CN103070172B - 一种云芝葡聚糖水剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种云芝葡聚糖水剂及其制备方法，特别是涉及防治马铃薯Y病毒的云芝葡聚糖水剂。所述水剂包含按重量计的云芝葡聚糖粗品1.0-2.0％、表面活性剂烷基糖苷5.0-8.0％、防止分解剂1，2-丁二醇3.0-5.0％、防冻剂甘油4.0-10.0％，用双蒸水补足至100％。所述云芝葡聚糖粗品采用保藏号为CGMCC No.6760的云芝菌株经菌株发酵和葡聚糖的提取步骤制得。本发明的云芝葡聚糖水剂500倍液对马铃薯Y病毒的平均防效大于78％，特别是1.1％的云芝葡聚糖水剂防治马铃薯Y病毒的平均防效高达80.4％，优于20％克Y特灵可湿性粉剂300倍液。
Description
一种云芝葡聚糖水剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及杀菌剂类，尤其是涉及一种云芝葡聚糖水剂及其制备方法，特别是涉及防治马铃薯Y病毒的云芝葡聚糖水剂。
技术背景
[0002] 马铃薯Y病毒(Potato virus Y)是感染马铃薯的病毒中最为广泛传播并造成严重经济损失的病毒之一，马铃薯植株被Y病毒侵染后，表现重型花叶、叶脉坏死和垂叶条斑坏死症状。特别是条斑坏死，在植株的叶脉、叶柄和茎上都会出现，复叶患病后很容易脱落，到后期植株上只留下接近顶部的一些叶子，严重影响马铃薯的产量和质量。同时，马铃薯Y病毒还可以侵染茄科、苋科、豆科和菊科作物，是危害粮食作物、经济作物、牧草、药材、果树的重要病原，在全世界范围内造成严重经济损失。
[0003] 马铃薯Y病毒主要是靠接触和蚜虫传播，尤其是蚜虫传播。目前，还没有一种专门防治马铃薯Y病毒的药剂，对于防治马铃薯Y病毒的措施主要包括以下几个方面:第一，利用植物茎尖培养，短时高温处理等细胞工程方法培育无病毒植株；第二，利用基因工程和传统的杂交等育种方法培育抗病毒植株；第三，通过杀灭蚜虫等传播介体来减轻马铃薯Y病毒危害等。然而，培育无病毒植株和抗性品种技术要求高、效率低，由于马铃薯Y病毒容易产生抗性，所以只能在短时间内发挥作用。通过消灭蚜虫来防治马铃薯病毒病，破坏了农田的生态环境，还容易产生化学农药残留，污染土壤。由此可见，目前的田间管理方法都是很被动地减少马铃薯Y病毒的危害，不能从本质上防治马铃薯Y病毒。
发明内容
[0004] 本发明为解决上述技术背景中的不足，提供了一种有效防治马铃薯Y病毒的云芝葡聚糖水剂及其制备方法，该水`剂形式的云芝葡聚糖杀菌剂不但可以有效地防治马铃薯Y病毒引起的病害，而且具有环境相容性好、不易产生抗药性、物理化学稳定性好、药效时间长等优点，是一种集预防和保护为一体的新型杀菌剂。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案包括云芝的发酵、云芝葡聚糖的提取和云芝葡聚糖水剂的加工。本发明采用特定的云芝菌株，其命名为Coriolus versicolor,其保藏登记号为CGMCC N0.6760，保藏机构为:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保持时间为2012年11月07日。该菌株的实验室编号为云芝菌株HT-6。该菌株已另案申请专利。
[0006] 本发明提供一种云芝葡聚糖水剂，其特征在于:各组分用量按重量计为:云芝葡聚糖粗品1.0-2.0 %、表面活性剂烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解剂I，2-丁二醇3.0-5.0%,防冻剂甘油4.0-10.0%，用双蒸水补足至100%。
[0007] 优选地，云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性剂烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解剂1，2- 丁二醇4%、防冻剂甘油4%，用双蒸水补足至100%。
[0008] 更优选地:云芝葡聚糖粗品1.1 %、表面活性剂烷基糖苷6.0%、防止分解剂1，2- 丁二醇4%、防冻剂甘油4%，用双蒸水补足至100%。
[0009] 所述的云芝葡聚糖粗品是如下制得的:
[0010] 步骤一:云芝的发酵:
