CN103025170B - 作为针对各种植物病原体的生物控制剂的pseudozyma aphidis - Google Patents

Abstract

在此提供了生物控制剂，其保护植物和植物材料免受害虫和病原体的影响并且促进植物的生长。还提供了包含这种生物控制剂的组合物、用于保护植物和植物材料并且促进在植物中的生长的方法、以及所述生物控制剂在制备农药组合物和生长促进组合物中的用途。

Description

作为针对各种植物病原体的生物控制剂的PSEUDOZYMA APHIDIS

发明领域

本发明涉及源自Pseudozymaaphidis的有效对抗各种植物病原体的生物控制剂。更具体地，本发明提供了一种包含源自P.Aphidis的杀细菌、杀真菌并且杀虫的真菌生物控制剂的组合物，所述组合物还用于增强植物生长、活力和病原体抗性以及延长产品和其他有机产品的寿命或货架期。本发明还涉及用于实现这些的方法。

发明背景

贯穿本申请提及的所有出版物通过引用完全结合在此，包括在其中引证的所有参考文献。

植物病原体通过它们迅速产生农药抗性的能力而对最大化作物生产量的努力提出了挑战，这种能力可以导致每年巨大的产量损失。如今，主要研究目的之一包括开发控制病原体的新工具。

由于环境问题的缘故，真菌生物控制剂已经变成化学品使用的重要替代物。可以通过以下机制之一或组合来实现生物控制：抗生作用、真菌寄生作用、竞争以及在宿主中诱导的抗性。这些机制可以阻碍病原体的生长和发育，从而减少病害。生物控制剂的复杂作用方式降低了病原体产生抗性的能力。生物控制剂的开发始于拮抗剂的发现，随后是它们的潜在生物控制活性的分离和表征。

少数生物杀真菌产品是在一些国家可商业获得的，例如AQ10，其含有白粉寄生孢（Ampelomycesquisqualis）的分生孢子，以及Sporodex，其为基于酵母絮绒假酶菌（Pseudozymaflocculosa）的分生孢子，二者均用于控制白粉病。也存在一些基于木霉（Trichodermaspp.）的产品，如Throcodex和Thrichopel，它们用来对抗灰霉、根腐病和根枯病。然而，生物控制的使用相对于化学杀真菌剂的使用仍然仅仅是适度的[Paulitz,T.C.和Belanger,.R.(2001)《植物病理学年鉴》（Annu.Rev.Phytopathol.）39:103-133]。

定殖于不同植物表面的附生酵母被认为具有生物控制活性并且提供对抗一些植物病原体的天然屏障[Avis,T.J.和Belanger,R.R.(2001)《应用与环境微生物学》（Appl.Environ.Microbiol.）67(2):956-960；Urquhart,E.J.和Punja,Z.K.(2002)《加拿大微生物学杂志》（Can.J.Microbiol.）48(3):219-229]。已经证明了酵母和酵母样真菌对于采后病害[Spadaro,D.,和Gullino,M.L.(2004)《国际食品微生物学杂志》（InternationalJournalofFoodMicrobiology）91:185-194]和温室中的病害[Paulitz,T.C.和Belanger,R.R.(2001)《植物病理学年鉴》（Annu.Rev.Phytopathol.）39(103-133)]的生物控制活性。Pseudozymaspp.是与黑粉菌目（Ustilaginales）相关的酵母小群体[Boekhout,T.(1995)《普通与应用微生物学杂志》（GeneralandAppliedMicrobiology）41(359-366)]。它们大多是附生的（从空气和雨水中取得水分和养分）或是腐生的（生长在死亡或腐败的有机质上并从中取得它们的营养），并且它们对植物和动物是不致病的[Avis,T.J.和Belanger,R.R.(2002)《欧洲微生物学会联合会酵母研究》（FEMSYeastRes）2(l):5-8]。最近已经发现Pseudozymarugulosa和絮绒假酶菌（P.Flocculosa）针对与它们相关的不同白粉病显示出生物活性[Dik,A.J.等人，(1998)《欧洲植物病理学杂志》（Eur.J.PlantPathol.）104(413-423]。已经发现絮绒假酶菌（P.Flocculosa）分泌一种表现出针对几种病原体的抗生素活性的特殊脂肪酸（unusualfattyacid）[Avis,T.J.和Belanger,R.R.(2001)ApplEnvironMicrobiol67(2):956-960；Avis,T.J.等人,(2001)《植物病理学》（Phytopathology）91(3):249-254；]。另一方面，Avis等人[Avis,T.J.等人，(2001)《植物病理学》（Phytopathology）91(3):249-254]发现没有白粉病（单丝壳（Sphaerothecafuliginea）(Schlechtend.:Fr.)Pollacci）的菌落崩溃（colonycollapse）以及从蚜虫分泌物分离的Pseudozymaaphidis(分离株CBS517.83)没有产生抗真菌脂肪酸。P.aphidis是P.rugulosa的近亲[Begerow,D.和Bauer,R.(2000)Mycol.Res.104(53-60)]，其首次从蚜虫分泌物分离[Henninger,W和Windisch,S.(1975)《微生物学文献集》（Arch.Microbiol.）105(l):47-48]，但是也已经在植物表面上发现[Allen,T.W.等人,(2004)《加拿大微生物学杂志》（Can.J.Microbiol.）50(10):853-860]。

发明人最近从草莓叶分离出附生酵母Pseudozymaaphidis（分离株L12）。分离株L12与白粉病菌落崩溃相关。在此呈现的数据表明，L12分泌在体外抑制几种真菌性和细菌性病原体的细胞外代谢物。另外，将L12孢子施用在分离的番茄叶或温室中的完整番茄植物上显著地减少了灰葡萄孢菌（Botrytiscinerea）感染。因此诸位发明人进一步表征P.aphidis的L12分离株，将它开发为对抗植物病原体的有效生物控制剂。大量生产活性培养物所需要的条件的特征为测试不同的温度和培养基并且通过灰葡萄孢菌生物测定法监测孢子浓度和活性。使用显微镜检查，测定了P.aphidis在宿主植物上的建立和传播。诸位发明人还测定了在体外对抗各种病原体的L12的分泌部分。另外，将P.aphidisL12孢子施用在温室中的番茄植物上并且验证它们在体内控制真菌性和细菌性病原体的能力。由本发明提供的新的并且有效的生物控制剂因此可以有助于减少控制病原体所需要的化学品的量，并且因而可以真正地有益于农民、消费者和环境。

诸位发明人在此基于天然存在的真菌开发了P.aphidisL12作为生物控制剂的实际应用，该生物控制剂增加植物对真菌、病毒、细菌和昆虫侵染的抗性并且增强生长。呈现的结果证明了P.aphidisL12用于控制导致作物植物的重大损伤的真菌性和细菌性植物病原体的高潜力。此外，这种分离株的新颖性在于它容易生产、十分稳定并且在低浓度有效。传统上已经用来控制食用植物病原体的化学品正在被禁用或不再是有效的，并且不允许有机农场主使用这些化学品。其他控制策略是不可获得或不能实行的。受环境问题和日益增长的有机产品需求的推动，迫切需要开发新的生物防御策略。

因此，本发明的一个目的是提供一种包含Pseudozymaaphidis细胞、组分或产物的组合物，从而提供改进的针对病原体感染的植物抗性。而且，本发明进一步提供了用于治疗、缓解、抑制或消除已建立的感染或侵染的组合物。

本发明的另一个目的是提供一种用于诱导植物免疫应答的包含Pseudozymaaphidis细胞、组分或产物的组合物。

本发明的又另一个目的是提供一种用于改善植物生长和产量的包含Pseudozymaaphids细胞、组分或产物的组合物。

本发明的这些目的和其他目的将随着描述的继续进行而变得清楚。

发明概述

诸位发明人在此证明了Pseudzymaaphidis及其产物的杀虫和促生长特性。因此，考虑了本发明的各个方面。

在第一方面，本发明涉及一种包含生物控制剂作为有效成分的农药组合物。该组合物包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。该组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

本发明的第二方面涉及一种用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的组合物。该组合物包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。这种组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

本发明在第三方面还提供了一种用于促进在植物中的生长的组合物，其包含一种生物控制剂作为有效成分。该组合物包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。该组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

除了提供用于保护植物或植物材料免受病害的影响和用于促进在植物中的生长的组合物之外，本发明还提供了用于实现相同目的的方法。

因此，在一个另外的方面，本发明涉及一种治疗、防止、缓解、抑制、消除在植物或植物材料中的细菌、真菌或害虫侵染或延迟其发作的方法。该方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在该植物或植物材料附近，其中该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

在另一个方面，本发明提供了一种用于促进在植物中的生长的方法，该方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在该植物或植物材料附近。该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphdis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

诸位发明人还考虑了根据本发明的生物控制剂在制备杀虫并且促生长的组合物中的用途。

因此，在一个另外的方面，本发明是针对生物控制剂在制造用于防止、缓解、抑制、消除害虫感染或侵染或延迟其发作的农药组合物中的用途。这种生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

在又一个另外的方面，本发明是针对一种生物控制剂在制造用于促进在植物中的生长的组合物中的用途。该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

借助于以下附图，本发明的这些方面和其他方面将变得清楚。

附图简要说明

图1A-1B

PseudozmaaphidisL12的分离

图1A：用白粉菌接种之前以蒸馏水（DW）或L12孢子处理的黄瓜子叶。

图1B：在PDA上生长的L12分泌粉红色代谢物至培养基中。

图2

采用可用数据库的P.aphidis序列比对

对于ITS1显示L12分离株（由SEQIDNO.5表示）、P.aphids（由SEQIDNO.6表示）、P.regulosa（由SEQIDNO.7表示）和P.Antarctica（由SEQIDNO.8表示）的序列比对。

图3A-3J

P.aphidis在PDA平板上和在植物上的生长

图3A：在PDA培养基上生长10天后的P.aphids的光学显微镜图像。箭头标出分泌物。

图3B：酵母样生长形状显现在从在PDA上的P.aphidis的上方拍摄的光学显微镜图像中。

图3C：如在光学显微镜中所见到的在PDA上的P.aphidis的束丝（Synemata）样外观。

图3D：如在SEM中在剖面上看到的在PDA上的P.aphidis菌丝体/酵母样形式。

图3E：如在SEM中从上方看到的在PDA上的P.aphidis酵母样形式

图3F：如在光学显微镜中看到的在番茄叶上生长2天后的P.aphidis。

图3G：在光学显微镜中使用血细胞计数器的在PDB上的孢子形状。

图3H：在光学显微镜中使用血细胞计数器的在YMPD上的孢子形状。

图3I和3J：（SEM）在拟南芥（A.thaliana）叶上生长3天后的P.aphidis：箭头指示P.aphidis。

图4

P.aphidis在UV暴露下存活

使接种到PDA平板上的10⁸个P.aphidis细胞暴露于UV持续不同的时间量（0、10、20和30分钟）并且随后转移至25°C的培养箱中。在3周之后记录暴露平板的照片。

缩写：Exp.t.UV（分钟），（暴露于UV的时间(min)）。

图5A-5C

P.aphidis培养优化

图5A：显示PDB培育的P.aphidis菌落直径作为培养温度和孵育时间的函数。

图5B：显示PDB培育的P.aphidis菌落分泌物直径作为培养温度和孵育时间的函数。

图5C：显示在不同温度培育21天的PDB培育的P.aphidis的照片。

缩写：Col.Diam.(mm)，（菌落直径(mm)）；Secret.Diam.(mm)，（分泌物直径(mm)）；T.(d)，（时间(天)）。

图6

P.aphidis的纤维素分泌

生长在用或不用纤维素膜覆盖的自来水琼脂平板上的P.aphidis。接种后7天记录细胞数。采用标准误差棒提供10个样品的平均数。*(p<0.05；t-检验)。

缩写：(M+)，（用纤维素膜覆盖的平板）；(M-)，（不用纤维素膜覆盖的平板）

图7A-7C

通过P.aphidis分泌物的植物病原体的体外抑制

图7A：生长在覆盖PDA平板的透析管上的L12。10天后，将透析管连同P.aphidis一起取出并且将含有分泌部分的平板用于真菌孢子萌发试验。显示使用P.aphidis分泌物的乙酸乙酯提取物对各种真菌的抑制（以mm半径表示）。

图7B：使用P.aphidis分泌物的乙酸乙酯提取物对各种细菌的抑制（以mm半径表示）。

图7C：使用P.aphidis分泌物的己烷提取物对各种细菌和真菌的抑制（以mm半径表示）。

缩写：PG，禾柄锈菌（（Pucciniagraminis））；AB，（甘蓝链格孢菌(Alternariabrassicicola)）；PC，禾冠柄锈菌（（Pcciniacoronata））；UA，（疣顶单胞锈菌(Uromycesappendiculatus)）；BC，（灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)）；LT，（鞑靼内丝白粉菌(Leveillulataurica)）；PD，（指状青霉(Penicilliumdigitatum)）；AT，（根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)）；CM，（密执安棍状杆菌密执安亚种(Clavibactermichiganensissubsp.michiganensis)）；EA，（解淀粉欧文氏菌(Erwiniaamylovora)）；PST，（丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringaepv.tomato)）；PSL，（丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonassyringaepv.lachrymans)）；SS，（马铃薯疮痂病菌(Streptomycesscabies)）；XCC，（野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonascampestrispv.campestris）；XCV，（野油菜黄单胞菌辣椒斑点致病变种(Xanthomonascampestrispv.vesicatoria)）；Inhibit.Sp.Germ.(%)，（孢子萌发抑制率(%)）；Inhibit.Hall,(mm)，（抑制晕圈(inhibitionhallow)(mm)）。

图8

由P.aphidis散发的挥发物的生物活性

使P.aphidis在划区的PDA皿上生长10天，之后，将灰葡萄孢菌的菌丝栓添加至划分的培养皿的另一半。记录在含有P.aphidis的划区培养皿的一半中的灰葡萄孢菌的菌落直径直至接种后4天，与在另一半不存在P.aphidis的对照平板上的生长比较。

缩写：PA+（含有划区的P.aphidis的培养皿）；PA-（没有P.aphidis的培养皿）；Les.Diam.(cm²)，（病斑直径(cm²)）；T.P.Inoculat.(天)，（接种后时间(天)）。

图9A-9F

通过P.Aphidis在离脱叶中和在植物体内的真菌的抑制

图9A：用灰葡萄孢菌（每片小叶7500个孢子）接种之前，将完整番茄植物或离脱叶用P.aphidis孢子或用水喷洒，并且在接种后5天对感染进行评分。显示用10⁸个孢子/ml处理的植物和离脱叶的照片。

图9B：用灰葡萄孢菌（每片小叶5ml；1500个孢子/ml）接种之前，将脱离的番茄叶用P.aphidis孢子（10⁸个孢子/ml）接种。

图9C：用灰葡萄孢菌（每片小叶5ml；1500个孢子/ml）接种之前，将完整的番茄植物用P.aphidis孢子（10⁴或10⁸个孢子/ml）接种。

图9D：用灰葡萄孢菌（每片小叶5ml；1500个孢子/ml）接种之前，将完整的番茄植物用10⁸个孢子/ml高压灭菌或未高压灭菌的P.aphidis孢子接种。

图9E：用灰葡萄孢菌感染后3天，将离脱番茄叶用P.aphidis10⁸个孢子/ml喷洒。显示了用P.aphidis喷洒10天后离脱叶的照片。

图9F：用单丝壳接种之前3天，将黄瓜苗用P.aphidis孢子（10⁸个孢子/ml）（PA）或用水（对照）喷洒。接种后11、12和16天对感染进行评分。缩写：Leav.（感染的叶%）；%Infect.（感染%）；Cont.（对照）；L12-10⁴（P.aphidisL1210⁴个孢子/ml）；L12-10⁸（P.aphidisL1210⁸个孢子/ml）；autoclave.（高压灭菌）；dH₂O，（蒸馏水）；Wh.Plan，（完整植物）；Detac.Leav.（离脱叶）；T.P.感染,(d)，（感染后时间(天)）；PA，（用P.aphidis处理）；B.C.（灰葡萄孢菌）。

图10A-10B

通过P.aphidis在植物体内的细菌的抑制

图10A：用密执安棍状杆菌(OD₆₀₀约0.9)接种之前，将完整的番茄植物用P.aphidis孢子（10⁸个孢子/ml）（PA）或用水（对照）喷洒并且在接种后记录38天。在接种后38天期间对症状进行评分。

图10B：接种后38天对恢复进行评分。

缩写：PA+（用P.aphidis处理）；PA-（未处理）；T.P.感染.(d)，（感染后时间(天)）；感染.Plan.(%)，（感染的植物(%)）；D（死亡）；I（感染）；R（恢复）。

图11A-11C

Pseudozymaaphidis应用的促生长作用

图11A：将番茄苗用10⁸个P.aphidis孢子以1周至2周间隔喷洒4次，并且在首次施用后在7周生长期间监测它们的叶数；

图11B：在首次施用后在7周生长期间监测叶高；

图11C：在首次施用之后7周监测重量。

处理的植物由带有三角形或白色条的线代表，未处理的植物由带有正方形或具条纹的条的线代表；星号表示t-检验统计差异p<0.05。

缩写：No.Leav.（叶数）；Heigh(cm)，（高度(cm)）；重量(gr)，（重量(gr)）；D.aft.Appl.（施用后天数）；w.10⁸/mlsp.P.aphidis（用10⁸个P.aphidis孢子/ml处理）；w/o10⁸/mlsp.P.aphidis（未用10⁸个P.aphidis孢子/ml处理）。

图12A-12B

L12诱导的抗性

图12A：将番茄植物用10⁸个P.aphidis喷洒，并且在施用后10天，使用半定量PCR监测PR1、PDF1.2和PIN2基因表达，与未处理的植物相比较。

图12B：将拟南芥植物用10⁸个P.aphidis喷洒，并且在施用后10天，使用半定量PCR监测PR1和PDF1.2基因表达，与未处理的植物相比较。

缩写：Cont.（对照）；Treat.（处理）。

图13A-13C

L12控制在SA积累和JA信号传导方面受损的拟南芥突变体上的灰葡萄孢菌。

在接种激素突变体NahG(SA缺陷的)、jar1-1(JA不敏感)、npr1-1(JA不敏感)和WT(PA-)之后24至72小时测量灰葡萄孢菌病斑大小，并且将其与用P.aphidis(PA+)喷洒的对应物上的病斑比较。

图13A：相对于未喷洒的对应物，用P.aphidis喷洒的拟南芥WT、NahG和jar1-1的记录照片。

图13B：相对于未喷洒的对应物，用P.aphidis喷洒的拟南芥WT、NahG和jar1-1的记录病斑大小。

图13C：相对于未喷洒的对应物，用P.aphidis喷洒的拟南芥WT和npr1-1的记录病斑大小。

缩写：PA+（含有划区的P.aphidis的培养皿）；PA-（没有P.aphidis的培养皿）；Les.Si.(cm²)，（病斑大小(cm²)）；T.P.Inoculat.(d)，（接种后时间(天)）；W.T.（野生型）。

本发明的详细说明

本发明涉及一种包含Pseudozymaaphidis细胞及其任何制备品的生物控制剂和它们在促进植物生长和健康方面的用途。更具体地，本发明披露了包含来自Pseudozymaaphidis细胞或其制备品的成分的杀细菌、杀真菌、抗病毒、杀虫并且促进植物生长的组合物，用于增强植物对植物病原体抗性的方法，用于诱导植物中的免疫相关基因的方法以及使用本发明的生物控制剂促进植物生长的方法。

因此，在第一方面，本发明提供了一种包含生物控制剂作为有效成分的农药组合物，该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。应当注意的是，该组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

该农药组合物因此有效用于保护和保存以及用于处理感染或受侵袭的植物、人、家畜、经济作物、农场产品和工业材料。

术语“农药”是指防止、破坏或控制任何害虫的物质或物质的混合物。特别地，该术语涉及有效用于治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌、真菌、病毒、昆虫相关或其他害虫相关感染或侵染、孢子萌发和菌丝生长或延迟其发作的物质或混合物。还用作在收获之前或之后施用至作物以保护商品在储存和运输期间免于变质的物质。

