CN103025731B - 作为alk5和/或alk4抑制剂的2-吡啶基取代的咪唑 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及2-吡啶基取代的咪唑，它们是转化生长因子-β(TGF-β)I型受体(ALK5)和/或活化素I型受体(ALK4)的抑制剂，还涉及它们的制备方法和它们在医药中的用途，具体用于治疗和预防由这些受体介导的疾病状态。

Description

作为ALK5和/或ALK4抑制剂的2-吡啶基取代的咪唑
技术领域
本发明涉及2-吡啶基取代的咪唑，它们是转化生长因子-β(TGF-β)I型受体(ALK5)和/或活化素（activin）I型受体(ALK4)的抑制剂，本发明还涉及它们的制备方法和它们在医药中的用途，具体用于治疗和预防由这些受体介导的疾病状态。
背景技术
TGF-β表示蛋白质家族TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，它们是细胞增殖与分化、伤口愈合、细胞外基质产生和免疫抑制的多效调控剂。这种超家族的其他成员包括活化素、抑制素、骨形态发生蛋白、生长与分化因子和米勒（Mullerian）抑制物。
TGF-β1通过两种高保守性单跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶转导信号，即I型(ALK5)和II型TGF-β受体。一旦配体诱发低聚化，II型受体过度磷酸化ALK5GS区中的丝氨酸/苏氨酸残基，通过创建Smad蛋白的结合位点引起ALK5的活化。活化的ALK5继而磷酸化C-末端SSXS-基序处的Smad2和Smad3蛋白，从而导致它们从受体中离解，并且与Smad4生成异质复合体(heteromericcomplex)。Smad复合体易位于核，与特异性DNA-结合性辅因子和辅调控剂装配，最终活化细胞外基质组分和基质-降解性蛋白酶抑制剂的转录。
活化素转导信号的方式与TGF-β相似。活化素与丝氨酸/苏氨酸激酶、活化素II型受体(ActRIIB)结合，活化的II型受体过度磷酸化ALK4GS区中的丝氨酸/苏氨酸残基。活化的ALK4继而磷酸化Smad2和Smad3。随后与Smad4生成异-Smad复合体，导致活化素-诱导的基因转录调节。
大量实验性动物研究证明了TGF-β的肾小球表达与纤维化之间的关联，包括增殖性肾小球性肾炎的Thy-1大鼠模型、兔抗-GBM肾小球性肾炎和局灶性节段性肾小球硬化的5/6肾切除大鼠模型，最近已有评述(例如,Bitzer,M.等人,KidneyBloodPress.Res.21:1-12(1998))。TGF-β的中和抗体改进Thy-1肾炎模型中的肾小球组织学(例如,Border,W.A.等人,Nature346:371-374(1990))。
高血糖条件增加鼠近侧小管细胞和人肾小球系膜细胞中的TGF-βmRNA和蛋白质合成(例如,Wahab,N.A.等人,Biochem.J.316:985-992(1996);Rocco,M.V.等人,KidneyInt.41:107-114(1992))。伴有早期肾疾病的糖尿病患者显示TGF-βmRNA和蛋白质在肾小球内的蓄积增加(例如,Yoshioka,K.等人,Lab.Invest.68:154-163(1993))。在患有慢性肾间质性纤维化的肾脏中，标志是小管基底膜增厚和间质腔扩大，伴有以胶原I、III、V、VII和纤连蛋白增加为特征的间质性纤维化(例如,Eddy,A.A.,J.Am.Soc.Nephrol.7:2495-2508(1996))。
TGF-β基因表达和蛋白质产生在多种肺纤维化动物模型中都增加了，包括博莱霉素、二氧化硅、石棉和辐射(例如,Phan,S.H.andKunkel,S.L.,Exp.LungRes.18:29-43(1992);Williams,A.O.等人,Am.J.Pathol.142:1831-1840(1993);Rube,C.E.等人,Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.47:1033-1042(2000))。在人肺纤维化疾病中观察到来自自发性肺纤维化的相邻组织切片中TGF-β1蛋白和胶原基因表达有一致性增加(例如,Broekelmann,T.J.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:6642-6646(1991))。已有文献记载肉样瘤病、尘肺病、石棉沉着病和辐射-诱发的纤维化患者中的TGF-β产生增加(例如,Khalil,N.等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.14:131-138(1996);Jagirdar,J.等人,Environ.HealthPerspect.105:1197-1203(1997))。抗-TGF-β抗体和TGF-β-可溶性受体能够部分地抑制博莱霉素-诱发的肺纤维化啮齿动物模型中的纤维化(例如,Giri,S.N.等人,Thorax48:959-966(1993);Wang,Q.等人,Thorax54:805-812(1999))。烟草烟雾已经成为能够导致小气道疾病继之以慢性阻塞性肺疾病(COPD)的最重要因素之一(例如,Wright,J.M.等人,Am.Rev.Respir.Dis.146:240-262(1992))。COPD是一种缓慢进展的和不可逆的疾患，以气道阻塞的功能性异常为特征。TGF-β已被假设参与在慢性气道炎性疾患、例如COPD中见到的气道再造(例如,Takizawa,H.Int.J.Mol.Med.1:367-378(1998);Ning,W.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:14895-14900(2004))。
肝星形细胞(HSC)是肝纤维化中细胞外基质蛋白的主要来源。通过TGF-β1的作用，活化的肝星形细胞产生细胞外基质明显增加(例如,Friedman,S.L.,Prog.LiverDis.14:101-130(1996);Pietrangelo,A.,Semin.LiverDis.16:13-30(1996))。过度表达肝中TGF-β1的转基因小鼠形成肝纤维化以及肝外病变，例如肾纤维化(例如,Sanderson,N.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:2572-2576(1995))。
TGF-β1及其受体在受损血管和纤维增殖性血管损伤中被过度表达，引起细胞外基质的过度产生(例如,Saltis,J.等人,Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.23:193-200(1996);McCaffrey,T.A.等人,J.Clin.Invest.96:2667-2675(1995))。
抗-TGF-β抗体在大鼠中减少瘢痕形成，改进新生真皮的细胞体系结构(例如,Shah,M.,J.Cell.Sci.108:985-1002(1995))，在兔中促进角膜伤口的愈合(例如,Moller-Pedersen,T.,Curr.EyeRes.17:736-747(1998))，并且在大鼠中加速胃溃疡的伤口愈合(例如,Ernst,H.,Gut39:172-175(1996))。
辐射性纤维化是正常人体组织中治疗性或意外过度暴露于辐射的常见后果。TGF-β1在辐射性纤维化的引发、发展和持续中扮演核心角色，最近已有评述(例如,Martin,M.等人,Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.47:277-290(2000))。
器官移植在很多情形中并发有慢性排斥，就有些器官而言，例如肾脏，它是移植物损失的主要方式。在人类患者中，肺和肾移植的慢性排斥与TGF-β在组织内表达增加有关(例如,El-Gamel,A.等人,Eur.J.Cardiothorac.Surg.13:424-430(1998);Shihab,F.S.等人,J.Am.Soc.Nephrol.6:286-294(1995))。
TGF-β在腹膜粘连中有牵连(例如,Saed,G.M.等人,WoundRepairRegeneration7:504-510(1999))。ALK5和/或ALK4抑制剂能够预防腹膜和皮下纤维化粘连。
TGF-β2水平在大多数患有少年青光眼的眼房水肿瘤眼中和几乎一半患有原发性开放角度青光眼(POAG)的眼中都有增加（例如，Picht,G.等人,GraefesArch.Clin.Exp.Ophthalmol.239:199-207(2001)）。TGF-β1和TGF-β2亚型据报道都增加培养的来自假性剥脱性青光眼和POAG患者的人特农氏囊成纤维细胞的细胞外基质产生（例如，Kottler,U.B.等人,Exp.EyeRes.80:121-134(2005)）。US2007/0142376A1公开了使用ALK5调控剂治疗青光眼和控制眼内压，ALK5抑制剂减少经TGF-β2处理的灌注人前段中的纤连蛋白水平以及经TGF-β2处理的小梁网状细胞培养物中的纤连蛋白、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和前胶原I型C-肽的水平。
在各种癌症的晚期，肿瘤细胞和肿瘤内基质细胞一般过度表达TGF-β。这引起血管生成与细胞运动的刺激、免疫系统的抑制和肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用增加(例如,Hojo,M.等人,Nature397:530-534(1999))。所以，肿瘤细胞变得更有侵袭性，转移至远侧器官(例如,Maehara,Y.等人,J.Clin.Oncol.17:607-614(1999);Picon,A.等人,CancerEpidemiol.BiomarkersPrev.7:497-504(1998))。
PAI-1是组织型纤溶酶原激活物和尿激酶型纤溶酶原激活物的主要生理抑制剂。PAI-1水平升高与血栓形成和血管疾病有关，提示了高血浆PAI-1可能通过破坏纤维蛋白溶解与凝固之间的天然平衡而促进过高凝固性状态(例如,Vaughan,D.E.,J.Invest.Med.46:370-376(1998))。已知TGF-β刺激PAI-1的表达(例如,Dennler,S.等人,EMBOJ.17:3091-3100(1998))。因此，用TGF-β信号传递途径抑制剂抑制PAI-1的产生能够提供一种新颖的纤维蛋白溶解疗法。
活化素信号传递和活化素的过度表达与下列疾病有联系：牵涉细胞外基质蓄积与纤维化的病理疾患(例如,Matsuse,T.等人,Am.J.Respir.CellMol.Biol.13:17-24(1995);Inoue,S.等人,Biochem.Biophys.Res.Comm.205:441-448(1994);Matsuse,T.等人,Am.J.Pathol.148:707-713(1996);DeBleser等人,Hepatology26:905-912(1997);Pawlowski,J.E.,等人,J.Clin.Invest.100:639-648(1997);Sugiyama,M.等人,Gastroenterology114:550-558(1998);Munz,B.等人,EMBOJ.18:5205-5215(1999))、炎性反应(例如,Rosendahl,A.等人,Am.J.Respir.CellMol.Biol.25:60-68(2001)、恶病质或消瘦(Matzuk,M.M.等人,Proc.Natl.Acd.Sci.USA91:8817-8821(1994);Coerver,K.A.等人,Mol.Endocrinol.10:534-543(1996);Cipriano,S.C.等人,Endocrinology141:2319-2327(2000))、中枢神经系统疾病或病理反应(例如,Logan,A.等人,Eur.J.Neurosci.11:2367-2374(1999);Logan,A.等人,Exp.Neurol.159:504-510(1999);Masliah,E.等人,Neurochem.Int.39:393-400(2001);DeGroot,C.J.A.等人,J.Neuropathol.Exp.Neurol.58:174-187(1999);John,G.R.等人,Nat.Med.8:1115-1121(2002))和高血压(例如,Dahly,A.J.等人,Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.283:R757-767(2002))。研究显示，TGF-β和活化素能够协同作用，诱导细胞外基质产生(例如,Sugiyama,M.等人,Gastroenterology114;550-558(1998))。
因此，显然用本发明优选的化合物抑制Smad2和Smad3的ALK5和/或ALK4磷酸化能够治疗和预防牵涉这些信号传递途径的疾患。
WO00/61576和US2003/0149277A1公开了三芳基咪唑衍生物和它们作为ALK5抑制剂的用途。WO01/62756A1公开了吡啶基咪唑衍生物和它们作为ALK5抑制剂的用途。WO02/055077A1公开了咪唑基环状缩醛衍生物作为ALK5抑制剂的用途。WO03/087304A2公开了三取代的杂芳基和它们作为ALK5和/或ALK4抑制剂的用途。WO2005/103028A1和US7,407,958B2公开了作为ALK5和/或ALK4抑制剂的2-吡啶基取代的咪唑。尤其是在WO2005/103028A1和US7,407,958B2中要求保护的代表性化合物之一IN-1130证实了其在若干动物模型中作为ALK5和/或ALK4抑制剂的用途。IN-1130有效地抑制大鼠由单侧输尿管阻塞(UUO)诱发的肾纤维化(Moon,J.-A.等人,KidneyInt.70:1234-1243(2006))，改善用MOG35-55致免疫化的SBE-luc和GFAP-luc小鼠实验性自体免疫性脑脊髓炎(EAE)(Luo,J.等人,J.Clin.Invest.117:3306-3315(2007))，减少大鼠的被膜纤维化和纠正其阴茎弯曲(Ryu,J.-K.等人,J.Sex.Med.6:1284-1296(2009))，并且显著地缩小用鼠前列腺癌细胞系TrampC2处理过的小鼠肿瘤体积，同时增强免疫应答(Lee,G.T.等人,J.Urol.180:2660-2667(2008))。而且，US2008/0319012A1公开了作为ALK5和/或ALK4抑制剂的2-吡啶基取代的咪唑。尤其是在US2008/0319012A1中要求保护的代表性化合物之一IN-1233证实了其在若干动物模型中作为ALK5和/或ALK4抑制剂的用途。IN-1233通过抑制TGF-β信号传递，有效地预防野百合碱大鼠模型肺动脉高血压的形成与进展(Long,L.等人,Circulation119:566-576(2009))，还预防大鼠尿道模型放置裸金属支架后的肉芽组织生成(Kim,J.H.等人,Radiology255:75-82(2010))。
发明内容
现已惊人地发现，一类2-吡啶基取代的咪唑作为有效的和选择性的ALK5和/或ALK4抑制剂，因此可用于治疗、预防和减轻由ALK5和/或ALK4介导的各种疾病状态，例如肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精-诱发的肝炎、胆系疾患、囊性纤维化病、肺纤维化、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤，以及肺、乳腺、结肠、肾、卵巢、宫颈、肝、胆管、胃肠道、胰腺、前列腺、头和颈的癌症。
附图说明
本发明的上述方面和其他特征将在下列说明中加以解释，并且结合附图，其中：
图1显示实施例2、60、86、92和94对HaCaT-3TP-Luc细胞中TGF-β1-诱导的3TP-Luc受体活性的影响。
图2显示实施例2、60、86、92和94对4T1-3TP-Luc细胞中TGF-β1-诱导的3TP-Luc受体活性的影响。
图3显示实施例2对MCF10A细胞中TGF-β1-诱导的Smad2/3核易位的影响。
图4显示实施例2对MCF10A细胞中TGF-β1-诱导的细胞迁移的影响。
图5a和5b显示实施例2对4T1细胞中TGF-β1-诱导的细胞侵袭的影响。
(5a).DAPI-染色的细胞停留在底表面上。(5b).5个随机视野所得每视野平均细胞数。
图6显示实施例2对4T1细胞的细胞生长的影响。
图7显示实施例2对MCF10A细胞的细胞生长的影响。
图8a和图8b显示实施例3对BALB/c4T1异种移植小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将实施例3（13.6或27.3mg/kg）溶于水（载体），口服给予小鼠BID，每周连续五天，持续四周。
(8a).肺表面上的白点指示了转移的结节（白箭头）。(8b).全肺表面上转移结节的数量。
图9a和9b显示实施例2对BALB/c4T1异种移植小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将实施例2（5、10、20或40mg/kg）溶于人工胃液制剂（载体），口服给予小鼠，每周连续五天，持续三周。
(9a).肺表面上的白点指示了转移的结节。(9b).左侧肺叶表面上转移结节的数量。
图10a、10b和10c显示实施例2对BALB/c4T1异种移植小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将实施例2（5、10、20或40mg/kg）溶于人工胃液制剂（载体），口服给予小鼠，每隔一天一次（每周三次），持续24天。
(10a).肺表面上的白点指示了转移的结节。(10b).左侧肺叶表面上转移结节的数量。(10c).对肿瘤组织中TGF-β1-诱导的Smad2磷酸化的影响。
图11a、11b和11c显示实施例61对BALB/c4T1异种移植小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将实施例61（43.6mg/kg）溶于盐水（载体），腹膜内给予小鼠，每隔一天一次（每周三次），持续2.5周。
(11a).肺表面上的白点指示了转移的结节。(11b).左侧肺叶表面上转移结节的数量。(11c).原始肿瘤的体积。
图12a、12b、12c和12d显示实施例61对MMTV/c-Neu小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将携带肿瘤的MMTV/c-Neu小鼠用实施例61（43.6mg/kg）腹膜内处理，每隔一天一次，持续三周。
(12a).乳腺肿瘤和肺组织的苏木精与曙红(H&E)染色。(12b).肺中组织学上可检测的转移性损伤的数量。(12c).乳腺肿瘤的体积。(12d).β-酪蛋白mRNA水平。
