的糖溶液）、醇（例如乙醇、异丙醇或十六烷基醇）、二醇（例如丙二醇或聚乙二醇）、甘油缩酮类（例如2,2-二甲基-1,1-二氧戊环-4-甲醇）、醚类（例如聚乙二醇400）、油、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪酸甘油酯或乙酰化的脂肪酸甘油酯，加入或不加入可药用表面活性剂（例如皂或洗涤剂）、悬浮剂（例如果胶、卡波姆、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素）或乳化剂，以及其他药用辅剂均可。

可用在本发明肠胃外制剂中的油的实例为石油、动物油、植物油或合成来源油，例如花生油、大豆油、芝麻油、棉花籽油、玉米油、橄榄油、凡士林油和矿物油。合适的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、异硬脂酸和肉豆蔻酸。合适的脂肪酸酯为例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。合适的皂包括脂肪酸碱金属盐、脂肪酸铵盐以及脂肪酸三乙醇胺盐；且合适的洗涤剂包括阳离子洗涤剂，例如二甲基二烷基卤化铵、烷基卤化吡啶鎓以及烷基胺乙酸盐；阴离子洗涤剂，例如烷基、芳基和烯烃基磺酸盐，烷基、烯烃、醚以及单甘油酯硫酸盐和磺基丁二酸盐；非离子洗涤剂，例如氧化脂肪胺、脂肪酸烷醇酰胺、聚（氧乙烯-氧丙烯）、环氧乙烷共聚物或环氧丙烷共聚物；以及两性洗涤剂，例如烷基-β-氨基丙酸盐、2-烷基咪唑啉季铵盐，以及混合物。

本发明所述肠胃外组合物在溶液中通常包含从约0.5重量%至约25重量%的活性成分。也可有利地使用防腐剂和缓冲液。为了最小化或消除在注射部位处的刺激，所述组合物可包含亲水亲油平衡（HLB）为从约12至约17的非离子型表面活性剂。在所述制剂中表面活性剂的量的范围为从约5重量%至约15重量%。所述表面活性剂可以是具有上述HLB的单一组分或可以是具有需要的HLB的两种或多种组分的混合物。

在肠胃外制剂中使用的表面活性剂的实例为聚乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯类，例如失水山梨糖醇单油酸酯以及环氧乙烷和疏水性基质（由环氧丙烷和丙二醇缩合形成）的高分子量加合物。

所述药用组合物可以是无菌可注射水性悬浮液的形式。所述悬浮液可根据已知的方法使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制，所述悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，环氧烷与脂肪酸的缩合产物（例如聚氧乙烯硬脂酸酯）、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物（例如十七乙烯氧基十六烷醇）、环氧乙烷与来源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物（例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯）、或环氧乙烷与来源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物（例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯）。

所述无菌可注射制品还可以是溶于非毒性肠胃外可用稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可被应用的稀释剂和溶剂为例如水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和等渗葡萄糖溶液。另外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。对此目的，可应用任意温和的不挥发油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。另外，脂肪酸例如油酸可用在可注射制剂中。

本发明组合物还可以用于直肠给药的栓剂的形式给药。这些组合物可通过将所述药物与合适的非刺激性赋形剂混合配制，所述赋形剂在常温下是固体但是在直肠温度下是液体，且将因此在直肠中熔化以释放药物。这类材料为例如可可脂和聚乙二醇。

应用在本发明方法中的另一个制剂应用透皮递送装置（“贴剂”）。所述透皮贴剂可被用于以受控量提供本发明所述化合物的连续或不连续的输注。透皮贴剂的结构以及用于递送药剂的用途在本领域中众所周知（参见，例如美国专利No.5,023,252，1991年6月11日授权,以引用的方式纳入本说明书）。所述贴剂可被构建成用于连续的、脉冲的或根据要求递送药用制剂。

用于肠胃外给药的控释制剂包括本领域中已知的脂质体、聚合物微球和聚合物凝胶制剂。

可能需要或必须经由机械递送装置将所述药用组合物引入患者中。所述机械递送装置的结构以及用于递送药用制剂的用途在本领域中众所周知。直接的技术，例如用于将药物直接给药至脑的直接技术通常涉及将药物递送导管放置于患者的脑室系统以绕过血脑屏障。一个用于将试剂运输至机体的特定解剖区的这类可植入递送系统记载于美国专利No.5,011,472（1991年4月30日授权）。

本发明所述组合物必须或根据需要还可包含其他常规的可药用配合成分，通常称为载体或稀释剂。可利用用于制备合适剂型形式的所述组合物的常规步骤。所述成分和步骤包括那些在下文的参考文献中描述的，其中每一篇都以引用的方式纳入本说明书：Powell,M.F.et al,“Compendium of Excipients for Parenteral Formulations”PDAJournal of Pharmaceutical Science & Technology 1998,52(5),238-311；Strickley,R.G“Parenteral Formulations of Small MoleculeTherapeutics Marketed in the United States(1999)-Part-1”PDAJournal of Pharmaceutical Science & Technology 1999,53(6),324-349；和Nema,S.et al,“Excipients and Their Use in Injectable Products”PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997,51(4),166-171。

适合用于配制所述组合物以用于其预期的给药途径的通常使用的药用成分包括：

酸化剂（实例包括但不限于乙酸、柠檬酸、富马酸、盐酸、硝酸）；

碱化剂（实例包括但不限于氨溶液、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺（triethanolamine）、三乙醇胺（trolamine））；

吸附剂（实例包括但不限于粉末状纤维素和活性炭）；

气溶胶喷射剂（实例包括但不限于二氧化碳、CCl2F2、F2ClC-CClF2和CClF3）；

空气排代剂（实例包括但不限于氮气和氩气）；

抗真菌防腐剂（实例包括但不限于苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠）；

抗微生物防腐剂（实例包括但不限于苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、氯化十六烷基吡啶鎓、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞和硫柳汞）；

抗氧化剂（实例包括但不限于抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚、丁羟甲苯、次磷酸、单硫代甘油、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、甲醛化次硫酸钠、焦亚硫酸钠）；

粘合材料（实例包括但不限于嵌段聚合物、天然和合成橡胶、聚丙烯酸酯、聚氨酯、硅酮、聚硅氧烷和苯乙烯-丁二烯共聚物）；

缓冲剂（实例包括但不限于偏磷酸钾、磷酸二钾、乙酸钠、无水柠檬酸钠和柠檬酸钠二水合物）；

载体（实例包括但不限于阿拉伯胶糖浆、芳香糖浆、芳香酏剂、樱桃糖浆、可可糖浆、橙皮糖浆、糖浆、玉米油、矿物油、花生油、芝麻油、抑菌氯化钠注射液和抑菌注射用水）；

螯合剂（实例包括但不限于依地酸二钠和乙二胺四乙酸）；

着色剂（实例包括但不限于FD&C Red No.3、FD&C Red No.20、FD&C Yellow No.6、FD&C Blue NO.2、D&C Green No.5、D&COrange No.5、D&C Red No.8、焦糖和氧化铁红）；

澄清剂（实例包括但不限于膨润土）；

乳化剂（实例包括但不限于阿拉伯树胶、西土马哥、十六烷醇、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、失水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯50单硬脂酸酯）；

包囊剂（实例包括但不限于明胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素）；

芳香剂（实例包括但不限于茴香油、肉桂油、可可粉、薄荷醇、橙油、薄荷油和香兰素）；

湿润剂（实例包括但不限于甘油、丙二醇、山梨糖醇）；

研磨剂（实例包括但不限于矿物油和甘油）；

油（实例包括但不限于花生油、矿物油、橄榄油、花生油、芝麻油和植物油）；

软膏基质（实例包括但不限于羊毛脂、亲水软膏、聚乙二醇软膏、凡士林、亲水凡士林、白色软膏、黄色软膏和玫瑰水软膏）；

渗透增强剂（经皮递送）（实例包括但不限于单羟基或聚羟基醇、单或多元醇、饱和或不饱和脂肪醇、饱和或不饱和脂肪酯、饱和或不饱和二羧酸、精油、磷脂酰基衍生物、脑磷脂、萜烯醚、酰胺、醚、酮和脲）；

