CN103045676A - 一种壳聚糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种壳聚糖的制备方法属于生物发酵领域,更具体的说,是涉及一种壳聚糖的制备方法。本发明提供了一种制备简单、耗时短、产率高的壳聚糖的制备方法。本发明的制备步骤为:黑曲霉发酵;甲壳素的制备。
Description
技术领域:
本发明属于生物发酵领域,更具体的说,是涉及一种壳聚糖的制备方法。
背景技术:
壳聚糖是甲壳素经浓碱溶液处理后脱去乙酰基的产物,化学名为聚(1,4)-2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖。壳聚糖的生物相容性良好,在生物医学及制药等方面的应用极其广泛,可用作烧伤敷料及伤口愈合剂,包扎纱布用壳聚糖处理后,伤口愈合速度可提高75%。用壳聚糖制成的可吸收性手术缝线,机械强度高,可长期贮存,能用常规方法消毒,可染色,可掺入药剂,能被组织降解吸收,免除患者拆线的痛苦。壳聚糖能抑制胃酸和溃疡,具有降解胆固醇及三甘油脂的作用。肝素是一种带有磺酸基、羧基的极有效的抗凝血剂,硫酸酯化的壳聚糖在结构上与肝素相似,这种类肝素衍生物一般具有相当甚至超过肝素活性,为提供合成廉价的抗凝血剂提供了有效的途径。此外,壳聚糖还可用于制作人工肾透析膜和隐形眼镜。由壳聚糖制备出的微胶囊,是一种生物降解型的高分子膜材料,是优良且极具发展前途的医用缓释体系。
此外,壳聚糖在食品上可用作保鲜膜。将其水溶液涂于果蔬表面,可人为在果蔬表面形成一个低氧高二氧化碳的密闭环境,抑制果蔬呼吸,同时抑菌繁殖,提高果蔬光泽度,提高果树的感官品质。
壳聚糖的制备方法大都耗时长、对设备要求高,且产率普遍很低。
发明内容:
本发明就是针对上述问题,提供了一种制备简单、耗时短、产率高的壳聚糖的制备方法。
为了实现本发明的上述目的,本发明的制备步骤为:
1.黑曲霉发酵
斜面培养基制备:4%琼脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖,加热过滤后装入试管,于121℃高压灭菌20min;在无菌操作台上进行接种,于22~34℃电热恒温培养箱培养0~110h;用接种环刮取新鲜斜面上的黑髓霉孢子,转入装有无菌水和装有玻璃珠的具塞三角瓶中,充分振荡后用血球计数板计算悬液浓度,并用无菌水稀释至所需浓度(7108~9X 108个孢子/mL);在500mL锥形瓶中用多层纱布及牛皮纸包住锥形瓶瓶口,于121℃高压灭菌20min;灭菌后在无菌操作台按量接入孢子悬液,恒温摇床发酵,摇床转速为120~210r/min;
2.壳聚糖的制备
取发酵液,离心洗涤菌体至上清液无色,取所得沉淀加入7%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10w/V),50℃下处理3h后离心,水洗涤沉淀至上清液无色;取上述沉淀,加入乙醇∶水=1∶1的20%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10W/V),于480W功率下微波处理15min后离心,洗涤沉淀至上清液呈中性;取上述沉淀,加入5%乙酸溶液于100℃下处理5h,离心分离,调节pH值为8~10,此时出现大量白色絮状沉淀,离心,无离子水洗涤沉淀至上清液呈中性;转移沉淀至平皿中,50℃下真空干燥,所得固体即为壳聚糖。
本发明的有益效果:
1.本发明工艺简单、便于生产;
2.本发明产率较高。
附图说明:
图1、图2、图3为三因素对壳聚糖产率的影响图。
具体实施方式:
本发明以黑曲霉为原料,利用发酵法制备壳聚糖,本发明的工艺步骤为:
1.黑曲霉发酵
斜面培养基制备:4%琼脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖,加热过滤后装入试管,于121℃高压灭菌20min;在无菌操作台上进行接种,于22~34℃电热恒温培养箱培养0~110h;用接种环刮取新鲜斜面上的黑髓霉孢子,转入装有无菌水和装有玻璃珠的具塞三角瓶中,充分振荡后用血球计数板计算悬液浓度,并用无菌水稀释至所需浓度(7108~9X108个孢子/mL);在500mL锥形瓶中用多层纱布及牛皮纸包住锥形瓶瓶口,于121℃高压灭菌20min;灭菌后在无菌操作台按量接入孢子悬液,恒温摇床发酵,摇床转速为120~210r/min;
2.壳聚糖的制备