[0011] (I)摇瓶种子活化:均匀挑取保藏登记号为CGMCC N0.6760的云芝菌株的菌丝块转接于装有80ml种子培养基的250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒温振荡培养4d ;所述种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麸皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余为水；
[0012] (2)摇瓶种子培养:按50ml/L的接种量将摇瓶种子液接入装有200ml种子培养基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒温振荡培养4d ;所述的种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麸皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO40.2g/L，其余为水；
[0013] (3)600L大发酵罐培养:将经摇瓶发酵的种子液接入600L发酵罐发酵培养；发酵罐装料系数为0.7，接种量5%，转速150r/min，通风量0.8v/v/m,发酵温度26~28°C，罐压
0.5kg/cm2 ;所述发酵培养基配方为:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆饼粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麸皮 7.5g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余为水；
[0014] 步骤二:云芝葡聚糖的提取
[0015] 将经步骤一发酵后获得的发酵液过滤后得到的菌丝体用清水洗涤，洗涤后再过滤，向洗涤后的菌丝体中加人2%的Na2CO3溶液，菌丝体与Na2CO3溶液重量比为1: 20，抽提温度45°C，pH为8.5，超声破碎20min，过滤抽提液，将滤液5000r/min离心lOmin，减压浓缩至原体积的1/10，向浓缩液中加入活性碳脱色，过滤，向滤液中加入等体积乙醇，沉淀30min后过滤，先后分别用无水乙醇、丙酮、乙醚冲洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品O
[0016] 本发明的云芝葡聚糖水剂的配制工艺为:向双蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性剂烷基糖苷，控制反应温度不高于60°C，搅拌至原药完全溶解后加入防止分解剂1，2- 丁二醇和防冻剂甘油，再加入适量的双蒸水补足至100 %，再次搅拌混合均匀。
[0017] 进一步地，本发明提供上述云芝葡聚糖水剂在防治马铃薯Y病毒方面的应用。本发明的云芝葡聚糖水剂500倍液对马铃薯Y病毒的平均防效大于78 %，特别是1.1 %的云芝葡聚糖水剂防治马铃薯Y病毒的平均防效高达80.4%，优于20%克Y特灵可湿性粉剂300倍液。
[0018] 除非另有说明，本发明的为重量百分比。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下:
[0020] I)本发明云芝葡聚糖来源于云芝,其有效成分云芝葡聚糖同时也是云芝的药用成分，对人畜无毒，环境相容性好，不会产生传统化学农药的残留问题。
[0021] 2)本发明云芝葡聚糖水剂中的有效成分是云芝葡聚糖，由于真菌多糖结构多样，并且具有很高的生物活性，在防治马铃薯Y病毒过程中生物活性高，防效好，并且不易产生抗药性。
[0022] 3)本发明云芝葡聚糖水剂使用时无粉尘飞扬，对作业者安全，与可湿性粉剂和悬浮剂相比，克服了可湿性粉剂生产和使用过程中的粉尘污染问题和悬浮剂储存容易分层的缺点，本发明水中分散性好，贮存期无低温结冰现象，在植物病毒病特别是马铃薯Y病毒的防治中具有广阔的应用前景。具体实施方式:
[0023] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对云芝葡聚糖水剂的制备及其在防治马铃薯Y病毒方面的应用具体说明。
[0024] 实施例1:云芝葡聚糖水剂的制备:
[0025] 步骤一:云芝的发酵:
[0026] (I)摇瓶种子活化:均匀挑取保藏登记号为CGMCC N0.6760的云芝菌株的菌丝块定量转接于装有80ml种子培养基的250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒温振荡培养4d ；所述的种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麸皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO4