图13a和13b显示实施例3对MMTV/c-Neu小鼠乳腺肿瘤转移至肺的影响。将携带肿瘤的MMTV/c-Neu小鼠用实施例3（43.6mg/kg）腹膜内处理，每隔一天一次，持续十周。
(13a).β-酪蛋白mRNA水平。(13b).原始乳腺肿瘤中MMP-9和MMP-2活性。
图14a、14b、14c和14d显示实施例3对大鼠胆管-结扎的肝纤维化的影响。将实施例3（21.8或43.6mg/kg）溶于盐水（载体），口服给予大鼠，每周三次，持续四周，始于BDL手术之后。
(14a).血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性。(14b).肝中pSmad3蛋白水平。(14c).肝中α-SMA、纤连蛋白和波形蛋白的水平。(14d).肝组织的苏木精与曙红(H&E)染色。
图15a、15b和15c显示实施例2对大鼠胆管-结扎的肝纤维化的影响。将实施例2（5、10或20mg/kg）溶于人工胃液制剂（载体），口服给予大鼠，每周三次，持续四周，始于BDL手术之后。
(15a).ALT和AST的活性。(15b).肝中α-SMA和纤连蛋白的水平。(15c).肝组织的苏木精与曙红(H&E)染色。
图16a和16b显示实施例2对博莱霉素-诱发的小鼠肺纤维化的影响。将实施例2（5、10或20mg/kg）溶于人工胃液制剂（载体），口服给予小鼠，每周五次，持续两周，始于第7天。
(16a).肺中α-SMA和纤连蛋白的水平。(16b).肺组织的苏木精与曙红(H&E)染色。
表1显示实施例1-139的结构和1HNMR与MS光谱数据。
表2显示实施例140-153的结构和1HNMR与MS光谱数据。
表3显示所选实施例对ALK5激酶磷酸化的IC50值。
表4显示实施例2对各种激酶磷酸化的IC50值或抑制%。
表5显示实施例3对BDL大鼠体重和器官重量变化的影响。
表6显示实施例2对BDL大鼠体重和器官重量变化的影响。
本发明最佳实施方式
在本发明的一种实施方式中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中每个Ra独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、OH、-O-C1-6烷基、-O-C1-6卤代烷基、-O-C3-6环烷基、NH2、-NH-C1-6烷基、-NH-C1-6卤代烷基、-NH-C3-6环烷基、-S-C1-6烷基、-S-C1-6卤代烷基、-S-C3-6环烷基、CN或NO2；
m是0、1、2、3或4；
A1和A2之一是N，另一个是NR1，其中R1是H、OH、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基；
X是一条键、-(CH2)p-、-NR2-、-O-或-S-，其中p是0或1，R2是H或C1-3烷基；
每个Rb独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)q-OR3、-(CH2)q-NR3R4、-(CH2)q-SR3、-(CH2)q-NO2、-(CH2)q-CONHOH、-(CH2)q-CN、-(CH2)q-COR3、-(CH2)q-CO2R3、-(CH2)q-CONR3R4、-(CH2)q-四唑、-(CH2)q-CH=CH-CN、-(CH2)q-CH=CH-CO2R3、-(CH2)q-CH=CH-CONR3R4、-(CH2)q-CH=CH-四唑、-(CH2)q-NHCOR3、-(CH2)q-NHCO2R3、-(CH2)q-CONHSO2R3、-(CH2)q-NHSO2R3、-(CH2)q-C≡C-CN、-(CH2)q-C≡C-CO2R3、-(CH2)q-C≡C-CONR3R4、-(CH2)q-C≡C-四唑、-(CH2)q-SOR5、-(CH2)q-SO2R5或-(CH2)r-(OR3)2，其中R3和R4独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基；或者与它们所连接的氮原子一起构成单环的环，例如咪唑、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪和高哌嗪；R5是C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基；q是0、1、2、3或4；r是1、2、3或4；
n是0、1、2、3、4或5。
正如本文所使用的，由式(I)虚线所示双键代表落入本发明范围内的化合物可能的互变异构环形式，双键连接于未取代的氮。
优选地，Ra是C1-3烷基或卤素。
优选地，m是1或2。
优选地，A1和A2之一是N，另一个是NR1，其中R1是H。
优选地，X是-(CH2)p-或-NR2-，其中p是0，R2是H。
优选地，Rb是卤素、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C3-4环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、-(CH2)q-OR3、-(CH2)q-NR3R4、-(CH2)q-SR3、-(CH2)q-CN、-(CH2)q-COR3、-(CH2)q-CO2R3、-(CH2)q-CONR3R4、-(CH2)q-NHCOR3、-(CH2)q-NHSO2R3、-(CH2)q-SOR5或-(CH2)q-SO2R5，其中R3和R4独立地是H、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C3-4环烷基；或者与它们所连接的氮原子一起构成单环的环，例如咪唑、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪和高哌嗪；R5是甲基；q是0、1或2。
优选地，n是1、2或3。
可以提到的具体本发明化合物包括如下及其药学上可接受的盐：
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二甲基苯胺；
N((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙炔基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(甲硫基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(甲硫基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(甲硫基)苯胺；
2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)邻苯二甲腈；
2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
2-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙腈；
2-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙腈；
1-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酮；
1-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酮；
甲基3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-
2-基)甲基氨基)苯甲酸酯；
甲基4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-
2-基)甲基氨基)苯甲酸酯；
N-(2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N1-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-N2,N2-二甲基苯-1,2-二胺；
N1-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-N3,N3-二甲基苯-1,3-二胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吡咯烷-1-基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-吗啉代苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-吗啉代苯胺；
N3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氟-N1,N1-二甲基苯-1,3-二胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(二甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(二甲基氨基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((二甲基氨基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吗啉代甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉代甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-5-((二甲基氨基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-3-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-3-(吗啉代甲基)苯胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(吗啉代甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-(吗啉代甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(吗啉代甲基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(2-(二甲基氨基)乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基苯胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-N-甲基苯胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)(甲基)氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)(甲基)氨基)苯甲酰胺；
6-(2-苄基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；
6-(2-(2-氟苄基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯甲酰胺；
6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-2-(苯氧基甲基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；
6-(2-((2-氟苯氧基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲氧基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲氧基)苯甲酰胺；
6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-2-(苯硫基甲基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶；
6-(2-((2-氟苯硫基)甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶。
本发明化合物通常是小的有机分子（非肽小分子），大小一般小于约1,000道尔顿。优选的非肽小分子的分子量小于约750道尔顿，更优选小于约500道尔顿。
式(I)化合物也可以以“前体药物”形式应用，它被设计成在对受治疗者给药时释放式(I)化合物。前体药物设计是本领域熟知的，依赖于式(I)化合物所含有的取代基。例如，含有羟基的取代基能够与载体偶联，所述载体使该化合物在生物学上无活性，直至被内源性酶除去，或者例如被靶向于受治疗者中特定受体或位置的酶所除去。
在属性上为酸性的式(I)化合物（例如具有羧基或酚羟基）能够生成药学上可接受的盐，例如钠、钾、钙或金盐。在本发明的范围内还有与药学上可接受的胺生成的盐，例如氨、烷基胺、羟基烷基胺和N-甲基葡糖胺。式(I)化合物可以用酸处理，生成酸加成盐。这类酸的实施例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、甲磺酸、磷酸、对-溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、抗坏血酸、马来酸、乙酸和本领域技术人员熟知的其他无机和有机酸。酸加成盐可以制备如下，将式(I)化合物的游离碱形式用足量酸（例如盐酸）处理，生成酸加成盐（例如氢氯化物）。酸加成盐可以通过下列方式转化回其游离碱形式：将盐用适合的稀碱水溶液（例如氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钾、或氨）处理。
有些本发明化合物可以从溶剂中结晶或重结晶，例如水性和有机溶剂。在这类情况下可以生成溶剂化物。本发明在其范围内包括化学计量的溶剂化物，包括水合物以及含有可变量水的化合物，可以借助冷冻干燥等过程生成。
式(I)化合物可以含有一个或多个不对称中心，因而可能存在对映体或非对映体。所要理解的是，本发明包括式(I)化合物的混合物和分开的单个异构体。此外，含有烯基的某些式(I)化合物可以存在顺式-或反式-异构体。在每种情形中，本发明包括混合物和分开的单个异构体。
式(I)化合物也可以存在互变异构形式，本发明包括混合物和其分开的单个互变体。
在本发明中还包括适合于生物研究的式(I)化合物的放射性标记衍生物。
本文所用的术语“烷基”表示含有1-6个碳原子的饱和脂族烃基团。烷基可以是直链或支链的。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。烷基可以可选地被一个或多个取代基取代，例如烷氧基、环烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、卤素、羟基、磺基或巯基。
本文所用的术语“环烷基”表示3-6个碳原子的脂族碳环。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
本文所用的术语“卤代烷基”表示含有一个或多个卤原子的烷基。卤代烷基的实例包括氟甲基、氯甲基、溴甲基和三氟甲基。
本文所用的术语“卤素”或“卤代基”表示氟、氯、溴或碘。
本文所用的术语“烯基”表示含有2-6个碳原子和至少一条双键的脂族碳基团。象烷基一样，烯基可以是直链或支链的。烯基的实例包括但不限于乙烯基、烯丙基、异丙烯基、2-丁烯基和2-己烯基。烯基可以可选地被一个或多个取代基取代，例如烷氧基、环烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、卤素、羟基、磺基或巯基。
本文所用的术语“炔基”表示含有2-6个碳原子和至少一条叁键的脂族碳基团。炔基可以是直链或支链的。炔基的实例包括但不限于乙炔基、炔丙基和丁炔基。炔基可以可选地被一个或多个取代基取代，例如烷氧基、环烷氧基、氨基、硝基、羧基、氰基、卤素、羟基、磺基或巯基。
本文所用的术语“ALK5和/或ALK4抑制剂”表示这样的化合物，除了抑制Smad、例如Smad6和Smad7以外，它选择性抑制ALK5和/或ALK4受体，优先于p38或II型受体。
本文所用的术语“ALK5-和/或ALK4-介导的疾病状态”表示任何受ALK5和/或ALK4介导（或调控）的疾病状态，例如受TGF-β和/或活化素信号传递途径中Smad2和Smad3磷酸化的抑制所调控的疾病。
本文所用的术语“溃疡”用于包括但不限于糖尿病性溃疡、慢性溃疡、胃溃疡和十二指肠溃疡。
式(I)化合物可以借助大量已知方法从商业上可获得或已知的原料制备。如果原料不可从商业来源获得，可以借助本领域已知的工艺制备它们。
流程1
在一种方法中，按照流程1制备式(I)化合物，其中A1是N，A2是NH，或者A1是NH，A2是N，X是-NH-。具体而言，使Ra-取代的吡啶-2-甲醛(II)与苯胺和二苯基亚磷酸酯反应，得到N，P-缩醛(III)，它可以进一步与[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲醛偶联，随后在酸性条件中水解，生成一元酮(IV)。一元酮(IV)可以用HBr的DMSO溶液氧化为二酮(V)。这种二酮(V)然后可以在乙酸氨的存在下与2,2-二甲氧基乙醛缩合，得到缩醛-被保护的咪唑(VI)，它可以在酸性条件中水解，生成咪唑-2-甲醛(VII)。该咪唑-2-甲醛(VII)可以在酸的存在下，例如乙酸，与Rb-取代的苯胺(VIII)偶联，生成亚胺，它可以进一步用还原剂还原，例如硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠，得到式(I)化合物。Ra、Rb、m和n定义同上。
流程2
在另一种方法中，按照流程2制备式(I)化合物，其中A1是N，A2是NH，或者A1是NH，A2是N，X是-(CH2)p-、-NR2-、-O-或-S-，其中p是0或1，R2是C1-3烷基。二酮(V)可以在乙酸氨的存在下与适当的Rb-取代的醛(IX)缩合，得到式(I)化合物。Ra、Rb、m和n定义同上。
作为替代选择，正如流程3所描绘的，当式(I)化合物中的Rb是-(CH2)q-CN、-(CH2)q-CH=CH-CN或-(CH2)q-C≡C-CN时，它可以进一步被官能化生成式(I)化合物。Ra、R3、R4、X、m和q定义同上。
所得由式(I)-(IX)代表的本发明化合物可以借助适当的常规方法分离和纯化，例如柱色谱和重结晶。
本发明化合物可以借助任意适合的途径给药，例如口服、口腔、舌下、直肠、阴道、鼻、局部或肠胃外（包括静脉内、肌内、皮下和冠状动脉内）给药。
本发明的外用制剂可以为例如软膏、霜剂或洗剂、眼用软膏和眼用或耳用滴剂、浸渗敷料和气雾剂，并且可以含有适当的常规添加剂，例如防腐剂、帮助药物渗透的溶剂以及软膏和霜剂中的软化剂。
