CN103006746A

CN103006746A - 太子参提取物及其应用

Info

Publication number: CN103006746A
Application number: CN2012105888034A
Authority: CN
Inventors: 胡娟; 庞文生; 林泗定; 戴启文; 张鸿程
Original assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2012-12-31
Filing date: 2012-12-31
Publication date: 2013-04-03

Abstract

本发明提供了三种太子参提取物及它们在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。本发明提供的三种太子参提取物能抑制肺部炎症反应，益气生津、增强抵抗力，使免疫平衡得到恢复、改善肺功能，消除及缓解乏力、心悸、气短等肺气虚症状。肺气虚的改善对于多发、难治、具有反复发作特点的肺系疾病防治具有重要意义。

Description

太子参提取物及其应用

技术领域

本发明属于中药领域，涉及太子参提取物的制备方法及其应用，特别是涉及太子参的乙醇提取物、乙酸乙酯提取物的制备方法及乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和多糖三种提取物在制备肺气虚症相关疾病治疗药物中应用。

背景技术

肺气虚，出自《素问·方盛衰论篇》，又称肺气不足。多由寒温不适，久咳伤气，悲伤不已，劳逸不当所致。症见咳嗽气短，甚则喘促或呼吸困难，痰多清稀，疲倦，自汗，脉虚或弱。肺气虚是肺系疾病的基础病机，指肺脏正气的虚弱，肺的机能活动减退。肺气虚症是临床常见证候，引起呼吸功能的不同程度损害，肺、气管和支气管病理形态的改变，以及机体免疫功能的改变等；可见于反复呼吸道感染、慢性支气管炎、支气管哮喘得不到有效控制，部分病例终将演变成肺气肿、肺源性心脏病、肺间质疾病等多种慢性肺系疾患；近年来，随着人口的老年化、环境污染、吸烟等多种因素的影响，慢性阻塞性肺疾病简称慢阻肺（COPD），随着其发病率和死亡率不断增加已成为全球关注的健康问题。COPD是一种破坏性的肺部疾病，是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病，气流受限通常呈进行性发展并与肺对有害颗粒或气体的异常炎症反应有关。至今，尚无一种药物能有效的控制COPD病情的发展，不少国家将其作为慢性疾病中重点防治项目。中医肺病学专家李泽庚等研究发现，COPD肺气虚基本都处于中重度，肺气虚证为慢性阻塞性肺疾病的基本病机。因此，肺气虚的改善对于多发、难治、具有反复发作特点的肺系疾病防治具有重要意义。

在肺系疾病发生、发展过程中，日久由实转虚，最终累及他脏。早在《内径》中就有“五脏六腑皆令人咳，非独肺也”的论述，明确提出肺是咳、喘的主要病位，同时也常与其它脏腑功能失常有关，中医认为肺系疾病辨证重在肺、脾、肾三脏。肺为气之主，为贮痰之器，肺失治节，在肺则以咳嗽为主；脾为生痰之源，在脾则为咯痰为主；肾为气之根，生痰之本，在肾以气喘为主。肺不伤不咳，脾不伤不久咳，肾不伤不喘促。本病标在肺，本在脾肾。

太子参，别名孩儿参、童参、四叶参或米参，系石竹科太子参属多年生草本宿根性植物异叶假繁缕Pseudostellaria heterophylla （Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.的干燥块根。太子参味甘、微苦，性平。归脾、肺经。太子参中富含氨基酸、多糖、苷类、磷脂类、环肽类、脂肪酸类、油脂类、挥发油类、甾醇类、微量元素等多种化学成分，以太子参益气、健脾为主，配合其润肺止咳功效，多糖具有提高免疫力功能，多组分发挥作用相得益彰，起到益气生津、增强抵抗力，使免疫平衡得到恢复、改善肺功能，消除及缓解乏力、心悸、气短等肺气虚症状。

发明内容

本发明的目的在于提供太子参提取物及其在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。本发明提供的三种太子参提取物能抑制肺部炎症反应，益气生津、增强抵抗力，使免疫平衡得到恢复、改善肺功能，消除及缓解乏力、心悸、气短等肺气虚症状。另外，肺气虚的改善对于多发、难治、具有反复发作特点的肺系疾病防治具有重要意义。

本发明首先提供了一种太子参乙醇提取物，所述太子参乙醇提取物的制备方法如下：取太子参干燥药材，按质量体积比计，加入8～10倍量的70～95%（质量分数）乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，回流提取3次，每次2小时；合并提取液，再将提取液置于浓缩罐中，浓缩至提取液体积的1/20～1/25，得乙醇提取物浸膏。

所述提取罐的油液温度为90～130℃，提取液温度为70～90℃，灌内压力0.03 ～0.06Mpa。所述浓缩罐的浓缩油温度为85～95℃，浓缩液温度为30～70℃，压力为-0.02～-0.05 Mpa。

