CN103028110A

CN103028110A - 抗分泌因子的新用途

Info

Publication number: CN103028110A
Application number: CN2012105700824A
Authority: CN
Inventors: H－A·汉松; E·延尼谢; S·兰格; L·伦罗特; P·埃里克松; A·佩尔松
Original assignee: Esther Fakete - Ltd By Share Ltd
Current assignee: Esther Fakete - Ltd By Share Ltd
Priority date: 2003-09-26
Filing date: 2004-09-24
Publication date: 2013-04-10
Anticipated expiration: 2024-09-24
Also published as: NZ545661A; US8748367B2; EP1734989B1; ES2384385T3; GB0322645D0; JP2007506735A; JP4943847B2; EP1734989A1; CA2537335C; RU2416426C2; NO20060901L; KR101159858B1; ZA200601807B; AU2004275682A1; AU2004275682B2; KR20060097718A; IL174464A0; BRPI0414793A; US20070009575A1; CN103028110B

Abstract

本发明是抗分泌因子的新用途。涉及抗分泌蛋白或其具有相同特性的同源物或其某些片段在制造药物或医用食物中的用途，其用于诱导受损或患病神经组织的改善拯救、诱导胚胎干细胞、成年干细胞、祖细胞和/或自干细胞或祖细胞衍生的细胞的增殖、凋亡、分化和/或迁移，以及用于治疗以细胞损失和/或获得为特征或与之相关的状况。在一个优选的实施方案中，所述状况是神经创伤或CNS和/或PNS和/或ANS的状况或疾病，例如阿尔茨海默病。

Description

抗分泌因子的新用途

本申请是申请日为2004年9月24日、发明名称为“抗分泌因子的新用途”的中国专利申请200480027827.6的分案申请。

发明领域

本发明涉及包含称作抗分泌因子（AF）的一组蛋白质的某些要素的肽、多肽和蛋白质在制造用于治疗和/或预防状况或医学状况的药物的用途，其中所述状况特征在于（或与其相关）细胞的病理性损失和/或获得、或者如在病理性降解时细胞所表达蛋白质的过量产生或异常降解率、或者包括干细胞或祖细胞在内的已分化细胞和/或组织的修复、恢复和/或再生控制的损失，其中所述医学状况特征在于（或与其相关）其为这样一类状况，即其包括由创伤、窒息、毒素、缺氧、局部缺血、感染或者退化性或代谢性损伤对脑和神经系统其它部分的损伤，其中所述损伤引起缺陷、障碍或异常结构和功能。本发明尤其涉及抗分泌蛋白质或者其具有相同功能特征的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物的新用途、诱导抗分泌蛋白质的食物的新用途和具有高水平抗分泌蛋白质的蛋黄的新用途。

本发明还涉及增殖、诱导、降低和/或维持所分离干细胞发生的方法及治疗的方法。

发明背景

中枢神经系统（CNS）、周围神经系统（PNS）或自主神经系统（ANS）中的创伤性、窒息性、缺氧性、局部缺血性、中毒性、感染性、退化性或代谢性损伤常引起几种不同类型细胞的损伤。帕金森病和阿尔茨海默病是CNS内的退化性状况的实例，两者常引起特定的细胞群体损失。帕金森病尤其与黑质内的多巴胺能神经元的特定损失有关。类似地，多发性硬化症与轴突的结构和功能病变以及髓鞘质和少突胶质细胞的损失有关。阿尔茨海默病是神经元损失引起退化性失调的另一个例子。此外，存在CNS、PNS和ANS损伤或疾病与少突胶质、星形神经胶质、卫星细胞、施万细胞、小胶质、血管细胞和神经元的损伤相关的众多事例。

通常，退化或损伤后神经元和已分化神经胶质细胞的替换不是成年哺乳动物脑的特征。因此通常认为神经元损失为永久性的。然而，必须指出疾病、脑肿瘤和神经创伤的恢复主要是因为存活细胞的修复和重建。然而，出生后在包括人类的所有哺乳动物物种脑内的侧脑室室下区(SVZ)和在海马中的齿状回颗粒下层(SGZ)内的神经发生一直持续至成年期(参考文献2、3、4)。此外，神经祖细胞在脊髓和在ANS中的形成程度较小。不得不强调的是在神经组织的损伤处和疾病中可重建和形成血管细胞、小胶质细胞和巨噬细胞以及结缔组织细胞。

如在包括人在内的成年哺乳动物身体的其它组织一样，在脑中存在全能的细胞群体，命名为祖细胞。神经元祖细胞是干细胞并且存在于脑内侧脑室室下区(SVZ)以及海马齿状回颗粒下层(SGZ)内，在此处此种细胞连续增殖并且迁移至临近的脑结构，并且最终退化或者存活和分化。例如SGZ中的新生神经元优选地迁移至海马颗粒细胞层，并且最终表达已分化神经元的标记以及获得已分化颗粒细胞的相应形态学特征，使轴突性突起建成为苔藓纤维途径(mossy fibre pathway)并且在海马内与它们的靶标形成突触性连接(参考文献5)。应当强调的是，若未受到足够刺激，大部分新形成的此类细胞会退化，而另一些细胞则获得神经胶质细胞的特征(参考文献3、4、5)。

由于海马与空间学习和记忆密切相关，因此齿状回内的神经发生本身尤其引起人们的兴趣(参考文献6)。SVZ内的神经发生通过吻侧漂移线向嗅叶持续提供新的神经细胞，但是在例如中风和神经创伤时，如果受损或发病部位适度接近于正在迁移的前体细胞，则正在迁移的初级神经元祖细胞可以偏转至受损或发病部位。

SVZ和SGZ内祖细胞的增殖受例如生长因子、白介素、N-甲基-d-天冬氨酸受体拮抗物施用的影响或受肾上腺摘除的影响，肾上腺摘除后导致皮质类固醇激素水平降低或缺乏(参考文献7、8)。此外，对富集环境的暴露伴随着在例如齿状回中存活的新形成的颗粒细胞数目的增加以及存活神经元总数的增加(参考文献9)。新神经细胞的形成随着年龄的增长而降低(参考文献3)。

在损伤或疾病后减少神经组织中的炎症反应是有益的，并且导致存活神经元数目的增加、突触形成的改善和延长以及星形细胞增生的减少，同时对血管和相关结构的阻碍性影响较小从而对循环的阻碍性影响较小。弱的炎症至中度的炎症对于修复和恢复性事件以及神经发生是有益的，而强烈炎症反应是有害的并且可引起本可恢复的组织和细胞的损失加重。

抗分泌因子(AF)是一类体内天然存在的蛋白质。Lange和

总结了抗分泌因子常识(参考文献1)。抗分泌因子的结构和AF在包括人类在内的动物体内引起的某些效应描述于专利W097/08202(参考文献10)。分离自脑垂体的人AF蛋白质是41kD的蛋白质，包含382个氨基酸。