制剂也可以含有可相容的常规载体，例如霜剂或软膏基质和用于洗剂的乙醇或油醇。这类载体可以占制剂的约1%直至约98%。更通常地，它们将构成制剂的多达约80%。
关于在上述疾患的治疗或预防性处置中对人给药，式(I)化合物的口服、口腔或舌下剂量一般将在50-5000mg每天的范围内，就普通成年患者(70kg)而言。因而就典型的成年患者而言，单个药片或胶囊在适合的药学上可接受的介质或载体中含有25-500mg活性化合物，每天一次或多次以单一或多重剂量给药。根据需要，肠胃外给药剂量通常将在25-250mg每单一剂量的范围内。在实践中，医师将确定实际的服药方案，它将最适合于个体患者，并且将因特定患者的年龄、体重和反应而异。上述剂量是平均情况的示例，但是也能存在个别情形，其中可能适用更高或更低的剂量范围，这也在本发明的范围内。
就人类用途而言，式(I)化合物可以被单独给药，但是一般与药物载体混合给药，根据预定给药途径和标准药学实践选择载体。例如，化合物可以被口服、口腔或舌下给药，剂型为片剂，含有赋形剂，例如淀粉或乳糖，或者剂型为胶囊或扁囊，单独或与赋形剂混合，或者剂型为酏剂或混悬液，含有矫味剂或着色剂。这类液体制剂可以用药学上可接受的添加剂制备，例如悬浮剂（例如甲基纤维素，半合成甘油酯，例如witepsol，或甘油酯混合物，例如杏仁油与PEG-6酯的混合物或PEG-8与辛酸/癸酸甘油酯的混合物）。化合物也可以被肠胃外注射，例如静脉内、肌内、皮下或冠状动脉内。就肠胃外给药而言，化合物最好采用无菌水溶液的形式，其中可以含有其他物质，例如盐，或者单糖，例如甘露糖醇或葡萄糖，使溶液与血液等渗。
因而，本发明在另一方面提供药物组合物，包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明也提供用于治疗的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者含有任一实体的药物组合物。
本发明进一步提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者含有任一实体的药物组合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗哺乳动物由ALK5和/或ALK4受体介导的疾病。
ALK5-和/或ALK4-介导的疾病状态包括但不限于肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精-诱发的肝炎、胆系疾患、囊性纤维化病、肺纤维化、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤，以及肺、乳腺、结肠、肾、卵巢、宫颈、肝、胆管、胃肠道、胰腺、前列腺、头和颈的癌症。
本发明进一步提供抑制哺乳动物TGF-β和/或活化素信号传递途径的方法，例如抑制Smad2或Smad3被ALK5和/或ALK4磷酸化。
本发明进一步提供减少人过量细胞外基质蓄积的方法，该方法通过抑制TGF-β和/或活化素信号传递途径，例如抑制Smad2或Smad3被ALK5和/或ALK4磷酸化。
本发明进一步提供治疗、预防或减少人类肿瘤细胞转移的方法，该方法通过抑制TGF-β信号传递途径。
本发明进一步提供治疗、预防或减少人类由TGF-β过度表达介导的癌症的方法，该方法通过抑制TGF-β信号传递途径。
本发明进一步提供治疗、预防或减少人类血管损伤的方法，该方法通过抑制TGF-β信号传递途径。
具体实施方式
下列实施例进一步阐述本发明，它们不应被视为限制权利要求所述发明的范围。在实施例中，电子喷雾电离质谱(ESI-MS)是在Q-Tof2质谱仪(Micromass,Manchester,UK)上获得的。
实施例
制备例1
二苯基(6-甲基吡啶-2-基)(苯基氨基)甲基膦酸酯(式(III)化合物，其中Ra=CH3)的制备
将6-甲基吡啶-2-甲醛(2.12g,17.50mmol)、苯胺(1.63g,17.50mmol)、二苯基亚磷酸酯(4.92g,21.00mmol)与氯化氧锆八水合物(0.56g,1.75mmol)的混合物在室温下搅拌1h（h，小时，下同）。将反应混合物用CH2Cl2萃取(3×50mL)，CH2Cl2溶液用水洗涤(2×20mL)，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(6.96g,92%)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.51(t,1H,J=7.8Hz),7.38(dd,1H,J=7.6,2.0Hz),7.27-7.22(m,4H),7.19-7.15(m,2H),7.14-7.07(m,4H),7.05-7.02(m,3H),6.80-6.74(m,3H),5.53(pseudot,1H,J=7.4Hz),5.36(dd,1H,J=21.0,8.2Hz),2.54(s,3H)。
制备例2
二苯基(6-乙基吡啶-2-基)(苯基氨基)甲基膦酸酯(式(III)化合物，其中Ra=CH2CH3)的制备
如制备例1所述制备标题化合物，使用6-乙基吡啶-2-甲醛代替6-甲基吡啶-2-甲醛。收率:81%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.55(t,1H,J=7.6Hz),7.38(dd,1H,J=7.6,2.0Hz),7.26-7.09(m,8H),7.07-7.00(m,5H),5.59(pseudot(假三重峰，下同),1H,J=7.0Hz),5.34(dd,1H,J=20.8,8.0Hz),2.82(q,2H,J=7.6Hz),1.28(t,3H,J=7.6Hz)。
制备例3
2-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙酮(式(IV)化合物，其中Ra=CH3)的制备
向所搅拌的[1，2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲醛(2.50g,17.01mmol)（按照WO03/087304A2所述方法制备）与二苯基(6-甲基吡啶-2-基)(苯基氨基)甲基膦酸酯(7.32g,17.01mmol)在THF(40mL)与i-PrOH(10mL)混合物中的溶液加入Cs2CO3(7.20g,22.11mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物滴加3NHCl溶液(25mL)，将混合物搅拌1h。然后用叔丁基甲基醚(40mL)稀释，用1NHCl萃取(2×35mL)。含水萃取液用50%KOH中和，直至达到pH7-8。过滤收集沉淀，用水洗涤，在真空中经P2O5干燥，得到标题化合物(3.41g,80%)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,1H,J=0.8Hz),8.31(s,1H),7.88(dd,1H,J=7.6,1.6Hz),7.73(t,1H,重叠,J=7.6Hz),7.71(dd,1H,重叠,J=9.2,0.8Hz),7.54(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.37(dd,1H,J=7.6,1.6Hz),4.62(s,2H),2.67(s,3H)。
制备例4
2-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-1-(6-乙基吡啶-2-基)乙酮(式(IV)化合物，其中Ra=CH2CH3)的制备
如制备例3所述制备标题化合物，使用二苯基(6-乙基吡啶-2-基)(苯基氨基)甲基膦酸酯代替二苯基(6-甲基吡啶-2-基)(苯基氨基)甲基膦酸酯。收率:78%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(dd,1H,J=1.6,0.8Hz),8.29(s,1H),7.88(brd,1H,J=7.6Hz),7.74(t,1H,J=7.6Hz),7.70(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.54(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.37(dd,1H,J=7.6,0.8Hz),4.62(s,2H),2.93(q,2H,J=7.6Hz),1.39(t,3H,J=7.6Hz)。
制备例5
1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮(式(V)化合物，其中Ra=CH3)的制备
在0℃下，向所搅拌的2-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙酮(6.20g,24.57mmol)的DMSO(48mL)混悬液滴加HBr(48wt.%水溶液,5.96g,12.4mL)，在60-70℃下加热混合物。2h后，将反应混合物冷却至0℃，倒在冰水(20mL)上，用固体K2CO3碱化至pH10。将混合物用CHCl3萃取(2×250mL)，有机相用水洗涤(2×100mL)，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(6.02g,92%)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.11(dd,1H,J=1.6,1.2Hz),8.47(s,1H),8.14(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),8.04(brd,1H,J=7.6Hz),7.88(dd,1H,J=9.2,1.2Hz),7.84(t,1H,J=7.8Hz),7.42(brd,1H,J=8.0Hz),2.49(s,3H)。
制备例6
1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-(6-乙基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮(式(V)化合物，其中Ra=CH2CH3)的制备
如制备例5所述制备标题化合物，使用2-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-1-(6-乙基吡啶-2-基)乙酮代替2-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙酮。收率:79%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.11(dd,1H,J=1.6,0.8Hz),8.42(s,1H),8.08(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.98(brd,1H,J=7.6Hz),7.83(dd,1H,重叠,J=9.2,0.8Hz),7.82(t,1H,重叠,J=7.6Hz),7.38(brd,1H,J=7.6Hz),2.71(q,2H,J=7.6Hz),1.08(t,3H,J=7.6Hz)。
制备例7
6-(2-(二甲氧基甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(式(VI)化合物，其中Ra=CH3)的制备
将所搅拌的1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮(6.00g,22.49mmol)的叔丁基甲基醚(120mL)溶液用乙二醛二甲缩醛(60wt.%水溶液,7.8mL,44.98mmol)处理。向其中加入NH4OAc(4.33g,56.2mmol)的MeOH(60mL)溶液，将所得混合物在室温下搅拌3h。用饱和NaHCO3水溶液调节反应的pH至8。将反应混合物用CHCl3萃取(2×150mL)，CHCl3溶液用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(6.13g,78%)，为浅黄色泡沫。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ10.54(brs,1H),8.96(s,1H),8.36(s,1H),7.82(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.77(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.47(t,1H,J=7.8Hz),7.23(d,1H,J=7.6Hz),7.04(d,1H,J=8.0Hz),5.57(s,1H),3.48(s,6H),2.58(s,3H)。
制备例8
6-(2-(二甲氧基甲基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(式(VI)化合物，其中Ra=CH2CH3)的制备
如制备例7所述制备标题化合物，使用1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-(6-乙基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮代替1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮。收率:68%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ10.67(brs,1H),8.97(brs,1H),8.35(s,1H),7.83(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.76(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.50(t,1H,J=7.8Hz),7.25(brd,1H,J=7.6Hz),7.05(d,1H,J=8.0Hz),5.56(s,1H),3.46(s,6H),2.83(q,2H,J=7.6Hz),1.31(t,3H,J=7.6Hz)。
制备例9
4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-甲醛(式(VII)化合物，其中Ra=CH3)的制备
将6-(2-(二甲氧基甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(6.00g,17.12mmol)溶于1NHCl(120mL)，将混合物在70℃下加热3h。使反应混合物冷却至0℃，然后用饱和NaHCO3水溶液中和。将混合物用10%MeOH的CHCl3溶液萃取(3×200mL)，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干，得到标题化合物(4.69g,90%)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.82(s,1H),9.01(brs,1H),8.41(s,1H),7.85(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.82(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.55(t,1H,J=7.8Hz),7.33(brs,1H),7.16(d,1H,J=8.0Hz),2.60(s,3H)。
制备例10
4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-甲醛(式(VII)化合物，其中Ra=CH2CH3)的制备
如制备例9所述制备标题化合物，使用6-(2-(二甲氧基甲基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶代替6-(2-(二甲氧基甲基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶。收率:99%;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(t,1H,J=1.2Hz),9.59(s,1H),8.43(s,1H),8.21(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.82(brd,1H,J=8.0Hz),7.73(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.69(t,1H,J=7.8Hz),7.08(brd,1H,J=7.6Hz),2.71(q,2H,J=7.6Hz),1.16(t,3H,J=7.6Hz)。
制备例11
3-氨基-5-(二甲基氨基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-5-二甲基氨基)的制备。该化合物按下列2步制备。
向干燥的密封试管加入3-溴-N，N-二甲基-5-硝基苯胺(1.73g,7.06mmol)（按照J.Org.Chem.60:5091-5103(2003)所述方法制备）、吡啶(24mL)和CuCN(1.26g,2.14mmol)。在220℃下加热混合物，同时搅拌3.5h。使反应混合物冷却至100℃，倒入含有氨水(100mL)与水(100mL)的混合物的烧瓶，用EtOAc萃取(2×100mL)。将EtOAc溶液连续用稀氨溶液(100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈(0.44g,33%)，为橙色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.74(dd,1H,J=2.0,1.2Hz),7.65(t,1H,J=2.2Hz),7.11(dd,1H,J=2.4,1.2Hz),3.10(s,6H)。
在10%Pd/C(0.04g)的存在下，使上述硝基化合物3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈(0.42g,2.22mmol)在甲醇(80mL)中、在氢气氛下氢化过夜。通过C盐(Celite)垫过滤反应混合物，在减压下蒸发滤液至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(0.29g,80%)，为褐色粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.35(dd,1H,J=2.4,1.6Hz),6.28(dd,1H,J=2.0,1.6Hz),6.14(t,1H,J=2.2Hz),3.76(brs,2H),2.92(s,6H)。