术语“害虫”在此定义为包括植物、人或家畜疾病的媒介物、不需要的细菌、真菌、病毒、昆虫、线虫种类或在食品、农业商品、木材和木制品或动物饲料的生产、加工、储存、运输或销售过程中引起损害或干扰上述过程的任何生物。

本发明因此进一步提供了用作农药组合物的生物控制剂。生物控制被定义为通过天敌减少害虫种群并且典型地涉及主动的人类角色。植物疾病的生物控制剂最经常地称为拮抗剂。成功的生物控制降低目标种类的群体密度。术语“生物控制剂”是指源自生物物质并且在治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他植物害虫感染或侵染中的至少一项或延迟其发作以及抑制孢子萌发和菌丝生长方面有效的化合物或组合物。应当理解的是，任何生物控制剂是环境安全的，即，它有害于目标种类，但是基本上不以非特异性方式损伤其他种类。此外，应当理解的是，术语“生物控制剂”也包括术语“生物化学控制剂”。生物化学控制剂是吸引、妨碍、破坏害虫或另外地发挥杀虫活性的天然存在或与天然产物相同的半化学品，例如，植物生长调节剂、激素、酶、信息素、异种信息素和利它素。

包含在本发明的组合物之内的生物控制剂包含Pseudozymaaphidis细胞。“Pseudozymaaphidis细胞”是指呈二态性的P.aphidis，表示它可以采取丝状和/或酵母形式，包括芽殖和芽生孢子形成。更具体地，菌株Pseudozymaaphidis同义于由Henninger和Windisch详述的蚜梗孢酵母（Sterigmatosaphidis）[《微生物学文献集》（Arch.Microbiol.）,1975,105,第49-50页]。该菌株从珊瑚樱（Solanumpseudocapsicum）的叶上的蚜科（Aphididae）的分泌物中分离并且能够同化肌醇和硝酸钾两者。这些真菌可以利用宽广范围的碳源，如戊糖、己糖、糖醇、可溶性淀粉、乙醇和有机酸。尿素酶反应呈阳性。用重氮蓝B盐染色也呈阳性。在麦芽提取物琼脂上在28°C的初始生长显示常常在一端或两端变尖的长形细胞(1.4-3.6)x(4.3-11.5μm)。还观察到长达40Am的十分长的细胞。在生长完成之后，琼脂被薄的气生菌丝体覆盖，所述气生菌丝体由源于短齿状、担子柄样结构或衰败菌丝的分支的、向顶的梭形芽生孢子链组成。在显微镜下，它显示分开的菌丝，这些菌丝具有在一些细胞中收缩的细胞质并且具有收缩隔膜（retractionsepta）。划线培养物是不定的，有时呈粉状，大多是粗糙和扁平的，带有粗糙边缘。颜色是奶油色至黄色。这种真菌是黑粉菌目的无性型，因为与玉米黑粉菌（Ustilagomaydis）26S核糖体DNA的比较将其归为相同的组[Boekhout,《普通与应用微生物学杂志》（J.Gen.Appl.Microbiol）,1995,41,第359-366页]。

应当理解的是，本发明的组合物可以包含Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体。表述“分离株或突变体”解释为具有基本上相同的等位互补的任何个体或同质个体群。应当理解的是，在异质个体群中存在等位异质性，其中一些个体在它们的一些基因中携带突变，如缺失、置换、重复等等。携带这种突变的个体因此是突变体。从所述异质群中取出个体被称为分离，其遗传上基本上一致的子代也是如此。还应当理解的是，在本发明背景下，“突变体”和“分离株”涉及在基因中被突变从而赋予可检测表型的Pseudozymaaphidis个体，并且在具体实施方案中，所述表型与P.aphidis的杀虫或商业有关特征相关。

更进一步地，本发明的组合物包含P.aphidis孢子作为生物控制剂。如本发明考虑，“孢子”是指细菌或真菌种类（尤其真菌种类）的至少一个休眠的（在施用时）但有活力的繁殖单位（reproductiveunit）。术语“Pseudozymaaphidis孢子”指圆柱形至梭形的芽生孢子。活性物质可以是孢子、酵母样形式、丝状形式或它们的一些或全部的组合。在叶上，可以发现二态真菌体，其包括担子柄（strigmata）上的芽生孢子，而在液体培养基中，主要发现酵母样形式和孢子，并且在固体培养基中，丝状和孢子形式是常见的。

可替代地或另外地，本发明的组合物可以包含P.aphidis的培养基作为生物控制剂。术语“P.aphidis的培养基”或“条件培养基”指其中预先生长过Pseudozymaaphidis并且它们向其中分泌有化合物的培养基或液体载体。培养滤液代谢物是分泌到生长培养基中的化合物。培养基可以原样使用或可以借助过滤、离心和提取的至少一项进一步加工。

在又另一个实施方案中，本发明的组合物可以包含Pseudozymaaphidis的任何制备品或分泌部分作为活性成分。“Pseudozymaaphidis分泌部分”是指从细胞中产生和分泌的化合物。

应当进一步注意的是，所述Pseudozymaaphidis细胞的任何提取物或制备品可以被本发明的组合物用作一种生物控制剂。术语“提取物”是指通过使用有机溶剂（例如乙酸乙酯或己烷）提取Pseudozymaaphidis细胞、孢子、培养物滤液或条件培养基所获得的任何物质。

重要的是，本发明的组合物可以包含在此所述的Pseudozymaaphidis细胞、突变体、分离株、提取物或条件培养基的任何组合。

应当理解的是，本发明的组合物可以任选地进一步包含农业上可接受的载体、稀释剂、乳化剂或分散剂。

应当理解的是，该组合物也有效用于治疗、防止、缓解、抑制、减少或消除已建立的细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫感染或侵染，并且有效治疗和防止由其所致的病害。

如在此所使用的，在本说明书中和以下权利要求部分中，术语“治疗”（"treat"）或“治疗”（"treating"）和它们的衍生形式包括基本上抑制、减缓或逆转病况的进展、基本上缓解病况的症状或基本上防止病况的症状出现，所述病况在植物中由植物病原体引起，这些植物病原体包括细菌、真菌、病毒、昆虫或其他植物害虫、孢子或菌丝。

术语“防止”和该术语的所有变体旨在表示预先阻止细菌、真菌、病毒、昆虫或其他害虫生长、增殖、侵染、感染、孢子萌发和菌丝生长。在这种情况下，应当理解的是该组合物是在暴露于所述病原体之前施用的。

术语“缓解”（"ameliorate"）和―缓解‖（"amelioration"）涉及由根据本发明的组合物和方法引起的所治疗的植物病况的改善，其中所述改善可以表现为以下形式：抑制真菌菌丝形成和/或部分或完全破坏它、抑制真菌和细菌孢子萌发、抑制真菌、细菌或其他害虫生长和增殖、诱导植物免疫应答以及改善所述感病植物的高度、重量、叶数和根系。通常，该术语是指感病植物生理状态的改善。

应当进一步指出的是，在治疗的受试者是人或家畜的某些实施方案中，术语“治疗”（"treat"）或―治疗‖（"treating"）和它们的衍生形式包括基本上抑制、减缓或逆转病况的进展、基本上缓解病况的症状或基本上防止病况的症状出现，所述病况在人或家畜中由人或家畜病原体引起，这些病原体包括细菌、真菌、病毒、昆虫或其他植物害虫、孢子或菌丝。

术语“抑制”和该术语的全部变体旨在包括限制或禁止细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫生长以及孢子萌发。

术语“消除”涉及任选地根据下文描述的本发明的方法通过与本发明的组合物接触而基本上根除或移除细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫。

术语“延迟”、“延缓”和其全部变体旨在包括减缓细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫生长以及孢子萌发的进展。表述“延迟发作”解释为防止或减缓细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫生长、侵染、感染、孢子萌发和菌丝生长的进展持续一段时间，使得所述细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫生长、侵染、感染、孢子萌发和菌丝生长在发展上不会进展到在根据本发明的治疗不存在时的程度或出现得更晚。

根据本发明的农药组合物包含源自Pseudozymaaphidis的材料。它保护植物或任何其他材料免受微生物如真菌和细菌（如在实例7-10中所示）以及病毒、昆虫、线虫和其他害虫的损害作用。而且，根据本发明的组合物不仅损害致病生物，它们还增强植物生长和诱导植物病原体抗性基因，如分别通过实例11和12所示。

在更具体的实施方案中，本发明的农药组合物是用于治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟其发作的杀细菌组合物。如在此所使用的，“杀细菌的”涉及在治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌生长和/或孢子萌发或延迟其发作方面特别有效的农药。

本发明的组合物因此可以充当杀细菌剂，如实例7和9所示。这些组合物可以作为杀细菌剂特别地有效用于控制密执安棍状杆菌密执安亚种（Clavibactermichiganensissubsp.michiganensis）、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

更具体地，应当理解的是，该组合物有效用于治疗、防止、缓解、抑制、减少或消除已建立的细菌感染，并且有效治疗和防止由其所致的病害。

根据其他实施方案，根据本发明的组合物以及方法（在下文所述）在部分或完全地防止、抑制或消除由细菌引起的植物感染方面是特别有效的，其非限制性实例包括：黄单胞菌属（Xanthomonas）种类，例如，野油菜黄单胞菌水稻致病变种（Xanthomonascampestrispv.oryzae）；假单胞菌属（Pseudomonas）种类，例如，丁香假单胞菌黄瓜致病变种；欧文氏菌属（Erwinia）种类，例如，解淀粉欧文氏菌；密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、马铃薯疮痂病菌。

在更具体的实施方案中，同样如实例7、8和9所展示，根据本发明的杀细菌组合物可以特别适用于其中细菌感染由以下至少一种细菌引起的情况：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

在特定的实施方案中，本发明的组合物在治疗和防止密执安棍状杆菌感染和由其所致的病理状况方面是特别有效的。密执安棍状杆菌是一种需氧的非胞子形成的革兰氏阳性植物致病菌，当前构成棍状杆菌属（Clavibacter）内的唯一种类。密执安棍状杆菌目前具有5个亚种：密执安棍状杆菌诡谲亚种（Clavibactermichiganensissubsp.insidiosus）、密执安棍状杆菌密执安亚种、密执安棍状杆菌内布拉斯加亚种（Clavibactermichiganensissubsp.nebraskensis）、密执安棍状杆菌坏腐亚种（Clavibactermichiganensissubsp.sepedonicus）和密执安棍状杆菌花叶亚种（Cavibactermichiganensissubsp.tesselarius）。密执安棍状杆菌密执安亚种是番茄细菌性溃疡的致病因子。

在又另一个实施方案中，本发明的杀细菌组合物在根癌农杆菌感染的情况下是有效的。根癌农杆菌（更新学名：放射型根瘤菌(Rhizobiumradiobacter)）是超过140个双子叶植物种类中冠瘿病（形成肿瘤）的致病因子。它是杆状的革兰氏阴性土壤细菌。症状由DNA小区段（称作T-DNA，用于‘转移DNA‘）插入至植物细胞中引起，DNA小区段在半随机位置结合到植物基因组中。根癌农杆菌（或A.tumefaciens）是根瘤菌科（Rhizobiaceae）的α变形菌（alphaproteobacterium），其包括固氮豆科植物共生体。不同于固氮共生体，致瘤农杆菌是致病的并且对植物无益处。受农杆菌侵袭的多种植物引起农业产业的极大关注。在经济上，根癌农杆菌是胡桃、葡萄、核果、坚果树、甜菜、辣根和大黄的严重病原体。

更进一步地，本发明的杀细菌组合物在解淀粉欧文氏菌感染的情况下是有效的。解淀粉欧文氏菌是肠杆菌科（Enterobacteriaceae）的革兰氏阴性细菌并且是造成火疫的原因。火疫是侵袭苹果、梨以及蔷薇科（Rosaceae）的一些其他成员的接触性传染病。它是苹果和梨生产者的严重担忧。在最佳条件下，它可以在单个生长季破坏整个果园。梨是最易感的，但是苹果、枇杷、海棠、榅桲、山楂、栒子、火棘、覆盆子以及一些其他蔷薇科植物也是易受伤害的。

本发明另一个实例的丁香假单胞菌是带有极生鞭毛的杆状革兰氏阴性细菌。它是可以感染广泛范围的植物种类并且以超过50个不同致病变种存在的植物病原体。这些致病变种中的许多曾经被视为假单胞菌属内的单独种类，但是分子生物学技术（如DNA杂交）已经显示这些种类实际上均是丁香假单胞菌种类的一部分。丁香假单胞菌也产生Ina蛋白，这些蛋白质造成水在相当高的温度下冻结，导致植物损伤。

在又另一个实施方案中，本发明的组合物可以在治疗马铃薯疮痂病菌感染和由其所致的病理状况方面是特别有效的。马铃薯疮痂病菌是在马铃薯和其他根类作物上引起常见疮痂病症状的三个链霉菌种类中的一个。马铃薯疮痂病菌存在于世界上所有马铃薯种植区的土壤中并且还侵袭其他肉质根作物。马铃薯（Solariumtuberosum）是主要经济宿主，但是其他肉质根作物，包括甜菜、萝卜、芜菁甘蓝（rutabaga）、芜菁、胡萝卜和欧防风（parsnip）也受侵袭。

本发明的组合物可以用于治疗野油菜黄单胞菌（Xanthomonascampestris）感染。野油菜黄单胞菌是引起多种植物病害的细菌种类。它是革兰氏阴性需氧杆菌，并且是侵袭十字花科植物如芸苔属(Brassica)和拟南芥属的黑腐病的致病因子。症状包括叶边褪绿和维管组织变黑，伴随广泛萎蔫和坏死。全叶黄化、萎蔫和坏死随着病害进展而出现。

如由实例7、15和16展示，本发明的P.aphidis生物控制剂在治疗和防止由真菌病原体引起的病害症状方面是有效的。因此，在具体实施方案中，该农药组合物是一种用于治疗、防止、缓解、抑制、消除真菌感染或侵染或延迟其发作的杀真菌组合物。

术语“杀真菌的”涉及在治疗、防止、缓解、抑制、消除真菌生长和/或孢子萌发和菌丝形成及生长或延迟其发作方面特别有效的农药。本发明的这些组合物因此可以充当杀真菌剂，如实例7和8所示。这些组合物可以作为杀真菌剂特别有效地用于控制灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

应当理解的是，该组合物也有效用于治疗、防止、缓解、抑制或消除已建立的真菌感染，并且有效治疗和防止由其所致的病害。

根据本发明的组合物和方法可以特别适合用于部分或完全地防止、抑制或消除真菌和真菌样植物病原体，这些病原体的非限制性实例包括：蜜环菌属（Armillaria）种类，例如，北方蜜环菌（Armillariaborealis）；座担子菌科（Brachybasidiaceae）种类；巴西壳属（Brasiliomyces）种类；例如像，Brasiliomycesmalachrae；丽赤壳属（Calonectria）种类，例如像，冬青丽赤壳菌（Calonectriailicicola）；菊花白锈病菌；Conidiosporomyces；Cryptobasidiaceae；外担子科（Exobasidiaceae）；镰刀菌属（Fusarium）种类，例如像，尖孢镰刀菌红花专化型（Fusariumoxysporumf.sp.carthami）；赤霉属（Gibberella）种类，例如像，Gibberellatricincta；Gliocladiopsis种类，例如像，Gliocladiopsistenuis；粉座菌科（Graphiolaceae）；胶锈菌属（Gymnosporangium）种类，例如像，Gymnosporangiumlibocedri；丛赤壳属（Nectria）种类，例如像，Nectriapseudotrichia；Pleuroceras；柄锈菌属（Puccinia）种类，例如像，锦葵柄锈菌（Pucciniamalvacearum）；楔孢黑粉菌属（Thecaphora）种类，例如像，马铃薯楔孢黑粉菌（Thecaphorasolani）；黑星菌属（Venturia）（属）和Westea；真菌样（卵菌门(Oomycota)）种类，如腐霉属（Phytium）、疫霉属（Phytopthora）、白锈菌和白粉菌（霜霉属（Peronospora）、盘霜霉属（Bremia）、指霜霉属（Peronosclerospora）、轴霜霉属（Plasmopara）和假霜霉属（Pseudoperonospora））。

在本发明的组合物的一些实施方案中，真菌感染由以下至少一项引起：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

根据一个具体的实施方案，本发明的组合物特别适合用于治疗灰葡萄孢菌感染和由其所致的病理状况。灰葡萄孢菌是侵袭许多植物种类的腐植真菌，虽然它最值得注意的宿主可以是葡萄。在葡萄栽培中，它常称作葡萄灰霉病；在园艺学中，它通常称作灰霉病（greymould或graymold）。这种真菌在葡萄上引起两种不同类型的感染。第一种，灰霉病（greyrot）因持续潮湿或湿润条件所致，并且典型地导致受侵袭的葡萄串损失。第二种，贵腐病在较湿润条件后接着较干燥条件时发生，并且可以导致不同的餐末甜葡萄酒，如苏太尼葡萄酒（Sauternes）或托卡伊阿苏葡萄酒（AszuofTokaji）。灰葡萄孢菌侵袭许多其他植物。它对于无核小水果如草莓和球茎作物在经济上是重要的。不同于葡萄，受侵袭的草莓是不可食用的并且被丢弃。灰葡萄孢菌是番茄大量损害的熟知病因，并且还侵袭大黄。

根据另一个具体的实施方案，本发明的组合物特别适合用于治疗青霉（Penicillium）感染和由其所致的病理状况。青霉与曲霉属（Aspergillus）是可比较的。青霉属属于散囊菌目（Eurotiales）。在这个目中，生物在闭囊壳内产生子囊。青霉属经常被称为半知菌纲或不全菌纲真菌。名称青霉来自词语“刷子”；这是指状青霉中孢子的外观。青霉真菌是多用途的和机会致病性的。它们是采后病原体。青霉属种类是水果和蔬菜中的真菌性腐败的最常见原因之一。意大利青霉（Penicilliumitalicum）和指状青霉是柑橘果实的最常见侵袭者，而扩展青霉（Penicilliumexpansum）已知侵袭苹果。指状青霉通过产生乙烯以加速成熟而发挥作用。它用绿色分生孢子覆盖果实，引起果实皱缩和变干。意大利青霉引起粘性腐败病（slimyrot）并且产生蓝绿色分生孢子。这些种类喜好较凉的温度，这解释了为何通常在留在冰箱内太长时间的食物上发现它们。许多种类产生霉菌毒素；例如，扩展青霉产生一种称作展青霉素的霉菌毒素。这些种类的大部分彼此在颜色特征、腐败方式和感染症状方面相似；它们属于称作青霉的一般类目。扩展青霉是最有侵袭性的种类之一。这些真菌生活时间长并且相当持久，甚至在不利条件下也是如此。有时，意大利青霉和扩展青霉彼此粘附以产生束丝。束丝也在棒形青霉（Penicillumclaviforme）中出现。青霉生长典型地由于产品中的伤口感染而发生。最常见的处理是对收获的产品使用杀真菌剂。青霉属种类不止侵袭水果。例如，疣状青霉（Penicilliumverrucosum）生长在谷物产品上。

根据另一个具体的实施方案，本发明的组合物特别适合用于治疗链格孢属（Alternaria）感染和由其所致的病理状况。链格孢属由许多常见的腐生性（从死的和/或腐败的有机质中获得养分）和植物致病性种类组成。链格孢属孢子可以典型地发现于空气、土壤、腐败的植物材料、木材和食物中。甘蓝链格孢菌是普遍存在的植物致病性真菌，但也作为腐生生物而存在。甘蓝链格孢菌在几乎每种重要的栽培芸苔属（Brassica）种类（包括绿花椰菜、卷心菜、卡诺拉和芥菜）上引起黑斑病（也称作黑叶斑病(darkleafspot)）。它具有世界范围的经济重要性，有时在作物如卡诺拉、芥菜或油菜中导致20%-50%的产量下降。

