CN103060415A - 一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 - Google Patents
一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103060415A CN103060415A CN2013100130532A CN201310013053A CN103060415A CN 103060415 A CN103060415 A CN 103060415A CN 2013100130532 A CN2013100130532 A CN 2013100130532A CN 201310013053 A CN201310013053 A CN 201310013053A CN 103060415 A CN103060415 A CN 103060415A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- tris
- acetic acid
- rheumatic arthritis
- nacl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其步骤包括：一、除杂；二、提取；三、分离；四、纯化；五、脱盐干燥，收集沉淀重新溶解，装入透析袋中，对水透析过夜，最后冷冻干燥，获得纯化Ⅱ型胶原蛋白。通过本方法制备了高纯度的能用于治疗风湿性关节炎的胶原蛋白，蛋白质含量≥94％，平均分子量400-800道尔顿，且制备方法简便，利于规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白制备方法，尤其涉及一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法。
背景技术
风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）是一种常见的急性或慢性结缔组织炎症。属变态反应性疾病，是风湿热的主要表现形式之一。多以急性发热及关节疼痛起病，典型表现是轻度或中度发热，游走性多关节炎，受累关节多为膝、踝、肩、肘、腕等大关节，常见由一个关节转移至另一个关节，病变局部呈现红、肿、灼热、剧痛，部分病人也有几个关节同时发病，不典型的病人仅有关节疼痛而无其他炎症表现，急性炎症一般于2-4周消退，不留后遗症，但常反复发作。若风湿活动影响心脏，则可发生心肌炎，甚至遗留心脏瓣膜病变。 风湿性关节炎的病因尚未完全明了。根据症状、流行病学及免疫学的资计分析，认为与人体溶血性链球菌感染密切相关，目前注意到病毒感染与本病也有一定关系。
目前治疗的方式主要有五种：一、中医推拿：能对风湿病症状的缓解起到辅助作用，这是风湿性关节炎的中医治疗方法；二、药物治疗：药物治疗的原则在于早发现、早诊断、早治疗，并能及早合理、联合用药；三、外科疗法：包括不同的侥幸手术，人工关节的置换、滑膜切除等。手术不能治愈风湿病，只能改善关节功能和生活的能力；四、物理、康复、职业训练、心理等其它的治疗方法，是风湿性关节炎的中医治疗方法；五、膏药治疗：使用膏药外治法，针对性给药，使药效得到充分吸收，从而实现舒筋活络，散寒定痛，调肝益肾，通利关节之功效，达到治愈风湿性关节炎的目的。
Ⅱ型胶原蛋白存在于软骨等组织中，口服同种属或异种属Ⅱ型胶原蛋白均有抑制、减轻动物模型关节炎和人类风湿性关节炎(RA）的作用，是一种很好的药物治疗成分，但现有的制备方法所制备的Ⅱ型胶原蛋白，蛋白质含量低，分子量大，不能满足医药需要，因此，需要一种提高蛋白质的含量，降低分子量的制备方法来满足医药工业需要。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术手段是：一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其制备步骤如下：
一、除杂：取定量新鲜动物软骨，剥去骨膜，置于液氮下冷冻，再磨成粉末，将软骨粉末置于容器中，加入其质量15倍体积的盐酸胍-Tris-HCl缓冲液，于4 ℃下搅拌处理16h，盐酸胍-Tris-HCl缓冲液中盐酸肌的浓度为6mol/L , Tris浓度为0.1mmol/L, pH值为7.5 ；
二、提取：处理完成后用冷冻离心机离心30min，转速设置8000r/min，收集沉淀，用0.6mmol/L乙酸充分洗涤，然后加入其质量5倍体积的0.6mmol/L乙酸，内含1.5g/L胃蛋白酶悬浮，于4℃下搅拌水解36h ；
三、分离：水解完成后，以12000r/min离心处理30min，收集上层清液，用2mmol/L 的NaCl盐析24h，离心，收集沉淀用0.2mmol/L乙酸溶解后装入透析袋，用缓冲液进行透析溶解，缓冲液浓度及组成为 0.1mmol/L Tris-HCl-0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4，此透析溶解液即为粗Ⅱ型胶原蛋白；
四、纯化：将大孔离子交换树脂NKA-9经0.1mmol/L Tris-HCl和0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4平衡后，装入交换柱内，控制树脂柱径高比≥5，缓缓加入经平衡液透析后的粗Ⅱ型胶原蛋白，调节过柱流速为每小时3～4倍树脂体积，用核酸蛋白检测仪于280nm监测流出液的第一个吸收峰，收集有吸收峰的流出液；