制备例12
3-((二甲基氨基)甲基)-2-氟苯胺(式(VIII)化合物，其中Rb=3-(二甲基氨基)甲基-2-氟)的制备。该化合物按下列3步制备，始于可商购的2-氟-1-甲基-3-硝基苯。
将所搅拌的2-氟-1-甲基-3-硝基苯(15.80g,101.94mmol)与N-溴琥珀酰亚胺(18.14g,101.94mmol)的CCl4(400mL)溶液用过氧化苯甲酰(0.37g,1.52mmol)处理。将混合物在回流温度下加热过夜，然后冷却至室温。过滤反应混合物，在减压下蒸发滤液至干。将残余物溶于溶于CH2Cl2(100mL)，再次过滤。在减压下蒸发滤液至干，残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到1-(溴甲基)-2-氟-3-硝基苯(8.11g,34%)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.02(m,1H),7.71(m,1H),7.30(td,1H,J=8.4,1.6Hz),4.55(d,2H,J=1.6Hz)。
向所搅拌的1-(溴甲基)-2-氟-3-硝基苯(0.70g,2.99mmol)与盐酸二甲胺(0.48g,5.98mmol)在CH2Cl2(10mL)中的混合物滴加三乙胺(0.91g,8.97mmol)。将混合物在室温下搅拌3h，在减压下蒸发至干。将残余物用水(10mL)稀释，用EtOAc萃取(2×25mL)。将EtOAc溶液用水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到1-(2-氟-3-硝基苯基)-N，N-二甲基甲烷胺(0.45g,76%)，为黄色粘性液体。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.04-7.99(m,1H),7.78-7.73(m,1H),7.37(td,1H,J=8.0,1.0Hz),3.64(d,2H,J=2.0Hz),2.29(d,6H,J=0.8Hz)。
将上述硝基化合物1-(2-氟-3-硝基苯基)-N，N-二甲基甲烷胺(0.45g,1.93mmol)、铁粉(1.35g,2.41mmol)、2NHCl(1mL)与乙醇(5mL)的混合物在回流温度下加热并搅拌2h。冷却至室温后，通过C盐垫过滤混合物。在减压下蒸发滤液至干，残余物用水(10mL)稀释，用固体K2CO3碱化至pH10。将含水混合物用EtOAc萃取(2×25mL)，EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(0.35g,91%)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.88(td,1H,J=7.8,1.0Hz),6.72-6.67(m,2H),3.71(brs,2H),3.47(d,2H,J=1.6Hz),2.27(s,6H)。
制备例13
2-氟-3-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺(式(VIII)化合物，其中Rb=2-氟-3-(吡咯烷-1-基甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的1-(溴甲基)-2-氟-3-硝基苯(2.00g,8.54mmol)与吡咯烷(0.91g,12.82mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加三乙胺(1.72g,17.08mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下蒸发至干。残余物用水(15mL)稀释，用EtOAc萃取(2×30mL)。将EtOAc溶液用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到1-(2-氟-3-硝基苄基)吡咯烷(1.20g,63%)，为粘性的油。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.02-7.97(m,1H),7.81-7.76(m,1H),7.36(td,1H,J=8.0,1.2Hz),3.81(d,1H,J=2.0Hz),2.62-2.58(m,4H),1.84-1.80(m,4H)。
如制备例12所述制备标题化合物，使用1-(2-氟-3-硝基苄基)吡咯烷代替1-(2-氟-3-硝基苯基)-N，N-二甲基甲烷胺。收率:80%;1HNMR(400MHz,CD3OD):δ6.87(td,1H,J=8.0,0.8Hz),6.77(td,1H,J=8.0,2.0Hz),6.68-6.64(m,1H),3.67(d,2H,J=1.6Hz),2.60-2.57(m,4H),1.82-1.78(m,4H)。
制备例14
2-氟-3-(吗啉代甲基)苯胺(式(VIII)化合物，其中Rb=2-氟-3-(吗啉代甲基))的制备
将所搅拌的1-(溴甲基)-2-氟-3-硝基苯(2.50g,10.6mmol)与吗啉(2.78g,32.0mmol)的甲苯(24mL)溶液在回流温度下加热2.5h。使反应混合物冷却至室温，然后用1NNaOH洗涤(2×20mL)。含水层用EtOAc萃取(2×25mL)，合并甲苯溶液和EtOAc萃取液，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到4-(2-氟-3-硝基苄基)吗啉(1.95g,89%)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.02-7.97(m,1H),7.83-7.78(m,1H),7.36(td,1H,J=8.0,1.0Hz),3.70-3.67(m,6H),2.51(brt,4H,J=4.6Hz)。
如制备例12所述制备标题化合物，使用(4-(2-氟-3-硝基苄基)吗啉)代替1-(2-氟-3-硝基苯基)-N，N-二甲基甲烷胺。收率:90%;1HNMR(400MHz,CD3OD):δ6.87(td,1H,J=8.0,0.8Hz),6.77(td,1H,J=8.0,2.0Hz),6.68-6.64(m,1H),3.68(brt,4H,J=4.8Hz),3.55(d,2H,J=1.6Hz),2.49(brt,4H,J=4.8Hz)。
制备例15
3-氨基-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=5-氰基-2-(二甲基氨基)甲基)的制备
在0℃下，向所搅拌的4-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(5.00g,20.74mmol)（按照WO07/024945A1所述方法制备）与盐酸二甲胺(2.03g,24.89mmol)在CH2Cl2(70mL)中的混合物滴加三乙胺(6.30g,62.23mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下蒸发反应混合物至干，残余物用水(20mL)稀释，用CH2Cl2萃取(3×100mL)。CH2Cl2溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到4-((二甲基氨基)甲基)-3-硝基苯(3.58g,84%)，为橙色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.15(brs,1H),7.92(brs,1H),7.85(brd,1H,J=7.2Hz),3.80(s,2H),2.27(s,6H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用4-((二甲基氨基)甲基)-3-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:91%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.02(dd,1H,J=7.6,0.4Hz),6.91(dd,1H,J=7.6,1.6Hz),6.84(d,1H,J=1.6Hz),5.05(brs,2H),3.43(s,2H),2.18(s,6H)。
制备例16
3-氨基-2-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-2-(二甲基氨基)甲基)的制备
在0℃下，向所搅拌的2-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(1.10g,4.56mmol)（按照Tetrahedron40:1863-1868(1984)所述方法制备）与盐酸二甲胺(0.74g,9.13mmol)在CH2Cl2(15mL)中的混合物滴加三乙胺(1.85g,18.25mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2h，在减压下蒸发至干。残余物用水(10mL)稀释，用EtOAc萃取(3×50mL)。EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到2-((二甲基氨基)甲基)-3-硝基苯甲腈(0.75g,80%)为黄色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.93(brd,1H,J=8.0Hz),7.85(dd,1H,J=8.0,1.4Hz),7.55(t,1H,J=8.0Hz),3.94(s,2H),2.24(s,6H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用2-((二甲基氨基)甲基)-3-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:93%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.15(t,1H,J=7.6Hz),7.00(dd,1H,J=7.6,0.8Hz),6.83(d,1H,J=7.6Hz),5.06(brs,2H),3.73(s,2H),2.29(s,6H)。
制备例17
3-氨基-5-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-5-(二甲基氨基)甲基)的制备
在0℃下，向所搅拌的3-(溴甲基)-5-硝基苯甲腈(1.50g,6.22mmol)（按照J.Org.Chem.55:1040-1043(1990)所述方法制备）与盐酸二甲胺(1.01g,12.44mmol)在CH2Cl2(15mL)中的混合物滴加三乙胺(1.88g,18.66mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3h，在减压下蒸发至干。残余物用水(15mL)稀释，用EtOAc萃取(3×50mL)。EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-((二甲基氨基)甲基)-5-硝基苯甲腈(1.10g,87%)，为粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.45(s,1H),8.40(d,1H,J=1.6Hz),8.01(s,1H),3.59(s,2H),2.30(s,6H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用3-((二甲基氨基)甲基)-5-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:98%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.96(m,1H),6.88(brd,1H,J=0.8Hz),6.80(dd,1H,J=2.4,1.6Hz),3.86(brs,2H),3.34(s,2H),2.24(s,6H)。
制备例18
3-氨基-4-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=5-氰基-2-(吡咯烷-1-基甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的4-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(5.12g,21.57mmol)与吡咯烷(1.84g,25.88mmol)的CH2Cl2(72mL)溶液滴加三乙胺(6.54g,64.71mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h，在减压下蒸发至干。残余物用水(30mL)稀释，用CH2Cl2萃取(3×100mL)。CH2Cl2溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-硝基-4-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(2.24g,45%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(d,1H,J=1.6Hz),7.94(brd,1H,J=8.0Hz),7.83(dd,1H,J=8.0,1.6Hz),3.99(s,2H),2.54(brs,4H),1.79(m,4H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用3-硝基-4-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:91%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.06(d,1H,J=7.6Hz),6.91(dd,1H,J=7.6,1.6Hz),6.84(d,1H,J=1.6Hz),5.08(brs,2H),3.64(s,2H),2.47(brs,4H),1.78(brs,4H)。
制备例19
3-氨基-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-2-(吡咯烷-1-基甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的2-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(1.10g,4.56mmol)与吡咯烷(0.65g,9.13mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加三乙胺(1.85g,18.25mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，在减压下蒸发至干。残余物用水(10mL)稀释，用CH2Cl2萃取(3×50mL)。CH2Cl2溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-硝基-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(0.96g,91%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.90(d,1H,J=7.6Hz),7.83(dd,1H,J=7.6,0.8Hz),7.52(t,1H,J=7.6Hz),4.14(s,2H),2.52(brs,4H),1.72(brs,4H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用3-硝基-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:93%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.13(t,1H,J=7.8Hz),6.99(dd,1H,J=7.8,1.2Hz),6.82(d,1H,J=8.0Hz),5.11(brs,2H),3.91(s,2H),2.58(brs,4H),1.81(brs,4H)。
制备例20
3-氨基-5-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-5-(吡咯烷-1-基甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的3-(溴甲基)-5-硝基苯甲腈(1.50g,6.22mmol)与吡咯烷(0.53g,7.46mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加三乙胺(1.88g,18.68mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。在减压下蒸发反应混合物至干，残余物用水(15mL)稀释，用EtOAc萃取(3×50mL)。EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-硝基-5-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈(1.30g,90%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.45(brs,1H),8.39(brt,1H,J=1.6Hz),8.02(brs,1H),3.78(s,2H),2.56(brs,4H),1.84(brs,4H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用3-硝基-5-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:85%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.99(pseudot,1H,J=1.6Hz),6.94(pseudot,1H,J=1.6Hz),6.79(dd,1H,J=2.4,1.6Hz),3.87(brs,2H),3.56(s,2H),2.54(m,4H),1.81(m,4H)。
制备例21