AF：s中关于抗炎症和抗分泌效应的活性位点似乎位于蛋白质中靠近AFN末端部分的第1-163位、或较优选第36-52或第36-44位的某个区域，或者其修饰。

最近本发明者开展的研究已经表明AF与蛋白质S5a(又称Rpn10)在一定程度上同源，其中所述S5a蛋白质组成了所有细胞中广泛存在的成分26S蛋白酶体的一个亚基，更加具体而言是19S/PA700帽中的亚基。在本发明中，将AF蛋白质定义为具有相同功能特征的一类同源蛋白质。蛋白酶体具备涉及降解过剩蛋白质以及短寿命的、不需要的、变性的、错误折叠的和异常的蛋白质降解的多种功能。而且，AF/S5a/Rpnl0参与细胞成分的分布和转运，最为明显地为参与蛋白质的分布和转运。

Davidson和Hickey(参考文献11、12)于2004年在国际科学期刊发表的两篇文章中报道已经产生抗AF抗体，该抗体能够调节炎症反应，从而证实了先前专利申请和专利中的描述(参考文献10、14)。

发明概述

本发明者现已惊奇地发现：AF及其片段能改善神经组织修复，以及介导和/或降低创伤、炎症和进行性退化的影响，从而拯救组织，这如通过神经组织损失的减少所确定以及通过抑制β淀粉样蛋白和其它组织成分的形成或促进β淀粉样蛋白和其它组织成分的分解(否则积累)来确定。对例如血管成分的有益影响也已经记录。AF及其片段能进一步拯救神经组织成分并且支持成年CNS中普遍存在的祖细胞的增殖。这表明其为一种新的和令人激动的作用模型，因为AF及其片段能介导受影响细胞的拯救和存活并且能够促进SVZ和SGZ中干细胞和祖细胞的增殖和迁移。

具体而言，本发明者已经认识到AF及其某些片段可调节神经组织成分的破坏、修复、再生、祖细胞的迁移和分化以及现存细胞和新细胞之间的突触形成，这促进了突触形成和功能性恢复并且降低了退化和组织破坏的速度和程度。

本发明因此提供旨在治疗特别是CNS、PNS和/或ANS的损伤、机能障碍、疾病或功能紊乱的新的和改进的方法，并且因此有可能有益地影响组织的功能。

包括人在内的哺乳动物的脑和脊髓保留终生产生神经元的能力，虽然此能力很大程度上仅局限于某些区域。通过干细胞或祖细胞的增殖产生了新的神经元、神经胶质细胞以及试验性的血管细胞。在产生本发明的研究期间，显而易见AF的某些片段拯救了神经组织并且诱导新细胞的形成增加，包括细胞之间的突起和突触。

现已经惊奇地发现，可以通过施用有效量的AF或其某些片段来治疗CNS损伤后或在神经元疾病或失调进程中神经组织的损失。因此有可能拯救神经组织，并且有可能在CNS、PNS或者ANS内的神经元或神经胶质细胞损失后影响细胞的形成、迁移和分化以及突触形成，或者有可能阻止CNS、PNS和ANS中所述细胞的年龄相关的退化。

在后续内容中，根据生物化学常用的基于使用单字母的缩写命名氨基酸，以便确定每一氨基酸。

在本发明的一个方面涉及抗分泌蛋白质或者其具有相同功能特性的同源物、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多肽或衍生物、或者其可药用盐在制造用于治疗和/或预防与细胞的拯救或者细胞的病理性损失和/或获得和/或脑水肿有关或以其为特征的状况的药物的用途，其中式I为：

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5(式I)

其中

X1为I、SEQ ID NO：1中第1-35位氨基酸或者空缺，

X2为H、R或K

X3为S或L

X4为T或A

X5为SEQ ID NO：1中第43-46、43-51、43-80或43-163位氨基酸或者空缺。

在本发明的一个实施方案中，式I具有选自如下之一的序列：

a)SEQ ID NO：1中第35-42位氨基酸，

b)SEQ ID NO：1中第35-46位氨基酸，

c)SEQ ID NO：1中第36-51位氨基酸，

d)SEQ ID NO：1中第36-80位氨基酸，

e)SEQ ID NO：1中第1-80位氨基酸，或

f)SEQ ID NO：1中第1-163位氨基酸，

或其可药用的盐。

SEQ ID NO：1是如在Johansson,E.等(参考文献13)或Lange,S等(参考文献10、14)中给出的抗分泌因子多肽或蛋白质的氨基酸序列。

本发明的第二个方面涉及诱导抗分泌蛋白质的食物在制造用于治疗和/或预防状况的食物或医用食物的用途，其中所述状况与细胞的拯救或者细胞的病理性损失和/或获得和/或脑水肿有关或以其为特征。

本发明的第三个方面涉及具有高水平、优选至少每毫升1000FIL单位的抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物的蛋黄在制造用于治疗和/或预防状况的食物或医用食物的用途，其中所述状况与细胞的拯救或者细胞的病理性损失和/或获得和/或脑水肿有关或以其为特征。

在本发明的一个实施方案中，该状况特征在于表现为已分化细胞和/或组织、胚胎干细胞、成年干细胞、祖细胞和/或自干细胞或祖细胞衍生的细胞的病理性退化、再生能力丧失和/或再生控制丧失、和/或再生控制丧失。仍然在另一个实施方案中，该状况与周围神经系统、自主神经系统和/或中枢神经系统内的细胞病理性损失和/或获得有关或以其为特征，并且又在另一个实施方案中，该状况与神经干细胞或神经祖细胞的拯救或病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

在本发明的一个实施方案中，该状况与少突胶质、星形神经胶质、施万细胞和/或神经元细胞和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征，并且在另一个实施方案中，该状况与非胆碱能神经元细胞、胆碱能神经元细胞和/或神经胶质细胞和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

在本发明的另一个实施方案中，该状况由中枢神经系统的损伤或中枢神经系统内的缺陷所致，并且在另一个实施方案中，该状况由创伤性病症、恶性病症、炎性病症、自身免疫性病症或退化性病症所致。

在另外一个实施方案中，该状况由震荡、挫伤引起的轴突损伤、头部创伤引起的轴突损伤、CNS内的小血管疾病引起的轴突损伤和/或在疾病和/或创伤后脊髓损伤所致，在另一个实施方案中所述状况特征在于记忆丧失，并且在此类新用途的最后一个实施方案中，该状况是脑水肿、多发性硬化症、窒息、缺氧损伤、缺血性损伤、创伤性损伤、帕金森病、阿尔茨海默病、中风、梅尼埃病或脱髓鞘病。

本发明的第四个方面涉及根据如上所述任一新用途的具有高水平抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性同源物的蛋黄的用途。

本发明的第五个方面涉及根据如上所述任一新用途的诱导抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性同源物的食物和/或饮料溶液的用途。

在一个实施方案中，将药物配制成用于静脉内灌注、肌内注射和/或皮下注射，在另一个实施方案中，将药物进行配制以致于当向所述患者施用时活性物质将进入患者脑上或脑内的脑室和/或其它腔体，并且还在另一个实施方案中，将药物进行配制以致于当向所述患者施用时活性物质将进入该患者的脑脊液。

