CN102973600B

CN102973600B - 一种腹膜透析液（乳酸盐）（低钙）组合物

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Publication number: CN102973600B
Application number: CN201210543292.4A
Authority: CN
Inventors: 何光杰; 袁英; 凌可均; 杨俊强
Original assignee: Tianjin Jinyao Group Co Ltd
Current assignee: Tianjin Jinyao Group Co Ltd
Priority date: 2012-12-13
Filing date: 2012-12-13
Publication date: 2014-11-26
Anticipated expiration: 2032-12-13
Also published as: CN102973600A

Abstract

一种腹膜透析液（乳酸盐）（低钙）组合物，含有1.5-4.0％的葡萄糖，0.5-0.6％的氯化钠，0.0001-0.0002％的氯化钙，0.00004-0.00006％的氯化镁，以及0.4-0.5％的乳酸钠，其特征在于还含有0.01％-0.02％的焦亚硫酸钠、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。

Description

一种腹膜透析液(乳酸盐)(低钙)组合物

技术领域

本发明腹膜透析液及其制备方法。

背景技术

腹膜透析，由于与血液透析相比，具有适用范围广、透析效率高、残存肾功能保存好、患者生活质量高等优点，在慢性肾功能衰竭的替代疗法中占有愈来愈重要的地位。成功的腹膜透析的关键在于超滤功能良好的腹膜。然而，由于腹膜透析治疗的长期性，在治疗过程中腹膜的超滤性能往往会受各种因素影响发生改变，而且这种改变是不可逆的，最终会造成患者腹膜超滤功能丧失，无法再进行腹透治疗。中国文献“腹膜透析超滤功能减退的临床及基础研究”（林星辉，上海交通大学博士学位论文，20080401）中公开了腹透液(PDS)具有多种非生物相容性因素，且与腹膜超滤功能减退密切相关，至少有两种分子——水孔蛋白1(AQPl)与一氧化氮(NO)参与该进程。长期PD病人，腹膜NO合成酶(NOS)活性显著提高，eNOS的提高是慢性PD病人NOS活性提高的主要原因。持续的eNOS活化刺激了NO的释放，导致腹膜血管的高通透性及血管新生，并最终促进超滤衰竭的发生。该文献还指出，由于腹膜透析液中的葡萄糖降解产物（GDPs）能促进内皮细胞eNOS的表达但并不促进AQPl的表达，GDPs的这种作用可能参与长期腹透过程中超滤功能减退的发生。

传统的腹膜透析液主要为不同浓度的葡萄糖电解质溶液，如天津天安药业股份有限公司生产腹膜透析液（乳酸盐）以及腹膜透析液（乳酸盐）（低钙）等。其中在公开的处方中腹膜透析液（乳酸盐）（低钙）含有作为抗氧化剂的0.005％的焦亚硫酸钠。腹膜透析液在生产和储存过程中不可避免的会产生葡萄糖降解产物，因此将降低其副作用从而提高腹膜透析液长期使用的安全性成为现有技术中需要解决的主要问题。

发明内容

经过研究我们意外的发现，加入一定量的焦亚硫酸钠或亚硫酸氢钠可以显著抑制腹膜内皮细胞eNOS的表达，从而抑制腹膜血管的高通透性和血管新生，防止腹膜超滤功能的丧失。

本发明中以下所述的百分比如无特别说明均指重量体积百分比。其中葡萄糖以C₆H₁₂O₆·H₂O计，氯化钙以CaCl₂·2H₂O计，氯化镁以MgCl₂·6H₂O计。

本发明提供了一种腹膜透析液，含有1.5-4.0％的葡萄糖，0.5-0.6％的氯化钠，0.0001-0.0002％的氯化钙，0.00004-0.00006％的氯化镁，以及0.4-0.5％的乳酸钠，其特征在于还含有0.01％-0.02％的焦亚硫酸钠、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。

所述腹膜透析液，优选配方为0.5377％的氯化钠，0.000147％的氯化钙，0.0000508％的氯化镁，0.4483％的乳酸钠，0.01％-0.02％的焦亚硫酸钠、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，以及1.5％或4.0％的葡萄糖，和余量的注射用水组成。