3-氨基-4-(吗啉代甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=5-氰基-2-(吗啉代甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的4-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(7.12g,29.55mmol)与吗啉(3.09g,35.45mmol)的CH2Cl2(98mL)溶液滴加三乙胺(8.97g,88.64mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h，在减压下蒸发至干。残余物用水(40mL)稀释，用CH2Cl2萃取(3×100mL)。CH2Cl2溶液用水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到4-(吗啉代甲基)-3-硝基苯甲腈(5.84g,80%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(s,1H),7.83(brs,2H),3.84(s,2H),3.67(t,4H,J=4.6Hz),2.45(t,4H,J=4.6Hz)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用4-(吗啉代甲基)-3-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:78%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.05(d,1H,J=8.0Hz),6.92(dd,1H,J=8.0,1.6Hz),6.86(d,1H,J=1.6Hz),5.02(brs,2H),3.68(brt,4H,J=4.0Hz),3.53(s,2H),2.41(brs,4H)。
制备例22
3-氨基-2-(吗啉代甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-2-(吗啉代甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的2-(溴甲基)-3-硝基苯甲腈(1.10g,4.56mmol)与吗啉(0.80g,9.13mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加三乙胺(1.85g,18.25mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5h，在减压下蒸发至干。残余物用水(10mL)稀释，用CH2Cl2萃取(3×50mL)。CH2Cl2溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到2-(吗啉代甲基)-3-硝基苯甲腈(1.02g,90%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.90(brd,1H,J=8.0Hz),7.84(dd,1H,J=8.0,1.2Hz),7.56(t,1H,J=8.0Hz),3.99(s,2H),3.60(brt,4H,J=4.4Hz),2.46(brs,4H)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用2-(吗啉代甲基)-3-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:82%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.15(t,1H,J=7.6Hz),7.01(d,1H,J=7.6Hz),6.83(d,1H,J=7.6Hz),5.00(brs,2H),3.78(s,2H),3.69(brs,4H),2.50(brs,4H)。
制备例23
3-氨基-5-(吗啉代甲基)苯甲腈(式(VIII)化合物，其中Rb=3-氰基-5-(吗啉代甲基))的制备
在0℃下，向所搅拌的3-(溴甲基)-5-硝基苯甲腈(1.50g,6.22mmol)与吗啉(0.65g,7.46mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加三乙胺(1.88g,18.66mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下蒸发至干。残余物用水(15mL)稀释，用EtOAc萃取(3×50mL)。EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-(吗啉代甲基)-5-硝基苯甲腈(0.87g,85%)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.45(brs,1H),8.41(brs,1H),8.01(brs,1H),3.74(brt,4H,J=4.4Hz),3.64(s,2H),2.48(brt,4H,J=4.4Hz)。
如制备例11所述制备标题化合物，使用3-(吗啉代甲基)-5-硝基苯甲腈代替3-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈。收率:85%;1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.00(brt,1H,J=1.6Hz),6.93(brs,1H),6.81(dd,1H,J=2.4,1.6Hz),3.88(brs,2H),3.74(brt,4H,J=4.6Hz),3.44(s,2H),2.47(brs,4H)。
制备例24
2-(2-氟苯氧基)乙醛(式(IX)化合物，其中Rb=2-氟,X=O)的制备。该化合物按下列2步制备。
将所搅拌的2-氟苯酚(1.00g,8.92mmol)、2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1.75g,8.92mmol)与K2CO3(1.47g,10.7mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物倒入冰冷的水(15mL)中，用EtOAc萃取(2×100mL)。EtOAc溶液用水(25mL)和盐水(25mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-2-氟苯(1.65g,81%)，为粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.09-6.96(m,3H),6.93-6.87(m,1H),4.85(t,1H,J=5.2Hz),4.07(d,2H,J=5.2Hz),3.82-3.74(m,2H),3.69-3.61(m,2H),1.24(t,6H,J=7.0Hz)。
在0℃下，向所搅拌的1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-2-氟苯(1.65g,7.23mmol)在1,4-二噁烷(50mL)与水(40mL)混合物中的溶液加入浓HCl(17.6mL)，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃，用饱和NaHCO3溶液中和，用EtOAc萃取(2×200mL)。EtOAC溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(0.78g,71%)，为粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.87(s,1H),7.12(ddd,1H,J=11.4,8.2,1.6Hz),7.08-7.04(m,1H),7.01-6.95(m,1H),6.91(td.1H,J=8.2,1.6Hz),4.63(s,2H)。
制备例25
2-(2-氟苯硫基)乙醛(式(IX)化合物，其中Rb=2-氟,X=S)的制备。该化合物按下列2步制备。
将2-氟苯硫酚(1.00g,7.80mmol)、溴乙醛二乙缩醛(1.41mL,9.36mmol)与Cs2CO3(3.05g,9.36mmol)在无水DMF(20mL)中的混合物在N2和室温下搅拌过夜。使反应混合物通过烧结漏斗过滤，滤液用水(20mL)稀释。含水混合物用Et2O萃取(3×100mL)，有机相经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到(2,2-二乙氧基乙基)(2-氟苯基)硫烷(1.81g,95%)，为粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.46-7.41(m,1H),7.24-7.18(m,1H),7.09-7.02(m,1H),4.64(t,1H,J=5.6Hz),3.69-3.61(m,2H),3.56-3.49(m,2H),3.10(d,2H,J=5.6Hz),1.17(t,6H,J=7.2Hz)。
在0℃下，向所搅拌的(2,2-二乙氧基乙基)(2-氟苯基)硫烷(1.00g,4.09mmol)在1,4-二噁烷(30mL)与水(25mL)混合物中的溶液加入浓HCl(9mL)，将混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物冷却至0℃，用饱和NaHCO3溶液中和，用CH2Cl2萃取(3×50mL)。有机相用水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干，得到标题化合物(0.59g,85%)，为粘性液体，立即用于下一步，无需进一步纯化。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(td,1H,J=3.2,1.2Hz),7.42-7.38(m,1H),7.31-7.25(m,1H),7.12-7.06(m,2H),3.58(d,2H,J=3.2Hz)。
制备例26
3-(甲基(2-氧代乙基)氨基)苯甲腈(式(IX)化合物，其中Rb=3-氰基、X=NMe)的制备。该化合物按下列3步制备，始于可商购的3-氨基苯甲腈。
在0℃下，向所搅拌的3-氨基苯甲腈(2.50g,21.10mmol)的无水DMSO(30mL)溶液逐份加入NaH(0.61g,25.39mmol)，将混合物在室温下搅拌20min，然后用溴乙醛二乙缩醛(4.20g,21.10mmol)处理。2h后，在0℃下向其中缓慢加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)，反应混合物用EtOAc萃取(2×50mL)。EtOAc溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-(2,2-二乙氧基乙基氨基)苯甲腈(0.86g,17%)，为浅橙色油。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.22(td,1H,J=7.8,0.6Hz),6.97(m,1H),6.84-6.81(m,2H),4.67(t,1H,J=5.4Hz),3.77-3.69(m,2H),3.61-3.53(m,2H),3.24(d,2H,J=5.6Hz),1.24(t,6H,J=7.0Hz)。
在0℃下，向所搅拌的3-(2,2-二乙氧基乙基氨基)苯甲腈(0.84g,3.59mmol)的无水DMF(5mL)溶液逐份加入NaH(0.10g,4.30mmol)。20min后，加入MeI(0.61g,4.30mmol)，将混合物在室温下搅拌6h。将反应混合物冷却至0℃，向其中滴加NH4Cl(10mL)溶液。含水混合物用CHCl3萃取(2×30mL)，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到3-((2,2-二乙氧基乙基)(甲基)氨基)苯甲腈(0.65g,73%)，为粘性液体。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.28-7.24(m,1H),6.96-6.93(m,3H),4.60(t,1H,J=5.2Hz),3.76-3.69(m,2H),3.55-3.47(m,2H),3.46(d,2H,J=5.2Hz),3.02(s,3H),1.20(t,6H,J=7.0Hz)。
在0℃下，向所搅拌的3-((2,2-二乙氧基乙基)(甲基)氨基)苯甲腈(0.65g,2.61mmol)的无水二噁烷(6mL)溶液滴加1NHCl(4.30mmol)，将混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，用NaHCO3水溶液中和，用CHCl3萃取(2×30mL)。CHCl3溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干，得到标题化合物(0.24g,52%)，为粘性液体，无需进一步纯化即可用于下一步。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.74(t,1H,J=0.8Hz),7.29(ddd,1H,J=8.8,7.4,0.8HZ),7.02(ddd,1H,J=7.4,0.8,1.2Hz),6.86(dd,1H,J=2.4,1.2Hz),6.82(ddd,1H,J=8.8,2.4,1.2Hz)4.14(d,2H,J=0.8Hz),3.10(s,3H)。
制备例27
2-((2-氟苯基)(甲基)氨基)乙醛(式(IX)化合物，其中Rb=2-氟,X=NMe)的制备。该化合物按下列3步制备，始于可商购的2-氟苯胺。
将所搅拌的2-氟苯胺(2.00g,17.90mmol)、溴乙醛二甲缩醛(3.25mL,21.40mmol)与Cs2CO3(11.70g,35.80mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物加热至120℃过夜。在减压下蒸发反应混合物至干，残余物用Et2O萃取(2×150mL)。Et2O溶液用水(4×50mL)和盐水(2×50mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用EtOAc与己烷的混合物作为洗脱剂，得到N-(2,2-二乙氧基乙基)-2-氟苯胺(2.00g,49%)，为无色的油。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.03-6.95(m,2H),6.82-6.77(m,1H),6.71-6.65(m,1H),4.72(t,1H,J=5.6Hz),3.78-3.71(m,2H),3.62-3.54(m,2H),3.29(d,2H,J=5.6Hz),1.26-1.22(m,6H)。
在0℃下，向所搅拌的N-(2,2-二乙氧基乙基)-2-氟苯胺(1.00g,4.40mmol)的无水DMF(10mL)溶液逐份加入NaH(0.16g,6.60mmol)。30min后，加入MeI(0.5mL,8.80mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc萃取(2×100mL)，EtOAc溶液用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干，得到N-(2,2-二乙氧基乙基)-2-氟-N-甲基苯胺(0.41g,38%)，为无色的油。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.05-6.96(m,3H),6.83-6.81(m,1H),4.69(t,1H,J=5.2Hz),3.72-3.64(m,2H),3.55-3.49(m,2H),3.33(dd,2H,J=5.2,1.2Hz),2.97(s,3H),1.19-1.53(m,6H)。
在0℃下，向所搅拌的N-(2,2-二乙氧基乙基)-2-氟-N-甲基苯胺(0.40g,1.60mmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液滴加2.5NHCl(5mL)，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃，用饱和NaHCO3溶液中和，用CHCl3萃取(2×50mL)。CHCl3溶液用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干，得到标题化合物(0.27g,98%)，为无色的油，无需进一步纯化即可用于下一步。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.80(dd,1H,J=2.4,1.2Hz),7.07-6.89(m,4H),3.91(dd,2H,J=1.8,0.8Hz),2.97(s,3H)。
实践例1
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺(实施例37)的制备
向所搅拌的4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-甲醛(4.00g,13.14mmol)的1,2-二氯乙烷(240mL)溶液加入3-乙烯基苯胺(2.36g,19.71mmol)和AcOH(0.79g,13.14mmol)，将混合物在80℃下加热2h。将反应混合物冷却至0℃，向其中加入NaBH(OAc)3(5.56g,26.20mmol)。将混合物在40℃下搅拌过夜，然后在0℃下用10%K2CO3溶液调节反应混合物的pH至7-8。将反应混合物用5%MeOH的CHCl3溶液萃取(2×200mL)，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2(1:19(v/v))的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(2.89g,63%)，为固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.59(brs,1H),8.94(s,1H),8.37(s,1H),7.81(d,1H,J=9.2Hz),7.77(d,1H,J=9.2Hz),7.45(t,1H,J=7.8Hz),7.20(brd,1H,重叠,J=7.6Hz),7.15(t,1H,重叠,J=7.8Hz),7.00(d,1H,J=8.0Hz),6.86(d,1H,J=7.6Hz),6.75(t,1H,J=2.0Hz),6.63(dd,1H,重叠,J=17.6,10.8Hz),6.61(dd,1H,重叠,J=8.0,2.0Hz),5.69(dd,1H,J=17.6,0.8Hz),5.21(dd,1H,J=10.8,0.8Hz),4.55(s,2H),4.39(brs,1H),2.51(s,3H);MS(ESI)m/z408.21(MH+).
