CN103068396A - 使用抑制c5和备解素相互作用的抗-备解素抗体来抑制交替途径介导的症患的方法 - Google Patents
使用抑制c5和备解素相互作用的抗-备解素抗体来抑制交替途径介导的症患的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103068396A CN103068396A CN2011800221973A CN201180022197A CN103068396A CN 103068396 A CN103068396 A CN 103068396A CN 2011800221973 A CN2011800221973 A CN 2011800221973A CN 201180022197 A CN201180022197 A CN 201180022197A CN 103068396 A CN103068396 A CN 103068396A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- properdin
- antibody
- described method
- resisting
- fab
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
一种在本发明的哺乳动物中抑制交替补体途径活化的方法,包括施用一定量的抗体和/或其片段,所述抗体和/或其片段特异性结合备解素,并抑制备解素与补体蛋白例如C5的结合以在本发明的哺乳动物中抑制交替补体途径。
Description
相关申请
本申请要求2010年3月2日提交的美国临时申请No.61/309,705的优先权,其主旨通过引用的方式全部并入本文。
技术领域
本发明涉及抗-备解素抗体剂,其抑制备解素与补体蛋白例如C5或C5b的结合,以及这些抗体用于在哺乳动物的预防和治疗环境中选择性抑制交替补体途径功能来预防、停止或反转疾病进展。
背景技术
补体系统对于针对病原体的宿主防御来说是重要的,并且涉及清除例如病原体、细菌细胞、外源抗原和肿瘤细胞。由于病原体炎症和自身免疫疾病交替补体途径(AP)活化。已经发现C3a,C5a和C5b-9的水平提高相关于数种急性和慢性疾病。因此,抑制疾病诱导的AP活化在其中补体活化在疾病病理中发挥作用的疾病中对于临床益处是重要的。
补体系统通过三种不同补体途径来活化:经典、凝集素和交替途径。经典途径通过抗原-抗体络合物活化,并且是宿主防御所需要的。凝集素途径是经典途径的变体。交替途径由外源材料、人工表面、死亡组织、细菌和死亡酵母细胞所活化。选择性抑制交替途径活化而不影响经典途径的治疗策略是治疗和AP活化相关的疾病和病患的疾病相关性的。在病理条件下,交替途径的活化产生过敏毒素,包括C3a,C5a和也称为MAC的组织损坏C5b-9分子。这些分子通过细胞活化、炎症介导因子的释放和C5b-9的沉积而介导炎症和组织损坏。巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞的白细胞趋化反应和活化提供炎症应答的证据。另外,血管渗透性、细胞溶解和组织损伤过程也在炎症过程中发生。活化的细胞释放炎症介导因子,例如TNF-α、IL-Iβ、IL-6、IL-8、VEGF、嗜中性粒细胞、弹性蛋白酶和过氧化物。
已知需要备解素来引发交替补体途径,由于其结合C3b组成AP活化中的必要的第一步骤。备解素高亲和性地结合C3b。备解素-结合的C3b随后结合因子B以形成PC3bB络合物,然后其被因子D切除以形成PC3bBb络合物,其中Ba释放。因为产生C3b和Bb的另外分子,因此它们装配到PC3bBb络合物中形成C5转化酶,这会切除C5为C5a和C5b。所形成的C5表示在和C6,C7,C8和C9相关时形成C5b-9络合物的锚蛋白。血液中的备解素浓度为约5μg/mL,因此其是仅仅以比因子D更低浓度存在的非-蛋白酶分子。
备解素是交替途径特异性分子,其存在和功能需要用于交替途径的传播。因此,抑制AP活化而不抑制经典补体途径表现为重要治疗策略以抑制AP的疾病-引导的活化。因此,通过耗尽备解素、中和备解素或失活备解素来阻断、抑制或防止AP活化保持为潜在重要的治疗策略。
之前未发现结合C5或C5b的抗-备解素抗体。本发明的抗体可以抑制备解素与C5或C5b的结合,因此抑制C3a,C3b,C5a,C5b和C5b-9的形成。类似地,可以产生抗-C5抗体,其将抑制备解素与C5/C5b的相互作用,并且抑制C3a,C3b,C5a,C5b和C5b-9的形成。
由于备解素与C5的结合亲和性弱于本发明的抗体与备解素的结合亲和性,因此本发明的抗体可以抑制C5分子与备解素的结合,并且通过在这样的环境中预防AP活化可以提供治疗益处,在该环境中备解素与C5的结合是预存的。使用特异性预防备解素与C5的结合的抗-备解素抗体来治疗可以在其中交替补体途径活化的病理条件下提供显著的治疗益处。
发明概述
已经开发可以抑制备解素与C3b的结合的抗体,并且已经讨论了去聚合备解素聚合物的那些。这些抗体可以抑制C3a,C5a和C5b-9的形成。
本发明涉及在哺乳动物中抑制交替补体途径活化的方法。该方法包括下列步骤:向哺乳动物施用治疗有效量的抗-备解素剂,其特异性结合备解素,并抑制备解素结合至少一种补体蛋白,例如C5,C5b或C9。
本发明还涉及抑制备解素结合例如C5或C5b、因此抑制C3a,C3b,C5a,C5b和C5b-9形成的抗体。
在本发明的一个方面中,抗-备解素剂可以结合至少一种补体蛋白,包括但不限于C5/C5b,C6,C7,C8或C9。
在本发明的另一方面中,抗-备解素剂可以选自下列组,包括但不限于:合成小分子、DNA适体、DNA片段、siRNA、单克隆和多克隆抗体、单克隆和或多克隆抗体的衍生物,它们阻断备解素结合C5/C5b,C6,C7,C8或C9中的至少一种,或者类似C5/C5b,C6,C7,C8或C9中的至少一种中发现的肽的任何部分。
在本发明的又一方面中,抗-备解素剂可以是注册为PTA-9641(14G11)的抗-备解素抗体。
本发明的抗-备解素单克隆抗体14G11结合SEQ ID NO:15AFAYQKRSGGLCQPCRSPRWSLWS的N端结构域。这些抗体抑制备解素结合C5b,并且抑制AP活化。
在本发明的另一方面中,抗-备解素剂可以体内或离体施用至哺乳动物,包括人。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体可以是单克隆、多克隆、嵌合、重组、人源化、脱免疫、humaneer化TM或全人抗体。
在本发明的一个方面中,抗-备解素抗体还可以是抗体片段,例如单链抗体,IgG,F(ab′)2,F(ab),F(ab′)片段,或截短抗体例如Fc截短抗体。
在本发明的另一方面中,抗-备解素剂与备解素的结合比可以为约0.2∶1至约1.5∶1。
在本发明的又一方面中,抑制备解素与至少一种补体蛋白的结合可以允许在哺乳动物中抑制交替补体途径而不影响经典途径活化。
在本发明的又一方面中,抗-备解素剂降低哺乳动物中游离备解素的水平。
在本发明的一个方面中,抗-备解素剂特异性结合备解素以抑制备解素与C5的结合。抗体可以在其C5结合位点结合备解素单体上的抗原表位,并且抑制备解素和C3b的Olimer的形成,如图2中所示。
在本发明的另一方面中,抗-备解素剂特异性结合备解素以抑制备解素结合C6,C7,C8或C9。
在本发明的又一方面中,小鼠中产生的抗-备解素抗体可以使用结合并抑制备解素结合C5和C9的特异性CDR域来制备。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体可以抑制也称为MAC的C5b-9络合物的形成。
在本发明的一个方面中,本发明提供通过施用治疗有效量的抗-备解素剂来改善和过度或不受控制的交替途径补体活化相关的疾病或病症的方法,所述抗-备解素剂特异性结合备解素以抑制备解素结合C5。
在本发明的另一方面中,抗体可以在细胞或哺乳动物中制备,或者其可以以在哺乳动物中噬菌体展示或重组或天然抗体文库基因工程化。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体和抗原结合片段施用至受试者可导致下列中的至少一种:抑制备解素结合C5,抑制备解素结合C5b,抑制备解素结合C9,降低C3bBb的形成,降低C3a和C5a的产生,降低C5b-9络合物的形成,降低嗜中性粒细胞的活化,降低单核细胞的活化,降低血小板的活化,降低白细胞-血小板缀合物的形成,降低TNF-α的产生,以及降低嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的产生。因此,抗体或其片段还可以在人血清/血浆中抑制交替途径依赖性兔红细胞胞溶。