塑化剂（实例包括但不限于邻苯二甲酸二乙酯和甘油）；

溶剂（实例包括但不限于乙醇、玉米油、棉籽油、甘油、异丙醇、矿物油、油酸、花生油、纯净水、注射用水、无菌注射用水和无菌冲洗用水）；

硬化剂（实例包括但不限于十六烷醇、十六烷基酯蜡、微晶蜡、石蜡、硬脂醇、白蜡和黄蜡）；

栓剂基质（实例包括但不限于可可脂和聚乙二醇（混合物））；

表面活性剂（实例包括但不限于苯扎氯铵、壬苯醇醚10、辛苯聚醇9（oxtoxynol 9）、吐温80、十二烷基硫酸钠和失水山梨糖醇单棕榈酸酯）；

悬浮剂（实例包括但不限于琼脂、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、高岭土、甲基纤维素、黄蓍树胶和硅酸镁铝）；

甜味剂（实例包括但不限于阿斯巴甜、葡萄糖、甘油、甘露醇、丙二醇、糖精钠、山梨糖醇和蔗糖）；

片剂抗粘剂（实例包括但不限于硬脂酸镁和滑石）；

片剂粘合剂（实例包括但不限于阿拉伯树胶、海藻酸、羧甲基纤维素钠、可压缩糖、乙基纤维素、明胶、液体葡萄糖、甲基纤维素、预胶凝淀粉）；

片剂和胶囊稀释剂（实例包括但不限于二碱式磷酸钙、高岭土、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉末状纤维素、沉淀碳酸钙、碳酸钠、磷酸钠、山梨糖醇和淀粉）；

片剂包衣剂（实例包括但不限于液体葡萄糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素和虫胶）；

片剂直接压缩赋形剂（实例包括但不限于二碱式磷酸钙）；

片剂崩解剂（实例包括但不限于海藻酸、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、波拉克林钾、海藻酸钠、淀粉羟乙酸钠和淀粉）；

片剂助流剂（实例包括但不限于胶体二氧化硅、玉米淀粉和滑石）；

片剂润滑剂（实例包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、硬脂酸和硬脂酸锌）；

片剂/胶囊剂遮光剂（实例包括但不限于二氧化钛）；

片剂抛光剂（实例包括但不限于巴西棕榈蜡和白蜡）；

增稠剂（实例包括但不限于蜂蜡、十六烷醇和石蜡）；

张度剂（实例包括但不限于葡萄糖和氯化钠）；

增粘剂（实例包括但不限于海藻酸、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、海藻酸钠和黄蓍树胶）；以及

润湿剂（实例包括但不限于十七乙烯氧十六烷醇、卵磷脂、山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯硬脂酸酯）。

根据本发明的药用组合物的说明如下：

无菌IV溶液：使用无菌的注射用水制备所需要的本发明化合物的5mg/mL溶液，并且如果需要，调节PH。将所述溶液用无菌的5%葡萄糖稀释至1-2mg/mL用于给药且以IV输注形式在60分钟内给药。

用于IV给药的冻干粉剂：无菌制品可由（i）100-1000mg本发明需要的化合物作为冻干粉剂，（ii）32-327mg/mL的柠檬酸钠以及（iii）300-3000mg的右旋糖酐40制备。所述制剂用无菌的注射用盐水或5%葡萄糖复原至10至20mg/mL的浓度，其被用盐水或5%的葡萄糖进一步稀释至0.2–0.4mg/mL，且用IV推注给药给药或通过在15-60分钟内IV输注给药。

肌内悬浮液：可制备下文的溶液或悬浮液，用于肌内注射：

50mg/mL的需要的本发明水不溶性化合物

5mg/mL羧甲基纤维素钠

4mg/mL吐温80

9mg/mL氯化钠

9mg/mL苯甲醇

硬壳胶囊：大量的单位胶囊是通过用以下成分填充每个标准两件式的硬明胶（galantine）胶囊制备：100mg粉末状的活性成分、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁。

软明胶胶囊：制备溶于易消化油（例如大豆油、棉花籽油或橄榄油）中的活性成分的混合物并且将其通过正置换型泵注射进入熔化明胶中以形成包含100mg所述活性成分的软明胶胶囊。所述胶囊被洗涤并干燥。可将所述活性成分溶解在聚乙二醇、甘油和山梨糖醇的混合物中以制备水混溶性药物混合物。

片剂：通过常规的步骤制备大量的片剂以使剂量单位为100mg活性成分、0.2mg胶体二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉以及98.8mg乳糖。合适的水性以及非水性包衣可用于增加适口性、改进精美性（elegance）和稳定性或延迟吸收。

速释片剂/胶囊剂：这些是通过常规的和新的方法制备的固体口服剂型。这些单位被口服服用，不用水进行药剂的速溶和递送。所述活性成分混合在包含例如糖、明胶、果胶和甜味剂的成分的液体中。这些液体通过冷冻干燥以及固态萃取技术固化成固体片剂或锭剂。可将所述药物化合物与粘弹性和热弹性的糖和聚合物或者泡腾组分一起压缩以制备用于速释的多孔基质，不需要水。

本发明所述药用组合物的剂量

基于已知用于评价对治疗任意上文提及的障碍有用的化合物的标准实验室技术，通过标准毒性测试以及通过用于在哺乳动物中确定对上文所述病症的治疗的标准药理测定，且通过比较这些结果与用于治疗所述病症的已知药剂的结果，可容易地确定本发明所述化合物的用于治疗每种所需适应症的有效剂量。待在这些病症之一的治疗中给予的所述活性成分的量可根据如下的考虑广泛地变化：所采用的具体化合物和剂量单位、给药模式、治疗周期、被治疗患者的年龄和性别以及被治疗病症的性质和程度。

待给予的所述活性成分的总量范围可为每天约0.001mg/kg至约200mg/kg体重，且优选从每天约0.1mg/kg至约50mg/kg体重。单位剂量可优选地包含从约5mg至约4000mg的活性成分，且每天可给药一次或多次。口服给药的每日剂量将优选地为从0.1至50mg/kg总体重。通过注射（包括静脉注射、肌内注射、皮下注射和肠胃外注射）并且使用输注技术给予的每日剂量将优选地为从0.1至10mg/kg总体重。每日直肠给药方案将优选地为从0.1至50mg/kg总体重。每日阴道给药方案将优选地为从0.1至50mg/kg总体重。每日局部给药方案将优选地为从0.1至10mg/kg，每日给药一至四次。经皮浓度将优选地为维持从0.1至10mg/kg的每日剂量所需的浓度。每日吸入给药方案将优选地为从0.1至10mg/kg总体重。其他的剂量和用量可通过常规方法选择。

用于每个患者的特定初始和持续给药方案将根据由主诊医生确定的病症的性质和严重程度、所应用的具体化合物的活性、患者的年龄和一般状况、给药时间、给药途径、药物排泄率、联合用药等而变化。所需要的治疗模式以及本发明化合物或其可药用盐或酯或组合物的剂量数可由本领域技术人员使用常规的治疗测试确定。

本发明所述化合物和组合物与另外的活性成分的结合。

本发明化合物可作为唯一药用制剂给药或与一种或多种其他的药用制剂结合给药，其中所述结合不会引起不可接受的副作用。这可与治疗过度增殖疾病（例如癌症）特别相关。在这种情况下，本发明所述化合物可与已知的细胞毒性试剂、信号转导抑制剂或与其他的抗癌试剂以及与其混合物和结合物结合。

在一个实施方案中，本发明所述化合物可与细胞毒性抗癌药剂结合。所述药剂的实例可在第11版的Merck Index（1996）中找到。这些药剂包括但不限于天冬酰胺酶（asparaginase）、博来霉素（bleomycin）、卡铂（carboplatin）、卡莫司汀（carmustine）、苯丁酸氮芥（chlorambucil）、顺铂（cisplatin）、门冬酰胺酶（colaspase）、环磷酰胺、阿糖胞苷（cytarabine）、达卡巴嗪（dacarbazine）、放线菌素D（dactinomycin）、柔红霉素（daunorubicin）、多柔比星（doxorubicin）（阿霉素（adriamycine））、表柔比星（epirubicin）、依托泊苷（etoposide）、5-氟尿嘧啶、六甲基三聚氰胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康（irinotecan）、亚叶酸（leucovorin）、洛莫司汀（lomustine）、氮芥（mechlorethamine）、6-巯基嘌呤、美司钠（mesna）、氨甲蝶呤（methotrexate）、丝裂霉素C（mitomycin C）、米托蒽醌（mitoxantrone）、泼尼松龙（prednisolone）、强的松（prednisone）、丙卡巴肼（procarbazine）、雷洛昔芬（raloxifen）、链佐星（streptozocin）、他莫昔芬（tamoxifen）、硫鸟嘌呤（thioguanine）、托泊替康（topotecan）、长春花碱（vinblastine）、长春新碱（vincristine）和长春地辛（vindesine）。

