CN101679362A

CN101679362A - 用于治疗癌症的 4 -{ 4 - [ ({ 3 -叔丁基 - 1 - [ 3 - (羟基甲基 )苯基 ] - 1 h -吡唑 - 5 -基} -氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-n-甲基吡啶-2-甲酰氨及其前药和盐

Info

Publication number: CN101679362A
Application number: CN200780051553A
Authority: CN
Inventors: R·史密斯; D·纳加拉纳姆
Original assignee: Bayer Healthcare LLC
Current assignee: Bayer Pharmaceuticals Corp; Bayer Healthcare LLC
Priority date: 2006-12-20
Filing date: 2007-12-20
Publication date: 2010-03-24
Also published as: JP2010514691A; EP2111401B1; AU2007336873A1; MX2009006579A; ATE498620T1; US20100063107A1; US8101773B2; EP2111401A1; DE602007012589D1; CA2673041A1; IL199403A0; DK2111401T3; WO2008079968A1

Abstract

本发明涉及化合物4－{4－[({3－叔丁基－1－[3－(羟基甲基)苯基]－1H－吡唑－5－基}－氨基甲酰基)－氨基]－3－氟苯氧基}－N－甲基吡啶－2－甲酰胺及其可选形式(例如，盐、溶剂合物、水合物、前药、多晶型物和代谢物)；包含它们的药物组合物；以及使用它们治疗癌症的方法。

Description

用于治疗癌症的4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺及其前药和盐

技术领域

本发明涉及新的羟基甲基苯基吡唑基脲化合物、包含所述化合物的药物组合物、以及这些化合物或组合物以单一药剂或者以和其他活性组分例如细胞毒性治疗剂的组合的形式，在治疗过度增殖和/或血管发生病症中的应用。

背景技术

为了支持大小超过1-2mm³的进行性肿瘤生长，公认肿瘤细胞需要功能性基质，它是由成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、细胞外基质蛋白和可溶性因子组成的支撑结构(Folkman，J.，Semin Oncol，2002，29(6 Suppl16)，15-8)。通过分泌可溶性生长因子例如PDGF和转化生长因子-β(TGF-β)，肿瘤诱导基质组织的形成，由此刺激宿主细胞分泌互补因子(complimentary factor)例如成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。这些刺激因子诱导新血管形成或者血管发生，由此将氧和养分运送至肿瘤并使其生长并且为转移提供途径。人们相信与抑制基质形成有关的某些治疗剂会抑制多种组织学类型的内皮肿瘤的生长。(George，D.Semin Oncol，2001，28(5 Suppl 17)，27-33；Shaheen，R.M.，等，Cancer Res，2001，61(4)，1464-8；Shaheen，R.M.，等，Cancer Res，1999，59(21)，5412-6)。然而，由于复杂性和血管发生过程和肿瘤进程中涉及的多种生长因子，靶向单一路径的药剂可能具有有限的效力。期望提供针对多种被肿瘤利用从而在宿主基质中诱导血管发生的关键性信号转导途径的治疗剂。其包括例如PDGF(基质形成的有效刺激素，Ostman，A.和C.H.Heldin，Adv Cancer Res，2001，80，1-38)、FGF(化学引诱剂及成纤维细胞和内皮细胞的促细胞分裂剂)和VEGF(血管化作用的有效调节剂)。HGF(肝细胞生长因子)代表另一种受关注的信号转导生长因子。

PDGF是基质形成的关键性调节剂，其由许多肿瘤以旁分泌的形式分泌，并且人们相信其促进成纤维细胞、平滑肌和内皮细胞的生长，促进基质形成和血管发生。PDGF起初被认为是猿猴肉瘤病毒的v-sis癌基因产物(Heldin，C.H.，等，J Cell Sci Suppl，1985，3，65-76)。此生长因子由被称为A链或B链的两个肽链组成，它们的一级氨基酸序列共享60％的同源性。所述链经二硫化物交联而形成30kDa的成熟蛋白，其包含AA、BB或者AB同二聚体或异二聚体。在血小板中发现高水平的PDGF，并且其由内皮细胞核血管平滑肌细胞表达。此外，在例如那些在血管化作用不良的肿瘤组织中发现的低氧条件下，PDGF的生成被上调(Kourembanas，S.，等，KidneyInt，1997，51(2)，438-43)。PDGF高亲和力地结合至PDGF受体(1106个氨基酸，124kDa的跨膜酪氨酸激酶受体，Heldin，C.H.，A.Ostman，和L.Ronnstrand，Biochim Biophys Acta，1998，1378(1)，79-113)。发现PDGFR为同二聚体链或异二聚体链的形式，其整个氨基酸序列具有30％的同源性且其激酶结构域间具有64％的同源性(Heldin，C.H.，等，Embo J，1988，7(5)，1387-93)。PDGFR是具有断裂激酶结构域的酪氨酸激酶受体家族(包括VEGFR2(KDR)、VEGFR3(Flt4)、c-Kit和FLT3)的成员。PDGF受体主要在成纤维细胞、平滑肌细胞和周细胞上表达，并且较少程度地在神经元、肾小球细胞、莱迪希细胞和中枢神经系统的许旺氏细胞上表达。当PDGF结合至受体时，其诱导受体二聚作用并进行酪氨酸残基的自身磷酸化和转磷酸化，这增强受体的激酶活性并且通过SH2蛋白结合结构域的活化而促进下游效应物的募集(recruitment)。许多信号转导分子与活化的PDGFR(包括PI-3-激酶、磷脂酶C-γ、src和GAP(p21-ras的GTP酶活化蛋白))形成复合物(Soskic，V.，等，Biochemistry，1999，38(6)，1757-64)。通过PI-3-激酶的活化，PDGF活化诱导细胞活动性和迁移的Rho信号转导途径，并且通过GAP的活化，通过p21-ras和MAPK信号转导途径的活化诱导有丝分裂发生。

在成体中，人们相信PDGF的主要功能是促进和增加伤口愈合速率并且维持血管内环境稳定(Baker，E.A.和D.J.Leaper，Wound Repair Regen，2000，8(5)，392-8；Yu，J.，A.Moon，和H.R.Kim，Biochem Biophys ResCommun，2001，282(3)，697-700)。除了在伤口愈合中的作用外，已知PDGF有助于维持血管内环境稳定。在新血管的生长期间，PDGF募集血管的结构完整性所需的周细胞和平滑肌细胞。在肿瘤新血管形成的过程中，认为PDGF起到相似的作用。作为其在血管发生中的部分功能，PDGF控制组织间隙(interstitial)液压，通过其对结缔组织细胞和细胞外基质之间的相互作用的调节来调节血管的通透性。抑制PDGFR的活性可以降低组织间隙压并且促使细胞毒素流入肿瘤，改善这些药剂的抗肿瘤效力(Pietras，K.，等，CancerRes，2002，62(19)，5476-84；Pietras，K.，等，Cancer Res，2001，61(7)，2929-34)。

通过对基质细胞或肿瘤细胞上的PDGFR受体直接的旁分泌或者自分泌刺激，或者通过受体的扩增或通过重组进行的受体活化，PDGF可以促进肿瘤生长。据推测通过PDGF对基质形成和诱导血管发生的直接作用，过表达的PDGF可以转化人黑素瘤细胞和角质形成细胞(不表达PDGF受体的两种细胞类型)(Forsberg，K.，等，Proc Natl Acad Sci U S A.，1993.90(2)，393-7；Skobe，M.和N.E.Fusenig，Proc Natl Acad Sci U S A，1998.95(3)，1050-5)。在结肠癌、肺癌、乳腺癌和前列腺癌中也观察到这种肿瘤基质的旁分泌刺激(Bhardwaj，B.，等，Clin Cancer Res，1996，2(4)，773-82；Nakanishi，K.，等，Mod Pathol，1997，10(4)，341-7；Sundberg，C.，等，Am J Pathol，1997，151(2)，479-92；Lindmark，G.，等，Lab Invest，1993，69(6)，682-9；Vignaud，J.M.，等，Cancer Res，1994，54(20)，5455-63)，其中肿瘤表达PDGF，但是不表达受体。已报导在胶质母细胞瘤(Fleming，T.P.，等，Cancer Res，1992，52(16)，4550-3)、软组织肉瘤(Wang，J.，M.D.Coltrera，和A.M.Gown，CancerRes，1994，54(2)，560-4)和卵巢癌(Henriksen，R.，等，Cancer Res，1993，53(19)，4550-4)、前列腺癌(Fudge，K.，C.Y.Wang，和M.E.Stearns，Mod Pathol，1994，7(5)，549-54)、胰腺癌(Funa，K.，等，Cancer Res，1990，50(3)，748-53)和肺癌(Antoniades，H.N.，等，Proc Natl Acad Sci U S A，1992，89(9)，3942-6)中的肿瘤细胞生长的自分泌刺激，其中被分析的大部分肿瘤既表达配体PDGF也表达受体。较少程度地观察到受体的配体无关性活化，但是在慢性骨髓单核细胞白血病(CMML)中已有报导，其中染色体易位事件在Ets-样转录因子TEL和PDGF受体之间形成融合蛋白。此外，已在胃肠基质肿瘤中发现PDGFR中的活化突变，其中不涉及c-Kit的活化(Heinrich，M.C.，等，Science，2003，9，9)。

某些PDGFR抑制剂干扰肿瘤基质生长，并且被认为抑制肿瘤生长和转移。

在胚胎发育期和某些血管发生-依赖性疾病中的血管发生和血管生成(vasculogenesis)的另一种主要调节剂是血管内皮生长因子(VEGF；也被称为血管通透性因子VPF)。VEGF代表由于可选择的RNA剪接而以同二聚体形式存在的促分裂原的同工型家族。据报导VEGF同工型对血管内皮细胞是高度特异的(综述，参见：Farrara等，Endocr.Rev.1992，13，18；Neufield等，FASEB J.1999，13，9)。

据报导VEGF的表达受缺氧(Shweiki等，Nature 1992，359，843)，以及各种细胞因子和生长因子例如白细胞介素-1、白细胞介素-6、表皮生长因子和转化生长因子诱导。迄今为止，已报导了VEGF和VEGF家族成员结合至三种跨膜受体酪氨酸激酶中的一种或多种(Mustonen等，J.Cell Biol.，1995，129，895)、VEGF受体-1(也称为flt-1(fms-样酪氨酸激酶-1))、VEGFR-2(也称为含激酶插入域受体(KDR)，KDR的鼠类似物也称为胎肝激酶-1(flk-1))，和VEGFR-3(也称为flt-4)。已证明KDR和flt-1具有不同的信号转导性质(Waltenberger等，J.Biol.Chem.1994，269，26988)；Park等，Oncogene 1995，10，135)。因此，在完整的细胞中，KDR经历强的配体-依赖性酪氨酸磷酸化，而flt-1表现出微弱的反应。因此，人们相信对于诱导整个VEGF-介导的生物反应谱，与KDR结合是关键性的必要条件。

在体内VEGF在血管生成中具有决定性作用，并且诱导血管发生和血管的透化。失调的VEGF表达促使以异常的血管发生和/或超通透性(hyperpermeability)过程为特征的许多疾病的发生。人们相信通过某些药剂调节VEGF-介导的信号转导级联可以为异常的血管发生和/或超通透性过程的控制提供有效的模式。

血管内皮生长因子(VEGF、VEGF-C、VEGF-D)和它们的受体(VEGFR2、VEGFR3)不仅是肿瘤血管发生的关键调节剂，也是淋巴管形成的关键调节剂。VEGF、VEGF-C和VEGF-D在大多数肿瘤中表达，主要在肿瘤生长期表达，经常以基本上增长的水平表达。VEGF表达受缺氧、细胞因子、癌基因例如ras刺激，或者是受肿瘤抑制基因的失活刺激(McMahon，G.Oncologist 2000，5(Suppl.1)，3-10；McDonald，N.Q.；Hendrickson，W.A.Cell1993，73，421-424)。

VEGF的生物活性通过与它们的受体结合来介导。人们相信VEGFR3(也称为Flt-4)主要在正常成体组织内的淋巴内皮上表达，并且新生淋巴管的形成需要VEGFR3的功能，但是对于已存在的淋巴管的维持则不需要VEGFR3的功能。在肿瘤中，VEGFR3也在血管内皮上上调。最近，VEGFR3的配体VEGF-C和VEGF-D已被认为是哺乳动物中淋巴管形成的调节剂。由肿瘤相关性的淋巴管形成因子诱导的淋巴管形成可能促进新生血管生长入肿瘤，使肿瘤细胞接近体循环。侵入淋巴管的细胞可以通过胸导管找到进入血流的路径。肿瘤表达的研究使得可以将VEGF-C、VEGF-D和VEGFR3的表达与直接与原发肿瘤的扩散能力相关的临床病理学因素(例如，淋巴结转移(involvement)、淋巴侵入、次级转移和无病存活(disease-freesurvival))直接进行对比。在许多情况中，这些研究证明淋巴发生因子的表达和原发性实体肿瘤转移能力之间的统计学上的相关性(Skobe，M.等，Nature Med.2001，7(2)，192-198；Stacker，S.A.等，Nature Med.2001，7(2)，186-191；Makinen，T.等，Nature Med.2001，7(2)，199-205；Mandriota，S.J.等，EMBO J.2001，20(4)，672-82；Karpanen，T.等，Cancer Res.2001，61(5)，1786-90；Kubo，H.等，Blood 2000，96(2)，546-53)。

在恶性细胞中，缺氧似乎是产生VEGF的重要刺激因素。对于由肿瘤细胞应答缺氧而引起的VEGF诱导，需要p38MAP激酶的活化(Blaschke，F.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.2002，296，890-896；Shemirani，B.等，Oral Oncology 2002，38，251-257)。除了通过调节VEGF的分泌而参与血管发生外，p38MAP激酶还促进恶性细胞侵袭，并且通过调节胶原酶的活性和尿激酶纤溶酶激活物的表达来促进不同肿瘤类型的转移(Laferriere，J.等，J.Biol.Chem.2001，276，33762-33772；Westermarck，J.等，Cancer Res.2000，60，7156-7162；Huang，S.等，J.Biol.Chem.2000，275，12266-12272；Simon，C.等，Exp.Cell Res.2001，271，344-355)。

对于以治疗和预防癌症为目标的药物的制备，受体酪氨酸激酶TrkA是另一个受关注的目标。TrkA是神经生长因子(NGF)的高亲和力的受体。人们相信TrkA和NGF在肿瘤中的表达涉及肿瘤例如胰腺肿瘤、前列腺肿瘤还有乳腺肿瘤的增殖和转移，还涉及血管发生。据报导TrkA在胰腺肿瘤、乳腺肿瘤、卵巢肿瘤和前列腺肿瘤中表达。近期的研究证明人类前列腺肿瘤细胞和胰腺肿瘤细胞可以分泌NGF，它和它的受体TrkA一同产生促进这些肿瘤细胞的生长和存活的自分泌循环(Ruggeri，B.A.等，Curr.Med.Chem.1999，6：845-857；Weeraratna，A.T.等，The Prostate 2000，45：140-148)。已假定通过小分子TrkA抑制剂(Miknyoczki，S.J.等，Clin.Cancer Res.1999，5：2205-2212；George，D.J.等，Cancer Res.1999，59：2395-2401；Weeraratna，A.T.等，Clin.Cancer Res.2001，7：2237-2245)和抗-NGF抗体(Miknyoczki，S.J.等，Clin.Cancer Res.2002，8：1924-1931)对NGF-TrkA信号转导途径的抑制在异种移植模型中不仅抑制神经内分泌肿瘤的生长，而且抑制它的转移。此外，已证明NGF诱导内皮细胞增殖(Cantarella，G.等，FASEB J.2002，16：1307)。这些细胞形成新血管网络以为生长中的肿瘤供应养分，并且也表达VEGFR2酪氨酸激酶受体。这些受体经它们的配体活化导致内皮细胞增殖、迁移和血管形成和稳定化(Albo，D.等，Curr.Pharm.Des.2004，10：27-37；Thurston，G.，Cell Tissue Res.2003，31：61-68)。