根据另一个具体的实施方案，本发明的组合物特别适合用于治疗菜豆黑锈病菌感染和由其所致的病理状况。常见的菜豆锈病由担子菌纲真菌菜豆黑锈病菌（Uromycesappendiculatus）(Pers.:Pers.)Unger引起。它是不能独立于其菜豆宿主生活的专性寄生性真菌。这种真菌不能在实验室中在人工培养基上培养。锈病病原体在菜豆宿主上完成其完整的生活周期；因此，这种锈菌是寄生的。常见的菜豆锈病具有世界范围分布并且它在世界的大多数干菜豆和食荚菜豆生产地区存在，并且尤其在其中菜豆生长季节期间盛行湿润至中等湿润条件、长露期和凉爽条件的位置存在。

根据另一个具体的实施方案，本发明的组合物特别适合用于治疗鞑靼内丝白粉菌感染和由其所致的病理状况。番茄白粉病由真菌鞑靼内丝白粉菌引起。本疾病可能在商业种植的番茄中十分具有破坏性，其中产量损失可以在严重感染的田地中超过50%。损失的程度取决于环境条件、疾病发作日期和杀真菌剂控制的有效性。伴有偶尔暴雨的炎热干燥日有利于病害的发展。

在又另一个实施方案中，本发明的组合物特别适合用于治疗核盘菌感染。核盘菌是植物致病性真菌并且如果条件适当，可以引起称作白霉病的病害。核盘菌病也称作棉状腐病、水浸状软腐病（waterysoftrot）、茎腐病、枯萎病（drop）、冠腐病（crownrot）和花腐病（blossomblight）。这种病原体的关键特征是其在它感染的植物上产生黑色静止结构物（称作菌核）和白色绒毛状生长物的能力。这些菌核在春天形成在子囊中产生孢子的子实体，因而命名为子囊菌（Ascomycetes）。这种病原体可以在许多大陆上出现和具有广泛的植物宿主范围。当核盘菌因有利的环境条件在田间发生时，损失可能巨大。白霉病侵袭广泛范围的宿主。已知它感染408种植物种类。其多样的宿主范围和感染处于任何生长阶段的植物的能力使得白霉病是一种十分严重的疾病。这种真菌可以在感染的组织上、在土壤中和在活植物上存活。它侵袭幼苗、成熟植物和田间的或储存的果实。白霉病可以在田间在植物之间迅速传播。它也可以在储存设施中传播遍及收获的作物。它常侵袭的一些作物是大豆、菜豆、向日葵、卡诺拉和花生。

更进一步地，本发明的组合物旨在用于治疗禾冠柄锈菌感染。禾冠柄锈菌是燕麦冠锈病和大麦冠锈病的植物病原体和致病因子。这种病原体在全世界存在，感染野生和栽培燕麦。自从1993以来，已经在这个地区的几个地方的大麦和饲草上发生冠锈病暴发。未曾确定大麦中由这种病害引起的产量损失的程度。冠锈病对大麦生产造成威胁，因为在季节的早期从局部接种物（localinoculum）发生在大麦中的首次感染。

应当注意的是，本发明的杀真菌组合物可以抑制真菌孢子萌发和菌丝形成的至少一项。

“萌发”，在一般意义上，可以意指从微小存在或起源扩展成更大的任何事物。如在此提及的，“萌发”涉及真菌从孢子中出现并且开始生长的过程。萌发的实例是从孢子生长孢苗。萌发也可以是指在真菌、藻类和一些植物中从休眠孢子出现细胞以及从孢子生长孢苗菌丝或菌体。分生孢子是在特定条件下萌发的真菌的无性繁殖孢子。

菌丝（复数形式“菌丝”）是真菌的长、分支丝状结构，并且也存在于不相关的放线菌门中。在大多数真菌中，菌丝是主要的营养生长模式，并且统称为菌丝体；酵母是不生长为菌丝的单细胞真菌。菌丝由管状细胞壁包围的一个或多个细胞组成。在大多数真菌中，菌丝被称作“隔膜”（（单数形式隔膜septum）的内部横隔分隔成细胞。一些真菌具有无隔菌丝，表示它们的菌丝不被隔膜分隔。菌丝生长在它们的顶端。在顶端生长期间，通过细胞壁组分的外部装配和聚合和内部产生新细胞膜而延长细胞壁。顶体是与顶端生长相关的细胞内细胞器。它由含有细胞壁组分的膜结合囊泡的聚集体组成。顶体是真菌内膜系统的一部分，容纳和释放它从高尔基体接收的囊泡。这些囊泡经细胞骨架行进至细胞膜并且借助胞吐过程将它们的内容物释放到细胞的外部，在这里它可以随后转运至需要它的地方。囊泡膜有助于细胞膜的生长，同时它们的内容物形成新的细胞壁。顶体沿菌丝束的顶点移动并且产生顶端生长和分支；菌丝束的顶端生长速率是平行的并且受顶体的移动调节。随着菌丝伸长，间隔可以在正在生长的顶端后面形成以将每一菌丝分隔成单独的细胞。菌丝可以通过正在生长的顶端分叉或通过新的顶端从建立的菌丝中出现而分支。

如在此所使用的术语“菌丝形成”和“菌丝生长”涉及从孢子长出菌丝的过程，还与术语“孢子萌发”和正在生长的菌丝顶端的伸长和/或分叉的过程是可互换的。应当理解的是，用本发明的组合物处理真菌或细菌可能以至少大约5%-95%、大约10%-90%、大约15%-85%、大约20%-80%、大约25%-75%、大约30%-70%、大约35%-65%、大约40%-60%或大约45%-55%抑制菌丝形成和生长。也可能以至少大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或大约100%抑制所述菌丝形成和生长。

更具体地，如在此所使用的，术语“抑制”（"inhibit"）或“抑制”（"inhibition"）旨在以至少大约1%-100%、大约5%-95%、大约10%-90%、大约15%-85%、大约20%-80%、大约25%-75%、大约30%-70%、大约35%-65%、大约40%-60%或大约45%-55%限制、延迟、减少、降低或削弱某个过程、现象或表型。所述限制、延迟、减少、降低或削弱某个过程、现象或表型达也可能是至少大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或大约100%。

还应当指出的是，本发明的农药组合物可以另外地充当用于治疗、防止、缓解、抑制、消除病毒感染或延迟其发作的抗病毒组合物。植物致病性病毒的非限制性实例包括：弹状病毒属（Rhabdovirus），紫花苜蓿耳突病毒（AEV）；苜蓿花叶病毒属（苜蓿花叶病毒（AMV））；黄矮病毒组，菜豆卷叶病毒（BLRV）；马铃薯Y病毒属（Potyvirus），菜豆黄花叶病毒（BYMV）；黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus），黄瓜花叶病毒（CMV）；蠕传病毒属（Nepovirus），澳洲紫花苜蓿潜隐病毒（LALV）；豇豆花叶病毒科（Comoviridae），澳洲紫花苜蓿无症病毒（LASV）；南方菜豆花叶病毒属（Sobemovirus），紫花苜蓿短暂条纹病毒（LTSV）；香石竹潜隐病毒属（Carlavirus），豌豆新西兰线条病毒（PSV）；香石竹潜隐病毒属，红三叶草叶脉花叶病毒（RCVMV）；等轴不稳环斑病毒属（Ilarvirus），烟草条纹病毒（TSV）；烟草蚀纹病毒；马铃薯X病毒属（Potexvirus），白三叶草花叶病毒（WCMV）；南芥菜花叶病毒；意大利菊芋潜隐病毒；植原体属；布拉迪斯拉发花叶病毒；蚕豆萎蔫病毒；葡萄病毒B；葡萄扇叶病毒；桃丛簇花叶病毒；碧冬茄星状花叶病毒；悬钩子环斑病毒；藜草花叶病毒；草莓潜隐环斑病毒；烟草花叶病毒；烟草坏死病毒；烟草环斑病毒；番茄黑环病毒；和番茄环斑病毒。

根据某些实施方案，本发明的农药组合物可以特别适合用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在人类中的细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫感染或侵染中的至少一项或延迟其发作。

在其他实施方案中，本发明的农药组合物可以特别适合用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在家畜中的细菌、真菌、病毒、昆虫或任何其他害虫感染或侵染中的至少一项或延迟其发作。

在更具体的实施方案中，本发明的农药组合物可以用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在人类或家畜中的由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、链球菌属（Streptococcus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、志贺菌属（shigella）、弯曲菌属（Campylobacter）、洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderiacenocepacia）、鸟分枝杆菌（Mycobacteriumavium）和沙门菌属（Salmonella）中的至少一种所引起的细菌感染或延迟其发作。

在其他的具体实施方案中，本发明的农药组合物可以用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在人类或家畜中的由假丝酵母属（Candida）、曲霉属（Aspergillus）、须霉属（Phycomyces）、接合菌纲（Zygomyces）、根霉属（Rhizopus）、毛霉属（Mucor）、犁头霉属（Absidia）、霍塔毛孢子菌（Piedraiahortae）、白吉利毛孢子菌（Trichosporonbeigelii）、威尼克外瓶霉（Exophialawerneckii）、小孢子菌属（Microsporum）、分枝孢子菌属（Cladosporium）、着色真菌属（Fonsecaea）、镰刀菌属（Fusarium）、青霉属、表皮癣菌属（Epidermophyton）、小孢子菌属、毛癣菌属（Trichophyton）、糠秕马拉色菌（Malasseziafurfur）、花斑癣菌（Pityriasisversicolor）、粗球孢子菌（Coccidioidesimmitis）、荚膜组织胞浆菌（histoplasmacapsulatum）、皮炎芽生菌（Blastomycosesdermatitidis）、新型隐球酵母（Cryptococcusneoformans）、申克孢子丝菌（Sporothrixschenckii）中的至少一种所引起的真菌感染或延迟其发作。

在更具体的实施方案中，本发明的农药组合物可以用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在人类或家畜中的由以下病毒科：腺病毒科（Adenoviridae）、小RNA病毒科（Picornaviridae）、疱疹病毒科（Herpesviridae）、嗜肝DNA病毒科（Hepadnaviridae）、黄病毒科（Flaviviridae）、逆转录病毒科（Retroviridae）、正粘病毒科（Orthomyxoviridae）、副粘病毒科（Paramyxoviridae）、乳多空病毒科（Papovaviridae）、多瘤病毒属（Polyomavirus）、弹状病毒科（Rhabdoviridae）、披膜病毒科（Togaviridae）中的至少一种所引起的病毒感染或延迟其发作。

在另一个方面，本发明提供了一种在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的组合物。该组合物包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。是组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

根据本发明的多种实施方案，本发明的这些组合物在处理的植物中赋予抗性。

术语“抗性”涉及植物抵抗细菌、真菌、病毒、昆虫或其他害虫感染或侵染的能力，即，与未处理的植物相比，所述植物可以在这种感染或侵染期间和之后展示更好的存活率，或与未处理的植物相比，它可以显示更少的症状，或它可以不以如未处理植物那样高的比率被感染或侵染。

例如，用本发明的组合物处理的植物可以抵抗害虫感染或侵染，并且感染率或侵染率达将比未处理的植物低大约1%-100%、大约5%-95%、大约10%-90%、大约15%-85%、大约20%-80%、大约25%-75%、大约30%-70%、大约35%-65%、大约40%-60%或大约45%-55%，或者比未处理的植物低至少大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或大约100%。

处理的植物的存活率可以比未处理的植物高大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或约100%。

与未处理的植物相比，可以抑制或减少由这种感染或侵染引起的病理学症状大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或大约100%。

另外，对处理的植物赋予抗性也可以归因于诱导促进植物免疫应答的免疫相关基因并且因此诱导针对病原体的抗性。这样的基因可以包括例如防御素和/或致病相关基因或任何其他的免疫相关基因。更具体地，与未处理的植物相比，可能以大约1%-1000%、大约5%-95%、大约10%-90%、大约15%-85%、大约20%-80%、大约25%-75%、大约30%-70%、大约35%-65%、大约40%-60%或大约45%-55%，或与未处理的植物相比，以至少大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%或大约1000%诱导PR1和PDF1.2的至少一种的表达。

相对于病害或害虫易感的植物，抵抗病害或害虫的植物常常被定义为在该植物上或该植物中的病原体生长的减少。因此，与易感植物相比，抗性植物将较少地受到所述病原体不利影响，或甚至对其有害作用有免疫力。这可以例如通过诱导植物免疫基因来实现。

实际上，在一个实施方案中，本发明的组合物上调或诱导植物免疫相关基因的表达。在更具体的实施方案中，所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

通常，当使用时，术语“诱导表达”或“诱导基因的表达”涉及引起以下情况至少一项增加：转录速率、翻译速率、蛋白质和/或mRNA稳定性、基因产物量和蛋白质和/或mRNA成熟。更具体地，当诱导所述基因表达时，与对照（未处理（未诱导）的生物）中的相应速率相比，转录速率、翻译速率、蛋白质和/或mRNA稳定性、基因产物量和蛋白质成熟和/或mRNA成熟中的至少一项的增加为：以至少大约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%或大约1000%增加。

在一个具体实施方案中，病程相关蛋白家族的成员可以是PR1并且防御素家族的成员可以是PDF1.2。

PDF1.2也称作LCR77；低分子量半胱氨酸丰富77；MFC16.8；MFC16_8；PDF1.2；PDF1.2A；植物防御素1.2和植物防御素1.2A。PDF1.2编码乙烯响应和茉莉酸响应植物防御素，并且属于具有以下成员的植物防御素（PDF）家族：Atlg75830/PDF1.1、At5g44420/PDF1.2a、At2g26020/PDF1.2b、At5g44430/PDF1.2c、At2g26010/PDF1.3、Atlgl9610/PDF1.4、Atlg55010/PDF1.5、At2g02120/PDF2.1、At2g02100/PDF2.2、At2g02130/PDF2.3、Atlg61070/PDF2.4、At5g63660/PDF2.5、At2g02140/PDF2.6、At5g38330/PDF3.1和At4g30070/PDF3.2。

在另一个具体实施方案中，本发明的组合物诱导PR1在所述植物中表达。

PR1（病程相关基因1）也称作AtPR1；病程相关基因1；病程相关蛋白1；PR1；PR1；T6B13.15和T6B13_15。在响应于多种病原体时诱导PR1基因表达。它是对于SAR应答的有用分子标记。这种基因的表达是水杨酸响应的（SAR）。

“病程相关蛋白（PR）”已经定义为“由宿主植物编码但是仅在病理或相关情况下诱导的蛋白质”。将被包括在PR之中的一种蛋白质必须在感染时新近表达，但是不必然地在所有病理情况下表达。病理情况指所有类型的感染状态，不仅仅指其中PR最常见的抗性、超敏反应；它们还包括由线虫、昆虫和草食动物所致的寄生性侵袭（parasiticattack）。仅借助于非生物性胁迫条件的诱导不是纳入作为PR的充分标准。PR组的成员包括例如PR1a、PR1b、PR1c、PR2a、PR2b、PR3、PR4、PR5a、PR5b、16kD、Gluc.b、Ch.32、Ch.34和渗透蛋白。

在又另一个具体实施方案中，本发明的组合物诱导PDF1.2在所述植物中表达。

在进一步的具体实施方案中，本发明的组合物诱导PR1和PDF1.2在所述植物中表达，所述组合物任选地诱导至少一个另外的免疫相关基因表达。

在某些实施方案中，这种基因例如包括拟南芥基因AtBGL2、AtVSPl、AtThi2.1、AtLox以及它们在其他植物种类中的等同物。更进一步地，这些基因可以是番茄基因：蛋白质抑制剂1（Pin1）和Pin2。

在具体实施方案中，本发明的组合物增强、增加或诱导植物免疫相关基因的表达，从而增加植物对害虫（包括真菌、病毒、细菌、线虫和昆虫的至少一种）感染或侵染的抗性。

在又另一个实施方案中，本发明的农药组合物和方法可以适用于赋予针对由线虫引起的病理状况的抗性和/或对其进行治疗。植物致病性线虫的非限制性实例包括：鳞球茎茎线虫（Ditylenchusdipsaci）、菊花滑刃线虫（Aphelenchoidesritzemabosi）、孢囊线虫属（Heteroderaspp.）种类、三叶草胞囊线虫（Heteroderatrifolii）、甜菜胞囊线虫（Heteroderaschachtii）、美洲剑线虫（Xiphinemaamericanum）、短体属（Pratylenchus）种类、伤残短体线虫（Pratylenchusvulnus）、落选短体线虫（Pratylenchusneglectus）、穿刺短体线虫（Pratylenchuspenetrans）、长针属（Longidorus）种类、针线虫属（Paratylenchus）种类、钩针线虫（Paratylenchushamatus）、肾状线虫属（Rotylenchulus）种类、根结线虫属（Meloidogyne）种类、花生根结线虫（Meloidogynearenaria）、哥伦比亚根结线虫（Meloidogynechitwoodi）、北方根结线虫（Meloidogynehapla）、南方根结线虫（Meloidogyneincognita）、爪哇根结线虫（Meloidogynejavanica）、螺旋属（Helicotylenchus）种类、拟毛刺属（Paratrichodorus）种类、矮化属（Tylenchorhynchus）种类、长尾刺线虫（Belonolaimuslongicaudatus）、半穿刺线虫（Tylenchulussemipenetrans）、薄叶小环线虫（CriconemellaxenoPlax）、螺旋属种类和矮化属种类。