本发明还提供了一种太子参多糖提取物，所述太子参多糖提取物的制备方法的如下：

a、太子参干燥药材，加入8～10倍量的70～95%(质量分数)乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90～130℃，提取液温度70～90℃，灌内压力0.03～0.06MPa，回流提取3次，每次2小时；

b、上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇，再用7～10倍量(质量体积比)蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩至原体积的1/5～1/10，得到太子参粗多糖提取物；根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在65～85%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4～1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5～10 min，静置，离心除去中间蛋白沉淀物，重复操作4～6次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在65～85%范围内，4℃静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物初产品，将多糖提取物冷冻干燥，得到太子参多糖提取物。

本发明另外还提供了一种太子参乙酸乙酯提取物，所述太子参乙酸乙酯提取物的制备方法如下：由权利要求1所述的制备方法制得的乙醇提取物浸膏，加入蒸馏水溶解稀释2～10倍成混悬液，用石油醚按1:1的比例萃取4～6次至上层有机相澄清无色，除去上层石油醚萃取液；下层水层用乙酸乙酯按1:1的比例萃取3～5次至上层有机相澄清无色，乙酸乙酯有机相用旋转蒸发仪浓缩，回收溶剂，得到乙酸乙酯浓缩浸膏，于真空干燥箱中干燥，温度30～70℃，压力-0.02～-0.05 MPa，得到太子参乙酸乙酯提取物。

本发明还提供了上述三种提取物在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。

本发明的显著优点：本发明提供的三种太子参提取物能抑制肺部炎症反应，益气生津、增强抵抗力，使免疫平衡得到恢复、改善肺功能，消除及缓解乏力、心悸、气短等肺气虚症状。另外，肺气虚的改善对于多发、难治、具有反复发作特点的肺系疾病防治具有重要意义。

附图说明

图1 为大鼠气道流速测试波形；

图2为大鼠潮气量测试波形；

图3 为大鼠跨肺压测试波形。

具体实施方式

实施例1：太子参干燥药材100克，加入8倍量的70%乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90℃，提取液温度70℃，灌内压力0.03 MPa，回流提取3次，每次2小时；合并提取液，于浓缩罐中，浓缩油温度85℃，浓缩液温度30℃，压力-0.02 MPa，浓缩至原体积的1/20，得乙醇提取物浸膏。

实施例2：取太子参干燥药材200克，加入10倍量的95%乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐的油液温度为130℃，提取液温度为90℃，灌内压力0.06Mpa。回流提取3次，每次2小时；合并提取液，再将提取液置于浓缩罐中，浓缩罐的浓缩油温度为95℃，浓缩液温度为70℃，压力为-0.05 Mpa。浓缩至提取液体积的1/25，得乙醇提取物浸膏。

实施例3：太子参干燥药材300克，加入9倍量的80%乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度110℃，提取液温度80℃，灌内压力0.04MPa回流提取3次，每次2小时；合并提取液，于浓缩罐中，浓缩油温度90℃，浓缩液温度50℃，压力-0.04 MPa，浓缩至原体积的1/23，得乙醇提取物浸膏。

实施例4：太子参干燥药材100克，加入8倍量的70%乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐油液温度90℃，提取液温度70℃，灌内压力0.03 MPa，回流提取3次，每次2小时；上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇，再用7倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩至原体积的1/5，得到太子参粗多糖提取物；根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在65%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/4蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇5 min，静置，离心除去中间蛋白沉淀物，重复操作4次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在65%范围内，4℃静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物，将多糖提取物冷冻干燥，得到太子参多糖提取物。

实施例5：取太子参干燥药材200克，加入10倍量的95%乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，提取罐的油液温度为130℃，提取液温度为90℃，灌内压力0.06Mpa。回流提取3次，每次2小时；上述乙醇提取后，药材残渣挥干乙醇，再用10倍量蒸馏水提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩至原体积的1/10，得到太子参粗多糖提取物；根据Sevag法将太子参粗多糖提取物用适量的蒸馏水稀释溶解，加入乙醇沉淀粗多糖，使乙醇浓度在85%范围内，静置过夜，离心，得到粗多糖沉淀物，将沉淀物用蒸馏水溶解，加入1/6蒸馏水体积的氯仿、与氯仿等体积的正丁醇，充分振摇10 min，静置，离心除去中间蛋白沉淀物，重复操作6次至无白色沉淀物，分离合并上层溶液，加入乙醇使其浓度在85%范围内，4℃静置过夜，离心，得到太子参多糖提取物，将多糖提取物冷冻干燥，得到太子参多糖提取物。