在本发明的一个方面中,本发明涉及在哺乳动物宿主中抑制交替补体途径活化的方法,包括施用治疗有效量的抗-备解素单克隆抗体,其特异性结合备解素上的抗原表位,其中抗原表位涉及C5,C5b或C9结合。
在另一方面中,本发明涉及通过在哺乳动物中施用治疗有效量的抗体而在哺乳动物中抑制交替补体途径活化而不抑制经典途径活化的方法,所述抗体特异性结合备解素的抗原表位,这通过抑制备解素和C5的相互作用而不影响经典途径活化来阻断交替途径活化。
在进一步的方面中,本发明涉及在哺乳动物中抑制交替补体途径活化而不抑制经典途径活化的方法。该方法包括下列步骤:向哺乳动物施用治疗有效量的抗体,所述抗体特异性结合备解素并抑制C5b-9的沉积,这通过抑制备解素和C5的相互作用而不影响经典途径活化来阻断交替途径活化。
在另一方面中,本发明涉及抑制交替补体途径活化的方法,包括下列步骤:向哺乳动物施用治疗有效量的抗体,所述抗体通过抑制备解素和C5的相互作用而不影响经典途径活化来阻断PC3b络合物、PC3bB络合物和PC3bBb络合物的形成。
在又一方面中,本发明可以提供在出于发展疾病或病症的个体中抑制交替补体途径活化的方法,其中通过向需要的个体施用本发明的任何特定抗体或本文公开的其抗原结合片段来交替补体途径的活化有助于疾病病理学、加重疾病或引起疾病。
在进一步的方面中,本发明可以涉及治疗由疾病相关或病理条件介导的交替途径活化的方法,包括下列步骤:向哺乳动物施用治疗有效量的抗体或其片段,其特异性结合备解素,并在病理位点阻断C9装配的引发和抑制C5b-9络合物形成。
在本发明的另一方面中,本发明提供药学上可接受的载体中的抗-备解素剂,所述载体选自:干燥可分散粉末;无水乙醇;小胶囊;脂质体;雾状喷雾剂;和可注射的赋形剂。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体可以在其C5结合位点特异性结合备解素单体上的抗原表位,并且可以抑制备解素和C3b聚合物的形成。
在本发明的一个方面中,本发明涉及在备解素-敲除小鼠或其他啮齿动物中制备大鼠或小鼠抗-备解素单克隆抗体的方法。该方法包括下列步骤:向小鼠或其他啮齿动物施用有效量的备解素或其片段以备解素敲除有效量的备解素或其片段(其引起敲除啮齿动物以产生针对备解素的抗体)。小鼠或其他啮齿动物可包括人免疫球蛋白基因。片段包括具有C5结合结构域的肽。
在本发明的另一方面中,本发明还涉及分离的抗体或其抗原结合部分,其结合人备解素并阻断C5或C5b结合备解素。抗体或其抗原结合部分包含:重链可变结构域,包含三种CDR的氨基酸序列(SEQID NO:1);和轻链可变结构域,包括三种CDR的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体或其抗原结合片段可包括:由ATCC登录号PTA-9641保藏的杂交瘤细胞系制备的抗体的重链可变域和轻链可变域。
在本发明的一个方面中,本发明进一步涉及结合人备解素的分离的抗体或其抗原结合部分。抗体或其抗原结合片段包含:重链可变结构域,含有三种CDR的氨基酸序列(SEQID NO:1)。
在本发明的另一方面中,本发明进一步涉及结合人备解素的分离的抗体或其抗原结合部分。抗体或其抗原结合片段包含:轻链可变结构域,三种CDR的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
在本发明的又一方面中,抗-备解素抗体或其抗原结合片段还可以抑制在人血清/血浆中交替途径依赖性兔红细胞胞溶。
在本发明的一个方面中,本发明涉及通过下列方式来在哺乳动物中抑制交替途径补体活化的方法:向哺乳动物中施用治疗有效量的抗-备解素抗体或其抗原结合部分,其以抗体与备解素单体的摩尔比为约0.2∶1特异性结合备解素以抑制交替途径补体活化。
在本发明的另一方面中,本发明的抗体可以体内或离体施用。
在本发明的又一方面中,抗体或其抗原结合部分可以特异性结合备解素上的抗原表位,因此在哺乳动物中抑制交替补体途径。
在另一方面中,本发明可以提供治疗疾病或病患的方法,其中AP活化发挥作用。治疗包括下列步骤:向哺乳动物施用源自鼠源单克隆抗体(ATCC PTA-9641)的抗备解素抗体或其抗原结合片段,其在C5或C5b的结合位点选择性结合备解素,并且抑制C3bBb络合物、PC3bBb络合物、PC5络合物、PC9络合物和PC3b络合物的形成。抗-备解素抗体或其抗原结合片段可以具有的平衡解离常数在约1nM至约1pM之间。本发明的抗体可以施用至已经或处于发展疾病或病患风险的哺乳动物中,其中AP活化发挥作用。在某些实施方案中,疾病或病患选自本文所述的多种疾病,其中交替途径在疾病中发挥病理作用。
附图简述
图1示出备解素在C5b-9的装配和形成中的假设作用的图。
图2显示如果备解素可以存在为三聚体时PC5bC3bBb转化酶的形成。
图3显示备解素与C3b,C5/C5b和C9的结合亲和性。
图4显示本发明的抗-备解素剂可以抑制rRBC的溶血。
图5显示抗-备解素IgG和F(ab′)2高亲和性地结合备解素。
图6显示通过抗-备解素抗体抑制备解素与C5b和C9的结合。
图7显示抑制正常人血清中新形成的C3b的AP-依赖性形成。
图8显示抑制正常人血清中PC3b络合物的AP-依赖性形成。
图9显示抑制正常人血清中AP-依赖性Bb形成。
图10显示抑制正常人血清中AP-依赖性C5形成。
图11显示抑制正常人血清中AP-依赖性C9形成。
图12显示抑制正常人血清中AP-依赖性C5b-9形成。
图13示出SEQ ID NO:1-6。
图14示出SEQ ID NO:7-8。
图15示出SEQ ID NO:9-10。
图16示出SEQ ID NO:11-12。
图17示出SEQ ID NO:13-14。
图18示出SEQ ID NO:15。
发明详述
如此处使用的,术语″抗体″或″其抗体片段″是指完整抗体或和完整抗体竞争特异性结合位点的其结合片段。结合片段包括Fab,Fab′,F(ab′)2,Fv,和单链抗体。
如本文使用的,术语″抗-备解素剂″是指小分子、DNA片段、siRNA,DNA的适体、单克隆和多克隆抗体、单克隆和或多克隆抗体的衍生物,它们阻断备解素结合C5或者类似C5中发现的肽的任何部分。
如本文使用的,术语″补体决定区(CDR)″是指特异性抗体可以结合的抗体上的区域。
如本文使用的,术语″保守序列修饰″是指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。保守修饰可包括氨基酸替换、增加和缺失。
如本文使用的,术语″抗原表位″是指抗原上的一组三维结构,其中单克隆抗体及其片段将结合。
如本文使用的,术语″单克隆″是指这样的抗体,其结合氨基酸序列,并且在其靶抗原上具有单一特异性抗原表位。
已知备解素高亲和性地结合C3b。发现备解素结合C5和C5b对于备解素功能是重要的,并且特异性抑制备解素结合C5或C5b的单克隆抗体通过抑制C5b-9形成和抑制C3b形成的来抑制备解素功能。本发明的一个实施方案涉及抗-备解素抗体,其可以结合备解素并抑制备解素结合C5或C5b。
备解素高亲和性地结合C9,这表明备解素在MAC装配中的作用。本发明的抗体可以抑制:a)AP活化和b)AP诱导C5b-9的形成。抑制备解素结合C5/C9可以允许在哺乳动物中抑制交替补体途径而不影响经典途径活化。抗体与备解素结合的比可以为约0.2∶1至约1.5∶1。抗-备解素剂可以防止和/或逆转备解素与C5和C9的结合。
因此,本发明的一个实施方案涉及抗-备解素抗体,其可以结合备解素,并抑制其功能所需要的备解素结合C5或C5b。通过抑制备解素结合C5/C5b,抗-备解素抗体可以抑制也称为MAC的C5b-9络合物的形成。
备解素也可以存在为聚合物,例如二聚体、三聚体或四聚体。已经开发备解素结合C3b,和抑制备解素结合C3b的抗体。本发明可包括可以抑制备解素结合C5b和C9的抗体。C5提供锚以形成C5b-9络合物,并且C9负责形成C5b-9络合物的部分。本发明的抗体可以抑制MAC装配,并提供在C3转化酶形成位点形成MAC的机理。
在一个例子中,备解素可以存在为三聚体。具有三个备解素分子的三聚体可以包括可被C5b占据的两个位点。一个位点将被C3b根据下式占据:(P)x(C5b)y(C3b)z(Bb)w,其中X=Y+Z,Z=W。PC3bBb是纯C3转化酶。P(C5b)C3bBb也是结合C5b的转化酶。该分子可以切除C3和C5,从而产生一定摩尔数的C5b。随着途径进行以制备MAC,备解素-结合的C3b能够被C5b取代。备解素结合的C5b参与形成C5b-9。备解素也高亲和性地结合C9,这可进一步稳定功能性聚合物C9分子的形成。