原癌基因c-Met是受体酪氨酸激酶家族的成员，它编码由140-kDa的跨膜β链和50-kDa的细胞外α链组成的异二聚体复合物。此异二聚体复合物充当肝细胞生长因子(HGF)或者分散因子(SF)的高亲和力受体。对于正常哺乳动物发育而言，c-Met/HGF信号转导是必须的，并且已证明它在细胞生长、迁移、形态分化和三维管状结构的组构(例如肾小管细胞、腺体形成等)中特别重要。c-Met和HGF在各种组织中广泛地表达，并且它们的表达通常局限于分别源自上皮和间充质的细胞。目前若干令人信服的证据表明HGF/c-Met信号转导在各种组织学类型的肿瘤的生长和恶性进展中具有重要作用。在裸小鼠中，异位过度表达c-Met或HGF的细胞系变为致瘤的和转移性的，而c-Met的下调降低它们的致瘤可能性。发现HGF-依赖性自分泌循环与骨肉瘤、横纹肌肉瘤和乳腺癌有关(Trusolino和Comoglio，Nat RevCancer，2002，2，289-300)。c-Met或者HGF转基因小鼠产生转移性肿瘤(Wang，R.等，J.Cell Biol.2001，153，1023-1034；Takayama等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1997，94，701-706)。在许多种类的实体肿瘤中已发现了c-Met表达的过度表达并且其与预后不良有关(Birchmeier，等，Mol.Cell Biol.，2003，4，915-925；Christensen，J.和Salgia，R.，Can Lett.，2005，225，1-26)。将c-Met和人类癌症联系在一起的确切的证据来自于使患有遗传性乳头状肾癌的患者中的活化突变的种系的识别(Dharmawardana，等，Curr.Mol.Med.，2004，4，855-868).最后，在许多胃肿瘤中观察到c-Met基因的扩增(Ponzetto，C.等，Oncogene.1991，6，553-9)。

因为c-Met/HGF信号转导途径和致瘤及肿瘤进展之间的紧密相关性，许多研究组已探究了若干种治疗方法。深入研究了HGF/SF-中和抗体(Cao等，Proc Natl Acad Sci USA 2001，98，7443-8)、c-Met反义寡核苷酸(Kitamura等，Br J Cancer 2000，83：668-73)、Met蛋白的显性失活型(Firon等，Oncogene 2000，19，2386-97；Furge等，Proc Natl Acad Sci USA 2001，98，10722-7)、靶向Met mRNA的核酶(Abounader等，J Natl Cancer Inst，1999，91，1548-56；Abounader等，FASEB J 2002，16，108-10)和小分子c-Met激酶抑制剂(Christensen等，Cancer Res 2003，63，7345-55)作为可能的策略以阻断c-Met活化和抑制肿瘤生长、侵袭和转移。因此，识别c-Met激酶活性的有效抑制剂具有抑制各种癌症类型的肿瘤生长的巨大的潜力。

慢性骨髓性白血病(CML)由致癌蛋白Bcr-Abl引起(Groffen，J.等，JCell Physiol Suppl，1984，3，179-191，Sattler，M.和Griffin，J.D.，SeminHematol，2003，40，4-10)。费城染色体是CML的特征，它是因为染色体9和染色体22之间的相互易位而在CML患者内形成(Rowley，J.D.，Nature，1973，243，290-293)，并且这种易位导致形成Bcr-Abl融合蛋白(Groffen，J.和Heisterkamp，N.，Baillieres Clin Haematol，1987，1，983-999)。Abl蛋白是非受体酪氨酸激酶，在正常细胞中它的活性被严格地调节。然而，由于N-末端存在Bcr蛋白，Bcr-Abl融合蛋白被组成性活化。在骨髓性母细胞期，组成性活化蛋白转化，因此引起CML(Kelliher，M.A.，等，Proc Natl Acad SciUSA，1990，87，6649-6653)。尽管210kDa蛋白是CML中最常见的，但取决于参与易位的染色体上的确切的断裂点，融合蛋白的大小在185至230kDa间变化。

开发伊马替尼(Gleevec

，STI571)作为Bcr-Abl蛋白的抑制剂以治疗CML患者开创了肿瘤学中的靶向治疗领域(Capdeville，R.，等，Nat Rev DrugDiscov，2002，1，493-502)。已发现在血液学和细胞遗传学水平上，患有早期CML的患者的反应率大于90％(Deininger，M.等，Blood，2005，105，2640-2653，Talpaz，M.等，Blood，2002，99，1928-1937)。然而，在长期治疗后，大部分患者产生对伊马替尼的耐药性(Gorre，M.E.和Sawyers，C.L.，Curr Opin Hematol，2002，9，303-307)。迄今位置，在患者中已观察到多于30种Bcr-Abl的伊马替尼-耐药性突变，并且这些突变的大部分局限于融合蛋白激酶区域中的子域。重要的是，三种突变，即T315I、E255K和M351T，代表多于50％的伊马替尼耐药性(Deininger，M.，Buchdunger，E.和Druker，B.J.，Blood，2005，105，2640-2653)。

最近，已有许多致力于克服CML患者中的伊马替尼耐药性的尝试。例如，已报导BMS-354825(达沙替尼)是Bcr-Abl的抑制剂，并且也是Src家族激酶的抑制剂。据报导，在基于细胞分析测定的15种伊马替尼-耐药性的Bcr-Abl突变中，除了T315I之外，BMS-354825抑制该蛋白的所有突变形式(Shah，N.P.，等，Science，2004，305，399-401)。据报导化合物AMN-107(尼洛替尼)对Bcr-Abl激酶活性的抑制比伊马替尼强多于20倍。据报导，除了T315I之外，AMN-107抑制大部分伊马替尼-耐药性Bcr-Abl突变。在生化分析中，AMN-107也表现出对E255K突变体略弱的抑制(Weisberg，E.，等，Cancer Cell，2005，7，129-141)。因此，对于用于治疗CML和伊马替尼-耐药性CML的新疗法存在重要的未满足的医学需要。

已描述了某些二芳基脲具有作为丝氨酸-苏氨酸激酶和/或酪氨酸激酶抑制剂的活性。已证明这些二芳基脲作为药物组合物中的活性成分在治疗癌症、血管发生疾病和炎性疾病中的用途。参见Redman等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，9-12；Smith等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，2775-2778；Dumas等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，2047-2050；Dumas等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，2051-2054；Ranges等，Book ofAbstracts，220^thACS National Meeting，2000，Washington，DC，USA，MEDI 149；Dumas等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2002，12，1559-1562；Lowinger等，Clin.Cancer Res.2000，6(suppl.)，335；Lyons等，Endocr.-Relat.Cancer 2001，8，219-225；Riedl等，Book of Abstracts，92^nd AACR Meeting，2001，New Orleans，LA，USA，abstract 4956；Khire等，Book of Abstracts，93^rdAACR Meeting，2002，San Francisco，CA，USA，abstract 4211；Lowinger等，Curr.Pharm.Design2002，8，99-110；Regan等，J.Med.Chem.2002，45，2994-3008；Pargellis等，Nature Struct.Biol.2002，9(4)，268-272；Carter等，Book of Abstracts，92^ndAACR Meeting，2001，New Orleans，LA，USA，abstract 4954；Vincent等，Book of Abstracts，38^th ASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 1900；Hilger等，Book of Abstracts，38^th ASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 1916；Moore等，Book of Abstracts，38^th ASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 1816；Strumberg等，Book of Abstracts，38^th ASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 121；Madwed，Book of Abstracts，ProteinKinases：Novel Target Identification and Validation for TherapeuticDevelopment，San Diego，CA，USA，2002；Roberts等，Book of Abstracts，38thASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 473；Tolcher等，Book ofAbstracts，38^th ASCO Meeting，2002，Orlando，FL，USA，abstract 334；和Karp等，Book of Abstracts，38^th AACR Meeting，San Francisco，CA，USA，abstract2753。

某些脲衍生物，包括某些吡唑基苯基脲已被确认为蛋白激酶例如raf激酶和p38激酶的有效抑制剂，并且这些化合物在Dumas，J.等人，“Inhibition of p38 Kinase Activity using Atyl-and Heteroaryl-SubstitutedHeterocyclic Ureas”，PCT Int.Appl.，WO 99 32110；和Dumas，J.等，“Inhibition of Raf Kinase using Aryl-and Heteroaryl Substituted HeterocyclicUreas”，PCT Int.Appl.，WO 9932455中已有描述。在WO 9932110中关注的一种吡唑基苯基脲化合物是实施例37，即1-[5-叔丁基-2-(4-氟-苯基)-2H-吡唑-3-基]-3-[4-(吡啶-4-基氧基)-苯基]-脲。在Regan，J.R.等人，“AromaticHeterocyclic Compounds as Anti-Inflammatory Agents”，PCT Int.Appl.，WO99 23091中也描述了相关的受关注的吡唑化合物。更新近地，已发现在吡唑基-N-苯基基团上含有官能团化的“末端基团”作为取代基的某些吡唑基苯基脲是有效的蛋白激酶抑制剂，对例如VEGFR2、PDGFR和Trk-A具有抑制活性；在Lee，W.等，“Substituted Pyrazolyl Urea Derivatives Useful in theTreatment of Cancer”，PCT Int.Appl.，WO 2005 110994中描述了这些化合物。最近发现其它受关注的吡唑基苯基脲化合物是例如VEGFR2、c-Met、Bcr-Abl和Bcr-Abl的各种突变的有效抑制剂，并且在Smith，R.等人，“UreaCompounds Useful in the Treatment of Cancer”，PCT Int.Appl.US/0645976，12/1/2006提交，题为“Urea Compounds Useful in the Treatment of Cancer.”中描述了这些化合物。例如在Smith，R.等人的同一专利申请中的受关注的化合物引入4-(4-氨基-苯氧基)-吡啶-2-羧酸甲基酰胺片段，或者4-(4-氨基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-羧酸甲基酰胺片段，或者4-(4-氨基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-羧酸酰胺片段。在Hoelzemann，G.等人，“Pyrazole Derivatives”，PCT Int.Appl.，WO 2006/105844中也描述了相关的受关注的吡唑化合物。本发明的化合物和组合物特别引人关注，因为它们显示出对抗如VEGFR2、野生型Bcr-Abl，和Bcr-Abl的各种突变的有效活性，并且显示出理想的物理化学性质例如在水和有机介质中的溶解度以及理想的体内药代动力学学和药理学特性。

尽管在本领域有进展，但仍然需要癌症治疗和抗癌化合物。

可以例如通过本发明的化合物在下文所述的体外肿瘤细胞增殖分析中的活性来说明它们的应用。在本领域中公知肿瘤细胞增殖分析中的活性和临床环境中的抗肿瘤活性之间的关联性。例如，利用体外肿瘤增殖分析证明紫杉醇(Silvestrini等，Stem Cells 1993，11(6)，528-35)、泰索帝(Bissery等，Anti Cancer Drugs 1995，6(3)，339)和拓扑异构酶抑制剂(Edelman等，CancerChemother.Pharmacol.1996，37(5)，385-93)的治疗用途。

本文中所述的化合物和组合物，包括它们的盐和酯，显示出抗增殖活性，并因此可用于预防或治疗与过度增殖相关的疾病。

发明内容

已发现新的羟基苯基吡唑基脲化合物是VEGFR激酶、野生型Bcr-Abl和Bcr-Abl的各种突变(包括T315I)的有效抑制剂，它们都是在治疗增生性疾病(包括癌症)中关注的分子靶点。

本发明涉及；

(i)新化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和及其盐、溶剂合物、水合物、前药、多晶型物及代谢物，包括以分离的立体异构体形式存在或在立体异构体的混合物中的其盐或前药的非对映异构体形式；

(ii)新化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)或其盐、溶剂合物、水合物、前药、多晶型物或代谢物(包括其盐和前药的非对映异构体形式)的药物组合物，和

(iii)单一药剂形式或与细胞毒性治疗剂组合形式的(i)或(ii)在治疗过度增殖和血管发生疾病中的应用。

化合物(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)及其盐、水合物、溶剂合物、前药、多晶型物及代谢物(包括盐和前药的非对映异构体形式)被统称为“本发明的化合物”。

化合物(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的代谢物包括其氧化衍生物，其中一个或多个氮被羟基基团取代。所述代谢物还包括化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的类似物，其中的甲基酰胺基团通过代谢降解被脱甲基化。代谢物还包括化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的氧化衍生物，其中吡啶基团的氮原子可以是氧化物形式(或者具有羟基取代基)并且包括在本领域被称为1-氧代-吡啶和1-羟基-吡啶的那些结构。

在本文中使用的化合物、盐等词的复数形式时其也意指单数的化合物、盐等。

(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的药学可接受的盐的应用也在本发明的范围内。术语“药学可接受的盐”是指相对无毒性的无机酸或有机酸的加成盐。例如，参见S.M.Berge，等，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.1977，66，1-19。

化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的代表性盐包括常规的无毒性盐，例如通过本领域熟知的方法由无机酸或有机酸形成的盐。例如，这样的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。

用于本发明目的的溶剂合物是其中溶剂分子形成固态复合物的本发明化合物的那些形式，并且溶剂分子包括但不局限于例如乙醇和甲醇。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中溶剂是水。

化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物可以进一步用不稳定的官能团(在体内给药后这些基团被切断而得到母体活性剂)和药理学上无活性的衍生化(官能化)基团修饰。这些衍生物通常被称为前药，可以用于例如改变活性剂的物理化学性质、使活性剂靶向特定组织、改变活性剂的药代动力学和药效学性质，以及减少不良副作用。

化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)和本发明的其他化合物的前药包括例如可以通过羟基基团的酰化而制备的高耐受性且药学可接受的酯。这样的酯前药的实例包括由乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、丁二酸和甲氧基乙酸制备而得的酯。酯前药的其他实例包括由氨基酸例如D-丙氨酸、L-丙氨酸、D-缬氨酸、L-缬氨酸、β-丙氨酸等制备而得的酯。酯前药的其他实例包括可以经双(叔丁基)磷酸酯制备而得的磷酸酯。