取发酵液,离心洗涤菌体至上清液无色,取所得沉淀加入7%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10w/V),50℃下处理3h后离心,水洗涤沉淀至上清液无色;取上述沉淀,加入乙醇∶水=1∶1的20%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10W/V),于480W功率下微波处理15min后离心,洗涤沉淀至上清液呈中性;取上述沉淀,加入5%乙酸溶液于100℃下处理5h,离心分离,调节pH值为8~10,此时出现大量白色絮状沉淀,离心,无离子水洗涤沉淀至上清液呈中性;转移沉淀至平皿中,50℃下真空干燥,所得固体即为壳聚糖。
本发明选择发酵温度、发酵时间、摇床转速为影响壳聚糖产率的因素,影响情况可见图1、图2、图3。
由图2可以看到,菌株在培养过程中,壳聚糖的产量和相对分子质量都在变化。培养初期菌丝体迅速生长,壳聚糖量也迅速增加。随着培养时间的增加,壳聚糖量逐渐达到饱和,菌丝体的量不再增加;另一方面,壳聚糖的相对分子质量随着培养期的延长而迅速下降。
作为一种最佳方案,本发明的制备步骤为:发酵温度为28℃,摇床转速为180r/min,发酵时间为80h。
Claims (2)
1.一种壳聚糖的制备方法,其特征在于,本发明的制备步骤为:
(1)黑曲霉发酵
斜面培养基制备:4%琼脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖,加热过滤后装入试管,于121℃高压灭菌20min;在无菌操作台上进行接种,于22~34℃电热恒温培养箱培养0~110h;用接种环刮取新鲜斜面上的黑髓霉孢子,转入装有无菌水和装有玻璃珠的具塞三角瓶中,充分振荡后用血球计数板计算悬液浓度,并用无菌水稀释至所需浓度(7108~9X108个孢子/mL);在500mL锥形瓶中用多层纱布及牛皮纸包住锥形瓶瓶口,于121℃高压灭菌20min;灭菌后在无菌操作台按量接入孢子悬液,恒温摇床发酵,摇床转速为120~210r/min;
(2)壳聚糖的制备
取发酵液,离心洗涤菌体至上清液无色,取所得沉淀加入7%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10w/V),50℃下处理3h后离心,水洗涤沉淀至上清液无色;取上述沉淀,加入乙醇∶水=1∶1的20%氢氧化钠溶液(菌体∶碱液=1∶10W/V),于480W功率下微波处理15min后离心,洗涤沉淀至上清液呈中性;取上述沉淀,加入5%乙酸溶液于100℃下处理5h,离心分离,调节pH值为8~10,此时出现大量白色絮状沉淀,离心,无离子水洗涤沉淀至上清液呈中性;转移沉淀至平皿中,50℃下真空干燥,所得固体即为壳聚糖。
2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖的制备方法,其特征在于,本发明的制备步骤为:发酵温度为28℃,摇床转速为180r/min,发酵时间为80h。
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Cited By (2)
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CN103952454A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-30 | 青岛科柏利高性能聚合物有限公司 | 一种用餐厨垃圾制造可降解塑料的工艺 |
CN110156913A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-23 | 扬州日兴生物科技股份有限公司 | 一种利用蜡样芽孢杆菌处理废弃虾蟹壳提取甲壳素的方法 |
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2011
- 2011-10-14 CN CN 201110310404 patent/CN103045676A/zh active Pending
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PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130417 |