本发明的另一实施方案涉及特异性结合备解素的抗体,例如抗-备解素抗体,以及这些抗体用于通过抑制备解素结合C5或C5b而抑制交替补体途径活化。本发明的抗-备解素抗体针对或特异性结合涉及控制备解素功能的备解素上的结构域。本发明的抗-备解素抗体或其片段可以通过数种方法抑制AP活化而不抑制或影响经典补体途径,包括但不限于选择性抑制备解素结合C5或C5b,降低攻击络合物C5b-9的膜的形成,降低过敏毒素(例如C3a和/或C5a)的形成,降低C3b的形成,降低嗜中性粒细胞、单核细胞和血小板的活化,和/或降低白细胞聚集体形成。
已知哺乳动物备解素的氨基酸序列。例如人备解素的氨基酸序列以登记No.AAA36489公开于GenBank数据库。人备解素是469氨基酸蛋白,包括单肽(氨基酸1-28)和六个非-相同血栓spondin 1型重复(TSR),均为约60个氨基酸,如下所示:氨基酸80-134(TSR1),氨基酸139-191(TSR2),氨基酸196-255(TSR3),氨基酸260-313(TSR4),氨基酸318-377(TSR5)和氨基酸382-462(TSR6)。
抗-备解素抗体可以基于它们抑制备解素结合C5的能力来选择,然后基于rRBC(兔红细胞)的AP依赖性溶血来选择。这些抗体可以以约0.2∶1化学计量比结合备解素。抑制交替途径(AP)补体活化可以引起C3a,C5a和C5b-9的水平降低,抑制单核细胞的活化,抑制单核细胞-血小板的,并且抑制嗜中性粒细胞-血小板聚集体。
在本发明的另一实施方案中,抗-备解素抗体可以抑制备解素结合C5。在本发明的进一步实施方案中,抗-备解素抗体可以抑制备解素与C5b的结合。在本发明的又一实施方案中,抗-备解素抗体可以抑制备解素结合C9。在这些实施方案中,抗-备解素抗体可以以下列来影响结合:抗体与备解素约0.2∶1摩尔比、抗体与备解素约1∶1摩尔比、抗体与备解素约1.5∶1比和抗体与备解素最大约10∶1。
在本发明的进一步实施方案中,抗-备解素抗体可以高亲和性地结合备解素,可以抑制C5结合,可以抑制C3a,C5a和C5b-9形成,可以抑制嗜中性粒细胞、单核细胞和血小板活化,可以抑制白细胞血小板缀合物形成,并且可以防止交替补体途径活化。
在本发明的又一实施方案中,本发明的抗体可以对于经典途径活化没有影响。因此,本发明的单克隆抗体可以不抑制经典途径。本发明的单克隆抗体可以通过其结合C5或C5b补体蛋白结合备解素上的抗原表位,所述抗原表位仅涉及AP活化。
在本发明的另一实施方案中,本发明的抗体可包含:mAb的CDR1,CDR2和CDR3的重链和轻链或其组合。可变重链的氨基酸序列示于SEQID NO:1(CDR1),SEQ ID NO:2(CDR2)和SEQ ID NO:3(CDR3)。可变轻链CDR示为SEQ ID NO:4(CDR1),SEQ ID NO:5(CDR2)和SEQ ID NO:6(CDR3)。因此,在另一实施方案中,本发明可提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分,包含可结合人备解素的CDR区。
因此,在本发明的又一实施方案中,本发明可以提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分,包含:(a)重链可变域,包含分别包括SEQ ID NO:1,2和3的氨基酸序列的CDR1,CDR2和CDR3;以及(b)轻链可变域,包含分别包括SEQ ID NO:4,5和6的氨基酸序列的CDR1,CDR2和CDR3;其中抗体特异性结合人备解素。
在另一实施方案中,本发明的抗体可包含:重链和轻链可变域,包含和本文所述抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列,并且其中抗体保持本发明的抗-备解素抗体的期望功能性能。例如,本发明可以提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分,包含重链可变域和轻链可变域,其中:(a)重链可变域,包含和SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列;(b)轻链可变域,包含和SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列;以及(c)抗体特异性结合人备解素。
在本发明的各种实施方案中,抗-备解素抗体可以是例如嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在本发明的另外其他实施方案中,本发明的抗体的VH和/或VL氨基酸序列可以和本文阐述的序列85%,90%,95%,96%,97%,98%或99%同源。通过突变可以获得具有VH和VL区的抗体,所述区和上面阐述序列的VH和VL区具有高同源性例如80%或更高。
在其他实施方案中,本发明的抗体可包括:重链可变域,包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列;和轻链可变域,包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列,其中基于本文所述的优选抗体这些CDR序列中的一种或多种包含特定氨基酸序列,例如NM4540或其保守修饰,并且其中抗体保持本发明的抗-备解素抗体的期望功能性能。
在本发明的另一实施方案中,抗-备解素单克隆抗体的一个例子可以标记为14G11。抗-备解素抗体14G11可以结合备解素,并可以抑制:备解素结合C5和C9;C3a,C5a和C5b-9形成;AP C3转化酶形成;和细胞活化。备解素结合C5,并且可在病理位点引导形成C5b-9络合物。本发明的抗-备解素剂可结合备解素,并且抑制备解素结合C5或C5b,并因此可抑制AP活化。
本发明的抗-备解素单克隆抗体14G11可以结合SEQ ID NO:15的N-端结构域。这些抗体可以抑制备解素与C5b的结合,并因此抑制AP活化。
本发明的抗体可以是单克隆,多克隆,嵌合,重组,人源化,脱免疫,Humaneer化TM或全人抗体。抗体还可以是抗体片段,例如单链抗体,IgG,F(ab′)2,F(ab),F(ab′)片段,或截短抗体(例如Fc截短抗体)。抗体可以在细胞或哺乳动物中制备,或者其可以以在哺乳动物中噬菌体展示或重组或天然抗体文库基因工程化。抗体可以体内或离体施用。抗体可以缺少能力以在人中活化Fcγ受体以及缺少免疫原性。
本发明的中和抗体和抗原结合片段施用至受试者可以导致下列中的至少一种:抑制备解素结合C5,抑制备解素结合C5b,抑制备解素结合C9,降低C3bBb的形成,降低C3a和C5a的产生,降低C5b-9络合物的形成,降低嗜中性粒细胞的活化,降低单核细胞的活化,降低血小板的活化,降低白细胞-血小板缀合物的形成,降低TNF-α的产生,以及降低嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的产生。因此,抗体或其片段还可以在人血清/血浆中抑制交替途径依赖性兔红细胞胞溶。
人源化单克隆抗-备解素抗体列于序列SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQIDNO:10,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:12,SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:14中,其可以含有上面列出的CDR序列中的至少一种。另外,人源化单克隆抗-备解素抗体可以含有本发明的CDR序列的至少一种的任何组合。
治疗抗体
目前接受的治疗抗体包含鼠源,嵌合,灵长目源化和人源化抗体。抗原结合片段通常认为是抗体的单链可变域,Fab,Fab2′,Fc结构域中截短和scFv。源自这些蛋白的嵌合和人源化片段含有是结合的主要肽段的CDR。在可以结合相同靶的各种抗体的CDR中的同源性可为50-70%,70-80%,和80-95%,或在CDR的一些例子中为100%。这些抗体可以通过各种技术来制备,例如CDR移植、在非人灵长类中产生人抗体、在小鼠中产生人抗体、敲除小鼠技术以及可以用于制备这些抗体的其他方法。
而且,来自其他物种的一种或多种人抗体可以通过展示类型技术而产生,包括但不限于噬菌体展示、逆转录病毒展示、核糖体展示和其他这些技术。所得分子可以经历另外突变,例如亲和成熟术,这些技术是熟知的。