在关于该主题的以下综述中描述了用于合成前药的方法，对这些方法的描述通过引用并入本文：Higuchi，T.；Stella，V.eds.Prodrugs As Novel DrugDelivery Systems.ACS Symposium Series.American Chemical Society：Washington，DC(1975)；Roche，E.B.Design of Biopharmaceutical Propertiesthrough Prodrugs and Analogs.American Pharmaceutical Association：Washington，DC(1977)；Sinkula，A.A.；Yalkowsky，S.H.J Pharm Sci.1975，64，181-210；Stella，V.J.；Charman，W.N.Naringrekar，V.H.Drugs 1985，29，455-473；Bundgaard，H.，ed.Design of Prodrugs.Elsevier：New York(1985)；Stella，V.J.；Himmelstein，K.J.J.Med.Chem.1980，23，1275-1282；Han，H-K；Amidon，G.L.AAPS Pharmsci 2000，2，1-11；Denny，W.A.Eur.J.Med.Chem.2001，36，577-595；Wermuth，C.G.in Wermuth，C.G.ed.The Practice ofMedicinal Chemistry Academic Press：San Diego(1996)，697-715；Balant，L.P.；Doelker，E.in Wolff，M.E.ed.Burgers Medicinal Chemistry And DrugDiscovery John Wiley & Sons：New York(1997)，949-982。

本发明的化合物的盐或前药可包含一个或多个不对称中心。不对称碳原子可以以(R)或(S)构型或者(R，S)构型存在。环上取代基也可以以顺式或反式的形式存在。意图将所有这样的构型(包括对映异构体和非对映异构体)都包括在本发明范围内。优选的异构体是产生更理想的生物活性的构型的那些异构体。本发明化合物的分离的、纯的或部分纯化的异构体或外消旋混合物也包括在本发明的范围内。通过本领域已知的标准技术可以进行所述异构体的纯化和所述异构体混合物的分离。

在实施例1中描述了制备化合物：(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)的具体方法。在实施例2至7中描述了盐形式的制备。

可以通过可选方法制备实施例1(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)。在专利文献中已描述了二芳基脲(包括吡唑基脲)的具体制备，并且其适用于本发明的化合物。例如，Miller S.等，“Inhibition of p38 Kinase usingSymmetrical and Unsymmetrical Diphenyl Ureas”PCT Int.Appl.WO 9932463；Miller，S等，“Inhibition of raf Kinase using Symmetrical and UnsymmetricalSubstituted Diphenyl Ureas”PCT Iht.Appl.，WO 99 32436；Dumas，J.等，“Inhibition of p38 Kinase Activity using Substituted Heterocyclic Ureas″PCTInt.Appl.，WO 99 32111；Dumas，J.等，“Method for the Treatment ofNeoplasm by Inhibition of raf Kinase using N-Heteroaryl-N’-(hetero)arylureas″PCT Int.Appl.，WO 99 32106；Dumas，J.等，“Inhibition of p38 Kinase Activityusing Aryl-and Heteroaryl-Substituted Heterocyclic Ureas”PCT Int.Appl.，WO 99 32110；Dumas，J.，等，“Inhibition of raf Kinase using Aryl-andHeteroaryl-Substituted Heterocyclic Ureas”PCT Int.Appl.，WO 99 32455；Riedl，B.，等，“O-Carboxy Aryl Substituted Diphenyl Ureas as raf KinaseInhibitors”PCT Int.Appl.，WO 2000 42012；Riedl，B.，等，“O-Carboxy ArylSubstituted Diphenyl Ureas as p38 Kinase Inhibitors”，PCT Int.Appl.，WO 200041698；Dumas，J.等，”Heteroaryl ureas containing nitrogen hetero-atoms as p38kinase inhibitors”，U.S.Pat.Appl.Publ.，US 20020065296；Dumas，J.等，”Preparation of N-aryl-N′-[(acyl-phenoxy)-phenyl]ureas as raf kinase irhibitors″，PCT Int.Appl.，WO 2002 62763；Dumas，J.等，″Inhibition of rafkinase usingquinolyl，isoquinolyl or pyridyl ureas″，PCT Int.Appl.，WO 2002 85857；Dumas，J.等，”Preparation of quinolyl，isoquinolyl or pyridyl-ureas as inhibitors of rafkinase for the treatment of tumors and/or cancerous cell growth”U.S.Pat.Appl.Publ.，US 20020165394；Lee，W.等，“Substituted Pyrazolyl Urea DerivativesUseful in the Treatment of Cancer”，PCT Int.Appl.，WO 2005 110994。所有前述专利申请都通过引用并入本文中。

可以在本发明的化合物的合成以及在本发明化合物的合成中涉及的中间体的合成中使用的合成转换方法是本领域技术人员熟知的或易获得的。许多合成转换方法可以在编辑物中找到，如：

J.March.Advanced Organic Chemistry，4th ed.；John Wiley：New York(1992)

R.C.Larock.Comprehensive Organic Transformations，2nd ed.；Wiley-VCH：New York(1999)

F.A.Carey；R.J.Sundberg.Advanced Organic Chemistry，2nd ed.；PlenumPress：New York(1984)

T.W.Greene；P.G.M.Wuts.Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.；John Wiley：New York(1999)

L.S.Hegedus.Transition Metals in the Synthesis of Complex OrganicMolecules，2nd ed.；University Science Books：Mill Valley，CA(1994)

L.A.Paquette，Ed.The Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis；John Wiley：New York(1994)

A.R.Katritzky；O.Meth-Cohn；C.W.Rees，Eds.Comprehensive OrganicFunctional Group Transformations；Pergamon Press：Oxford，UK(1995)

G.Wilkinson；F.G A.Stone；E.W.Abel，Eds.ComprehensiveOrganometallic Chemistry；Pergamon Press：Oxford，UK(1982)

B.M.Trost；I.Fleming.Comprehensive Organic Synthesis；Pergamon Press：Oxford，UK(1991)

A.R.Katritzky；C.W.Rees Eds.Comprehensive Heterocylic Chemistry；Pergamon Press：Oxford，UK(1984)

A.R.Katritzky；C.W.Rees；E.F.V.Scriven，Eds.ComprehensiveHeterocylic Chemistry II；Pergamon Press：Oxford，UK(1996)

C.Hansch；P.G.Sammes；J.B.Taylor，Eds.Comprehensive MedicinalChemistry：Pergamon Press：Oxford，UK(1990).

另外，反复出现的合成方法和相关主题的综述包括：Organic Reactions；John Wiley：New York；Organic Syntheses；John Wiley：New York；Reagentsfor Organic Synthesis：John Wiley：New York；The Total Synthesis of NaturalProducts；John Wiley：New York；The Organic Chemistry of Drug Synthesis；John Wiley：New York；Annual Reports in Organic Synthesis；Academic Press：San Diego CA；和Methoden der Organischen Chemie(Houben-Weyl)；Thieme：Stuttgart，German。此外，合成转化的数据库包括Chemical Abstracts，其可通过CAS Online或SciFinder进行搜索，Handbuchder Organischen Chemie(Beilstein)，其可通过SpotFire进行搜索，以及REACCS。

本发明还涉及筛选患者以测定他们对本发明化合物的敏感性的方法。例如本发明涉及选择患有待治疗疾病的对象的方法，该方法以任何有效的顺序包括一个或多个以下步骤，例如，测量在获自患病的对象的样品中的Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的表达或者活性，并且将本发明的化合物给药至确诊为表达或活性水平改变(例如高或活化)的对象。

术语“敏感性”被广泛地用于表示例如对毒性或其它不利影响等作出反应的能力。例如，本发明涉及确定疾病是否可以被本文中公开的化合物调节的方法，该方法包括测量在患有所述疾病的细胞中Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的表达或者活性。所得结果可以用于确定或预测对象是否会对本发明的化合物有反应。例如，当所述疾病是肿瘤时，该方法可以用于预测该肿瘤是否对本发明的化合物敏感。术语“敏感的”是指可以用它来治疗此肿瘤，例如使肿瘤消退或细胞死亡、抑制细胞增殖、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤转移等。

可以常规地测定疾病例如肿瘤是否对本发明的化合物敏感。例如，为了确定Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的活性的存在和/或不存在，以及它们的水平，可以对显示出病症的细胞或组织(例如，肿瘤细胞、活组织检查样品等)进行分析。当验明表达和/或活性水平异常(例如高)时，这可能表明对象会对本发明的化合物作出反应，并且得益于本发明的化合物。基因表达的水平(例如mRNA水平)、基因扩增的水平或者基因产物活性(例如酪氨酸激酶活性)的水平可以用于表征与相应基因和信号转导途径相关的细胞状态。例如，本发明的靶基因具有酪氨酸激酶活性，并因此激酶活性可以被用于评价细胞或组织的状态。在下文的实施例中，通过研究底物被其磷酸化的水平来测量其活性。可以定量地(例如使用同位素、光谱法等)或半定量地进行，如在实施例中直观地评价水平并且指定+1至+4的强度水平。例如，具有高水平的被磷酸化的底物的细胞或组织(和显示出活性增强的大量的细胞)可以被认为具有高水平的激酶活性，并因此作为用本发明化合物治疗的候选者。可以评价多于一种的活性，并且由若干靶所得的结果可以用于确定对象的疾病(例如肿瘤)是否会对本发明的化合物作出反应。

靶活性的水平可以与对照或其它标准比较。因此，例如“高”水平可以是其中与用作对比的标准或对照相比，细胞表达统计学上较大量的测得活性或被磷酸化的底物的水平。高水平也可以是其中25％或更多的细胞表达靶活性。

该方法可以进一步包括将样品中的表达和正常对照物进行对比，或者与得自正常或未受影响的组织的样品中的表达进行对比的步骤。可以和标准在电子表格中(例如与数据库)等进行人工对比。正常对照可以是随分析提供的标准样品；可以得自同一患者的邻近的但未受影响的组织；或者，其可以是预定值等。可以测定基因表达、蛋白表达(例如细胞中的丰度)、蛋白活性(例如激酶活性)等。

例如，为了分析Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的存在、量和/或活性，可以分析癌症患者的活组织检查。它们中的一个或多个的异常(例如增加)表达或活性可能表明可以通过本发明的化合物治疗该癌症。激酶活性增加表明相应激酶被活化或被过度表达，表明其可利用本发明的化合物治疗。除了活组织检查样品外，也可以在其它体液例如血清、血液、大脑脊髓液、尿等中例如在周围血淋巴细胞(PBLs)中测量表达。

另外，可以根据组织是否经历新血管形成以及有多少新血管形成来筛选和监测癌症患者。这可以按照上文中的描述进行评价，例如，使用血管标记物(如CD31)的免疫组织化学，VGFR配体的循环水平等。

也可以根据在体液(例如血液)中高于正常水平的脱落的胞外域的出现来筛选和监测患者，所述胞外域衍生自各种受体，包括Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的细胞外部分。检测方法可以常规地进行，例如，利用特异性结合细胞外域的抗体。

测量表达包括测定或检测细胞内存在或细胞排出的多肽量，以及测量潜在的(underlying)mRNA，其中mRNA的存在量被认为反映由细胞合成的多肽的量。另外，可以分析Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的基因以确定是否存在造成异常表达或者多肽活性异常的基因缺陷。这些基因的序列是可公开获得的。

本发明化合物的组合物

本发明也涉及包含一种或多种本发明化合物的药物组合物。通过将其给药至有需要的患者，这些药物组合物可以用于实现所需药学效果。对本发明目的而言，患者是需要治疗特定病症或疾病的哺乳动物，包括人类。因此，本发明包括包含药学可接受的载体和药学有效量的本发明化合物的药物组合物。药学可接受的载体优选为相对地无毒性的载体，并且在与活性成分的有效活性相符的其浓度下对患者无害，使得归因于所述载体的任何副作用不削弱活性成分的有益效果。化合物的药学有效量优选为对受治疗的特定病症产生效果或发挥影响的用量。本发明的化合物可与本领域熟知的药学可接受的载体一起给药，采用任何有效的常规单元剂型，包括立即释放、缓释和定时释放制剂，通过口服、肠胃外、局部、鼻内、眼部、眼部、舌下、直肠、阴道等途经给药。

对于口服给药，可以将所述化合物配制成固体或液体制剂，如胶囊剂、丸剂、片剂、含片、锭剂、熔化剂(melt)、散剂、溶液剂、混悬剂或乳剂，并且可以按照本领域已知的生产药物组合物的方法制备。所述的固体单元剂型可以是包含例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉的普通的硬壳或软壳明胶胶囊型。

在另一个实施方案中，可以将本发明化合物和常规片剂基质如乳糖、蔗糖和玉米淀粉与以下成分组合进行压片：粘合剂如阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；崩解剂(用以在给药后帮助分解和溶解片剂)如马铃薯淀粉、褐藻酸、玉米淀粉、和瓜尔胶、西黄蓍胶、阿拉伯树胶；润滑剂(用以改善片剂成粒的流动性并且防止片剂物质粘附在片剂模具和冲孔的表面)如滑石、硬脂酸、或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌；染料；着色剂；以及调味剂(用以提高片剂的感官质量并使得它们更易为患者接受)如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。用于口服液体剂型的适当赋形剂包括磷酸二钙和稀释剂如水和醇例如乙醇、苄醇和聚乙二醇，添加或不添加药学可接受的表面活性剂、助悬剂或乳化剂。各种其它物质可以作为包衣存在或者用以改变剂量单位的物理形态。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可以包衣有虫胶、糖或二者。

可分散的粉末和颗粒适合于制备水混悬剂。它们提供活性成分与分散剂或湿润剂、助悬剂和一种或多种防腐剂的混合物。适当的分散剂或湿润剂和助悬剂在上文中已举例列出。其它的赋形剂，例如上述的甜味剂、调味剂和着色剂也可以包含在其中。

本发明的药物组合物也可以采用水包油型乳剂。油相可以是植物油如液体石蜡，或者植物油的混合物。适当的乳化剂可以是(1)自然界存在的树胶如阿拉伯树胶和西黄蓍胶，(2)自然界存在的磷脂如大豆和卵磷脂，(3)源于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，如脱水山梨糖醇单油酸酯，(4)上述偏酯与氧化乙烯的缩合产物，例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。所述乳剂还可以包含甜味剂。

通过将活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油或者矿物油如液体石蜡中，可以配制油性混悬剂。油性混悬剂可以包含增稠剂如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。混悬液还可以包含一种或多种防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；以及一种或多种甜味剂如蔗糖或糖精。

可以用甜味剂如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制糖浆剂和酏剂。这样的制剂还可以包含缓和剂(demulcent)和防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯以及调味剂和着色剂。

本发明的化合物也可以以可注射剂的方式肠胃外给药即皮下给药、静脉给药、眼内给药、滑膜内给药、肌内给药或腹膜内给药，优选地在含有药物载体的生理学上可接受的稀释剂中，所述药物载体可以是无菌的液体或液体混合物如水、盐水、右旋糖水溶液和有关糖溶液、醇如乙醇、异丙醇或十六烷醇、二醇如丙二醇或聚乙二醇、甘油缩酮如2，2-二甲基-1，1-二氧戊环-4-甲醇、醚如聚(乙二醇)400、油、脂肪酸、脂肪酸酯、或脂肪酸甘油酯、或乙酰化脂肪酸甘油酯；其中添加或不添加药学可接受的表面活性剂如皂或清洁剂、助悬剂如果胶、卡波姆、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素、或乳化剂和其它药物佐剂。