在又另一个实施方案中，本发明的农药组合物和方法可以适用于赋予针对由昆虫引起的病理状况的抗性和/或对其进行治疗。优先于所述植物的植物有害昆虫的非限制性实例包括：Acalymma、黑头长翅卷蛾（Aclerisvariegana）、非洲粘虫（Africanarmyworm）、非洲化蜂（Africanizedbee）、潜蝇科（Agromyzidae）、褐切根虫（Agrotismunda）、Agrotisporphyricollis、柑橘黑刺粉虱（Aleurocanthuswoglumi）、甘蓝粉虱（Aleyrodesproletella）、南瓜缘蝽（Anasatristis）、奥地利丽金龟（Anisopliaaustriaca）、梨花象甲（Anthonomuspomorum）、草莓花象（Anthonomussignatus）、桔红圆肾盾蚧（Aonidiellaaurantii）、蚜虫（Aphid）、黑豆蚜（Aphisfabae）、棉蚜（Aphisgossypii）、苹果实蝇（Applemaggot）、阿根廷蚁（Argentineant）、行军切根虫（Armycutworm）、Arotrophoraarcuatalis、咖啡链蚧（Asterolecaniumcoffeae）、澳洲疫蝗（Australianplaguelocust）、马铃薯木虱（Bactericeracockerelli）、果实蝇属（Bactrocera）、番石榴果实蝇（Bactroceracorrecta）、蓓蝽（Bagradahilaris）、胡桃天牛（Bandedhickryborer）、BanksiaBoringMoth、甜菜粘虫（Beetarmyworm）、布冈夜蛾（Bogongmoth）、棉铃象甲（Bollweevil）、甘蓝蚜（Brevicorynebrassicae）、褐飞蝗（Brownlocust）、茶翅椿（Brownmarmoratedstinkbug）、褐稻虱（Brownplanthopper）、甘蓝夜蛾（CabbageMoth）、菜青虫（Cabbageworm）、四纹豆象（Callosobruchusmaculatus）、蔗龟（Canebeetle）、胡萝卜茎蝇（Carrotfly）、瘿蚊科（Cecidomyiidae）、地中海实蝇（Ceratitiscapitata）、谷物叶甲（Cerealleafbeetle）、麦秆蝇（Chloropspumilionis）、柑橘天牛（Citruslong-hornedbeetle）、咖啡绿蚧（Coccusviridis）、苹果蠹蛾（Codlingmoth）、咖啡果小蠹（Coffeeborerbeetle）、科罗拉多马铃薯甲虫（Coloradopotatobeetle）、杂拟谷盗（Confusedflourbeetle）、草螟属（Crambus）、黄瓜叶甲（Cucumberbeetle）、象鼻虫（Curculionucum）、切根虫（Cutworm）、歪斜褐夜蛾（DarkSword-grass）、棕榈核小蠹（Datestonebeetle）、地种蝇属（Delia）（属）、葱地种蝇（Deliaantiqua）、萝卜地种蝇（Deliafloralis）、甘蓝地种蝇（Deliaradicum）、沙漠蝗虫（Desertlocus）、根萤叶甲属（Diabrotica）、小菜蛾（Diamondbackmoth）、瓜绢野螟（Diaphaniaindica）、黄瓜绢野螟（Diaphanianitidalis）、柑橘木虱（Diaphorinacitri）、蔗根非耳象（Diaprepesabbreviatus）、长额负蝗（Differentialgrasshopper）、摩洛哥戟纹蝗（Dociostaurusmaroccanus）、斑翅果萧（Drosophilasuzukii）、尖翅蕉弄蝶（Erionotathrax）、绵蚜亚科（Eriosomatinae）、甘蔗飞虱（Eumetopinaflavipes）、欧洲玉米螟（EuropeanCornBorer）、甘蓝菜蝽（Eurydemaoleracea）、麦扁盾蝽（Eurygasterintegriceps）、森林虫（Forestbug）、西花蓟马（Frankliniellaoccidentalis）、美东花蓟马（Franklniellatritici）、大蜡螟（Galleriamellonella）、暗切夜蛾（GardenDart）、温室白粉虱（Greenhousewhitefly）、东方蝼蛄（Gryllotalpaorientalis）、野地蟋蟀（Grylluspennsylvanicus）、美国舞毒蛾（GypsymothsintheUnitedStates）、棉铃虫（Helicoverpaarmigera）、谷实夜蛾（Helicoverpazea）、茄二十八星瓢虫（Henosepilachnavigintioctopunctata）、黑森瘿蚊（Hessianfly）、日本金龟（Japanesebeetle）、虫斑皮蠹（Khaprabeetle）、亮灰蝶（Lampidesboeticus）、大白粉蝶（LargeWhite）、潜叶虫（Leafminer）、Lepidiotaconsobrina、榆蛎盾蚧（Lepidosaphesulmi）、Leptoglossuszonatus、Leptopternadolabrata、小蜡螟（Lesserwaxmoth）、潜叶蛾（Leucoptera）（蛾）、咖啡潜叶蛾（Leucopteracaffeina）、苹果浅褐卷叶蛾（Lightbrownapplemoth）、浅褐色苹果蛾天敌（Lightbrownapplemothcontroversy）、稻水象甲（Lissorhoptrusoryzophilus）、长尾弄蝶（Long-tailedSkipper）、草盲蝽属（Lygus）、木槿曼粉蚧（Maconellicoccushirsutus）、蔷薇刺金龟（Macrodactylussubspinosus）、马铃薯蚜（Macrosiphumeuphorbiae）、玉米象（Maizeweevil）、烟草天蛾（Manducasexta）、大麦茎干瘿蚊（Mayetiolahordei）、粉蚧（Mealybug）、蛾（Moth）、韭菜蛾（Leekmoth）、桃蚜（Myzuspersicae）、稻绿蝽（Nezaraviridula）、橄榄果萧（Olivefruitfly）、禾萧科（Opomyzidae）、达摩凤蝶（Papiliodemodocus）、木瓜秀粉蚧（Paracoccusmarginatus）、Paratachardinapseudolobata、豌豆蚜（Peaaphid）、蝽总科（Pentatomoidea）、马铃薯块茎蛾（Phthorimaeaoperculella）、鳃金龟属（Phyllophaga）（属）、根瘤蚜属（Phylloxera）、球蚜总科（Phylloxeroidea）、棉红铃虫（Pinkbollworm）、苹果芽蛾（Platynotaidaeusalis）、梅锥象甲（Plumcurculio）、暗色粉蚧（Pseudococcusviburni）、紫斑谷螟（Pyralisfarinalis）、外引红火蚁（Redimportedfireant）、赤蝗（Redlocust）、樱桃绕实蝇（Rhagoletiscerasi）、西部樱桃实蝇（Rhagoletisindifferens）、越桔绕实蝇（Rhagoletismendax）、红棕象甲（Rhynchophorusferrugineus）、谷蠹（Rhyzoperthadominica）、米蛾（RiceMoth）、麦双尾蚜（Russianwheataphid）、梨圆蚧（SanJosescale）、介壳虫（Scaleinsect）、眼蕈蚊科（Sciaridae）、茶黄蓟马（Scirtothripsdorsalis）、盾蝽科（Scutelleridae）、蛇形潜叶蝇（Serpentineleafminer）、银叶粉虱（Silverleafwhitefly）、蜂箱小甲虫（Smallhivebeetle）、大豆蚜（Soybeanaphid）、圆灰翅夜蛾（Spodopteracilium）、斜纹夜蛾（Spodopteralitura）、黄瓜十二点叶甲（Spottedcucumberbeetle）、南瓜蔓吉丁虫（Squashvineborer）、Stenotusbinotatus、胸喙亚目（Sternorrhyncha）、向日葵实蝇（Strauzialongipennis）、黄曲条跳甲（Stripedfleabeetle）、盾蝽（Sunnpest）、甘薯褐黄缘蝽（Sweetpotatobug）、牧草盲蝽（Tarnishedplantbug）、蓟马（Thrips）、棕榈蓟马（Thripspalmi）、褐色橘蚜（Toxopteracitricida）、非洲木虱（Triozaerytreae）、番茄麦蛾（Tutaabsoluta）、小圆皮蠹（Variedcarpetbeetle）、石榴小灰蝶（Viracholaisocrates）、蜡虫（Waxworm）、西方玉米根虫（Westerncornrootworm）、麦象甲（Wheatweevi）、冬尺蠖蛾（WinterMoth）和材小蠹（Xyleborusglabratus）。

在一个具体实施方案中，本发明的组合物有效防止、缓解、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染、孢子萌发和菌丝生长或延迟其发作。本发明的组合物从而有效延长这种产品的货架期或储存时间。

应当注意的是农场和工业产品包括植物、植物材料（包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织）、坚果、籽粒、果实（例如，葡萄）、插枝、根茎、接穗）、收获的作物（包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果、籽粒、果实、插枝、根茎或接穗）的任一种。

此外，因此应当理解的是，所述农药组合物可以有效防止、缓解、抑制、消除在不是植物材料的农场和工业产品（如肉产品和乳制品）以及易感于所述害虫的任何工业材料中的害虫感染或侵染、孢子萌发和菌丝生长或延迟其发作。

术语“货架期”被定义为一种产品对于消费者或零售商而言出于感官、营养和/或安全性目的保持可接受的时间的量。本发明的组合物对于延长产品货架期是特别有用的，如在实例10中所示，在0°C下2.5个月和20°C下3月之后，与对照葡萄相比，在用所述组合物处理的葡萄中显示腐败降低50%。用本发明的组合物处理的工业和农场产品的货架期可以延长至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、15天、20天、25天、30天、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年、5年、10年或甚至更长时间。

在保护材料时，本发明的组合物可以用于保护工业材料免受所不希望的微生物感染和破坏。

在本发明背景下，工业材料被理解为表示已经为用于工业中制备好的非生命物质。例如，预期由根据本发明的组合物保护以免受微生物、真菌、病毒或昆虫改变或破坏的工业材料可以是胶粘剂、浆料、纸和板材、纺织品、羽毛、木材、涂料和塑料制品、冷却润滑剂以及可以被这类害虫感染或破坏的其他材料。也可以提及在有待保护的材料范围内可能因微生物增殖受损的生产厂的部件，例如冷却水回路。

应当理解的是，在某些实施方案中，本发明的组合物还可以进一步包含农业上可接受的载体。术语“农业上可接受的载体”旨在包括促进本发明的组合物施用至预期受试者或促进储存、运输或处置的任何材料，所述受试者可以例如植物、植物材料或设备。用于施用至植物和植物材料的组合物中的载体优选地是无植物毒性的或仅仅是轻微植物毒性的。取决于所希望的制剂，适合的载体可以是固体、液体或气体。在一个实施方案中，优选的载体包括极性液体载体如水、矿物油和植物油。

如在此所使用的，术语“受试者”旨在包括可以将本发明的化合物或组合物施用到其上的任何目标表面，例如施用到植物、植物材料（包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果、籽粒、果实、插枝、根茎、接穗）、收获的作物（包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果、籽粒、果实、插枝、根茎、接穗），或包括可能接触收获作物的任何表面，包括采收设备、包装设备和包装材料。

因此通常配制用于农业和工业目的像这样使用的组合物、以及如下文描述用于促进在植物中的生长的组合物。可以在惰性载体中使用如在此所述的有效成分形成根据本发明的抗微生物、抗真菌、杀虫的并且促进植物生长的组合物。如果配制为固体，则这些成分可以与这样的典型的载体（如漂白土、高岭土、二氧化硅或其他可湿性无机稀释剂）混合。也可以通过将干的有效成分与精细分散的固体如滑石、硅藻土（kieselguhr）、叶蜡石、粘土、硅藻土（diatomaceousearth）等组合来使用自由流动的粉剂。

散剂也可以作为混悬剂或溶液剂应用，这取决于在液体载体中的溶解度。可以使用活性成分分散于低沸点分散溶剂载体中的加压喷雾剂，典型地是气溶胶。重量百分比可以根据其中组合物有待施用和制剂有待使用的方式而变化。通常，活性成分将包含抗微生物组合物中按重量计0.005%至95%的活性成分。生物控制组合物可以与其他成分一起施用，其他成分包括生长调节剂、杀虫剂、除草剂、肥料等等。有助于适用性、便利、处置、维持化学稳定性和增加有效性的活性成分制剂可能需要添加各种材料。可以基于影响活性成分的溶解度、着火危险及闪点、乳化性、比重和经济考虑来选择溶剂。

根据本发明的另一个实施方案，可以添加任何辅助剂来增强活性成分，并且可以包括呈阴离子、阳离子或非离子的表面活性剂。稳定剂和防冻复合物将延长储存。另外地，可以添加增效剂、粘着剂、涂布剂（spreader）和除臭复合物（deodorantcompound）来改善商品制剂的处理特性。

也可以使用本发明的农药组合物作为抗微生物剂，用于抑制在活宿主的表面上或在活宿主外部的介质中存在的微生物的生长或根除在这些位置的微生物。可以使用本发明的组合物例如作为易受微生物生长影响的多种固体和液体培养基的消毒剂。可以通过熟练的技术人员已知的方法来确定本发明组合物的适合量。

可以按任何已知的方式制备这些组合物，例如通过用农业可接受的载体、辅料或稀释剂（如溶剂、乳化剂和分散剂或表面活性剂）补足活性成分来制备。

适合用于本发明及其多种产物中的溶剂包括但不限于芳香族化合物，例如二甲苯；氯化的芳香化合物，例如氯苯；石蜡，例如矿物油馏分；醇，例如甲醇及丁醇；酮，例如环己酮；胺，例如乙醇胺及二甲基甲酰胺；和水，优选地是去离子的。当使用水时，也可以使用其他有机溶剂作为共溶剂。

适用于本发明及其产物中的载体包括但不限于研磨的天然或合成矿物，例如，高岭土、粘土、滑石、白垩、二氧化硅、硅酸盐等。

适合用于本发明的组合物中的乳化剂包括但不限于非离子型和阴离子型乳化剂，例如，聚氧乙烯脂肪醇醚、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐，等等。

适合用于本发明的组合物中的分散剂包括但不限于木质素亚硫酸盐废液（lignosulfitewasteliquor）和甲基纤维素，等等。

适合的表面活性剂包括但不限于木质素-苯酚-（ligno-phenol-）、萘-和二丁基萘磺酸、脂肪酸、烷基-和烷芳基磺酸盐、烷基月桂基醚和脂肪醇硫酸盐、硫酸化十六烷醇、十七烷醇和十八烷醇的盐和脂肪醇乙二醇醚的盐、磺化萘及其衍生物与甲醛的缩合物、萘或萘磺酸与苯酚和甲醛的缩合物、聚氧乙烯辛基酚醚、乙氧基化异辛基-、辛基-或壬基苯酚、烷基酚聚乙二醇醚、三丁基苯基聚乙二醇醚、烷基月桂基聚醚醇、异三癸醇、脂肪醇/氧化乙烯缩合物、乙氧基化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚或聚氧丙烯烷基醚、月桂醇聚乙二醇醚乙酸酯（laurylalcoholpolyglycoletheracetate）、山梨醇酯、木质素亚硫酸盐废液或甲基纤维素。

出于本申请的目的，可以将混悬剂形式的本发明组合物直接使用或配制为适合于喷雾、雾化、喷洒、撒布或倾倒的组合物。例如，可以将组合物配制为待喷雾的溶液剂、粉剂、混悬剂、高度浓缩的水性、油性或其他混悬剂或分散体、乳剂、油分散体、糊剂、喷粉剂或颗粒剂。

无毒的含水组合物也可以含有各种添加剂，如抗氧化剂、防腐剂、pH中和剂和/或澄清剂。

在使用时，将无毒含水组合物稀释并且喷洒或喷雾到侵染的宿主上。在一些情况下，可能需要重复施用。

为了增强施用的效率，本发明的农药组合物，具体而言，杀真菌/杀细菌/抗病毒组合物并且促进植物生长的组合物也可以包含其他活性成分，如除草剂、杀虫剂、生长刺激剂、肥料等等。

另外地，可以将液体形式的组合物置于擦拭巾（wipe）上或包埋于其中，所述擦拭巾优选地由纸或布制成或将其提供作为用于卫生的清洁剂。

根据本发明的组合物也适合用于增加作物的产量。而且，它具有降低的毒性并且被植物良好耐受。

这种组合物在控制植物病害所需的浓度被植物良好耐受的事实（如在实例6中所示）允许处理植物的地上部分、繁殖砧木（propagationstock）和种子、以及土壤。

评定本发明的组合物或包含另外农用药剂如另外杀真菌剂或随其一起递送的本发明组合物可以包括评定：

(1)在不刺激所不希望的非目标微生物生长或不损害有益生物的情况下的目标微生物的控制程度。

(2)控制的耐久性。

(3)在部分或整个生长季期间反复使用时对植物发育的植物毒性和影响程度。

(4)与产业中所使用的其他控制产品的相容性。

在一个实施方案中，本发明的组合物是轻微植物毒性的并且优选地该组合物是没有植物毒性的。

如在此所使用的，术语“轻微植物毒性的”旨在表示该植物毒性水平基本上不影响植物产量或品质，并且优选地表示本发明的组合物可以在植物叶上引起小污损（5-15mm²），并且可以引起坏死或褪绿斑（>15mm²）和叶扭曲，但是优选地不应当杀死在施用本发明的组合物的植物上的多于30%、优选地不多于20%的叶。术语“植物产量”是指植物或植物群体的产品产量。在一个实施方案中，该产量可以是产品的产量，所述产品包括但不限于完整植物或植物部分如根、鳞茎、球茎、块茎、叶、插枝、花、茎、果实和种子或其他繁殖材料中的一种或多种。

在第三方面，本发明提供了用于促进在植物中的生长的组合物。本发明的组合物包含一种生物控制剂作为活性成分，该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合；所述组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

术语“促进生长”是指以下事实：在处理足够时间后，与未处理的对照植物相比，在用该组合物处理的植物中的至少一个植物部分的质量是显著更大的。

更具体地，根据一个实施方案，该组合物诱导以下至少一项的增加：植物重量、植物高度、植物叶数、根系、植物粗度和植物生物量。

应当理解的是，该组合物可以在各个植物部分中促进植物生长。如在此提及的术语“植物部分”是针对以下任何一项：叶盘、根、茎、嫩枝、叶、花粉、种子、胚、子叶、下胚轴、大配子体、愈伤组织、分生组织以及各种形式的细胞和培养物如单细胞、原生质体、胚和愈伤组织。植物组织可以处于植物中或处于器官、组织或细胞培养物中。

在一个实施方案中，质量增加的部分是对植物商业产量有影响的部分（果实、籽粒、根、花和叶）。

应当的理解是，本发明的组合物可以增加木本植物的粗度、生物量和刚性并且因此可以适用于造纸工业中。

具体而言，增强植物生长的组合物可能以大约1%至大约99.9%之间，更具体地以至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约20%、大约21%、大约23%、大约25%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%或大约60%增加植物的高度。更具体地，处理可能以至少大约15%至大约25%增加植物的高度。

此外，该组合物可能以大约1%至大约99.9%之间，更具体地以至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约21%、大约23%、大约25%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%或大约60%增加植物的重量。更具体地，处理可能以至少大约25%至大约35%增加植物的重量。

就每株植物的叶数而言，该组合物可能以大约1%至大约99.9%之间，更具体地以至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约20%、大约21%、大约23%、大约24%、大约25%、大约26%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%或大约60%增加所述数目。更具体地，处理可能以至少大约20%至大约30%增加植物叶数。

可以在实例11和图11A-11C中找到这样的增强的实例。

该组合物也可以增强植物根系，表示为所述植物的地下部分的重量的增加。在一些实施方案中，所述植物的地下部分的重量增加大约1%至大约99.9%之间，更具体地至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%＞、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约20%、大约21%、大约23%、大约24%、大约25%、大约26%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%或大约60%。

该组合物也可以增加植物茎（stalk）粗度。在一些实施方案中，所述植物的茎粗度增加大约1%至大约99.9%之间，更具体地至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约20%、大约21%、大约23%、大约24%、大约25%、大约26%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%、大约60%、大约70%、大约80%、大约90%和大约100%。

此外，本发明的组合物还使得植物更为木质（挺直），反映为在植物和垂线（垂直于地面）之间的角度减小。这种减小可以是至少大约0.1°、大约0.2°、大约0.4°、大约0.8°、大约1.0°、大约2.0°、大约3.0°、大约4.0°、大约5.0°、大约6.0°、大约8.0°、大约10°、大约12°、大约14°、大约16°、大约18°、大约20°、大约22°、大约24°、大约28°、大约30°或大约35°。

该组合物可能以大约1%至大约99.9%之间，更具体地以至少大约1%、大约3%、大约5%、大约7%、大约9%、大约11%、大约13%、大约15%、大约17%、大约19%、大约20%、大约21%、大约23%、大约24%、大约25%、大约26%、大约27%、大约29%、大约30%、大约31%、大约33%、大约35%、大约37%、大约39%、大约41%、大约43%、大约45%、大约47%、大约49%、大约51%、大约53%、大约55%、大约57%或大约60%增加植物的生物量。

在另一个实施方案中，本发明的组合物可以进一步包含另外的选自下组的农用药剂，该组由以下各项组成：除草剂、杀虫剂、生长刺激剂和肥料。

除草剂，也称作除莠剂，是用来杀死不想要的植物的农药类型。选择性除草剂杀死特定的目标，同时保留所希望的作物相对不受伤害。这些除草剂中的一些通过干扰杂草生长发挥作用并且常常是植物激素的合成模拟物。用来清理废弃荒地、工业地点、铁路和铁路路堤的除草剂是非选择性的并且杀死与它们接触的所有植物材料。较小的量用于林业、牧场系统和划归为野生动物栖息地的区域的管理。

除草剂可以按活性、用途、化学家族、作用方式或所控制的植被类型而分组。

按照活性，除草剂可以是仅破坏与这种化学品接触的植物组织的接触性除草剂或从叶施用下至根或从土壤施用上达叶而转运遍及植物的全身性除草剂。

按照用途，可以在种植前掺入除草剂，即，将它们在种植之前施用到土壤并且机械地掺入土壤中。掺入的目的是防止因光分解作用和/或挥发性而消散。它们可以是在作物出苗之前施用到土壤并且防止杂草种子的萌发或早期生长的苗前除草剂，或它们可以是在作物已经出苗后施用的苗后除草剂。

它们按作用机制（MOA）的分类指示了施用后在植物中受到影响的关键酶（firstenzyme）、蛋白质或生物化学步骤。主要作用机制是：

ACC酶抑制剂是杀草的化合物。乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）是脂质合成的第一步骤的部分。因此，ACC酶抑制剂影响草植株的分生组织中的细胞膜产生。草的ACC酶对这些除草剂是敏感的，而双子叶植物的ACC酶不敏感。