抗-备解素抗体或其片段可以用于疾病的预防和治疗性治疗的治疗方法,所述疾病直接或间接由交替补体途径成分介导,和/或由本文所述的交替补体途径活化后产生的因子介导。
抗体治疗的另外标准
本发明的功能活性可以通过单克隆抗体抑制交替补体途径的能力来测量。例如,本发明的抗-备解素抗体可以表现出下列性能中的一种或多种:(1)抑制备解素结合C5(或C5b);(2)降低PC3bBb形成/或C3bBb形成,(3)降低游离备解素的浓度,(4)降低C3b的形成,(5)降低C3a,C5a和C5b-9的形成,(6)降低单核细胞CDllb表达,(7)降低嗜中性粒细胞CDllb表达,(8)降低血小板CD62P表达,(9)降低白细胞-血小板缀合物形成,(10)降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及(11)降低嗜中性粒细胞弹性蛋白酶形成。
双特异性抗体、免疫毒素、放射标记的疗法、肽疗法的产生、基因疗法(特别是体内)、反义疗法,并且小分子可以覆盖在本发明中。可以产生双特异性抗体,包含例如:(i)两种抗体,一种和备解素具有特异性并且另一种和一起缀合的的第二分子具有特异性;(ii)单一抗体,其具有:和备解素具有特异性的一链与和第二分子具有特异性的第二链;或删)具有和备解素以及其他分子具有特异性的单链抗体。这些双特异性抗体可以使用本领域熟知的技术来产生。
本发明的抗-备解素抗体或其片段可以用于疾病的预防和治疗性治疗的治疗方法,所述疾病直接或间接由交替补体途径成分介导,和/或由本文所述的交替补体途径活化后产生的因子介导。抗-备解素剂
在另一实施方案中,本发明可以提供抑制备解素-依赖性补体活化的副作用的方法。抗-备解素抑制剂可以以这样的量施用,该量在活体中有效地抑制备解素依赖性补体活化。在本发明的该方面的实施中,代表性备解素抑制剂可包括抗-备解素抗体,其可抑制备解素结合C5和C5b,并且可通过抑制和备解素有关的C5来抑制C3a,C5a和C5b-9的产生。备解素抑制剂可以单独使用作为首要疗法,或者和其他方法联合作为补充以增加其他治疗的益处。
抑制剂可以是小分子、适体、DNA片段、表示CDR结构域的小肽和/或siRNA。这些抑制剂抑制备解素结合C5,C9以及和C5相关的C3b。
适体
可以制备适体,其高亲和性地结合备解素,并且是以特异地良好限定的三维形状折叠的单链寡核苷酸,这允许它们和折叠的三维蛋白靶相互作用。不同于单克隆抗体,未观察到适体是免疫原性。由于核算不会典型地被人免疫系统识别为外源试剂,因此适体通常不会引发抗体应答。适体的三维结构在适体和其靶蛋白之间产生较大的相互作用的表面积,从而使适体理想地适于阻断蛋白-蛋白相互作用。而且,由于适体和细胞表面和外部发现的蛋白相互作用,因此适体不会不得不穿越细胞膜,这可以使得更容易递送有效量的适体至靶。适体是化学稳定的,并且可以指定为在人体中抵抗代谢降解。使用标准定义的化学修饰和缀合,适体可以特异性工程化以具有最佳半衰期或保持有效浓度的能力。适体被化学合成,从而允许以更低的成本快速大规模和可重现地制备。抗-备解素抗体
在本发明的一些实施方案中,备解素抑制剂可以包含:抗-备解素抗体,其通过抑制备解素结合C5和C5b来选择性抑制交替途径。这些抗体可以包括多克隆、单克隆或衍生自任何产生抗体的哺乳动物的重组抗体,并且可以是多特异性、嵌合、人源化、抗-独特型和抗体片段。抗体片段可包括Fab,Fab′,F(ab)2,F(ab′)2,Fv片段,scFv片段以及本文进一步描述的单链抗体。本发明中所述的抗体是可以抑制备解素与C5,C5b和C9结合的那些。
抗-备解素抗体的制备
抗备解素抗体的制备可以通过使用完整备解素、备解素多肽和/或使用抗原备解素抗原表位-负载的肽(例如备解素多肽的一部分)来完成。可以分离备解素肽和多肽,它们用于作为天然多肽、重组或合成肽、以及催化失活的重组多肽来提高抗体。本发明的该实施方案可提供使用转基因小鼠株获得的抗-备解素抗体。用于制备抗备解素抗体的抗原还包括融合多肽。
多克隆抗体
使用熟知的方法,通过下列方式可以制备针对备解素的多克隆抗体:使用备解素多肽或其免疫原性部分来免疫动物以产生多克隆抗体。多克隆抗体典型地在动物中提高,例如犬、山羊、鸡、大鼠、小鼠、马、牛、兔、豚鼠或绵羊。或者,本发明的抗-备解素抗体还可以源自低于人的灵长类和/或通过epitomics或cell DNA/RNA methodologies销售的技术来制备。然后含有免疫原活性的抗体的血浆使用标准方法从这些免疫的动物中制备。
单克隆抗体
在本发明的一些实施方案中,备解素抑制剂可以是高特异性抗-备解素单克隆抗体,其针对抗原表位导向。如本文使用的,修饰剂″单克隆″表示抗体的特性为得自抗体的基本上同源的群。单克隆抗体可以使用任何技术获得,所述技术通过在培养基中的连续细胞系来提供制备抗体分子,例如杂交瘤法。
人单克隆抗体可以使用转基因小鼠来获得,所述小鼠已经工程化以对应于抗原刺激而产生特异性人抗体。
在本发明的一个实施方案中,用于本发明方法的抗-备解素单克隆抗体可以以<100pM、优选<10pM和最优选<2pM的结合亲和性结合备解素。嵌合/人源化抗体
嵌合抗体是非人的人源化形式,例如鼠源抗体,这含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。人源化单克隆抗体通过下列制备:将非人动物例如小鼠,来自小鼠免疫球蛋白的重可变链和轻可变链的CDR转移到人可变结构域。典型地,人抗体的残基然后在非人配体的框架区中被取代。本发明的人源化抗体可包括结合CDR3区的备解素。另外,本发明的抗-备解素抗体的Fc部分可被取代以制备IgA或IgM以及人IgG抗体。重组抗体
抗-备解素抗体还可以使用重组方法来制备。重组方法。例如,人抗体可以使用人免疫球蛋白表达库(例如得自Stratagene,Corp.,La Jolla,Calif或Bioatla,San Diego,CA)制备以产生人抗体的片段(VH,VL,FV,Fd,Fab或F(ab′)2),其然后使用制备嵌合抗体的那些方法类似的技术来用于构建全人抗体。
免疫球蛋白片段
用于本发明方法的备解素抑制剂可包括完整免疫球蛋白分子以及相对熟知的片段,包括Fab,Fab′,F(ab).sub.2,F(ab′).sub.2和Fv片段,scFv片段,双体,线性抗体,单链抗体分子和抗体片段形成的多特异性抗体。
蛋白水解(例如通过常规方法而胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整个抗体)可以获得抗体片段。例如,抗体片段可以通过抗体和胃蛋白酶的酶切除制备以提供F(ab′)2。该片段可进一步使用硫醇还原剂来切除以产生Fab′单价片段。在另一例子中,切除反应可以使用源自二硫键连接的切除的巯基的阻断基团来进行。在又一例子中,使用胃蛋白酶的酶切除直接产生两种单价Fab片段和Fc片段。
在本发明的一些实施方案中,缺少Fc区的抗体片段的使用可以优选用于避免活化经典补体途径,这在Fc结合Fcγ受体时引发。可以制备MoAb,其通过多种方法避免Fcγ受体相互作用。例如,单克隆抗体的Fc区可使用蛋白酶部分消化(例如无花果蛋白酶消化)来化学除去,从而产生例如抗原结合抗体片段例如Fab或F(ab)2。在另一例子中,不结合Fcγ受体的人γ4 IgG同位型可以在本文所述的人源化抗体的构建过程中使用。缺少Fc结构域的抗体、单链抗体和抗原-结合结构域还可以使用本文所述重组技术来工程化。
另外,可以产生单肽链,其可以结合备解素特异性分子,其中重链和轻链Fv区连接。Fv片段可以通过肽接头连接以形成单链抗原结合蛋白(scFv)。
另外药剂
包含备解素抑制剂的组合物和方法可包括一种或多种另外治疗药剂。这些另外药剂可以提高备解素抑制剂的活性,或者以增加性或协同性方式来提供的相关治疗功能。例如,一种或多种备解素抑制剂可以联合一种或多种消炎和/或镇痛剂来施用。
抗体的制备
依照本发明的抗体可以使用本领域熟知的标准方法在动物例如小鼠中制备。本发明的单克隆抗体可转化为人源化版本用于治疗用途。全人抗体还可以通过本领域熟知的方法产生。抗体可以按照合同或固定制成人源化,全人,humaneer化,嵌合,重组以用于治疗应用。特定优选的细胞系通过下列方式选择:确定细胞系具有高表达水平,并且产生具有构成性备解素结合性能的抗体。
本发明的抗体还可以使用备解素敲除啮齿动物例如小鼠制备以产生有效的阻断抗体。由于这些啮齿动物不含备解素基因,因此啮齿动物将视注射备解素作为免疫原性抗原,而不是系统中存在的正常蛋白。基于作为抗原注射的备解素的识别,啮齿动物将产生针对其的抗体。使用敲除啮齿动物的益处允许增加产生抗体的可能性,取决于使用的啮齿动物,所述抗体是抗-大鼠,抗-小鼠和抗-任何其他物种。