可用于本发明肠胃外制剂的油实例为来自于石油、动物、植物或合成来源的那些油，例如花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、矿脂和矿物油。适合的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、异硬脂酸和肉豆蔻酸。适合的脂肪酸酯是如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。适合的皂包括脂肪酸的碱金属盐、铵盐和三乙醇胺盐，适合的清洁剂包括阳离子清洁剂如二甲基二烷基铵卤化物、烷基吡啶鎓卤化物和烷基胺乙酸盐；阴离子清洁剂如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐和烯烃磺酸盐，烷基硫酸盐、烯烃硫酸盐、醚硫酸盐和单酸甘油酯硫酸盐、以及磺基丁二酸盐；非离子清洁剂如氧化脂肪胺、脂肪酸烷醇酰胺、和聚(氧化乙烯-氧化丙烯)或者氧化乙烯或氧化丙烯共聚物；和两性清洁剂如烷基-β-氨基丙酸盐和2-烷基咪唑啉季铵盐)以及混合物。

本发明的肠胃外用组合物在溶液中一般含有约0.5重量％至约25重量％的活性成分。还可以有利地使用防腐剂和缓冲剂。为了最小化或消除在注射部位的刺激，此组合物可以包含亲水-亲脂平衡值(HLB)优选为约12至约17的非离子表面活性剂。这样的制剂中表面活性剂的用量优选在约5重量％至约15重量％的范围内。所述表面活性剂可以是具有上述HLB的单一组分，或者是具有所需HLB的两个或多个组分的混合物。

用于肠胃外制剂的表面活性剂的实例是聚乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类如脱水山梨糖醇单油酸酯以及氧化乙烯与由氧化丙烯和丙二醇缩合形成的疏水性基质的高分子量加合物。

所述药物组合物可以是无菌的可注射水混悬剂形式。这样的混悬液可以按照已知的方法用适当的分散剂或湿润剂和助悬剂配制，所述助悬剂为例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂例如卵磷脂、氧化烯与脂肪酸的缩合产物如聚氧乙烯硬脂酸酯、氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物如十七乙烯氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol)、氧化乙烯与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、或氧化乙烯与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。

无菌的可注射制剂也可以是在无毒性肠胃外用可接受的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射溶液剂或混悬剂。可以使用的稀释剂和溶剂是：如水、林格溶液、等渗氯化钠溶液和等渗葡萄糖溶液。另外，常规使用无菌的非挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何无刺激性的非挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可以用于制备可注射剂。

本发明的组合物还能以适用于直肠给药本发明化合物的栓剂的形式给药。通过将本发明的化合物与适当的非刺激性赋形剂混合来制备这些组合物，所述赋形剂在常温下是固体但在直肠的温度下是液体，并且因此在直肠中融化以释放出药物。这样的物质有例如可可脂和聚乙二醇。

用于本发明方法中的另一种制剂利用透皮递送装置(“贴剂”)。这种透皮贴剂可以用于以受控量连续或间断地输注本发明的化合物。用于递送药剂的透皮贴剂的结构和应用是本领域公知的(参见如1991年6月11日授权的第5,023,252号美国专利，其通过引用并入本文中)。可以将所述贴剂构建成用于连续性地、脉冲性地或按照需要递送药剂。

用于肠胃外给药的控释剂型包括本领域已知的脂质体制剂、聚合物微球制剂和聚合物凝胶制剂。

可能需要或必要通过机械递送装置将药物组合物施用至患者。用于递送药剂的机械递送装置的结构和应用是本领域公知的。直接技术——如直接施药至大脑——通常涉及将药物递送导管安插入患者的脑室系统以避开血脑屏障。在1991年4月30日授权的第5,011,472号美国专利中描述了用于将药剂传送至特定的身体解剖区域的一种这样的可植入递送系统，。

根据需要或期望，本发明的组合物还可以包含其它常规的药学可接受的混合成分，通常被称为载体或稀释剂。可以使用用于制备适合的剂型的所述组合物的常规方法。这样的成分和方法包括以下文献中所述的那些成分和方法，它们各自通过引用并入本文中：Powell，M.F.等，″Compendiumof Excipients for Parenteral Formulations″PDA Journal of PharmaceuticalScience & Technology 1998，52(5)，238-311；Strickley，R.G″ParenteralFormulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States(1999)-Part-1″PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999，53(6)，324-349；和Nema，S.等，″Excipients and Their Use in InjectableProducts″PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997，51(4)，166-171。

可适当地用于配制用于预期的给药途径的组合物的常用药物成分包括：

酸化剂(实例包括但不局限于乙酸、柠檬酸、富马酸、盐酸、硝酸)；

碱化剂(实例包括但不局限于氨溶液、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺、三乙醇胺(trolamine))；

吸附剂(实例包括但不局限于粉末状纤维素和活性碳)；

气雾剂喷射剂(实例包括但不局限于二氧化碳、CCl₂F₂、F₂ClC-CClF₂和CClF₃)

空气置换剂(air displacement agents，实例包括但不局限于氮和氩)；

抗真菌防腐剂(实例包括但不局限于苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠)；

抗菌防腐剂(实例包括但不局限于苯扎氯铵、苄索氯铵、苄醇、西吡氯铵、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞和硫柳汞)；

抗氧化剂(实例包括但不局限于抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁对甲氧酚、丁基化羟基甲苯、次磷酸、单硫代甘油、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、甲醛合次硫酸氢钠、焦亚硫酸钠)；

粘合物质(实例包括但不局限于嵌段聚合物、天然和合成橡胶、聚丙烯酸酯、聚氨酯、硅酮、聚硅氧烷和苯乙烯-丁二烯共聚物)；

缓冲剂(实例包括但不局限于偏磷酸钾、磷酸氢二钾、乙酸钠、无水柠檬酸钠以及二水合柠檬酸钠)

载体(实例包括但不局限于阿拉伯树胶糖浆、芳香糖浆、芳香酏剂、樱桃糖浆、可可糖浆、橙糖浆、糖浆、玉米油、矿物油、花生油、芝麻油、抑菌氯化钠注射剂和抑菌注射用水)

螯合剂(实例包括但不局限于乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸)

着色剂(实例包括但不局限于FD&C Red No.3、FD&C Red No.20、FD&C Yellow No.6、FD&C Blue No.2、D&C Green No.5、D&C Orange No.5、D&C Red No.8、焦糖和氧化铁红)；

澄清剂(实例包括但不局限于膨润土)；

乳化剂(实例包括但不局限于阿拉伯树胶、聚西托醇、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯50单硬脂酸酯)；

包封剂(实例包括但不局限于明胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素)

调味剂(实例包括但不局限于茴香油、肉桂油、可可、薄荷脑、橙油、薄荷油和香草醛)；

保湿剂(实例包括但不局限于甘油、丙二醇和山梨糖醇)；

研磨剂(实例包括但不局限于矿物油和甘油)；

油(实例包括但不局限于花生油、矿物油、橄榄油、花生油、芝麻油和植物油)；

软膏剂基质(实例包括但不局限于羊毛脂、亲水软膏、聚乙二醇软膏、矿脂、亲水矿脂、白色软膏、黄色软膏、和玫瑰水软膏)；

促渗透剂(透皮递送)(实例包括但不局限于单羟基或多羟基醇、单价-或多价醇、饱和或不饱和脂肪醇、饱和或不饱和脂肪酯、饱和或不饱和二羧酸、精油、磷脂酰基衍生物、脑磷脂、萜烯、酰胺、醚、酮和脲)

增塑剂(实例包括但不局限于邻苯二甲酸二乙酯和甘油)；

溶剂(实例包括但不局限于乙醇、玉米油、棉籽油、甘油、异丙醇、矿物油、油酸、花生油、净化水、注射用水、注射用无菌水和冲洗用无菌水)；

硬化剂(实例包括但不局限于鲸蜡醇、十六烷基酯蜡、微晶蜡、石蜡、硬脂醇、白蜡和黄蜡)；

栓剂基质(实例包括但不局限于可可脂和聚乙二醇(混合物))；

表面活性剂(实例包括但不局限于苯扎氯铵、壬苯醇醚10、辛苯昔醇(oxtoxynol)9、聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸钠和脱水山梨糖醇单棕榈酸酯)；

助悬剂(实例包括但不局限于琼脂、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、高岭土、甲基纤维素、西黄蓍胶和硅酸镁铝)；

甜味剂(实例包括但不局限于阿斯帕坦、右旋糖、甘油、甘露醇、丙二醇、糖精钠、山梨糖醇和蔗糖)；

片剂抗粘附剂(实例包括但不局限于硬脂酸镁和滑石)；

片剂粘合剂(实例包括但不局限于阿拉伯树胶、褐藻酸、羧甲基纤维素钠、可压缩糖、乙基纤维素、明胶、液体葡萄糖、甲基纤维素、非交联聚乙烯吡咯烷酮和预糊化淀粉)；

片剂和胶囊剂稀释剂(实例包括但不局限于磷酸氢钙、高岭土、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉末状纤维素、沉淀碳酸钙、碳酸钠、磷酸钠、山梨糖醇和淀粉)；

片剂包衣剂(实例包括但不局限于液体葡萄糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素和虫胶)；

片剂直接压片赋形剂(实例包括但不局限于磷酸氢钙)；

片剂崩解剂(实例包括但不局限于褐藻酸、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、波尔阿克里林钾、交联聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠、淀粉乙醇酸钠和淀粉)；

片剂助流剂(实例包括但不局限于胶体二氧化硅、玉米淀粉和滑石)；

片剂润滑剂(实例包括但不局限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、硬脂酸和硬脂酸锌)；

片剂/胶囊剂遮光剂(实例包括但不局限于二氧化钛)；

片剂光泽剂(实例包括但不局限于巴西棕榈蜡(carnuba wax)和白蜡)；

增稠剂(实例包括但不局限于蜂蜡、鲸蜡醇和石蜡)；

张度剂(实例包括但不局限于右旋糖和氯化钠)；

增粘剂(实例包括但不局限于褐藻酸、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠和西黄蓍胶)；及

润湿剂(实例包括但不局限于十七乙烯氧基鲸蜡醇、卵磷脂、山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯硬质酸酯)。

可以如下说明本发明的药物组合物：

无菌IV溶液：可以用无菌的可注射水制备本发明所需化合物的5mg/mL溶液，并且在必要时调节pH值。用无菌的5％右旋糖将溶液稀释至1-2mg/mL用于给药，并且在约60分钟内作为IV输液给药。

用于IV给药的冻干粉末：可以使用如下组分制备无菌制剂：(i)100-1000mg本发明所需化合物的冻干粉末，(ii)32-327mg/mL柠檬酸钠，及(iii)300-3000mg Dextran 40。用无菌的可注射盐水或右旋糖5％将此制剂复溶至浓度为10至20mg/mL，再用盐水或右旋糖5％将它进一步稀释至0.2-0.4mg/mL，并且在15-60分钟内，作为IV推注给药，或者作为IV输液给药。

肌内混悬剂：可以制备以下用于肌内注射的溶液剂或混悬剂：

50mg/mL需要的水不溶性的本发明化合物

5mg/mL羧甲基纤维素钠

4mg/mL TWEEN 80

9mg/mL氯化钠

9mg/mL苄醇

硬壳胶囊剂：通过用100mg活性成分粉末、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁填充各个标准两件套硬明胶(galantine)胶囊来制备大量的单位胶囊剂。

软明胶胶囊剂：制备活性成分在可消化油如大豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，并通过排代泵将其注射入熔化的明胶以形成含有100mg活性成分的软明胶胶囊。洗涤并干燥所得胶囊。可以将活性成分溶解于聚乙二醇、甘油和山梨糖醇的混合物中来配制可与水混溶的药物混合物。

片剂：按照常规方法配制大量的片剂，使得剂量单位为：100mg活性成分、0.2mg胶体二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉和98.8mg乳糖。可以使用适当的水性和非水性包衣以增强可口性、改善外观和稳定性或延迟吸收。

立即释放片剂/胶囊剂：其是按照常规方法和新方法制备的固体口服剂型。这些单元在无水情况下口服，以快速溶解并递送药剂。将活性成分在包含成分如糖、明胶、果胶和甜味剂的液体中混合。通过冷冻干燥和固相萃取技术将这些液体固化成固体片剂或囊片。可以将这些药物化合物与粘弹性和热弹性糖和聚合物或泡腾组分一起压缩而产生用于无需水而立即释放的多孔基质。

治疗过度增殖疾病的方法

本发明涉及使用本发明的化合物及其组合物治疗哺乳动物过度增殖疾病的方法。本发明的化合物和组合物可以用于抑制、阻断、减少、降低等细胞增殖和/或细胞分裂，和/或引起凋亡。此方法包括将能有效治疗所述疾病的量的本发明化合物给药至有此需要的哺乳动物，包括人类。过度增殖疾病包括但不局限于如牛皮癣、瘢痕疙瘩及其它影响皮肤的过度增生、良性前列腺过度增生(BPH)、实体瘤如乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头和颈癌、甲状腺癌、副甲状腺癌以及它们的远端转移。那些疾病还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。

乳腺癌的实例包括但不局限于侵润性导管癌、侵润性小叶癌、原位导管癌和原位小叶癌。

呼吸道癌的实例包括但不局限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌，以及支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。

脑癌的实例包括但不局限于脑干和hypophtalmic神经胶质瘤、小脑和大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜细胞瘤、以及神经外皮层瘤和松果体瘤。

雄性生殖器官肿瘤包括但不局限于前列腺和睾丸癌。雌性生殖器官肿瘤包括但不局限于子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌以及子宫肉瘤。

消化道肿瘤包括但不局限于肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌和唾液腺癌。

泌尿道肿瘤包括，但不局限于膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌、尿道癌和人乳头状肾癌。

眼癌包括但不局限于眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤。

肝癌的实例包括但不局限于肝细胞癌(具有或不具有纤维板层型变体(fibrolamellar variant)的肝细胞癌)、胆管癌(肝内胆管癌)和混合型肝细胞胆管癌。

皮肤癌包括但不局限于鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑素瘤皮肤癌。

头和颈癌包括但不局限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇和口腔癌和鳞状上皮细胞癌。淋巴瘤包括但不局限于AIDS-相关淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金病和中枢神经系统的淋巴瘤。

肉瘤包括但不局限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤。

白血病包括但不局限于急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病。

这些疾病在人类中已经得到良好表征，而且在其它哺乳动物中也存在有相似的病因，可以通过给药本发明的药物组合物来治疗这些疾病。

整个本文中陈述的术语“治疗”是常规用法，如以克服、缓解、减轻、解除、改善所述疾病或病症如癌症的状况为目的的对对象的处理或看护等。

治疗激酶失调的方法

本发明还提供用于治疗与激酶活性(如酪氨酸激酶活性)异常相关的疾病的方法，其中所述激酶包括但不局限于KDR(VEGFR2)、Trk-A、c-Met、和Bcr-Abl，该方法包括给药有效量的本发明的化合物。疾病包括癌症(例如那些本文中提及的那些癌症)、与血管发生相关的疾病(见上文)、细胞增殖疾病等。例如，在许多肿瘤类型中已发现了c-Met的过度表达和突变，所述肿瘤包括例如实体瘤、遗传性乳头状肾癌、肝细胞癌(例如儿童型)和胃肿瘤。在癌症包括例如胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳头状甲状腺癌、髓样甲状腺癌(包括家族型)和急性髓细胞性白血病中已报导了Trk-A的表达和突变。Bcr-Abl和该激酶的突变是慢性骨髓性白血病(CML)的诱因。