实施例6：由实施例1制得的乙醇提取物浸膏，加入蒸馏水溶解稀释2倍成混悬液，用石油醚按1:1的比例萃取4次至上层有机相澄清无色，除去上层石油醚萃取液；下层水层用乙酸乙酯按1:1的比例萃取3次至上层有机相澄清无色，乙酸乙酯有机相用旋转蒸发仪浓缩，回收溶剂，得到乙酸乙酯浓缩浸膏，于真空干燥箱中干燥，温度30℃，压力-0.02 MPa，得到太子参乙酸乙酯提取物。

实施例7：由实施例2制得的乙醇提取物浸膏，加入蒸馏水溶解稀释10倍成混悬液，用石油醚按1:1的比例萃取6次至上层有机相澄清无色，除去上层石油醚萃取液；下层水层用乙酸乙酯按1:1的比例萃取5次至上层有机相澄清无色，乙酸乙酯有机相用旋转蒸发仪浓缩，回收溶剂，得到乙酸乙酯浓缩浸膏，于真空干燥箱中干燥，温度70℃，压力-0.05 MPa，得到太子参乙酸乙酯提取物。

实施例8：由实施例3制得的乙醇提取物浸膏，加入蒸馏水溶解稀释5倍成混悬液，用石油醚按1:1的比例萃取5次至上层有机相澄清无色，除去上层石油醚萃取液；下层水层用乙酸乙酯按1:1的比例萃取4次至上层有机相澄清无色，乙酸乙酯有机相用旋转蒸发仪浓缩，回收溶剂，得到乙酸乙酯浓缩浸膏，于真空干燥箱中干燥，温度50℃，压力-0.03 MPa，得到太子参乙酸乙酯提取物。

药理学实验

1．动物造模给药

SPF级Wistar大鼠，雌雄不拘，重量为200士25(g)，周龄6-8周龄。实验前1周将 Wistar 大鼠置于实验环境中饲养，室温22-26℃。采用《实用中医证侯动物模型学》之“烟熏法肺气虚证动物模型”复制法；每组10只大鼠，雌雄各半，分别置于特制的1m³烟室中，用刨花、锯末、烟叶各30～50g，点燃烟熏，每日1次，每次30分钟，自由进食、饮水，连续烟熏60天，注意适当通风，以防大鼠窒息。正常对照组置于正常无烟环境中饲养，不烟熏，自由进食、饮水。

正常对照组（正常组）灌服生理盐水10 ml/kg，模型对照组（模型组）灌服生理盐水10 ml/ kg，阳性对照组灌服桂龙咳喘胶囊：每天用药剂量1.25 ml/100g，太子参乙醇提取物、多糖提取物、乙酸乙酯提取物组分别灌服高中低剂量100-500 mg/kg。各组均于停止烟熏当天开始每天灌胃给药1次/天，连续给药15天。

．三种太子参提取物对肺气虚证的治疗作用

肺气虚证大鼠经太子参提取物治疗后，通过测定肺气道阻力(lung resistance, RL)和动态肺顺应(dynamic lung comp liance, Cdyn) 等肺功能的改善，评价其对肺气虚证的治疗作用。大鼠灌胃给药结束第2天25 %乌拉坦（4 ml/kg相当于 1000 mg/kg）麻醉后，切开颈部皮肤，分离气管，行气管插管。将手术后的大鼠置于透明的有机玻璃体描记器内，接通气管插管，引伸于体积描记器外。同时于体积描记器的侧孔接上压力换能器和MedLab生物信号采集处理系统。将所有待测的导管接通完毕，盖上体描记器的盖子，并使其完全密闭，即可描记随动物呼吸而引起密闭的体描记器内容积的变化，即为潮气量( tidal volume，V_T ) ，以定容器定标。取Fisher管与气管插管接通，测气流速率( airway flow， V) ，连接上压力换能器—PCLAB生物信号采集处理系统描记，用流量计定标。用一钝头、头端带有2～3小孔的金属管直接插入胸膜腔内，连着导管与差压换能器—MedLab 生物信号采集处理系统联接，差压换能器的另一头与口腔插管连接(测口腔压) ，即可测得跨肺压( trans pulmo- nary pressure， Ptp )，用水检压计定标。所有这些外科手术和连接完成后让大鼠在体描记器内平稳 1 min 后，观察描记 5 min，由 Medlab 生物信号系统导出潮气量、气道流速、跨肺压，计算得到RL和Cdyn，计算公式:RL ( cmH₂O·m^- 3·h^- 1) = Ptp/V， Cdyn (mL·cm^- 1H₂O) =V_T/Ptp。图1～3分别是气道流速、潮气量、跨肺压等大鼠肺功能测试波形，肺功能测试结果见表1。

表1 大鼠气道阻力RL和气道顺应性Cdyn的变化（太子参提取物剂量400 mg/kg）

与空白对照组比较：P^▲▲<0.01, P^▲<0.05，具有显著差异；与模型组比较：P*<0.05，P**<0.01，具有显著差异；与模型组比较：P^C＞0.05，无差异。