适于与本发明所述化合物一起使用的其他细胞毒性药物包括但不限于那些公知用于治疗Goodman and Gilman's The PharmacologicalBasis of Therapeutics（第九版，1996年，McGraw-Hill）中的肿瘤性疾病的化合物。这些药物包括但不限于氨鲁米特（aminoglutethimide）、L-天冬酰胺酶、硫唑嘌呤（azathioprine）、5-氮杂胞苷克拉屈滨（5-azacytidine cladribine）、白消安（busulfan）、己烯雌酚（diethylstilbestrol）、2',2'-二氟脱氧胞苷、多西紫杉醇（docetaxel）、红羟基壬基腺嘌呤（erythrohydroxynonyladenine）、乙炔基雌二醇、5-氟脱氧尿苷、一磷酸5-氟脱氧尿苷、磷酸氟达拉滨（fludarabinephosphate）、氟甲睾酮（fluoxymesterone）、氟他胺（flutamide）、己酸羟孕酮（hydroxyprogesterone caproate）、伊达比星（idarubicin）、干扰素、醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate）、醋酸甲地孕酮（megestrol acetate）、美法仑（melphalan）、米托坦（mitotane）、紫杉醇（paclitaxel）、喷司他丁（pentostatin）、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸（PALA）、普卡霉素（plicamycin）、司莫司汀（semustine）、替尼泊苷（teniposide）、丙酸睾酮（testosterone propionate）、噻替哌（thiotepa）、三甲基三聚氰胺、尿苷（uridine）和长春瑞滨（vinorelbine）。

适于与本发明所述化合物结合使用的其他细胞毒性抗癌药物包括新发现的细胞毒性成分，例如奥沙利铂（oxaliplatin）、吉西他滨（gemcitabine）、卡培他滨（capecitabine）、埃博霉素（epothilone）以及其天然或合成的衍生物、替莫唑胺（temozolomide）（Quinn et al.,J.Clin.Oncology 2003,21(4),646-651）、托西莫单抗（tositumomab）（Bexxar）、trabedectin（Vidal et al.,Proceedings of the AmericanSociety for Clinical Oncology 2004,23,摘要3181）以及纺锤体驱动蛋白Eg5的抑制剂（Wood et al.,Curr.Opin.Pharmacol.2001,1,370-377）。

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可与其他的信号转导抑制剂结合。特别感兴趣的是靶向EGFR家族（例如EGFR、HER-2和HER-4）的信号转导抑制剂（Raymond et al.,Drugs 2000,60(Suppl.1),15-23;Harari et al.,Oncogene 2000,19(53),6102-6114），以及其各自的配体。所述试剂的实例包括但不限于抗体疗法例如赫赛汀（Herceptin）（曲妥单抗（trastuzumab））、爱必妥（Erbitux）（西妥昔单抗（cetuximab））以及帕妥珠单抗（pertuzumab）。所述疗法的实例还包括但不限于小分子激酶抑制剂例如ZD-1839/Iressa（Baselga et al.,Drugs 2000,60(Suppl.1),33-40）、OSI-774/Tarceva（Pollack et al.J.Pharm.Exp.Ther.1999,291(2),739-748）、CI-1033（Bridges,Curr.Med.Chem.1999,6,825-843）、GW-2016（Lackey etal.，92nd AACR Meeting,New Orleans,2001年3月24-28日,abstract4582）、CP-724,714（Jani et al.,Proceedings of the American Society forClinical Oncology 2004,23,abstract 3122）、HKI-272（Rabindran etal.,Cancer Res.2004,64,3958-3965）以及EKB-569（Greenberger et al.,11th NCI-EORTC-AACR Symposium on New Drugs in CancerTherapy，Amsterdam，2000年11月7-10日，abstract 388).

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可与靶向分裂激酶结构域家族（VEGFR、FGFR、PDGFR、flt-3、c-kit、c-fms等）的受体激酶的其他信号转导抑制剂以及其各自的配体结合。这些药物的实例包括但不限于抗体，例如阿瓦斯丁（Avastin）（贝伐单抗（bevacizumab））。这些药物的实例还包括但不限于小分子抑制剂，例如STI-571/Gleevec（Zvelebil,Curr.Opin.Oncol.,Endocr.Metab.Invest.Drugs 2000,2(1),74-82）、PTK-787（Wood et al.,Cancer Res.2000,60(8),2178-2189）、SU-11248（Demetri et al.,Proceedings of theAmerican Society for Clinical Oncology 2004,23,abstract 3001）、ZD-6474（Hennequin et al.,92nd AACR Meeting,New Orleans,2001年3月24-28日,abstract 3152）、AG-13736（Herbst et al.，Clin.CancerRes.2003,9,16(suppl 1),abstract C253）、KRN-951（Taguchi et al.，95th AACR Meeting,Orlando,FL，2004，abstract 2575）、CP-547,632（Beebe et al.,Cancer Res.2003,63,7301-7309）、CP-673,451（Robertset al.,Proceedings of the American Association of Cancer Research2004,45,abstract 3989）、CHIR-258（Lee et al.,Proceedings of theAmerican Association of Cancer Research 2004,45,abstract 2130）、MLN-518（Shen et al.,Blood 2003,102,11， abstract 476）以及AZD-2171（Hennequin et al.,Proceedings of the American Associationof Cancer Research 2004,45,abstract 4539）。

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可与Raf/MEK/ERK转导通路（Avruch et al.，Recent Prog.Horm.Res.2001,56,127-155），或PKB（akt）通路（Lawlor et al.,J.Cell Sci.2001,114,2903-2910）的抑制剂结合。这些包括但不限于PD-325901（Sebolt-Leopold et al.,Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004,45,abstract 4003）以及ARRY-142886（Wallace et al.，Proceedings of theAmerican Association of Cancer Research 2004,45,abstract 3891）。

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可与组蛋白脱乙酰基化酶的抑制剂结合。所述试剂的实例包括但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）、LAQ-824（Ottmann et al.，Proceedings of the AmericanSociety for Clinical Oncology 2004,23,abstract 3024）、LBH-589（Becket al.,Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23,abstract 3025）、MS-275（Ryan et al.,Proceedings of the AmericanAssociation of Cancer Research 2004,45,abstract 2452）以及FR-901228（Piekarz et al.,Proceedings of the American Society forClinical Oncology 2004,23,abstract 3028）。

在另一个实施方案中，本发明所述化合物可与其他的抗癌试剂（例如蛋白酶体抑制剂，以及m-TOR抑制剂）结合。这些包括但不限于硼替佐米（bortezomib）（Mackay et al.,Proceedings of the AmericanSociety for Clinical Oncology 2004,23,abstract 3109）以及CCI-779（Wu et al.,Proceedings of the American Association of CancerResearch 2004,45,abstract 3849）。

通常，使用细胞毒性和/或细胞抑制的抗癌试剂与本发明化合物或组合物联合治疗癌症将发挥以下作用：

（1）相比单独给予任一的药物，在减少肿瘤生长或甚至消除肿瘤方面产生更好的功效，

（2）提供更少量的所给药的化学治疗剂的给药，

（3）提供在患者中耐受良好的化学疗法治疗，所述治疗与单一药剂化学疗法和某些其他联合疗法中观察到的有害药理并发症相比具有更少的有害药理并发症，

（4）提供在哺乳动物尤其在人中治疗广谱的不同癌症类型，

（5）提供在被治疗的患者中更高的应答率，

（6）提供与标准化学疗法治疗相比在被治疗的患者中更长的生存时间，

（7）提供更长的肿瘤消退时间，和/或

（8）与已知的例子——其中其他的癌症药物组合产生拮抗作用——相比，产生至少与单独使用所述药物同样好的功效和耐受性结果。

本发明的方面包括但不限于：

在一个实施方案中，本发明提供下文的方面

方面1.式（I）的合成代谢产物或其盐、或其前药或其经分离的立体异构体。

方面2.式I化合物的合成的M2、M3、M4或M5代谢产物或所述代谢产物的盐，其中所述M2、M3、M4和M5代谢产物的结构为：

代谢产物M-2

代谢产物M-3

代谢产物M-4

代谢产物M-5

方面3.根据方面2的合成代谢产物的可药用盐，其是

a）有机酸或无机酸的碱式盐，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸（甲苯磺酸盐）、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、顺丁烯二酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸或扁桃酸；或

b）含有碱金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子、脂肪族取代的铵阳离子或芳香族取代的铵阳离子的有机或无机碱的酸式盐。