本发明的第六个方面涉及增殖、诱导、降低和/或维持来自任一生发层的分离干细胞或干细胞后代体外发生的方法，其特征在于用抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多肽或衍生物或者其可药用的盐治疗所分离的细胞，其中式I为：

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5(式I)

其中

X1为I、SEQ ID NO：1中第1-35位氨基酸或者空缺，

X2为H、R或K

X3为S或L

X4为T或A

在上面描述方法的一个实施方案中，式I具有选自如下之一的序列：

a)SEQ ID NO：1中第35-42位氨基酸，

b)SEQ ID NO：1中第35-46位氨基酸，

c)SEQ ID NO：1中第36-51位氨基酸，

d)SEQ ID NO：1中第36-80位氨基酸，

e)SEQ ID NO：1中第1-80位氨基酸，或

f)SEQ ID NO：1中第1-163位氨基酸，

或其可药用的盐。

在该方法的另一个实施方案中，所述的分离细胞选自上皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、巨噬细胞和小胶质细胞、血管细胞、骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、血细胞、神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、祖细胞、干细胞和/或自祖细胞或干细胞衍生的细胞。

本发明的第七个方面涉及治疗和/或预防与细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征的状况的方法，其包括向需要其的患者施用有效量的抗分泌蛋白质、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多肽或衍生物或者其可药用的盐，其中式I为：

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5(式I)

其中

X1为I、SEQ ID NO：1中第1-35位氨基酸或者空缺，

X2为H、R或K

X3为S或L

X4为T或A

在治疗和/或预防方法的一个实施方案中，式I具有选自下列之一的序列：

a)SEQ ID NO：1中第35-42位氨基酸，

b)SEQ ID NO：1中第35-46位氨基酸，

c)SEQ ID NO：1中第36-51位氨基酸，

d)SEQ ID NO：1中第36-80位氨基酸，

e)SEQ ID NO：1中第1-80位氨基酸，或

f)SEQ ID NO：1中第1-163位氨基酸，

或其可药用的盐。

在本方法的另一个实施方案中，该状况特征在于表现为已分化细胞和/或组织、胚胎干细胞、成年干细胞、祖细胞和/或自干细胞或祖细胞衍生的细胞的病理性退化、再生能力的丧失和/或再生控制的丧失、和/或再生控制的丧失，并且仍然在本方法另一个实施方案中，该状况与周围神经系统、自主神经系统和/或中枢神经系统内细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

在本方法另一个实施方案中，该状况与神经干细胞或神经祖细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征，并且仍然在本方法另一个实施方案中，该状况与少突胶质、星形神经胶质、施万细胞和/或神经元细胞和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

在另外一个实施方案中，该状况与非胆碱能神经元细胞、胆碱能神经元细胞和/或神经胶质细胞、和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征，并且仍然在另一个实施方案中，该状况由中枢神经系统的损伤或中枢神经系统内的缺陷所致。

在一个实施方案中，该状况由创伤性病症、恶性病症、炎性病症、自身免疫性病症或退化性病症所致，在另一个实施方案中，该状况由震荡、挫伤引起的轴突损伤、头部创伤引起的轴突损伤、CNS内的小血管疾病引起的轴突损伤和/或在疾病和/或创伤后脊髓损伤所致，并且在仍然另一个实施方案中，所述状况特征在于记忆丧失。

在治疗和/或预防方法的一个实施方案中，该状况是脑水肿、多发性硬化症、窒息、缺氧损伤、缺血性损伤、创伤性损伤、帕金森病、阿尔茨海默病、中风、梅尼埃病或脱髓鞘病。

在上述方法的另一个实施方案中，将抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配制成用于静脉内灌注、肌内注射和/或皮下注射的药物，在另一个实施方案中，将抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配进行配制，以致于当向所述患者施用时活性物质将进入患者脑内和/或脑上的脑室和/或其它腔体，并且还在最后一个实施方案中，将抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配进行配制，以致于当向所述患者施用时活性物质将进入该患者的脑脊液。

本发明的第八个方面涉及增殖、诱导、降低和/或维持来自任一生发层的分离干细胞或干细胞后代发生的方法，其特征在于：

a)在分离所述细胞之前向所述患者施用有效量的抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物、或者包含如上所定义式I氨基酸序列的寡肽或多肽或其衍生物；

b)体外繁殖所述分离细胞；随后

c)向需要其的同一患者或另一患者移植所述已增殖的细胞。

本发明的第九个方面涉及增殖、诱导、降低和/或维持来自患者的任一生发层的分离干细胞或干细胞后代发生的方法，其特征在于：

a)从患者中分离所述细胞和/或干细胞后代；

b)向所述分离细胞体外施用有效量的抗分泌蛋白质或其具有相同功能特性的同源物、或者包含如上所定义式I氨基酸序列的寡肽或多肽或其衍生物，并繁殖所述细胞；随后

c)向需要其的同一患者或另一患者回植所述已增殖细胞。

在刚刚描述的两种方法的一个实施方案中，所述分离细胞选自成纤维细胞、巨噬细胞、血管细胞、骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、血细胞、神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、施万细胞、祖细胞、干细胞和/或自祖细胞或干细胞衍生的细胞。

在本发明的一些实施方案中，式I多肽可以额外包含保护基。N末端保护基的例子包括乙酰基。C末端保护基的例子包括酰胺。

本发明的另一个实施方案是如上所述通过以适当方式向个体提供所需要的AF以治疗状况，其中所述状况是与AF：s和相关化合物形成不足或AF受体功能缺陷有关的状况。

由使用内源性产生AF：s组成的本发明另一个实施方案对于本领域任何技术人而言是显而易见的。这可以通过采用专利描述的通过施用诱导AF的食物来诱导AF：s的方法(参考文献15)实现。

在本发明的另一个实施方案中，施用同样先前描述于专利(参考文献16)中的包含高水平AF：s的蛋黄。

发明详述

术语细胞的病理性损失和/或获得在本上下文中用于描述众多医学状况和病症的共同技术特征。状况和病症特征在于表现为已分化细胞和/或组织、胚胎干细胞、成年干细胞、祖细胞和/或自干细胞或祖细胞衍生的细胞的病理性退化、再生能力丧失和/或再生控制能力丧失。此外，该术语还包括神经组织细胞存活的改善和拯救以及次级退化效应的降低或消失。

待治疗的状况可以是由一种或多种尤其对神经系统的创伤性窒息、神经病性疼痛、缺氧损伤、缺血性损伤、中毒性损伤、感染性损伤、退化性损伤或代谢性损伤所致。这常常导致几种不同细胞类型的损伤。因此由提及的任一原因所致的脑损伤常引起神经学缺陷、认知缺陷和额外的精神病综合征。在其它一些情况下，该状况可由创伤性病症、恶性病症、炎性病症、自身免疫性病症或退化性病症引起或者由药物或X-射线治疗引起。在又一些情况下，该状况可由遗传因素引起或者其原因可能未知。在另外一些情况下，此状况可由震荡引起的轴突损伤、头部或身体创伤引起的轴突损伤、CNS内的小血管疾病引起的轴突损伤和/或疾病和/或创伤后脊髓损伤、或者在此种损伤中水肿的作用所致。