实践例2
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺氢氯化物(实施例38)的制备
在50℃下加热所搅拌的N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺(1.00g,2.45mmol)在无水CHCl3(12mL)中的混悬液，得到澄清的溶液。将CHCl3溶液冷却至0℃，向其中加入1.0MHCl的Et2O溶液(7.36mL,7.36mmol)。5min后，在N2下过滤沉淀，在真空中经P2O5充分干燥，得到标题化合物(1.07g,98%)，为黄色粉末。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(dd,1H,J=1.6,0.8Hz),8.65(s,1H),7.97(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.86(dd,1H,重叠,J=9.2,1.6Hz),7.85(t,1H,重叠,J=7.8Hz),7.65(d,1H,J=8.0Hz),7.38(d,1H,J=7.6Hz),7.12(t,1H,J=7.8Hz),6.91(t,1H,J=1.6Hz),6.79(d,1H,J=7.6Hz),6.71(dd,1H,J=8.0,1.6Hz),6.64(dd,1H,J=17.6,11.2Hz),5.80(dd,1H,J=17.6,0.8Hz),5.20(dd,1H,J=11.2,0.8Hz),4.79(s,2H),2.51(s,3H)。
实践例3
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺硫酸盐(实施例39)的制备
在0C下，向所搅拌的N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺(100mg,0.25mmol)在无水EtOH(2mL)中的混悬液加入10%H2SO4的无水EtOH溶液(0.20mL,0.37mmol)。使混合物升温至室温，搅拌10min。将反应混合物用无水Et2O(8mL)稀释，搅拌另外10min。在N2下过滤沉淀，用无水Et2O洗涤(4×4mL)，然后在真空中经P2O5充分干燥，得到标题化合物(79mg,64%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(dd,1H,J=1.6,0.8Hz),8.63(s,1H),7.98(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.84(t,1H,J=8.0Hz),7.76(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.43(d,1H,J=7.6Hz),7.40(d,1H,J=8.0Hz),7.13(t,1H,J=7.8Hz),6.80(brs,1H),6.79(d,1H,重叠,J=7.6Hz),6.64(dd,1H,重叠,J=17.6,11.2Hz),6.63(dd,1H,重叠,J=7.6,2.0Hz),5.74(dd,1H,J=17.6,0.8Hz),5.21(dd,1H,J=11.2,0.8Hz),4.68(s,2H),2.58(s,3H)。
实践例4
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈(实施例116)的制备
向所搅拌的4-((1,2,4)三唑并(1,5-a)吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-甲醛(0.50g,1.64mmol)的1,2-二氯乙烷(30mL)溶液加入3-氨基-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈(0.43g,2.46mmol)和AcOH(0.20g,3.29mmol)，将混合物在80℃下加热过夜。在减压下浓缩反应混合物，将残余物溶于无水MeOH(30mL)。在0℃下，向该甲醇溶液加入NaBH4(0.25g,6.57mmol)，然后使混合物升温至室温，搅拌另外3h。在0℃下用1NHCl调节反应混合物的pH至7-8，然后在减压下除去MeOH。含水混合物用CH2Cl2萃取(2×50mL)，CH2Cl2溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2(1:19(v/v))的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(0.60g,79%)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(s,1H),8.36(s,1H),7.86(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.78(dd,1H,J=9.2,0.8Hz),7.47(t,1H,J=7.6Hz),7.23(brd,1H,J=7.6Hz),7.09(d,1H,J=7.6Hz),7.01(d,1H,J=7.6Hz),6.98(dd,1H,J=7.6,1.6Hz),6.93(brs,1H),4.59(s,2H),3.63(s,2H),2.53(s,3H),2.33(s,6H);MS(ESI)m/z464.23(MH+).
按照类似于上述实践例1-4所述方式制备下表1所列化合物。在表1中包括这些化合物的质谱数据。
【表1】
实践例5
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-N-甲基苯胺(实施例140)的制备
向所搅拌的1-((1,2,4)三唑并(1,5-a)吡啶-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮(0.20g,0.75mmol)在叔丁基甲基醚(10mL)与MeOH(8mL)混合物中的溶液加入2-((2-氟苯基)(甲基)氨基)乙醛(190mg,1.13mmol)和NH4OAc(0.15g,1.88mmol)，将混合物在室温下搅拌2h。用饱和NaHCO3水溶液调节混合物的pH至8。除去溶剂后，将反应混合物用CHCl3萃取(2×100mL)，CHCl3溶液用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2(1:19(v/v))的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(90mg,32%)，为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(brs,1H),8.37(s,1H),7.82(dd,1H,J=9.2,1.6Hz),7.78(dd,1H,J=9.2,1.2Hz),7.49(t,1H,J=7.8Hz),7.25(brd,1H,J=7.6Hz),7.14-7.06(m,3H),7.04(d,1H,J=7.6Hz),7.00-6.94(m,1H),4.44(s,2H),2.91(s,3H),2.58(s,3H);MS(ESI)m/z414.20(MH+).
实践例6
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯甲腈(实施例145)的制备
向所搅拌的1-((1,2,4)三唑并(1,5-a)吡啶-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二酮(4.00g,15.02mmol)在叔丁基甲基醚(30mL)与MeOH(30mL)混合物中的溶液加入3-(甲酰基甲基)苯甲腈（按照WO02/096875A1所述方法制备）(6.54g,45.07mmol)和NH4OAc(11.58g,150.24mmol)，将混合物在室温下搅拌90min。用饱和NaHCO3水溶液调节混合物的pH至8。除去溶剂后，将混合物用EtOAc萃取(2×150mL)，EtOAc溶液用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2(1:19(v/v))的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(1.92g,33%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(brs,1H),9.53(brs,1H),8.49(s,1H),7.96(dd,1H,J=9.2,1.8Hz),7.84(d,1H,J=2.0Hz),7.82(d,1H,J=9.2Hz),7.74-7.71(m,2H),7.69(t,1H,重叠,J=7.6Hz),7.56(t,1H,J=7.8Hz),7.47(brs,1H),7.15(d,1H,J=7.6Hz),4.18(s,2H),2.47(s,3H);MS(ESI)m/z392.18(MH+).
实践例7
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯甲酰胺(实施例147)的制备
在室温下，向所搅拌的3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯甲腈(41mg,0.10mmol)的EtOH(2mL)溶液加入28%H2O2(13.9mL,0.11mmol)和1NNaOH(0.39mL,0.39mmol)。将混合物加热至60℃达1h，然后在0℃下向其中加入1NHCl以调节pH7-8。除去溶剂后，残余物用CH2Cl2萃取(2×15mL)。CH2Cl2溶液用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下蒸发至干。残余物经过硅胶MPLC纯化，使用MeOH与CH2Cl2(1:9(v/v))的混合物作为洗脱剂，得到标题化合物(15mg,35%)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(brs,1H),8.32(s,1H),7.77(s,1H),7.76(dd,1H,重叠,J=9.2,1.6Hz),7.69(d,1H,J=9.2Hz),7.56(d,1H,J=8.0Hz),7.44(t,1H,J=7.6Hz),7.39(d,1H,J=7.6Hz),7.26(t,1H,J=8.0Hz),7.21(d,1H,J=7.6Hz),6.98(d,1H,J=7.6Hz),6.60(brs,1H),6.27(brs,1H),4.15(s,2H),2.44(s,3H);MS(ESI)m/z410.19(MH+).