ALS抑制剂：乙酰乳酸合成酶（ALS）（也称作乙酰羟酸合成酶,或AHAS）是支链氨基酸（缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸）合成中的第一步骤。这些除草剂缓慢地使受侵袭的植物缺乏这些氨基酸，最终导致DNA合成的抑制。它们以同样的方式影响草类和双子叶植物。ALS抑制剂家族包括磺酰脲类（SU）、咪唑啉酮类（IMI）、三唑并嘧啶类（TP）、氧基苯甲酸嘧啶酯类（pyrimidinyloxybenzoates）（POB）和磺酰氨基羰基三唑啉酮类（SCT）。ALS是仅存在于植物中而在动物中不存在的生物途径，因此使得ALS抑制剂属于安全除草剂。

EPSPS抑制剂烯醇丙酮莽草酸3-磷酸合成酶EPSPS用于氨基酸色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的合成中。它们以同样的方式影响草类和双子叶植物。草甘膦（Roundup）是内吸性EPSPS抑制剂但是因接触土壤而失活。

合成植物生长素开创了有机除草剂时代。在长期研究植物生长调节剂——植物生长素后，在20世纪40年代发现它们。合成植物生长素模拟这种植物激素。它们在细胞膜上具有几个作用点，并且在控制双子叶植物中是有效的。2,4-D是合成植物生长素除草剂。

光系统II抑制剂在光合作用中在光化学步骤减少从水至NADPH2+的电子流。它们与D1蛋白上的Qb位点结合并且阻止醌与这个位点结合。因此，这组化合物引起电子在叶绿素分子上积累。因此，发生比通常被细胞耐受的那些氧化反应过度的氧化反应，并且植物死亡。三嗪除草剂（包括莠去津（Atrazine））和脲衍生物（敌草隆（diuron））是光系统II抑制剂。

光系统I抑制剂通过FeS–Fdx-NADP从正常途径窃取电子，导致电子在氧上直接放电。因此，产生ROS（活性氧簇）并且发生比通常被细胞耐受的那些氧化反应过度的氧化反应，导致植物死亡。

除草剂的实例包括但不限于：肟草酮（tralkoxydim）、喹禾灵（quizalofop）、禾草灵酸（diclofop）、炔草酸（clodinafop）、稀禾定（sethoxydim）、精恶唑禾草灵（fenoxyprop）、烯草酮（clethodim）、野燕枯（difenzoquat）、野麦畏（triallate）、二甲戊灵（pendimethalin）、氟乐灵（trifluralin）、乙丁烯氟灵（ethalfluralin）、咪草酯（imazamethabenz）、磺酰磺隆（sulfesulfuron）、氟酮磺隆（flucarbazone）、甲磺隆（metsulfuron）、醚苯磺隆（triasulfuron）、苯磺隆（tribenuron）、氯磺隆（chlorsulfuron）、噻磺隆（thifensulfuron）、氟磺隆（prosulfuron）、甲咪唑烟酸（imazapic）、咪草烟（imazathapyr）、甲氧咪草烟（imazamox）、草甘膦、草硫膦（sulfosate）、百草枯（paraquat）、麦草畏（dicamba）、二氯吡啶酸（clopyralid）2,4-D、二氯喹啉酸（quinclorac）、氯氟吡氧乙酸（fluoxypyr）、二氯吡啶酸、毒莠定（picloram）、哒草特（pyridate）和溴苯腈（bromoxynil）。

在又另一个实施方案中，本发明的组合物还进一步包含杀虫剂作为另外的活性剂。

杀虫剂是针对昆虫使用的农药。它们包括分别针对昆虫的卵和幼虫所用的杀卵剂和杀幼虫剂。杀虫剂用于农业、医学、工业和家庭。杀虫剂的用途被认为是20世纪农业生产率增加背后的主要因素之一。

内吸杀虫剂被处理的植物结合。昆虫在采食植物的同时摄入杀虫剂。

接触性杀虫剂毒杀直接接触的昆虫。功效常常与杀虫剂施用的量相关，小液滴（如气溶胶）常常改善性能。

天然杀虫剂，如烟碱、除虫菊和印楝提取物，由植物产生作为针对昆虫的防御物。自2001年以来，在美国已经禁用基于烟碱的杀虫剂以防残留物污染食物。

含保护剂成分植物（PIP）是由基因修饰后的植物产生的杀昆虫物质。例如，将编码特定的苏云金芽孢杆菌（Baccillusthuringiensis）杀生物蛋白的基因导入作物植物的遗传物质中。然后，植物制造这种蛋白质。由于杀生物剂结合到该植物中，至少不需要另外施用相同的化合物。

无机杀虫剂用金属制造的并且包括现在很少使用的砷酸盐、铜化合物和氟化合物以及常用的硫。

有机杀虫剂是合成化学品，它们包括许多可供如今使用的农药。

杀虫剂的实例包括但不限于：(E)-7-十二烯基乙酸酯/(E)-8-十二烯基乙酸酯/(Z)-8-十二烯基乙酸盐、(E,E)-8,10十二碳二烯-1-醇、1,3二氯丙烯、3(S)甲基-6-异丙烯基-9-十二碳二烯-1-基-乙酸酯、阿巴美丁（abamectin）、乙酰甲胺磷（acephate）、啶虫脒（acetamiprid）、涕灭威（aldicarb）、大蒜（Alliumsativum）、顺式氯氰菊酯（alphacypermethrin）、磷化铝、双甲脒（amitraz）、印楝素（azadirachtin）、保棉磷（azinphosmethyl）、苏云金芽胞杆菌以色列亚种（Bacillusthuringiensissubspisraelensis）、苏云金芽孢杆菌鲇泽变种（Bacillusthuringiensisvaraiziwai）、苏云金芽孢杆菌库斯塔变种（Bacillusthuringiensisvarkurstaki)、球孢白僵菌（Beauveriabassiana）、丙硫克百威（benfuracarb）、高效氟氯氰菊酯（beta-cyfluthrin）、高效氯氰菊酯（β-cypermethrin）、联苯菊酯/腈菌唑（bifenthin/myclobutanil）、联苯菊酯（bifenthrin）、硼砂、大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobiumjaponicum）、大隆（brodifacoum）、溴螨酯（bromopropylate）、噻嗪酮（buprofenzin）、硫线磷（cadusafos）、卡诺拉油/大蒜提取物/除虫菊（pyrethrum）、甲萘威（carbaryl）、克百威（carbofuran）、二氧化碳/环氧乙烷、丁硫克百威（carbosulfan）、盐酸杀螟丹（cartaphydrochloride）、溴虫清（chlorphenapy）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、香茅油、四螨嗪（clofentezine）、可得蒙（codlimone）（E,E-8,10-十二碳二烯-1-醇）、可得蒙（codlimone）[(E,E)-8,10-十二碳二烯-7-醇]、铜、王铜/硫磺、杀鼠醚（coumatetralyl）、苹果异形小卷蛾（Cryptophlebialeucotreta）、杀螟腈（cyanophos）、氟氯氰菊酯（cyfluthrin）、三环锡（cyhexatin）、氯氰菊酯（cypermethrin）、灭萧胺（cyromazine）、右旋丙烯菊酯（d-allethrin）、棉隆（dazomet）、溴氰菊酯（deltamethrin）、灭赐松（demeton-S-methyl）、地亚农（diazinon）、敌敌畏（dichlorvos）、三氯杀螨醇（dicofol）、鼠得克（difenacoum）、除虫脲（diflubenzuron）、乐果（dimethoate）、灭幼脲（Dimilin）、乙拌磷（disulfoton）、右旋苯醚菊酯/胺菊酯（（d-phenothrin/tetramethrin）、E,E-8,10-十二碳二烯-1-醇/十二碳二烯醇/十四醇、E,E-8,10-十二碳二烯-1-醇、EDB、埃玛菌素（emamectin）、硫丹（endosulfan）、顺式氰戊菊酯（esfenvalerate）、丙线磷（ethoprophos）、二溴乙烷、依杀螨（etoxazole）、苯线磷（fenamiphos）、喹螨醚（fenazaquin）、苯丁锡（fenbutatin）、杀螟硫磷（fenitrohion）、苯氧威（fenoxycarb）、唑螨酯（fenpyroximate）、倍硫磷（fenthion）、氰戊菊酯（fenvalerate）、EDTA铁钠、氟虫腈（fipronil）、氟虫脲（flufenoxuron）、氟氯苯菊酯（flumethrin）、伐虫脒（formetanate）、噻唑磷（fosthiazate）、夫马洁林（fumagillin）、糠醛、γ-BHC、高效氯氟氰菊酯（γ-cyhalothrin）、大蒜提取物、伏蚁腙（hydramethylnon）、吡虫啉（imidacloprid）、高效氟氯氰菊酯（lambda-cyhalothrin）、异戊烯酸薰衣草酯（lavandulylsenecioate）、虱螨脲（lufenuron）、磷化镁、代森锰锌（mancozeb）、槭树内酯（maplelactone）、马拉硫磷（mercaptothion）、四聚乙醛（metaldehyde）、威百亩（metam-sodium）、金龟子绿僵菌蝗变种（Metarhiziumanisopliaevaracridium）分离株IMI330189、威百亩（metham-sodium）、对甲胺磷（methamidophos）、杀扑磷（methidathion）、甲硫威（methiocarb）、灭多威（methomyl）、甲基溴、速灭磷（mevinphos）、弥拜菌素（milbemectin）、矿物油、双苯氟脲（novaluron）、氧乐果（omethoate）、邻苯基苯酚、杀线威（oxamyl）、砜吸磷（oxydemeton-methyl）、淡紫拟青霉（Paecilomyceslilacinus）菌株251、对硫磷（parathion）、氯菊酯（permethrin）、稻丰散（phenothoate）、甲拌磷（phorate）、抗蚜威（pirimicarb）、多硫化硫（polysulphidesulphur）、脂肪酸钾盐、丙溴磷（profenofos）、炔螨特（propargite）、丙硫磷（prothiofos）、除虫菊素（pyrethrin）、吡丙醚（pyriproxyfen）、喹硫磷（quinalphos）、菜籽油、豌豆根瘤菌菜豆生物型（Rhizobiumleguminosarumbiovarphaseoli）、鱼藤酮（rotenone）、氟硅酸钠、艾克敌（Spinosad）、螺螨酯（spirodiclofen）、硫磺、吐酒石（tartaremetic）、氟胺氰菊酯（tau-fluvalinate）、虫酰肼（tebufenozide）、双硫磷（temephos）、特丁硫磷（terbufos）、杀虫畏（tetrachlorvinphos）、乙酸十四烯酯（tetradecenylacetate）、三氯杀螨砜（tetradifon）、噻虫啉（thiacloprid）、噻虫嗪（thiamethoxam）、硫双威（thiodicarb）、福美双（thiram）、敌百虫（trichlorfon）、哈茨木霉（Trichodermaharzianum）、杀铃脲（triflumuron）、地中海实蝇引诱剂（trimedlure）、Z-8-十二烯-1-基乙酸酯/E-8-十二烯-1-基乙酸酯/Z-8-十二烯-1-醇以及磷化锌。

更进一步地，本发明的组合物可以进一步包含生长刺激剂作为另外的活性剂。如在此所使用的，术语“生长刺激剂”或“植物生长刺激剂”涉及引起植物生物量、根系分叉和长度、植物重量、叶数、茎粗度、植物高度和花数和/或果实数中的至少一项增加的物质。所述刺激剂可以是生物来源、有机来源或无机来源并且可以是固体或液体。这类刺激剂的非限制性实例包括：（可喷洒的可溶性粪肥）、 Biostimulant（含有冷水海带提取物的植物激素连同腐植酸和黄腐酸）、（用专有有机酸浸渍的研磨制粒的碳酸钙（38%））、VigaROOT^TM刺激剂（螯合铁、螯合锰、螯合锌、天然腐植物质、海草提取物、丝兰（yucca）和天然糖、维生素、氨基酸及有益细菌的专有共混物的干燥可溶组合）、330FEIron（10%完全螯合的DTPA铁）。

本发明的组合物可以进一步包含肥料。术语“肥料”涉及添加至土壤以供应植物生长必需的一种或多种植物养分的天然或合成来源的任何有机或无机物质（除了石灰质材料之外）。最近的评定发现大约40至60%的作物产量归功于使用商品肥料。

矿质无机肥料已经使用多个世纪，而仅在工业革命期间才广泛地开发化学合成的无机肥料。无机肥料使用还显著地支持了全球人口增长-据估计地球上几乎一半的人口目前因使用合成氮肥而得以供给食物。有机肥料包括天然存在的有机物质（例如，粪肥、蚯蚓粪、堆肥、海草、海鸟粪）或天然存在的矿物沉积物（例如，硝石）。

典型地肥料按以下变化的比例提供：

六种大量元素养分：氮（N）、磷（P）、钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg）、和硫（S）；和六种微量元素养分：硼（B）、氯（Cl）、铜（Cu）、铁（Fe）、锰（Mn）、钼（Mo）和锌（Zn）。

肥料的非限制性实例包括：硝酸铵33.5%N、铵21%N、硫酸硝酸铵26%N、硝酸钙铵（CAN）27%、硝酸钙15.5%N、硝酸钠（天然智利硝石）16%N、尿素46%N、低缩二脲尿素、碱性炉渣10%P2O5、磷矿石30/32%P205、单过磷酸钙18/20%P2O5（粉末/颗粒状）、重过磷酸钙46%P2O5颗粒状43%（水溶性）、氯化钾肥60%K20、硫酸钾肥48/52%K20、磷酸氢二铵（DAP）18-46-0、磷酸一铵（MAP）12-52-0、苜蓿粉、蝙蝠和海鸟粪、血粉、骨粉、鸡粪、鱼粉、海草（液体）、蚯蚓粪/蚯蚓堆肥、棉籽粉以及其他。

在另一个方面，本发明涉及一种治疗、防止、缓解、抑制、消除在植物或植物材料中的细菌、真菌或害虫侵染或延迟其发作的方法。本发明的方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在处理的植物或植物材料附近。在一个具体实施方案中，该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

应当理解的是，本发明的方法适用于处理和防止任何植物病原体的感染或侵染和由其所致的任何病理状况。

如本文所用，术语“疾病或病状”指其中存在扰动正常功能的状态。“疾病”是植物的任何异常状况，其引起功能障碍或损害所述植物的味道、香味、外观或质地。应当注意的是，在本文中等同地使用术语“病害”、“失调”和“状况”。在特定情况下，病害是由病原体引起的，病原体包括细菌、真菌、病毒、线虫、昆虫或其他害虫。

如在此所使用的术语“防止”或“预防”是指阻止植物病理出现，不论有无症状。像这样，本发明的方法可以用来防止出现有害植物病原体介导的状况，并且可以因此用来改善或稳定任何植物的健康。为了防止细菌、真菌、病毒、昆虫、线虫或任何其他害虫感染或侵染或处理建立的感染或侵染，可以单次或多次施用本发明的生物控制剂或其任何组合物至植物或任何植物部分、组织或细胞培养物，并且可以在延长的时间段内进行。例如，在本发明方法的一个实施方案中，可以将本发明的生物控制剂或其任何组合物至少大约每隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、60、90、120、150或180天施用。在另一个实施方案中，可以将生物控制剂或其组合物大约每隔1天至大约每隔7天、大约每隔1天至大约每隔14天、大约每隔1天至大约每隔21天、大约每隔1天至大约每隔28天或大约每隔1天至大约每隔35天施用。在一个实施方案中，可以将生物控制剂或其组合物大约每隔1天至大约每隔30天、大约每隔1天至大约每隔60天或大约每隔1天至大约每隔90天施用。在另一个实施方案中，可以将生物控制剂或其组合物大约每隔1天至大约每隔7天、大约每隔7天至大约每隔14天、大约每隔14天至大约每隔21天、大约每隔21天至大约每隔28天或大约每隔28天至大约每隔35天施用。

事实上，可以将生物控制剂或其组合物定期施用持续植物的一生，或甚至超过所处理的植物的生活周期而定期施用至植物的附近。

将本发明的生物控制剂或其任何组合物施用至植物上或植物材料上。应当注意的是，在此所使用的术语“植物材料”包括包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果、籽粒、果实、插枝、根茎、接穗、收获的作物（包括根、鳞茎、块茎、球茎、叶、花、种子、茎、愈伤组织、坚果、籽粒、果实、插枝、根茎、接穗），或包括可能接触收获作物的任何表面，包括采收设备、包装设备和包装材料。

在其他实施方案中，可以在处理的植物或植物材料的附近施用本发明的生物控制剂或其任何组合物。表述“在处理的植物或植物材料的附近”涉及围绕根据本发明的组合物可以施用到其上的所述植物或植物材料的周边，以便处理或防止植物或植物材料感染或侵染。因此，应当理解的是，“所述植物或植物材料的附近”包括在直到所述植物或植物材料的至少大约1cm、2cm、3cm、4cm、5cm、6cm、7cm、8m、9m、10cm、20cm、30cm、40cm、50cm、60cm、70cm、80cm、90cm、1m、2m、3m、4m、5m、6m、7m、8m、9m、10m、11m、12m、13m、14m、15m、16m、17m、18m、19m、20m、30m、40m或甚至50m范围内存在的所有物体。术语“所述植物或植物材料的附近”还涉及这样的物体，其中在处理的植物或植物材料的所述范围内安置这些物体之前，向其施用本发明的组合物。例如，在施用至所述植物之前，可以用本发明的组合物来增强肥料或任何其他补充物。

应当理解的是，本发明的组合物特别适合用于处理和防止植物病害，并且因此可以用于保护作物和商业上重要的其他植物或任何其他植物。

在一个实施方案中，本发明的方法用于治疗、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟其发作。

应当理解的是，所述细菌感染由以下至少一项引起：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

植物细菌病及其激发者的非限制性实例包括：

细菌性叶斑病（野油菜黄单胞菌苜蓿致病变种（Xanthomonascampestrispv.alfalfae））；细菌性芽腐病（菊欧文氏菌菊花致病变种（Erwiniachrysanthemipv.chrysanthemi））；细菌性枯萎病（密执安棍状杆菌诡谲亚种）；冠瘿（根癌农杆菌）；冠和根腐病复合征（绿黄假单胞菌（Pseudomonasviridiflava））；矮化（苛养木杆菌（Xylellafastidiosa））；丁香叶斑病（丁香假单胞菌丁香致病变种（Pseudomonassyringaepv.syringae））；细菌性溃疡（密执安棍状杆菌密执安亚种）；和细菌枯萎病（茄科雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum））。

在一个特定的实施方案中，本发明的方法可以用于治疗密执安棍状杆菌相关性病理状况，例如，番茄细菌性溃疡。

在又另一个具体实施方案中，本发明的方法可以用于治疗超过140个双子叶植物种类中的冠瘿病（肿瘤形成），一种由根癌农杆菌引起的病害。

另一个实施方案涉及用于治疗由解淀粉欧文氏菌引起的火疫的本发明方法。火疫是侵袭苹果、梨和蔷薇科（Rosaceae）的一些其他成员的接触性传染病。它是苹果和梨生产者的严重担忧。在最佳条件下，它可以在单个生长季节破坏整个果园。

更进一步地，本发明的方法可以适用于治疗丁香假单胞菌相关性病理状况，例如，由所述病原体产生Ina蛋白，引起水在相当高的温度冻结，导致植物损伤。

在另一个实施方案中，本发明的方法适用于治疗马铃薯疮痂病菌相关性病理状况，例如在马铃薯和其他根类作物上的疮痂病症状。

在另一个实施方案中，本发明的方法可以适用于治疗由野油菜黄单胞菌引起的植物病害。更具体地，所述病害的症状包括叶边褪绿和维管组织变黑，伴随广泛枯萎和坏死。随着病害的进展出现全叶黄化、枯萎和坏死。