五、脱盐干燥：向流出液中加入2mmol/L NaCl 溶液，盐析Ⅱ型胶原蛋白，于4℃下沉淀10-12h，用冷冻离心机离心20min，转速设置8000r/min，收集沉淀用0.6mmol/L乙酸重新溶解，装入透析袋中，对水透析过夜，最后冷冻干燥，获得纯化Ⅱ型胶原蛋白。
进一步的，所述步骤五中所得的纯化Ⅱ型胶原蛋白为白色粉末，蛋白质含量≥94％，平均分子量400-800道尔顿。
本发明的有益效果在于：通过本方法制备了高纯度的能用于治疗风湿性关节炎的胶原蛋白，蛋白质含量≥94％，平均分子量400-800道尔顿，且制备方法简便，利于规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。
实施例1
一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其制备步骤如下：
一、除杂：取3kg新鲜动物软骨，剥去骨膜，置于液氮下冷冻，再磨成粉末，将软骨粉末置于容器中，加入其质量15倍体积的盐酸胍-Tris-HCl缓冲液，于4 ℃下搅拌处理16h，盐酸胍-Tris-HCl缓冲液中盐酸肌的浓度为6mol/L , Tris浓度为0.1mmol/L, pH值为7.5 ；
二、提取：处理完成后用冷冻离心机离心30min，转速设置8000r/min，收集沉淀，用0.6mmol/L乙酸充分洗涤，然后加入其质量5倍体积的0.6mmol/L乙酸，内含1.5g/L胃蛋白酶悬浮，于4℃下搅拌水解36h ；
三、分离：水解完成后，以12000r/min离心处理30min，收集上层清液，用2mmol/L 的NaCl盐析24h，离心，收集沉淀用0.2mmol/L乙酸溶解后装入透析袋，用缓冲液进行透析溶解，缓冲液浓度及组成为 0.1mmol/L Tris-HCl-0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4，此透析溶解液即为粗Ⅱ型胶原蛋白；
四、纯化：将大孔离子交换树脂NKA-9经0.1mmol/L Tris-HCl和0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4平衡后，装入交换柱内，控制树脂柱径高比≥5，缓缓加入经平衡液透析后的粗Ⅱ型胶原蛋白，调节过柱流速为每小时3倍树脂体积，用核酸蛋白检测仪于280nm监测流出液的第一个吸收峰，收集有吸收峰的流出液；
五、脱盐干燥：向流出液中加入2mmol/L NaCl 溶液，盐析Ⅱ型胶原蛋白，于4℃下沉淀10h，用冷冻离心机离心20min，转速设置8000r/min，收集沉淀用0.6mmol/L乙酸重新溶解，装入透析袋中，对水透析过夜，最后冷冻干燥，获得纯化Ⅱ型胶原蛋白。
所得纯化Ⅱ型胶原蛋白为白色粉末，蛋白质含量94.7％，平均分子量400-800道尔顿。
实施例2
一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其制备步骤如下：
一、除杂：取5kg新鲜动物软骨，剥去骨膜，置于液氮下冷冻，再磨成粉末，将软骨粉末置于容器中，加入其质量15倍体积的盐酸胍-Tris-HCl缓冲液，于4 ℃下搅拌处理16h，盐酸胍-Tris-HCl缓冲液中盐酸肌的浓度为6mol/L , Tris浓度为0.1mmol/L, pH值为7.5 ；
二、提取：处理完成后用冷冻离心机离心30min，转速设置8000r/min，收集沉淀，用0.6mmol/L乙酸充分洗涤，然后加入其质量5倍体积的0.6mmol/L乙酸，内含1.5g/L胃蛋白酶悬浮，于4℃下搅拌水解36h ；
三、分离：水解完成后，以12000r/min离心处理30min，收集上层清液，用2mmol/L 的NaCl盐析24h，离心，收集沉淀用0.2mmol/L乙酸溶解后装入透析袋，用缓冲液进行透析溶解，缓冲液浓度及组成为 0.1mmol/L Tris-HCl-0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4，此透析溶解液即为粗Ⅱ型胶原蛋白；
四、纯化：将大孔离子交换树脂NKA-9经0.1mmol/L Tris-HCl和0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4平衡后，装入交换柱内，控制树脂柱径高比≥5，缓缓加入经平衡液透析后的粗Ⅱ型胶原蛋白，调节过柱流速为每小时4倍树脂体积，用核酸蛋白检测仪于280nm监测流出液的第一个吸收峰，收集有吸收峰的流出液；
五、脱盐干燥：向流出液中加入2mmol/L NaCl 溶液，盐析Ⅱ型胶原蛋白，于4℃下沉淀12h，用冷冻离心机离心20min，转速设置8000r/min，收集沉淀用0.6mmol/L乙酸重新溶解，装入透析袋中，对水透析过夜，最后冷冻干燥，获得纯化Ⅱ型胶原蛋白。
所得纯化Ⅱ型胶原蛋白为白色粉末，蛋白质含量94.6％，平均分子量400-800道尔顿。
本发明的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