有效量的本发明的化合物可以用于治疗这样的疾病，包括那些在上文背景技术部分中提及的疾病(如癌症)。然而，无论其作用机理和/或激酶与疾病的关系如何，使用本发明的化合物可以治疗这样的癌症和其它疾病。

短语“异常激酶活性”或“异常酪氨酸激酶活性”包括编码所述激酶的基因的任何表达或活性异常，或者该基因所编码的多肽的任何表达和活性异常。这种异常活性的实例包括但不局限于基因或多肽的过度表达；基因扩增；产生组成性活性或过度活跃的激酶活性的突变；基因突变、缺失、置换、增加等。

本发明也提供了抑制激酶活性，特别是抑制VEGFR2、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的活性的方法，该方法包括给药有效量的本发明的化合物，包括其盐、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂合物、前药(如酯)及其非对映异构体形式。在细胞(如体外)中，或者在哺乳动物对象的细胞中，特别是需要治疗的人类患者的细胞中，可以抑制激酶活性。

本发明的化合物可以用于在美国专利6,946,471、6,921,763、6,855,728、6,723,694、6,660,744、6,468,529、6,350,754、6,297,238、6,214,344、6,207,152、6,099,841、6,057,105、6,051,593、5,734,039、5,707,624、5,686,292和5,646,036中所述的任何适应症；其各自通过引用全文并入本文中。

治疗血管发生疾病的方法

本发明还提供治疗与过度和/或异常血管发生相关的病症和疾病的方法。血管发生的不适当和异位表达对机体是有害的。许多病理状况与额外的血管生长有关。这些病况包括，如糖尿病视网膜病、缺血性视网膜-静脉闭塞和早产儿视网膜病变(Aiello等，New Engl.J.Med.1994，331，1480；Peer等Lab.Invest.1995，72，638)、与年龄相关的黄斑变性(AMD；参见，Lopez等Invest.Opththalmol.Vis.Sci.1996，37，855)、新生血管性青光眼、牛皮癣、晶状体后纤维组织增生、血管纤维瘤、炎症、类风湿性关节炎(RA)、再狭窄、支架内再狭窄、血管移植再狭窄等。另外，与癌和赘生组织相关的血液供应增加，促进生长，导致肿瘤的快速增大和转移。此外，肿瘤中新生血管和淋巴管的生长为变节细胞(renegade cell)提供了逃生路线，促进转移和随后的癌症扩散。因此，本发明的化合物可用于治疗和/或预防上述的任何血管发生疾病，如通过抑制和/或减少血管形成；通过抑制、阻断、减少、降低内皮细胞增殖或其它涉及血管发生的类型，以及引起所述细胞类型的细胞死亡或凋亡等。

例如，通过用本发明的化合物接触血管形成细胞群体，并且测定所述化合物对血管形成的作用，可以常规地测试本发明的化合物和组合物的血管发生活性。可以使用能够形成血管的任何细胞群体。有用的模型包括例如体内Matrigel-型分析；肿瘤新血管形成分析；CAM分析；BCE分析；细胞迁移分析；HUVEC生长抑制分析；动物模型(例如无胸腺小鼠中的肿瘤生长、兔中的慢性下肢缺血模型、癌症模型等)；体内系统，例如患者中的心或者肢(例如，生成血管治疗以治疗心肌梗塞)；需要治疗的主体例如患有与血管发生相关的疾病例如癌症、缺血性综合征、动脉阻塞疾病的主体，需要改善侧支循环、促进血管生长入生物工程组织的主体等。

细胞可以包括例如内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞、胚胎和成体干细胞、外胚层细胞、间充质细胞、内胚层细胞、赘生细胞、血液、牛CPAE(CCL-209)、牛FBHE(CRL-1395)、人类HUV-EC-C(CRL-1730)、小鼠SVEC4-10EHR1(CRL-2161)、小鼠MS1(CRL-2279)、小鼠MS1 VEGF(CRL-2460)、干细胞等。短语“能够形成血管”不是指具体的细胞类型，而仅仅是指在适当的条件下群体中的细胞能够形成血管。在某些情况下，所述群体可能是异质的，包括多于一种细胞类型，只有其中的部分实际分化成血管，但是其它细胞是引发或者维持血管形成过程所必需的。

可用于测定化合物或组合物对血管发生的作用的有效模型基于如下观察，即当用生长因子(例如FGF-1)填充的重组基底膜基质例如Matrigel被皮下注射入宿主动物时，内皮细胞被募集入此基质，在若干天内形成新血管。参见例如Passaniti等，Lab.Invest.，67：519-528，1992。为了稳定化生长因子和/或减缓它从基质中的释放，可以将生长因子绑定到肝素或其它稳定剂上。也可以周期性地用生长因子再灌注基质以增强和延长生成血管的过程。更具体地，可以将包含FGF-1的Matrigel塞植入物皮下地植入宿主小鼠。FGF的初始推注将内皮细胞吸引至植入物中，但是不导致新血管形成。约10-15天后，可以用FGF-1再灌注所述植入物。FGF-1刺激已存在于所述植入物内的内皮细胞而引发血管发生过程。

其它可用于研究血管发生的系统包括例如肿瘤外植体的新血管形成(如美国专利第5，192,744；6,024,688号)、鸡尿囊绒膜(CAM)分析(例如，Taylor和Folkman，Nature，297：307-312，1982；Eliceiri等，J.Cell Biol.，140，1255-1263，1998)、牛毛细血管内皮(BCE)细胞分析(例如美国专利第6,024,688号；Polverini，P.J.等，Methods Enzymol.，198：440-450，1991)、迁移分析、HUVEC(人类脐带血管内皮细胞)生长抑制分析(例如美国专利第6,060,449号)。

本发明的化合物或组合物可以以适宜于其对细胞发挥作用的任何方式和任何条件下与细胞群体接触。将化合物递送至细胞的方法可能取决于测试试剂的类型例如它的化学性质，以及细胞群体的性质。一般地，化合物必须接近细胞群体，因此其必须以一定形式(或前形式(pro-form))递送使细胞群体可以生理上体验到化合物，即与细胞接触。例如，如果意图使药剂进入细胞，如果需要，它可以与促进或增强细胞穿透性的任何方法组合，例如与对细胞表面抗原特异性的抗体或其它药剂、脂质体、脂类、螯合剂、靶向部分等组合。也可以例如通过电穿孔、改变压力等来处理、操作细胞以增强递送。

根据已知的用于评价可用于治疗过度增殖疾病和血管发生疾病的化合物的标准实验室技术，通过标准的毒性测试，并通过用于测定哺乳动物中验明的上述病症治疗的标准药理学分析，以及通过将这些结果与用于治疗这些病症的已知药剂的结果对比，可以很容易地测定用于治疗各预期适应症的本发明化合物的有效剂量。根据要考虑的因素例如使用的具体化合物和剂量单位、给药方式、治疗期、受治疗患者的年龄和性别，和被治疗病症的性质及程度，在这些病症中任一种病症的治疗中，本发明的化合物的给药量可以有很大变化。

待给药的本发明的化合物的总量的范围通常是约0.001mg/kg至约200mg/kg体重每天，优选为约0.01mg/kg至约20mg/kg体重每天。临床应用的给药时间安排范围是每天给药1-3次至每四个星期给药一次。另外，在一定时间内不给患者施用本发明化合物的“药物假期”可能有利于药理效果和耐受性的总体平衡。单位剂量可以包含约0.5mg至约1500mg活性成分，并且每天可以给药一次或多次或者每天少于一次。通过注射给药(包括静脉注射、肌内注射、皮下注射和肠胃外注射，以及应用输液技术)的平均日剂量优选为总体重的0.01-200mg/kg。直肠给药方案的平均日剂量优选为总体重的0.01-200mg/kg。阴道给药方案的平均日剂量优选为总体重的0.01-200mg/kg。局部给药方案的平均日剂量优选为0.1-200mg，每天给药1-4次。透皮给药剂型浓度优选为保持日剂量0.01-200mg/kg所需的浓度。吸入给药方案的平均日剂量优选为总体重的0.01-100mg/kg。

当然，对于每个患者的具体初始和后续给药方案将依据由主治诊断医生确定的病症的性质和严重性、使用的具体化合物的活性、患者的年龄和整体状况、给药时间、给药途径、药物排泄速率、药物组合等变化。利用常规的治疗测试，本领域技术人员可以确定需要的治疗方式和本发明化合物的给药剂量数。

本发明的化合物可以作为单独的药剂给药，或者，在组合不产生不可接受副作用的情况下，可以与一种或多种其它药剂组合给药。例如，本发明的化合物可以与已知的抗过度增殖或其它适应症的药剂等以及它们的混合物和组合组合给药。

所述的其它药剂可以是阿地白介素、阿仑膦酸、alfaferone、阿利维A酸、别嘌醇、aloprim、aloxi、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、anzmet、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮杂胞苷、硫唑嘌呤、BCG或ticeBCG、苯丁抑制素、乙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、蓓萨罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降钙素、campath、卡培他滨、卡铂、康士得(casodex)、cefesone、西莫白介素、柔红霉素(cerubidine)、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、DaunoXome、地塞米松(decadron)、地塞米松磷酸盐、戊酸雌二醇(delestrogen)、地尼白介素-毒素连接物(denileukin diftitox)、甲基氢化泼尼松(depo-medrol)、地洛瑞林、右雷佐生、己烯雌酚、氟康唑(diflucan)、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、屈大麻酚、DW-166HC、乙酸亮丙瑞林(eligard)、elitek、ellence、emend、表柔比星、阿法依泊汀、epogen、依铂、ergamisol、estrace、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、乙炔基雌二醇、氨磷汀(ethyol)、依替膦酸、凡毕复(etopophos)、依托泊苷、法倔唑、farston、非格司亭、非那雄胺、fligrastim、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷单磷酸酯、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟甲睾酮、氟他胺、福美坦、fosteabine、福莫司汀、氟维司群、gammagard、吉西他滨、吉妥单抗、格列卫(gleevec)、卡莫司汀(gliadel)、戈舍瑞林、格拉司琼HCl、组氨瑞林、和美新(hycamtin)、氢化可的松、eyrthro-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-1a、白细胞介素-2、内含子A、易瑞沙(iressa)、伊立替康、凯特瑞(kytril)、蘑菇多糖硫酸酯、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林乙酸盐、左旋咪唑、左亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠(levothroid)、levoxyl、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚(marinol)、氮芥(mechlorethamine)、甲钴胺、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素(menest)、6-巯嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、metvix、米替福新、米诺环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、Modrenal、Myocet、奈达铂、neulasta、neumega、neupogen、尼鲁米特、诺瓦得士(nolvadex)、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、昂丹司琼HCl、orapred、奥沙利铂、紫杉醇、pediapred、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、picibanil、毛果芸香碱HCl、吡柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、泼尼松龙、泼尼松、premarin、丙卡巴肼、procrit、雷替曲塞、利比(rebif)、铼-186依替膦酸、利妥昔单抗(rituximab)、roferon-A、罗莫肽、salagen、善宁(sandostatin)、沙格司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、甲强龙(solu-medrol)、膦门冬酸(sparfosic acid)、干细胞治疗剂、链佐星、氯化锶-89、synthroid、他莫昔芬、坦洛新、他索纳明、睾内酯(tastolactone)、美索帝(taxotere)、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊甙、丙酸睾酮、testred、硫鸟嘌呤、塞替派、促甲状腺素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲奥舒凡、维A酸、trexall、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、曲普瑞林乙酸盐、曲普瑞林双羟萘酸盐、UFT、尿苷、戊柔比星、维斯力农、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、维鲁利秦(virulizin)、zinecard、净司他丁斯酯、枢复宁(zofran)、ABI-007、阿考比芬(acolbifene)、actimmune、affinitak、氨基蝶呤、阿佐昔芬(arzoxifene)、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦(atrasentan)、BAY43-9006(索拉非尼)、阿瓦斯汀(avastin)、CCI-779、CDC-501、西乐葆(celebrex)、西妥昔单抗、克立那托、乙酸环丙孕酮、地西他滨、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-PEG、ixabepilone、钉形贝(keyhole limpet)血蓝蛋白、L-651582、兰瑞肽、拉索昔芬、libra、lonafarnib、米泼昔芬、米诺膦酸、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他(neovastat)、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇多谷氨酸盐、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶(ranpirnase)、13-顺视黄酸、沙铂(satraplatin)、西奥骨化醇、T-138067、特罗凯、taxoprexin、胸腺素α1、噻唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、TransMID-107R、伐司朴达(valspodar)、伐普肽、瓦他拉尼、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸，或它们的组合。

可以加入所述组合物的任选的抗过度增殖剂包括但不局限于列于Merck Index第11版，(1996)(其通过引用并入本文)中的癌症化学治疗药物方案上的化合物，如门冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、L-天冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、道诺霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲基三聚氰胺、羟基脲、异环磷酰胺、依立替康、亚叶酸、洛莫司汀、氮芥、6-巯嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、丝裂霉素C、米托蒽醌、泼尼松龙、泼尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、链佐星、他莫昔芬、硫鸟嘌呤、托泊替康、长春碱、长春新碱和长春地辛。

其它适合于和本发明的化合物或组合物一起使用的抗过度增殖剂包括但不局限于在Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis ofTherapeutics(第9版)Molinoff等编辑，由McGraw-Hill出版，第1225-1287页，(1996)(其也通过引用并入本文)中所述的公认用于治疗肿瘤性疾病的那些化合物，例如氨鲁米特、L-门冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮杂胞苷克拉屈滨、白消安、己烯雌酚、2′，2′-二氟脱氧胞苷、多西他赛、赤式羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyl adenine)、乙炔基雌二醇、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷单磷酸酯、氟达拉滨磷酸酯、氟甲睾酮、氟他胺、羟孕酮己酸酯、伊达比星、干扰素、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、司莫司汀、替尼泊甙、丙酸睾酮、塞替派、三甲基三聚氰胺、尿苷和长春瑞滨。

其它适合于和本发明的化合物或组合物一起使用的抗过度增殖药剂包括，但不局限于其它抗癌药剂如埃坡霉素及其衍生物、依立替康、雷洛昔芬和托泊替康。

通常，本发明的化合物或组合物与细胞毒性剂和/或细胞抑制剂的组合用于：

(1)与各自单独给药相比，在减少肿瘤生长或甚至清除肿瘤方面，产生更好的效力，

(2)减少化学治疗剂的给药量，

(3)提供化学治疗，其在患者中的耐受性好，且与单一药剂化学治疗和某些其它组合治疗所观察到的结果相比，其有害药理并发症更少，

(4)治疗哺乳动物中、特别是人类中更广谱的不同癌症类型，

(5)提高被治疗的患者中的响应速率，

(6)与标准化学治疗相比，延长受治疗患者存活时间，

(7)延长肿瘤进程的时间，和/或

(8)在其它癌症药剂组合产生拮抗作用的已知情况下，产生至少与那些药剂单独使用时的效力和耐受性结果一样良好的效力和耐受性结果。

可以通过任何可用的方法，例如通过蛋白质印迹、ELISA、斑点印迹、免疫沉淀、RIA、免疫组织化学等进行多肽的检测。例如，可以制备组织切片，并用特异性抗体(间接或直接地)标记，并用显微镜显示。例如通过制备待测样品的裂解液，然后通过ELISA或者蛋白质印迹测定每单位量组织的多肽量，从而不经可视化就可以量化多肽数量。可以使用抗体和其它特异性结合试剂。对于如何进行检测没有限制。