1.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余为水；
[0027] (2)摇瓶种子培养:按50ml/L的接种量将摇瓶种子液接入装有200ml种子培养基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒温振荡培养4d ;所述的种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麸皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO40.2g/L，其余为水；
[0028] (3) 600L大发酵罐培养:将摇瓶发酵的种子液接入600L发酵罐发酵培养；发酵罐装料系数为0.7，接种量5 %，转速150r/min，通风量0.8v/v/m,发酵温度26~28V，罐压
0.5kg/cm2 ;所述发酵培养基配方为:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆饼粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麸皮 7.5g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余为水；
[0029] 步骤二:云芝葡聚糖的提取
[0030] 将发酵液过滤后得到的菌丝体用清水洗涤，洗涤后再过滤，向洗涤后的菌丝体中加入2%的Na2CO3溶液，菌丝体与Na2CO3溶液重量比为I: 20，抽提温度45。。，pH为8.5，超声破碎20min,过滤抽提液,将滤液5000r/min离心IOmin,减压浓缩至原体积的1/10,向浓缩液中加入活性碳脱色，过滤，向滤液中加入等体积乙醇，沉淀30min后过滤，先后分别用无水乙醇、丙酮、乙醚冲洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品；
[0031] 步骤三:制备云芝葡聚糖水剂:
[0032] 云芝葡聚糖水剂的各组分用量按重量计为:云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性剂烷基糖苷6.0%、防止分解剂I，2- 丁二醇4 %、防冻剂甘油4 %，用双蒸水补足至100 %。云芝葡聚糖水剂的配制工艺为:向双蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性剂烷基糖苷，控制反应温度不高于60°C，搅拌至原药完全溶解后加入防止分解剂1，2_ 丁二醇和防冻剂甘油，再加入适量的水补足至100 %，再次搅拌混合均匀。
[0033] 实施例2:1.1 %云芝葡聚糖水剂对马铃薯Y病毒的防效实验:
[0034] 为验证实施例1所制得的1.1%云芝葡聚糖水剂对马铃薯Y病毒的防效，我们在2009年9月至2010年7月进行大田推广试验，实验结果报告如下:
[0035] I试验条件
[0036] 1.1实验对象、作物和品种
[0037] 实验对象为马铃薯Y病毒Potato virus Y，来源于西北农林科技大学植物保护学院植物病毒实验室，试验作物为马铃薯，品种为紫花白，购自陕西省咸阳市杨凌区金道种子农资站。
[0038] 1.2环境条件
[0039] 试验用地选在陕西省咸阳市杨凌区，试验地面积800m2 (1.21亩)，土质为轻壤土，有机质含量为1.01%，pH值7.7，所有试验小区栽培条件及管理措施一致。
[0040] 本实验设1.1%云芝葡聚糖水剂500倍液、20%克Y特灵可湿性粉剂300倍液和不施药清水共3个处理，每个处理4个重复，共12个小区，各小区随机排列，每个小区40m2小区间及试验地周围设置0.6m宽的隔离带。2010年4月进行播种，平均株距8cm，播种后分别于2010年5月5日、15日和25日叶面喷雾一次，亩用药液500kg，喷药器械为工农-16型喷雾器。
[0041] 1.3气象条件
[0042] 第一次施药(5月5日)当日少云,风力3级,最高气温25°C,最低气温15°C,相对湿度为80%。第二次施药(5月15日)当日阴，风力3级，最高气温23°C，最低气温15°C，相对湿度为80%。第一次施药(5月25日)当日少云，风力5级，最高气温25°C，最低气温14°C，相对湿度为80%。
[0043] 最后一次施药后7天进行调查，每小区采用4点取样法，每点查20株，记录总株数和各级病株数。