抗体可以表达为四聚体,含有两个轻链和两个重链,为单独重链,轻链Fab,Fab′,F(ab′)2和Fv,或者为单链抗体,其中重链和轻链可变结构域通过间隔剂连接。
对于一些应用,非-IgG抗体可以是有用的。例如,如果需要多价抗体络合物,可以使用IgM和IgA抗体。嵌合,人源化和人抗体典型地通过重组表达来制备。
或者,抗体编码序列可以以转基因引入以将基因组加入转基因动物,并且随后使用本领域熟知的方法在转基因动物中表达。
重组抗体可以是鼠源类IgG1,IgG2a,IgG2b,IgM,IgA,IgD或IgE,人类IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgM,IgA1,IgA2,IgD或IgE,或其组合或片段。在一个例子中,嵌合抗体文库主要包括IgG抗体或Fab抗体片段。
治疗方法
本发明的方法可通常包括下列步骤:向需要的哺乳动物受试者施用有效量或治疗有效量的本发明的抗体以降低交替补体途径活化后产生的多肽的水平的方法;降低C5b-9或膜攻击络合物(MAC)的水平;降低过敏毒素的水平;降低新形成的C3b,P,Bb和C5b-9的水平的方法;以及治疗交替补体途径介导的疾病或病患。
本发明的抗体的″有效量″或″治疗有效量″是使交替补体途径活化后产生的多肽的产生和/或水平有效地降低至少约20%,至少约30%,至少约40%,至少约50%,至少约60%,至少约70%,至少约80%,至少约90%或更高的量。
抗-备解素抗体可以以和药学上可接受的赋形剂的制剂施用至个体。本领域已知大量药学上可接受的赋形剂,并且无需在本文详细讨论。
在由本发明提供的方法中,本发明的抗体可以使用能够导致期望的治疗效果的任何便利方式来施用至宿主。因此,抗体可以引入多种制剂以用于治疗施用。在一个例子中,本发明的抗体可以通过联合合适的药学上可接受的载体或稀释剂配制为药物组合物,并且可以配制为固体、半固体、液体或气体形式的制剂,例如片剂、胶囊剂、粉末剂、颗粒剂、油膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。
这样,本发明的抗体的施用可以以多种施用来实现,包括口服、颊部、直肠、胃肠道、腹膜内、皮内、皮下、肌内、透皮、透鼻、肺部、气管内等施用。
在药物剂型中,所述药剂可以以它们药学上可接受的盐的形式来施用,或者它们还可以独立地、或以合适的缔合和联合其他药学上有效化合物来施用。下列方法和赋形剂仅仅是示例性的,并且绝不限制。
用于注射或静脉内施用的单位剂型可包含在组合物中的抑制剂作为无菌水、生理盐水或另外药学上可接受的载体中的溶液。
本发明的抗体可以使用某些频率和时限施用至个体,以实现期望的治疗效果。例如,本发明的抗体可以例如以下列方式施用:1月1次、1月2次、1月3次、每隔一周(qow)、每周1次(qw)、每周2次(biw)、每周3次(tiw)、每周4次、每周5次、每周6次、每隔一天(qod)、每天(qd)、每天2次(qid)、或每天3次(tid)、或基本上连续或连续,时限为约1天至约1周、约2周至约4周、约1月至约2月、约2月至约4月、约4月至约6月或更长。
联合疗法
在一些实施方案中,抗-备解素抗体可以和第二治疗剂在联合疗法中以有效量施用。
疾病病症
在本发明的另一方面中,本发明的抗体可以用于在患有急性或慢性病理损伤的受试者(包括人)中通过体内交替途径抑制补体活化。本发明可以联合使用下列疾病、病患、损伤和治疗,包括但不限于:
体外循环疾病和病患:心肺分流术后炎症,手术后肺部障碍,心肺分流术,血液透析,白细胞清除术,血浆除去法,血小板除去法,肝素-引起的离体LDL沉降(HELP),灌注后综合征,体外膜式人工氧合法(ECMO),心肺分流术(CPB),灌注后综合征,系统炎症应答以及多种器官失效。
心血管疾病和病患:急性冠动脉综合征,Kawaski病(动脉炎),高安氏动脉炎,过敏性紫癜肾炎,血管渗漏综合征,经皮冠状动脉干预(PCI),心肌梗塞形成,急性心肌梗塞后缺血-再灌注损伤,动脉粥样硬化,血管炎,免疫复合体血管炎,和类风湿关节炎相关的血管炎(也称为恶性类风湿关节炎),系统性红斑狼疮-相关的血管炎,败血症,动脉炎,动脉瘤,心肌病,扩张性心肌病,心脏手术,外周血管病症,肾血管性病症,心血管病症,脑血管病症,肠系膜/肠道血管病症,糖尿病血管病,静脉性气栓(VGE),韦格内氏肉芽肿症,肝素-引起的体外膜式人工氧合法以及白塞氏综合征。
骨/肌与骨骼的疾病和病患:关节炎,炎性关节病,非-炎性关节病,类风湿关节炎,青年类风湿性关节炎,系统性青年类风湿性关节炎,骨关节炎,骨质疏松症,全身性红斑狼疮(SLE),白塞氏综合征以及斯耶格伦氏综合征。
移植疾病和病患:移植排斥,异种移植,移植物抗宿主病,器官或移植物的异种移植,器官或移植物的异体移植以及超急性排斥。
眼睛/眼部疾病和病患:湿和干年龄相关的黄斑变性(AMD),脉络膜新生血管(CNV),视网膜损伤,糖尿病视网膜病,糖尿病视网膜毛细管病,眼睛的网状内皮细胞真菌病,葡萄膜炎,糖尿病视网膜水肿,糖尿病视网膜病,糖尿病视多膜微动脉瘤,病理性近视,视网膜中央静脉阻塞(CRVO),角膜新生血管形成,视网膜新生血管形成,视网膜色素上皮细胞(RPE),眼睛的网状内皮细胞真菌病和普尔夏氏视网膜病。
血/血液疾病和病患:脓毒症,系统性炎症应答综合征(SIRS),失血性休克,急性呼吸窘迫综合征(ARDS),灾难性抗-磷脂综合征(CAPS),冷凝集素病(CAD),自身免疫性血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP),内毒血症,溶血性尿毒症(HUS),非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS),阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH),败血症,败血病性休克,镰状细胞血症,溶血性贫血,嗜酸性白细胞增多综合征和抗-磷脂综合征(APLS)。
呼吸/肺疾病和病患:哮喘,韦格内氏肉芽肿症,输血-相关的急性肺部损伤(TRALI),抗肾小球基底膜抗体(古德帕斯彻氏病),嗜酸细胞性肺炎,过敏性肺炎,过敏性支气管炎,支气管扩张,反应性气道病综合征,呼吸道合胞病毒(RSV)感染,副流感病毒感染,鼻病毒感染,腺病毒感染,变应性支气管肺曲菌病(ABPA),肺结核,肺寄生虫病,成人型呼吸窘迫综合征,慢性阻塞性肺病(COPD),类肉瘤病,气肿,支气管炎,囊性纤维变性,间质性肺炎,急性呼吸窘迫综合征(ARDS),输血-相关的急性肺部损伤,局部缺血/再灌注急性肺部损伤,棉屑沉着病,肝素-引起的体外膜式人工氧合法,过敏性休克和石棉-引起的炎症。
中枢和周围神经系统/神经疾病和病患:多发性硬化(MS),重症肌无力(MG),假麻痹性重症肌无力,多发性硬化,格-巴二氏综合征,Miller-Fisher综合征,中风,中风后再灌注,阿耳茨海默氏病,变集运动神经病(MMN),脱髓鞘,亨延顿氏舞蹈病,夏科氏综合征(ALS),帕金森氏病,视乳头变性疾病(DDD),脑膜炎,来自脑膜炎的脑神经损害,变异克雅氏病(vCJD),特发性多神经炎,脑/脑创伤(包括但不限于出血,炎症和水肿)和神经性疼痛。
创伤-引起的损伤和疾患:失血性休克,低血容量性休克,脊髓损伤,脑损伤,脑创伤,脑缺血再灌注,挫伤,伤愈,重度烧伤和冻伤。
肾部疾病和病患:肾再灌注损伤,链球菌感染后肾小球性肾炎(PSGN),古德帕斯彻氏病,膜性肾炎,贝格尔氏病/IgA肾病,膜增生性肾小球性肾炎,膜状肾小球性肾炎,膜增殖性肾小球性肾炎(肾小球膜毛细血管肾小球性肾炎),急性感染后肾小球性肾炎,冷球蛋白性肾小球性肾炎,狼疮肾炎,埃诺克-多恩莱因炎和肾皮质坏死(RCN)。
器官的再灌注损伤和疾患:包括但不限于心脏、脑部、肾脏和肝脏。
生殖和泌尿生殖疾病和病患:痛性膀胱疾病和病患,感官膀胱疾病和病患,自发流产,男性和女性不孕不育病,孕期疾病,胎儿母体耐性,子痫前期,泌尿生殖炎症,胎盘功能障碍的疾病和病患,流产慢性非细菌性膀胱炎和间质性膀胱炎的疾病和病患。
皮肤/皮疾病和病患:烧伤,牛皮癣,特应性皮炎(AD),嗜酸细胞性海绵层水肿,荨麻疹,热损伤,类天疱疮,后天性表皮松解大疤性皮肤棘层松解,自身免疫大疱性皮肤病,大疱性类天疱疮,硬皮病,血管性水肿,遗传性血管神经水肿(HAE),猫眼疮,妊娠疱疹,斯耶格伦氏综合征,皮肌炎以及疱疹样皮炎。
胃肠道疾病和病患:克罗恩氏病,腹腔疾病/谷朊-敏感性肠病,惠普耳氏病,肠缺血,炎症性肠病和溃疡性结肠炎.
