CN103048317A - 一种生牛乳体细胞检测比色杯及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种生牛乳体细胞检测比色杯及其制备方法，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；所述芯材的组成成分包括1～12份芳香酯、1～18份重氮盐、0.1～1.6份增溶增敏剂，水溶解上述成分，并用浓度为0.1mol/L缓冲溶液调溶液pH为8.0，得到芯材溶液；所述壁材的组成成分包括酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖或蔗糖20～50份，水溶解上述成分得到壁材溶液，将芯材溶液与壁材溶液按照1：1混合，取混合溶液0.15～0.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔，经冷冻干燥和避光处理，得到生牛乳体细胞检测比色杯。本发明能够快速、敏感、便捷的对生牛乳中的体细胞进行检测。

Description

一种生牛乳体细胞检测比色杯及其制作方法

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体地，本发明涉及一种生牛乳体细胞检测比色杯及其制作方法。

背景技术

生牛乳中的体细胞数是指每毫升生牛乳中的细胞总数，体细胞数是衡量生牛乳品质与供应生牛乳动物乳腺健康的重要指标，需要简便、成本低、准确度高的检测方法。

目前国内外乳品行业应用的生牛乳体细胞数或乳房炎的检测方法很多，通用的方法包括仲裁法-显微镜直接观察法、电子计数仪检测法、加利福尼亚细胞数测定法(CMT)、酯酶法。其中，仲裁法-显微镜直接观察法需要染色、制片、观察、计数，十分繁琐，易造成操作人员视觉疲劳出现人为误差，且其所用的试剂(四氯乙烷)具有强毒性。电子计数仪检测法设备价格昂贵、运行成本高；加利福尼亚细胞数测定法只是对生牛乳的凝固状态进行粗略的判断，主观性强，结果不够准确。

酯酶法是基于粒细胞胞质内含有特异性酯酶可作用于底物芳香酯，释放出酚，酚又与重氮盐发生反应形成紫色络合物，颜色深浅与体细胞数呈一定的比例关系。但酯酶法未能广泛应用于生牛乳验收，以及奶牛乳房炎判定，主要原因为：芳香酯检测生牛乳时用量微小，需精密称量；重氮盐配制方法繁琐，分布广泛的生牛乳检测现场无法具备精密称取药品、配制反应溶液的条件。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种生牛乳体细胞检测比色杯，该比色杯能够快速、敏感、便捷的对生牛乳中的体细胞进行检测。

为达到上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种生牛乳体细胞检测比色杯，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；

所述芯材的组成成分包括1～12份芳香酯、1～18份重氮盐、0.1～1.6份增溶增敏剂，200份水溶解上述成分，浓度为0.1mol/L缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

所述壁材的组成成分包括酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖或蔗糖20～50份。

所述芳香酯为吡咯酯，也可以是其他芳香酯，比如吲哚酯等。

所述重氮盐为1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐，也可以是其他的重氮盐，如氟硼酸重氮盐。

所述缓冲溶液为Tris-盐酸缓冲溶液。

所述增溶增敏剂为EDTA。

本发明采用微胶囊技术，以芳香酯及重氮盐为芯材，并根据芯材性质以及检测样品（生牛乳）性质配制壁材，使壁材即可有效承载并保护芯材，又可以在与生牛乳接触时迅速崩解，快速反应。

本发明通过真空干燥技术使用壁材包埋吡咯酯及重氮盐，在比色杯底部形成质地细致均匀的药品固体方块，且比色杯底部采用避光处理，-10℃～10℃条件保存。

本发明的壁材中，乳糖或蔗糖为惰性载体，可有效保护芯材自身不发生反应变色。其中，乳糖与大豆蛋白颗粒小、易溶解，与待测样品溶液混合后可迅速崩解释放芯材。乳糖和大豆蛋白联合使用不会造成吡咯酯及重氮盐在运输或使用过程中的损失，且可赋予成品细腻丰满的质感。酪蛋白在壁材配制中具有乳化作用，同时具有pH调节作用，使溶液以及成品的pH更接近中性。

一般生牛乳的pH为6.3～6.8，因此，本发明试剂反应的最佳pH条件为弱碱环境，故在配制过程中需要添加缓冲溶液，调节pH。

本发明的使用方法：量取1～2mL生牛乳注入比色杯，震荡、混匀，静置1～10min观察生牛乳颜色变化。

本发明的另一个目的在于，提供一种生牛乳体细胞检测比色杯的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1）比色杯处理：比色杯经超声波处理10～30分钟，水冲洗，热风干燥箱干燥；