在本发明的一个实施方案中，待治疗的状况是与CNS以及PNS和/或ANS内细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征的状况。

可以通过包含SEQ ID NO：1氨基酸序列片段的多肽影响的细胞是例如干细胞、祖细胞和/或甚至是获得改善存活和重新获得暂失功能的已分化细胞。此类细胞可属于三种生发层中的任一生发层。一旦受到刺激，所述细胞将分化、获得功能并且形成突触以替代例如病理性CNS、PNS和/或ANS状况中的机能异常、垂死或已丧失的细胞或细胞群体，其中所述状况特征在于细胞例如神经胶质、和/或神经元细胞或细胞群体如神经元细胞、和/或神经胶质细胞和/或细胞群体以及血管细胞和炎症细胞的异常丧失。

本发明尤其涉及对与干细胞、优选神经干细胞损失有关或以其为特征的状况的治疗，或者对特征在于祖细胞损失和/或获得或与其相关状况的治疗。此外本发明涉及移植至神经组织的干细胞或祖细胞存活的改善。

本发明还尤其涉及对与已分化细胞损失和/或获得有关状况的治疗。在一个优选的实施方案中，已分化细胞是骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、少突胶质、星形神经胶质、神经元细胞、上皮细胞内皮、皮肤、血液、肝、肾、骨、结缔组织、肺组织、外分泌腺组织和/或内分泌腺组织或者肌肉细胞。优选地，已分化细胞是神经元细胞、神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞、施万细胞或其它神经胶质细胞。

本发明还提供了包含式I氨基酸序列的多肽在制造药物中的用途，其中所述药物用于拯救和正常化神经组织内的细胞以及调节CNS、PNS和/或ANS中的干细胞/祖细胞的发育和/或细胞间突触。

本发明的又一个实施方案提供了调节CNS中的干细胞发育和/或细胞间突触的方法，其包括将干细胞间接体内或者体外与某一量的包含式I氨基酸序列的多肽接触。

本发明的用途和方法优选地适用于治疗影响祖细胞以及神经细胞间和/或衍生自神经元干细胞的细胞间突触的病理性丧失或获得的异常和/或医学状况。因此可将所述方法用于预防、治疗或改善CNS、PNS和/或ANS的损伤、疾病或缺乏。根据本发明所用的药物活性物质尤其适用于治疗影响施万细胞、卫星细胞、少突胶质、星形神经胶质和/或神经元细胞的状况。此类状况可以归咎于例如CNS的损伤或缺乏、神经元细胞丧失或记忆丧失。此类状况可以由例如许多不同的因素或疾病(例如创伤性病症、恶性病症、炎性病症、水肿性病症、自身免疫性病症或退化性病症如多发性硬化症、缺氧损伤、局部缺血性损伤、创伤性损伤、阿尔茨海默病和帕金森病、梅尼埃病和脱髓鞘病)所致。用于本发明该优选实施方案的药物活性物质的效应是因为：该类药物活性物质具有改善细胞存活、诱导细胞形成、诱导突触产生或分解在所述细胞中积累的神经元斑(neuronal plaque)和/或β-APP、β淀粉样蛋白和其它化合物的能力。

然而，并且如上所述，本发明并不限制于治疗神经元疾病和状况的用途和方法，并且所述用途和方法还可用于治疗多种特征为细胞病理性丧失或获得的多种哺乳动物状况，例如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症、中风、窒息性或缺氧性心衰、心肌梗塞、糖尿病、关节病(artrosis)或关节炎、皮肤病和烧伤、慢性伤口、肝病或肝衰竭、肌肉疾病或损伤、癌症(受癌症影响的组织)、胰机能障碍和炎症性肠病。

本发明的药物组合物或药物可以额外地包含一种或多种本领域已知的那些可药用载体、接受体或稀释剂。

组合物或药物可以是例如流体、半流体、半固体或固体组合物形态，例如但不限于已溶解的输液液体如无菌盐水、多种盐溶液、葡萄糖溶液、磷酸盐缓冲盐水、血液、血浆或水；粉末、微胶囊、微球、纳米粒子、喷雾剂、气溶胶、吸入器、溶液、分散剂、混悬剂、乳剂或其混合物。

所述组合物可根据常规制药规范进行配制，要考虑到寡肽或多肽或者蛋白质的稳定性和反应性。

显而易见所述组合物可包括诱导AF的食物或含高水平AF：s的蛋黄。诱导AF的食物在适于此目的的组合物中优选地口服或经口施用。具有高水平AF：s的蛋黄优选地口服或经口施用。AF和其衍生物也可通过注射和气溶胶辅助或通过表面沉积施用。

所述组合物或药物可根据常规制药规范配制，常规制药规范参见例如“Remington：The science and practice of pharmacy(第20版)”(MackPublishing，Easton PA，2000年，ISBN0-91273404-3)和“Encyclopedia ofPharmaceutical Technology”(Swarbrick，J.和J.C.Boylan编，MarcelDekker，Inc.，New York，1988，ISBN0-8247-2800-9)。

对本发明所用的组合物或药物中可药用的赋形剂及其优化浓度的选择可通过实验容易地确定。一种可药用赋形剂是否适用于一种药物组合物通常还取决于采用何种剂型。然而药物制剂领域技术人员可在例如“Remington：The science and practice of pharmacy(第20版)”(MackPublishing，Easton PA，2000年，ISBN0-91273404-3)中找到指导。

可药用赋形剂是对所述组合物将要施用的个体基本无害的物质。该赋形剂通常满足国家药品机构发布的要求。官方药典如美国药典和欧洲药典制定了众知的可药用赋形剂的标准。

以下是根据本发明所用的相关药物组合物的综述。该综述基于施用的特定途径。然而应当意识到在可药用赋形剂可按不同剂型或不同组合物应用的那些情况下，特定可药用赋形剂的应用不受限于该赋形剂的特定剂型或特定功能。

经肠胃外施用的组合物：

为了全身应用，本发明的组合物可包含常规无毒的可药用的载体和赋形剂，包括微球和脂质体。

根据本发明使用的组合物可包括所有类型的固体组合物、半固体组合物和流体组合物。特别相关的组合物是例如溶液、悬浮液和乳剂。

可药用赋形剂可包括溶剂、缓冲剂、防腐剂、螯合剂、抗氧剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂和/或稀释剂。不同试剂的实例如下所列。

多种试剂的实例：

溶剂的实例包括但不限于水、乙醇、血液、血浆、脊髓液、腹水和淋巴液。

缓冲剂的实例包括但不限于柠檬酸、乙酸、酒石酸、乳酸、氢磷酸(hydrogenphosphoric acid)、重碳酸盐、磷酸盐、二乙胺等等。

螯合剂的实例包括但不限于EDTA钠和柠檬酸。

抗氧剂的实例包括但不限于丁基羟基茴香醚(BHA)、抗坏血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物、半胱氨酸以及它们的混合物。