可以使用量化和/或检测样品内存在/不存在靶核酸(例如，Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl等的基因、mRNA等分析)。分析可以在单细胞水平进行，或者在包含许多细胞的样品中进行，其中该分析是样品中存在的全部细胞和组织群的“平均”表达。可以使用任何适当的分析形式，包括但不局限于，例如DNA印迹分析、RNA印迹分析、聚合酶链反应(“PCR”)(例如，Saiki等，Science，241：53，1988；美国专利第4,683,195，4,683,202，和6,040,166号；PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications，Innis等，eds.，Academic Press，New York，1990)、反转录酶聚合酶链反应(“RT-PCR”)、锚式PCR、cDNA末端快速扩增(“RACE”)(例如，Schaefer in Gene Cloningand Analysis：Current Innovations，第99-115页，1997)、连接酶链反应(“LCR”)(EP 320308)、单侧PCR(Ohara等，Proc.Natl.Acad.Sci.，86：5673-5677，1989)、索引方法(indexing methods)(例如，美国专利第5,508,169号)、原位杂交、差别显示(例如，Liang等，Nucl.Acid.Res.，21：3269 3275，1993；美国专利第5,262,311，5,599,672和5,965,409号；WO97/18454；Prashar和Weissman，Proc.Natl.Acad.Sci.，93：659-663，和美国专利第6,010,850和5,712,126号；Welsh等，Nucleic Acid Res.，20：4965-4970，1992，和美国专利第5,487,985号)，以及其它RNA指纹分析技术，基于核酸序列的扩增(“NASBA”)和其它基于转录的扩增体系(例如，美国专利第5,409,818和5,554,527号；WO 88/10315)、多核苷酸阵列(例如，美国专利第5,143,854，5,424,186；5,700,637，5,874,219，和6,054,270号；PCT WO 92/10092；PCTWO 90/15070)、Qβ复制酶(PCT/US87/00880)、链置换扩增(“SDA”)、修复链反应(“RCR”)、核酸酶保护分析、基于扣除的方法、快速扫描等。其它的有用的方法包括但不局限于例如基于模板的扩增方法、竞争性PCR(例如，美国专利第5,747,251号)、基于氧化还原的分析(例如美国专利第5,871,918号)、基于Taqman的分析(例如，Holland等，Proc.Natl.Acad，Sci.，88：7276-7280，1991；美国专利第5,210,015和5,994,063号)、实时荧光监测(例如，美国专利第5,928,907号)、分子能量转移标记(例如美国专利第5,348,853，5,532,129，5,565,322，6,030,787，和6,117,635号；Tyagi和Kramer，Nature Biotech.，14：303-309，1996)。可以使用任何适宜于基因或蛋白表达的单细胞分析的方法，包括原位杂交、免疫细胞化学、MACS、FACS、流式细胞术等。对于单细胞分析，可以利用抗体、PCR或者核酸扩增的其它类型(例如，Brady等，Methods Mol.& Cell.Biol.2，17-25，1990；Eberwine等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.，89，3010-3014，1992；美国专利第5,723,290号)测量表达产物。可以常规地进行这些方法和其它方法，例如按照提及的出版物中所述进行。

例如可以按照以下实施例中所述，或者使用激酶活性的标准分析法常规地评价Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的活性。

测量表达包括评价基因转录和翻译体系的所有方面。例如，如果启动子缺陷引起疾病，或者被怀疑引起疾病，那么可以通过研究(例如测序或限制性酶切作图)基因中的启动子序列，通过检测转录产物(例如RNA)，通过检测翻译产物(例如多肽)来评价(即“评定”)样品。可以使用任何测量基因是否有用的方法，包括多肽、多核苷酸和功能性测定基因的生物活性。

在进行评价时，可以将所得结果和疾病非相关性基因对比，或者和来自同样组织的未受影响的组织或区域的同样的基因对比。对比的性质可以常规地确定，取决于如何完成评价。例如，如果检测样品的mRNA水平，那么可以用正常的mRNA水平作对比，或者用已知的不受该疾病影响的基因作对比。检测mRNA的方法已为人熟知，并且上文中已描述，例如，但不局限于，RNA印迹分析、聚合酶链反应(PCR)、反转录酶PCR、RACE PCR等。相似地，如果多肽的合成被用于评价基因，那么正常组织样品中的多肽可以用作对比，或者来自已知其表达不受该疾病影响的不同基因的多肽作为对比。这些仅是如何进行这样的方法的实例。

也可以选择接受治疗的患者，如果他们具有已知与癌症相关的特定的基因型，特别是与Flk-1、Trk-A和/或Bcr-Abl的异常表达(包括这些基因的突变)相关的基因型。本发明涉及选择接受治疗的患者的方法，包括测定取自对象的样品中Flk-1、Trk-A和/或Bcr-Abl的表达水平，其中表达水平异常与疾病有关，并且将本发明的化合物或组合物给药至被验明具有所述异常表达的对象。本发明涉及选择接受治疗的患者的方法，该方法包括测定在取自对象的样品中Flk-1、Trk-A和/或Bcr-Abl基因突变的存在，其中所述突变与疾病有关，并且将本发明的化合物或组合物给药至被验明具有所述突变的对象。

可以常规地测定突变的存在，例如从对象采集细胞或组织样品，从中提取核酸，测定靶基因的基因序列或结构(利用例如mRNA、cDNA、基因组DNA等)，对比靶基因的序列或结构和正常基因的结构，由此而得的序列或结构上的不同表明对象内的基因中的突变。可以用任何有效的方法测定突变，例如对比标准基因和对象基因之间的限制性酶切图、核苷酸序列、氨基酸序列、RFLP、脱氧核糖核酸酶位点、DNA甲基化指纹(例如美国专利第6,214,556号)、蛋白切割位点、分子量、电泳迁移率、电荷、离子迁移率等。也可以对比蛋白质。为进行这种方法，可以对比整个或部分基因或多肽。例如，如果使用核苷酸测序，可以测序整个基因，包括启动子、内含子和外显子，或者仅对其部分(例如外显子1、外显子2等)进行测序和对比。

本发明还提供评价本发明的化合物或组合物治疗疾病的效力的方法，该方法包括任何有效的顺序的一个或多个以下步骤，例如测量取自己用本发明的化合物治疗的所述对象的样品中的VEGFR-2、Trk-A、c-Met或Bcr-Abl的表达或活性，并且测定所述化合物对所述表达或活性的作用。测量步骤可以按照已描述的方法进行。

例如，可以自己用本发明化合物或组合物治疗的患者采集活组织检查样品，然后分析提及的信号分子的存在和/或活性。如上所述，在癌组织中磷酸-ERK水平降低(例如，与正常组织或治疗前相比)表明该化合物正在体内发挥效力和治疗效果。

测定本发明的化合物或组合物对表达或活性的作用包括进行组织样品和对照，或其它类型标准之间的对比的步骤。可以使用的标准的实例包括但不局限于治疗前的组织样品、取自未受影响的组织的组织样品或者取自受影响的组织的未受影响区域的组织样品(例如，取自未被转化的、非癌性等的组织的区域)等。标准也可以是针对该标记物已确立的代表正常表达水平的数值或数值范围。也可以在用本发明的化合物治疗的治疗方案期间的至少两个不同的时间点采集的样品之间进行对比。例如，在开始药物治疗后，可以在不同的时间采集样品，并且表达和/或活性水平的分析可以用于监测对象的进展/预后，例如对象对药物方案的反应如何。可以采用任何时间点，例如每日、每周两次、每周、每两周、每月、每年、多时间点(至少2、3、4、8、12等)。

短语“测定作用”表示分析和/或验明由化合物或组合物产生的结果。可以验明任何类型的作用，例如其中表达和/或活性减少、降低、下调、抑制、阻断、增强、上调、未改变等。

此方法可以用于确定适当的剂量和给药方案，例如给药多少本发明的化合物或组合物以及以什么频率给药。通过监测它对组织内信号转导分子的影响，临床医生可以确定适当的治疗方案和其是否达到预期的效果，例如对信号转导途径的调节或抑制作用。例如，如果本发明的化合物或组合物不足以降低标记物例如Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl的量，可以增加患者中的剂量或者更频繁的给药。相似地，当表明本发明的化合物或组合物显示出有效地降低Flk-1、Trk-A、c-Met和/或Bcr-Abl，或者其它疾病状态的标记物的水平时，可以降低剂量和/或频率。因为本发明的化合物或组合物可以与其它治疗例如放射治疗、化学治疗和其它药剂组合给药，对对象进行监测可以用以评价治疗方案对疾病进展的组合作用。

缩写和首字母缩写词

在Journal of Organic Chemistry的每一卷的第一期中出现有机化学领域的技术人员所用的全面的缩写表；该列表通常出现在标题名为Standard List of Abbreviations的表格中。所述列表中包含的缩写以及有机化学领域技术人员使用的全部缩写都通过引用并入本文中。为了本发明的目的，所述的化学元素与Periodic Table of the Elements，CAS版，Handbook of Chemistryand Physics，第67版，1986-87中的一致。

更具体地，当以下缩写用于本公开所有部分时，它们具有下列含义：

缩写

¹H NMR 质子核磁共振

Ac 乙酰基

amu 原子质量单位

aq 含水的

Bu 丁基

DMSO 二甲亚砜

ES 电子喷雾

Et 乙基

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

h 小时

HEPES N-(2-羟基乙基)-哌嗪-N′-(2-乙磺酸)

HPLC 高压液相色谱

LC-MS 液相色谱-偶联质谱

M 摩尔

m/z 质荷比

Me 甲基

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

mg 毫克

MHz 兆赫

min 分钟

mL 毫升

mmol 毫摩尔

mol 摩尔

mp 熔点

NMR 核磁共振

Ph 苯基

ppm 百万分率

Pr 丙基

THF 四氢呋喃

在以下所述实施例中报导的百分比收率基于摩尔量最低的起始成分用量来计算。用注射器或套管来转移对空气和潮湿敏感的液体和溶液，并且通过橡胶隔片将其注入反应器中。商品级试剂和溶剂不经进一步纯化直接使用。术语“减压浓缩”或者“减压下除去溶剂”通常是指在约15mm汞柱下使用Buchi旋转蒸发器。在某些情况下，使用离心多样品蒸发器(例如，GeneVacAtlas)在减压下除去溶剂。所有温度未经校正以摄氏度报导(℃)。薄层色谱(TLC)在预先涂覆的玻璃背衬的硅胶60A F-254 250μm板上进行。

电子轰击质谱(EI-MS)使用配有具有J&W DB-5柱(0.25μM 涂层；30m×0.32mm)的Hewlett Packard 5890气相色谱的Hewlett Packard 5989A型质谱仪获得。离子源保持在250℃，并且以2秒/扫描的速度，由50-800amu扫描谱图。

LC-MS：高压液相色谱-电子喷雾质谱(HPLC ES-MS)使用配有2个Gilson 306泵、Gilson 215型自动进样器、Gilson二极管阵列检测器、YMCPro C-18柱(2×23mm，120A)和带有z-喷雾电子喷雾电离的Micromass LCZ单四极质谱仪的Gilson HPLC系统。在2秒内由120-1000amu扫描谱图。ELSD(蒸发光散射检测器)数据也以模拟通道的形式采集。用缓冲剂A(含有0.02％TFA的2％乙腈水溶液)和缓冲剂B(含有0.02％TFA的2％水乙腈溶液)，以1.5mL/min的流速进行梯度洗脱。以如下方法洗脱样品：90％A持续0.5分钟，在3.5分钟内过渡至95％B并在95％B保持0.5分钟，然后在0.1分钟内将柱回复至初始条件。整个运行时间为4.8分钟。

NMR：在300/400MHz的Varian Mercury-plus光谱仪上进行常规的一维NMR光谱法。将样品溶解于获自Cambridge Isotope Labs的氘代溶剂中，并且转移至5mm ID Wilmad NMR管中。在293K获得谱图。以ppm尺度记录化学位移并且以适当的溶剂信号作参比，例如对于¹H谱图而言，丙酮-d₆为2.05、DMSO-d₆为2.49ppm、CD₃CN为1.93ppm、CD₃OD为3.30ppm、CD₂Cl₂为5.32ppm以及CDCl₃为7.26ppm。缩写：br，宽峰；s，单峰；d，二重峰；dd，双二重峰；ddd，双双二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰。

制备HPLC：以反相模式进行制备HPLC，用含有0.5％TFA的含水乙腈洗脱，通常利用配有两个Gilson 322型泵、Gilson 215型自动进样器、Gilson二极管阵列检测器和YMC Pro C-18柱(20×150mm，120A)的GilsonHPLC系统。用缓冲剂A(含0.1％TFA的水)和缓冲剂B(含有0.1％TFA的乙腈)进行梯度洗脱。将样品溶于MeOH或MeOH/DMSO，其浓度约为50mg/mL。进样体积为约2-3mL/进样。通常如下洗脱样品：10-90％B，15分钟，流速25mL/min，保持2分钟，回复至10％B。在254或220nm下通过UV监测收集期望的级分并且通过使用GeneVac离心多样品蒸发器在减压下蒸发。

通过使用本文中所述的方法可以制备本发明的化合物。给出以下具体实施例以说明本文中所述的发明，但是不应以任何方式将它们解释为限制本发明的范围。

实施例

实施例1

羟基甲基苯基吡唑基脲(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)

羟基甲基苯基吡唑基脲

步骤1.制备3-(5-氨基-3-叔丁基-1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯

在搅拌下小心地将硫酸(浓硫酸，15.7mL，295.7mmol)滴加至冰冷的EtOH(600mL)中。向其中加入3-肼基苯甲酸(45g，295.7mmol)和4，4-二甲基-3-氧代戊腈(40.7g，325.3mmol)，然后在90℃下将此混合物加热48h。在减压下蒸发大部分溶剂，并用乙酸乙酯稀释剩余的混合物。用冰冷的2MNaOH，随后用盐水洗涤所得混合物，然后干燥(Na₂SO₄)。通过硅胶床过滤此溶液，用更多乙酸乙酯洗涤。蒸发乙酸乙酯，然后用二氯甲烷/己烷处理剩余物而得到灰白色结晶固体产物(61g，71％)。MS m/z 288.2(M+H)⁺；计算质量287。保留时间(LC-MS)：2.99min。1H-NMR(DMSO-d₆)：δ8.16(m 1H)；7.88(m，2H)；7.60(t，1H)；5.40(s，1H)；5.32(s，2H)；4.36(q，2H)；1.34(t，3H)；1.21(s，9H)。