方面4.根据方面2的合成代谢产物，其是4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟代苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲酰胺的代谢产物。

方面5.根据方面4的合成代谢产物的可药用盐，其是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸（甲苯磺酸盐）、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、顺丁烯二酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸或扁桃酸的碱式盐。

方面6.一种化合物，其是根据方面2的合成代谢产物的盐酸盐、苯磺酸盐或甲磺酸盐。

方面7.包括根据方面2的合成代谢产物和生理学上可用载体的药用组合物。

方面8.包括根据方面4的合成代谢产物和生理学上可用载体的药用组合物。

方面9.用于在人或其他哺乳动物中治疗由蛋白激酶调节的且与所述蛋白激酶信号转导通路中的异常相关的疾病的药用组合物，包括根据方面2的合成代谢产物和生理学上可用载体。

方面10.用于治疗过度增殖障碍的药用组合物，包括根据方面4的合成代谢产物和生理学上可用载体。

方面11.用于治疗癌细胞生长的药用组合物，包括根据方面2的合成代谢产物和生理学上可用载体。

方面12.用于调节酪氨酸激酶信号转导的方法，包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面13.用于在人或其他哺乳动物中治疗或预防由酪氨酸激酶调节的且与在酪氨酸激酶信号转导通路中的异常相关的疾病的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面14.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防由VEGFR-2介导的障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面15.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防由PDGFR介导的障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面16.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防由raf介导的障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面17.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防由p38介导的障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面18.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防由VEGF介导的障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面19.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防过度增殖、炎性障碍和/或血管生成障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面20.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防过度增殖障碍的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面21.如在方面20中的方法，其中所述过度增殖障碍是癌症。

方面22.如在方面21中的方法，其中所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物结合一种或几种另外的抗癌试剂给药至人或其他哺乳动物。

方面23.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防特征为异常血管生成或高渗透过程的疾病的方法，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面24.如在方面23中的方法，用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防特征为异常血管生成或高渗透过程的疾病，所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物同时和另外的抗血管生成药物在相同的制剂中或在不同的制剂中给药至人或其他哺乳动物。

方面25.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防一种或多种下文的病症的方法：

肿瘤生长、视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变、年龄相关的黄斑变性；类风湿性关节炎、牛皮癣、与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病，包括大疱性类天疱疮、多形性红斑或疱疹样皮炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、脓毒性关节炎、肿瘤转移、牙周病、角膜溃疡、动脉粥样硬化斑块导致的的蛋白尿和冠状动脉血栓形成、动脉瘤主动脉疾病、节育、营养不良型大疱性表皮松解症、创伤性关节损伤后退行性软骨损失、由MMP活性介导的骨质减少、颞下颌关节疾病或神经系统的脱髓鞘疾病，

所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面26.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防一种或多种下文的病症以及另一种病症的方法：肿瘤生长、视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变、年龄相关的黄斑变性；类风湿性关节炎、牛皮癣、与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病，包括大疱性类天疱疮、多形性红斑或疱疹样皮炎；

所述另一种病症选自：

风湿热、骨吸收、绝经后骨质疏松、脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、感染性休克、内毒素休克、中毒性休克综合征、全身炎性反应综合征、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、赫尔斯海默尔反应、哮喘、成人呼吸窘迫综合症、急性肺纤维化疾病、肺结节病、过敏性呼吸系统疾病、矽肺病、煤工尘肺、肺泡损伤、肝衰竭、急性炎症期间的肝脏疾病、严重的酒精性肝炎、疟疾（恶性疟原虫疟疾和脑型疟疾）、非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）、充血性心力衰竭、心脏病后损伤、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性脑炎、脑损伤、多发性硬化（在多发性硬化中的脱髓鞘作用和少突胶质细胞损失）、晚期癌症、淋巴恶性肿瘤、胰腺炎、在感染、炎症和癌症中的伤口愈合不良、骨髓增生异常综合征、系统性红斑狼疮、胆汁性肝硬化、肠坏死、辐射损伤、给予单克隆抗体后的毒性、宿主抗移植物反应（缺血再灌注损伤以及肾脏、肝脏、心脏、和皮肤的同种异体移植物排斥）、肺同种异体移植物排斥（闭塞性支气管炎）以及由于全髋关节置换导致的并发症，

所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面27.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防一种或多种下文的病症以及一种感染性疾病的方法：肿瘤生长、视网膜病变、糖尿病视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变、年龄相关的黄斑变性；类风湿性关节炎、牛皮癣、与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病，大疱性类天疱疮、多形性红斑和疱疹样皮炎，

所述感染性疾病选自：

肺结核、在消化性溃疡疾病期间的幽门螺杆菌感染、克氏锥虫感染导致的查加斯病、大肠杆菌感染导致的志贺样毒素作用、葡萄球菌感染导致的肠毒素A作用、脑膜炎双球菌感染以及来自伯氏疏螺旋体的感染、梅毒螺旋体的感染、巨细胞病毒的感染、流感病毒的感染、泰勒脑脊髓炎病毒的感染以及人免疫缺陷病毒（HIV）的感染；

所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面28.如在方面22中的方法，其中所述另外的抗癌试剂选自天冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、门冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星（阿霉素）、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲基三聚氰胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、亚叶酸、洛莫司汀、氮芥、6-巯基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、丝裂霉素C、米托蒽醌、泼尼松龙、强的松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、链佐星、他莫昔芬、硫鸟嘌呤、托泊替康、长春花碱、长春新碱、长春地辛、氨鲁米特、L-天冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮杂胞苷克拉屈滨、白消安、己烯雌酚、2',2'-二氟脱氧胞苷、多西紫杉醇、红羟基壬基腺嘌呤、乙炔基雌二醇、5-氟脱氧尿苷、一磷酸5-氟脱氧尿苷、磷酸氟达拉滨、氟甲睾酮、氟他胺、己酸羟孕酮、伊达比星、干扰素、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸（PALA）、普卡霉素、司莫司汀、替尼泊苷、丙酸睾酮、噻替哌、三甲基三聚氰胺、尿苷和长春瑞滨、奥沙利铂、吉西他滨、卡培他滨、埃博霉素以及其天然或合成的衍生物、托西莫单抗、trabedectin和替莫唑胺、曲妥单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、帕妥珠单抗、ZD-1839（易瑞沙）、OSI-774（特罗凯）、CI-1033、GW-2016、CP-724,714、HKI-272、EKB-569、STI-571（格列卫）、PTK-787、SU-11248、ZD-6474、AG-13736、KRN-951、CP-547,632、CP-673,451、CHIR-258、MLN-518、AZD-2171、PD-325901、ARRY-142886、辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）、LAQ-824、LBH-589、MS-275、FR-901228、硼替佐米和CCI-779。

方面29.如在方面22中的方法，其中所述另外的抗癌试剂是选自DNA拓扑异构酶I和II抑制剂、DNA嵌入剂、烷基化试剂、抗代谢产物、细胞周期阻滞剂、微管干扰剂以及Eg5抑制剂的细胞毒性试剂。

方面30.如在方面22中的方法，其中所述另外的抗癌试剂选自生长因子受体信号传导抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、PKB通路抑制剂、Raf/MEK/ERK通路抑制剂、mTOR通路抑制剂和蛋白酶体抑制剂。

方面31.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防一种或多种下文的病症的方法：

风湿热、骨吸收、绝经后骨质疏松、脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、感染性休克、内毒素休克、中毒性休克综合征、全身炎性反应综合征、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、赫尔斯海默尔反应、哮喘、成人呼吸窘迫综合症、急性肺纤维化疾病、肺结节病、过敏性呼吸系统疾病、矽肺病、煤工尘肺、肺泡损伤、肝衰竭、急性炎症期间的肝脏疾病、严重的酒精性肝炎、疟疾（恶性疟原虫疟疾和脑型疟疾）、非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）、充血性心力衰竭、心脏病后损伤、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性脑炎、脑损伤、多发性硬化（在多发性硬化中的脱髓鞘作用和少突胶质细胞损失）、晚期癌症、淋巴恶性肿瘤、胰腺炎、在感染、炎症和癌症中的伤口愈合不良、骨髓增生异常综合征、系统性红斑狼疮、胆汁性肝硬化、肠坏死、牛皮癣、辐射损伤、给予单克隆抗体后的毒性、宿主抗移植物反应（缺血再灌注损伤以及肾脏、肝脏、心脏、和皮肤的同种异体移植物排斥）、肺同种异体移植物排斥（闭塞性支气管炎）以及由于全髋关节置换导致的并发症，