稀释剂和崩解剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉糖类复合物、磷酸钙、碳酸钙、硫酸钙、甘露醇、淀粉、微晶纤维素。

结合剂的实例包括但不限于蔗糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、淀粉、纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇。

用于本发明的药物组合物或物质优选地通过向所述患者周围静脉内灌注或通过肌内或皮下注射或者通过口腔、肺、鼻或口服途径施用。而且，还有可能通过向所述患者的脑室中手术方式插入分流器(shunt)施用所述药物组合物或药物活性物质。

在本发明一个实施方案中，将所述药物组合物进行配制以致于所述活性物质将进入患者脑的脑室内。

在本发明一个实施方案中，将所述药物组合物进行配制以致于当向所述患者施用时活性物质将进入患者脑的脑室或所述患者的脑脊液内。这可通过例如机械装置、媒介物、脂质体、脂微球或者生物的或合成的载体完成。

优选地，所施用的剂量范围是每100克体重大约0.001-100毫克的包含式I氨基酸序列的多肽，其包含0.001-100毫克/1克体重、0.001-100毫克/10克体重和0.001-100毫克/50克体重的范围。所施用的剂量范围优选地是每1公斤体重大约0.001-100毫克的包含式I氨基酸序列的多肽。

当使用诱导AF：s的食物时，所施用的剂量对应于每公斤体重0.2-5克的麦芽谷物(malted cereal)。当施用具有高水平AF：s(即至少1000FIL单位/毫升)的蛋黄时，使用每公斤体重0.05-0.5克的剂量。应当控制个体的反应。

本发明可用于治疗人或非人哺乳动物。

术语“治疗”如此处所用既涉及旨在治愈或减轻疾病或医学状况(特征在于细胞异常损失和/或获得)的治疗性治疗，也涉及旨在阻止疾病或医学状况(特征在于细胞和细胞组分如突触的病理性损失或获得)发展的预防性治疗。因此本发明的范围包括预防性治疗和治疗性治疗。术语“治疗”还指在CNS、PNS或ANS中的神经元、少突胶质或神经胶质细胞损失后通过诱导已分化细胞(例如神经元和/或神经胶质)的发生影响源自干细胞或祖细胞的细胞发生，或者指阻止CNS、PNS或ANS或体内其它结构中的年龄相关的正常退化。治疗可以急性或慢性方式进行。

AF扩展(AF-expanded)干细胞和/或祖细胞可以增殖，并且可在移植前已预分化或者允许通过所移植细胞和宿主间的相互作用而分化。AF扩展干细胞和/或祖细胞可单次施用和/或移植，或在较长时间内重复递送。通过血流将干细胞和/或祖细胞施用进入靶器官是特别有用的。

根据本发明的另一个优选的实施方案，可以使用包含式I氨基酸序列的多肽以便使组织培养或细胞培养中的祖细胞或干细胞或其它细胞增殖。此后，此类细胞可以用于向患有神经元细胞损失或另一类型内源性细胞缺乏所致状况的患者进行细胞移植。用于开始培养的细胞可来自该患者或来自另一个人类供体或动物供体，并且可用于治疗广泛多种的疾病和病症，所述疾病和病症包括心脏病例如梗死、糖尿病或者多种多样的神经疾病和病症如上面提到的那些。

因此本发明还提供体外增殖、诱导、降低和/或维持所分离干细胞和/或干细胞后代发生的方法，其特征在于以包含式I氨基酸序列的多肽处理所分离细胞。优选地，所分离细胞选自上皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、巨噬细胞和小胶质细胞、软骨细胞、心肌细胞、血细胞、神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、祖细胞、干细胞和/或自此类所述细胞衍生的细胞。通常，在适当条件下将所分离细胞处理一段时间，这足以完成所预期的增殖、诱导、降低和/或维持。

当计划从患者中移出细胞用于体外增殖时，首先增加患者中的祖细胞数目将是最有利的。这将更便于随后从患者中分离所述细胞。通过使用本发明的方法或药物组合物使祖细胞的数目增加。

包含式I氨基酸序列的多肽可单独使用或与其它药物、白介素或生长因子如表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)或胰岛素样生长因子(IGF)联合使用，以有计划地在例如CNS、PNS或ANS中诱导细胞发生或增殖。包含式I氨基酸序列的多肽可单独使用或同时或顺序地与其它药物、肽、生长因子、类固醇、脂类、糖基化蛋白质或肽联合使用，以便促进体内或体外细胞发生或特定类型细胞的产生。所述多肽还可用于诱导不成熟的细胞或多能细胞以激活上述细胞中的特异发育程序和特定基因。

如以上提及的术语“细胞发生”意指从原位的或处于分离状态的成年CNS或PNS或身体其它器官内的多能细胞、祖细胞或干细胞产生新细胞，例如神经元、少突胶质细胞、施万细胞、卫星细胞和星形胶质细胞。

此外，本发明还涉及物质的治疗性用途，其中所述物质降低患者中的活性AF的量或天然存在的AF类似物的量，并且因此降低患者中的新细胞发生例如少突胶质细胞的发生，其中所述患者患有这样的轴突损伤或脊髓损伤，例如由震荡引起的轴突损伤、头部创伤引起的轴突损伤、CNS内小血管疾病引起的轴突损伤和/或疾病和/或创伤后对脊髓的损伤。此类物质的实例是药物、抗体、化合物、肽和/或内源性AF释放的抑制物。

因为AF支持新细胞的发生并且尤其支持与学习和记忆密切相关的海马内的神经元的发生，所以可使用包含式I氨基酸序列的多肽以便通过所述细胞的发生促进学习和记忆。

尽管本发明主要涉及通过影响神经干细胞或祖细胞用于治疗CNS或PNS内的以细胞病理性损失或获得为特征的异常状况的方法，然而本发明的用途和方法可同样用于治疗和/或预防身体其它器官内的医学状况，只要所述医学状况的特征在于细胞的病理性损失和/或获得即可。

尽管参考文献在此处主要涉及包含式I氨基酸序列的多肽用途，然而在做必要修正的情况下本发明还涉及基本上由式I氨基酸序列组成的多肽和涉及由式I氨基酸序列组成的多肽。

包含式I氨基酸序列的多肽可通过包括重组体和合成方法在内的标准方法产生。

当阅读以下实施例时将更全面地理解本发明，这些实施例仅仅旨在说明，但不限制本发明的范围。

附图描述

图1.来自受假性治疗的对照脑的齿状回(A)和通过腹内注射溶于缓冲盐水的红藻氨酸(10mg/ml)诱导癫痫发作后的齿状回(B-7天；C-28天)的共聚焦免疫荧光显微照片，显示正在增殖的细胞团的分布。新形成的细胞被染成暗色。癫痫发作后第7天(B)和第28天(C)SGZ中的核苷酸还原酶(RNR)阳性细胞(即有丝分裂细胞)数目显著增加。B中的插图来自经相同方法染色的相同脑的另一个切片，显示出两个阳性即有丝分裂的细胞团。GCL=颗粒细胞层，HiL=门。标尺=200μm(A、B、C)，20μm(B中的插图)。