按照类似于上述实践例5-7所述方式制备下表2所列化合物。在表2中包括这些化合物的质谱数据。
【表2】
生物学数据
利用下列测定法可以评估本发明化合物的生物学活性：
评价ALK5激酶磷酸化的抑制作用的无细胞测定法
使用杆状病毒表达系统，使ALK5蛋白在Sr9昆虫细胞中表达为人重组GST-融合蛋白。利用GSH-琼脂糖(Sigma-Aldrich)亲和色谱纯化所表达的蛋白质。在来自PerkinElmer(Boston，MA，USA)的96-孔FlashPlatesTM中进行激酶测定，反应体积为50μL。分四个步骤吸移反应鸡尾酒试剂，顺序如下：20μL测定缓冲液(标准缓冲液)，5μLATP水溶液，5μL含每种供试式(I)化合物的10％DMSO，10μLGSK3(14-27)(200ng)/10μLALK5溶液(1ng)(预混合)。反应鸡尾酒试剂含有60mMHEPES-NaOH，pH7.5、3mMMgCl2、3mMMnCl2、3μMNa3VO4、1.2mMDTT、50μg/mLPEG20000、1μM[γ-33P]-ATP(大约2.5x105cpm每孔）、200ng/10μLGSK3(14-27)和1ng/10μLALK5。使反应鸡尾酒试剂在30℃下温育60min。用50μL2%(v/v)H3PO4终止反应，将平板抽吸，用200μL0.9%(w/v)NaCl洗涤两次。用BeckmanCoulterBiomek2000自动系统进行测定。用微量平板闪烁计数器(Microbeta,Wallac)测定33Pi的结合（以“cpm”计）。
式(I)化合物通常表现小于1μM的IC50值；有些表现小于0.1μM的IC50值；有些甚至表现小于10nM的IC50值，如表3所示。
【表3】
实施例 IC50(nM) 实施例 IC50(nM)
1 13.10 51 12.30
2 6.68 52 23.40
5 9.41 53 60.10
6 17.40 54 9.93
7 8.96 55 6.70
8 9.84 58 39.60
9 6.39 59 19.50
10 9.41 60 4.83
12 6.16 63 32.10
14 10.70 64 20.60
15 12.30 65 29.70
16 7.54 66 9.14
17 14.60 67 54.60
18 6.54 68 11.00
20 4.53 69 24.50
22 17.10 70 12.80
23 13.90 71 59.10
24 9.07 72 16.60
26 15.60 73 78.00
27 18.00 74 39.50
28 17.40 75 15.40
29 14.30 76 39.00
30 10.60 77 15.30
31 8.01 78 15.10
33 14.20 79 46.60
34 16.20 138 9.40
35 46.00 139 23.20
36 14.20 140 49.80
37 11.90 141 118.00
40 29.60 142 153.00
42 14.40 143 19.80
43 14.30 144 25.10
44 48.10 145 12.40
45 57.50 147 40.00
46 44.20 148 13.10
47 14.40 149 25.40
48 24.10 150 23.90
49 15.30 151 22.50
50 50.70 152 20.70
评价ALK4激酶磷酸化的抑制作用的无细胞测定法
可以按照与上述ALK5抑制作用所述相似的方式测定ALK4激酶磷酸化被供试式(I)化合物所抑制，除了使用GST-标记的ALK4(InvitrogenCorporation)和RBER-CHK肽代替GST-标记的ALK5和GSK3(14-27)以外。
式(I)化合物通常表现小于1μM的IC50值；有些表现小于0.1μM的IC50值；有些甚至表现小于10nM的IC50值。
激酶选择性
在来自PerkinElmer的96-孔FlashPlatesTM中进行激酶测定，反应体积为50μL。分四个步骤吸移反应鸡尾酒试剂，顺序如下：15μLATP水溶液，20μL测定缓冲液（标准缓冲液），5μL含实施例2的10%DMSO，10μL酶/底物混合物的水溶液。反应鸡尾酒试剂含有70mMHEPES-NaOH,pH7.5、3mMMnCl2、3μMNa3VO4、1.2mMDTT、1μM[γ-33P]-ATP（大约6x105cpm每孔）、蛋白激酶（可变量）和底物（可变量）。使反应鸡尾酒试剂在30℃下温育60min。用50μL2%(v/v)H3PO4终止反应，将平板抽吸，用200μL0.9%(w/v)NaCl洗涤两次。全部测定都用BeckmanCoulterBiomek2000/SL自动系统进行。用微量平板闪烁计数器测定33Pi的结合（以“cpm”计）。
【表4】
蛋白激酶 IC50(μM) 10μM的抑制% 1μM的抑制%
ALK5 0.00668
ALK4 0.0173
P38α 1.720
VEGF-R1 0.391
VEGF-R2 0.097
VEGF-R3 0.257
ALK1 66 20
ALK2 71 17
ALK3 27 -6
AKT1 3 0
CDK1/CycA 2 5
CHK1 5 -2
DAPK1 11 5
EGF-R wt 43 -8
ERK1 66 17
GSK3α 15 10
MEK1 wt 47 14
MET wt 12 -5
MST1 3 -7
PAK1 -3 -7
PDGFRα wt 91 53
PDGFRβ 87 47
PKA 18 -7
PKCα 4 -9
ROCK1 9 3
RPS6KA1 14 6
STK23 -1 -4
评价TGF-β信号传递的细胞抑制作用的测定法
将具有p3TP-Luc(neo)表达质粒的HaCaT-3TP-Luc稳定细胞或4T1-3TP-Luc稳定细胞分别按照2.5×104细胞/孔或5×105细胞/孔的浓度接种在96-孔平板中。当融合率为大约60-70%时，在有或没有每种供试式(I)化合物的存在下，在37℃和5%CO2中用含TGF-β1(2ng/mL)的0.2%FBS处理细胞达24h。按照厂商指导利用LuciferaseAssaySystem(Promega)制备细胞溶解产物，借助发光计MicroLumatPlus(Berthold,Germany)测量发光。
式(I)化合物通常表现小于1μM的IC50值；有些表现小于0.1μM的IC50值；有些甚至表现小于10nM的IC50值。
免疫荧光测定法
将MCF10A细胞按照2×105细胞/孔的浓度平板接种在6-孔平板的盖玻片上。12h后，当细胞被附着时，改变10%FBS培养基为0.5%FBS培养基。二十四小时后，在有或没有实施例2(1μM)的存在下用TGF-β1(2ng/mL)处理细胞达2h。然后，在室温下将细胞用4%甲醛溶液固定30min，用淬灭溶液(含50mMNH4Cl的PBS)淬灭15min。用PBS洗涤三次后，使细胞与封闭/渗透溶液(含1%BSA和0.1%TritonX-100的PBS)在室温下温育1h，与抗-Smad2/3抗体(BDBiosciences,FranklinLakes,NJ,USA)在4℃下温育过夜。借助Cy3-缀合的山羊抗-小鼠IgG(JacksonImmunoResearchLaboratories,BarHarbor,ME,USA)使荧光可视化。用DAPI溶液染色相同细胞的核。利用LSM510META激光同焦显微镜检系统(CarlZeiss,Germany)分析细胞。
实施例2抑制了MCF10A细胞中TGF-β1-诱导的Smad2/3核易位。
伤口愈合测定法
将MCF10A细胞按照2×105细胞/孔的浓度接种在6-孔平板中。当每孔被细胞占据超过80%的面积时，改变10%FBS为0.2%FBS。24h后，借助塑料吸移管尖制造伤口，然后在有或没有实施例2(1μM)的存在下用TGF-β1(2ng/mL)处理细胞达16h。基于由显微镜采集的细胞相衬图象，根据ImageJ程序(NationalInstitutesofHealth,MD,USA)计算从0至16h的伤口面积变化。
实施例2抑制了MCF10A细胞中TGF-β1-诱导的细胞迁移。
Matrigel侵袭测定法
将Transwells(6.5mm直径,8μm孔径;Corning,Lowell,MA,USA)的上表面涂以20μL经稀释的Matrigel(BDBiosciences)。在有或没有实施例2的存在下，在含有或不含TGF-β1(2ng/mL)的无血清培养基中，将4T1细胞按照4×104细胞/孔的密度接种在Transwell的上部空间上。在有或没有实施例2的存在下，向下部空间填充含有TGF-β1(2ng/mL)的10%FBS。在37℃和5%CO2中温育20h后，用棉签除去残留在膜的上表面上的细胞，利用荧光显微镜检观察残留在底表面上的DAPI-染色细胞。从5个随机视野得到每个视野的平均细胞数。
实施例2在matrigel侵袭测定法中抑制了TGF-β1-诱导的细胞侵袭。
细胞生长研究
将4T1细胞或MCF10A细胞按照每孔5×103细胞的浓度接种在96-孔平板中。细胞被附着后，在0.2%血清培养基中用实施例2的DMSO溶液处理细胞。温育四天后，借助SRB测定法测定细胞生存能力。
实施例2显示对4T1细胞生长没有影响，轻微增加MCF10A细胞生长且无显著性，从而提示了实施例2的抗-转移效应并非由于原有肿瘤的生长抑制。
对BALB/c4T1异种移植小鼠模型的抗-转移效应
从OrientBioInc.(Seoul,Korea)购买雌性BALB/c小鼠。使动物供养在温控室内(22℃)，自由供应食物和水。将4T1细胞(1.2×104细胞)悬浮在PBS中，植入五至六周龄雌性BALB/c小鼠的左#4乳脂垫（第0天）。在实验1中，处置始于肿瘤植入之后（第0天）。将实施例3(13.6或27.3mg/kg)溶于水，口服给予小鼠BID，每周连续五天，持续四周。在实验2中，处置始于第4天。将实施例2(5、10、20或40mg/kg)溶于人工胃液制剂，口服给予小鼠，每周连续五天，持续三周。在实验3中，处置始于第4天。将实施例2(5、10、20或40mg/kg)溶于人工胃液制剂，口服给予小鼠，每隔一天一次（每周三次），持续24天。在实验4中，将4T1细胞(1×104细胞)悬浮在PBS中，植入十周龄雌性BALB/c小鼠的左#4乳脂垫（第0天）。处置始于第10天。将实施例61(43.6mg/kg)溶于盐水，腹膜内给予小鼠，每隔一天一次，持续2.5周。在全部实验中，在最后一次给药后24至72h处死小鼠，立即向气管内注射含15%印度墨汁溶液(HardyDiagnostics)的PBS。分离经印度墨汁染色的肺，用Feket氏溶液（含60%乙醇、3%甲醛和4%乙酸的PBS）退色至少20min。统计左肺叶表面上转移结节的数量，用数码照相机拍摄肺的照片。利用测径规测量肿瘤尺寸，利用下列方程计算肿瘤体积：
肿瘤体积=(0.5236)×(宽度)2×(长度)
实施例2、3和61显著减少了肺上转移结节的数量。
在实验3中，进行蛋白质印迹分析，以检查实施例2对肿瘤组织中Smad2磷酸化的影响。在处死小鼠之前2h，对小鼠静脉内给予载体缓冲液(4mMHCl,1mg/mLBSA)或者含TGF-β1(50ng/小鼠)的载体缓冲液。在冰上，使来自小鼠的肿瘤组织在RIPA缓冲液[50mMTris,pH7.5,150mMNaCl,0.1%十二烷基硫酸钠,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,1mMNaF,1mMNa3VO4,1mMPMSF,蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂(1片RocheDiagnosticsGmbH蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂/10mL)(Roche)]中溶解20min。在4℃下，以13000rpm离心20min，使溶解产物澄清。利用Micro-BCA(bicinchoninicacid)蛋白质测定试剂盒(ThermoScientific)测定上清液的蛋白质含量。借助聚丙烯酰胺凝胶电泳分离含有20-50μg总蛋白质的溶解产物，然后电泳转移至聚偏二氟乙烯转移膜(Millipore,Billerica,MA,USA)。将膜用含有0.5%Tween-20(PBST)的含5%BSA(Sigma-Aldrich)的PBS封闭1h，与下列抗体之一在4℃下温育过夜：含抗-磷-Smad2(Millipore)、抗-Smad2/3(BDTransductionLaboratories,NJ,USA)或抗-β-肌动蛋白(Sigma-Aldrich)的PBST，其中含有1%BSA。将膜用PBST洗涤三次，与辣根过氧化物酶(HRP)-缀合的山羊抗-小鼠抗体或HRP-缀合的山羊抗-兔抗体(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA,USA)在室温下温育1h。利用蛋白质印迹鲁米诺试剂(SantaCruzBiotechnology)检测所结合的抗体。利用密度计LAS-3000成像仪(FUJIFILM,Tokyo,Japan)分析谱带强度。
实施例2抑制了肿瘤组织中TGF-β1-诱导的Smad2磷酸化。
对MMTV/c-Neu小鼠乳腺癌模型的抗转移效应
从JacksonLaboratory(BarHarbor,ME,USA)购买MMTV/c-Neu雌性转基因小鼠。使动物供养在温控SPF房间内(22℃)，自由供应食物和水。在实验1中，将实施例61(43.6mg/kg)溶于盐水，腹膜内给予三十二周龄MMTV/c-Neu小鼠，每隔一天一次，持续三周。在实验2中，将实施例3(43.6mg/kg)溶于盐水，腹膜内给予三十二周龄MMTV/c-Neu小鼠，每隔一天一次，持续十周。最后一次给药后24h处死小鼠，借助苏木精与曙红(H&E)染色分析乳腺肿瘤和肺的组织。为了测定乳腺肿瘤和肺组织中的β-酪蛋白mRNA水平，按照厂商指导利用TRIzol试剂(InvitrogenCorporation)和RNeasyMini试剂盒(Qiagen)从这些组织中分离总RNA。在37℃下，借助MMLVRTase(InvitrogenCorporation)，使用随机引物(InvitrogenCorporation)从2μg总RNA合成cDNA达1h，使用Taq聚合物酶(Promega)和下列基因特异性引物进行PCR扩增：小鼠GAPDH(正向)5’-ATGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3’与(反向)5’-TTGAAGTCGCAGGAGACAACC-3’，小鼠β-酪蛋白(正向)5’-TCCCACAAAACATCCAGCC-3’与(反向)5’-ACGGAATGTTGTGGAGTGG-3’。借助琼脂糖凝胶电泳分析所扩增的DNA。
实施例61显著减少肺中转移性损伤的数量。在MMTV/c-Neu小鼠的肺中检测到显著水平的β-酪蛋白（一种乳腺分化标记物）mRNA。实施例3和61显著抑制肺中的β-酪蛋白mRNA表达水平，证明了它们的抗转移效应。
借助明胶酶谱学测量原始乳腺肿瘤中MMP-9和MMP-2的活性。在冰上，使来自小鼠的肿瘤组织(30mg)在500μLRIPA缓冲液（50mMTris,150mMNaCl,0.1%十二烷基硫酸钠,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,不含EDTA的蛋白酶抑制剂）中溶解10-20min。在4℃下，以13000rpm离心10min，使溶解产物澄清。利用Micro-BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoScientific)测定上清液的蛋白质含量。向含有15μg总蛋白质的溶解产物加入装载缓冲液（0.5MTris,pH6.8,50%甘油,10%SDS和1%溴酚蓝溶液），制备装载样本。将装载样本在60℃下加热5min，在含有0.2%明胶的10%聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离。在室温下，将凝胶用洗涤缓冲液[2.5%Triton-X100,0.05MTris-HCl,pH7.5和0.1MNaCl]洗涤30min。然后，在37℃下，使凝胶在温育缓冲液[0.05MTris-HCl,pH7.5,0.15MNaCl,0.01MCaCl2,0.02%NaN3和1μMZnCl2]中温育16-18h，同时振摇。在室温下，将凝胶用含有5%甲醇与10%乙酸的0.5%库马斯蓝R250溶液染色2-4h，再在室温下用退色溶液（5%甲醇与10%乙酸）退色30min。利用密度计LAS-3000成像仪(FUJIFILM)，以cybergreen模式得到凝胶图象。
实施例3显著抑制原始乳腺肿瘤中MMP-9和MMP-2的活性。
对胆管-结扎的肝纤维化模型的抗纤维化效应