所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面32.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防一种或多种下文的病症的方法：

肺结核、在消化性溃疡疾病期间的幽门螺杆菌感染、克氏锥虫感染导致的查加斯病、大肠杆菌感染导致的志贺样毒素作用、葡萄球菌感染导致的肠毒素A作用、脑膜炎双球菌感染以及来自伯氏疏螺旋体的感染、梅毒螺旋体的感染、巨细胞病毒的感染、流感病毒的感染、泰勒脑脊髓炎病毒的感染以及人免疫缺陷病毒（HIV）的感染，

所述方法包括将根据方面2的合成代谢产物给药至人或其他哺乳动物。

方面33.用于在人和/或其他哺乳动物中治疗或预防除癌症外的骨质疏松症、炎症和血管生成障碍的方法，其通过将有效量的方面2的合成代谢产物给药至所述哺乳动物来进行。

方面34.用于在人或其他哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，包括将单一活性成分给药至人或其他哺乳动物并结合对raf/MEK/ERK通路介导的肿瘤细胞增殖的抑制以及对PDGF和VEGF介导的血管生成的抑制，其中所述活性成分包括根据方面2的合成代谢产物。

方面35.方面34的方法，其中所述对肿瘤细胞增殖的抑制由对raf激酶的抑制引起，且所述对血管生成的抑制由对PDGFR-β和VEGFR-2激酶的双重抑制引起。

方面36.用于在人或其他哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，包括将单一活性成分给药至人或其他哺乳动物并结合对raf通路介导的肿瘤细胞增殖的抑制以及对PDGF或VEGF介导的血管生成的抑制，其中所述活性成分包括根据方面2的合成代谢产物。

方面37.用于在需要其的受试者中治疗和/或预防疾病和/或病症的方法，包括给予有效量的根据方面2的合成代谢产物。

方面38.方面37的方法，其中所述方法包括在受试者或来自其的细胞中引起肿瘤消退。

方面39.方面37的方法，其中所述方法包括抑制淋巴管生成。

方面40.方面37的方法，其中所述方法包括抑制血管生成。

方面41.方面37的方法，其中所述方法包括抑制淋巴管生成和血管生成。

方面42.方面37的方法，其中所述方法包括刺激造血祖细胞的增殖。

方面43.方面37的方法，其中所述方法包括在哺乳动物受试者中治疗由raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3介导的障碍。

方面44.方面37的方法，其中所述方法包括确定病症是否可由所述化合物调节，包括在包括细胞或细胞提取物的样品中测量raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的表达或活性，当在所述病症中的所述表达或活性与正常对照不同时，则所述病症可由所述化合物调节，其中所述样品获自具有所述病症的受试者或细胞。

方面45.方面44的方法，进一步包括对比在所述样品和正常对照中的表达。

方面46.方面37的方法，其中所述方法包括评价所述化合物在治疗障碍方面的功效，包括给药所述化合物、测量raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3的表达或活性以及确定所述化合物对所述表达或活性的影响。

方面47.方面37的方法，其中所述方法包括确定raf、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、p38和/或flt-3在生物材料的样品中的存在情况，将所述样品与所述化合物接触以及确定所述化合物是否与所述材料结合。

方面48.方面37的方法，其中所述方法包括在需要其的受试者中治疗肿瘤，包括给药有效量的所述化合物，其中所述量可有效抑制肿瘤细胞增殖和新血管化。

方面49.根据方面2的合成代谢产物，其是具有下文结构式的M-2或M-5代谢产物，或其盐，或其前药或其经分离的立体异构体：

代谢产物M-2

代谢产物M-5

方面50.用于在受试者中治疗或预防肿瘤或血管疾病的方法，包括将根据方面49的合成代谢产物给药至所述受试者。

方面51.制备根据方面2的合成代谢产物的方法，包括在所述式I化合物足以代谢的条件下，将所述式I的化合物或其盐与肝微粒体制品接触且将所述代谢产物从所述制品中分离出。

附图说明

当结合附图考虑时，本发明的各种特征和伴随的优点将被更充分地理解（因为其变得更好理解），其中相同的标号在多个视图中指代相同或相似的部分，其中：

图1示出了来自体外和体内研究的瑞格非尼的代谢产物。

图2示出了瑞格非尼及其N-氧化物（M-2）和脱甲基N-氧化物（M-5）合成代谢产物的激酶选择性谱。

图3示出了M-2和M-5合成代谢产物在小鼠中显著抑制人异种移植物的肿瘤生长。

图4示出了瑞格非尼及其合成代谢产物M-2和M-5在被麻醉的大鼠中抑制VEGF的急性低血压作用。

图5示出了瑞格非尼的M-2合成代谢产物在大鼠GS9L胶质母细胞瘤模型中在单次口服剂量7.5mg/kg后影响血管外渗。测定使用动力学DCE-MRI分析进行。

图6示出了在将160mg瑞格非尼共沉淀片剂给药至患有结肠直肠癌的患者后第1天和第21天时瑞格非尼、M-2和M-5合成代谢产物的血浆浓度（n=9，初始数据）。数据来自与表4所示的相同的研究。

实施例

本发明用下文的非限制性实施例进一步说明。

在本说明书中使用的缩写如下：

4-氨基-3-氟苯酚的制备

在用氩气吹扫的干燥烧瓶中加入10%的Pd/C（80mg），接着加入3-氟代-4-硝基苯酚（1.2g，7.64mmol）在乙酸乙酯（40mL）中的溶液。所述混合物在H₂气氛下搅拌4个小时。将所述混合物过滤通过硅藻土垫并且在减压下蒸发溶剂，以产生黄褐色固体形式的所需产物（940mg，7.39mmol；产率97%）；1H-NMR(DMSO-d6)4.38(s,2H)、6.29-6.35(m,1H)、6.41(dd,J=2.5,12.7,1H)、6.52-6.62(m,1H)、8.76(s,1H)。

4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-羧酸甲酰胺的制备

将冷却至0°C的4-氨基-3-氟苯酚（500mg，3.9mmol）在N,N-二甲基乙酰胺（6mL）中的溶液用叔丁醇钾（441mg，3.9mmol）处理，且将所述棕色溶液在0°C搅拌25分钟。向所述混合物中加入4-氯-N-甲基-2-吡啶甲酰胺（516mg，3.0mmol）在二甲基乙酰胺（4mL）中的溶液。将所述反应在100°C加热16个小时。将所述混合物冷却至室温，用H₂O（20mL）骤停，且用乙酸乙酯（4×40mL）萃取。合并的有机相用H₂O（2×30mL）洗涤，干燥（MgSO₄），且蒸发以产生红棕色的油。1H-NMR显示了残余的二甲基乙酰胺的存在，因此将所述油溶于乙醚（50mL）且进一步用盐水（5×30mL）洗涤。有机层被干燥（MgSO₄）且浓缩以得到红棕色固体形式的950mg所需产物，其未经纯化被用于下一步。

制备4-氯-N-甲基-2-吡啶甲酰胺的方法记载于Bankston et al.,Org.Proc.Res.Dev.2002,6(6),777-781中。

实施例1：4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲酰胺的制备

向4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-羧酸甲酰胺（177mg，0.68mmol）在甲苯（3mL）中的溶液中加入4-氯-3-(三氟甲基)苯基异氰酸酯（150mg，0.68mmol）。所述混合物在室温下搅拌72小时。将所述反应减压浓缩且将所得残留物用乙醚研磨。所得到的固体由过滤收集并在真空下干燥4小时以获得题述的化合物（155mg，0.32mmol；产率47%）；1H-NMR(DMSO-d6)2.78(d,J=4.9,3H)、7.03-7.08(m,1H)、7.16(dd,J=2.6,5.6,1H)、7.32(dd,J=2.7,11.6,1H)、7.39(d,J=2.5,1H)、7.60(s,2H)、8.07–8.18(m,2H)、8.50(d,J=5.7,1H)、8.72(s,1H)、8.74-8.80(m,1H)、9.50(s,1H)；MS(HPLC/ES)483.06m/z=(M+1)。