图2.来自颅骨外侧放置冰冻探针40秒之后2天的大鼠脑照片。上排中的两个脑所来自的大鼠在脑损伤之前和之后自由获得标准颗粒饲料和自来水。可以注意到出血和变色的脑组织。下排中的两个脑所来自的大鼠在外侧颅骨暴露于冰冻探针之前的12天不受限地获得SPC食物和饮用溶液并且此后再获得2天的SPC食物和饮用溶液直到被处死前。可以注意到缺乏肉眼可见的出血和较小范围的脑损伤。以染色切片的光学显微镜术进一步证实，以SPC为食的大鼠中的高水平AF减少了脑损伤。

图3.来自颅骨外侧放置冰冻探针40秒之后6天的大鼠的脑照片。上排中的三个脑来自在脑损伤之前和之后自由获得标准颗粒饲料和自来水的成年大鼠。可以注意到轻微出血和脑组织的浅表缺损。下排中的三个脑所来自的大鼠在外侧颅骨接触冰冻探针之前的5天不受限地获得SPC食物和饮用溶液并且此后再获得6天的SPC食物和饮用溶液直到被处死前。可以注意到与上面一组中的大鼠脑相比脑损伤范围较小。以染色切片的光学显微镜术进一步证实，冰冻损伤前5天以SPC为食的大鼠中的AF水平减少了脑损伤。

实施例

实施例1：诱导AF形成增加则增进神经发生

开展了以下实验以评估AF的施用是否影响正常成年哺乳动物大鼠脑内的神经发生。

雄性和雌性大鼠(实验开始时体重为180-350克)购自B&K AB，Stockholm，瑞典。将动物在许可类型和尺寸的笼内饲养，并且从6点至18点进行光照。地区动物试验伦理委员会准许本实验。采取了措施以减少不适和痛苦。

测试大鼠在处死前以SPC颗粒食物为食并且饮用SPC提取物至少10天。未对动物进行任何外科手术或处理。通过腹内注射过量的戊巴比妥钠盐水或通过吸入异氟烷麻醉大鼠。打开胸腔，左心室插管并且灌注已添加肝素的调节平衡缓冲盐溶液以将血液从血管系统中冲走。此后灌注缓冲甲醛盐水溶液以固定组织。最后分割脑、脊髓、视网膜和神经组织的另外部分，并且在冷的缓冲福尔马林中进一步固定过夜。次日将前脑和海马分割、冲洗并且在冷冻切片机中切片之前浸于已添加20％蔗糖的缓冲盐水中。然后切成5-25μm厚的薄切片用于免疫组化法显示对任何DNA合成至关重要的核苷酸还原酶(RNR)R1亚基的分布和覆盖程度(图1a)，所述核苷酸还原酶R1亚基的存在显示细胞正通过有丝分裂形成(Zhu，H.等，参考文献14)。作为平行对照将来自前脑和海马的另外组织标本用石蜡包埋并进行如上所述的处理。

对进行RNR免疫组织化学处理的切片的光学显微术分析显示：与以标准的啮齿动物颗粒饲料为食的动物比较，对正常成年大鼠进行至少10天SPC食物的治疗增加了海马SGZ内正在增殖的干细胞和祖细胞的出现。正在分裂细胞频率的升高还可见于前脑SVZ中。通过免疫组织化学法借助于抗双皮层蛋白(由迁移的未成熟神经细胞表达)、NeuN(由成熟神经细胞表达)和GFAP(由星形细胞表达)的抗体对新形成的细胞进行鉴定。

可以得出结论：向成年哺乳动物提供至少10天的SPC食物似乎明显地促进了成年脑内干细胞和祖细胞的增殖。

实施例2：通过应用冰冻探针的脑损伤模型

开展以下实验以评估通过颅骨外应用极冷探针对啮齿动物脑所致的损伤。

通过吸入异氟烷麻醉大鼠并且剃掉头部毛发。皮肤在颅骨上的正中矢状面处切开。在左侧前囟点和后囟点之间暴露颅盖。将骨外膜从骨上分离，然后冲洗骨。此后极其仔细地除去来自颅盖的血液和任何液体，否则可能有损后续操作。通过按标准方式浸于液氮中的具有直径3mm且长4mm末端的圆柱形铜制探针冷却。已冷却的探针随后在后囟点和前囟点之间颅盖处(矢状正中线侧面4mm)应用40秒。然后移去探针并缝合皮肤伤口。冰冻探针的应用暂时引起暴露区下方脑组织冰冻。应当强调颅骨是未打开的并且没有引起骨折或重大损伤的其它迹象。所述动物在从麻醉复苏后运动未见任何明显问题、行为正常并且食物的消化和液体的饮用与那些未受处理动物十分类似。

冻伤后两天，左侧大脑皮层在紧接遭受冷却的颅骨部分下方的一个直径3-5mm的区域内表现变色和出血(图2)。浅凹陷表明存在神经组织损伤。在所述半影内即在严重损伤的神经组织中心带的边缘分布的脑物质中存在水肿。更详细的检查可显示所述水肿向白质延伸，这在所损伤的同一侧最为明显。对染色的薄切片的光学显微镜检查显示了在损伤的脑皮层中央的坏死组织，伴有似乎加重半影继发性组织损伤和细胞损伤的水肿。原发性损伤是在使用冰冻探针后的最初数秒期间内发生的损伤。继发性脑损伤包括1分钟或更长时间后发生的变化，对确切时间的限定取决于损伤类型。继发性变化可随时间变得更加严重，特别是在存在趋向有害的脑水肿时。炎症反应在数分钟内开始出现，在半影处最为明显并且其特征为大量活化星形细胞和小胶质细胞的出现。血管也受到损伤但可立即得以重建。然而直至数天或甚至数周后损伤组织中的中央坏死部分血管重新形成。

任何诱导炎症的脑损伤导致了SGZ和SVZ内(如果所述区域未受严重受损)干细胞和祖细胞增殖的暂时升高。而且，新的神经干细胞和祖细胞必须受到刺激以便存活、迁移和分化；否则细胞增殖可引起神经元细胞的净损失。

伴随脑损伤的结果是β淀粉样前体蛋白(β-APP)和β淀粉样蛋白(Aβ)的积累和在神经细胞胞体内和突起内的积累。β-APP和Aβ两者对神经细胞均有毒并且在神经创伤后数小时内开始积累。然而，若这两类蛋白溶解并因此消失，则受影响神经细胞在结构和功能上存活、恢复以及重新整合的可能性认为是高度有利的。此外，细胞骨架组分如神经丝和微管在神经创伤处受损并且积累，形成聚集物和缠结物使原发损伤变得更重并且甚至有害。轴突和树突因细胞骨架组分、细胞器和淀粉样蛋白的局部积累而呈现不规则串珠状、肿胀和扭曲。由于创伤后神经细胞的结构破坏例如冰冻后神经细胞的结构破坏，细胞装置的正常极精确和规则组织部分丧失并且正常细胞组分如遍在蛋白积累或出现浓度异常。除了那些在SGZ和SVZ内的神经细胞以外，神经细通常不再分裂，但其在神经创伤后可开始形成异常高量的在正常情况下只普遍存在于正在分裂细胞中的蛋白质和其它化合物，如细胞周期蛋白和相关组分。