[0044] 分级方法:
[0045] O级:植株茎基部和主根均无病斑；
[0046] I级:茎基部和主根上有少量病斑；
[0047] 3级:茎基部或主根上病斑较多，病斑面积占茎和根总面积的四分之一~二分之
[0048] 5级:茎基部及主根上病斑多且较大，病斑面积占茎基部和根总面积的二分之一~四分之三；
[0049] 7级:茎基部或主根上病斑连片，形成烧茎现象，但根系并未死亡；
[0050] 9级:根系坏死，植株地上部萎蔫或死亡。
[0053] 调查结果如下表1所示，其中，所有取样点都没有药害发生，经过田间小区试验表明，1.1 %云芝葡聚糖水剂500倍液对由马铃薯Y病毒的防效达80.4%，高于20%克Y特灵可湿性粉剂300倍液。
[0054] 表1 1.1 %云芝葡聚糖水剂对马铃薯Y病毒的防效实验
[0055]
[0056] 本发明的一种防治马铃薯Y病毒的云芝葡聚糖水剂及其制备方法已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。
Claims (5)
1.一种云芝葡聚糖水剂，其特征在于:各组分用量按重量计为:云芝葡聚糖粗品1.0-2.0%、表面活性剂烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解剂1，2—丁二醇3.0-5.0%、防冻剂甘油4.0-10.0%,用双蒸水补足至100% ;所述z?芝匍聚糖粗品是按照如下方法制得的: 步骤一:云芝的发酵: (1)摇瓶种子活化:均匀挑取保藏登记号为CGMCC N0.6760的云芝菌株的菌丝块转接于装有80ml种子培养基的250ml三角瓶中，于28°C，120r/min恒温振荡培养4d ;所述种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麸皮5g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO40.2g/L，其余为水； (2)摇瓶种子培养:按50ml/L的接种量将摇瓶种子液接入装有200ml种子培养基的500ml三角瓶中，于28°C，150r/min恒温振荡培养4d ;所述的种子培养基配方为:葡萄糖20g/L，玉米粉 10g/L，麸皮 5g/L，蛋白胨 3g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO40.2g/L，其余为水； (3) 600L大发酵罐培养:将经摇瓶发酵的种子液接入600L发酵罐发酵培养；发酵罐装料系数为0.7，接种量5%，转速150r/min，通风量0.8v/v/m,发酵温度26~28°C，罐压0.5kg/cm2 ;所述发酵培养基配方为:葡萄糖30g/L,玉米粉15g/L,豆饼粉20g/L,蛋白胨Ig/L，麸皮 7.5g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO4 0.2g/L，其余为水； 步骤二:云芝葡聚糖的提取 将经步骤一发酵后获得的发酵液过滤后得到的菌丝体用清水洗涤，洗涤后再过滤，向洗涤后的菌丝体中加入2%的Na2CO3溶液，菌丝体与Na2CO3溶液重量比为1:20，抽提温度45°C,pH为8.5,超声破碎20min,过滤抽提液,将滤液5000r/min离心IOmin,减压浓缩至原体积的1/10，向浓缩液中加入活性碳脱色，过滤，向滤液中加入等体积乙醇，沉淀30min后过滤，先后分别用无水乙醇、丙酮、乙醚冲洗沉淀物后真空干燥，得到云芝葡聚糖粗品。
2.根据权利要求1的云芝葡聚糖`水剂，其特征在于:云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性剂烷基糖苷5.0-8.0%、防止分解剂1，2—丁二醇4%、防冻剂甘油4%，用双蒸水补足至100%。
3.根据权利要求1的云芝葡聚糖水剂，其特征在于:云芝葡聚糖粗品1.1%、表面活性剂烷基糖苷6.0%、防止分解剂1，2—丁二醇4%、防冻剂甘油4%，用双蒸水补足至100%。
4.根据权利要求1的云芝葡聚糖水剂，其特征在于:向双蒸水中加入云芝葡聚糖粗品以及表面活性剂烷基糖苷，控制反应温度不高于60°C，搅拌至原药完全溶解后加入防止分解剂1，2—丁二醇和防冻剂甘油，再加入适量的双蒸水补足至100%，再次搅拌混合均匀。
5.根据权利要求1-3任一所述的云芝葡聚糖水剂在防治马铃薯Y病毒方面的应用。
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