步骤2.制备3-{3-叔丁基-5-[(苯氧基羰基)氨基]-1H-吡唑-1-基}-苯甲酸乙酯

向3-(5-氨基-3-叔丁基-1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(60g，208.8mmol)和K₂CO₃(86.6g，626.4mmol)在THF(1400mL)中的混合物中加入氯甲酸苯基酯(98.1g，626.4mmol)。在室温下搅拌此反应过夜。滤除固体并在减压下蒸发大部分溶剂。将剩余的混合物溶于EtOAc并用盐水洗涤，然后用水洗涤。然后干燥有机层并浓缩。粗产物通过从CH₂Cl₂/己烷中重结晶纯化而得到白色粉末状的预期产物(78.5g，92％)。MS m/z 408.1(M+H)⁺；计算质量407。保留时间(LC-MS)：3.92min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ10.19(s，宽峰，1H)；8.11(m 1H)；7.97(d，J＝7.6Hz，1H)；7.86(m，1H)；7.71(t，1H)；7.38(m，2H)；7.24(m，1H)；7.08(m，1H)；6.40(s，1H)；4.38(q，2H)；1.32(t，3H)；1.29(s，9H)。

步骤3.制备3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)-吡啶-4-基]-氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯

在室温下将3-{3-叔丁基-5-[(苯氧基羰基)氨基]-1H-吡唑-1-基}苯甲酸乙酯(9.36g，22.0mmol)、4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(5.0g，19.1mmol；如Dumas等在PCT Int.Appl.WO 2004078748(2004)中所述制备)和三乙胺(3.87g，38.3mmol)在无水THF(100mL)中的溶液搅拌过夜。通过柱色谱纯化粗产物(CH₂Cl₂加1％至3％的2M NH₃的MeOH溶液)，随后通过从EtOAc/己烷中重结晶得到灰白色结晶固体状的预期产物(6.32g，57％)。MS m/z 575.1(M+H)⁺；计算质量574。保留时间(LC-MS)：3.75min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ8.97(m，1H)；8.89(m，1H)；8.80(m，1H)；8.52(d，J＝5.6Hz，1H)；8.16(t，1H)；8.06(m，1H)；7.99(m，1H)；7.85(m，1H)；7.71(t，1H)；7.39(m，1H)；7.33(m，1H)；7.17(m，1H)；7.06(m，1H)；6.42(s，1H)；4.36(q，2H)；2.78(d，J＝5.2Hz，3H)；1.31(m，12H)。

步骤4.制备(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺)

向充分搅拌的冷却的4-(4-{3-[5-叔丁基-2-(3-乙氧基羰基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-脲基}-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-羧酸甲基酰胺(56mg，0.1mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中逐份加入NaBH₄(50mg)。14h后，小心地将冰水(10mL)加入此反应混合物中。然后，在减压下蒸发大部分乙醇。用饱和氯化铵水溶液(10mL)处理此剩余混合物，并用二氯甲烷(50、25、和25mL)提取三次。干燥合并的二氯甲烷提取液(硫酸钠)并蒸发溶剂。通过制备薄层色谱法在硅胶上用3-5％的2M氨的甲醇溶液在二氯甲烷中的溶液作洗脱剂纯化粗产物而得到白色粉末状的预期产物(31mg，58％)。

对于较大规模的合成按照以下相似步骤进行：向3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]-氧基}-苯基)-氨基甲酰基]-氨基}-1H-吡唑-1-基)-苯甲酸乙酯(11.2g，19.5mmol)的EtOH溶液中逐步地加入NaBH₄固体。然后在室温下搅拌此反应过夜，并通过逐渐加入NH₄Cl的水溶液终止反应。用EtOAc稀释此混合物，用NH₄Cl水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。然后干燥有机层并浓缩。然后通过柱色谱法在硅胶上纯化粗产物(CH₂Cl₂加1至5％的2M NH₃的MeOH溶液)，随后从二氯甲烷/己烷中重结晶得到白色结晶固体状的预期产物(8.0g，77％)。Mp 160℃；进一步重结晶后，得到预期产物，mp为196℃。MS m/z 533.3(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.13min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.02(s，宽峰，1H)；8.87(s，1H)；8.81(m，1H)；8.52(d，J＝5.2Hz，1H)；8.21(t，1H)；7.51(m，2H)；7.39(m，3H)；7.32(m，1H)；7.17(m，1H)；7.06(m，1H)；6.40(s，1H)；5.36(t，1H)；4.59(d，J＝5.6Hz，2H)；2.78(d，J＝4.8Hz，3H)；1.27(s，9H)。元素分析：C 62.92％；H5.43％；N 15.70％；计算值：C 63.15％；H 5.49％；N 15.78％。

实施例2

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，双(4-甲基-苯磺酸)盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，200mg，0.376mmol)的1，4-二氧六环(5mL)溶液中滴加一水合4-甲苯磺酸(143mg，0.75mmol)。过滤形成的沉淀并且用二氧六环洗涤，随后用己烷洗涤。将该固体从二氧六环/甲醇中重结晶而得到结晶白色粉末状的预期产物盐(115.8mg，35％)。Mp 184℃。MSm/z 533.2(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.48min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.04(s，宽峰，1H)；8.88(s，1H)；8.87(m，1H)；8.54(d，J＝5.6Hz，1H)；8.22(t，1H)；7.51(m，7H)；7.38(m，2H)；7.34(m，1H)；7.21(m，1H)；7.11(d，J＝7.6Hz，4H)；7.07(m，1H)；6.40(s，1H)；4.58(s，2H)；2.79(d，J＝4.8Hz，3H)；2.28(s，6H)；1.27(s，9H)。

实施例3

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二甲磺酸盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，225mg，0.42mmol)的1，4-二氧六环(5mL)溶液中滴加入4-甲磺酸(81mg，0.84mmol)。过滤形成的沉淀并用二氧六环洗涤，随后用己烷洗涤。然后该固体从丙酮/甲醇中重结晶而得到白色结晶粉末状的预期产物盐(156.7mg，51％)。Mp 158℃。MS m/z 533.1(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.21min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.04(s，宽峰，1H)；8.88(s，1H)；8.87(m，1H)；8.54(d，J＝6Hz，1H)；8.22(t，1H)；7.51(m，3H)；7.38(m，2H)；7.33(m，1H)；7.21(m，1H)；7.06(m，1H)；6.40(s，1H)；4.58(s，2H)；2.79(d，J＝5.2Hz，3H)；2.35(s，6H)；1.27(s，9H)。

实施例4

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二盐酸盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，220mg，0.41mmol)的1，4-二氧六环(10mL)溶液中滴加入盐酸(30mg，0.82mmol)。过滤如此形成的沉淀并用二氧六环洗涤，随后用己烷洗涤。然后将该固体从二氧六环/甲醇中重结晶而得到白色粉末状的预期产物盐(240mg，95％)。MS m/z 533.3(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.13min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.10(s，宽峰，1H)；8.97(s，1H)；8.87(m，1H)；8.53(d，J＝5.6Hz，1H)；8.21(t，1H)；7.50(m，3H)；7.39(m，2H)；7.33(m，1H)；7.20(m，1H)；7.06(m，1H)；6.39(s，1H)；4.58(s，2H)；2.79(d，J＝4.8Hz，3H)；1.27(s，9H)。

实施例5

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，双(苯磺酸)盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，212mg，0.40mmol)的丙酮(5mL)溶液中滴加入苯磺酸(157mg，1.0mmol)。过滤如此形成的沉淀并用丙酮洗涤，随后用己烷洗涤而得到白色结晶粉末状的预期产物盐(271.4mg，80％)。MS m/z 533.5(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.15min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.05(s，宽峰，1H)；8.88(m，2H)；8.54(d，J＝6.0Hz，1H)；8.22(t，1H)；7.59(m，4H)；7.51(m，3H)；7.38(m，2H)；7.34(m，7H)；7.22(m，1H)；7.07(m，1H)；6.41(s，1H)；4.58(s，2H)；2.79(d，J＝4.8Hz，3H)；1.27(s，9H)。

实施例6

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二氢溴酸盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，400mg，0.751mmol)的丙酮(5mL)溶液中滴加入48％HBr(1mL)的水溶液。过滤如此形成的沉淀并用丙酮洗涤，随后用己烷洗涤而得到白色粉末状的预期产物盐(505mg，96.8％)。MSm/z 533.4(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.36min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.03(s，宽峰，1H)；8.89(m，2H)；8.53(d，J＝5.6Hz，1H)；8.21(m，1H)；7.50(m，3H)；7.37(m，2H)；7.33(m，1H)；7.20(m，1H)；7.06(m，1H)；6.40(s，1H)；4.58(s，2H)；2.78(m，3H)；1.26(s，9H)。

实施例7

4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，硫酸氢盐

向(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，400mg，0.751mmol)的丙酮(5mL)溶液中滴加入硫酸(500mg，5.1mmol)在乙酸乙酯(5mL)中的溶液。过滤如此形成的沉淀并用丙酮洗涤，随后用己烷洗涤而得到白色结晶粉末状的预期产物盐(460mg，97％)。MS m/z 533.4(M+H)⁺；计算质量532。保留时间(LC-MS)：3.20min。¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ9.02(m，1H)；8.88(m，2H)；8.52(d，J＝6.0Hz，1H)；8.22(m，1H)；7.50(m，2H)；7.42(m，1H)；7.37(m，2H)；7.32(m，1H)；7.19(m，1H)；7.05(m，1H)；6.39(s，1H)；4.57(s，2H)；2.78(m，3H)；1.26(s，9H)。

实施例8

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]D-缬氨酸酯(valinate)

向室温下的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(1.00g，1.88mmol)和碳酸钾(1.30g，9.39mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液中加入N-(9-芴基甲基氧基羰基)-D-缬氨酸-氯化物(Fmoc-D-Val-Cl)，(1.34g，3.76mmol)。搅拌此反应混合物过夜。浓缩粗品并通过柱色谱法纯化(CH₂Cl₂∶2MNH₃的MeOH溶液，99∶1至97∶3)而得到1.20g(75％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 854.4(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：4.59min。

实施例9

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基D-缬氨酸酯

在室温下将溶有实施例8的3-(3-叔丁基-5-[(2-氟-4-[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基苯基)-氨基甲酰基]氨基-1H-吡唑-1-基)苄基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-缬氨酸酯，(1.10g，1.29mmol)的哌啶(0.16mL)/DMF(9.17mL)溶液搅拌20min。用EtOAc(20mL)稀释此反应混合物并用水洗涤(3x)。干燥合并的有机层并浓缩。通过prep-TLC(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，97∶3)纯化粗品而得到0.48g(59％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 632.2(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：2.73min。

实施例10

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基L-缬氨酸酯

步骤1：向0℃的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基-甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.200g，0.38mmol)、1-羟基苯并三唑(0.05g，0.38mmol)和Fmoc-L-Val-Cl(0.13g，0.38mmol)的氯仿(6mL)溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.11g，0.56mmol)。将此反应混合物升温至室温并且搅拌72h。浓缩粗品并且通过prep-TLC(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，97∶3)纯化而得到0.24g(74％)的白色粉末状的3-(3-叔丁基-5-[(2-氟-4-[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基-苯基)-氨基甲酰基]氨基-1H-吡唑-1-基)苄基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-L-缬氨酸酯。MS m/z 854.3(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：4.08min。

步骤2：在室温下将3-(3-叔丁基-5-[(2-氟-4-[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基苯基)-氨基甲酰基]氨基-1H-吡唑-1-基)苄基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-L-缬氨酸酯(0.20g，0.23mmol)的哌啶(0.26mL)/DMF(15mL)溶液搅拌20min。用EtOAc(20mL)稀释此反应混合物并且用水洗涤(3x)。干燥合并的有机层并且浓缩。通过prep-TLC(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，97∶3)纯化粗品而得到0.11g(76％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 632.2(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.11min。

实施例11

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基乙酸酯

向0℃的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(1.00g，1.88mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中滴加入乙酰氯(0.15mL，2.07mmol)。在0℃下将此反应混合物搅拌1h。用水终止此反应混合物，然后用CH₂Cl₂提取。干燥合并的有机层并浓缩。通过柱色谱法纯化此粗品(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，97∶3)而得到0.32g(30％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 575.1(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.55min。

实施例12

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基磷酸二叔丁基酯

向室温下的1-H-四唑(0.45M乙腈溶液，56mL，25.3mmol，在使用之前真空除去溶剂)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(5.00g，9.39mmol)和二-叔丁基N，N-二乙基亚磷酰胺(2.11g，8.45mmol)。在室温下搅拌此反应混合物2h。然后将此反应混合物冷却至-40℃，并在保持反应温度低于0℃下加入间氯过氧苯甲酸浆状物(85％CH₂Cl₂溶液，2.74g，12.2mmol)。使此反应混合物升温至室温并且搅拌10min，然后加入NaHSO₃(10％，40mL)的水溶液。在室温下另外搅拌1h后，将反应物转移至分液漏斗中，然后用EtOAc提取。用NaHCO₃(2×50mL)洗涤有机层，干燥(NaSO₄)并浓缩。通过柱色谱法纯化粗品(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，98∶2)，随后经重结晶(CH₂Cl₂/己烷)而得到3.57g(52％)白色结晶状的预期产物。MS m/z 724.9(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.74min。

实施例13

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基磷酸二氢酯二盐酸盐

向室温下的实施例12的二-叔丁基3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基磷酸酯，(0.45g，0.62mmol)的二氧六环(12mL)溶液中缓慢加入HCl/二氧六环(4M，4mL，16mmol)。形成白色的沉淀，然后在室温下将此悬浮液搅拌3h。用醚(20mL)稀释此反应混合物，然后收集固体。用醚洗涤所得固体，随后用己烷洗涤而得到0.40g(94％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 612.9(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.05min。

实施例14

4-{[3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基]氧基}-4-氧代丁酸

向室温下的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(0.45g，0.85mmol)的四氢呋喃(43mL)溶液中加入丁二酸酐(0.10g，1.00mmol)。在室温下将此反应混合物搅拌72h。浓缩此反应混合物，然后用己烷将剩余物研磨。过滤所得的白色粉末，然后用己烷洗涤。将此固体再溶于EtOAc中，用饱和氯化铵水溶液洗涤(2×15mL)，干燥(NaSO₄)，然后浓缩而得到0.49g(91％)纯的产物。MS m/z 633.1(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.29min。

实施例15

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基甲氧基乙酸酯

向0℃的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(0.15g，0.28mmol)的二氯甲烷(1.5mL)/吡啶(0.5mL)溶液中滴加入甲氧基乙酰氯(0.03mL，0.34mmol)。使此反应混合物升温至室温并搅拌72h。用EtOAc稀释此反应混合物，然后用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。用盐水洗涤合并的有机层，干燥，然后浓缩。通过柱色谱法纯化此粗品(CH₂Cl₂∶MeOH，100％CH₂Cl₂至98.5∶1.5)而得到0.16g(96％)白色固体状的预期产物。MS m/z 605.1(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.44min。

实施例16

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基丙酸酯

向室温下的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，(0.20g，0.38mmol)和碳酸钾(0.26g，1.88mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中滴加入丙酰氯(0.05mL，0.56mmol)。在室温下将此反应混合物搅拌过夜。浓缩此粗品，然后经prep-TLC(CH₂Cl₂∶2M NH₃的MeOH溶液，97∶3)纯化而得到0.09g(42％)白色粉末状的预期产物。MS m/z 589.1(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.68min。