神经胶质细胞、星形细胞和小胶质细胞增殖并变肥大。在受损组织内进一步发生残留血管的重建和血管发生。

任何神经创伤后出现的水肿加重了对组织的损伤(继发性损伤)。

冻伤后第六日因脑组织的损失在受损皮质的中央出现浅腔(图2)。可观察到出血的微量残留物，但是大部分的已渗出血液已去除。损伤中央处的坏死已经部分地清除了碎片并且因此看起来是界限相当清楚的凹陷。包围中央坏死的半影富含小胶质细胞和肥大的正在增殖的星形细胞。在此半影中可见受损的和垂死的神经细胞以及存活的神经细胞。大部分神经细胞显示有神经丝、β-APP和Aβ的积累。可以得出结论：经完整颅骨的脑冰冻可以以重复性方式导致脑损伤。

实施例3：如在第二天之后检查，AF：s拯救了冻伤的脑组织

开展如下实验以评估体内AF增加是否影响由啮齿动物脑颅骨外侧应用冰冻探针所致脑损伤的范围和严重程度，是否表现为神经保护作用。

雄性和雌性大鼠(实验开始时体重为180-350克)在脑损伤前提供SPC食物和饮用液体至少10天。在损伤当日，如实验2将大鼠麻醉并且准备。冰冻探针使用一次持续40秒。大鼠在缝合颅骨处的皮肤伤口并从麻醉中复苏后允许自由运动并且获得SPC食物和饮用液体。

冻伤两天后，如所述将大鼠处死并通过灌注法固定。当打开颅骨时，很明显与进食商业标准颗粒饲料和自来水的动物的脑损伤相比，存在较小范围的脑损伤(图2)。只存在少量可识别的出血。而且受损区域中央部分的浅凹陷不明显。与摄食标准颗粒食物和自来水的动物内观察到的水肿相比，所述半影看起来受水肿影响较小。对受损脑组织的染色薄切片进行光学显微镜检查显示出现较小的范围的受损细胞并且血液成分仅少量渗出。不规则分布的肿胀和串珠稀疏。例如本应明显的淀粉样蛋白和神经丝的积累较不明显。与供给标准食物和自来水的对照动物相比，神经胶质增生较少。然而两日后由SPC食物和饮用液体引起神经保护的程度存在变异。

可以得出结论：如在局部损伤两天后检查的脑组织损伤的降低所显示，实验性诱导体内AF形成增加导致神经保护。

实施例4：如第六天之后检查，AF：s拯救了冻伤的脑组织

冻伤六天后，如所述将大鼠处死并通过灌注法固定。当打开颅骨时，很明显与进食商业标准颗粒饲料和自来水的动物的脑损伤相比，存在较小范围的脑损伤(图3)。没有可识别的出血。而且受损区域中央部分的浅凹陷不明显并且在某些情况下难以确切鉴定。与摄食标准颗粒食物和自来水的动物中所观察到的结果相比，所述半影看起来受水肿影响较小。对受损脑组织的染色薄切片的光学显微镜检查显示较小范围出现受损伤细胞并且几乎没有血液的任何残留渗出。轴突和树突不规则分布的肿胀和串珠稀疏。在所述半影区域内存在明显的星形胶质细胞增生，但是不如来自摄食标准颗粒饲料和自来水的大鼠脑内那样广泛和普遍。然而，通过SPC食物和饮用液体引起的神经保护的程度存在变异。

当检查海马时，发现SGZ内神经干细胞和祖细胞的增殖存在明显的增加。对于SVZ同样如此，但较不明显。

可以得出结论：如第六天所检查到的局部损伤后脑组织损伤减少、胶质细胞增生较不明显以及来自SGZ中(最明显的是SGZ中的)干细胞和祖细胞的新神经细胞的形成增加所示，实验性诱导体内AF形成增加导致了神经保护。

实施例5：如第六天之后检查，每日静脉内注射AF衍生物(16个氨基酸的肽)拯救了冻伤的脑组织

雄性和雌性大鼠(实验开始时体重为180-350克)在脑损伤之前和之后供给标准颗粒食物和自来水。在损伤当日，如实验2所述将大鼠麻醉并且准备。冰冻探针使用一次持续40秒。大鼠在缝合颅骨处的皮肤伤口并从麻醉中复苏后允许自由运动。

从手术当日开始，向所有大鼠每日两次静脉内注射每公斤体重1-10μg的合成肽，持续5天，其中所述合成肽是包含第36-51位氨基酸(即由16个氨基酸组成)的AF的片段。将所述合成肽溶于盐水并且每次注射前新鲜制备。在处死当日即第六日，不再静脉内注射此肽。在任何一个动物中未观察到在运动活性、探索行为、摄食或饮水习性方面的副作用。

冻伤六天后，如所述将大鼠处死并通过灌注法固定。当打开颅骨时，很明显与进食商业的标准颗粒饲料和自来水的动物的脑损伤相比，脑损伤范围较小。脑内或脑表面无出血。此外，受损区域中央部分的浅凹陷不明显并且在某些情况下难以确切鉴定。所述半影看起来受水肿的影响较小。对受损脑组织染色薄切片的光学显微镜检查显示：与如实验2中处理和研究的大鼠脑相比，受损细胞出现的范围较小并且几乎没有血液的任何残留渗出。轴突和树突不规则分布的肿胀和串珠稀疏。在半影区域内存在明显的星形胶质细胞增生，但是不如来自摄食标准颗粒饲料和自来水的相应大鼠脑内那样广泛和普遍。然而由注射肽引起的神经保护程度存在变异。

当检查海马时，存在SGZ内的神经干细胞和祖细胞增殖的增加。对于SVZ同样如此。

可以得出结论：如第六天所检查到的局部损伤后脑组织损伤减少、胶质细胞增生较不明显以及来自SGZ中(最明显的是SGZ中的)干细胞和祖细胞的新神经细胞的形成增加所示，在冻伤后的前五天每日静脉内注射AF片段导致神经保护。

实施例6：如第六天之后检查，AF拯救了由兴奋性神经毒性药物红藻氨酸所损伤的脑组织

开展如下实验以评估体内AF增加是否影响由腹内注射兴奋性神经毒性药物红藻氨酸所致的啮齿动物脑损伤的范围和严重程度，是否表现为神经保护作用。

雄性和雌性大鼠(实验开始时体重为180-350克)在脑损伤至少前10天供给SPC食物和饮用液体。为了比较，相同数目的大鼠摄取标准颗粒食物和自来水。

在损伤当日，将溶于缓冲盐水的红藻氨酸(Sigma Chemical Co，St.Louis，Mo，USA)以每公斤体重10mg的量腹内注射一次。此后允许大鼠自由运动和获得SPC食物和饮用液体。在45-60分钟后，大鼠开始出现定型化行为，重复一种或两种运动。此后大鼠发生单侧和普遍癫痫发作。密切监测大鼠并且记录影响程度。红藻氨酸处理3小时后注射地西泮终止癫痫发作。本研究仅包括表现标准类型和程度的癫痫发作的大鼠。