在更具体的实施方案中，所述方法可以适用于治疗、抑制、消除真菌感染或延迟其发作。

在这样的实施方案中，真菌感染可以由以下至少一项引起：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

植物真菌病及其激发者的非限制性实例包括：

Acrocalymma根和冠腐病（Acrocalymmamedicaginis、Massarinawalkeri）；炭疽病（车轴草刺盘孢（Colletotrichumtrifolii））；丝囊霉（Aphanomyces）根腐病（根腐丝囊霉（Aphanomyceseuteiches））；黑斑病（豆类丝核菌（Rhizoctonialeguminicola））；黑根腐病（根串珠霉（Thielaviopsisbasicola）、雅致暗内孢（Chalaraelegans））；花腐病（blossomblight）（灰葡萄孢菌、富氏葡萄孢盘菌（Botryotiniafuckeliana）、核盘菌）；褐根腐病（Phomasclerotioides）；冠和根腐病复合征（锐顶镰刀菌（Fusariumacuminatum）、Gibberellaacuminata、燕麦镰刀菌（Fusariumavenaceum）、燕麦赤霉（Gibberellaavenacea）、木贼镰刀菌（Fusariumequiseti）、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）、接骨木镰刀菌（Fusariumsambucinum）、茄病镰刀菌、血红丛赤壳（Nectriahaematococca）、镰刀菌属种类、苜蓿茎点霉（Phomamedicaginis）、腐霉属（Pythium）种类、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）、瓜亡革菌（Thanatephoruscucumeris）、根串珠霉（Thielaviopsisbasicola）、雅致暗内孢）；炭腐病（菜豆壳球孢菌（Macrophominaphaseolina））；普通叶斑病（苜蓿假盘菌（Pseudopezizamedicaginis））；木栓化根腐病（炭角菌属（Xylaria）种类）；冠瘿病（苜蓿节壶菌（Physodermaalfalfae））；柱孢根腐病（Cylindrocarponmagnusianum、Nectriaramulariae）；帚梗柱孢霉根和冠腐病（野百合帚梗柱孢霉（Cylindrocladiumcrotalariae）、野百合丽赤壳属（Calonectriacrotalariae））；猝倒病（锐顶镰刀菌（Fusariumacuminatum）、Gibberellaacuminata、褐红坏死病菌（Mycoleptodiscusterrestris）、苜蓿疫霉根腐病菌（Phytophthoramedicaginis）、大雄疫霉苜蓿专化型（Phytophthoramegaspermaf.sp.medicaginis）、腐霉属（Pythium）种类、德巴利腐霉（Pythiumdebaryanum）、畸雌腐霉（Pythiumirregulare）、华丽腐霉（Pythiumsplendens）、终极腐霉（Pythiumultimum）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）、瓜亡革菌（Thanatephoruscucumeris））；霜霉病（车轴草霜霉（Peronosporatrifoliorum））；镰刀菌枯萎病（尖孢镰刀菌苜蓿专化型（Fusariumoxysporumf.sp.medicaginis））；小光壳叶斑病（Leptoleafspot）（Leptosphaerulinatrifolii）；小皮伞根腐病（小皮伞属（Marasmius）种类）；Mycoleptodiscus（褐红坏死病菌（Mycoleptodiscusterrestris））；漆斑菌（Myrothecium）根腐病（露湿漆斑菌（Myrotheciumroridum）、疣孢漆斑菌（Myrotheciumverrucaria））；瘤梗孢根腐病（多主瘤梗单孢霉菌（Phymatotrichopsisomnivore））、疫霉根腐病（苜蓿疫霉根腐病菌、大雄疫霉苜蓿专化型）；白粉病（豌豆白粉菌（Erysiphepisi）、鞑靼内丝白粉菌（Leveillulataurica））；丝核菌根腐病和茎疫病（立枯丝核菌、瓜亡革菌）；根霉芽腐病（葡枝根霉（Rhizopusstolonifer））；锈病（条纹单胞锈菌（Uromycesstriatus））；核盘菌冠和茎腐病（三叶草核盘菌（Sclerotiniatrifoliorum）、核盘菌）；白绢病（齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii）、罗氏阿太菌（Atheliarolfsii））；春季黑茎和叶斑病（苜蓿茎点霉（Phomamedicaginis））；壳多胞菌（Stagonospora）叶斑病和根腐病（草木樨壳多孢（Stagonosporameliloti）、草木樨茎点霉（Phomameliloti）、草地小球腔菌（Leptosphaeriapratensis））；匍柄霉（Stemphylium）叶斑病（格孢腔菌属（Pleospora）种类、Pleosporaalfalfae、苜蓿匍柄霉（Stemphyliumalfalfae）、蔟孢匍柄霉（Stemphyliumbotryosum）、迟熟格孢腔菌（Pleosporatarda）、小球匍柄霉（Stemphyliumglobulifeum）、Stemphyliumherbarum、枯叶格孢腔菌（Pleosporaherbarum）、膨胀匐柄霉（Stemphyliumvesicarium）种类复合体）；夏季黑茎和叶斑病（苜蓿尾孢（Cercosporamedicaginis））；黄萎病（黑白轮枝孢（Verticilliumalbo-atrum）、大丽轮枝孢（Verticilliumdahliae））；紫根腐病（Helicobasidiumbrebissonii、紫纹羽丝核菌（Rhizoctoniacrocorum））；冬季冠腐病（鬼伞（Coprinuspsychromorbidus））；Blackshoulder（链格孢）；和黄叶斑枯病（苜蓿黄斑病菌（Leptotrochilamedicaginis）、Sporonemaphacidioides）。

根据一个实施方案，本发明的方法适用于治疗灰葡萄孢菌相关病理状况。例如，这种真菌在葡萄上产生两种不同的感染，第一种为灰腐病，因持续潮湿或湿润条件所致，并且典型地导致受侵袭的葡萄串损失。第二种为贵腐病，在较湿润条件后接着较干燥条件时发生，并且可以导致不同的餐末甜葡萄酒，如苏太尼葡萄酒或托卡伊阿苏葡萄酒。灰葡萄孢菌侵袭许多其他植物。它对于无核小水果如草莓和球茎作物在经济上是重要的。

根据另一个实施方案，本发明的方法可以适合用于治疗水果和蔬菜中的真菌性腐败以及由意大利青霉、指状青霉、扩展青霉引起的任何其他病理状况。例如，粘性腐败病和蓝绿色分生孢子的产生和霉菌毒素（例如，扩展青霉产生一种称为展青霉素的霉菌毒素）的产生。

根据另一个实施方案，本发明的方法可以用于治疗在几乎每种重要的栽培芸苔属种类（包括绿花椰菜、卷心菜、卡诺拉和芥菜）上的黑斑病（也称为黑叶斑病）以及由链格孢属引起的任何其他病理状况。

更进一步地，本发明的方法可以适用于治疗由担子菌纲真菌疣顶单胞锈菌（Uromycesappendiculatus）(Pers.:Pers.)Unger引起的菜豆锈病。

在又另一个实施方案中，本发明的方法可以用于治疗由真菌鞑靼内丝白粉菌引起的番茄白粉病。

另一个实施方案涉及用于治疗由核盘菌引起的白霉病的本发明方法。

根据某些实施方案，本发明的方法可以用于治疗由禾冠柄锈菌引起的燕麦冠锈病和大麦冠锈病。

这种抗真菌方法可以特别适合于抑制孢子萌发和菌丝形成的至少一项。

在某些实施方案中，本发明的方法可以适用于治疗线虫相关状况。植物线虫病及其激发者的非限制性实例包括：鳞球茎茎线虫（Ditylenchusdipsci）；菊花滑刃线虫（Aphelenchoidesritzemabosi）；孢囊线虫（三叶草胞囊线虫（Heteroderatrifolii）；剑线虫（美洲剑线虫（Xiphinemaamericanum））；腐线虫（短体属（Pratylenchus）种类，落选短体线虫（Pratylenchusneglectus）、穿刺短体线虫（Pratylenchuspenetrans））；针线虫（长针属（Longidorus）种类；钉线虫（针线虫属（Paratylenchus）种类、钩针线虫（Paratylenchushamatus））；肾形线虫（肾状线虫属（Rotylenchulus）种类）；根结线虫（根结线虫属（Meloidogyne）种类，花生根结线虫（Meloidogynearenaria）、哥伦比亚根结线虫（Meloidogynechitwoodi）、北方根结线虫（Meloidogynehapla）、南方根结线虫（Meloidogyneincognita）、爪哇根结线虫（Meloidogynejavanica）；螺旋线虫（螺旋属（Helicotylenchus）种类）；短粗根线虫（拟毛刺属（Paratrichodorus）种类）；矮化线虫（矮化属（Tylenchorhynchus）种类）。

更进一步地，本发明的方法和组合物可以用于治疗由病毒性病原体引起的病理状况。植物病毒病及其激发者的非限制性实例包括：苜蓿耳突病（弹状病毒属，苜蓿耳突病毒（AEV））；苜蓿花叶病（苜蓿花叶病毒属，苜蓿花叶病毒（AMV））；菜豆卷叶病（黄矮病毒组，菜豆卷叶病毒（BLRV））；菜豆黄花叶病（马铃薯Y病毒属，菜豆黄花叶病毒（BYMV））；黄瓜花叶病（黄瓜花叶病毒属，黄瓜花叶病毒（CMV））；澳洲紫花苜蓿潜伏病（蠕传病毒属（Nepovirus）、澳洲紫花苜蓿潜隐病毒（LALV））；澳洲紫花苜蓿无症状病（豇豆花叶病毒科，澳洲紫花苜蓿无症状病毒（LASV））；紫花苜蓿短暂条纹病（南方菜豆花叶病毒属，紫花苜蓿短暂条纹病毒（LTSV））；豌豆条纹病（香石竹潜隐病毒属，豌豆新西兰线条病毒（PSV））；红三叶草叶脉花叶病（香石竹潜隐病毒属，红三叶草叶脉花叶病毒（RCVMV））；烟草条纹病（等轴不稳环斑病毒属，烟草条纹病毒（TSV））；烟草蚀纹病（Tomatoetch）（烟草蚀纹病毒）；和白三叶草花叶病（马铃薯X病毒属，白三叶草花叶病毒（WCMV））。

根据某些实施方案，本发明的方法通过在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性而保护植物免受病原体影响。更具体地，本发明的方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含所述生物控制剂的一种组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料上或施用在所述植物或植物材料附近。在具体实施方案中，本发明的生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

根据本发明的各种实施方案，本发明的方法在处理的植物中赋予抗性。术语“抗性”涉及植物抵抗细菌、真菌、病毒、昆虫或其他害虫感染或侵染的能力，即，与未处理的植物相比，所述植物可以在这种感染或侵染期间和之后展示更好的存活率，或与未处理的植物相比，它可以显示更少的症状，或它可以不以如未处理植物那样高的比率被感染或侵染。

有待使用的本发明的组合物和方法的生物控制剂的浓度根据目标作物、使用方法、制品形式、施用量、施用时间、有害病原体种类等等的差异而变化，而不必定义。

在一个实施方案中，所述方法上调或诱导植物免疫相关基因的表达。

在一个更具体的实施方案中，所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

本发明的农药组合物在治疗、改善、防止、消除、延迟病原体或赋予病原体抗性方面是有效的，病原体包括但不限于病毒或类病毒、细菌、昆虫、线虫、真菌等。病毒包括任何植物病毒，例如，烟草或黄瓜花叶病毒、环斑病毒、坏死病毒、玉米矮化花叶病毒，等等。主要作物的特定真菌、真菌样和病毒病原体包括：大豆：大雄疫霉大豆专化型（Phytophthoramegaspermasp.glycinea）、菜豆壳球孢菌（Macrophominaphaseolina）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）、核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum）、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）、菜豆间座壳大豆变种（Diaporthephaseolorumvar.sojae）（大豆拟茎点霉（Phomopsissojae））、大豆北方茎溃疡病菌（Diaporthephaseolorumvar.caulivora）、齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii）、菊池尾孢（Cercosporakikuchii）、大豆尾孢菌（Cercosporasojina）、东北霜霉（Peronosporamanshurica）、束状刺盘孢（Colletotrichumdematium）（Colletotichumtruncatum）、山扁豆生棒孢（Corynesporacassiicola）、大豆褐纹壳针孢（Septoriaglycines）、Phyllostictasojicola、链格孢（Alternariaalternata）、丁香假单胞菌大豆致病变种（细交链孢菌（Alternariaalternata）、Pseudomonassyringaep.v.glycinea）、野油菜黄单胞菌菜豆致病变种（Xanthomonascampestrisp.v.phaseoli）、Microsphaeradiffusa、半裸镰刀菌（Fusariumsemitectum）、大豆茎褐腐病菌（Phialophoragregata）、大豆花叶病毒、大豆小丛壳（Glomerellaglycines）、烟草环斑病毒、烟草条纹病毒、豆薯层锈菌（Phakopsorapachyrhizi）、瓜果腐霉（Pythiumaphanidermatum）、终极腐霉（Pythiumultimum）、德巴利腐霉（Pythiumdebaryanum）、番茄斑萎病毒、大豆孢囊线虫（Heteroderaglycines）、茄病镰刀菌（Fusariumsolani）；卡诺拉：白锈菌（Albugocandida）、芸苔链格孢（Alternariabrassicae）、十字花科小球腔菌（Leptosphaeriamaculans）、立枯丝核菌、核盘菌、芸苔生球腔菌（Mycosphaerellabrassiccola）、终极腐霉、寄生霜霉（Peronosporaparasitica）、粉红镰刀菌（Fusariumroseum）、链格孢；苜蓿：密执安棍状杆菌诡谲亚种、终极腐霉、畸雌腐霉、华丽腐霉、德巴利腐霉、瓜果腐霉、大雄疫霉、车轴草霜霉、苜蓿茎点霉苜蓿变种、苜蓿尾孢、苜蓿假盘菌、苜蓿黄斑病菌、镰刀菌属、野油菜黄单胞菌苜蓿致病变种、根腐丝囊霉、Stemphyliumherbarum、苜蓿匍柄霉（Stemphyliumalfalfae）；小麦：丁香假单胞菌致黑致病变种（Pseudomonassyringaep.v.atrofaciens）、冰草条黑粉菌（Urocystisagropyri）、野油菜黄单胞菌小麦致病变种（Xanthomonascampestrisp.v.translucens）、丁香假单胞菌丁香致病变种（Pseudomonassyringaep.v.syringae）、链格孢（Alternariaalternata）、草本支孢霉（Cladosporiumherbarum）、禾谷镰刀菌（Fusariumgraminearum）、燕麦镰刀菌、黄色镰刀菌（Fusariumculmorum）、小麦黑粉菌（Ustilagotritici）、小麦壳二胞（Ascochytatritici）、禾谷头孢霉（Cephalosporiumgramineum）、禾生炭疽菌（Collotetrichumgraminicola）、禾白粉菌小麦专化型（Erysiphegraminisf.sp.tritici）、禾柄锈菌小麦专化型（Pucciniagraminisf.sp.tritici）、隐匿柄锈菌小麦专化型（Pucciniareconditaf.sp.tritici）、条形柄锈菌（Pucciniastriiformis）、偃麦草核腔菌（Pyrenophoratritici-repentis）、颖枯壳针孢（Septorianodorum）、小麦壳针孢（Septoriatritici）、燕麦壳针孢（Septoriaavenae）、铺毛拟小尾孢（Pseudocercosporellaherpotrichoides）、立枯丝核菌、禾谷丝核菌（Rhizoctoniacerealis）、禾顶囊壳小麦变种（Gaeumannomycesgraminisvar.tritici）、瓜果腐霉、强雄腐霉（Pythiumarrhenomanes）、终极腐霉、禾草离蠕孢（Bipolarissorokiniana）、大麦黄矮病毒、雀麦花叶病毒、土传小麦花叶病毒、小麦条纹花叶病毒、小麦梭条花叶病毒（WheatSpindleStreakVirus）、美洲小麦条点病毒（AmericanWheatStriateVirus）、麦角菌（Clavicepspurpurea）、小麦腥黑粉菌（Tilletiatritici）、小麦光腥黑粉菌（Tilletialaevis）、小麦黑粉菌（Ustilagotritici）、印度腥黑粉菌（Tilletiaindica）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）、强雄腐霉、禾生腐霉（Pythiumgramicola）、瓜果腐霉、高原病毒、欧洲小麦条点病毒（Europeanwheatstriatevirus）；向日葵：霍尔斯单轴霉（Plasmophorahalstedii）、核盘菌、紫菀黄化病（AsterYellows）、向日葵壳针孢（Septoriahelianthi）、向日葵拟茎点霉（Phomopsishelianthi）、向日葵链格孢（Alternariahelianthi）、百日草链格孢菌（Alternariazinniae）、灰葡萄孢菌、麦氏茎点霉（Phomamacdonaldii）、桑树内生真菌（Macrophominaphaseolina）、Erysiphedehoracearum、米根霉（Rhizopusoryzae）、少根根霉（Rhizopusarrhizus）、葡枝根霉（Rhizopusstolonifer）、向日葵柄锈菌属（Pucciniahelianthi）、大丽轮枝孢（Verticilliumdahliae）、胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜致病变种（Erwiniacarotovorump.v.carotovora）、顶头孢霉（Cephalosporiumacremonium）、隐地疫霉（Phytophthoracryptogea）、婆罗门参白锈菌（Albugotragopogonis）；玉米：串珠镰刀菌亚粘团变种（Fusariummoniliformevar.subglutinans）、斯氏欧文氏菌（Erwiniastewartii）、轮枝样镰刀菌（Fusariumverticilloides）、串珠镰刀菌（Fusariummoniliforme）、玉蜀黍赤霉（禾谷镰刀菌）、玉米狭壳柱孢（Stenocarpellamaydis）（玉蜀黍壳色单隔孢（Diplodiamaydis））、畸雌腐霉、德巴利腐霉、禾生腐霉（Pythiumgraminicola）、华丽腐霉、终极腐霉、瓜果腐霉、黄曲霉（Aspergillusflavus）、玉蜀黍平脐蠕孢（Bipolarismaydis）O、T（异旋孢腔菌（Cochliobolusheterostrophus））、炭色长蠕孢（Helminthosporiumcarbonum）I、II和II（炭色旋孢腔菌（Cochlioboluscarbonum））、大斑凸脐蠕孢菌（Exserohilumturcicum）I、II和III、Helminthosporiumpedicellatum、玉蜀黍节壶菌（Physodermamaydis）、玉蜀黍叶点霉（Phyllostictamaydis）、玉蜀黍球梗孢（Kabatiellamaydis）、高粱尾孢（Cercosporasorghi）、玉米黑粉菌、高粱柄锈菌（Pucciniasorghi）、多堆柄锈菌（Pucciniapolysora）、菜豆壳球孢菌、草酸青霉菌（Penicilliumoxalicum）、稻黑孢（Nigrosporaoryzae）、草本支孢霉、新月弯孢菌（Curvularialunata）、不等弯孢（Curvulariainaequalis）、苍白弯孢（Curvulariapallescens）、密执安棒形杆菌尼布拉斯加亚种（Clavibactermichiganensesubsp.nebraskense）、绿色木霉（Trichodermaviride）、玉米矮化花叶病毒A和B、小麦条纹花叶病毒、玉米褪绿矮缩病毒（MaizeChloroticDwarfVirus）、高粱麦角菌（Clavicepssorghi）、燕麦假单胞菌（Pseudomonasavenae）、菊欧文氏菌玉蜀黍致病变种（Erwiniachrysanthemipv.zea）、胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwiniacarotovora）、谷物矮小螺原体、大孢壳色单隔孢（DiplodiamacrosPora）、大孢指疫霉（Sclerophthoramacrospora）、高粱指霜霉（Peronosclerosporasorghi）、菲律宾指霜霉（Peronosclerosporaphilippinensis）、玉蜀黍指霜霉（PeronosclerosPoramaydis）、甘蔗指霜霉（PeronosclerosPorasacchari）、丝轴黑粉菌（Sphacelothecareiliana）、玉米壳锈菌（Physopellazeae）、玉蜀黍头孢霉（Cephalosporiummaydis）、顶头孢霉（Cephalosporiumacremonium）、玉米褪绿斑驳病毒（MaizeChloroticMottleVirus）、高原病毒、玉米花叶病毒、玉米雷亚多非纳病毒（MaizeRayadoFinoVirus）、玉米条纹病毒、玉米斑纹病毒（MaizeStripeVirus）、玉米粗矮缩病毒（MaizeRoughDwarfVirus）；高粱：大斑凸脐蠕孢（Exserohilumturcicum）、禾生刺盘孢（Colletotrichumgraminicola）（禾生小丛壳（Glomerellagraminicola））、高粱尾孢、高粱胶尾孢（Gloeocercosporasorghi）、高粱粗斑壳二孢（Ascochytasorghina）、丁香假单胞菌丁香致病变种、野油菜黄单胞菌栖绒毛草致病变种（Xanthomonascampestrisp.v.holcicola）、须芒草假单胞菌（Pseudomonasandropogonis）、紫柄锈菌（Pucciniapurpurea）、菜豆壳球孢菌、高粱黑葱花霉（Periconiacircinata）、串珠镰刀菌、链格孢、高粱平脐蠕孢（Bipolarissorghicola）、高粱长蠕孢（Helminthosporiumsorghicola）、新月弯孢菌（Curvularialunata）、高粱茎点霉（Phomainsidiosa）、燕麦假单胞菌（金狗尾草叶斑假单胞菌（Pseudomonasalboprecipitans））、高粱座枝孢（Ramulisporasorghi）、高粱生座枝孢（Ramulisporasorghicola）、甘蔗黑痣菌（Phyllacharasacchari）、丝孢堆黑粉菌（Sporisoriumreilianum）（丝轴黑粉菌）、高粱轴黑粉菌（Sphacelothecacruenta）、高粱坚孢堆黑粉菌（Sporisoriumsorghi）、甘蔗花叶病毒H、玉米矮化花叶病毒A和B、高粱麦角菌、立枯丝核菌、占枝顶孢霉（Acremoniumstrictum）、大孢指疫霉、高粱指霜霉、菲律宾指霜霉、禾生指梗霜霉（Sclerosporagraminicola）、禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、强雄腐霉、禾生腐霉；水稻：稻梨孢（Magnaporthegrisea）、立枯丝核菌等。