实施例2：4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲酰胺盐酸盐的制备

将游离碱形式的实施例1所述化合物（2.0g）溶解于无水四氢呋喃（15mL）中且加入4M的HCl/二噁烷（过量的）。然后将所述溶液在真空下浓缩以产生2.32克灰白色固体。所述粗盐溶解于热乙醇（125mL）中，加入活性碳且将所述混合物回流加热15分钟。将热悬浮液过滤通过硅藻土521垫并冷却至室温。所述烧瓶被放置在冰箱中过夜。通过抽滤收集结晶固体，将其用乙醇洗涤，然后用己烷洗涤并风干。母液被浓缩且结晶（在冰箱中）过夜进行。收集第二批固体且与第一批合并。该无色盐在真空干燥箱中于60°C干燥两天。所获得的盐酸盐的产量为1.72g（79%）。

熔点：215°C

元素分析：

实施例3：4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲酰胺甲磺酸盐的制备

将游离碱形式的实施例1所述化合物（2.25g）溶解于乙醇（100mL）中且加入甲磺酸储备溶液（过量的）。然后将该溶液真空浓缩以得到黄色油。加入乙醇且再次浓缩，得到2.41g灰白色固体。将所述粗盐溶解于热乙醇（约125mL）中且然后缓慢冷却以结晶。在达到室温后，所述烧瓶被放置在冰箱中过夜。通过抽滤收集无色结晶物质；所得滤饼用乙醇洗涤，然后用己烷洗涤并风干，以得到2.05g物质，其在真空干燥箱中于60°C干燥过夜。

熔点：231°C

元素分析：

实施例4：4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲酰胺苯基磺酸盐的制备

将游离碱形式的实施例1所述化合物（2.25g）悬浮于乙醇（50mL）中且加入溶于乙醇（50mL）中的苯磺酸（0.737g)。将所述混合物在剧烈搅拌下加热。所有的固体物质均溶解得到微红色溶液。将所述溶液冷却至室温且刮擦所述烧瓶。难以形成晶体，找到一些晶种，将其加入至溶液中且放置在冰箱中过夜。在所述烧瓶中形成浅灰棕褐色（Grayish-tan）固体；通过抽滤破碎并收集所述物质。所述固体用乙醇洗涤，然后用己烷洗涤并风干。称重的产物：2.05g，产率69%。

熔点：213°C

元素分析：

实施例5：式I化合物的合成代谢产物的制备

作为代表性的实施例，式I化合物的合成代谢产物可通过将母体瑞格非尼化合物与肝微粒体孵育获得。

本申请的代谢产物还可以是通过合成方法获得的。

本申请的代谢产物可使用本领域中已知的技术纯化。

实施例6：在动物中的代谢谱

N-氧化物（M-2）和羟甲基（M-3）代谢产物在体外通过与各种哺乳动物物种（人、犬、大鼠、小鼠）的肝酶孵育而被鉴别为瑞格非尼的代谢产物。研究表明了瑞格非尼以及其代谢产物在人和动物物种中显示高的蛋白结合率。

所述代谢谱示于下文的图1和表1中。

表1.[14C]瑞格非尼（20μM）与不同物种的肝微粒体孵育下（蛋白浓度0.5mg/mL，60分钟）的代谢谱。

实施例7:药理情况

在口服给药10mg/kg瑞格非尼至小鼠5天后，N-氧化物（M-2）的暴露占总AUC（R+M-2+M-5）的约16%，然M-5相对于总AUC的贡献为约2%。数据示于下文的表2中。在口服给药10mg/kg M-2至小鼠后，瑞格非尼的暴露达到总暴露的约17%，这表明N-氧化物的还原是相关的体内代谢途径，而M-5占总暴露的5%。

表2.在将瑞格非尼及其代谢产物M-2和M-5口服给药至雌性NMRI-Foxn-1小鼠后，瑞格非尼及其代谢产物M-2和M-5在稳态下的药代动力学参数。

实施例8.激酶组宽的选择性谱

瑞格非尼和其代谢产物M-2和M-5的激酶组宽的选择性谱是通过Ambit Biosciences（San Diego，CA，US）使用活性位点竞争结合测定（Fabian et al.Nat Biotechnol 2005;23:329-336）进行。使用单一剂量的1μM化合物分析总共402个激酶。结合抑制活性表示为仍然结合的激酶与DMSO处理的对照相比的百分比。所述化合物的效能由环的大小反映。

在竞争结合测定中，M-2和M-5示出了与瑞格非尼相似但不同的激酶选择性谱。结果在图2中示出。

实施例9.M-2和M-5代谢产物的生物化学特征

M-2和M-5的特征都显示了有效的药理活性。在生物化学激酶测定中，M-2和M-5显示了与瑞格非尼相似但不同的抑制谱。在细胞测定中，M-2和M-5抑制了关键的靶标例如血管内皮生长因子（VEGF）受体2、TIE-2以及突变体和野生型的c-KIT和B-RAF，M-2的IC50值非常类似于瑞格非尼而且M-5的IC50值略高于瑞格非尼。数据示于表3中。

表3.在细胞激酶磷酸化测定中瑞格非尼、M-2和M-5的药理活性。

实施例10.M-2和M-5代谢产物的肿瘤生长抑制作用

人和大鼠肿瘤模型被用于确定M-2和M-5合成代谢产物对肿瘤生长和肿瘤血管系统的体内作用。

在这些研究中，带有人乳腺癌细胞系MDA-MB-231（K-RASG13D、B-RAFG464V）或人结肠直肠癌细胞系HT-29（B-RAFV600E）异种移植物的小鼠在接受肿瘤后的第11天开始用10mg/kg的瑞格非尼、M-2或M-5口服（每天×27）治疗。肿瘤生长抑制作用作为相对肿瘤面积（p<0.05对比在所有情况下的溶剂（vehicle）；n=8只小鼠/组）给出。所述肿瘤生长抑制测定是使用DCE-MRI进行。

如图3示出的，口服给药的两个合成代谢产物在临床前期小鼠的HT-29结肠直肠和MDA-MB-231乳腺癌症异种移植物中都呈现有效的剂量依赖性肿瘤生长抑制作用（TGI），相比10mg/kg的溶剂对照组（图3）相比分别实现显著的62/58%和54/50%TGI。

实施例11.对VEGF诱导的低血压的抑制作用

使用大鼠药效动力学模型研究所述合成代谢产物对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的低血压的急性效应。

在这些研究中，最初使用VEGF（9μg/kg）的静脉推注在大鼠中诱导暂时的低血压（参见图4的插图）。随后研究瑞格非尼及其合成代谢产物对VEGF诱导的低血压的拮抗作用。为此，在用溶剂进行10分钟静脉预处理后，以所示剂量给予瑞格非尼、M-2或M-5（图4）。计算舒张压（蓝色条）和收缩压（橙色条）的减少（在注射前和最小值之间的差别）。结果示于图4中。

实施例12.对肿瘤血管系统的作用

在携带有胶质母细胞瘤的GS9L大鼠Fischerrats中通过使用大分子对比剂Gadomer-17的DCE-MRI分析来分析瑞格非尼和M-2对体内肿瘤血管系统的药效动力学。在这些研究中，将在其大腿上携带有胶质母细胞瘤的大鼠用单一剂量的7.5mg/kg M-2或瑞格非尼治疗，且在治疗后2、6和24小时分析对Gadomer-17渗出的抑制作用。

结果示于图5中，左图示出了瑞格非尼的结果且右图示出了M-2合成代谢产物的结果。左侧的Y轴显示了肿瘤AUC值，其被标准化至大腿肌肉。右侧的Y轴显示了瑞格非尼、M-2、M-4和M-5的血清水平。因此，瑞格非尼、M-2、M-4和M-5的贡献可被单独地测定。

实施例13.体内药理学研究

在每日用160mg共沉淀片剂治疗21天的结肠癌患者中，M-2和M-5显示了与瑞格非尼非常类似的全身暴露。结果示于表4和图6（B）中。如在表4中显示的，瑞格非尼在患有结肠直肠癌患者中的生物转化导致去甲基化和氧化的M-2和M-5合成代谢产物水平显著升高。在用160mg共沉淀片剂每日一次或多次给药后观察所述合成代谢产物。

在患有结肠直肠癌的患者中连续的每日给药19天导致M-5和M-2合成代谢产物的AUC分别增加25倍和2倍。Cmax值类似地分别增加42倍和5倍。这些值反应在与初始剂量的对比中。