由表1看出，模型组大鼠RL较空白对照组增加了67.12%（P<0.01），Cdyn较空白对照组下降了75.14%（P<0.01），桂龙咳喘胶囊阳性对照组较模型组RL下降了26.02%（P<0.01），Cdyn增加了140.40%。400 mg/kg的给药剂量下，太子参乙酸乙酯提取部位组同模型组比较RL下降了24.01%，太子参粗多糖提取部位组同模型组比较RL下降了36.29%，太子参乙醇提取部位组 400 mg/kg同模型组比较RL下降了18.56%；太子参乙酸乙酯提取部位组同模型组比较Cdyn增加了168.98%，太子参粗多糖提取部位组同模型组比较Cdyn增加了171.30%，太子参乙醇提取部位组同模型组比较Cdyn增加了84.01%。

RL反映了大鼠气道的气流阻力情况，而Cdyn则反映了大鼠小气道的气流阻力及胸廓和肺组织的弹性状况。实验结果显示三种太子参提取物可不同程度的降低肺气虚证大鼠的气道阻力，增加肺气虚证大鼠肺动态顺应性。

．血清中免疫细胞因子测定

肺气虚证大鼠经太子参提取物治疗后，腹主动脉取血置于不含抗凝剂的真空采血管中，3000 r/min，离心 5 min，分离血清，-20℃冻存，ELISA 法测定内皮素（ET）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）。见表2。

表2 血清中免疫细胞因子测定

TNF-α是激活巨噬细胞等分泌的一种具有多种免疫功能的调节因子，可促进气道炎症细胞黏附、游走和浸润，对IL-8等促炎细胞因子的产生起到重要的作用。IL-10属抗炎类细胞因子，在肺部炎症疾病中起到重要的调节作用。ET受体广泛地存在于肺组织血管、气管、支气管上皮细胞及肺组织中的巨噬细胞内，对人体和动物支气管有强烈的收缩作用，尤以ET-1最强，ET及其受体的活化可以激活GM-CSF的表达和分泌。GM-CSF对巨噬细胞和中性粒细胞的激活、生存、增殖起到主导调节作用，引发炎症效应细胞扩大对外界有害刺激的炎症反应，促进细胞因子基因的表达；TNF-α和GM-CSF可同时调控NF-Kβ通路和p38 MAPK通路来介导肺部炎症反应。

由实验结果可以看出，太子参乙酸乙酯部位提取物、粗多糖提取物和乙醇提取物可以降低肺部炎症细胞趋化因子IL-8，TNF-α，GM-CSF的生成和释放，降低上皮细胞的活化，增加抗炎细胞因子IL-10的生成，进而控制病情的发展。

综上所述，太子参治疗肺气虚证的机制可能是通过作用于机体细胞分子水平抑制肺部炎症反应，增强机体抵抗性，改善肺功能。

Claims

1.一种太子参乙醇提取物，其特征在于：所述太子参乙醇提取物的制备方法如下：取太子参干燥药材，按质量体积比计，加入8～10倍量的质量分数为70～95%的乙醇浸泡，置于加压连续回流提取罐中，回流提取3次，每次2小时；合并提取液，再将提取液置于浓缩罐中，浓缩至提取液体积的1/20～1/25，得乙醇提取物浸膏。

2.根据权利要求1所述的一种太子参乙醇提取物，其特征在于：所述提取罐的油液温度为90～130℃，提取液温度为70～90℃，灌内压力0.03 ～0.06Mpa。

3.根据权利要求1所述的一种太子参乙醇提取物，其特征在于：所述浓缩罐的浓缩油温度为85～95℃，浓缩液温度为30～70℃，压力为-0.02～-0.05 Mpa。

4.如权利要求1所述的一种太子参乙醇提取物在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。

5.一种太子参多糖提取物的应用，其特征在于：以由太子参中提取到的太子参多糖为有效成分，在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。

6.一种太子参乙酸乙酯提取物，其特征在于：所述太子参乙酸乙酯提取物的制备方法如下：由权利要求1所述的制备方法制得的乙醇提取物浸膏，加入蒸馏水溶解稀释2～10倍成混悬液，用石油醚按1:1的比例萃取4～6次至上层有机相澄清无色，除去上层石油醚萃取液；下层水层用乙酸乙酯按1:1的比例萃取3～5次至上层有机相澄清无色，乙酸乙酯有机相用旋转蒸发仪浓缩，回收溶剂，得到乙酸乙酯浓缩浸膏，于真空干燥箱中干燥，温度30～70℃，压力-0.02～-0.05 MPa，得到太子参乙酸乙酯提取物。

7.如权利要求6所述的一种太子参乙酸乙酯提取物在制备肺气虚证相关疾病治疗药物中的应用。