CN103030709A

CN103030709A - 一种从柳蒿芽中制备多糖的方法

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Publication number: CN103030709A
Application number: CN2012105955819A
Authority: CN
Inventors: 姚德坤; 姚德利; 张亚红; 姚航; 黄运生; 吴海龙
Original assignee: GREAT XINGAN MOUNTAINS LINGEBEI ORGANIC FOOD CO Ltd
Current assignee: GREAT XINGAN MOUNTAINS LINGEBEI ORGANIC FOOD CO Ltd
Priority date: 2012-12-13
Filing date: 2012-12-13
Publication date: 2013-04-10
Anticipated expiration: 2032-12-13
Also published as: CN103030709B

Abstract

本发明公开一种从柳蒿芽中制备多糖的方法，该方法为：将柳蒿芽洗净，加15倍量85％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水将浓缩液pH值调至2.5，放置20分钟，滤过；滤液上广谱型大孔树脂吸附柱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并以体积比3∶1的丙酮∶甲醇洗杂质，继用体积比7∶1的丙酮∶甲醇洗脱，收集洗脱液；将所收集到的多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖成品，其含量在70％以上。本发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高。

Description

一种从柳蒿芽中制备多糖的方法

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种多糖的制备方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法从柳蒿芽中制备多糖的方法。

背景技术：

柳蒿别名柳蒿菜、水蒿、白蒿等，为菊科多年生草本植物，其嫩茎叶可食用。柳蒿每100克鲜品中含蛋白质37克、脂肪0.7克、碳水化合物9克、粗纤维2.1克、胡萝卜素4.4毫克、维生素B20.3毫克、烟酸1.3毫克、维生素C 23毫克。每100克干品中含钾1960毫克、钙950毫克、镁260毫克、磷415毫克、钠38毫克、铁13.9毫克、锰11.9毫克、锌2.6毫克、铜1.7毫克。有破血行淤，下气通络之疗效。

柳蒿多糖为柳蒿中碳水化合物，经科学研究及临床应用证明，柳蒿多糖具有免疫抑制作用，能减少我们通常使用的免疫抑制剂的诸如细胞毒性、机体抗感染能力下降、对骨髓造血细胞的繁殖抑制等副作用，还具有抗病毒及抗癌作用。人们发现天然植物柳蒿芽中含有大量的碳水化合物，从中提取柳蒿多糖并且取得了可喜进展，原料柳蒿芽来源较广。

发明内容

本发明目的在于提供一种从柳蒿芽中制备多糖的方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化柳蒿芽多糖的方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的。

本发明从柳蒿芽中制备多糖的方法包括如下步骤：

将柳蒿芽洗净，加入粗粉质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40min后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～80％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1～3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，

然后用丙酮∶甲醇的体积比为5～7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖，其含量在96％以上。

本发明从柳蒿芽中制备多糖的方法包括如下步骤：

称取洗净的柳蒿芽，加入粗粉质量20倍量的85％甲醇回流提取180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40min后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。

所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每min0.05ml/g树脂。

所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每min0.1ml/g硅胶。硅胶活化条件为，110℃30min。

本发明中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25～40℃搅拌20～40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。

本发明中精制过程包括如下步骤：

按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25℃搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40℃热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。

本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。

本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化柳蒿芽多糖，对柳蒿芽多糖的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量45％以上的多糖半成品和含量96％以上的多糖终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。

本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附多糖，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制，分离效果更佳。

具体实施方式：

实施例1：

称取洗净的柳蒿芽10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90％的甲醇回流提取140min，滤过；

滤液，回收甲醇，浓缩至4波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.8，放置40min，滤过；滤液上HPD100型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用15％的甲醇洗杂质，然后用70％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为2∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为6∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液2L；加入80g针剂活性炭，30摄氏度搅拌30min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体35g；中间体用8倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品20g，含量73％。

实施例2：

称取洗净的柳蒿芽15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95％的甲醇回流提取160min，滤过；

滤液，回收甲醇，浓缩至5波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40min，滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用10％的甲醇洗杂质，然后用60％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液3.5L；加入140g针剂活性炭，40℃搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体60g；中间体用9倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品32g，含量71，3％。

实施例3：

称取洗净的柳蒿芽20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87％的甲醇回流提取120min，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5，放置40min，滤过；滤液上AB-8型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用80％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液5L；加入200g针剂活性炭，25℃搅拌20min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体70g；中间体用8倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品36g，含量72.5％。

实施例4：

称取洗净的柳蒿芽5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98％的甲醇回流提取160min，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.6，放置40min，滤过；滤液上DM-130型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液1200ml；加入48g针剂活性炭，40℃搅拌25min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体20g；中间体用7倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品12g，含量73.2％。

Claims

1.一种从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

将柳蒿芽洗净，加入粗粉质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40min后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～80％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成晶；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1～3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5～7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。

2.如权利要求1所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

洗净的柳蒿芽，加入粗粉质量20倍量的85％甲醇回流提取180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40min后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。

3.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05ml/g树脂。

4.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟0.1ml/g 硅胶。硅胶活化条件为，110℃30min。

5.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制，按4g/100ml多糖洗脱液加入针剂活性炭，25～40℃搅拌20～40min，滤过；滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇40℃热溶，滤过，滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。

6.如权利要求5所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中精制过程包括如下步骤：

按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25℃搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40℃热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。

7.如权利要求6所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。