为进一步表征所述代谢产物，在将160mg瑞格非尼共沉淀片剂给药至患有结肠直肠癌的患者后第1天和第21天每天观察瑞格非尼、M-2和M-5的血浆浓度（n=9，初始数据）。结果示于图6中。观察到瑞格非尼、M-2和M-5的多个血浆浓度峰，最有可能是因为肠肝循环。母体化合物和M2/M5代谢产物的总Cmax水平在第21天为11mg/L。在最后一次给药后持续3天内所述药理学相关的总血浆浓度被评估为约2.5mg/L。

表4.在将160mg瑞格非尼共沉淀片剂给药至患有结肠直肠癌的患者后第1天和第21天时瑞格非尼、M-2和M-5的药代动力学参数（几何平均数（%CV），初始数据）

实施例14.c-raf（raf-1）生物化学测定

所述c-raf生物化学测定是用由Lck激酶活化（磷酸化）的c-raf酶进行。Lck活化的c-raf（Lck/c-raf）最初在Sf9昆虫细胞中通过用在多角体蛋白启动子的控制下表达GST-c-raf（从氨基酸302至氨基酸648）和Lck（全长）的杆状病毒共感染细胞而制备。所用的两种杆状病毒的感染复数为2.5且所述细胞在感染后48小时采集。

MEK-1蛋白质是在Sf9昆虫细胞中通过用表达GST-MEK-1（全长）融合蛋白的杆状病毒感染细胞制备，感染复数为5，且在感染后48小时采集所述细胞。相似的纯化步骤用于GST-c-raf 302-648和GST-MEK-1。

转染的细胞以100mg湿细胞生物量/mL悬浮在缓冲液中，所述缓冲液含有10mM磷酸钠、140mM氯化钠pH 7.3、0.5% Triton X-100以及蛋白酶抑制剂混合物。所述细胞用Polytron均质机破坏且以30,000g离心30分钟。将该30,000g上清液上样到GSH-Sepharose上。所述树脂用含有50mM Tris、pH 8.0、150mM NaCl和0.01% TritonX-100的缓冲液洗涤。被谷胱甘肽转移酶标记的蛋白质用含有100mM谷胱甘肽、50mM Tris、pH 8.0、150mM NaCl和0.01% Triton X-100的溶液洗脱。纯化的蛋白质被透析到含有20mM Tris、pH 7.5、150mMNaCl和20%甘油的缓冲液中。

将测试化合物在DMSO中使用3倍的稀释剂连续稀释至范围通常为从50μM至20nM（在测定中的最终浓度为从1μM至0.4nM）的储备浓度。所述c-Raf生物化学测定作为放射性过滤棉测定（radioactive filter mat assay）在Costar 96孔聚丙烯板（Costar 3365）中进行。所述板装有含有50mM HEPES pH 7.5、70mM NaCl、80ngLck/c-raf和1μg MEK-1的75μL溶液。随后，将2μL所述连续稀释的各个化合物加入到反应中，然后加入ATP。所述反应用含有5μMATP和0.3μCi[33P]-ATP的25μL ATP溶液启动。所述板被密封且在32°C下孵育1个小时。加入50μL 4%磷酸淬灭所述反应且使用Wallac Tomtec采集器将其收集到P30 Filtermat（PerkinElmer）上。过滤棉先用1%的磷酸洗涤然后用去离子水洗涤。将所述过滤器以微波干燥、在闪烁液中浸泡且在Wallac 1205Betaplate计数器（WallacInc.，亚特兰大，GA，美国）中读出。所述结果表达为抑制作用百分比。

%抑制作用=[100-(Tib/Ti)]×100，其中

Tib=（含有抑制剂的每分钟计数）-（背景）

Ti=（不含抑制剂的每分钟计数）-（背景）

本发明所述化合物在此测定中显示了对raf激酶的有效抑制作用。

实施例15：p38激酶体外测定

被纯化且用组氨酸标记的p38（在大肠杆菌中表达）在体外被MMK-6活化至高特异性活性。使用微量滴定格式，所有的反应都以100μL体积进行，用测定缓冲液（25mM HEPES 7.4，20mM MgCl2，150mM NaCl）稀释反应物以产生0.05μg/孔被活化的p38和10μg/孔的髓鞘碱性蛋白。测试化合物（5μL 10%的DMSO在水中的溶液）被制备且被稀释到所述测定缓冲液中以包括从5nM至2.5μM的最终浓度范围。所述激酶测定是通过以下方式启动，加入25μL的ATP混合物至最终浓度为每孔10μM冷的ATP和0.2μCi [γ-33P]ATP（200–400dpm/pmol的ATP）。所述板在32°C下孵育35分钟，且所述反应用7μL 1N的HCl水溶液淬灭。使用TomTec 1295采集器（Wallac,Inc.）将所得样品收集在P30 Filtermat（Wallac,Inc.）上，且在LKB 1205 Betaplate液体闪烁计数器（Wallac,Inc.）中计数。阴性对照仅包括底物加上ATP。SW1353细胞测定：将SW1353细胞（人软骨肉瘤）接种于（1000细胞/100μL DMEM 10%FCS/孔）96孔板中且孵育过夜。在替换培养基后，将细胞在37°C下与测试化合物接触1小时，在此时加入人IL-1（1ng/mL，Endogen，Woburn，WA）和重组人TNFα（10ng/mL）。培养物在37°C下孵育48小时，然后通过ELISA确定上清液的IL-6值。本发明所述化合物显示了对p38激酶的显著抑制作用。

实施例16：Bio-Plex Phospho-ERK 1/2免疫测定

建立使用激光流式细胞仪（Bio-Rad）平台的96孔pERK免疫测定以测量在乳腺癌细胞系中基础pERK的抑制。将MDA-MB-231细胞以50,000细胞/孔铺板在96孔微滴定板中的完全生长介质中。对于测试化合物对基础pERK1/2抑制的影响，在铺板后第二天，将MDA-MB-231细胞转移到具有0.1%BSA的DMEM中，且与以0.1%DMSO 1:3稀释至3μM至12nM的最终浓度的测试化合物孵育。细胞与测试化合物孵育2小时，洗涤，且在Bio-Plex全细胞裂解液A中裂解。样品用缓冲液B 1:1（v/v）稀释且直接转移到测定板中或在-80°C下冷冻直至进行处理。50μL被稀释的MDA-MB-231细胞裂解物与约2000个5微米的Bio-Plex小珠（缀合有抗ERK1/2的抗体）在摇床上于室温下过夜孵育。第二天，进行生物素化的磷酸化-ERK1/2夹心免疫测定，在每个孵育期间小珠被洗涤3次且然后50μLPE-strepavidin被用作显影剂。pERK1/2的相对荧光单位是通过用Bio-Plex流动槽（探针）以高灵敏度计数25个小珠而检测出。IC50是通过采用未处理的细胞作为最大值且以无细胞（只有珠）作为背景，使用基于Excel电子表格的程序计算。

本发明所述化合物在该测定中显示了显著的抑制作用。

实施例17:Flk-1（鼠VEGFR-2）生物化学测定

该测定是在96孔不透明板（Costar 3915）中以TR-FRET格式进行。反应条件如下：10μM ATP、25nM聚GT-生物素、2nM铕标记的磷酸化-Tyr Ab、10nM APC、7nM Flk-1（激酶结构域）、1% DMSO、50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl₂、0.1mM EDTA、0.015% BRIJ、0.1mg/mL BSA、0.1%巯基乙醇。反应通过加入酶启动。在每个孔中的最终反应体积为100μL。反应开始后约1.5-2.0小时，板在PerkinElmer Victor V多标记计数板上于615和665nM下读出。对于每个孔，信号作为比例：（665nm/615nm）×10000计算出。

本发明所述化合物显示了对VEGFR2激酶的显著抑制作用。

实施例18：鼠PDGFR FRET生物化学测定

该测定采用96孔黑板（Costar 3915）的格式。使用下文的反应物：铕标记的抗磷酸酪氨酸的抗体pY20、Perand streptavidin-APC、聚GT-生物素以及小鼠PDGFR。所述反应条件如下：在测定缓冲液（50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl₂、0.1mM EDTA、0.015% BRIJ 35、0.1mg/mL BSA、0.1%巯基乙醇）中将1nM小鼠PDGFR与20μMATP、7nM聚GT-生物素、1nM pY20抗体、5nM streptavidin-APC和1% DMSO结合。反应是通过加入酶启动。在每个孔中的最终反应体积为100μL。在90分钟后，所述反应通过加入10μL/孔的5μM星形孢菌素停止。在反应停止约1小时后，将板在Perkin Elmer Victor V多标记计数板上于615和665nM下读出。对于每个孔，信号作为比例：（665nm/615nm）×10000计算出。本发明所述化合物显示了对PDGFR激酶的显著抑制作用。