还应当注意的是，本发明的方法有效用于防止、缓解、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟其发作，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

在第五个方面，本发明是针对一种用于促进在植物中的生长的方法。本发明的方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在所述植物或植物材料附近。在具体实施方案中，本发明的生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

在一个具体实施方案中，这种方法导致以下至少一项的增加：植物重量、植物高度、植物叶数、根系、植物粗度和植物生物量。

应当注意的是，本发明的所有方法涉及施用至一种植物中或施用在处理的植物附近。

该方法可以适当地涉及将本发明的组合物施用至在其中存在所述植物或植物材料的区域内的生长培养基，如土壤、泥炭、砂或水。例如，可以将组合物施用至其中将栽种植物的生长培养基如土壤、泥炭、砂或水或与之混合，或可以将其施用至其中已经栽种植物的生长培养基如土壤、泥炭、砂或水或与之混合，尤其当这些植物是易受在此所述的病害影响的那些植物时。

该组合物可以例如通过灌溉、喷洒、在栽种所述植物之前直接施用至所述生长培养基中并且通过在它们用于接触有待保护的植物或植物材料之前以所述组合物浸渍毛巾、擦拭物、组织等而施用。

在第六个方面，本发明提供了一种生物控制剂在制造用于防止、缓解、抑制、消除害虫感染或侵染或延迟其发作的农药组合物中的用途。本发明的生物控制剂可以包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株或突变体；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的任何提取物或制备品；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

在一些实施方案中，本发明的生物控制剂可以用于制备用于治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟其发作的农药组合物，特别地是杀细菌组合物。

这些细菌感染可以由以下至少一项引起：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

在又另一个实施方案中，由本发明提供的生物控制剂的用途产生用于治疗、防止、缓解、抑制、消除真菌感染或侵染或延迟其发作的杀真菌组合物。

这种杀真菌组合物可以特别适用于治疗由以下至少一项引起的真菌感染：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

不仅仅是对植物病原体起作用，使用生物控制剂产生的农药组合物在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性。

本发明进一步提供了本发明的生物控制剂在制备任何农药组合物例如抗病毒组合物、抗线虫组合物或可以用于治疗昆虫相关病理状况的任何组合物中的用途。

在一个实施方案中，使用该生物控制剂产生的农药组合物上调或诱导植物免疫相关基因的表达。在更具体的实施方案中，所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

在更具体的实施方案中，这些植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

在一个具体实施方案中，病程相关蛋白家族的成员可以是PR1并且防御素家族的成员可以是PDF1.2。

在另一个具体实施方案中，该农药组合物诱导PR1在所述植物中表达。

在又另一个具体实施方案中，农药组合物诱导PDF1.2在所述植物中表达。

在进一步的具体实施方案中，该农药组合物诱导PR1和PDF1.2在所述植物中表达，所述组合物任选地诱导至少一个另外的免疫相关基因表达。

此外，这种组合物适合用于防止、缓解、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟其发作，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

另外，在一些实施方案中，根据本发明的用途是用于制备促进在植物中的生长的组合物。

更进一步地，本发明提供了如由本发明定义的一种生物控制剂，用于治疗、防止、改善、抑制、消除害虫感染或侵染或延迟其发作。确切地说，用于治疗、防止、缓解、抑制、消除细菌、真菌或病毒感染或侵染或延迟其发作。

在一些实施方案中，本发明提供了如由本发明定义的一种生物控制剂，用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性。

在其他实施方案中，本发明提供了如由本发明定义的一种生物控制剂，用于防止、缓解、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟其发作，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

更进一步地，本发明提供了如由本发明定义的一种生物控制剂，用于促进在植物中的生长。

本发明的一个另外的方面涉及一种用于治疗、防止、缓解、抑制、消除在植物或植物材料中的细菌、真菌或害虫侵染或延迟其发作的组合物。

在此披露和描述了本发明，应当理解的是本发明不限于在此披露的具体实例、方法步骤和组合物，因为这类方法步骤和组合物可以稍有变化。还应当理解的是，在此所使用的术语用于以下目的：仅描述具体实施方案并且不旨在是限制性的，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求书及其等同物限定。

必须注意的是，如在本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个/一种”（"a"）、“一个/一种”（"an"）和“该(the)”包括复数指示物，除非另外清楚地说明该内容。

贯穿本说明书和后续的实例和权利要求书，除非上下文另外要求，词语“包含”（"comprise"）及其变化形式如“包含”（"comprises"）及“包含”（"comprising"）应当理解为表示包括所陈述的整体或步骤或者所陈述的整体或步骤的组，但不排除任何其它整体或步骤或任何其它整体或步骤的组。

实例

现在参考以下实例，连同上文描述一起，以非限制性的方式展示本发明的一些实施方案。通常，再是所使用的命名和本发明中所用的实验室程序包括分子技术、生物化学技术、微生物学技术和重组DNA技术。文献中透彻地解释了这些技术。参见，例如，《分子克隆实验室手册》"MolecularCloning:AlaboratoryManual"Sambrook等人,(1989)；《现代分子生物学常用实验技术》"CurrentProtocolsinMolecularBiology"第I-III卷,Ausubel,R.M.编著(1994)；Ausubel等人,《现代分子生物学常用实验技术》"CurrentProtocolsinMolecularBiology",JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989)；Perbal,《分子克隆实验指南》"APracticalGuidetoMolecularCloning",JohnWiley；Sons,NewYork(1988)；Watson等人,《重组DNA》"RecombinantDNA",ScientificAmericanBooks,纽约（NewYork）；Birren等人(编著)《基因组分析：实验室手册系列》"GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries",第1-4卷,冷泉港实验室出版社（ColdSpringHarborLaboratoryPress）,纽约(1998).《核酸杂交》"NucleicAcidHybridization"Hames,B.D.和HigginsS.J.编著(1985)；《转录和翻译》"TranscriptionandTranslation"Hames,B.D.和HigginsS.J.编著(1984)；《固定细胞和酶》"ImmobilizedCellsAndEnzymes"IRLPress,(1986)；《分子克隆实验指南》"APracticalGuidetoMolecularCloning"Perbal,B.,(1984)和《酶学方法》"MethodsinEnzymology"第1-317卷,学术出版社（AcademicPress）；《PCR方案：方法和应用指南》"PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications"，学术出版社，圣地亚哥（SanDiego），加利福尼亚州(1990)；Marshak等人.,《蛋白质纯化和表征策略–实验过程指南》"StrategiesforProteinPurificationAndCharacterization-ALaboratoryCourseManual"CSHL出版社（1996）；所有文献通过引用结合，如同在此完全陈述那样。贯穿本文件提供了其他的一般参考文献。将其中的程序被认为是本领域熟知的并且被提供以方便读者。包含在其中的全部信息通过引用结合在此。

材料

马铃薯葡萄糖琼脂（Difco）

马铃薯葡萄糖肉汤（Difco）

营养琼脂培养基（Difco）

设备和试剂盒

EZ真菌DNA提取试剂盒（EisenbergBros有限公司，以色列）

QiangenRNeasy试剂盒（英杰公司，圣地亚哥，加利福尼亚州）

EZ-第一链cDNA合成试剂盒（生物工业公司，以色列}

Multigen发酵罐（新布朗斯维克（NewBrunswick））

BiologSF-N平板（Biolog,海沃德（Hayward），加利福尼亚州，美国）

Sep-PakC18盒（Waters）

旋转蒸发器（步琪（Buchi），Flawil,瑞士）

E5150溅射镀膜仪（Polaron设备有限公司，沃特福德(赫特福德郡)WD1（War-fordHertfordshireWD1）,英国）扫描电子显微镜（JSM-5410LV；日本电子株式会社（JEOLLtd），东京，日本）

实验程序

P.aphidis培养

将P.aphidis分离株L12在26°C保持在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）上的固体培养中并且每月转移至新鲜的培养基。将液体培养物在26°C在设定于150转/分钟的旋转振荡器上在马铃薯葡萄糖肉汤（PDB）中保持7-10天。在液体培养物中10天之后，获得10⁸个分生孢子/ml。

DNA提取

将细胞在26°C旋转振荡器（150转/分钟）上在PDB中培养。将真菌生物质以10,000转/分钟离心20分钟，并且弃去培养基。将真菌细胞用无菌蒸馏水洗涤两次并且以10,000转/分钟离心另外的20分钟。弃去水，并且将真菌生物质转移至无菌的1.5-ml艾本德微量离心管并冻干。使用EZ真菌DNA提取试剂盒根据制造商的说明，从冻干的10mg真菌材料中制备基因组DNA。

DNA序列

采用针对完整ITS(ITS1f5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3'（也由SEQIDNO.5表示）和ITS4r5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，（也由SEQIDNO.6表示）的特异性引物，将提取的DNA用于PCR。以25μl的体积和1μl的模板DNA，通过ReadymixTaqDNA聚合酶系统（西格玛）进行PCR反应。扩增在热循环仪（伯乐公司（BioRadInc.），赫拉克勒斯（Hercules），加利福尼亚州）中进行，其中所述热循环仪如下编程：初始变性步骤在95°C持续3分钟，在92°C持续30秒，35个循环，在58°C（ITS）或52°C（nSSU）持续30秒，和在72°C持续1分钟。以72°C10分钟终末延长完成扩增。将扩增的条带送交测序并且将序列与数据库比对。序列呈现在图2中并且表示为SEQIDNO.:7、8、9和10，分别对应于L12、P.aphidis、P.rogulosa和P.Antarctica。

RNA分离和RT-PCR分析

用QiangenRNeasy试剂盒根据制造商的说明书，从未处理的番茄或拟南芥植物中并且从用10⁸个P.aphidis孢子/ml处理后10天的植物中分离总RNA。根据制造商的说明书（英杰公司，圣地亚哥，加利福尼亚州），在RNeasyQiagen柱上进行DNA酶处理。用EZ-第一链cDNA合成试剂盒逆转录1μg总RNA。使用如下热循环程序进行RT-PCR：96°C持续2分钟；27-33个以下循环：95°C持续15秒，55°C持续20秒以及72°C持续30秒。引物如下：LePRlF-5'TCTTGTGAGGCCCAAAATTC3'(表示为SEQIDNO.:1)；LePR1R-5'ATAGTCTGGCCTCTCGGACA3'(表示为SEQIDNO.:2)；LeActineF-5'AGGCACACAGGTGTTATGGT3'(表示为SEQIDNO.:3)和LeActineR-5'AGCAACTCGAAGCTCATTGT3'(表示为SEQIDNO.:4)；LePIN1F-5'CTTCTTCCAACTTCCTTTG3'(表示为SEQIDNO.:11)和LePIN1R-5'TGTTTTCCTTCGCACATC3'(表示为SEQIDNO.:12)；AtPR1F-5'GCCCACAAGATTATCTAAGGG3'(表示为SEQIDNO.:13)和AtPR1R-5'ACCTCCTGCATATGATGCTCCT3'(表示为SEQIDNO.:14)；AtPDF1.2F-TCATGGCTAAGTTTGCTTCC(表示为SEQIDNO.:15)和PDF1.2R-5'AATACACACGATTTAGCACC3'(表示为SEQIDNO.:16)。

用于体外抑制测定的P.aphidis分泌部分的分离

将P.aphidis置于PDA上，用透析管覆盖并且在26°C孵育10天。然后移出含有真菌的透析管并且将带有P.aphidis分泌部分的平板用于具有不同真菌病原体的抑制测定。将平板用不同的病原体接种，在它们的最佳温度孵育并且将它们的孢子萌发和菌丝线性生长测量几天。另外，使用乙酸乙酯和己烷从PDB培养物滤液提取代谢物。更具体地，使P.aphidis在26°C在埃伦迈厄（Erlenmeyer）烧瓶中以150转/分钟的恒定搅拌在PDB培养基中生长10天。将真菌细胞旋转离心下来（以10,000转/分钟，20分钟）。将上清液（由培养物滤液组成）使用1NHCl滴定至pH2.0并且使用分液漏斗以等体积的乙酸乙酯提取。收集乙酸乙酯部分并且在旋转蒸发器中在42°C蒸发[Paz,Z.等人,(2007)《应用微生物学杂志》（J.Appl.Microbiol.）103(6):2570-2579]。在使用己烷的情况下，收集的乙酸乙酯部分用己烷再提取并且如上文所示在旋转蒸发器中在42°C蒸发。将干燥部分在甲醇中复原并且在施用于华特门（Whatman）滤纸片（6mm直径）上之后用于体外实验。将滤纸片置于用不同细菌接种的PDA平板的中心。

植物和病原体的繁殖

使灰葡萄孢菌（B05.10）、指状青霉、甘蓝链格孢菌和核盘菌在22°C-27°C在每日12小时光照下在PDA培养基上生长。将鞑靼内丝白粉菌在25°C在辣椒植物上保持。在25°C分别将禾柄锈菌（Pucciniagraminis）和疣顶单胞锈菌（Uromycesappendiculatus）在小麦植物和菜豆植物上保持。

在完全黑暗下在28°C-37°C使密执安棍状杆菌密执安亚种（CMM44）、野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种（Xanthomonascampestrispv.vesicatoria）、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种（X.campestrispv.campestris）、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌番茄致病变种、丁香假单胞菌黄瓜角斑病致病变种（P.syringaepv.lachrymans）和马铃薯疮痂病菌在营养琼脂培养基（NA）上生长。所有病原体均来自本地保藏中心。

在温室中在25°C和40%相对湿度下使番茄植物（番茄(Lycopersiconesculentum)，生态型870）生长。

番茄植物上的灰葡萄孢菌的抑制

为了检验对离脱叶上和完整植物上灰葡萄孢菌的抑制，将番茄叶/植物用不同浓度（10⁴和10⁸个孢子/ml）的P.aphidis喷洒至流动，并且被允许在叶/植物上建立3日。然后用病原体（总计15,000个孢子）接种植物并且监测处理的植物中以及用水处理的对照植物中的病害症状。

番茄植物上的密执安棍状杆菌的抑制

将番茄植物用不同浓度（10⁴和10⁸个孢子/ml）的P.aphidis喷洒。允许P.aphidis在植物上建立2-3天，此后通过使用在细菌悬液（OD₆₀₀约0.9）中浸过的剪刀切下第一叶而用密执安棍状杆菌接种这些植物。监测处理的植物中和用水喷洒的对照植物中的病害症状。一些实验涉及如在实例6中所述那样接种密执安棍状杆菌后另外施用P.aphidis。

黄瓜植物上的单丝壳的抑制

用单丝壳接种之前3天，将黄瓜苗（黄瓜（Cucumissativus）栽培品种'Saphi'）用P.aphidis孢子（10⁸个孢子/ml）或用水喷洒（每个处理10株苗），并且在接种后11、12和16天对感染进行评分。为接种，将源自携带接种物的供体植物中的孢子从四面直接吹到健康籽苗上。通过使用比例1%-5%、5%-25%、25%-50%和50%-100%确定被白粉病症状覆盖的叶的百分比而对感染进行评分。

采收后葡萄上的腐败的抑制

收获来自MoshavLachis的Yuval葡萄园的汤普森无籽葡萄并且按来自3串的1.25kg包装（32个重复）。一天后，将葡萄用水或P.aphidis（10⁶或10⁸个孢子/ml）喷洒并且转移至0°C储存。2.5个月后，将葡萄转移至20°C持续3日并且监测腐败。测定每个重复的腐败葡萄的量（表示为克）。由于样品变异性，将两个连续重复的结果合并在一起以产生2.5kg样本大小。确定平均腐败并且使用Instat用Student-NewmanKeuls事后检验以P值0.01计算显著性。

电子显微镜检查

为了保存和检验拟南芥叶上的真菌孢子和菌丝，在这项研究中采用稍有改变的如Kim,(2007)中所述的蒸气固定程序[Kim,K.W.(2007),《植物病理学杂志》（J.Phytopathology）156:125-128]。在用P.aphidis处理4天之后，将拟南芥叶在良好通风的通风柜中附接至小铅瓶（viallead）。使标本在封闭的小瓶中暴露于2%(w/v)四氧化锇蒸气至少2小时并且然后在通风柜中保留过夜。然后使用剃须刀片，切出用锇酸浸渍的叶方块（每个5×5mm²）并且将其安装在金属桩（metalstub）上（直径10mm）。使用E5150溅射镀膜仪，将它们用金进行溅射镀膜（大约30nm厚）并且用扫描电子显微镜以20kV加速电压进行检查。

散发的挥发物的生物学活性测定

使P.aphidis在商业生产的划区培养皿的一半中的PDA上在25°C生长10天，之后，在划区的培养皿的另一半添加灰葡萄孢菌的菌丝栓。记录灰葡萄孢菌的菌落直径直至接种后4天并且将其与P.aphidis不存在的情况下对照平板上的生长比较。

纤维素活性

使P.aphidis在高压灭菌的纤维素膜覆盖的自来水琼脂平板（8%）上生长。接种后7天记录细胞数。

P.aphidis暴露于UV

PDA平板用10个P.aphidis细胞接种并且使其经受UV暴露持续不同的时间（0、10、20和30分钟）。然后将平板转移至25°C的培养箱中并且在72小时之后用数字摄像机记录。

实例1

P.aphidis的分离

诸位发明人从草莓叶分离出P.aphidis菌株（分离株L12）。L12分离株与图1A上看到的白粉病菌落崩溃相关。使用针对内部转录间隔区序列（ITS1）的完整rDNA区域和针对线粒体大亚基（mtLSU）和胞核小亚基（nSSU）的部分序列的特异性引物，如上文实验程序中所述，将L12分离株鉴定为P.aphidis[Avis,T.J.等人,(2001)《植物病理学》（Phytopathology）91(3):249-254]。序列显示与P.aphidis的100%一致性，如在表1和图2中所示。

表1：P.aphidis序列鉴定

^aa由BoekhoutTeun进行^b如Avis等人在2001中所述，由LevyMaggie进行

实例2

P.aphidis是一种附生酵母样真菌

诸位发明人进一步表征了L12分离株。显示在图3)中的扫描电子显微镜检查揭示，P.aphidisL12分离株是二态附生真菌。这种真菌可以在PDA上具有酵母样形式（图3E）和束丝样结构（图3C）并且还可以形成菌丝（图3D）。分离的真菌可以生长在番茄和拟南芥叶表面上并将其覆盖，如在图3F、3I和3J中所示。接种有P.aphidis的切下叶在组织内部没有显示任何真菌结构。诸位发明人得出结论，在所使用的特定实验条件下，发现P.aphidis仅作为体表寄生菌而存在；然而，不能排除它作为内生菌，因为在使用1%次氯酸钠并且甚至使用明火消毒叶表面后，在所述表面上鉴定出P.aphidis。此外，如图4清楚地显示，P.aphidis在暴露于UV直至30分钟时仍存活，并且因此，不能排除在次氯酸盐消毒和火焰消毒的叶表面上鉴定的真菌抵抗这些苛刻程序。