在癫痫发作后第六日，如所述处死大鼠并通过灌注法固定。当打开颅骨时，未显示脑损伤迹象。在摄取SPC食物和摄取标准颗粒饲料和自来水的大鼠之间没有差异。在两种情况下均未见肉眼可见的水肿。

对脑海马染色薄切片的光学显微镜检查显示了两组动物间损伤程度的差异。与摄取标准颗粒饲料和自来水动物的更为严重的损伤相比，以SPC食物治疗的动物表现为CA1和CA3/4区域内神经细胞退化范围较小。对于苔藓纤维生长可观察到同样的差异。可以识别出轴突和树突不规则分布的肿胀和串珠。与摄取标准颗粒饲料的那些大鼠相比，摄取SPC食物的大鼠的门区域中和腔隙层及分子层中以及门中存在较不明显的星形神经胶质增生。然而由SPC食物和饮用液体引起的神经保护程度存在相当大的变异。

当检查海马时，很明显SGZ内神经干细胞和祖细胞增殖增加(图1)。对于SVZ同样如此，尽管较不明显。在饮食SPC食物和饮用溶液后，SGZ内新形成的RNR-阳性细胞的存活率增加。

可以得出结论：如癫痫发作后第六日海马内脑组织损伤程度的降低、和伴随着较不明显的胶质细胞增生以及来自SGZ中(最明显的是SGZ中的)干细胞和祖细胞的新神经细胞的形成增加所示，实验性诱导体内AF形成增加导致神经保护。

实施例7：在弥散性脑损伤后，AF和AF片段影响脑组织的拯救，最明显是对弥散性轴突损伤的影响

开展如下实验以评估体内AF和AF片段出现的增加是否影响由旋转加速度创伤所致的兔脑弥散性脑损伤的范围和严重程度。

最常见的脑损伤是称作脑震荡的脑损伤。脑损伤每年影响8-9万瑞典人，并且其中大约四分之一的人不得不住院至少一天以便临床检查和观察。在美国，大约200万个体患有脑震荡并且其中大约50万人住院一天或更长时间。大多数患者要接受X射线和/或MRI检查。

对此类个体而言，脑震荡后面临增加患有长期神经精神学后遗症和疼痛的危险增加。而且，以后发展成为痴呆(最明显是阿尔茨海默病)的危险。

将使用幼年和成年兔。将已麻醉兔的颅骨从软组织中分离。将由塑料制成并以玻璃纤维强化的一个头盔与所述颅骨粘合。所述头盔与向兔头的传送旋转加速度创伤(前面-后面或相反)的接触设备(exposure equipment)连接。通过施用AF或与所选择AF序列对应的合成肽治疗该兔。另外的兔将以SPC食物和饮用溶液为食或备选地以基于蛋黄的组合物为食。接触参数将由计算机记录系统密切监测。

在旋转加速度创伤后的预定时间段内，将脑从处死的兔中取出并仔细检查所推测的通过AF及其衍生物以及蛋黄的神经保护作用。所计划实验的优点在于脑损伤是定型的并且对应于人类最常见脑损伤即脑振荡。脑水肿的形成将由脑内移植的与计算机连接的纤维光学传感器密切监测。因此可以密切追踪和记录AF和其衍生物对水肿形成和组织病理性异常的影响。也将开展长期研究。

可以得出结论：使用AF或其衍生物治疗的弥散性脑损伤的实验性诱导对评估刺激情况下神经保护的长期作用至关重要，其中所述刺激情况正是临床医学实践中人类脑损伤的主要原因。

参考文献：

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15.Lange，S等，PCT/SE97/01918

16.Lange，S等，PCT/SE99/02340

Claims

1.a)抗分泌因子（AF）蛋白质，其基本上由SEQ ID NO:2的第36-51位氨基酸组成，或

b)其可药用盐，

在制造用于神经保护的药物中的用途。

2.a)抗分泌因子（AF）蛋白质，其基本上由SEQ ID NO:2的第36-51位氨基酸组成，或

b)其可药用盐，

在制造用于神经保护的药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防选自中枢神经系统的损伤、中枢神经系统内的缺陷、创伤性病症、恶性病症、自身免疫性病症或退化性病症、由震荡、挫伤引起的轴突损伤、头部创伤引起的轴突损伤、CNS内的小血管疾病引起的轴突损伤、在疾病后脊髓损伤、多发性硬化症、窒息、缺氧损伤、缺血性损伤、创伤性损伤、帕金森病、阿尔茨海默病、中风和脱髓鞘病的状况。

3.由麦芽谷物制造的诱导抗分泌蛋白质的食物在制造用于神经保护的食物或医用食物中的用途。

4.具有至少1000FIL单位/ml抗分泌蛋白质的蛋黄在制造用于神经保护的食物或医用食物中的用途。

5.具有至少1000FIL单位/ml抗分泌蛋白质的蛋黄在制造用于神经保护的药物中的用途。

6.权利要求2－5任一项的用途，其中所述状况的特征在于表现为已分化细胞和/或组织、胚胎干细胞、成年干细胞、祖细胞和/或自干细胞或祖细胞衍生的细胞的病理性退化、再生能力的损失和/或再生控制的损失和/或再生控制的损失，用于治疗和/或预防与周围神经系统、自主神经系统和/或中枢神经系统内细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征的状况。

7.权利要求2－6任一项的用途，其中所述状况与神经干细胞或神经祖细胞的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

8.权利要求2－7任一项的用途，其中所述状况与少突胶质、星形神经胶质、施万细胞和/或神经元细胞和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

9.权利要求8的用途，其中所述状况与非胆碱能神经元细胞、胆碱能神经元细胞和/或神经胶质细胞和/或细胞群体的病理性损失和/或获得有关或以其为特征。

10.权利要求2－9任一项的用途，其中所述状况由中枢神经系统的损伤或中枢神经系统内的缺陷所致。

11.权利要求2－10任一项的用途，其中所述状况由创伤性病症、自身免疫性病症或退化性病症所致。

12.权利要求2－11任一项的用途，其中所述状况特征在于记忆丧失。

13.权利要求1－3和5－12任一项的用途，其中将所述药物配制成用于静脉内灌注、肌内注射和/或皮下注射。

14.权利要求1－3和5－12任一项的用途，其中将所述药物如此配制以致于当向所述患者施用时此活性物质将进入患者脑上或脑内的脑室和/或其它腔体。

15.权利要求1－3和5－12任一项的用途，其中将所述药物如此配制以致于当向所述患者施用时此活性物质将进入患者脑脊液。