对于PDGFR和Flk-1的IC50产生，加入化合物，然后进行酶启动。50倍的储液是用在50% DMSO/50%蒸馏水溶液中连续1:3稀释的化合物制备。加入2μL的所述储液至测定中，得到最终的化合物浓度范围在1% DMSO中为10μM-4.56nM。数据表示为抑制作用百分比：%抑制作用=100-（（含有抑制剂的信号-背景）/（不含抑制剂的信号–背景））×100。

实施例19：MDA-MB231增殖测定

将人乳腺癌细胞（MDA MB-231，NCI）在补充10%的热灭活FBS的标准生长培养基（DMEM）中在加湿培养箱中于37°C下在5%的CO₂（v/v）下培养。细胞以每孔3000细胞的密度铺板在96孔培养皿中的90μL生长培养基中。为了确定T0h CTG值，在铺板24小时后，将100μL CellTiter-Glo发光试剂（Promega）加入到每个孔中且在室温下孵育30分钟。在Wallac Victor II仪器中记录发光。所述CellTiter-Glo试剂引起细胞裂解且产生与ATP存在量成比例的发光信号，其转而直接与所存在的细胞的数量成比例。

将测试化合物溶解于100%的DMSO中以制备10mM储液。储液在生长培养基中被进一步以1:400稀释，以产生溶于0.25%DMSO中的25μM测试化合物的工作储液。测试化合物在含有0.25%DMSO的生长培养基中被连续稀释以对所有孔维持恒定的DMSO浓度。60μL被稀释的测试化合物被加入到每个培养孔中以得到最终体积180μL。含有和不含有各个测试化合物的细胞被孵育72个小时，在此时按如前文所述的方法测量ATP依赖的发光以产生T72h值。任选地，所述IC50值可以最小二乘分析程序使用化合物浓度与抑制作用百分数确定。

%抑制作用=[1-（T72h测试-T0h）/（T72h对照-T0h）]×100，其中

T72h测试=在测试产物存在的情况下72小时处的ATP依赖发光

T72h对照=在测试产物不存在的情况下72小时处的ATP依赖发光

T0h=在时间零点的ATP依赖发光

使用该测定时，本发明所述化合物显示了显著的增殖抑制作用。

实施例20：在AoSMC细胞中的pPDGFR-β夹心ELISA

使用标准细胞培养技术将100K P3-P6 Aortic SMC以1000μL体积/孔铺板在12孔簇的每个孔的SGM-2中。第二天，将细胞用1000μLD-PBS冲洗一次，然后将血浆在500μL含有0.1% BSA的SBM（平滑肌细胞基底培养基）中饥饿过夜。化合物在DMSO中用10倍的稀释步骤以从10μM至1nM的剂量范围稀释。最终的DMSO浓度为0.1%。通过快速倒置入槽中移除旧的培养基，然后在37°C下用1小时向对应细胞孔中加入100μL的每种稀释液。然后细胞被用10ng/mLPDGF-BB配体在37°C刺激7分钟。所述培养基被轻轻倒出且加入含有蛋白酶抑制剂片剂（完整；不含EDTA）和0.2mM钒酸钠的150μL等渗细胞裂解缓冲液。细胞在冷藏室的摇床上于4°C下裂解15分钟。裂解物被置于微量离心管中，在其中加入15μL琼脂糖缀合的抗PDGFR-β的抗体且在4°C下孵育过夜。第二天，将小珠用50体积的PBS冲洗3次且在1×LDS样品缓冲液中煮沸5分钟。样品在3-8%梯度的Tris-乙酸盐凝胶上电泳，并转移到硝酸纤维素膜上。将膜在1%BSA/TBS-T中封闭1小时，然后用溶于封闭液中的抗磷酸化-PDGFR-β-b（Tyr-857）抗体（1:1000稀释）孵育1小时。在用TBS-T洗涤3次后，将膜在山羊抗兔HRP IgG（1:25000稀释）中孵育1小时。在加入ECL底物前再进行三次洗涤。膜被暴露于Hyperfilm-ECL。随后，膜被剥离且用针对总PDGFR-β的抗PDGFR-β的抗体再次检测（reprobed）。

表A说明了对p38激酶、PDGFR激酶和VEGFR2激酶的体外激酶生物化学测定的代表性结果。这三个激酶靶标都参与到间质激活和内皮细胞增生中，引起血管生成且提供血液供给至肿瘤组织。

表A

表B说明了用于raf激酶活性的两个细胞测定的代表性结果，其是（i）MDA-MB231细胞中对pERK的抑制作用，raf激酶活性的机器读数，以及（ii）MDA-MB231细胞的增殖测定，raf激酶活性的功能性测定。此外，表B说明了在主动脉平滑肌细胞中PDGFR驱使的PDGFR-β磷酸化作用的结果，其是PDGFR激酶抑制作用的机器读数。

表B

总之，本发明化合物提供对血管生成和肿瘤细胞增殖的抑制作用的独特结合。其也具有对一些关键激酶靶标例如raf、p38、PDGFR和VEGFR-2的改进的抑制谱，所述raf、p38、PDGFR和VEGFR-2均是用于治疗骨质疏松症、炎症疾病和过度增殖疾病包括癌症的目的分子靶标。

可相信本领域的技术人员使用前述的信息和本领域中可用的信息可最大程度的利用本发明。对本领域普通技术人员来说，应当显而易见的是在不偏离本文陈述的本发明的精神或范围下可对本发明作出改变和修饰。上文和下文引用的所有出版物、申请和专利都以引用的方式纳入本说明书中。

上文和下文陈述的主题标题意在指导可在本申请中发现某些信息，但是不旨在作为在本申请中可以找到关于这类标题的信息的唯一来源。

不经进一步详细阐述，可相信本领域技术人员可使用前述的说明最大程度的利用本发明。因此，前述优选的具体实施方案应被解释为仅是说明性的，且不以任何方式限制本公开内容的剩余部分。

在前文所述和实施例中，除非另有说明，所有的温度均未经校正地以摄氏度说明，且所有的份数和百分数均以重量计。

本文引用的所有申请、专利和出版物的完整公开文本以及下文的出版物都以引用的方式纳入本说明书。

1.Wilhelm S et al.“Regorafenib(BAY 73-4506)：identification of clinically relevantmetabolites and their preclinical pharmacology.”American Society of ClinicalOncology(ASCO)Annual Meeting，2010.Abstract no.1666(enclosed).

2.Wilhelm S et al.Mol Cancer Ther 2009；8(suppl)：abs B42.

3.Eisen T et al.Eur J Cancer Suppl 2009；7：424，abs O-71053.

4.Strumberg D et al.J Clin Oncol(Meeting Abstracts)2009；27：16ls，abs 35604.

5.Fabian MA et al.Nat Biotechnol 2005；23：329-336

通过用本发明的概括性或具体描述的反应物和/或操作条件替换前述实施例中所用的那些反应物和/或条件，可重复前述的实施例并获得相似的成功。

从前文的说明看，本领域技术人员可容易地确定本发明的本质特征，且在不偏离其精神和范围的情况下可对本发明作出各种改变和修饰以使其适应各种用法和条件。

Claims (4)

1.式I化合物的M2、M3、M4或M5合成代谢产物或所述合成代谢产物的盐或前药或立体异构体，其中所述式I化合物以及所述M2、M3、M4或M5合成代谢产物的结构为：

代谢产物M-2

代谢产物M-3

代谢产物M-4

代谢产物M-5

2.根据权利要求1的合成代谢产物或所述合成代谢产物的盐或前药或立体异构体，其中M2或M5合成代谢产物具有以下的结构式：

代谢产物M-2

代谢产物M-5

3.一种在受试者中抑制肿瘤生长的方法，包括将根据权利要求1的合成代谢产物或包括所述合成代谢产物的药用组合物给药至所述受试者。

4.一种制备根据权利要求1的合成代谢产物的方法，包括在足以使式I化合物代谢的条件下，将所述式I化合物或其盐与肝微粒体制剂接触且将所述代谢产物从所述制剂中分离出。

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