所述的腹膜透析液，优选采用以下方法配制：

1.浓液配制：取处方量10％的注射用水，加入入处方量的其他成分搅拌至全部溶解。后，然后加入药用炭0.1~1%搅拌均匀后，放置10~20分钟后过滤得到浓液。

2.药液稀释：将浓液加压过滤至稀配罐中，补充注射用水至全量。经0.22μm终端过滤器过滤至可见异物合格后灌封。

优选在配制和灌封时采用惰性气体保护，所述惰性气体选自氮气或二氧化碳中的一种或几种。

所述重量体积百分比为加入活性炭重量与所配制的注射液的处方体积之比。

具体实施方式

制剂实施例

配方如下表，分装规格为2000ml/袋，表中数据为折合每袋透析液的配方

对照例1-2，分别按照实施例1-2的配方其中对照例1不加入焦亚硫酸钠或亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，对照例2中加入0.005％的焦亚硫酸钠，

1.浓液配制：取处方量10％的注射用水，加入处方量的其他成分搅拌至全部溶解。后，然后加入药用炭0.1~1%搅拌均匀后，放置10~20分钟后过滤得到浓液。

在配制和灌封时采用氮气保护。

药理实施例

一、实验动物及分组：

动物模型的建立：采用6～8 周龄雄性Wister大鼠，体重在200～250克，随机分组，每组10只。正常对照组，每日腹腔内注入0.9%生理盐水20ml。实验组腹膜内每日注入20ml透析液，并于实验第7、14、21、28天加入乳酸盐红霉素6.25万单位，注射部位固定在大鼠左下腹部，30天后进行腹膜平衡实验，宰杀所有动物，收集大鼠腹膜作病理HE染色及Massion染色，免疫组化测eNOS表达和血管生成情况。

腹膜平衡实验方法如下：宰杀前使用10%水合氯醛(3.5mg/㎏)肌注麻醉大鼠，腹腔内注射4.0% 透析液（即对照例2）20ml，麻醉后局部去毛消毒，2小时后于大鼠左下腹缓慢插入带有多个侧孔的10号静脉留置针，缓慢低位引流腹膜透析液，量取引流液。沿腹白线打开腹腔，用纱布吸干腹腔内残余液体后称重。准确测量超滤量：超滤量=(纱布吸水后的重量- 纱布的重量)×(1ml/mg+引流量-20ml)。取距离切口5～10mm 的右侧壁层腹膜组织5～10mm 保存于10% 福尔马林中，进行前述病理检测。

病理检测：壁层腹膜组织保存于10%福尔马林中24h后，开始脱水，石蜡包埋。取石蜡包埋的壁层腹膜组织作2μm切片，60℃烘干融蜡，然后以二甲苯脱蜡，酒精梯度复水，常规方法HE及Masson 染色，光镜下观察病理改变，壁层腹膜厚度测定，选用Masson染色切片，每片切片至少含有4 块壁层腹膜组织，每个切片随机观察不重叠测量10个200倍视野，平均值作为判定厚度的标准，并比较炎症程度。

免疫组化检测eNOS 及毛细血管表达：5μm厚度的石蜡切片，常规脱蜡水化，PBS(，磷酸盐缓冲液，PH7.2-7.4，下同)冲洗3min×3次，每张切片加一滴0.3%过氧化氢阻断液，室温下孵育30min，PBS冲洗3min×3次，甩去PBS液滴加一抗，室温下孵育1h，PBS冲洗3min×3次，甩去PBS液，每张切片加一滴生物素标记的二抗，室温下孵育20min，PBS冲洗3min×3次，甩去PBS液，加DAB（二氨基联苯胺）染色溶液，变色后自来水冲洗，用苏木素复染，自来水冲洗，脱水，封片。eNOS阳性表达呈棕黄色颗粒，以JD801数码医学显微图像分析系统连续扫描5个视野, 读取平均光密度（OD）值作为eNOS的平均表达亮。CD34阳性以血管内皮细胞呈棕色或棕黄色染色为标准，切片在100倍光镜下挑选微血管分布最高密度区域，在200倍光镜下计数5个不重复视野中被CD34染成棕黄色的微血管数，取其平均值作为微血管密度(MVD)。每个与邻近微血管明显分离的阳性染色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇都视为独立的微血管；只要结构不相连，其分支结构也记作一个血管计数。而直径大于8个红细胞的血管不在计数范围内。