一、除杂：取定量新鲜动物软骨，剥去骨膜，置于液氮下冷冻，再磨成粉末，将软骨粉末置于容器中，加入其质量15倍体积的盐酸胍-Tris-HCl缓冲液，于4 ℃下搅拌处理16h，盐酸胍-Tris-HCl缓冲液中盐酸肌的浓度为6mol/L , Tris浓度为0.1mmol/L, pH值为7.5 ；
二、提取：处理完成后用冷冻离心机离心30min，转速设置8000r/min，收集沉淀，用0.6mmol/L乙酸充分洗涤，然后加入其质量5倍体积的0.6mmol/L乙酸，内含1.5g/L胃蛋白酶悬浮，于4℃下搅拌水解36h ；
三、分离：水解完成后，以12000r/min离心处理30min，收集上层清液，用2mmol/L 的NaCl盐析24h，离心，收集沉淀用0.2mmol/L乙酸溶解后装入透析袋，用缓冲液进行透析溶解，缓冲液浓度及组成为 0.1mmol/L Tris-HCl-0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4，此透析溶解液即为粗Ⅱ型胶原蛋白；
四、纯化：将大孔离子交换树脂NKA-9经0.1mmol/L Tris-HCl和0.4mmol/L NaCl ，pH=7.4平衡后，装入交换柱内，控制树脂柱径高比≥5，缓缓加入经平衡液透析后的粗Ⅱ型胶原蛋白，调节过柱流速为每小时3～4倍树脂体积，用核酸蛋白检测仪于280nm监测流出液的第一个吸收峰，收集有吸收峰的流出液；
五、脱盐干燥：向流出液中加入2mmol/L NaCl 溶液，盐析Ⅱ型胶原蛋白，于4℃下沉淀10-12h，用冷冻离心机离心20min，转速设置8000r/min，收集沉淀用0.6mmol/L乙酸重新溶解，装入透析袋中，对水透析过夜，最后冷冻干燥，获得纯化Ⅱ型胶原蛋白。
2.根据权力要求1所述的治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法，其特征在于：所述步骤五中所得的纯化Ⅱ型胶原蛋白为白色粉末，蛋白质含量≥94％，平均分子量400-800道尔顿。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2013100130532A CN103060415A (zh) | 2013-01-15 | 2013-01-15 | 一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2013100130532A CN103060415A (zh) | 2013-01-15 | 2013-01-15 | 一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103060415A true CN103060415A (zh) | 2013-04-24 |
Family
ID=48103309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2013100130532A Pending CN103060415A (zh) | 2013-01-15 | 2013-01-15 | 一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103060415A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103238839A (zh) * | 2013-05-15 | 2013-08-14 | 百岳特生物科技（上海）有限公司 | 用于保养关节的含胶原蛋白的食品组成物 |
| CN103583943A (zh) * | 2013-10-10 | 2014-02-19 | 青岛贝尔特生物科技有限公司 | 一种增加骨密度的保健品配方 |
| CN106319015A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-01-11 | 上海海洋大学 | 一种鲨鱼软骨中具有生物活性ⅱ型胶原蛋白的制备方法 |
| CN109627326A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-04-16 | 汤臣倍健股份有限公司 | 一种非变性胶原蛋白提取方法和胶原蛋白的鉴定方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1795005A (zh) * | 2003-08-28 | 2006-06-28 | 南京宝生药业有限公司 | 河鲀ⅰ型胶原蛋白提取物的医药保健用途及其制备工艺 |
| CN101301490A (zh) * | 2008-06-27 | 2008-11-12 | 四川大学 | 一种医用级ⅱ型胶原的制备方法 |
| CN101363040A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-11 | 无锡贝迪生物工程有限公司 | 胶原蛋白的制备方法 |
| CN101570772B (zh) * | 2008-05-04 | 2012-07-25 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种天然骨胶原的制备方法 |
-
2013