内分泌疾病和病患:淋巴瘤性甲状腺肿,幼稚淋巴细胞性甲状腺炎,压力焦虑,和影响泌乳刺激素的其他疾病,生长或胰岛素-样生长因子,促肾上腺皮质激素释放,胰腺炎,艾迪生氏病,糖尿病包括但不限于1型和2型糖尿病,I型糖尿症,类肉瘤病,糖尿病视多膜毛细管病,非-肥胖糖尿病(IDDM),血管病,IDDM或2型糖尿病的神经病或视网膜病并发症以及胰岛素耐性。
恶性肿瘤的治疗:源自化疗和放射疗法的疾病和病患。
通过引用并入
本文引用的所有文献,包括专利、专利申请、论文、课本等以及本文引用的文献,在它们并非已经并入的情况,通过引用的方式全部并入本文。另外,下列文献也通过引用的方式全部并入本文,包括这些文献中引用的文献:
下面描述和例子详细描述本发明的某些优选实施方案,并且描述发明人所涵盖的最佳使用方式。然而,将意识到,无论文本中可出现多么详细的内容,本发明可以以多种方式来实施,并且本发明应该依照所附权利要求书及其任何等同形式来理解。
实施例
除非另外说明,否则所有试剂都是最高可得等级。所有补体蛋白、替换和经典途径缓冲液、检测抗体和红细胞来自Complement Technologies(Tyler,TX)或Quidel Corporation(San Diego,CA)。流式细胞计量术抗体来自BD Biosciences,San Jose,CA。TMB底物来自Kirkegaard & Perry Limited,Gaithersberg,MD。所有次级抗体来自American Qualex,San Clemente,CA,BSA和其他试剂都来自Sigma-Aldrich,St Louise,MO。
ELISA板读数器(SpectraMax 190and 250)来自Molecular Devices,并且流式细胞计是FACS Calibur。Varity 3D程序用于数据分析,曲线拟合使用MicroCal Origin程序来进行。使用SectraMax,Molecular Devices运行溶血动力学测定,ELISA板来自Corning Costar,Lowell,MA。
抗-备解素抗体产生于NovelMed Thrapeutics,并且对应的细胞系储存于ATCC。F(ab)2和Fab使用合适的酶法来产生,并且使用凝胶电泳法来检验纯度。
实施例1
备解素结合补体蛋白C3b,C5/C5b和C9
已知备解素高亲和性地结合C3b。我们证实备解素高亲和性地结合C5/C5b和C9,并且最小地或不使备解素结合C6,C7和C8。C3和C5都存在为完整蛋白,然而当底物结合时,它们分别转化为C3b和C5b。迄今为止没有公开的报道证实备解素结合C5和/或C5b。通过抑制备解素与C5/C5b的结合,我们证实阻断交替途径的活化。以每孔2.0μg/50μl聚苯乙烯微量滴定板包覆人C3,C5,C6,C7,C8和C9于磷酸盐缓冲的盐水(PBS)中在4℃下过夜。在吸气蛋白溶液后,所述孔使用含有1%牛血清清蛋白(BSA)的PBS在室温下阻断2小时。没有补体蛋白包覆的孔作为背景对照。增加备解素在阻断溶液中各种浓度的等分部分,并且使板孵育1小时。结合C3b,C5/C5b,C6,C7,C8和C9的备解素通过下列方式测量:以在阻断溶液中1∶2000稀释增加检测抗体山羊抗-人备解素多克隆抗体。使板在室温下孵育1小时。在使用PBS洗涤板后,加入过氧化物酶-缀合的兔抗-山羊抗体(在阻断溶液中1∶2000稀释),并且允许孵育1小时。将板再次使用PBS彻底冲洗,并且加入100μl的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)底物。在25℃下孵育30分钟后,TMB的反应通过加入100μl的磷酸来淬灭,并且在微板读数器中在450nm处读取板。如图3中所示,备解素结合底物,所述底物分别以2.6,6.2和15.9nM的高亲和性值结合C3b,C5/C5b和C9。对于C6,C7和C8蛋白没有或极少观察到结合。
实施例2
抗-备解素IgG和F(ab′)2抑制交替途径(AP)依赖性兔血红细胞(rRBC)胞溶
该红细胞胞溶测定基于rRBC表面上末端补体络合物的形成。因此,rRBC胞溶。在700nm处光散射的进展性降低是红细胞胞溶的直接量度。典型地,rRBC在含有5mM MgCl2的明胶佛罗拿缓冲液中、在正常人血清中孵育。在这些条件下,rRBC的表面在正常人血清中引发交替途径的活化。交替途径活化导致在rRBC的表面上形成C5b-9络合物。期望抑制C5b-9络合物形成的药剂抑制细胞胞溶。为了评价抗-备解素抗体及其片段的效果,各种浓度的IgG,F(ab′)2和Fab和正常人血清(10%NHS)在AP缓冲液中在37℃下孵育,固定浓度的兔红细胞在能够在700nm处读取的温度控制的ELISA板读数器中。在700nm处测量的光散射的进展性降低(由于完整细胞的胞溶)是时间的函数。记录数据,并且使用SpectraMax 190板读数器和SoftMax软件分析。在各浓度的IgG,F(ab′)2和Fab处计算总抑制,并且结果表示为未胞溶对照的百分比。各浓度处的数据使用MicroCal Origin软件在S形图中绘制。如图4中所示,IgG和F(ab)2在正常人血清中抑制rRBC的AP依赖性溶血,抑制红细胞胞溶的IC50为10nM。抗体能够以约10nM的IC50抑制胞溶。
抗-备解素单克隆抗体不抑制经典途径活化
本发明的单克隆抗体不抑制经典途径,这是宿主防御的合适功能所需要的。抗体增敏的绵羊红细胞和1%或10%正常人血清在含有钙(5mMCaCl2/MgCl2)缓冲液的明胶佛罗拿缓冲液中孵育。抗体增敏的绵羊细胞活化经典途径。结果,C5b-9形成在红细胞表面上并引起细胞胞溶。我们在1%和10%正常人血清中检测抗体。在两种条件下,NM9401抑制红细胞胞溶。在典型测定中,红细胞在CP缓冲液中的1/10正常人血清中孵育以允许发生补体活化。由于CP活化,C5b-9形成在红细胞表面上,从而引起细胞胞溶。在700nm处测量的光散射的进展性降低(由于细胞胞溶)是时间的函数。抗备解素IgG以1%和10%血清浓度不会抑制抗体增敏的绵羊细胞的胞溶。如预计的,没有血清对照不显示对细胞胞溶具有作用。这些结果表明抗-备解素抗体能够选择性抑制交替补体途径而不影响经典途径活化。
实施例3
抗-备解素IgG和F(ab′)2高亲和性地结合人备解素
抗-备解素IgG和F(ab)2与人备解素的亲和性在低pM范围内。抗体和其片段以类似的亲和性结合备解素。
聚苯乙烯微量滴定板包覆磷酸盐缓冲的盐水(PBS)中的人(每孔2.0μg/50μl)备解素在4℃下过夜。在吸气备解素溶液后,将板使用含有1%牛血清清蛋白(BSA)(Sigma-Aldrich,St.Louis,Mo.)的PBS在室温下阻断1小时。没有肽或备解素包覆的孔作为背景对照。将单克隆抗-备解素抗体IgG,Fab2和Fab在阻断溶液中的等分部分加入备解素包覆的板,并且允许孵育1小时以使结合发生。在室温下孵育1小时后,将板使用PBS冲洗5次,并且和1∶2000稀释的检测过氧化物酶-缀合的山羊抗-小鼠单克隆抗体检测。在该孵育后,将板冲洗,并且使用TMB试剂鉴定结合的过氧化物酶。如图5中所示,IgG和F(ab)2高亲和性地结合备解素。
实施例5
抗-备解素Fab2抑制备解素和C5/C5b与C9的相互作用
我们证实备解素高亲和性地结合C5/C5b和C9。在该实验中,我们证实抗-备解素F(ab′)2以8至20nM的亲和性抑制备解素与C5/C5b和C9的相互作用。聚苯乙烯微量滴定板以每孔2.0μg/50μl在磷酸盐缓冲的盐水(PBS)中包覆人C5和C9在4℃下过夜。在吸气蛋白溶液后,将孔使用含有1%牛血清清蛋白(BSA)的PBS在室温下阻断2小时。没有补体蛋白包覆的孔作为背景对照。将50nM的备解素的等分部分和各种浓度的在阻断溶液中抗-备解素F(ab′)2孵育到C5和C9包覆的板上去,并且使这些板在室温下孵育1小时。通过增加在阻断溶液中1∶2000稀释的检测抗体山羊抗-人备解素多克隆抗体测量备解素与C5/C5b和C9的结合。使板在室温下孵育1小时。在使用PBS洗涤板后,加入过氧化物酶-缀合的兔抗-山羊抗体(在阻断溶液中1∶2000稀释),并且允许孵育1小时。将板再次使用PBS彻底冲洗,并且加入100μl的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)底物。在25℃孵育30分钟后,通过加入100μl的磷酸来淬灭TMB的反应,在微板读数器中在450nm处读取板。如图6中所示,抗-备解素Fab2抑制备解素与C5和C9的相互作用,从而表明备解素与C5和C9的相互作用对于抑制交替途径是重要的。在约20nM的抗-备解素的情况下观察到完全抑制,从而表明抗体与备解素的比为0.2∶1。
实施例6
抗备解素IgG及其片段抑制交替补体途径的C3转化酶(PC3bBb)的形成,这通过备解素,C3b,Bb,C9,C9和C5b-9的沉积来测量。
交替补体途径在正常人血清中被来自Salmonella Typhosa的脂多糖活化。我们已经利用该示例来证实本发明的抗-备解素抗体是否将抑制PC3bBb的形成。我们测量在抗-备解素抗体及其片段存在和不存在下因子P,C3b,Bb,C5b,C9和C5b-9的沉积。使用合适的抗体检测C3和C5转化酶的形成。在抗-备解素抗体存在下,注意到C3和C5转化酶形成的剂量依赖性抑制。在典型测定中,聚苯乙烯微量滴定板的孔以2μg/50μl在PBS中包覆LPS(来自Salmonella Typhosa的脂多糖)过夜。将孔和PBS中的1%BSA孵育以阻断孔中的未占据的位点。在室温下进行2小时阻断并且使用PBS冲洗后,AP缓冲液中的正常人血清(10%)混合各种浓度的抗体及其片段。将混合物孵育到LPS包覆的孔上去。使板在37℃下孵育2小时以允许发生补体AP活化。在孵育后,将板使用PBS彻底洗涤,并且使用合适抗体来检测C3转化酶组分。我们使用在阻断溶液中1∶2000的兔抗-人C3c、在阻断溶液中1∶2000的山羊抗-人P、以及在阻断溶液中1∶500的山羊抗-人因子Bb和在阻断溶液中1∶2000的HlPO缀合的抗-人C5b-9检测C3b。板和它们各自抗体一起在室温下孵育1小时。在孵育后,将板使用PBS冲洗,并且使用1∶2000(对于C3b)过氧化物酶标记的山羊抗-兔检测结合的抗体,在阻断溶液中1∶2000的过氧化物酶标记的兔抗-山羊用于备解素检测。将所有板使用TMB显色,之后使用PBS彻底洗涤。使用1M亚磷酸淬灭蓝色。C3b(图7),因子P(图8),Bb(图9),C5b(图10)和C9(图11)以及MAC(图12)一起存在指示AP C3转化酶形成。图8证实因子P沉积的剂量依赖性抑制,图9证实Bb的剂量依赖性沉积,图7证实C3b形成的剂量依赖性沉积,以及图12证实通过抗-备解素抗体的C5b-9沉积的剂量依赖性沉积。这些数据提供抗-备解素单克隆抗体抑制转化酶形成和抑制AP活化的直接证据。
实施例7
鼠源单克隆抗体指派的抗备解素14G11的DNA克隆和测序
通过RT-PCR和DNA测序来分析细胞系14G11中所含的免疫球蛋白特异性mRNA。结果证实,细胞系转录IgGl Kappa抗体。除了主要转录,获得两种变体非-翻译的kappa转录体(假基因)。通过逆转录使用寡(dT)引物从RNA产生RT-PCR-cDNA。设定PCR反应以分析和扩增细胞系的可变和恒定重和轻区,并且寡-dT引物用于恒定重区和全长轻链,以及特定引物用于可变重和可变轻区。cDNA反应使用TdT拖尾以允许寡dT特异性引物用于产生全-延伸的(在5′端)克隆。将纯化的插入物克隆到pBluescript中,并且从各反应中挑出克隆。分离小量制备DNA,限制性内切酶谱和阳性克隆通过测序来分析。下面可以看到所得测序数据。NM14G11.9的测序结果14G11.9重链结果-重链可变域NM14G11.9的核苷酸序列
GACAAGTGTGCAGCCATGGGCAGGCTTACTTCTTCATTCCTGCTACTGATTGTCCCTGCATATGTCCTGTCCCAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATTCGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGTCAAGAGCTATAACCCAGCCCTGAAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGTAGCCAGGTATTCCTCAGGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAATTGGAGATGGTTATTACTCTTTTGACTATTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCT
NovelMed重链可变域NM14G11.9的氨基酸序列
MGRLTSSFLLLIVPAYVLSQVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDVKSYNPALKSRLTISKDTSSSQVFLRIASVDTADTATYYCARIGDGYYSFDYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWN
(突出区域分别涉及CDR 2,CDR3和CDR 4)。
NovelMed kappa链可变域NM14G11.9的核苷酸序列