从OrientBioInc.购买六周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。在实验1中，将体重180-200g的SD大鼠随机分成五个实验组：假手术的对照大鼠(n=5)，假手术的实施例3处置大鼠(43.6mg/kg,n=5)，胆管-结扎的(BDL)大鼠(n=10)，用21.8或43.6mg/kg实施例3处置的BDL大鼠(n=10)。在实验2中，将体重180-200g的SD大鼠随机分成五个实验组：假手术的对照大鼠(n=5)，BDL大鼠(n=10)，用5、10或20mg/kg实施例2处置的BDL大鼠(n=10)。就BDL而言，将动物用zoletil(20mg/kg)和赛拉嗪(10mg/kg)麻醉，暴露共用胆管，利用3-0丝线双-结扎。将第一条结扎线置于肝管接合处下方，第二条置于胰管入口上方。然后切割双结扎线之间的共用胆管。在假手术的大鼠中，在腹部开一切口，然后缝合，无需任何处置。处置开始于手术操作后2h以内。对大鼠口服给予实施例3的盐水溶液（实验1）或者实施例2的人工胃液制剂溶液（实验2），每周三次，持续四周，BDL始于手术。使动物供养在温控室(21℃)内，供应经过高压灭菌的食物和水。最后一次给药后48h，杀死动物，除去血清、脾和肝。将肝脏矢状切成若干部分，在液氮中速冻，保存在-70℃下。将一部分肝浸入10%中性缓冲的福尔马林，供组织病理学检查。全部实验操作都是按照我们的学会指南进行的。按照厂商指导，利用分光光度酶测定试剂盒(AsanPharm.Co.,Ltd.,Hwaseong-si,Korea)测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性。也利用自动化仪器测定一般血清生化。将肝脏样品固定在10%中性缓冲的福尔马林中，然后进行常规的石蜡包埋操作。切制切片（5μm厚），使用苏木精与曙红(H&E)染色，借助光学显微镜检查。在冰上，使肝组织在RIPA缓冲液[50mMTris,pH7.5,150mMNaCl,1mMEDTA,0.1%十二烷基硫酸钠,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,50mMNaF,1mMNa3VO4,1mMPMSF,蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂(1片RocheDiagnosticsGmbH蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂/10mL)(Roche)]中溶解20min。在4℃下，以13000rpm离心20min，使溶解产物澄清。利用Micro-BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoScientific)测定上清液的蛋白质含量。借助6-10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离含有20-60μg总蛋白质的溶解产物，然后转移至硝基纤维素(WhatmanGermany)或聚偏二氟乙烯膜(Millipore)。将膜用5%BSA(Sigma-Aldrich)或5%脱脂脱水乳溶液封闭1h，与下列抗体之一在4℃下温育过夜：兔抗磷-Smad3(CellSignalingTechnology,Beverly,MA,USA)，兔抗-α-SMA(Millipore)，小鼠抗-纤连蛋白，小鼠抗-波形蛋白(BDBiosciences)，或者小鼠抗-β-肌动蛋白(Sigma-Aldrich)。将膜用Tris-缓冲盐水洗涤三次，与HRP-缀合的山羊抗-兔抗体或HRP-缀合的山羊抗-小鼠抗体(SantaCruzBiotechnology)在室温下温育1h。利用ECL试剂盒(GEHealthcare,Princeton,NJ,USA)检测所结合的抗体。利用密度计LAS-3000成像仪(FUJIFILM)分析谱带强度。
与假手术的对照大鼠相比，BDL大鼠显示有体重减轻和器官（肝和脾）重量增加。实施例2和3恢复了BDL大鼠的体重减轻，降低了器官（肝和脾）重量。与假手术的动物相比，在BDL大鼠中观察到血清ALT和AST有显著增加。实施例2和3提高了BDL大鼠的血清ALT和AST。实施例3抑制了Smad信号传递，并且抑制了BDL大鼠肝脏中的α-SMA、纤连蛋白和波形蛋白。实施例2抑制了BDL大鼠肝脏中的α-SMA和纤连蛋白。与正常大鼠肝脏相比，BDL大鼠肝脏显示有典型的组织学改变，以中枢±中枢结构破坏和桥式纤维化形成为特征。实施例2和3明显消除了BDL-诱导的组织学改变。
【表5】
数据代表平均±S.E.(n=5-8)。
**:p<0.01相对于假手术(sham);#:p<0.05相对于BDL;##:p<0.01相对于BDL。
【表6】
数据代表平均±S.E.(n=5-8)。
*:p<0.05相对于假手术(sham);**:p<0.01相对于sham;#:p<0.05相对于BDL。
对博莱霉素-诱导的肺纤维化模型的抗纤维化效应
从OrientBioInc.购买六周龄雄性ICR小鼠。将体重31-35g的小鼠随机分成五个实验组：假手术的对照小鼠(盐水,n=6)，博莱霉素(BLM)-处置小鼠(n=10)，用5、10或20mg/kg实施例2处置的BLM-处置小鼠(n=10)。就肺纤维化的诱导而言，将小鼠用zoletil(10mg/kg)和赛拉嗪(5mg/kg)麻醉，通过气管内滴注在第0天给予BLM(BLM硫酸盐,1mg/kg)(MBcell,LosAngeles,CA,USA)的60μL盐水溶液。将实施例2溶于人工胃液制剂，口服给予小鼠，每周五次，持续两周，始于第7天。使动物供养在温控室(21℃)内，供应经过高压灭菌的食物和水。手术后三周，杀死动物，除去肺脏。将肺脏矢状切成若干部分，在液氮中速冻，保存在-70℃下。将一部分肺浸入10%中性缓冲的福尔马林，供组织病理学检查。全部实验操作都是按照我们的学会指南进行的。将肺脏样品固定在10%中性缓冲的福尔马林中，然后进行常规的石蜡包埋操作。切制切片（5μm厚），使用苏木精与曙红(H&E)染色，借助光学显微镜检查。在冰上，使肺组织在RIPA缓冲液[50mMTris,pH7.5,150mMNaCl,1mMEDTA,0.1%十二烷基硫酸钠,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,50mMNaF,1mMNa3VO4,1mMPMSF,蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂(1片RocheDiagnosticsGmbH蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂/10mL)(Roche)]中溶解20min。在4℃下，以13000rpm离心20min，使溶解产物澄清。利用Micro-BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoScientific)测定上清液的蛋白质含量。借助6-10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离含有20-50μg总蛋白质的溶解产物，然后转移至硝基纤维素膜(Whatman)。将膜用5%脱脂脱水乳溶液封闭1h，与兔抗-α-SMA(Millipore)或小鼠抗-纤连蛋白(BDBiosciences)在4℃下温育过夜。将膜用Tris-缓冲盐水洗涤三次，与HRP-缀合的山羊抗-兔抗体或HRP-缀合的山羊抗-小鼠抗体(SantaCruzBiotechnology)在室温下温育1h。利用ECL试剂盒(GEHealthcare)检测所结合的抗体。利用密度计LAS-3000成像仪(FUJIFILM)分析谱带强度。
与假手术的动物相比，BLM-诱导的纤维化肺显示有升高水平的α-SMA和纤连蛋白。实施例2抑制了BLM-诱导的纤维化肺中的α-SMA和纤连蛋白。来自BLM-处置小鼠的肺组织显示有典型的组织学特征，也就是肺泡间隔变厚，并且被炎性细胞浸润，还发现有胶原沉积在小间隙中。实施例2在全部供试剂量水平下都明显减少了BLM-诱导的组织学改变。

Claims (8)

1.式(I)化合物：
其中：
每个Ra独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、OH、―O―C1-6烷基、―O―C1-6卤代烷基、―O―C3-6环烷基、NH2、―NH―C1-6烷基、―NH―C1-6卤代烷基、―NH―C3-6环烷基、―S―C1-6烷基、―S―C1-6卤代烷基、―S―C3-6环烷基、CN或NO2；
m是0、1、2、3或4；
A1和A2之一是N，另一个是NR1，其中R1是H、OH、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、或C3-6环烷基；
X是―NH―；
每个Rb独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、―(CH2)q―OR3、―(CH2)q―NR3R4、-(CH2)q―SR3、―(CH2)q―NO2、―(CH2)q―CONHOH、―(CH2)q―CN、-(CH2)q-COR3、-(CH2)q―CO2R3、―(CH2)q―CONR3R4、―(CH2)q―四唑、―(CH2)q―CH＝CH-CN、―(CH2)q―CH＝CH-CO2R3、-(CH2)q―CH＝CH―CONR3R4、-(CH2)q―CH＝CH-四唑、-(CH2)q-NHCOR3、-(CH2)q-NHCO2R3、―(CH2)q―CONHSO2R3、-(CH2)q―NHSO2R3、―(CH2)q―C≡C―CN、―(CH2)q―C≡C―CO2R3、-(CH2)q-C≡C―CONR3R4、―(CH2)q―C≡C-四唑、-(CH2)q―SOR5、―(CH2)q―SO2R5或―(CH2)r-(OR3)2，其中R3和R4独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基；或者与它们所连接的氮原子一起构成单环；R5是C1-6烷基、C1-6卤代烷基或C3-6环烷基；q是0、1、2、3或4；r是1、2、3或4；
n是0、1、2、3、4或5；
或者其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，选自下组：
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二氯苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-溴苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二甲基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-异丙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-乙烯基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-乙炔基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,4-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(甲氧基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(三氟甲氧基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(甲硫基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(甲硫基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-(甲硫基)苯胺；
2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)邻苯二甲腈；
2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酰胺；
2-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙腈；
2-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙腈；
1-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酮；
1-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酮；
甲基3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酸酯；
甲基4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲酸酯；
N-(2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)乙酰胺；
N-(2-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N-(3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N-(4-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯基)甲磺酰胺；
N1-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-N2,N2-二甲基苯-1,2-二胺；
N1-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-N3,N3-二甲基苯-1,3-二胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吡咯烷-1-基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-吗啉代苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-吗啉代苯胺；
N3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-4-氟-N1,N1-二甲基苯-1,3-二胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(二甲基氨基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(二甲基氨基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((二甲基氨基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(吗啉代甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(吗啉代甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-5-((二甲基氨基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)-2-氟苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-3-(吡咯烷-1-基甲基)苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟-3-(吗啉代甲基)苯胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-((二甲基氨基)甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(吡咯烷-1-基甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-4-(吗啉代甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-2-(吗啉代甲基)苯甲腈；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)-5-(吗啉代甲基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-(2-(二甲基氨基)乙基苯胺；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基苯胺；
3-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基氨基)苯甲腈；
N-((4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-乙基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-氟苯胺；
及其药学上可接受的盐。
3.药物组合物，包含一种或多种权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐，和药学上可接受的稀释剂或载体。
4.权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐在制备用于抑制人类TGF-β或活化素信号传导途径或此二者的药物中的用途。
5.权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐在制备用于治疗、预防或减少人类肿瘤细胞转移的药物中的用途。
6.权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐在制备用于通过抑制人类TGF-β信号传导途径来治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌的药物中的用途。
7.权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐在制备用于治疗、预防或减少人类血管损伤的药物中的用途。
8.权利要求1或2的化合物或者其药学上可接受的盐在制备用于治疗、预防或减轻人类选自下组的疾病的药物中的用途：肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精-诱发的肝炎、囊性纤维化病、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤，以及肺、乳腺、肾、卵巢、宫颈、肝、胆管、胃肠道、胰腺、前列腺、头和颈的癌。
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