分组情况如下：

实验组号	1	2	3	4	5	6	7
									实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	对照例1	对照例2	正常对照

实验结果用均数±标准差表示，数据处理采用14.0统计软件包进行单因素方差分析，组间两两比较采用t检验，P＜0.05表示有统计学意义。

实验结果如下

腹膜形态学改变及腹膜厚度变化

光镜下，实验组7腹膜覆盖一层扁平间皮细胞，腹膜薄，致密，连续光滑完整，实验组4-5组腹膜增厚，间皮细胞变为圆形，柱形，有脱落，间皮下基底层明显增厚，可见大量成纤维样细胞及单核巨噬细胞，且有纤维样物质沉积，Masson显示有大量的胶原沉积。实验组1-4也有上述改变，但程度明显较轻。所有实验组腹膜厚度情况见下表（，n＝10）

编号	1	2	6	7	11	12	16
								厚度/μm	33.89±1.38	30.70±1.41	34.50±1.38	29.19±1.40	45.65±2.98	51.77±3.36	6.52±0.62

上述检测表明，加入了本发明实施例1-10的实验组1-10，其腹膜厚度都明显低于采用对照组1-5药物的实验组11-15（P＜0.01），而且，加入了0.005％焦亚硫酸钠的实验组13-14，其腹膜厚度与不加焦亚硫酸钠的实验组11-12相比，并没有产生明显降低腹膜增生的效果，说明焦亚硫酸钠或亚硫酸钠或亚硫酸氢钠的加入，只有达到一定浓度以上才能产生明显的抑制了腹膜增生的效果。

免疫组化测腹膜eNOS表达及毛细血管增生情况

吸光度OD和微血管MVD密度检测结果如下，（，n＝10）

编号

1

2

6

7

11

12

16

OD

0.201±0.012

0.235±0.011

0.198±0.009

0.239±0.010

0.305±0.017

0.355±0.016

0.152±0.009

MVD

14.9±2.01

20.2±1.87

14.5±2.23

19.9±1.72

33.7±2.21

38.4±2.76

5.6±1.07

吸光度和MVD检测表明，上述检测表明，加入了本发明实施例1-4的实验组1-10，其吸光度和MVD都明显低于采用对照例1-2药物的实验组4-5（P＜0.01），而且，加入了0.005％焦亚硫酸钠的实验组5，其吸光度和MVD与不加焦亚硫酸钠的实验组1相比，并没有产生明显降低，说明焦亚硫酸钠或亚硫酸钠或亚硫酸氢钠的加入，只有达到一定浓度以上才能产生明显的抑制了腹膜eNOS表达和微血管增生的效果。

腹膜平衡试验结果

检测超滤量V（ml），透出液葡萄糖浓度/初始腹膜透析液葡萄糖浓度（D₂/D₀），以及透析液尿素浓度/血浆尿素浓度（D/Purea），检测结果如下表，（，n＝10）

编号

1

2

6

7

11

12

16

V/ml

3.9±0.5

3.6±0.4

4.2±0.3

3.9±0.3

1.7±0.5

1.6±0.3

8.0±0.5

D₂/D₀

0.48±0.03

0.42±0.03

0.48±0.03

0.43±0.04

0.27±0.03

0.26±0.02

0.67±0.03

D/Purea

0.71±0.06

0.67±0.05

0.70±0.05

0.71±0.05

0.90±0.06

0.89±0.07

0.55±0.05

腹膜平衡试验表明，加入了本发明实施例1-4实验组1-4，腹膜的超滤性能显著高于采用对照例1-2药物的实验组4-5（P＜0.01），而且，加入了0.005％焦亚硫酸钠的实验组1，其腹膜的超滤性能与与不加焦亚硫酸钠的实验组2相比，并没有产生明显变化，说明焦亚硫酸钠或亚硫酸钠或亚硫酸氢钠的加入，只有达到一定浓度以上才能明显抑制eNOS的活性和微血管的新生，从而产生可以防止腹膜超滤功能的效果。

Claims

1.一种腹膜透析液，其特征是由0.5377％的氯化钠，0.000147％的氯化钙，0.0000508％的氯化镁，0.4483％的乳酸钠，0.01％-0.02％的焦亚硫酸钠、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，以及1.5％或4.0％的葡萄糖，和余量的注射用水组成。