2）芯材溶液：1～12份芳香酯、1～18份重氮盐、0.1～1.6份增溶增敏剂，200份水溶解上述原料，浓度为0.1mol/L缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

3）壁材溶液：酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖蔗糖20～50份，100ml水溶解上述原料得到壁材溶液；

4）混合溶液注入比色杯：芯材溶液：壁材溶液按照1：1混合，取混合溶液0.15～0.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；

5）真空冷冻干燥：-80～-20℃预冻2～8h，1～20pa真空干燥5～10h；

6）避光处理：真空冷冻干燥后，比色杯底部形成检测块，采用不透光材质包裹比色杯底部或采用不透光涂料涂布比色杯底部，得到生牛乳体细胞检测比色杯。

所述混合溶液0.15～0.25mL注入比色杯中，优选混合溶液0.2mL注入比色杯中。

所述芳香酯为吡咯酯，也可以是其他芳香酯，比如吲哚酯等。

所述重氮盐为1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐，也可以是其他的重氮盐，如氟硼酸重氮盐。

所述缓冲溶液为Tris-盐酸缓冲溶液。

所述增溶增敏剂为EDTA。

本发明相对于现有技术具有以下优点：

1）可解决现有生牛乳体细胞的检测方法无法实现实时在线检测的问题，适用于生产现场生牛乳体细胞数据的收集；

2）可解决酯酶法无法现场准确用量的问题；

3）检测速度快，最快2～8分钟即可定量测定原料乳的体细胞；

4）检测方便，注入生牛乳混匀观察即可；

5）便捷、经济、准确、成本低、应用广泛，既适合个体奶农，又适合大型牧场的大量检测。

具体实施方式

下面以具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

一种生牛乳体细胞检测比色杯，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；

所述芯材的组成成分包括1份吡咯酯、1份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐、0.1份增溶增敏剂，200份水溶解上述成分，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

所述壁材的组成成分包括酪蛋白5份、大豆蛋白15份、乳糖20份。

一种生牛乳体细胞检测比色杯的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1）比色杯处理：751型有机玻璃比色杯经超声波处理10分钟，水冲洗，热风干燥箱干燥；

2）芯材溶液：1份吡咯酯、1份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐、0.1份增溶增敏剂，200份水溶解，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

3）壁材溶液：酪蛋白5份、大豆蛋白15份、乳糖20份，100ml水溶解得到壁材溶液；

4）混合溶液注入比色杯：芯材溶液：壁材溶液按照1：1混合，取混合溶液0.2mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；

5）真空冷冻干燥：-28～-20℃预冻2h，1.3pa真空干燥10h；

6）避光处理：真空冷冻干燥后，比色杯底部形成检测块，采用不透光材质包裹比色杯底部，得到生牛乳体细胞检测比色杯。

实施例2

一种生牛乳体细胞检测比色杯，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；

所述芯材的组成成分包括12份吡咯酯、18份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐、1.6份增溶增敏剂，200份水溶解上述成分，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

所述壁材的组成成分包括酪蛋白10份、乳清蛋白30份、蔗糖50份。

一种生牛乳体细胞检测比色杯的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1）比色杯处理：751型有机玻璃比色杯经超声波处理15分钟，水冲洗，热风干燥箱干燥；

2）芯材溶液：12份吡咯酯、18份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐、1.6份增溶增敏剂，200份水溶解，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

3）壁材溶液：酪蛋白10份、乳清蛋白30份、蔗糖50份，100ml水溶解得到壁材溶液；

4）混合溶液注入比色杯：芯材溶液：壁材溶液按照1：1混合，取混合溶液0.15mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；

5）真空冷冻干燥：-80～-40℃预冻2h，1.3pa真空干燥10h；

6）避光处理：真空冷冻干燥后，比色杯底部形成检测块，采用不透光涂料涂布比色杯底部，得到生牛乳体细胞检测比色杯。

实施例3

一种生牛乳体细胞检测比色杯，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；

所述芯材的组成成分包括8份吲哚酯、12份氟硼酸重氮盐、1.0份增溶增敏剂，200份水溶解上述成分，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

所述壁材的组成成分包括酪蛋白8份、乳清蛋白20份、蔗糖35份。

一种生牛乳体细胞检测比色杯的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1）比色杯处理：751型有机玻璃比色杯经超声波处理30分钟，水冲洗，热风干燥箱干燥；