实例3

P.aphidisL12分离株生长的最佳温度

使用普通培养基马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）来研究P.aphidis在不同温度的生长。确定25°C至28°C范围作为菌落线性生长（在图5A和5C中显示）和真菌分泌（在图5B和5C中显示）的最佳温度范围。

实例4

P.aphidis分泌纤维素酶

为了验证P.aphidis分泌纤维素酶，诸位发明人在补充有纤维素膜的水琼脂平板上孵育这种真菌。如图6显示，P.aphidis在补充有纤维素的平板上生长得更好，表明它分泌纤维素酶。

实例5

P.aphidis在番茄植物上定殖、增殖和保持

诸位发明人检验了P.aphidis在番茄植物上定殖和增殖的能力。将P.aphidis孢子喷洒在植物上并且测定它们的群体动力学。在光学显微镜下观察叶来验证P.aphidis孢子的存在，并且将叶样品施用至PDA平板来验证生存力。在叶上喷洒点之下和之上并且还在新出现的叶上观察到P.aphidis。直至在施用后21天在所有叶上发现P.aphidis。

实例6

P.aphidis的致病性

直到施用后4周，P.aphidis以两个不同浓度（10⁴和10⁸个孢子/ml）在番茄植物和拟南芥植物和离脱叶上的叶施用没有显示植物敏感的致病性或症状的证据。同样，用生物控制剂混悬剂浸泡根系之后，不存在与番茄植物相关的病理学证据（例如褪绿或任何其他症状，数据未显示）。

实例7

P.aphidis分泌物对植物病原体的体外影响

P.aphidis分泌物对真菌性病原体的影响

在图1B和图3A中显示，P.aphidisL12分离株胞外分泌粉红色代谢物。发现这些分泌物体外抑制几种真菌病原体的孢子萌发，如在图7A中展示。它们完全抑制灰霉致病因子灰葡萄孢菌、引起小粒谷类作物（小麦、大麦、燕麦和黑麦）茎锈病的禾柄锈菌以及在柑橘中引起绿霉的指状青霉的孢子萌发。在大部分芸苔属种类上引起芸苔属黑色叶斑病的甘蓝链格孢菌被抑制85至90%，菜豆锈病的致病因子疣顶单胞锈菌被抑制70%，并且在番茄和辣椒上引起白粉病的鞑靼内丝白粉菌被抑制45%。这些分泌物还完全抑制核盘菌的菌核萌发，而它们仅略微抑制（10%）燕麦冠锈病和大麦冠锈病的致病因子禾冠柄锈菌中的孢子萌发，在图7A中所示。

对核盘菌菌核萌发和灰葡萄孢菌、甘蓝链格孢菌及核盘菌的菌丝体线性生长的抑制持续，甚至使用高压灭菌的P.aphidis分泌物时也是如此（数据未显示）。在进一步的测定中，诸位发明人使用划分的平皿，其中P.aphidis被局限于所述平板的一侧，而灰葡萄孢菌、甘蓝链格孢菌或核盘菌在另一侧上。如在图8中描绘的，在这些条件下未检测到病原体抑制作用，表明负责病原体抑制的分泌物不是挥发性的。

P.aphidis分泌物对细菌性病原体的影响

通过测量滤纸片周围的腐败晕圈测定P.aphidis提取物对各种细菌的生长抑制作用，其中所述滤纸片用P.aphidisL12分离株培养物-滤液代谢物的乙酸乙酯或己烷提取物饱和（如由图7B所展示）。使用乙酸乙酯提取物抑制时，诸位发明人发现了几种细菌性病原体的体外抑制，如图7B所示。最显著的抑制是针对引起番茄植物（番茄）细菌性溃疡的密执安棍状杆菌密执安亚种（26mm）和引起冠瘿病的根癌农杆菌（25mm）的抑制。其他细菌性病原体解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种显示了中度抑制作用（7-15mm）。

在7C图中显示了使用己烷提取物时对几种细菌性和真菌性病原体的抑制。在己烷的情况下，最显著的抑制也是针对密执安棍状杆菌密执安亚种（24mm）和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种（15mm）的抑制。其他细菌性病原体如根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌番茄致病变种和野油菜黄单胞菌野油菜致病变种显示了中度抑制作用（9-12mm）。此外，己烷提取物抑制了所分析的真菌灰葡萄孢菌（13mm）和甘蓝链格孢菌（19mm）。

实例8

P.aphidis对离脱叶上和植物中的真菌感染的影响

用灰葡萄孢菌（总计1600个或16,000个孢子）接种之前3天，将离脱的番茄叶用P.aphidis（10⁴或10⁸个孢子/ml）喷洒。图9A和图9B显示，当离脱叶分别用10⁴或10⁸个P.aphidis孢子喷洒时，与用水喷洒的叶相比，感染显著降低55%至70%并且几乎降低100%。在灰葡萄孢菌感染的脱离叶上施用P.aphidis阻止了感染的扩散（图9E）。

如在9C图中所示，在灰葡萄孢菌接种之前3天将10⁴个/mlP.aphidis孢子或10⁸个P.aphidis孢子/ml施用至温室中的番茄植物分别降低感染15%至50%和45%至80%。对P.aphidis的高压灭菌取消了对灰葡萄孢菌感染的抑制作用，如在图9D中所示。

图9F显示了P.aphidis对黄瓜苗中孢子白粉病的作用。在接种引起白粉病的真菌单丝壳之前3天施用10⁸个P.aphidis孢子/ml至温室中的黄瓜籽苗降低感染77%至97%。

实例9

P.aphidis在植物中对密执安棍状杆菌的生物控制活性

在接种密执安棍状杆菌之前三天将10⁸个P.aphidis孢子/ml施用至温室中的番茄植物在防止密执安棍状杆菌症状方面是27%至53%有效的（图10A），因此，证明了本发明的生物控制剂的保护潜力。当诸位发明人在密执安棍状杆菌感染后增加另外的三次施用（一周给予一次）时，获得了70%至80%的症状减少。如由图10B所展示的，诸位发明人还观察到植物在显示首发症状后的50%恢复。这似乎是关于生物控制剂在感染植物上的恢复能力的首次报道。植物可以藉此恢复的机制仍然是未知的。不受受理论约束，诸位发明人推测在恢复和诱导的抗性之间存在着关联。为了评价这种假设，在恢复之前、在其期间和在其之后实施了PR基因诱导的时程分析。

实例10

P.aphidis对采收后葡萄腐败的生物控制活性

将汤普森无籽葡萄在收获后一天用水（对照）或用P.aphidis(10⁶或10⁸个孢子/ml)处理并且转移至0°C环境储存2.5个月。在将葡萄从储存室移出并保存在20°C三天之后，用P.aphidis处理的葡萄显示50%更少的腐败浆果。在下表2中呈现了这些发现。

表2：采收后葡萄的腐败

缩写：SNK（Student-Newman事后检验，p=0.01）；SE（标准误差；PA，P.aphidis）

实例11

P.aphidis诱导植物生长

发现P.aphidis促进了番茄植物生长。用总计三次施用P.aphidis（一周一次）处理的番茄植物比未处理的植物高20%，重量超过30%并且具有25%更多的叶（分别参见图11A-11C）。处理的植物还更为木质（挺直）并且具有更大的根系（数据未显示）。不受受理论约束，诸位发明人推测P.aphidi施用通过减少水分蒸腾而增强光合作用。

实例12

P.aphidis促进诱导的免疫基因表达

用P.aphidis处理不仅增强植物生长，还诱导植物免疫系统。在12A图中显示，在叶施用P.aphidis之后6和10天的番茄植物中观察到PR1基因表达的诱导，而在用水处理的植物中没有显示诱导。在施用P.aphidis之后，拟南芥植物中的PR1和PDF1.2表达也被上调（图12B）。在JA信号转导jar1和SA积累以及信号转导NahG和npr1-1方面分别受损的拟南芥突变体用P.aphidis处理随后用灰葡萄孢菌接种时，抑制作用与WT植物类似地持续，如在图13A、13B和13C中所示。因此，似乎诱导的抗性是不依赖SA-、JA-和NPR1的。现在，诸位发明人确定提取的代谢物可以在植物中诱导抗性或控制灰葡萄孢菌感染。

实例13

P.aphidis大量生产所需要的条件的表征

诸位发明人首先标准化一种用于获得足够的实验室实验及和田间实验用的活性接种物的方法。使P.aphidis分离株L12以不同的温度和孢子浓度在不同的液体生长培养基中生长，并且在针对灰葡萄孢菌的生物测定中监测活性。在预实验中，诸位发明人在不同的温度使用普通培养基-马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）并且确立25°C至28°C为菌落直径和分泌物的最佳温度范围，如在图5A-5C中所显示。当诸位发明人以恒定搅拌150转/分钟使真菌在在埃伦迈厄烧瓶中的液体马铃薯葡萄糖肉汤（PDB）中生长时，在26°C上10日天之后获得10⁸个分生孢子/ml。然后，使用Multigen发酵罐在不同的温度探索不同的液体培养基（例如，酵母麦芽蛋白胨葡萄糖、葡萄糖蛋白胨培养基、CZAPEX-DOX），以便获得用于大量生产孢子和活性分泌物（如在针对灰葡萄孢菌的生物测定中所确定的）的最佳条件。平行地，在BiologSF-N平板上检验P.aphidis对不同碳源的利用。通过施用接种有根癌农杆菌或灰葡萄孢菌孢子的低熔点琼脂并且检查P.aphidis分泌物在每种不同碳源情况下的生长抑制作用，这些平板还用于活性生物测定。基于这些结果，做出了建立用于最大孢子形成和活性的最佳条件和培养基的尝试。

实例14

探索P.aphidis-宿主相互作用

P.aphidisL12首次从草莓叶表面分离并且被指定为附生菌。现在，诸位发明人检验P.aphidisL12在植物的地上部分和其根系上建立和扩散所需要的条件。使用显微镜监测真菌自身在宿主上建立所需要的时间和它们扩散至植物的不同部分的能力。然后，诸位发明人提出验证L12的附生性命名。用L12喷洒番茄叶并且允许L12自身在植物上建立。在表面消毒之后，监测真菌在喷洒和未喷洒的植物部分上以及在截面中的位置。另外，诸位发明人构建了如对絮绒假酶菌所述的表达GFP的萦光L12分离株。诸位发明人然后使用萦光双目显微镜（fluorescencebinocular.）监视L12-GFP的建立。诸位发明人还使用共焦显微镜检查来检测植物组织内部的L12-GFP。这允许研究P.aphidisL12在植物上的建立并且确定它是否还可以渗入植物并且作为内生菌而生长。

实例15

测定由P.aphidis分泌的体外对抗不同真菌性和细菌性植物病原体的部分

在初步结果中，诸位发明人证明，从P.aphidis分离株L12分泌的化合物可以抑制各种真菌性病原体，如在图7A中所展示，并且这些化合物的乙酸乙酯提取物可以按剂量反应方式抑制几种细菌性病原体，如在图7B中所展示。己烷提取物也抑制细菌性和真菌性病原体，如在图7C所展示。

然后，进一步探索L12分泌的部分针对真菌性病原体灰葡萄孢菌和细菌性病原体密执安棍状杆菌的生物控制能力，并且将该研究扩展至其他病原体。首先，诸位发明人检验了L12的全部分泌部分体外抑制病原体的能力。通过在覆盖PDA平板的透析管上使真菌生长10天并且然后移走透析管连同真菌，诸位发明人使用铺板于PDA上的分泌部分。诸位发明人从PDB培养物滤液中浓缩分泌部分并且检验针对病原体的剂量反应作用。更具体地，为了获得分泌部分，使L12在1升PDB中在黑暗中在恒定搅拌（150转/分钟）下生长10天，并且将培养物离心以除去真菌。将培养物滤液通过固相提取盒转移并且用1ml甲醇洗脱。洗脱的‘培养物滤液‘部分然后用于体外生物测定实验，首先用灰葡萄孢菌和密执安棍状杆菌进行，并且随后用其他病原体进行（例如，核盘菌、番茄粉孢(Oidiumlycopersicum)、根癌农杆菌、野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种和野油菜黄单胞菌野油菜致病变种）。将洗脱的部分以不同浓度施用在6mm滤纸片上，所述滤纸片然后在层流罩中干燥并且用于针对平板上不同病原体的抑制生物测定中，与仅有甲醇的滤纸片比较。可替代地，将洗脱部分（以不同浓度）施用至含有适合培养基的平板，用于采用不同病原体的生物测定。

另外，使用乙酸乙酯和己烷从培养物滤液提取代谢物。将培养物滤液使用1NHCl滴定至pH2.0，并且使用分液漏斗用100ml乙酸乙酯提取，重复三次。收集乙酸乙酯/己烷部分并且在旋转蒸发器中在42°C蒸发[Paz,Z.等人,(2007)《应用微生物学杂志》J.Appl.Microbiol.103(6):2570-2579]。使用Sep-PakC18浓缩剩余的PDB培养物滤液。将干燥部分用1ml甲醇复原并且用于如前所述的体外实验中：将每个部分以不同浓度分别施用在6mm滤纸片上，所述滤纸片在层流罩中干燥并且然后用于针对平板上的不同病原体的抑制生物测定中，与仅有甲醇的滤纸片比较。可替代地，将这些部分（以不同浓度）施用至含有适合培养基的平板，用于采用不同病原体的生物测定。为了验证活性化合物是否为热敏感的，诸位发明人用提取之前已经煮沸过的培养物滤液重复本实验。然后，发明人鉴定了活性部分并且随后鉴定了活性化合物。

实例16

测定P.aphidis在体内对抗不同真菌性和细菌性植物病原体的作用

在图9A和9B中呈现的预实验中，诸位发明人展示L12抑制了在离脱叶和在完整植物上的灰葡萄孢菌。发明人将他们的体内实验扩展至其他病原体（核盘菌、白粉病、野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种和密执安棍状杆菌）。将番茄植物用不同浓度（10⁴、10⁸和10¹²个孢子/ml）的L12喷洒，并且允许L12分离株自身在植物上建立。将植物用以上病原体接种，并且监测与用水喷洒的植物相比的病害症状。

实例17

来自分泌部分的活性化合物的分离和鉴定

如在所呈现的结果中所示，P.aphidisL12具有显著的作为抗多种植物病原体的有效生物药剂的潜力。需要表征用于有效产生孢子和代谢物分泌物的条件，并且活性化合物的鉴定可以有助于开发对抗广泛范围的病原体的有效生物控制剂。

为了分离和鉴定来自分泌部分的活性化合物，使L12在PDB中在黑暗中在恒定搅拌（150转/分钟）下生长10天。如上文所述获得L12的粗提物，并且将干燥部分在1:9(v/v)甲醇:水中复原并且使其经受色谱法。根据[Paz,Z.等人,(2007)《应用微生物学杂志》103(6):2570-2579]，对粗提物进行反相液相色谱法（RPLC）分离。收集每种检测到的化合物并且针对灰葡萄孢菌进行生物测定。然后使用HPLC-MS并且如果需要使用NMR来鉴定活性化合物。

Claims (34)

1.一种包含生物控制剂作为有效成分的农药组合物，用于在用于治疗、防止、抑制、消除害虫感染或侵染的方法或用于延迟害虫感染或侵染发作的方法中使用，所述组合物包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合；所述组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述农药组合物是用于治疗、防止、减轻、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟细菌感染或侵染发作的杀细菌组合物。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细菌感染由以下至少一项引起：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述农药组合物是用于治疗、防止、抑制、消除真菌感染或侵染或延迟其发作的杀真菌组合物。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述真菌感染由以下至少一项引起：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物抑制真菌孢子萌发和菌丝形成中的至少一项。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述农药组合物是用于治疗、防止、减轻、抑制、消除病毒感染或侵染或延迟病毒感染或侵染发作的抗病毒组合物。

8.根据权利要求1所述的组合物，用于在用于防止、抑制、消除在农场或工业产品中的害虫感染或侵染的方法或延迟在农场或工业产品中的害虫感染或侵染发作的方法中使用，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

9.一种用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的方法中使用的组合物，其包含一种生物控制剂作为有效成分，该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合；所述组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述组合物上调或诱导植物免疫相关基因的表达。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

12.一种用于在促进在植物中的生长的方法中使用的组合物，其包含一种生物控制剂作为有效成分，该生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合；所述组合物任选地进一步包含载体、稀释剂和赋形剂。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述组合物诱导以下至少一项的增加：植物重量、植物高度、植物叶数、根系、植物粗度和植物生物量。

14.根据权利要求1、9和12中任一项所述的组合物，其中所述组合物进一步包含另外的农用药剂，其选自下组，该组由以下各项组成：除草剂、杀虫剂、生长刺激剂和肥料。

15.一种治疗、防止、抑制、消除在植物或植物材料中的细菌、真菌或害虫侵染或延迟其发作的方法，包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在所述植物或植物材料附近，所述生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述方法用于治疗、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟其发作。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述细菌感染由以下至少一项引起：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述方法用于治疗、抑制、消除真菌感染或延迟其发作。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述真菌感染由以下至少一项引起：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述方法抑制孢子萌发和菌丝形成的至少一项。

21.用于在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性的方法，所述方法包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在所述植物或植物材料附近，所述生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述方法上调或诱导植物免疫相关基因的表达。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述植物免疫相关基因编码病程相关蛋白家族和防御素家族的至少一项。

24.根据权利要求15所述的方法，用于防止、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟其发作，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

25.一种用于促进在植物中的生长的方法，其包括以下步骤：将一种生物控制剂或包含该生物控制剂的组合物施用至一种植物上、施用至一种植物材料或施用在所述植物或植物材料附近，所述生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述方法导致以下至少一项的增加：植物重量、植物高度、植物叶数、根系、植物粗度和植物生物量。

27.一种生物控制剂在制造用于防止、抑制、消除害虫感染或侵染或延迟其发作的农药组合物中的用途，所述生物控制剂包含以下至少一项：

a.Pseudozymaaphidis细胞或其任何分离株；

b.Pseudozymaaphidis孢子；

c.Pseudozymaaphidis的条件培养基；

d.来自Pseudozymaaphidis的分泌化合物；

e.(a)至(d)中任一项的提取物；和

f.在(a)至(e)中定义的生物控制剂的至少两种的组合。

28.根据权利要求27所述的用途，其中所述农药组合物是用于治疗、防止、减轻、抑制、消除细菌感染或侵染或延迟细菌感染或侵染发作的杀细菌组合物。

29.根据权利要求28所述的用途，其中所述细菌感染由以下至少一项引起：密执安棍状杆菌、根癌农杆菌、解淀粉欧文氏菌、丁香假单胞菌黄瓜致病变种、丁香假单胞菌番茄致病变种、马铃薯疮痂病菌、野油菜黄单胞菌野油菜致病变种和野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病变种。

30.根据权利要求27所述的用途，其中所述农药组合物是用于治疗、防止、减轻、抑制、消除真菌感染或侵染或延迟真菌感染或侵染发作的杀真菌组合物。

31.根据权利要求30所述的用途，其中所述真菌感染由以下至少一项引起：灰葡萄孢菌、指状青霉、甘蓝链格孢菌、疣顶单胞锈菌、鞑靼内丝白粉菌、核盘菌和禾冠柄锈菌。

32.根据权利要求27所述的用途，其中所述组合物在植物中针对害虫感染或侵染赋予抗性。

33.根据权利要求27所述的用途，其中所述组合物用于防止、减轻、抑制、消除在农场和工业产品中的害虫感染或侵染或延迟在农场和工业产品中的害虫感染或侵染发作，从而延长所述产品的货架期或储存时间。

34.根据权利要求27所述的用途，其中所述组合物用于促进在植物中的生长。