GGAAATGCATCACACCAGCATGGGCATCAAAATGGAGTCACAGATTCAGGTCTTTGTATTCGTGTTTCTCTGGTTGTCTGGTGTTGACGGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCATCTCCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGAGTGATGCTCTAGCCTGGTTTCAACAGAAACCGGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTCGCCATCCTACCGGTACACTGGGGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAACATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTGGAGATCAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC
Kappa轻链的氨基酸序列
MHHTSMGIKMESQIQVFVFVFLWLSGVDGDIVMTQSHKFMSTSVGDRVSISCKASQDVSDAVAWFQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLEIKRADAAPTV
(突出区域分别涉及CDR 1,CDR 2和CDR 3)。
Claims (80)
1.一种在哺乳动物中抑制交替补体途径活化的方法,所述方法包括下列步骤:向哺乳动物施用抗-备解素剂或其抗原结合片段,所述抗-备解素剂或其抗原结合片段特异性结合备解素,并通过抑制备解素与至少一种补体蛋白的结合来抑制所述交替补体途径活化。
2.权利要求1所述的方法,其中所述至少一种补体蛋白选自:C5/C5b、C6、C7、C8或C9。
3.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制P-C3bBb杂聚物的形成。
4.权利要求3所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB形成、PC3bBb形成和PC5bC3bBb形成的形成,其中(P)x(C5b)y(C3b)z(Bb)w和X=Y+Z,Z=W。
5.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂是合成小分子。
6.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂是适体或DNA片段。
7.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂是siRNA。
8.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂是抗-备解素抗体或其抗原结合片段。
9.权利要求6所述的方法,其中所述抗-备解素抗体能够特异性结合备解素上的抗原表位。
10.权利要求6所述的方法,其中所述抗-备解素抗体注册为PTA-9641(14G11)。
11.权利要求6所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是嵌合、重组、人源化、脱免疫、humaneer化或全人抗体。
12.权利要求6所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是IgG或抗原结合片段Fab、Fab′、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2或CDR3。
13.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂体内或离体施用于哺乳动物。
14.权利要求10所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
15.权利要求1所述的方法,其中抗-备解素剂或其抗原结合片段与备解素的比为约0.2∶1至约1.5∶1。
16.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制交替途径而不会抑制经典途径。
17.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂降低哺乳动物中游离备解素的水平。
18.权利要求1所述的方法,其中所述抗-备解素剂设置在药学上可接受的载体中以施用至哺乳动物。
19.权利要求16所述的方法,其中所述抗-备解素剂的药学上可接受的载体选自:干燥可分散粉末;无水乙醇;小胶囊;脂质体;雾状喷雾剂;或可注射的赋形剂。
20.一种在哺乳动物中抑制交替补体途径活化的方法,所述方法包括:向哺乳动物施用抗-备解素剂,所述抗-备解素剂特异性结合备解素,并通过抑制备解素与C5的结合来在所述哺乳动物中抑制所述交替补体途径活化。
21.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制P-C3bBb杂聚物的形成。
22.权利要求21所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB形成、PC3bBb形成和PC5bC3bBb形成的形成,其中(P)x(C5b)y(C3b)z(Bb)w和X=Y+Z,Z=W。
23.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂是合成小分子。
24.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂是适体或DNA片段。
25.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂是siRNA。
26.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂是抗-备解素抗体或其抗原结合片段。
27.权利要求26所述的方法,其中所述抗-备解素剂能够特异性结合根据SEQ ID NO 15(AFAYQKRSGGLCQPCRSPRWSLWS)的备解素上的抗原表位。
28.权利要求26所述的方法,其中所述抗-备解素抗体注册为PTA-9641(14G11)。
29.权利要求26所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是嵌合、重组、人源化、脱免疫、humaneer化或全人抗体。
30.权利要求26所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是IgG或抗原结合片段Fab、Fab′、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2或CDR3。
31.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂体内或离体施用于哺乳动物。
32.权利要求31所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
33.权利要求20所述的方法,其中抗-备解素剂或其抗原结合片段与备解素的比为约0.2∶1至约1.5∶1。
34.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制交替途径而不会抑制经典途径。
35.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂降低哺乳动物中游离备解素的水平。
36.权利要求20所述的方法,其中所述抗-备解素剂设置在药学上可接受的载体中以施用至哺乳动物。
37.权利要求36所述的方法,其中所述抗-备解素剂的药学上可接受的载体选自:干燥可分散粉末;无水乙醇;小胶囊;脂质体;雾状喷雾剂;或可注射的赋形剂。
38.一种在哺乳动物中抑制炎症应答的方法,所述方法包括:施用抗-备解素抗体或其抗原结合片段,所述抗-备解素抗体或其抗原结合片段特异性结合备解素,并通过抑制备解素与选自C6、C7、C8和C9的补体蛋白的结合来抑制所述交替补体途径活化。
39.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体或其抗原结合片段抑制P-C3bBb杂聚物的形成。
40.权利要求39所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB形成、PC3bBb形成和PC5bC3bBb形成的形成,其中(P)x(C5b)y(C3b)z(Bb)w和X=Y+Z,Z=W。
41.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体能够特异性结合备解素上的抗原表位。
42.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体注册为PTA-9641(14G11)。
43.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是嵌合、重组、人源化、脱免疫、humaneer化或全人抗体。
44.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是IgG或抗原结合片段Fab、Fab′、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2或CDR3。
45.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素抗体体内或离体施用于哺乳动物。
46.权利要求45所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
47.权利要求38所述的方法,其中抗体或其抗原结合片段与备解素的比为约0.2∶1至约1.5∶1。
48.权利要求38所述的方法,其中所述抗体抑制交替途径而不会抑制经典途径。
49.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素剂降低哺乳动物中游离备解素的水平。
50.权利要求38所述的方法,其中所述抗-备解素剂设置在药学上可接受的载体中以施用至哺乳动物。
51.权利要求50所述的方法,其中所述抗-备解素剂的药学上可接受的载体选自:干燥可分散粉末;无水乙醇;小胶囊;脂质体;雾状喷雾剂;或可注射的赋形剂。
52.一种改善和过度或不受控制的交替途径补体活化相关的疾病或病症的方法,所述方法包括:向哺乳动物施用治疗有效量的抗-备解素抗体或其抗原结合部分,所述抗-备解素抗体或其抗原结合部分特异性结合备解素,以抑制备解素与C5的结合和抑制交替途径活化。
53.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制P-C3bBb杂聚物的形成。
54.权利要求53所述的方法,其中所述抗-备解素剂抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB形成、PC3bBb形成和PC5bC3bBb形成的形成,其中(P)x(C5b)y(C3b)z(Bb)w和X=Y+Z,Z=W。
55.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体或其抗原结合片段能够特异性结合备解素上的抗原表位。
56.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体已经在ATCC注册为PTA-9641。
57.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是嵌合、重组、人源化、脱免疫、humaneer化或全人抗体。
58.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体是IgG或抗原结合片段Fab、Fab′、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2或CDR3。
59.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体体内或离体施用于哺乳动物。
60.权利要求59所述的方法,其中所述哺乳动物是人。
61.权利要求52所述的方法,其中抗-备解素抗体或其抗原结合片段与备解素的比为约0.2∶1至约1.5∶1。
62.权利要求52所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合部分特异性结合备解素,以在所述哺乳动物中抑制所述交替补体途径。
63.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体或其抗原结合片段降低哺乳动物中游离备解素的水平。
64.权利要求52所述的方法,其中所述抗-备解素抗体或其抗原结合片段设置在药学上可接受的载体中以施用至哺乳动物。
65.权利要求64所述的方法,其中所述抗-备解素剂的药学上可接受的载体选自:干燥可分散粉末;无水乙醇;小胶囊;脂质体;雾状喷雾剂;或可注射的赋形剂。
66.小鼠抗体,包含SEQ ID NO:1的重链可变结构域序列。
67.小鼠抗体,包含SEQ ID NO:2的轻链可变结构域序列。
68.鼠源抗体,包含含有SEQ ID NO:1的重链可变结构域序列和含有SEQ ID NO:2的轻链可变结构域序列。
69.抗体,包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5或6。
70.嵌合抗体,包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
71.人源化抗体,包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5或6中的至少一种。