实施例17

3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基3-甲基丁酸酯

向0℃的实施例1的(4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(0.10g，0.19mmol)的二氯甲烷(1.0mL)/吡啶(0.3mL)溶液中滴加入3-甲基丁酰氯(0.02mL，0.23mmol)。使此反应混合物升温至室温并搅拌72h。用EtOAc稀释此反应混合物，然后用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。用盐水洗涤合并的有机层，干燥，然后浓缩。通过柱色谱法纯化此粗品(CH₂Cl₂∶MeOH，100％CH₂Cl₂至98.5∶1.5)而得到0.02g(18％)白色固体状的预期产物。MS m/z 617.3(M+H)⁺；保留时间(LC-MS)：3.89min。

生物学评价

为了更好地理解本发明，给出以下实施例。这些实施例仅仅是为了说明的目的，而不应以任何方式诠释为限定本发明的范围。本文中提及的所有出版物都通过引用全部并入本文中。

可以通过本领域熟知的体外、先体外后体内和体内分析来证明本发明的化合物的活性。例如，为了证明本发明的化合物的活性，可以使用以下分析。

生物学测定实施例

Flk-1(鼠VEGFR-2)生化测定

以TR-FRET模式在96-孔不透明板(Costar 3915)上进行此分析。反应条件如下：10μMATP、25nM聚GT-生长素、2nM Eu-标记的磷酸-TyrAb(PY20 Perkin Elmer)、10nM APC(Perkin Elmer)、7nM Flk-1(激酶结构域)、1％DMSO、50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl₂、0.1mM EDTA、0.015％BRIJ、0.1mg/mL BSA、0.1％巯基乙醇。通过加入酶使反应开始。各孔中的最终反应体积为100μL。在反应开始后约1.5-2.0小时，在Perkin ElmerVictor V Multilabel计数器上，在615和665nM读板。对于各孔以比值(665nm/615nm)*10000计算信号。

c-Met生化分析

将ELISA模式用于c-Met生物化学分析。此分析在96-孔板中使用C-末端HIS-标记的细胞内激酶结构域(956-1390个氨基酸)人类重组c-Met。在此分析中使用涂有用聚(GluTyr)(Sigma#P0275)的96-孔板(Costar#9018)。在100μL反应体积中，在含有0.2μM ATP(Sigma#A7699)的分析缓冲液(50mM HEPES pH7.0、5mM MnCl₂、0.1％BSA、0.5mM原钒酸钠、0.1％β-巯基乙醇)中，用2nM c-Met蛋白将涂于板上的聚(GluTyr)底物磷酸化。以10uM至128pM范围内的8-点IC₅₀剂量曲线的形式，在最终浓度1％DMSO下加入2μL的化合物。温育25分钟后，用25μL的100mM EDTA终止分析反应。然后清洗板，并用100μL的80ng/mL抗-4G10-HRP抗体(Upstate#16-105)将孔处理1h。最后将板清洗一次，然后用100μL3，3’，5，5’-TMB(Sigma#T8665)显色，并用100μL 1M HCl终止。在Victor 2平板读数器(Perkin Elmer)上读板，并利用内部软件进行IC₅₀的分析和计算。

Bcr-Abl野生型和突变体T315I生物化学分析

在由50mM Tris pH 7.5、10mM MgCl₂、1mM EGTA、2mM DTT、50μM ATP和0.4μCi的33P-ATP组成的分析缓冲液中，将髓Bcr-Abl-wt或突变体Bcr-Abl-T315I激酶(0.17nM)与鞘碱性蛋白(MBP，2μM)温育。在加入ATP前，以不同浓度加入待测化合物(终DMSO浓度＝1％)。在32℃下将此反应混合物温育1小时。然后通过加入磷酸(最终浓度＝1％)终止此反应，并将样品转移至滤垫，在β板读数器上读数。通过利用4参数拟合和内部软件分析MBP磷酸化被Bcr-Abl-wt或Bcr-Abl-T315I的抑制。

在Flk-1、c-Met、野生型Bcr-Abl和突变体T315I Bcr-Abl的生物化学测试中，实施例1显示出IC₅₀＜500nM。在Flk-1、c-Met、野生型Bcr-Abl和突变体T315I Bcr-Abl的生物化学分析中，实施例9、10、11、14、15和16显示出IC₅₀＜1μM，在c-Met和T315I Bcr-Abl的生物化学分析中，实施例8、12和17显示出IC₅₀＜20μM。

体外肿瘤细胞增殖分析

用于测试本发明化合物的粘附肿瘤细胞增殖分析包括由Promega开发的被称为Cell Titre-Glo的读数(Cunningham，BA″A Growing Issue：CellProliferation Assays.Modern kits ease quantification of cell growth″TheScientist 2001，15(13)，26；和Crouch，SP等，″The use of ATP bioluminescenceas a measure of cell proliferation and cytotoxicity″Journal of ImmunologicalMethods 1993，160，81-88)。

在96-孔板中，以3000细胞/孔，在含有10％胎牛血清的完整培养基中平板接种H460细胞(肺癌，购自ATCC)，并在37℃下温育24小时。平板接种24小时后，加入终浓度在10nM-20μM范围内的系列稀释的待测化合物，DMSO最终浓度为0.2％。加入待测化合物后，在完整的生长培养基中，在37℃下温育细胞72小时。在第4天，使用Promega Cell Titer GloLuminescent

分析试剂盒，将细胞溶解，并且向各孔加入100微升底物/缓冲剂的混合物，混合，并在室温下温育8分钟。在光度计上读出样品以测量各孔细胞溶胞产物中存在的ATP的量，其对应于该孔中可存活的细胞的量。在温育24小时的读数值被扣除作为第0天。为了测定IC₅₀值，使用线性回归分析测定用此测定模式对细胞增殖产生50％抑制的药物浓度。将该方案应用于待测的不同细胞系，包括，但不局限于CAKI-1、MKN45、HCC2998、K562、H441、K812、MEG01、SUP15、HCT116、BaF3-Abl(wt)和BaF3-Abl(T315I)。

在一种或多种受关注的细胞系中，实施例1和其衍生物(实施例9、11、12、13和14)显示出抗增殖性质(IC₅₀＜5μM)。受关注的细胞系包括，但不局限于CAKI-1、MKN45、HCC2998、K562、H441、K812、MEG01、SUP15、HCT116、BaF3-Abl(wt)和BaF3-Abl(T315I)。

表1说明对于各种BaF3细胞系(其表达Bcr-Abl的不同形式，包括野生型)和K562(表达野生型Bcr-Abl的人类细胞系)的细胞增殖分析的结果。特别引入关注的是BaF3-Abl(T315I)、BaF3-Abl(E255K)、BaF3-Abl(M351T)和BaF3-Abl(Y253F)是表达已在患者中观察到的Bcr-Abl的伊马替尼-耐药性突变体的细胞类型。给出实施例1的数据。对于不表达Bcr-Abl的BaF3亲代细胞系，测得实施例1的化合物的细胞增殖IC₅₀值大于3μM。

表1.用实施例1处理的表达Bcr-Abl的野生型和突变型的各种细胞系的细胞增殖IC₅₀值(M)。

表1

细胞类型	细胞增殖IC₅₀(M)
细胞类型	细胞增殖IC₅₀(M)	K562	1.58E-09
BaF3-Abl(wt)	3.84E-09	K562	1.58E-09
BaF3-Abl(wt)	3.84E-09	BaF3-Abl(T315I)	3.41E-08
BaF3-Abl(E255K)	5.03E-08	BaF3-Abl(T315I)	3.41E-08
BaF3-Abl(E255K)	5.03E-08	BaF3-Abl(M351T)	8.11E-09
BaF3-Abl(Y253F)	5.64E-09	BaF3-Abl(M351T)	8.11E-09

在BaF3-Abl(M351T)增殖分析中，实施例9、11、12、13和14显示IC₅₀＜10μM。

相信利用前述信息和本领域可获得的信息，本领域技术人员可以充分地利用本发明。本领域技术人员应该认识到，在不偏离本文中提出的本发明精神或范围的情况下，可以对本发明进行改变和修改。在上下文中所提出的标题旨在指引在本申请的什么地方可以发现某信息，但是不应视为本发明中可发现关于所述主题的信息的唯一来源。所有出版物和专利都通过引用并入本文。

Claims

1.化合物，其是4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺、其药学可接受的盐、其代谢物、其溶剂合物、其水合物、其前药或者其多晶型物，或者以分离的立体异构体形式存在或在立体异构体的混合物中的其盐或前药的非对映异构体形式。

2.如权利要求1所述的化合物，其是4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的前药。

3.如权利要求2所述的化合物，其中所述前药是

a)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]D-缬氨酸酯：

b)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)-氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基D-缬氨酸酯：

c)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基L-缬氨酸酯：

d)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基乙酸酯：

e)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基磷酸二叔丁基酯：

f)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基磷酸二氢酯二盐酸盐：

g)下式的4-{[3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}-苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基]氧基}-4-氧代丁酸：

h)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基甲氧基乙酸酯：

i)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基丙酸酯：

或者

j)下式的3-(3-叔丁基-5-{[(2-氟-4-{[2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基]氧基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-1H-吡唑-1-基)苄基3-甲基丁酸酯：

4.如权利要求1所述的化合物，其是4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的盐。

5.如权利要求2所述的化合物，其中所述盐是

a)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，双(4-甲基苯磺酸)盐，

b)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二甲磺酸盐，

c)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二盐酸盐，

d)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二(苯磺酸)盐，

e)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，二氢溴酸盐，或者

f)4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，硫酸氢盐。

6.药物组合物，其包含：

化合物4-{4-[({3-叔丁基-1-[3-(羟基甲基)苯基]-1H-吡唑-5-基}-氨基甲酰基)-氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺、其药学可接受的盐、其代谢物、其溶剂合物、其水合物、其前药或者其多晶型物，或者以分离的立体异构体形式存在或在立体异构体混合物中的其盐或前药的非对映异构体形式，和

生理学可接受的载体。

7.药物组合物，其包含如权利要求3所述的化合物和生理学可接受的载体。

8.药物组合物，其包含如权利要求5所述的化合物和生理学可接受的载体。

9.治疗过度增殖疾病的方法，其包括将治疗有效量的如权利要求1所述的化合物给药至有此需要的哺乳动物。

10.治疗过度增殖疾病的方法，其包括将治疗有效量的如权利要求6所述的组合物给药至有此需要的哺乳动物。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述过度增殖疾病是癌症。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头和/或颈癌、甲状腺癌、副甲状腺癌和/或它们的远处转移。

13.如权利要求11所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤、肉瘤或者白血病。

14.如权利要求12所述的方法，其中

所述乳腺癌是侵润性导管癌、侵润性小叶癌、原位导管癌或者原位小叶癌；

所述呼吸道癌是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管腺瘤或者胸膜肺母细胞瘤；

所述脑癌是脑干肿瘤、hypophtalmic神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜细胞瘤、神经外皮层瘤或者松果体瘤；

所述雄性生殖器官肿瘤是前列腺癌或者睾丸癌；

所述雌性生殖器官癌症是子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌或者子宫肉瘤；

所述消化道癌症是肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌或唾液腺癌；

所述泌尿道癌症是膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌或者尿道癌；

所述眼癌是眼内黑素瘤或者视网膜母细胞瘤；

所述肝癌是肝细胞癌、具有或不具有纤维板层型变体的肝细胞癌、胆管癌或者混合型肝细胞胆管癌；

所述皮肤癌是鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌或者非黑素瘤皮肤癌；

所述头和颈癌是喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇或者口腔癌；

所述淋巴瘤是AIDS-相关淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、霍奇金病或者中枢神经系统淋巴瘤；

所述肉瘤是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、淋巴肉瘤或者横纹肌肉瘤；

所述白血病是急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病或者毛细胞白血病。

15.治疗血管发生疾病的方法，其包括将治疗有效量的如权利要求1所述的化合物给药至有此需要的哺乳动物。

16.如权利要求6所述的组合物，其还包含抗过度增殖剂。

17.如权利要求16所述的组合物，其中所述抗过度增殖剂是埃坡霉素(epothiline)或其衍生物、伊立替康、雷洛昔芬或拓扑替康。

18.如权利要求6所述的组合物，其进一步包含其他药剂。

19.如权利要求18所述的组合物，其中所述其他药剂是阿地白介素、阿仑膦酸、alfaferone、阿利维A酸、别嘌醇、aloprim、aloxi、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、anzmet、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮杂胞苷、硫唑嘌呤、BCG或tice BCG、苯丁抑制素、乙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、蓓萨罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降钙素、campath、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、DaunoXome、地塞米松、地塞米松磷酸盐、戊酸雌二醇、地尼白介素-毒素连接物、甲基氢化泼尼松、地洛瑞林、右雷佐生、己烯雌酚、氟康唑、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、屈大麻酚、DW-166HC、乙酸亮丙瑞林、elitek、ellence、emend、表柔比星、阿法依泊汀、epogen、依铂、ergamisol、estrace、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、乙炔基雌二醇、氨磷汀、依替膦酸、凡毕复、依托泊苷、法倔唑、farston、非格司亭、非那雄胺、fligrastim、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷单磷酸酯、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟甲睾酮、氟他胺、福美坦、fosteabine、福莫司汀、氟维司群、gammagard、吉西他滨、吉妥单抗、格列卫、卡莫司汀、戈舍瑞林、格拉司琼HCl、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、eyrthro-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-1a、白细胞介素-2、内含子A、易瑞沙、伊立替康、凯特瑞、蘑菇多糖硫酸酯、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林乙酸盐、左旋咪唑、左亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、levoxyl、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、6-巯嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、metvix、米替福新、米诺环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、Modrenal、Myocet、奈达铂、neulasta、neumega、neupogen、尼鲁米特、诺瓦得士、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、昂丹司琼HCl、orapred、奥沙利铂、紫杉醇、pediapred、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、picibanil、毛果芸香碱HCl、吡柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、泼尼松龙、泼尼松、premarin、丙卡巴肼、procrit、雷替曲塞、利比、铼-186依替膦酸、利妥昔单抗、roferon-A、罗莫肽、salagen、善宁、沙格司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、甲强龙、膦门冬酸、干细胞治疗剂、链佐星、氯化锶-89、synthroid、他莫昔芬、坦洛新、他索纳明、睾内酯、美索帝、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊甙、丙酸睾酮、testred、硫鸟嘌呤、塞替派、促甲状腺素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、trexall、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、曲普瑞林乙酸盐、曲普瑞林双羟萘酸盐、UFT、尿苷、戊柔比星、维斯力农、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、维鲁利秦、zinecard、净司他丁斯酯、枢复宁、ABI-007、阿考比芬、actimmune、affinitak、氨基蝶呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、BAY43-9006(索拉非尼)、阿瓦斯汀、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、乙酸环丙孕酮、地西他滨、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-PEG、ixabepilone、钉形贝血蓝蛋白、L-651582、兰瑞肽、拉索昔芬、libra、lonafarnib、米泼昔芬、米诺膦酸、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇多谷氨酸盐、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺视黄酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、特罗凯、taxoprexin、胸腺素α1、噻唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、TransMID-107R、伐司朴达、伐普肽、瓦他拉尼、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸，或它们的组合。