2）芯材溶液：8份吲哚酯、12份氟硼酸重氮盐、1.0份增溶增敏剂，200份水溶解，浓度为0.1mol/L Tris-盐酸缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

3）壁材溶液：酪蛋白8份、乳清蛋白20份、蔗糖35份，100ml水溶解得到壁材溶液；

4）混合溶液注入比色杯：芯材溶液：壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液0.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；

5）真空冷冻干燥：-80～-40℃预冻2h，1.3pa真空干燥10h；

6）避光处理：真空冷冻干燥后，比色杯底部形成检测块，采用不透光涂料涂布比色杯底部，得到生牛乳体细胞检测比色杯。

实施例4

1、比色杯检测方法建立

选取分娩30天内的奶牛的体细胞数较高的生牛乳样品，用UHT乳以1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：19比例稀释。将待测样品混匀，各取2ml加入实施例1～3制得的比色杯中，震荡、混匀，于1min、5min和10min记录颜色变化，并应用直接显微镜计数（NY/T800-2004）检测样品体细胞数，结果如表1～3：

表1实施例1制备的比色杯检测生牛乳时的颜色变化

表2实施例2制备的比色杯检测生牛乳时的颜色变化

表3实施例3制备的比色杯检测生牛乳时的颜色变化

由上表可以看出实施例1～3所制备的比色杯的检测限为≥14万/mL。当5min样品的颜色为淡黄或橙色时，样品体细胞数≤50万/mL；当5min样品的颜色为褐色时，样品体细胞数为50～113万/mL；当5min样品的颜色为（深褐色）紫红时，样品体细胞数≥113万/mL。以该实验结果为依据制作比色卡，并将三个5min内的样品颜色变化范围分别设定为“-”阴性、“+”弱阳性和“++”阳性，对生牛乳体细胞指标进行半定量分析。

2、对比实验检测结果

随机选取体细胞数不同的生牛乳样品29组，每组样品分为五份，分别应用直接显微镜计数（NY/T800-2004）、CMT检测法、实施例1的检测比色杯、实施例2的检测比色杯和实施例3的检测比色杯对生牛乳体细胞指标进行测定，对比结果如表4：

表4不同样品采用不同检测方式的检测结果

由上述检测结果可知，本发明检测比色杯的检测结果与仲裁法-显微镜直接观察法有良好的对应关系，较CMT法检测结果更为客观、准确，并且较显微镜检测更为简便、快捷。

Claims (10)

1.一种生牛乳体细胞检测比色杯，所述比色杯底部设置检测块，所述检测块包括芯材和壁材；

所述芯材的组成成分包括1～12份芳香酯、1～18份重氮盐、0.1～1.6份增溶增敏剂，200份水溶解上述成分，浓度为0.1mol/L缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

所述壁材的组成成分包括酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖或蔗糖20～50份。

2.根据权利要求1所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述芳香酯为吡咯酯或吲哚酯。

3.根据权利要求1所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述重氮盐为1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐或氟硼酸重氮盐。

4.根据权利要求1所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述缓冲溶液为Tris-盐酸缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述增溶增敏剂为EDTA。

6.一种生牛乳体细胞检测比色杯的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1）比色杯处理：比色杯经超声波处理10～30分钟，水冲洗，热风干燥箱干燥；

2）芯材溶液：1～12份芳香酯、1～18份重氮盐、0.1～1.6份增溶增敏剂，200份水溶解，浓度为0.1mol/L缓冲溶液调溶液的pH为8.0；

3）壁材溶液：酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖或蔗糖20～50份，100ml水溶解上述原料得到壁材溶液；

4）混合溶液注入比色杯：芯材溶液与壁材溶液按照1：1混合，取混合溶液0.15～0.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；

5）真空冷冻干燥：-80～-20℃预冻2～8h，1～20pa真空干燥5～10h；

6）避光处理：真空冷冻干燥后，比色杯底部形成检测块，采用不透光材质包裹比色杯底部或采用不透光涂料涂布比色杯底部，得到生牛乳体细胞检测比色杯。

7.根据权利要求6所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述芳香酯为吡咯酯或吲哚酯。

8.根据权利要求6所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述重氮盐为1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮盐或氟硼酸重氮盐。

9.根据权利要求6所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述缓冲溶液为Tris-盐酸缓冲溶液。

10.根据权利要求6所述的生牛乳体细胞检测比色杯，其特征在于，所述增溶增敏剂为EDTA。