- 2013-01-15 CN CN2013100130532A patent/CN103060415A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1795005A (zh) * | 2003-08-28 | 2006-06-28 | 南京宝生药业有限公司 | 河鲀ⅰ型胶原蛋白提取物的医药保健用途及其制备工艺 |
| CN101570772B (zh) * | 2008-05-04 | 2012-07-25 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种天然骨胶原的制备方法 |
| CN101301490A (zh) * | 2008-06-27 | 2008-11-12 | 四川大学 | 一种医用级ⅱ型胶原的制备方法 |
| CN101363040A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-11 | 无锡贝迪生物工程有限公司 | 胶原蛋白的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 刘高梅等: "猪软骨II型胶原蛋白的制备及结构表征", 《食品研究与开发》, vol. 33, no. 8, 31 August 2012 (2012-08-31), pages 47 - 49 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103238839A (zh) * | 2013-05-15 | 2013-08-14 | 百岳特生物科技（上海）有限公司 | 用于保养关节的含胶原蛋白的食品组成物 |
| CN103583943A (zh) * | 2013-10-10 | 2014-02-19 | 青岛贝尔特生物科技有限公司 | 一种增加骨密度的保健品配方 |
| CN106319015A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-01-11 | 上海海洋大学 | 一种鲨鱼软骨中具有生物活性ⅱ型胶原蛋白的制备方法 |
| CN109627326A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-04-16 | 汤臣倍健股份有限公司 | 一种非变性胶原蛋白提取方法和胶原蛋白的鉴定方法 |
| CN109627326B (zh) * | 2019-01-16 | 2021-07-06 | 汤臣倍健股份有限公司 | 一种非变性胶原蛋白提取方法和胶原蛋白的鉴定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102309644B (zh) | 一种治疗骨伤的中药组合物 | |
| CN103060415A (zh) | 一种治疗风湿性关节炎的胶原蛋白制备方法 | |
| CN101507736B (zh) | 一种治疗老年痴呆以及与坐骨腰椎、肿疖、受风相关的多种痹症的中药制剂 | |
| CN101066356A (zh) | 治疗附睾炎性不育症的中药 | |
| CN102120013B (zh) | 祛湿除痹的茶 | |
| CN1244346C (zh) | 一种润肠口服液及其制备方法 | |
| CN103520283B (zh) | 一种足浴粉及其制备方法 | |
| CN101940723A (zh) | 一种治疗肾盂肾炎的中药制剂 | |
| CN102579706B (zh) | 一种治疗尿结石的中药 | |
| CN102670871B (zh) | 一种风湿、类风湿中药组合物及其应用 | |
| CN104922290A (zh) | 一种治疗风湿骨痛的药捻治疗技术 | |
| CN1297309C (zh) | 关节痹络通外用药组合物及其制备方法 | |
| CN102302619B (zh) | 一种治疗痛风的药物 | |
| CN101066317A (zh) | 治疗附睾炎性不育症的中药制剂 | |
| CN101433660A (zh) | 治疗溃疡出血的纯中药 | |
| CN1085093C (zh) | 治疗男性不育的口服液 | |
| CN106266388B (zh) | 一种治疗骨痹、活血止痛的外搽药酒及其制备方法 | |
| CN106955306A (zh) | 一种治疗幼畜腹泻的中药注射剂及其制备方法 | |
| CN1107725A (zh) | 肩痛宁搽剂 | |
| CN105031164A (zh) | 一种可治疗破伤风的内服药物及其制备方法 | |
| CN1241602C (zh) | 治疗心脑血管疾病的口服药酒 | |
| CN103536784A (zh) | 一种治疗喉炎的中药及其制备方法 | |
| CN104001032A (zh) | 一种治疗肾阴亏虚型慢性扁桃体炎的中药制剂 | |
| CN104474124A (zh) | 一种治疗风湿性关节炎药酒 | |
| CN103638095B (zh) | 一种皮肤病药物的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20130424 |