72.人源化抗体的可变结构域,包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的重链可变结构域氨基酸序列。
73.人源化抗体的可变结构域,包含选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的轻链可变结构域氨基酸序列。
74.鼠源、嵌合或人源化抗-备解素抗体,包含大于50%同源性的SEQID NO:1、2、3、4、5和6的可变结构域序列。
75.鼠源、嵌合或人源化抗-备解素抗体,包含大于约60%同源性的SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的可变结构域序列。
76.鼠源、嵌合或人源化抗-备解素抗体,包含大于约70%同源性的SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的可变结构域序列。
77.鼠源、嵌合或人源化抗-备解素抗体,包含大于约80%同源性的SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的可变结构域序列。
78.鼠源、嵌合或人源化抗-备解素抗体,包含大于约95%同源性的SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的可变结构域序列。
79.多肽,包含包括SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列或其部分。
80.抗体,所述抗体竞争抗-备解素鼠源抗体克隆14G11或人源化抗-备解素抗体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US30970510P | 2010-03-02 | 2010-03-02 | |
US61/309,705 | 2010-03-02 | ||
PCT/US2011/026841 WO2011109494A2 (en) | 2010-03-02 | 2011-03-02 | A method for inhibiting alternative pathway mediated disorders with anti-properdin antibodies that inhibit c5 interactions with properdin |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103068396A true CN103068396A (zh) | 2013-04-24 |
CN103068396B CN103068396B (zh) | 2016-07-06 |
Family
ID=44542818
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201180022197.3A Active CN103068396B (zh) | 2010-03-02 | 2011-03-02 | 抑制c5和备解素相互作用的抗-备解素抗体在制备抑制交替途径活化的药剂中的用途 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP2544694B1 (zh) |
CN (1) | CN103068396B (zh) |
AU (1) | AU2011223660B2 (zh) |
CA (1) | CA2811091C (zh) |
WO (1) | WO2011109494A2 (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112014015111A2 (pt) * | 2011-12-21 | 2017-06-13 | Novartis Ag | composições e processos para anticorpos que se direcionam ao fator p |
AU2013326932B2 (en) * | 2012-10-04 | 2019-06-06 | Novelmed Therapeutics, Inc. | Alternative pathway specific antibodies for treating hemolytic diseases |
JP2023510769A (ja) * | 2020-01-08 | 2023-03-15 | ザイダス ライフサイエンシズ リミティド | 抗プロペルジン抗体とその調製 |
WO2024108529A1 (en) * | 2022-11-25 | 2024-05-30 | Linno Pharmaceuticals Inc. | Properdin binding protein and use thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999010009A1 (en) * | 1997-08-26 | 1999-03-04 | Gliatech Inc. | A process for inhibiting complement activation via the alternative pathway |
CN1596313A (zh) * | 2001-11-26 | 2005-03-16 | 细胞基质公司 | 人源化的胶原抗体及相关方法 |
WO2006128006A1 (en) * | 2005-05-26 | 2006-11-30 | The Regents Of The University Of Colorado | Inhibition of the alternative complement pathway for treatment of traumatic brain injury, spinal cord injury and related conditions |
WO2009110918A1 (en) * | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Novelmed Therapeutics, Inc. | Anti-properdin antibodies |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7320873B2 (en) * | 2000-08-14 | 2008-01-22 | N.V. Organon | Use of antibodies against specific MHC-peptide complexes |
US7365167B2 (en) * | 2001-11-26 | 2008-04-29 | Cell Matrix, Inc. | Humanized collagen antibodies and related methods |
US20060140939A1 (en) * | 2003-02-21 | 2006-06-29 | Fung Sek C M | Methods for preventing and treating tissue damage associated with ischemia-reperfusion injury |
US8192742B2 (en) * | 2007-03-23 | 2012-06-05 | NovelMed Therapeutics | Method of inhibiting complement activation with human anti-factor C3 antibodies and use thereof |
-
2011
- 2011-03-02 AU AU2011223660A patent/AU2011223660B2/en active Active
- 2011-03-02 EP EP11751270.7A patent/EP2544694B1/en active Active
- 2011-03-02 CN CN201180022197.3A patent/CN103068396B/zh active Active
- 2011-03-02 CA CA2811091A patent/CA2811091C/en active Active
- 2011-03-02 WO PCT/US2011/026841 patent/WO2011109494A2/en active Application Filing
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999010009A1 (en) * | 1997-08-26 | 1999-03-04 | Gliatech Inc. | A process for inhibiting complement activation via the alternative pathway |
CN1596313A (zh) * | 2001-11-26 | 2005-03-16 | 细胞基质公司 | 人源化的胶原抗体及相关方法 |
WO2006128006A1 (en) * | 2005-05-26 | 2006-11-30 | The Regents Of The University Of Colorado | Inhibition of the alternative complement pathway for treatment of traumatic brain injury, spinal cord injury and related conditions |
WO2009110918A1 (en) * | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Novelmed Therapeutics, Inc. | Anti-properdin antibodies |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2544694A4 (en) | 2014-03-05 |
CA2811091C (en) | 2017-07-25 |
CA2811091A1 (en) | 2011-09-09 |
EP2544694B1 (en) | 2018-10-31 |
AU2011223660A1 (en) | 2012-11-22 |
EP2544694A2 (en) | 2013-01-16 |
CN103068396B (zh) | 2016-07-06 |
WO2011109494A3 (en) | 2012-01-19 |
WO2011109494A2 (en) | 2011-09-09 |
AU2011223660B2 (en) | 2016-10-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Beirnaert et al. | Bivalent llama single-domain antibody fragments against tumor necrosis factor have picomolar potencies due to intramolecular interactions | |
JP6417442B2 (ja) | ヒト組織因子抗体及びその使用 | |
JP6244350B2 (ja) | ヒト化およびキメラ抗因子Bb抗体、ならびにその使用 | |
TWI564305B (zh) | 治療性抗體 | |
WO2019238012A1 (zh) | 可以阻断CD47和SIRPa相互作用的抗体及其应用 | |
TWI787223B (zh) | Gremlin-1結晶結構及抑制抗體 | |
AU2013269606B2 (en) | P2X7 receptor antagonists and agonists | |
CN103003302B (zh) | 人源化和嵌合抗-备解素抗体 | |
CN103068396B (zh) | 抑制c5和备解素相互作用的抗-备解素抗体在制备抑制交替途径活化的药剂中的用途 | |
EA026375B1 (ru) | Антигенсвязывающие белки, специфические в отношении сывороточного амилоидного компонента р | |
CN114096275A (zh) | 新型bssl抗体 | |
TW202246341A (zh) | 針對NKp46的抗體及其應用 | |
US20220396618A1 (en) | Rage antibodies, fragments and uses thereof | |
CN114729013A (zh) | 抗cd22抗体及其用途 | |
WO2021000004A1 (en) | Methods of treating myocarditis and/or cardiomyopathy and reagents therefor | |
CN114685655B (zh) | Pd-1结合分子及其应用 | |
WO2024022478A1 (zh) | 结合大麻素受体cb1的抗体及其用途 | |
CN115873114A (zh) | Ctla-4结合分子及其应用 | |
TW202115110A (zh) | 針對補體成分5之抗體分子及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |