CN102906089A - 用于治疗丙型肝炎的化合物 - Google Patents

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CN102906089A CN2010800667299A CN201080066729A CN102906089A CN 102906089 A CN102906089 A CN 102906089A CN 2010800667299 A CN2010800667299 A CN 2010800667299A CN 201080066729 A CN201080066729 A CN 201080066729A CN 102906089 A CN102906089 A CN 102906089A
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Abstract

本发明提供10种具有碱性结构吡唑并[1,5-a]吡啶的具体化合物，包括它们的盐，及使用所述化合物的组合物和方法。所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性并可用于治疗感染有HCV的那些患者。

Description

用于治疗丙型肝炎的化合物
技术领域
本发明大体上涉及新颖的式I、式II、式III、式IV和式V化合物，包括它们的盐，所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性并可用于治疗感染有HCV的那些患者。本发明还涉及使用这些化合物的组合物和方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界范围内感染约一亿七千万人—约为1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些感染有HCV的个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌(Lauer,G.M.;Walker,B.D.N.,Engl.J.Med.,2001,345,41-52)。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断的氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛类似性，已将HCV归类为黄病毒科(Flaviviridae family)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体(enveloped virion)，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已表征了至少6种主要的基因型，且已描述了多于50种的亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布是不同的，且HCV遗传异质性的临床重要性仍是难以确定的，尽管对基因型对发病和治疗的可能影响进行了大量的研究。
单链HCV RNA基因组的长度为约9500个核苷酸，且具有单一的可读框(ORF)，其编码由约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，该多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶所裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。据信第一种病毒蛋白酶为金属蛋白酶，且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-端区域内的丝氨酸蛋白酶(也被称作NS3蛋白酶)，且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎发挥多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A形成复合物，这是进行加工以在所有位点提高蛋白质水解效率所必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(也被称作HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，在HCV的复制中涉及所述酶。HCV NS5B蛋白参见“Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase inComplex with Ribonucleotides”,Bressanelli,S.等人,Journal of Virology,2002,3482-3492；及Defrancesco和Rice,Clinics in Liver Disease,2003,7,211-242。
目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素与利巴韦林的组合，其在40%的患者中产生持续的效果(Poynard,T.等人,Lancet,1998,352,1426-1432)。最新的临床结果表明，作为单一疗法，PEG化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素(Zeuzem,S.等人,N.Engl.J.Med.,2000,343,1666-1672)。然而，即使就涉及PEG化的α-干扰素与利巴韦林的组合的实验性治疗方案而言，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，就开发用于治疗HCV感染的有效疗法而言，存在明显和迫切的需要。
HCV-796为HCV NS5B抑制剂，其显示出在患者中降低HCV RNA水平的能力。当用所述化合物作为单一药物进行治疗时，病毒的RNA水平在给药期间短暂降低，然后反弹，但当与标准护理即干扰素和利巴韦林的一种形式联用时，病毒的RNA水平较大幅度地降低。由于在联用方案的长期给药过程中观察到肝毒性，因此该化合物的开发被搁置。美国专利7,265,152和相应的PCT专利申请WO2004/041201A2描述了HCV-796类化合物。
Figure BDA00002387178600021
本发明提供以下技术优点，例如所述化合物是新颖的并可有效对抗丙型肝炎。另外，所述化合物例如就以下一个或多个方面而言提供药用优点：它们的作用机制、结合性质、抑制效力、靶标选择性、溶解度、安全性或生物利用度。
发明内容
本发明一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物或其药用盐：
Figure BDA00002387178600031
其中
R1为卤素、烷基、环烷基、烷氧基、噁唑烷酮基、二氧代噻嗪基、R5R6N、取代有1个
Figure BDA00002387178600033
取代基的哌啶酮基、取代有1个
Figure BDA00002387178600034
取代基的吡咯基或苯基，其中所述苯基取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羧基和CONR7R8的取代基，且其中所述苯基还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基或卤代苯基中的0-2个；
R2为氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基或R5R6N；
R3为氰基、烷氧基羰基、(环烷基)氧基羰基、(烷基磺酰基)氨基羰基、CONR11R12、(R13)(R14)NCONH、三唑基、噻唑基或四唑基；
R4为取代有0-2个卤素的苯基；
R5为氢、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苄基、烷基羰基、卤代烷基羰基、苯基羰基、(烷氧基苯基)羰基、烷基磺酰基、苯基磺酰基、(烷氧基苯基)磺酰基或(卤代烷氧基苯基)磺酰基；
R6为氢、烷基、羟基烷基或烷氧基烷基；或
R5和R6与它们所连接的氮一起为噁唑烷酮基或二氧代噻嗪基；
R7为氢、烷基、
Figure BDA00002387178600041
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；或
R9和R10一起为亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；或
R11和R12与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R13为氢或烷基；
R14为氢或烷基；或
R13和R14与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R15为烷基或环烷基；
R16为氢、卤素、烷基或烷氧基；
R17为氢、卤素、烷基或烷氧基；和
Ar1为异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基或苯基，且取代有卤素、烷基或苯基中的0-1个。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物或其药用盐，其中
R1为卤素、烷氧基、噁唑烷酮基、二氧代噻嗪基、R5R6N或苯基，其中所述苯基取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基和CONR7R8的取代基，且其中所述苯基还取代有0-1个烷基；
R2为氢、卤素、烷氧基或R5R6N；
R3为氰基、烷氧基羰基、(环烷基)氧基羰基、(烷基磺酰基)氨基羰基、CONR11R12、(R13)(R14)NCONH、三唑基、噻唑基或四唑基；
R4为取代有0-2个卤素的苯基；
R5为烷基磺酰基；
R6为氢、烷基、羟基烷基或烷氧基烷基；
R7为氢、烷基或
Figure BDA00002387178600051
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；或
R9和R10一起为亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
R13为氢或烷基；
R14为氢或烷基；或
R13和R14与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R16为氢；
R17为氢；和
Ar1为苯基或吡啶基。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物或其药用盐，其中
R1为烷氧基或苯基，其中所述苯基取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基和CONR7R8的取代基，且其中所述苯基还取代有0-2个烷基；
R2为氢、卤素或R5R6N；
R3为CONR13R14；
R4为取代有0-2个卤素的苯基；
R5为烷基磺酰基；
R6为氢或羟基烷基；
R7为氢、烷基或
Figure BDA00002387178600052
R8为氢；
R9为烷基；
R10为烷基；或
R9和R10一起为亚乙基或亚丙基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
R13为氢或烷基；
R14为氢或烷基；或
R13和R14与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R16为氢；
R17为氢；和
Ar1为吡啶基或苯基，且取代有烷基或苯基中的0-1个。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物或其药用盐，其中
R1为环烷基、烷氧基、
Figure BDA00002387178600061
取代有1个
Figure BDA00002387178600062
取代基的哌啶酮基、取代有1个
Figure BDA00002387178600063
取代基的吡咯基或苯基，其中所述苯基取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、羧基和CONR7R8的取代基，且其中所述苯基还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基或卤代苯基中的0-2个；
R2为氢、卤素、环烷基或R5R6N；
R3为CONR11R12；
R4为取代有0-2个卤素的苯基；
R5为氢、(环烷基)烷基、苄基、卤代烷基羰基、(烷氧基苯基)羰基、烷基磺酰基、(烷氧基苯基)磺酰基或(卤代烷氧基苯基)磺酰基；
R6为氢或羟基烷基；
R7为氢、烷基、
Figure BDA00002387178600064
R8为氢；
R9为烷基；
R10为烷基；或
R9和R10一起为亚乙基或亚丙基；
R11为烷基；
R12为氢；
R15为烷基或环烷基；
R16为氢；
R17为氢；和
Ar1为异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、嘧啶基或苯基，且取代有烷基或苯基中的0-1个。
本发明另一个方面为式Ia、式IIa、式IIIa、式IVa或式Va化合物或其药用盐：
Figure BDA00002387178600071
其中
R1为卤素、烷氧基、噁唑烷酮基、二氧代噻嗪基、R5R6N或苯基，其中所述苯基取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基和CONR7R8的取代基，且其中所述苯基还取代有0-1个烷基；
R2为氢、卤素、烷氧基或R5R6N；
R3为氰基、烷氧基羰基、(环烷基)氧基羰基、(烷基磺酰基)氨基羰基、CONR11R12、(R13)(R14)NCONH、三唑基、噻唑基或四唑基；
R4为取代有0-2个卤素的苯基；
R5为烷基磺酰基；
R6为氢、烷基、羟基烷基或烷氧基烷基；
R7为氢、烷基或
Figure BDA00002387178600072
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；或
R9和R10一起为亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；或
R11和R12与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R13为氢或烷基；
R14为氢或烷基；或
R13和R14与它们所连接的氮一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；和
Ar1为苯基或吡啶基。
本发明另一个方面为式Ia化合物：
其中R16和R17为氢。
本发明另一个方面为式IIa化合物：
Figure BDA00002387178600082
其中R16和R17为氢。
本发明另一个方面为式IIIa化合物：
Figure BDA00002387178600083
其中R16和R17为氢。
本发明另一个方面为式IVa化合物：
Figure BDA00002387178600091
其中R16和R17为氢。
本发明另一个方面为式Va化合物：
Figure BDA00002387178600092
其中R16和R17为氢。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物或其药用盐，其中R1为取代有1个CONR7R8取代基和卤素、烷基或烷氧基中的0-2个的苯基；R2为氢、卤素、烷基或R5R6N；R3为CONR11R12；R4为单氟代苯基；R5为烷基磺酰基；R6为烷基；R7为
Figure BDA00002387178600093
R8为氢；R9为甲基；R10为甲基；或R9和R10一起为亚乙基；R11为烷基；R12为氢或烷基；R16为氢；R17为氢；和Ar1为噁二唑基、吡啶基、嘧啶基或苯基，且取代有卤素或烷基中的0-1个。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中R1为取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羧基和CONR7R8的取代基的苯基，且其中所述苯基还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基或卤代苯基中的0-2个。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中R1为取代有1-2个选自烷基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基和CONR7R8的取代基的苯基，且其中所述苯基还取代有卤素、烷基或烷氧基中的0-1个；
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中R2为R5R6N；
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中R3为CONR11R12。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中R4为苯基或单氟代苯基。
本发明另一个方面为式I、式II、式III、式IV或式V化合物，其中Ar1为苯基。
任何变量(包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17或Ar1)的任何范围可独立与任何其它变量的范围一起使用。
除非另有说明，这些术语具有下述意义。“烷基”是指由1至6个碳构成的直链或支链烷基。“烯基”是指由2至6个碳构成且具有至少一个双键的直链或支链烷基。“环烷基”是指由3至7个碳构成的单环环系。“羟基烷基”、“烷氧基”及涉及取代的烷基部分的其它术语包括由针对所述烷基部分的1至6个碳原子构成的直链和支链异构体。“卤代烷基”和“卤代烷氧基”包括所有卤化异构体，从单卤素取代的烷基到全卤素取代的烷基。“芳基”包括碳环芳族取代基和杂环芳族取代基。涉及括号和多重括号的术语意在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，如((R)烷基)那样的术语是指进一步被取代基R取代的烷基。通过化学绘图而被描述为连接在多环环系(例如二环环系)的可变位置的取代基是指连接至它们被绘制所依附的环。例如，式IV中的取代基R1和R2是指与式IV中的苯环连接而不是与式IV中的噻吩环连接。
亚乙基是指乙二基或-CH2CH2-；亚丙基是指丙二基或-CH2CH2CH2-；亚丁基是指丁二基或-CH2CH2CH2CH2-；亚戊基是指戊二基或-CH2CH2CH2CH2CH2-。
二氧代噻嗪基是指
本发明包括所述化合物的所有药用盐形式。药用盐为其中抗衡离子不会显著助长化合物的生理学活性或毒性且其本身作为药理学等价物的那些药用盐。这些盐可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括乙酸盐、醋硬脂酸盐、苯磺酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、氯化物、枸橼酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及昔萘酸盐。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、苄星盐、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐及锌盐。
本发明一些化合物具有不对称碳原子(参见例如以下结构)。本发明包括所有立体异构形式，包括对映异构体和非对映异构体及立体异构体的混合物诸如外消旋体。一些立体异构体可使用本领域已知的方法来制备。所述化合物的立体异构体混合物及相关中间体的立体异构体混合物可根据本领域公知的方法来分离成单独的异构体。当在以下方案和表格中描述分子结构时使用的楔形线或虚线仅意在表示相对的立体化学，而不应该被解释为暗示绝对的立体化学指定。
本发明意在包括出现在本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但质量数不同的那些原子。例如但不限于此，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。经同位素标记的本发明化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述类似的方法使用经同位素标记的适当试剂代替未经标记的所用相应试剂来制备。上述化合物可具有多种潜在用途，例如在确定生物学活性中作为标准品和试剂。在同位素是稳定的情况下，上述化合物可具有使生物学性质、药理学性质或药物代谢动力学性质得以有利改变的潜力。
合成方法
所述化合物可通过本领域已知的方法(包括下述那些方法及在本领域技术范围内的变体)来制备。一些试剂和中间体是本领域已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用容易得到的原料来制备。用于描述化合物合成的变量(例如所编号的“R”取代基)仅意在说明如何制备所述化合物，而不应该与权利要求书中或说明书其它段落中使用的变量相混淆。以下方法出于说明性目的，而非意在限制本发明范围。
方案中使用的缩写通常符合本领域中使用的惯用意义。说明书和实施例中使用的化学缩写如下定义：“NaHMDS”为二(三甲基甲硅烷基)氨基钠；“DMF”为N,N-二甲基甲酰胺；“MeOH”为甲醇；“NBS”为N-溴琥珀酰亚胺；“Ar”为芳基；“TFA”为三氟乙酸；“LAH”为氢化铝锂；“BOC”为叔丁氧羰基；“DMSO”为二甲基亚砜；“h”为小时；“rt”为室温或保留时间(根据上下文)；“min”为分钟；“EtOAc”为乙酸乙酯；“THF”为四氢呋喃；“EDTA”为乙二胺四乙酸；“Et2O”为乙醚；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶；“DCE”为1,2-二氯乙烷；“ACN”为乙腈；“DME”为1,2-二甲氧基乙烷；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”为二异丙基乙基胺；“Nf”为CF3(CF2)3SO2-；及“TMOF”为原甲酸三甲酯。
如方案1中所示，本发明一些化合物可如下制备：使芳基三氟甲磺酸酯或卤化物与取代的苯基硼酸偶联，所述取代的苯基硼酸在一些实施例中含有羧酸或羧酸酯。其它偶联配对体、技术和条件是本领域已知的，诸如其它碳-碳成键反应。酸和酯可通过本领域已知的方法来转化成酰胺。
方案1
可将二磺酰胺选择性水解成单磺酰胺。单磺酰胺可用简单的烷基或官能化的烷基再次烷基化。
方案2
方案3
方案3(续)
Figure BDA00002387178600161
方案3(续)
Figure BDA00002387178600171
方案4
Figure BDA00002387178600181
方案5
Figure BDA00002387178600182
方案6
方案7
Figure BDA00002387178600192
方案8
方案9
Figure BDA00002387178600211
生物学方法
当在以下HCV RdRp检测中测定时，所述化合物展现出对抗HCV NS5B的活性。
对HCV NS5B RdRp进行克隆、表达及纯化
将对HCV基因型1b的NS5B蛋白进行编码的cDNA克隆到pET21a表达载体中。将所述蛋白质表达成截掉C末端的18个氨基酸(the protein wasexpressed with an 18amino acid C-terminal truncation)以提高溶解度。大肠杆菌感受态细胞系BL21(DE3)用于所述蛋白质的表达。使培养物在37℃生长约4小时直到培养物达到在600纳米处的光密度为2.0。将培养物冷却至20℃并用1mM IPTG进行诱导。加入新鲜的氨苄青霉素至最终浓度为50μg/mL并使细胞在20℃生长过夜。
对细胞团块(3升)进行细胞溶解以供纯化，得到15-24mg经纯化的NS5B。溶胞缓冲剂包含20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5%TritonX-100、1mM DTT、1mM EDTA、20%甘油、0.5mg/mL溶菌酶、10mM MgCl2、15μg/mL脱氧核糖核酸酶I及完全TM蛋白酶抑制剂药片(Roche)。加入溶胞缓冲液后，经冷冻的细胞团块使用组织匀浆器来重新混悬。为了降低样品的粘度，使用与Branson超声波处理器连接的微尖头使溶胞产物的等分液在冰上接受超声波处理。经超声波处理的溶胞产物在4℃以100,000×g离心1小时并过滤通过0.2微米滤器单元(Corning)。
所述蛋白质使用三个连续的色谱步骤来纯化：肝素琼脂糖CL-6B、polyU琼脂糖4B及Hitrap SP琼脂糖(Pharmacia)。色谱缓冲液与溶胞缓冲液相同，但不含有溶菌酶、脱氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制剂且缓冲液中的NaCl浓度根据将蛋白质加载到色谱柱上的需要而调整。色谱柱各自用NaCl梯度液洗脱，所述梯度液的长度为5至50倍柱体积，这取决于色谱柱的类型。最终色谱步骤后，所得到的酶纯度>90%(基于SDS-PAGE分析)。将酶分成等分液并贮存在-80℃。
标准HCV NS5B RdRp酶检测
在96孔板(Costar 3912)中在最终体积为60μL的情况下进行HCV RdRp基因型1b检测。检测缓冲液包含20mM Hepes(pH 7.5)、2.5mM KCl、2.5mMMgCl2、1mM DTT、1.6单位RNAse抑制剂(Promega N2515)、0.1mg/mLBSA(Promega R3961)及2%甘油。将所有化合物在DMSO中连续稀释(3倍)并在水中进一步稀释以使DMSO在检测中的最终浓度为2％。HCVRdRp基因型1b酶在最终浓度为28nM时使用。polyA模板在6nM时使用且生物素化的寡dT12引物在最终浓度为180nM时使用。模板是商购的(Amersham 27-4110)。生物素化的引物由Sigma Genosys制备。3H-UTP在0.6μCi(0.29μM总UTP)时使用。反应通过加入酶来引发，在30℃孵育60分钟并通过加入25μL含有SPA珠子(4μg/mL,Amersham RPNQ 0007)的50mMEDTA来停止。在室温孵育>1小时后，板用Packard Top Count NXT读取。
经修改的HCV NS5B RdRp酶检测
经修改的酶检测基本如就标准酶检测所述那样来进行，不同的是，生物素化的寡dT12引物如下预捕获在经链霉抗生物素涂覆的SPA珠子上：将引物与珠子在检测缓冲液中混合并在室温孵育1小时。离心除去未结合的引物。将与引物结合的珠子重新混悬在20mM Hepes缓冲液(pH 7.5)中并在引物的最终浓度为20nM及珠子的最终浓度为0.67μg/μL时用于检测。检测中的加入顺序如下：将酶(14nM)加到经稀释的化合物中，然后加入模板(0.2nM)、3H-UTP(0.6μCi,0.29μM)及与引物结合的珠子的混合物以引发反应，其中所给出的浓度为最终浓度。使反应在30℃进行4小时。
化合物的IC50值使用七种不同的[I](抑制浓度)来确定。IC50值使用方程式y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过抑制作用来计算。
FRET检测制剂
96孔细胞培养板用于进行HCV FRET筛选检测。FRET肽(Anaspec,Inc.)(Taliani等人,Anal.Biochem.,1996,240,60-67)在其一端附近含有荧光供体即EDANS且在另一端附近含有受体即DABCYL。所述肽的荧光通过供体和受体之间的分子间共振能量转移(RET)来淬灭，但当NS3蛋白酶使所述肽裂解时，产物不再发生RET淬灭且供体的荧光变得显而易见。检测试剂如下制备：得自Promega(#E153A)的5×细胞荧光素酶细胞培养物溶胞试剂用蒸馏水稀释至1×，加入NaCl至最终为150mM且将FRET肽由2mM储备液稀释至最终为20μM。
为了制备板，带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶(Renilla luciferase)报告子基因的HCV复制子细胞用胰蛋白酶处理并置于96孔板的每个孔中，其中将经滴定的测试化合物加到第3列至第12列中；第1列和第2列含有对照化合物(HCV蛋白酶抑制剂)且最底行含有细胞而不含有化合物。然后将板置于37℃的CO2培养箱中。
检测
加入上述测试化合物(FRET检测制剂)后，在不同的时间将板取出且向每个孔中加入Alamar蓝色溶液(Trek Diagnostics,#00-100)以测量细胞毒性。在Cytoflour 4000仪器(PE Biosystems)中读取后，板用PBS洗涤，然后通过向每个孔中加入30μL上述FRET肽检测试剂(FRET检测制剂)而用于FRET检测。然后将板置于Cytoflour 4000仪器中，其已被设定成激发波长为340nm/发射波长为490nm，以自动模式运行20次循环且板在动态模式中读取。典型地，读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。可选择地，进行Alamar蓝色读取后，板用PBS洗涤，加入不含有酚红的50μLDMEM(高葡萄糖)，然后板用于荧光素酶检测(使用Promega Dual-Glo荧光素酶检测系统)。
通过对相对的HCV复制子抑制作用及相对的细胞毒性值进行定量来对化合物进行分析。为了计算细胞毒性值，将得自对照孔的平均Alamar蓝色荧光信号设定为100%无毒性。然后将各个化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以100%以确定细胞毒性百分比。为了计算HCV复制子抑制值，平均背景值得自在检测结束时含有最高量的HCV蛋白酶抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然Huh-7细胞的那些值。
然后将背景值从得自对照孔的平均信号中扣除且该值用作100%活性。然后将各个化合物测试孔中的各个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100%以确定活性百分比。将针对蛋白酶抑制剂滴定的EC50值计算成使FRET或荧光素酶活性降低50%的浓度。针对化合物板得到的两个值即细胞毒性百分比和活性百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
HCV复制子荧光素酶报告子检测
开发HCV复制子荧光素酶检测以监测本发明化合物对HCV病毒复制的抑制作用。复制子荧光素酶报告子检测的使用最初由Krieger等人(KriegerN,Lohmann V和Bartenschlager R,J.Virol.,75(10):4614-4624(2001))描述。使组成性表达HCV复制子的HUH-7细胞在含有10%胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/mLG418(Gibco-BRL)的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)(Gibco-BRL)中生长。将化合物在DMSO中以3倍连续稀释用于二十点滴定，然后转移到经组织培养基处理的无菌384孔板(Corning目录号3571)中。然后板用50μL细胞(在含有4%FCS的DMEM中)以3.0×103个细胞/孔的密度接种(DMSO的最终浓度为0.5%)。在37℃孵育3天后，细胞的海紫罗兰属荧光素酶活性使用EnduRen作为底物(Promega目录号E6485)来分析。将EnduRen底物在DMEM中稀释，然后加到板中至最终浓度为7.5μM。将板在37℃孵育2小时，然后立即通过Viewlux Imager(PerkinElmer)使用发光程序来读取30秒。为了评价化合物的细胞毒性，CC50值通过用CellTiter-Blue(Promega目录号G8082)对含有EnduRen的板进行倍增来得到。将3μLCell-Titer Blue加到每个孔中并在37℃孵育8小时。每个孔的荧光信号使用Viewlux Imager来读取，其中激发波长为525/10纳米且发射波长为598/10纳米。
化合物的代表性数据示于表1和表2中。
表1
Figure BDA00002387178600261
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A为0.002至0.25μM；B>0.25μM且<1.0μM；C为1.0μM至10.0μM；D>0.67μM，但未确定确切值；E>10.0μM；F>0.4μM，但未确定确切值；G>1.39μM，但未确定确切值；H>0.62μM，但未确定确切值；I>4μM，但未确定确切值；J>3.7μM，但未确定确切值；K>1.23μM，但未确定确切值；L>4.17μM，但未确定确切值；M>0.5μM，但未确定确切值。*EC50使用384孔板方案和1a复制子来确定。
表2
Figure BDA00002387178600442
Figure BDA00002387178600451
Figure BDA00002387178600461
Figure BDA00002387178600471
*EC50使用384孔板方案来确定。
药物组合物和治疗方法
所述化合物展现出对抗HCV NS5B的活性且可用于治疗HCV和HCV感染。因此，本发明另一个方面为一种组合物，其包含本发明化合物或其药用盐及药用载体。
本发明另一个方面为一种组合物，其还包含具有抗HCV活性的化合物。
本发明另一个方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物为干扰素。在本发明另一个方面，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
本发明另一个方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素。在本发明另一个方面，所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明另一个方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明另一个方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标的功能以治疗HCV感染，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及核苷类似物。
本发明另一个方面为一种组合物，其包含本发明化合物或其药用盐、药用载体、干扰素及利巴韦林。
本发明另一个方面为抑制HCV复制子功能的方法，所述方法包括使所述HCV复制子与本发明化合物或其药用盐接触。
本发明另一个方面为抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，所述方法包括使所述HCV NS5B蛋白与本发明化合物或其药用盐接触。
本发明另一个方面为在患者中治疗HCV感染的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV复制子的功能。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV NS5B蛋白的功能。
本发明另一个方面为在患者中治疗HCV感染的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐且给药(之前、之后或同时)其它具有抗HCV活性的化合物。
本发明另一个方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物为干扰素的方法。
本发明另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明另一个方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明另一个方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪奎莫特、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明另一个方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及核苷类似物。
本发明另一个方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制HCV生命周期中靶标的功能而非抑制HCV NS5B蛋白的功能的方法。
“治疗有效”是指提供有意义的患者益处所需要的药物量，其如肝炎和HCV感染领域中的执业人员所理解的那样。
“患者”是指感染有HCV病毒且适于治疗的人们，其如肝炎和HCV感染领域中的执业人员所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎和HCV感染领域中的执业人员所理解的那样来使用。
本发明化合物通常以药物组合物的形式来给药，所述药物组合物包含治疗有效量的化合物或其药用盐及药用载体且可含有常规赋形剂。药用载体为具有可接受的安全性的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式和液体形式，包括例如胶囊剂、片剂、锭剂和粉末剂及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂。组合物使用常规制剂技术来制备且常规赋形剂(诸如粘合剂和润湿剂)和媒介物(诸如水和醇)通常用于组合物。参见例如Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA,第17版,1985。
固体组合物通常被配制成剂量单位且每个剂量提供约1至1000mg活性成份的组合物是优选的。剂量的一些实例为1mg、10mg、100mg、250mg、500mg及1000mg。通常，其它药物将以与临床上所使用的经典单位范围类似的单位范围存在。典型地，其为0.25-1000mg/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。通常，液体组合物的单位剂量范围将为1-100mg/mL。剂量的一些实例为1mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL及100mg/mL。通常，其它药物将以与临床上所使用的经典单位范围类似的单位范围存在。典型地，其为1-100mg/mL。
本发明涵盖所有常规给药模式且口服方法和胃肠外方法是优选的。通常，给药方案将类似于临床上所使用的其它药物。典型地，每日剂量将为每日1-100mg/kg体重。通常，口服方法需要较多的化合物，而胃肠外方法需要较少的化合物。然而，具体的给药方案将由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给药所述化合物的方法。也就是说，所述化合物可与可用于治疗肝炎和HCV感染的其它药物联用，但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些组合方法中，所述化合物通常将搭配其它药物而以每日1-100mg/kg体重的每日剂量来给药。其它药物通常将以治疗上所使用的量来给药。然而，具体的给药方案将由医师通过合理的医药判断来确定。
适于组合物和方法的化合物的一些实例示于表2中。
表2
Figure BDA00002387178600491
Figure BDA00002387178600501
Figure BDA00002387178600511
具体实施方式
方案中使用的缩写通常符合本领域中使用的惯用意义。说明书和实施例中使用的化学缩写如下定义：“NaHMDS”为二(三甲基甲硅烷基)氨基钠；“DMF”为N,N-二甲基甲酰胺；“MeOH”为甲醇；“NBS”为N-溴琥珀酰亚胺；“Ar”为芳基；“TFA”为三氟乙酸；“LAH”为氢化铝锂；“BOC”为叔丁氧羰基；“DMSO”为二甲基亚砜；“h”为小时；“rt”为室温或保留时间(根据上下文)；“min”为分钟；“EtOAc”为乙酸乙酯；“THF”为四氢呋喃；“EDTA”为乙二胺四乙酸；“Et2O”为乙醚；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶；“DCE”为1,2-二氯乙烷；“ACN”为乙腈；“DME”为1,2-二甲氧基乙烷；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”为二异丙基乙基胺；“Nf”为CF3(CF2)3SO2-；及“TMOF”为原甲酸三甲酯。
本申请中使用的缩写如下定义：“1×”为一次，“2×”为两次，“3×”为三次，“℃”为摄氏度，“eq”为当量，“g”为克，“mg”为毫克，“L”为升，“mL”为毫升，“μL”为微升，“N”为当量浓度，“M”为摩尔浓度，“mmol”为毫摩尔，“min”为分钟，“h”为小时，“rt”为室温，“RT”为保留时间，“atm”为大气压，“psi”为磅/平方英寸，“conc.”为浓的，“sat”或“sat’d”为饱和的，“MW”为分子量，“mp”为熔点，“ee”为对映异构体过量，“MS”或“Mass Spec”为质谱，“ESI”为电喷雾离子化质谱，“HR”为高分辨率，“HRMS”为高分辨率质谱，“LCMS”为液相色谱/质谱，“HPLC”为高压液相色谱，“RP HPLC”为反相HPLC，“TLC”或“tlc”为薄层色谱，“NMR”为核磁共振光谱，“1H”为质子，“δ”为德尔塔，“s”为单峰，“d”为二重峰，“t”为三重峰，“q”为四重峰，“m”为多重峰，“br”为宽峰，“Hz”为赫兹，及“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”为本领域技术人员熟知的立体化学符号。
Figure BDA00002387178600521
3-(3-硝基吡啶-4-基)苯甲酸
在氮气气氛下向脱气的含有4-氯-3-硝基吡啶(3.0g,18.9mmol)、3-二羟硼基苯甲酸(3.7g,22.7mmol)、碳酸钾(5.2g,37.8mmol)和二噁烷(189mL)的混合物中一次性加入四(三苯基膦)钯(0)(0.30g,0.28mmol)。在快速搅拌下将混合物在100℃加热15小时，冷却至室温，过滤并浓缩，得到3-(3-硝基吡啶-4-基)苯甲酸，其为棕色残留物，所述残留物不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.375min。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 245(MH+)。
Figure BDA00002387178600522
3-(3-硝基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
向含有2-苯基丙-2-胺(5.5g,40.4mmol)、二异丙基乙基胺(18.8mL,108mmol)、3-(3-硝基吡啶-4-基)苯甲酸(8.8g,27.0mmol)和DMF(180mL)的溶液中一次性加入HATU(15.4g,40.4mmol)。将溶液在室温保持1小时，然后浓缩。用硅胶(50-100%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度)进行纯化，得到3-(3-硝基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺，其为深黄色蓬松固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.21(s,1H),8.93(d,J=5.02Hz,1H),8.51(s,1H),7.97(dt,J=7.03,1.76Hz,1H),7.92(s,1H),7.73(d,J=5.02Hz,1H),7.52-7.61(m,2H),7.34-7.41(m,2H),7.27(t,J=7.65Hz,2H),7.16(t,J=7.28Hz,1H),1.64-1.72(m,6H)。LCMS保留时间:2.060分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 362(MH+)。
Figure BDA00002387178600531
3-(3-氨基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
在氮气气氛下向含有3-(3-硝基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(2.0g,5.5mmol)和甲醇(18.5mL)的溶液中一次性加入10%Pd/C(1.6g,0.76mmol,湿的,50%水)。将反应混合物在氢气气氛(气囊)下搅拌2小时，过滤并浓缩，得到3-(3-氨基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺，其为浅黄色油状物，所述油状物不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.47(s,1H),8.11(s,1H),7.93(s,1H),7.85(d,J=4.77Hz,1H),7.81(ddd,J=7.65,1.63,1.51Hz,1H),7.52-7.61(m,2H),7.36-7.41(m,2H),7.24-7.30(m,2H),7.15(t,J=7.28Hz,1H),7.04(d,J=5.02Hz,1H),5.15(s,2H),1.64-1.70(m,6H)。LCMS保留时间:1.240分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 332(MH+)。
Figure BDA00002387178600541
3-(3-(甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
历时3分钟向含有3-(3-氨基吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(1.7g,5.1mmol)、三乙胺(5.2g,51.3mmol)和二氯甲烷(85mL)的溶液中滴加甲磺酰氯(0.90mL,11.3mmol)/二氯甲烷(75mL)。将溶液在室温保持1小时并浓缩以除去所有溶剂。将由此得到的残留物溶解在THF(51mL)中且通过注射器稳流加入四丁基氟化铵(24mL,1.0M于THF中)。将溶液在60℃保持18小时，浓缩并溶解在乙酸乙酯(75mL)中。溶液用水(5×50mL)洗涤，用盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。用硅胶(0-8%甲醇/二氯甲烷,60分钟梯度)进行纯化，得到3-(3-(甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺，其为浅黄色泡沫。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.42(s,1H),8.64(s,1H),8.56(d,J=4.88Hz,1H),8.45(s,1H),8.03(s,1H),7.90(d,J=7.63Hz,1H),7.71(d,J=7.63Hz,1H),7.58(t,J=7.78Hz,1H),7.49(d,J=4.88Hz,1H),7.40(d,J=7.93Hz,2H),7.29(t,J=7.63Hz,2H),7.17(t,J=7.17Hz,1H),2.85(s,3H),1.69(s,6H)。LCMS保留时间:1.277分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z410(MH+)。
3-(3-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
通过注射器向含有3-(3-(甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(0.20g,0.50mmol)、碳酸钾(0.30g,2.0mmol)和DMF(1.6mL)的混合物中稳流加入(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷(0.10mL,0.50mmol)。将混合物在80℃搅拌4小时，冷却至室温，过滤，浓缩并用硅胶(0-10%甲醇/二氯甲烷,60分钟梯度)进行纯化，得到3-(3-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺，其为棕色油状物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.75(s,1H),8.64(d,J=4.88Hz,1H),8.35(s,1H),7.96(s,1H),7.91(d,J=7.94Hz,1H),7.77(d,J=7.93Hz,1H),7.52-7.60(m,2H),7.40(d,J=7.32Hz,2H),7.28(t,J=7.63Hz,2H),7.17(t,J=7.32Hz,1H),3.42-3.50(m,1H),3.25(s,3H),3.03(s,1H),1.64-1.71(m,6H),0.71-0.78(m,9H),-0.12至-0.06(m,6H)。LCMS保留时间:2.497分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 568(MH+)。
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
向冷却的(0℃,冰浴)含有3-(3-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)吡啶-4-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(0.090g,0.12mmol)和二氯甲烷(2mL)的溶液中快速滴加O-(均三甲苯基磺酰基)羟胺(0.080g,0.37mmol)/二氯甲烷(2mL)。将溶液在0℃保持15分钟，从冷却浴中取出并在环境温度保持2小时。将溶液浓缩，溶解在甲醇(5mL)中并再次浓缩，得到1-氨基-3-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-4-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡啶鎓2,4,6-三甲基苯磺酸盐，其为浅黄色泡沫(470,MH+)。将由此得到的产物溶解在DMF(2.4mL)中并历时20分钟缓慢滴加到冷却的(0℃,冰浴)含有碳酸钾(0.070g,0.50mmol)、3-(4-氟苯基)丙炔酸甲酯(0.030g,0.19mmol)和DMF(2.0mL)的混合物中。在搅拌下将混合物保持在冷却浴中并在环境温度使反应进行15小时。将混合物过滤并浓缩。用硅胶(0-100%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度)进行纯化，得到2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯，其为黄色残留物。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.72(s,1H),8.24(s,1H),8.16(s,1H),7.97-8.00(m,1H),7.89(t,J=7.93Hz,1H),7.77-7.84(m,2H),7.50-7.59(m,2H),7.40-7.49(m,3H),7.23-7.33(m,3H),7.12-7.19(m,3H),3.83(s,3H),3.62-3.71(m,1H),3.39-3.46(m,1H),3.30-3.39(m,1H),3.18-3.23(m,3H),2.63-2.72(m,1H),1.78(t,J=12.21Hz,6H)。LCMS保留时间:2.403分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 645(MH+)。
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸
向含有2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.021g,0.33mmol)、THF(0.20mL)和甲醇(0.13mL)的溶液中加入氢氧化锂水溶液(0.081mL,2.0M)。将溶液在室温保持20小时，然后在45℃保持8小时。溶液用HCl水溶液(0.21mL,1.0N)调整至pH低于4并用乙酸乙酯(2×0.50mL)萃取。合并的有机部分用盐水(0.50mL)洗涤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸，其为浅黄色残留物，所述残留物不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.778分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 631(MH+)。
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.021g,0.033mmol)、HOAT(0.0050g,0.036mmol)、二异丙基乙基胺(0.070mL,0.40mmol)、盐酸甲胺(0.0090g,0.13mmol)、二氯甲烷(0.70mL)和DMF(0.14mL)的溶液中加入EDCI(0.020g,0.10mmol)。将溶液在室温保持15小时并浓缩。通过制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),12分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间为7.4分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.13(s,1H),8.28(s,1H),8.05(s,1H),8.00(q,J=4.27Hz,1H),7.86-7.94(m,3H),7.78(d,J=8.03Hz,1H),7.75(s,1H),7.56(t,J=7.78Hz,1H),7.37-7.42(m,2H),7.25-7.35(m,4H),7.16(t,J=7.28Hz,1H),4.95(t,J=4.89Hz,1H),3.58(dd,J=14.18,5.65Hz,1H),3.38(s,2H),3.21-3.26(m,3H),2.86-2.96(m,1H),2.75(d,J=4.52Hz,3H),1.67(s,6H)。LCMS保留时间:2.825分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 644(MH+)。
Figure BDA00002387178600581
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸甲酯由4-甲氧基吡啶(0.55g,3.1mmol)来制备。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.38(d,J=7.63Hz,1H),7.73-7.77(m,1H),7.73(d,J=5.49Hz,1H),7.49(d,J=2.75Hz,1H),7.13(t,J=8.70Hz,2H),6.66(dd,J=7.63,2.75Hz,1H),3.94(s,3H),3.81(s,3H)。LCMS保留时间:2.706分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 301(MH+)。
Figure BDA00002387178600591
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸由2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.99g,3.3mmol)来制备。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.30(s,1H),8.70(d,J=7.32Hz,1H),7.79(dd,J=8.85,5.80Hz,2H),7.43(d,J=2.75Hz,1H),7.27(t,J=9.00Hz,2H),6.83(dd,J=7.63,2.75Hz,1H),3.92(s,3H)。LCMS保留时间:1.420分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 287(MH+)。
Figure BDA00002387178600592
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由2-(4-氟苯基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.88g,2.6mmol)来制备。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 8.42(d,J=7.63Hz,1H),7.71-7.78(m,2H),7.30(d,J=2.75Hz,1H),7.25(t,J=8.85Hz,2H),6.73(dd,J=7.63,2.75Hz,1H),3.96(s,3H),2.86(s,3H)。LCMS保留时间:1.935分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 300(MH+)。
Figure BDA00002387178600601
2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(0.30g,1.0mmol)和甲苯(10mL)的混悬液中一次性加入三溴化硼-甲硫醚复合物(1.3g,4.0mmol)。将混合物在密闭容器中在氮气气氛下在105℃搅拌40小时，冷却至室温并用氢氧化钠水溶液(3×20mL,2.0M)萃取。合并的含水萃取物用HCl水溶液(2.0M,约60mL)中和并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机部分用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为棕色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.69(s,1H),8.55(d,J=7.32Hz,1H),7.75-7.82(m,2H),7.50(d,J=4.58Hz,1H),7.28(t,J=9.00Hz,2H),7.05(d,J=2.44Hz,1H),6.65(dd,J=7.48,2.59Hz,1H),2.72(d,J=4.58Hz,3H)。LCMS保留时间:1.102分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 285(MH+)。
Figure BDA00002387178600602
三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯
将含有2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(0.25g,0.66mmol)、N-苯基二(三氟甲烷)磺酰胺(0.35g,0.99mmol)、三乙胺(0.46mL,3.3mmol)和二氯甲烷(6.5mL)的溶液在室温保持18小时。溶液用二氯甲烷(10mL)进一步稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，用水(5mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。用硅胶(0-100%乙酸乙酯/己烷,45分钟梯度)进行纯化，得到三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯，其为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.00(d,J=7.63Hz,1H),7.98(d,J=2.44Hz,1H),7.94(d,J=4.58Hz,1H),7.83-7.89(m,2H),7.41(s,1H),7.32-7.38(m,2H),7.25(dd,J=7.48,2.90Hz,1H),2.77(d,J=4.58Hz,3H)。LCMS保留时间:2.623分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 418(MH+)。
Figure BDA00002387178600611
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸
向脱气的含有三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯(0.19g,0.44mmol)、3-二羟硼基苯甲酸(0.11g,0.67mmol)、碳酸铯(0.22g,0.67mmol)、二噁烷(3.7mL)和水(0.74mL)的溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.0090g,0.010mmol)。将溶液在95℃保持7小时。将溶液冷却至室温，浓缩并溶解在含有水和甲醇的溶液(1.8/1,14mL)中。过滤溶液以除去细小颗粒并用二氯甲烷(3×5mL)洗涤。将含水部分浓缩至干，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸，其为浅灰色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.830分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 390(MH+)。
Figure BDA00002387178600621
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2-苯基丙-2-胺(0.040g,0.29mmol)、二异丙基乙基胺(0.10mL,0.58mmol)、3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸(0.10g,0.20mmol)和DMF(1.3mL)的溶液中一次性加入HATU(0.10g,0.25mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),12分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8.0分钟。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.90(d,J=7.32Hz,1H),8.65(s,1H),8.26(s,1H),8.10(s,1H),8.00(d,J=6.10Hz,2H),7.88-7.94(m,3H),7.61-7.66(m,1H),7.49(dd,J=7.17,1.68Hz,1H),7.42(d,J=7.63Hz,2H),7.28-7.35(m,4H),7.19(s,1H),2.81(d,J=4.58Hz,3H),1.72(s,6H)。LCMS保留时间:3.325分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 507(MH+)。
Figure BDA00002387178600631
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸(0.070g,0.14mmol)和1-苯基环丙胺盐酸盐(0.040g,0.20mmol)来制备。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.40(s,1H),8.90(d,J=7.32Hz,1H),8.35(s,1H),8.11(d,J=1.22Hz,1H),8.03(d,J=7.93Hz,1H),7.98(d,J=7.63Hz,2H),7.90(dd,J=8.70,5.65Hz,2H),7.65(t,J=7.78Hz,1H),7.49(dd,J=7.32,1.83Hz,1H),7.28-7.35(m,4H),7.23-7.26(m,2H),7.15-7.20(m,1H),2.81(d,J=4.58Hz,3H),1.32(d，J=9.16Hz,4H)。LCMS保留时间:3.053分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 505(MH+)。
Figure BDA00002387178600632
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸(0.070g,0.14mmol)和1-苯基环丁胺盐酸盐(0.040g,0.20mmol)来制备。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.21(s,1H),8.90(d,J=7.02Hz,1H),8.30(s,1H),8.09(s,1H),7.96-8.03(m,2H),7.88-7.96(m,3H),7.63(t,J=7.63Hz,1H),7.53(d,J=7.63Hz,2H),7.48(dd,J=7.32,1.83Hz,1H),7.30-7.37(m,4H),7.21(t,J=7.32Hz,1H),2.82(d,J=4.58Hz,3H),2.63-2.71(m,2H),2.58(ddd,J=12.13,8.62,6.10Hz,2H),2.03-2.11(m,1H),1.84-1.93(m,1H)。LCMS保留时间:3.225分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,4.6×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 519(MH+)。
5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸(0.10g,0.20mmol)和2-甲基丙-2-胺(0.020g,0.30mmol)来制备。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.88(d,J=7.02Hz,1H),8.19(s,1H),8.09(d,J=1.22Hz,1H),7.95-8.02(m,3H),7.87-7.93(m,3H),7.58-7.64(m,1H),7.47(dd,J=7.32,1.83Hz,1H),7.33(t,J=9.00Hz,2H),2.82(d,J=4.58Hz,3H),1.43(s,9H)。LCMS保留时间:2.940分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z445(MH+)。
Figure BDA00002387178600651
4-(苄基氧基)吡啶-3-胺
向含有4-(苄基氧基)-3-硝基吡啶(7.2g,31.3mmol)和锌粉(6.1g,91.0mmol)的混合物中加入乙酸(7.2mL，7.5mmol)。将混合物在室温搅拌6小时，过滤并浓缩。将所得残留物溶解在乙酸乙酯(300mL)中，用饱和氯化铵水溶液(3×100mL)洗涤，用盐水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(苄基氧基)吡啶-3-胺，其为橙色油状物，所述油状物不经进一步纯化即使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.91(s,1H),7.72(d,J=5.49Hz,1H),7.50(d,J=7.63Hz,2H),7.41(t,J=7.32Hz,2H),7.34(s,1H),7.03(d,J=5.49Hz,1H),5.24(s,2H),5.13(s,2H)。LCMS保留时间:1.372分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 201(MH+)。
Figure BDA00002387178600661
N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺
历时90分钟向含有4-(苄基氧基)吡啶-3-胺(6.2g,15.8mmol)、三乙胺(11mL,79mmol)和二氯甲烷(163mL)的溶液中滴加甲磺酰氯(1.2mL,15.8mmol)/二氯甲烷(100mL)。将溶液在室温保持6小时并浓缩，得到N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺，其不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.305分钟。LC数据用配备有Waters-Xterra,5微米,C18,4.6×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 279(MH+)。
Figure BDA00002387178600662
N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)-N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲磺酰胺
N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)-N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲磺酰胺由N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(4.6g,10.6mmol)来制备。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.40(d,J=5.77Hz,1H),8.30(s,1H),7.45-7.51(m,2H),7.33-7.43(m,3H),7.26(d,J=5.77Hz,1H),5.27(s,2H),3.59(s,4H),2.94(s,3H),0.78(s,9H),-0.07(s,6H)。LCMS保留时间:3.221分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 437(MH+)。
Figure BDA00002387178600671
6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-羟基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯由N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)-N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲磺酰胺(2.4g,5.5mmol)来制备。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.50(s,1H),7.69-7.75(m,2H),7.66(s,1H),7.39-7.47(m,5H),7.13(t,J=8.70Hz,2H),5.24(s,2H),3.81(s,4H),3.74(s,3H),2.87(s,3H),0.80(s,9H),-0.01(s,6H)。LCMS保留时间:3.190分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为254nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 628(MH+)。
Figure BDA00002387178600672
2-(4-氟苯基)-5-羟基-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
在氮气气氛下向含有6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-羟基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.17g,0.27mmol)和乙酸乙酯(5.4mL)的溶液中一次性加入10%Pd/C(0.04g,0.04mmol Pd)。将反应混合物在氢气气氛(气囊)下搅拌2小时，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-羟基-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯，其为浅黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.71(s,1H),8.68(s,1H),7.73(ddd,J=11.98,5.33,2.76Hz,2H),7.46(s,1H),7.25-7.31(m,2H),3.70(s,7H),3.11-3.14(m,3H),0.74(s,9H),-0.06至-0.04(m,6H)。LCMS保留时间:2.750分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 538(MH+)。
6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯由2-(4-氟苯基)-5-羟基-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.15g,0.29mmol)来制备。LCMS保留时间:3.200分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 670(MH+)。
Figure BDA00002387178600691
3-(2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸
3-(2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸由6-(N-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.07g,0.10mmol)来制备。LCMS保留时间:1.845分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 528(MH+)。
Figure BDA00002387178600692
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯由3-(2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯甲酸(0.05g,0.10mmol)和1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.03g,0.15mmol)来制备。LCMS保留时间:1.473分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为254nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z644(MH+)。
Figure BDA00002387178600701
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸由2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(0.06g,0.10mmol)来制备。LCMS保留时间:1.220分钟。LC数据用配备有Waters-Sunfire,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 630(MH+)。
Figure BDA00002387178600702
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.04g,0.06mmol)来制备。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.26(s,1H),9.16(s,1H),8.45(d,J=3.05Hz,1H),8.11(s,1H),8.05(q,J=4.27Hz,1H),7.95-8.01(m,1H),7.88-7.93(m,2H),7.87(d,J=8.24Hz,1H),7.78(s,1H),7.65-7.70(m,1H),7.59-7.64(m,1H),7.31-7.40(m,3H),7.16(dd,J=7.02,5.19Hz,1H),5.01(s,1H),3.58-3.65(m,1H),3.42(s,1H),3.25(s,4H),2.94(dt,J=14.65,4.43Hz,1H),2.74-2.78(m,3H),1.53-1.59(m,2H),1.24-1.31(m,2H)。LCMS保留时间:1.517分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 643(MH+)。
6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯
将3-(4-氟苯基)-3-氧代丙酸乙酯(2.6g,12mmol)溶解在DCM(32mL)中，冷却至0℃并用四正丁基三溴化铵(6.75g,14.0mmol)处理。将反应混合物在0℃搅拌1小时，在室温搅拌1小时，然后用饱和NaHCO3(水溶液)(2×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗品溶解在EtOH(60mL)中，然后加入5-溴吡啶-2-胺(6.22g,36.0mmol)且将反应混合物在氮气下在70℃搅拌过夜(LCMS表明反应完成)。反应混合物用DCM(~120mL)稀释，用饱和NaHCO3(水溶液)(2×100mL)洗涤且干燥(MgSO4)有机层，过滤并浓缩。将所得固体溶解在DCM(~30mL)中，用己烷(~70mL)稀释并搅拌。滤出固体(含有一些所需产物)并浓缩母液，溶解在DCM中并通过Biotage Horizon(40M,10%EtOAc/己烷,SiO2)来纯化(化合物在设备中析出，这导致未知量的化合物变为废品)。所收集的馏分具有析出的固体物质，过滤收集所述固体物质，得到6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(594mg,1.636mmol,13%收率)，其为白色蓬松固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.60(s,1H),7.75(d,J=8.4Hz,1H),7.74(d,J=8.4Hz,1H),7.62(d,J=9.2Hz,1H),7.52(dd,J=9.2,1.5Hz,1H),7.13(d,J=8.5Hz,1H),7.12(d,J=8.5Hz,1H),4.33(q,J=7.1Hz,2H),1.25(t，J=7.1Hz,3H)。LCMS:m/e=743(M+H)+,保留时间=2.24分钟(柱=(2)Phenomenex 4.6×50mm C1810μm,溶剂A=10%MeOH-90%H20-0.1%TFA,溶剂B=90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA,起始%B=0,最终%B=100,梯度时间=2分钟,保持时间=1分钟,流速=5mL/min)。LC-MS保留时间为2.04分钟；m/z 362,364(MH+)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600721
6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸
将6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(394mg,1.09mmol)溶解在MeOH(10mL)和THF(10mL)中，然后加入1M NaOH水溶液(7.5mL,7.50mmol)且将反应混合物在70℃加热1小时。反应混合物用1M HCl水溶液(8mL)处理(形成白色析出物)，冷却至室温，用水(30ml)稀释并过滤收集析出物(用水淋洗)。将固体真空干燥过夜，得到6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(290mg,0.87mmol,80%收率)，其为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.40(宽单峰,1H),9.53(s,1H),7.86(d,J=8.6Hz,1H),7.84(d,J=8.6Hz,1H),7.78(d,J=9.5Hz,1H),7.73(dd,J=9.5,1.5Hz,1H),7.30(d,J=8.9Hz,1H),7.28(d,J=8.9Hz,1H)。LC-MS保留时间为0.94min；m/z 334,336(MH+)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%TFA且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600731
6-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
将6-溴-2-(4-氟苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(250mg,0.746mmol)在DCE(8mL)中浆化，然后加入草酰氯(0.30mL,3.4mmol)且将浆液搅拌5分钟。然后加入DMF(50μL,0.65mmol)(起泡)且将浆液搅拌1小时，然后加入甲胺(5mL,10mmol)(2M于THF中)(放热)和TEA(~3mL)(放热)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物在水(~30mL)和DCM/MeOH(9/1,3×30mL)之间分配。将合并的有机物浓缩至干且将残留物在MeOH/EtOAc(1∶1,~40mL)中浆化并过滤收集6-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(172mg,0.494mmol,66%收率)，其为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.92(s,1H),8.25(s,1H),7.85(d,J=7.9Hz,1H),7.83(d,J=7.9Hz,1H),7.69(d,J=9.5Hz,1H),7.56(d,J=9.5Hz,1H),7.33(d,J=8.5Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),2.79(d,J=4.0Hz,3H)。LC-MS保留时间为1.73分钟；m/z 348,350(MH+)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600732
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯甲酸
将6-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(150mg,0.431mmol)和3-二羟硼基苯甲酸(107mg,0.646mmol)在二噁烷(5mL)和水(1mL)中浆化。向反应混合物中先后加入Cs2CO3(211mg,0.646mmol)和Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)钯)(50mg,0.043mmol)。将反应混合物密封并在100℃加热过夜。将反应溶液冷却至室温，过滤除去固体，用水(~10mL)稀释并用1N HCl(水溶液)(1.5mL,1.5mmmol)酸化。过滤收集所形成的白色析出物，用水洗涤并干燥，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯甲酸(174mg,0.335mmol,78%收率)，其为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.15(宽单峰,1H),9.01(s,1H),8.25-8.17(m,2H),8.00(t,J=7.5Hz,2H),7.87(d,J=8.7Hz,1H),7.86(d,J=8.6Hz,1H),7.67(t,J=7.8Hz,1H),7.65-7.59(m,1H),7.59-7.53(m,1H),7.32(d,J=8.9Hz,2H),2.82(d,J=4.0Hz,3H)。LC-MS保留时间为1.18min；m/z 388(MH-)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600741
6-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
将3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯甲酸(40mg,0.10mmol)在DMF(0.7mL)和TEA(0.1mL)中浆化。向该浆液中加入2-甲基丙-2-胺(11.27mg,0.154mmol)，然后加入HATU(59mg,0.15mmol)(溶液变为黄色)。将反应混合物在室温搅拌过夜(LCMS表明反应完成)。反应混合物用MeOH(0.7mL)稀释，过滤并通过制备性HPLC(乙腈/水(含有10mM乙酸铵缓冲剂))来纯化，得到6-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(19.6mg,0.042mmol,41%收率)，其为白色固体。1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm 9.25(宽单峰,1H),8.08(t,J=1.8Hz,1H),7.90(dd,J=9.2,1.8Hz,1H),7.88-7.85(m,1H),7.84-7.82(m,1H),7.81-7.78(m,2H),7.77(宽二重峰,J=9.2Hz,1H),7.61(t,J=7.8Hz,1H),7.29(t,J=8.9Hz,2H),2.69(s,3H),1.52(s,9H)。LC-MS保留时间为1.39分钟；m/z 443(MH-)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
将3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯甲酸(40mg,0.10mmol)和2-苯基丙-2-胺(21mg,0.15mmol)溶解在DMF(0.7mL)和TEA(0.1mL)中。向该溶液中加入HATU(59mg,0.15mmol)(溶液变为黄色)。将反应混合物在室温搅拌2小时(LCMS表明反应完成)。反应混合物用MeOH(0.7mL)稀释，过滤并通过制备性HPLC(乙腈/水(含有10mM乙酸铵缓冲剂))来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(24.1mg,0.045mmol,44%收率)，其为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 9.25(宽单峰,1H),8.14(宽单峰,1H),7.92-7.86(m 3H),7.81-7.79(m,3H),7.63(t,J=7.8Hz,1H),7.49(d,J=7.6Hz,2H),7.35(d,J=7.3Hz,1H),7.33(d,J=8.2Hz,1H),7.29(d,J=8.9Hz,1H),7.27(d,J=8.6Hz,1H),7.22(t,J=7.2Hz,1H),2.90(s,3H),1.81(s,6H)。LC-MS保留时间为1.74分钟；m/z 507(MH+)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%TFA且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600761
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
将3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯甲酸(40mg,0.10mmol)和1-苯基环丙胺盐酸盐(26mg,0.15mmol)在DMF(0.7mL)和TEA(0.1mL)中浆化。向该浆液中加入HATU(59mg,0.15mmol)(溶液变为黄色)。将反应混合物在室温搅拌2小时(LCMS表明反应完成)。反应混合物用MeOH(0.7mL)稀释，过滤并通过制备性HPLC(乙腈/水(含有10mM乙酸铵缓冲剂))来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(15.2mg,0.028mmol,28%收率)，其为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 9.27(宽单峰,1H),8.31(宽单峰,1H),7.97-7.88(m 3H),7.82-7.76(m,3H),7.66(t,J=7.8Hz,1H),7.35-7.26(m,6H),7.22-7.17(m,1H),2.90(s,3H),1.45-1.36(m,4H)。LC-MS保留时间为1.63分钟；m/z 505(MH+)。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%TFA且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178600762
2-(5-溴-2-硝基苯基)-3-(4-氟苯基)-3-羟基丙烯酸乙酯
将碳酸钾(3.3g,24mmol)加到搅拌的4-溴-2-氟-1-硝基苯(2.45g,11mmol)和3-(4-氟苯基)-3-氧代丙酸乙酯(2.7g,13mmol)于DMSO(11mL)中的溶液中。黄色溶液变为紫色且将反应混合物在室温搅拌。8小时后，反应混合物用25mL 1N HCl中和并用EtOAc萃取。有机相用水(×3)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶色谱用Biotage 40+M柱(梯度洗脱为历经10根柱体积的5%至25%EtOAc/己烷且在λ=254nm进行馏分收集)纯化，得到标题化合物，其为粘性琥珀色油状物(4.8g,105%收率,1H NMR表明含有~10重量%的EtOAc)。1H NMR(酮:烯醇互变异构体的比例为~0.6:1,500MHz,CDCl3)δppm 13.47(s,1H)7.94-8.05(m,2H)7.86(d,J=8.55Hz,1H)7.62-7.72(m,1.2H)7.51(dd,J=8.55,2.14Hz,1H)7.29-7.35(m,2H)7.15-7.21(m,1.2H)7.12(d,J=2.14Hz,1H)6.94(t,J=8.55Hz,2H)6.35(s,0.6H)4.20-4.34(m,2H)4.04-4.11(m,1.2H)1.23-1.27(m,2H)1.18(t,J=7.17Hz,3H)。LC/MS用带有UV检测(220nm)和Waters Micromass的Shimadzu-VP设备进行。LC/MS方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/10mM NH4OAc，溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/10mMNH4OAc，起始%B=0，最终%B=100，梯度时间=2分钟，停止时间=3分钟，流速=5ml/min，柱为XBridge C185μm 4.6×50mm；两个洗脱峰的HPLCRt=1.69和1.83分钟(比例为~1:2)，两个峰的(ES-)m/z(M-)=408,410(比例为1:1)。
Figure BDA00002387178600771
5-溴-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-羧酸乙酯
在250mL圆底烧瓶中将铁粉(710mg,13mmol)加到搅拌的2-(5-溴-2-硝基苯基)-3-(4-氟苯基)-3-羟基丙烯酸乙酯(1.0g,2.4mmol)于EtOH(20mL)/AcOH(16mL)中的溶液中。在空气冷凝器下将烧瓶立即置于预加热的(100℃)油浴中且将浆液剧烈搅拌。1.5小时后，将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(200mL)稀释并过滤除去固体。滤液用水反复洗涤直到有机相不再是红色。然后有机相用盐水和饱和NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩(与PhMe(甲苯)共沸以除去残留的AcOH)，得到灰白色固体。粗产物用1:1CH2Cl2/己烷研磨且滤液通过硅胶色谱用Biotage 40+M柱(梯度洗脱为历经10根柱体积的10%至40%EtOAc/己烷且在λ=254nm进行馏分收集)纯化。如上得到的灰白色析出物用CH2Cl2进一步研磨，得到白色固体且将滤液浓缩，得到灰白色固体。用与上述相同的方法对析出物和滤液分别进行色谱分离，但在λ=320nm进行馏分收集。三根柱各自得到两个主要峰。将合并的第一个洗脱峰浓缩，得到标题化合物(335mg,38%收率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δppm 8.67(宽单峰,1H)8.36(宽单峰,1H)7.54-7.70(m,2H)7.36(d,J=7.68Hz,1H)7.25(t,J=7.68Hz,1H)7.11(t,J=8.23Hz,2H)4.31(q,J=6.83Hz,2H)1.33(t,J=7.14Hz,3H)。LC/MS用带有UV检测(220nm)和WatersMicromass的Shimadzu-VP设备进行。LC/MS方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/10mM NH4OAc，溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/10mMNH4OAc，起始%B=0，最终%B=100，梯度时间=2分钟，停止时间=3分钟，流速=5ml/min，柱为XBridge C185μm 4.6×50mm；HPLC Rt=1.73，(ES+)m/z(MH+)=362,364(比例为1:1)。
Figure BDA00002387178600781
5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基-1H-吲哚-3-甲酰胺
在氮气气氛下将5-溴-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(90mg,0.25mmol)于1,2-二氯乙烷(3mL)中的混悬液在冰浴中冷却。加入三溴化硼于CH2Cl2中的溶液(1M,0.75mL，0.75mmol)，在氮气下历时4小时将反应混合物温热至室温。然后通过加入甲胺于THF中的溶液(2M,5mL,10mmol)将反应淬灭。将反应混合物在EtOAc和水之间分配，有机相用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物。加入Et2O/己烷并形成白色析出物。过滤收集粉末，用Et2O洗涤并风干，得到标题化合物(60mg,70%收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.93(s,1H)7.82(d,J=1.83Hz,1H)7.71-7.78(m,3H)7.32-7.41(m,3H)7.29(dd,J=8.55,1.83Hz,1H)2.75(d,J=4.58Hz,3H)。LC/MS用带有UV检测(220nm)和Waters Micromass的Shimadzu-VP设备进行。LC/MS方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/10mMNH4OAc，溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/10mM NH4OAc，起始%B=0，最终%B=100，梯度时间=2分钟，停止时间=3分钟，流速=5ml/min，柱为XBridgeC185μm 4.6×50mm；HPLC Rt=1.26，(ES+)m/z(MH+)=347,349(比例为1:1)。
Figure BDA00002387178600782
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)-1H-吲哚-5-基)苯甲酸
在7mL闪烁瓶中将5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基-1H-吲哚-3-甲酰胺(59mg,0.17mmol)、3-二羟硼基苯甲酸(47mg,0.28mmol)、Cs2CO3(100mg,0.31mmol)和Pd(PPh3)4(17mg,0.015mmol)合并。加入1,4-二噁烷(1.25mL)和水(0.25mL)，将小瓶盖好且将反应混合物在油浴中加热至90℃。7小时后，将反应混合物冷却至室温并用水稀释。加入1mL 1N HCl并形成析出物。混悬液用EtOAc(+MeOH以有助于溶解)萃取且有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到棕色固体。其通过制备性HPLC来纯化且浓缩，得到白色固体(12mg,18%收率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.34(s,1H)8.06(s,1H)7.97(d,J=7.63Hz,1H)7.92(d,J=7.93Hz,1H)7.65-7.74(m,2H)7.54(t,J=7.78Hz,1H)7.51(s,2H)7.23(t,J=8.85Hz,2H)2.89(s,3H)。LC/MS用带有UV检测(220nm)和Waters Micromass的Shimadzu-VP设备进行。LC/MS方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/10mM NH4OAc，溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/10mM NH4OAc，起始%B=0，最终%B=100，梯度时间=2分钟，停止时间=3分钟，流速=5ml/min，柱为XBridge C185μm4.6×50mm；HPLC Rt=0.88，(ES+)m/z(MH+)=389。
Figure BDA00002387178600791
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺
向3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)-1H-吲哚-5-基)苯甲酸(12mg,0.031mmol)和DIPEA(20μL,0.115mmol)于1,2-二氯乙烷(0.5mL)/DMF(0.1mL)中的溶液中加入枯基胺(cumylamine)(15μL,0.10mmol)和HATU(15mg,0.039mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后蒸发挥发物且残留物直接通过制备性HPLC来纯化。浓缩，得到标题化合物，其为白色粉末(11mg,68%收率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.52(s,1H)8.09(d,J=7.93Hz,2H)7.85(d,J=7.63Hz,1H)7.66-7.77(m,3H)7.49-7.57(m,3H)7.47(d,J=8.24Hz,2H)7.31(t,J=7.78Hz,2H)7.23(t,J=8.85Hz,2H)7.19(t,J=7.32Hz,1H)2.89(s,3H)1.78(s,6H)。LC/MS用带有UV检测(220nm)和Waters Micromass的Shimadzu-VP设备进行。LC/MS方法：溶剂A=10%CH3CN/90%H2O/0.1%TFA，溶剂B=90%CH3CN/10%H2O/0.1%TFA，起始%B=0，最终%B=100，梯度时间=3分钟，停止时间=4分钟，流速=4ml/min，柱为Sunfire C185μm4.6×50mm；HPLC Rt=1.49分钟，(ES+)m/z(MH+)=506。分析性HPLC方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/0.1%TFA，溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/0.1%TFA，起始%B=10，最终%B=100，梯度时间=15分钟，停止时间=18分钟，流速=1ml/min；柱为Waters Sunfire C-18,3.5μm 4.6×150mm，Rt=15.29分钟，纯度=97%；柱为Waters Xbridge Phenyl 3.5μm 4.6×150mm，Rt=11.59分钟，纯度=98%。
对于以下实验操作，除非另有说明，所使用的LCMS条件如下：Luna4.6×50mm S10，波长=220nm，流速=4mL/min，梯度=5至95%乙腈/10mM乙酸铵水溶液。
Figure BDA00002387178600801
6-碘-2-苯基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
将二氯甲烷(10mL)和3-碘吡啶(928mg,4.53mmol)加到配备有磁力搅拌棒的100mL圆底烧瓶中。该无色溶液用冰浴冷却并历时5分钟滴加O-(均三甲苯基磺酰基)羟胺(975mg,4.53mmol)/二氯甲烷(10mL)。在室温搅拌30分钟后，溶剂通过旋转蒸发来除去，得到白色固体。加入苯基丙炔酸甲酯(1000mg,6.24mmol)/二甲基甲酰胺(9mL)。加入碳酸钾(2504mg,18.12mmol)。反应混合物缓慢变成深绿色。在室温搅拌2小时后，将反应混合物倒入乙醚(300mL)中并用水(8×25mL)萃取。通过旋转蒸发从有机部分中除去溶剂。将粗产物溶解在最小量的二氯甲烷中并加载到90g“Single Sep”硅胶柱上且用历经1000mL的0至40%乙酸乙酯/己烷洗脱。分离出标题化合物(200mg,12%)，其为橙色固体。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 3.83(s,3H)7.46(m,3H)7.59(dd,J=9.16,1.53Hz,1H)7.75(m,2H)8.00(dd,J=9.31,0.76Hz,1H)8.82(s,1H)。LCMS:2.4分钟,M+1=379。
Figure BDA00002387178600802
6-碘-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
将6-碘-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(250mg,0.661mmol)溶解在LiOH水溶液(2N,1mL)、甲醇(2mL)和四氢呋喃(7mL)中。将该溶液在45℃搅拌过夜。24小时后，加入2mL 2M LiOH和2mL甲醇。在55℃加热过夜。反应混合物用冰水浴冷却并滴加盐酸水溶液(10mL,1N)直到pH试纸表明为酸性。加入乙酸乙酯(200mL)和水(40mL)。有机部分用盐水(20mL)萃取并用硫酸镁干燥。溶剂通过旋转蒸发来除去。将残留物在真空下放置过夜，得到白色固体(204mg,85%)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.47(m,3H)7.77(m,2H)7.97(d,J=9.46Hz,1H)9.27(s,1H)。
Figure BDA00002387178600811
6-碘-N-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向配备有磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中加入6-碘-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(200mg,0.549mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(74.8mg,0.549mmol)、盐酸甲胺(55.6mg,0.824mmol)、二异丙基乙基胺(671μL,3.84mmol)、二氯甲烷(5000μL)和二甲基甲酰胺(500μL)。向该黄色溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(147mg,0.769mmol)。将反应混合物在室温搅拌6小时并用乙酸乙酯(200mL)稀释。有机部分用0.5N盐酸洗涤5次，用饱和碳酸氢钠洗涤1次且用盐水洗涤2次。有机部分用硫酸镁干燥。溶剂通过旋转蒸发来除去。将残留物在真空下放置过夜，得到白色固体(130mg,90%)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.87(m,3H)7.51(m,3H)7.63(dd,J=9.31,1.37Hz,1H)7.76(m,3H)8.94(s,1H)。LCMS:1.8分钟,M+1=378。
Figure BDA00002387178600812
6-(2-甲氧基苯基)-N-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向配备有磁力搅拌棒的微波瓶中加入2-甲氧基苯基硼酸(12.09mg,0.080mmol)、6-碘-N-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(15mg,0.040mmol)、碳酸钠(7.38mg,0.070mmol)、二乙酸钯(II)(0.893mg,3.98μmol)和二甲基甲酰胺(1.0mL)。将该混合物置于氩气气氛下并在150℃加热10分钟。通过反相HPLC(起始%B=30,最终%B=80,梯度时间=10分钟,流速=35mL/minute,波长=220nm,溶剂A=10%甲醇+90%水(含有0.1%TFA),溶剂B=90%甲醇+10%水(含有0.1%TFA),柱=Phenomenex-Luna 30×50mm S10,产物峰在7.6分钟)分离出标题化合物(5.7mg,36%)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 2.85(d,J=4.88Hz,3H)3.86(s,3H)7.03(d,J=7.93Hz,1H)7.08(t,J=7.02Hz,1H)7.39(m,2H)7.54(m,3H)7.63(dd,J=9.16,1.53Hz,1H)7.69(m,1H)8.36(dd,J=9.16,0.61Hz,1H)8.76(m,1H)。LCMS:2.0分钟,M+1=358。
Figure BDA00002387178600821
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸甲酯
历时5分钟向冷却的(-78℃,干冰-丙酮)含有2-(4-氟苯基)-3-碘-5-甲氧基苯并[b]噻吩(1.0g,2.6mmol)和THF(26mL)的溶液中加入正丁基锂(2.0mL,浓度为1.0M的THF溶液)。将溶液在-78℃保持1小时。然后通过注射器快速稳流加入氯甲酸甲酯(0.80mL,10.4mmol)。将溶液从冷却浴中取出并在环境温度静置15小时。将溶液浓缩并用硅胶(0-10%乙酸乙酯/己烷,40分钟梯度)进行纯化，得到2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸甲酯，其为黄色残留物。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 7.88(d,J=2.44Hz,1H),7.66(d,J=8.85Hz,1H),7.47(dd,J=8.85,5.19Hz,2H),7.12(t,J=8.70Hz,2H),7.05(dd,J=8.70,2.59Hz,1H),3.91(s,3H),3.74(s,3H)。LCMS保留时间:3.355分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 317(MH+)。
Figure BDA00002387178600822
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸
向含有2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸甲酯(0.59g,1.9mmol)、THF(13.5mL)和甲醇(8.5mL)的溶液中加入氢氧化锂水溶液(9.3mL,2.0M)。将溶液在50℃保持15小时。将溶液冷却至室温，用HCl水溶液(22mL,1.0N)调整至pH低于4并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有机部分用盐水(15mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸，其为白色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.99(s,1H),7.93(d,J=8.55Hz,1H),7.80(d,J=2.44Hz,1H),7.59(dd,J=8.55,5.49Hz,2H),7.32(t,J=8.70Hz,2H),7.11(dd,J=8.85,2.44Hz,1H),3.82-3.87(m,3H)。LCMS保留时间:1.532分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 303(MH+)。
Figure BDA00002387178600831
2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
向含有2-(4-氟苯基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-3-羧酸(0.57g,1.9mmol)、HOAT(0.28g,2.1mmol)、二异丙基乙基胺(2.3mL,13.2mmol)、盐酸甲胺(0.20g,2.8mmol)和二氯甲烷(20mL)的溶液中加入EDCI(0.51g,13.2mmol)。将溶液在室温保持6小时，再用DCM(20mL)稀释，用水(20mL)洗涤，用HCl水溶液(2×20mL,0.1N)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺，其不经进一步纯化即使用。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.30(d,J=4.27Hz,1H),7.90(d,J=8.85Hz,1H),7.60(dd,J=8.70,5.34Hz,2H),7.34(t,J=8.85Hz,2H),7.16(d,J=2.14Hz,1H),7.07(dd,J=8.85,2.44Hz,1H),3.81(s,3H),2.74(d,J=4.58Hz,3H)。LCMS保留时间:2.513分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 316(MH+)。
Figure BDA00002387178600841
2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
向含有2-(4-氟苯基)-5-甲氧基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(0.58g,1.8mmol)和DCE(18mL)的混悬液中一次性加入三溴化硼-甲硫醚复合物(2.3g,7.4mmol)。将混合物在密闭容器中在氮气气氛下在83℃搅拌9小时，冷却至室温并用HCl水溶液(20mL,1.0N)淬灭。将混合物浓缩以除去所有溶剂且加入水(50mL)。含水混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺，其为棕色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.56(s,1H),8.31(d,J=4.58Hz,1H),7.78(d,J=8.55Hz,1H),7.55-7.63(m,2H),7.29-7.37(m,2H),7.08(d,J=2.14Hz,1H),6.91(dd,J=8.85,2.44Hz,1H),2.73(d,J=4.58Hz,3H)。LCMS保留时间:2.137分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 302(MH+)。
Figure BDA00002387178600842
三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基酯
将含有2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(0.47g,0.93mmol)、N-苯基二(三氟甲烷)磺酰胺(0.50g,1.4mmol)、三乙胺(0.64mL,4.6mmol)和二氯甲烷(9.2mL)的溶液在室温保持16小时。溶液用二氯甲烷(30mL)进一步稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤，用水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。用硅胶(0-100%乙酸乙酯/己烷,45分钟梯度)进行纯化，得到三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基酯，其为白色固体。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.07(d,J=2.44Hz,1H),7.85(d,J=8.54Hz,1H),7.55-7.59(m,2H),7.30(dd,J=8.85,2.44Hz,1H),7.18(t,J=8.55Hz,2H),2.88(s,3H)。LCMS保留时间:2.981分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 434(MH+)。
Figure BDA00002387178600851
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸
向脱气的含有三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基酯(0.32g,0.74mmol)、3-二羟硼基苯甲酸(0.18g,1.1mmol)、碳酸铯(0.36g,1.1mmol)、二噁烷(6.2mL)和水(1.2mL)的溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.02g,0.016mmol)。将溶液在95℃保持90分钟。将溶液冷却至室温，浓缩并混悬在乙酸乙酯(20mL)中，搅拌1小时。过滤混合物，用水(3×20mL)洗涤并风干，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸，其为灰色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:2.132分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 406(MH+)。
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
向含有2-苯基丙-2-胺(0.030g,0.23mmol)、二异丙基乙基胺(0.13mL,0.75mmol)、3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸(0.075g,0.15mmol)和DMF(1.0mL)的溶液中一次性加入HATU(0.74g,0.20mmol)。将溶液在室温保持15小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8.5分钟。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.62(s,1H),8.42(d,J=4.88Hz,1H),8.17(d,J=8.55Hz,1H),8.13(s,1H),7.99(s,1H),7.84-7.89(m,2H),7.82(dd,J=8.55,1.53Hz,1H),7.66(dd,J=8.70,5.34Hz,2H),7.59(t,J=7.78Hz,1H),7.42(d,J=7.32Hz,2H),7.37(t,J=8.70Hz,2H),7.30(t,J=7.63Hz,2H),7.18(t,J=7.32Hz,1H),2.77(d,J=4.58Hz,3H),1.71(s,6H)。LCMS保留时间:3.305分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 523(MH+)。
Figure BDA00002387178600871
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸(0.075g,0.154mmol)和1-苯基环丙胺盐酸盐(0.038g,0.22mmol)来制备。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.36(s,1H),8.41(d,J=4.58Hz,1H),8.22(s,1H),8.17(d,J=8.24Hz,1H),7.98(d,J=1.53Hz,1H),7.93(d,J=7.63Hz,1H),7.89(d,J=7.94Hz,1H),7.83(dd,J=8.39,1.68Hz,1H),7.66-7.68(m,1H),7.65(d,J=5.19Hz,1H),7.61(t,J=7.78Hz,1H),7.37(t,J=8.70Hz,2H),7.29(t,J=7.63Hz,2H),7.22-7.26(m,2H),7.15-7.19(m,1H),2.77(d,J=4.58Hz,3H),1.31(d,J=11.90Hz,4H)。LCMS保留时间:3.250分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 521(MH+)。
Figure BDA00002387178600872
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)苯并[b]噻吩-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸(0.075g,0.15mmol)和1-苯基环丁胺盐酸盐(0.041g，0.22mmol)来制备。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.18(s,1H),8.42(d,J=4.58Hz,1H),8.14-8.22(m,2H),7.97(s,1H),7.88(dd,J=16.02,7.48Hz,2H),7.82(d,J=8.54Hz,1H),7.66(dd,J=8.24,5.80Hz,2H),7.59(t,J=7.63Hz,1H),7.52(d,J=7.63Hz,2H),7.31-7.40(m,4H),7.21(t,J=7.32Hz,1H),2.77(d,J=4.58Hz,3H),2.62-2.71(m,2H),2.53-2.60(m,2H),2.02-2.11(m,1H),1.83-1.92(m,1H)。LCMS保留时间:3.370分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 535(MH+)。
Figure BDA00002387178600881
5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基苯并[b]噻吩-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)苯并[b]噻吩-5-基)苯甲酸(0.075g,0.15mmol)和2-甲基丙-2-胺(0.016g,0.22mmol)来制备。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.42(s,1H),8.16(s,1H),8.07(s,1H),7.96(s,2H),7.82(s,3H),7.66(s,2H),7.57(s,1H),7.37(s,2H),2.78(s,3H),1.42(s,9H)。LCMS保留时间:3.218分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,4.6×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 461(MH+)。
Figure BDA00002387178600891
5-(2-氯-5-(异丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
5-(2-氯-5-(异丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由5-(2-氯-5-(异丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.027g,0.045mmol)和盐酸甲胺(0.013g,0.18mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到5-(2-氯-5-(异丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:6分钟。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 9.01(s,1H),8.11(s,2H),7.92(s,1H),7.84-7.91(m,3H),7.71(d,J=8.55Hz,1H),7.24-7.30(m,2H),3.65(s,1H),3.56(s,1H),3.30(d,J=1.22Hz,2H),3.18-3.27(m,3H),2.82-2.91(m,4H),1.92(dq,J=13.47,6.80Hz,1H),0.99(d,J=6.71Hz,6H)。LCMS保留时间:1.800分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 638(MNa+)。
Figure BDA00002387178600892
5-环丙基-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
5-环丙基-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由5-环丙基-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.013g,0.030mmol)和盐酸甲胺(0.008g,0.12mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到5-环丙基-2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-羟基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:5.5分钟。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 8.79(s,1H),7.77-7.82(m,2H),7.42(s,1H),7.23-7.28(m,2H),4.06-4.14(m,1H),3.72-3.79(m,1H),3.63-3.70(m,2H),3.26(s,3H),2.87(s,3H),2.30-2.37(m,1H),1.15-1.24(m,2H),1.02-1.10(m,1H),0.80(dd,J=8.85,3.36Hz,1H)。LCMS保留时间:1.397分钟。LC数据用配备有SunfireC18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z468.8(MNa+)。
Figure BDA00002387178600901
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-甲氧基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-甲氧基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺由2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-甲氧基乙基)甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.032g,0.049mmol)和盐酸甲胺(0.014g,0.19mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-6-(N-(2-甲氧基乙基)甲基磺酰氨基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.58(s,1H),8.38(s,1H),8.25(s,1H),7.92-7.98(m,1H),7.73(ddd,J=11.80,5.14,2.89Hz,2H),7.61-7.66(m,1H),7.52-7.58(m,1H),7.47(dd,J=8.41,1.13Hz,2H),7.24-7.34(m,10H),7.18-7.23(m,1H),5.61(d,J=4.52Hz,1H),3.76-3.87(m,1H),3.26-3.34(m,7H),3.18-3.26(m,3H),2.88(d,J=5.02Hz,3H),2.61(d,J=15.56Hz,1H),1.82(s,6H)。LCMS保留时间:2.232分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5μ,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z657.7(MNa+)。
Figure BDA00002387178600911
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.030g,0.049mmol)和盐酸甲胺(0.014g,0.19mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8.5分钟。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.25(s,1H),8.36(s,1H),8.05(q,J=4.37Hz,1H),8.02(s,1H),7.89-7.95(m,3H),7.78(s,1H),7.75(d,J=7.63Hz,1H),7.58(t,J=7.78Hz,1H),7.40(d,J=7.32Hz,2H),7.35(t,J=8.85Hz,2H),7.29(t,J=7.78Hz,2H),7.18(t,J=7.32Hz,1H),3.52(s,1H),3.21(s,3H),3.12(s,1H),2.77(d,J=4.58Hz,3H),1.69(s,6H),0.95(t,J=7.17Hz,3H)。LCMS保留时间:2.213分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 628(MH+)。
Figure BDA00002387178600921
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由2-(4-氟苯基)-6-(甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.088g,0.090mmol)和盐酸甲胺(0.024g,0.36mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-80%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),20分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:14分钟。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.43(宽单峰,1H),8.82-8.92(m,3H),8.46(s,3H),8.04(s,4H),7.88-7.98(m,13H),7.69-7.78(m,7H),7.54-7.62(m,4H),7.41(d,J=7.93Hz,7H),7.26-7.36(m,14H),7.18(t,J=7.17Hz,3H),2.84(s,10H),2.71-2.80(m,11H),1.65-1.75(m,21H)。LCMS保留时间:2.002分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 600(MH+)。
Figure BDA00002387178600931
6-(N-(环丙基甲基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
将含有2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(甲基磺酰氨基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(0.030g,0.050mmol)、(溴甲基)环丙烷(0.010g,0.075mmol)、碳酸钾(0.028g,0.20mmol)和DMF(0.5mL)的混合物在60℃搅拌15小时。将溶液过滤并浓缩，得到含有6-(N-(环丙基甲基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺的残留物，所述化合物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-80%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),20分钟梯度)来分离，得到白色固体。制备性HPLC保留时间:17分钟。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(s,1H),8.35(s,1H),8.06(宽单峰,2H),7.92(dd,J=8.70,5.65Hz,3H),7.76-7.86(m,2H),7.55-7.65(m,1H),7.33-7.42(m,4H),7.29(t,J=7.63Hz,2H),7.15-7.25(m,1H),3.41(dd,J=14.04,6.71Hz,1H),3.21(s,3H),2.96(dd,J=14.19,7.17Hz,1H),2.77(d,J=4.27Hz,3H),1.68(s,6H),0.73-0.83(m,1H),0.34-0.44(m,1H),0.29(ddd,J=8.16,4.43,4.20Hz,1H),0.01-0.11(m,1H),-0.04(dt,J=9.38,4.62Hz,1H)。LCMS保留时间:2.352分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z654(MH+)。
Figure BDA00002387178600941
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.019g,0.042mmol)和盐酸甲胺(0.011g,0.16mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),10分钟梯度)来纯化，得到6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-苯基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:7分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.56(s,1H),8.32(s,1H),7.67-7.77(m,2H),7.54(d,J=2.01Hz,1H),7.52(d,J=1.51Hz,1H),7.40-7.50(m,3H),7.20-7.30(m,4H),5.54(d,J=4.02Hz,1H),2.81-2.93(m,3H),2.70-2.81(m,3H),1.16(t,J=7.15Hz,3H)。LCMS保留时间:1.443分钟。LC数据用配备有Xterra,7微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 466.9(MH+)。
Figure BDA00002387178600942
5-环己基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
5-环己基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由5-环己基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.018g,0.039mmol)和盐酸甲胺(0.011g,0.16mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1MTFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到5-环己基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺。制备性HPLC保留时间:10分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.47(s,1H),8.31(s,1H),7.63-7.75(m,2H),7.22-7.28(m,5H),3.84(dq,J=14.05,7.03Hz,1H),3.57(dq,J=14.02,7.12Hz,1H),3.03-3.07(m,3H),2.90-2.99(m,J=11.86,11.86,3.39,3.26Hz,1H),2.88(d,J=4.77Hz,3H),2.00(d,J=13.05Hz,1H),1.89(d,J=11.29Hz,2H),1.73-1.85(m,2H),1.54-1.64(m,2H),1.35-1.48(m,3H),1.20-1.27(m,3H)。LCMS保留时间:1.577分钟。LC数据用配备有Xterra,7微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 473(MH+)。
Figure BDA00002387178600951
5-环戊基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
5-环戊基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由5-环己基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.015g,0.034mmol)和盐酸甲胺(0.009g,0.13mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1MTFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到5-环戊基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9分钟。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.42-8.50(m,1H),8.30-8.42(m,1H),7.64-7.73(m,2H),7.21-7.33(m,2H),5.51(宽单峰,1H),3.83(dd,J=13.80,7.03Hz,1H),3.56-3.69(m,1H),3.41(d,J=8.53Hz,1H),3.00-3.12(m,3H),2.87(d,J=4.77Hz,3H),2.25(宽单峰,1H),2.11(宽单峰,1H),1.95(宽单峰,2H),1.75(宽单峰,6H),1.19-1.31(m,3H)。LCMS保留时间:1.500分钟。LC数据用配备有Xterra,7微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 459(MH+)。
Figure BDA00002387178600961
5-环丙基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向脱气的含有三氟甲磺酸6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯(0.050g,0.093mmol)、环丙基硼酸(0.012g,0.14mmol)、磷酸钾一水合物(0.69g,0.33mmol)、三环己基膦(0.260mg,0.93μmol)、甲苯(0.9mL)和水(0.08mL)的溶液中加入二乙酸钯(1.0mg,4.64μmol)。将溶液在95℃保持2小时。过滤溶液以除去固体且浓缩，得到含有5-环丙基-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺的残留物。所述化合物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来分离，得到白色固体。制备性HPLC保留时间:8.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.50(s,1H),7.84(s,1H),7.62-7.74(m,2H),7.17-7.29(m,2H),5.52(宽单峰,1H),3.90(宽单峰,1H),3.70(d,J=7.78Hz,1H),3.08(s,3H),2.86(d,J=4.77Hz,3H),2.23(tt,J=8.31,5.24Hz,2H),1.27(t,J=7.15Hz,3H),1.19(ddd,J=8.22,3.07,1.51Hz,2H),1.13(d,J=14.31Hz,1H)。LCMS保留时间:1.322分钟。LC数据用配备有Xterra,7微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 430.8(MH+)。
Figure BDA00002387178600971
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.024g,0.046mmol)和1-(4-氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.013g,0.069mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm8.54(s,1H),8.29(s,1H),7.82(宽单峰,2H),7.65-7.77(m,2H),7.40(d,J=7.78Hz,2H),7.31-7.38(m,3H),7.22-7.30(m,4H),6.90-7.00(m,2H),5.55(d,J=4.77Hz,1H),3.42(宽单峰,1H),3.00-3.12(m,2H),2.78-2.90(m,4H),2.34(s,3H),1.62(宽单峰,2H),1.25-1.37(m,5H),1.08(宽单峰,3H)。LCMS保留时间:1.920分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 658(MH+)。
Figure BDA00002387178600981
2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.016g,0.040mmol)和1-(4-氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.011g,0.059mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.5分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.24(s,1H),8.84(d,J=7.03Hz,1H),7.83-7.96(m,5H),7.75(s,1H),7.47(d,J=8.03Hz,1H),7.26-7.38(m,4H),7.05-7.16(m,3H),2.78(d,J=4.77Hz,3H),2.37(s,3H),1.26(d,J=6.27Hz,4H)。LCMS保留时间:2.533分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10mM TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 537(MH+)。
Figure BDA00002387178600982
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.024g,0.059mmol)和1-苯基环丁胺盐酸盐(0.016g,0.089mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丁基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11分钟。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.52(d,J=7.03Hz,1H),8.29(s,1H),7.67-7.79(m,4H),7.54(d,J=7.78Hz,2H),7.32-7.43(m,3H),7.20-7.32(m,6H),6.94(d,J=7.03Hz,1H),6.80(s,1H),5.66(d,J=4.27Hz,1H),2.88(d,J=4.77Hz,3H),2.75(t,J=7.78Hz,4H),2.38(s,3H),2.11-2.24(m,1H),1.95(dt,J=11.48,7.94Hz,1H)。LCMS保留时间:1.870分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10mM TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 533(MH+)。
实施例24
Figure BDA00002387178600991
2-(4-氟苯基)-N,7-二甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
按照用于制备4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(实施例25)的操作，2-(4-氟苯基)-N,7-二甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(2-(4-氟苯基)-7-甲基-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.022g,0.053mmol)和1-苯基环丙胺盐酸盐(0.013g,0.079mmol)来制备。由此得到的残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到2-(4-氟苯基)-N,7-二甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.23(d,J=1.25Hz,1H),7.69-7.82(m,4H),7.39(d,J=8.03Hz,1H),7.29-7.36(m,4H),7.23-7.29(m,6H),7.17-7.23(m,1H),7.04(s,1H),6.82(s,1H),5.66(d,J=4.52Hz,1H),2.87(d,J=5.02Hz,4H),2.84(s,3H),2.40(s,3H),1.34-1.46(m,4H)。LCMS保留时间:2.413分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 533(MH+)。
Figure BDA00002387178601001
5-氯-6-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
由4-氯-3-氟吡啶(2.0g,15.2mmol)开始来制备5-氯-6-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为含有区域异构体的混合物的残留物。用硅胶(0-80%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度)分离，得到5-氯-6-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(其为第一洗脱异构体)和5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(其为第二洗脱异构体)，所述第二洗脱异构体以2.2/1的比例占优势。每种异构体为灰白色固体。
5-氯-6-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯:1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.48(d,J=3.76Hz,1H),7.93(d,J=7.28Hz,1H),7.65(dd,J=8.66,5.40Hz,2H),7.15(t,J=8.66Hz,2H),3.26(s,3H),1.11(s,9H)。LCMS保留时间:2.681分钟。LC数据用配备有的Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z422(MH+)。
5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯:1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.26(dd,J=7.28,1.00Hz,1H),7.71(dd,J=8.91,5.40Hz,2H),7.15(t,J=8.66Hz,2H),6.80-6.89(m,1H),3.34(s,3H),1.15(s,9H)。LCMS保留时间:2.625分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z422(MH+)。
Figure BDA00002387178601011
3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
向脱气的含有5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.10g,0.24mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(0.078g,0.30mmol)、碳酸钠(0.075g,0.71mmol)、二噁烷(2.0mL)和水(0.40mL)的溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.008g,0.007mmol)。将混合物在95℃搅拌18小时。将溶液冷却至室温，过滤除去固体并用1N盐酸水溶液(2.0mL)调整至pH低于4。加入水(10mL)且含水部分用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。合并的有机部分用盐水(20mL)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并浓缩，得到3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸，其为残留物，所述残留物不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:2.467分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z522(MH+)。
Figure BDA00002387178601021
3-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
在室温向含有3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.070g,0.13mmol)和二氯甲烷(8.0mL)的溶液中加入TFA(0.84mL,10.9mmol)。将溶液保持15分钟并浓缩至干，得到3-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸，其为灰白色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.825分钟。LC数据用配备有Sunfire C18,5微米,C18,4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 444(MNa+)。
Figure BDA00002387178601031
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.030g,0.18mmol)、二异丙基乙基胺(0.16mL,0.95mmol)、3-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.050g,0.12mmol)和DMF(0.8mL)的溶液中一次性加入HATU(0.09g,0.24mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J=6.78Hz,1H),7.81-7.90(m,2H),7.76(d,J=7.78Hz,1H),7.72(s,1H),7.40(d,J=8.03Hz,1H),7.29-7.37(m,4H),7.13-7.24(m,3H),6.90(s,1H),6.73(t,J=6.65Hz,1H),5.90(d,J=4.52Hz,1H),2.97(d,J=4.77Hz,3H),2.32(s,3H),1.39(宽单峰,4H)。LCMS保留时间:1.975分钟。LC数据用配备有Xbridge,5微米,C18,4.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 537(MH+)。
Figure BDA00002387178601032
6-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
6-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(6-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.024g,0.059mmol)和1-苯基环丙胺盐酸盐(0.015g,0.089mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到6-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.49(d,J=4.02Hz,1H),8.31(d,J=7.53Hz,1H),7.84(dd,J=8.03,1.76Hz,1H),7.66-7.74(m,3H),7.40(d,J=8.03Hz,1H),7.29-7.37(m,4H),7.24-7.27(m,1H),7.20(t,J=6.02Hz,1H),6.89(s,1H),5.56(d,J=4.27Hz,1H),2.86(d,J=4.77Hz,3H),2.32(s,3H),1.40(d,J=9.03Hz,4H)。LCMS保留时间:2.535分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10mM TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 537(MH+)。
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺由3-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.065g,0.154mmol)和1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.032g,0.154mmol)来制备。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),20分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.48(d,J=4.02Hz,1H),8.37(d,J=7.03Hz,1H),7.78-7.90(m,4H),7.60(td,J=7.78,1.76Hz,1H),7.44(d,J=8.03Hz,1H),7.38(d,J=7.78Hz,1H),7.13-7.22(m,2H),7.04-7.13(m,2H),6.76(t,J=6.78Hz,1H),5.87(d,J=4.52Hz,1H),2.97(d,J=5.02Hz,3H),2.35(s,3H),1.69-1.80(m,2H),1.37-1.48(m,2H)。LCMS保留时间:1.642分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10mM TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 538(MH+)。
Figure BDA00002387178601051
4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.059g,0.027mmol)、二异丙基乙基胺(0.04mL,0.22mmol)、3-氟-5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.012g,0.027mmol)和DMF(0.19mL)的溶液中一次性加入HATU(0.021g，0.055mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),20分钟梯度)来纯化，得到4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:15.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.36(d,J=7.03Hz,1H),7.80-7.89(m,2H),7.56(d,J=9.79Hz,1H),7.51(s,1H),7.28-7.36(m,4H),7.13-7.25(m,3H),6.91(s,1H),6.72(t,J=6.78Hz,1H),5.85(d,J=4.27Hz,1H),2.97(d,J=4.77Hz,3H),2.23(s,3H),1.38(s,4H)。LCMS保留时间:2.437分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 555(MH+)。
Figure BDA00002387178601061
4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.070g,0.033mmol)、二异丙基乙基胺(0.04mL,0.22mmol)、3-氟-5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.012g,0.027mmol)和DMF(0.19mL)的溶液中一次性加入HATU(0.021g,0.055mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),20分钟梯度)来纯化，得到4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.44-8.53(m,1H),8.38(d,J=7.03Hz,1H),7.80-7.90(m,2H),7.55-7.67(m,3H),7.36(d,J=8.03Hz,1H),7.31(s,1H),7.14-7.22(m,2H),7.10(ddd,J=7.47,4.96,1.13Hz,1H),6.74(t,J=6.78Hz,1H),5.87(d,J=4.77Hz,1H),2.97(d,J=4.77Hz,3H),2.25(s,3H),1.66-1.73(m,2H),1.38-1.46(m,2H)。LCMS保留时间:1.828分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 556(MH+)。
Figure BDA00002387178601071
4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2,2,2-三氟乙酸1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙铵(0.021g,0.083mmol)、二异丙基乙基胺(0.08mL,0.51mmol)、3-氟-5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.028g,0.064mmol)和DMF(0.43mL)的溶液中一次性加入HATU(0.048g,0.13mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-5-(3-氟-2-甲基-5-(1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:8.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J=7.03Hz,1H),7.77-7.88(m,2H),7.61(dd,J=9.54,1.51Hz,1H),7.54(s,1H),7.27-7.33(m,1H),7.13-7.22(m,2H),6.71(t,J=6.65Hz,1H),5.92(d,J=4.52Hz,1H),2.97(d,J=5.02Hz,3H),2.32(s,3H),2.22(s,3H),1.77-1.87(m,2H),1.55-1.65(m,2H)。LCMS保留时间:2.137分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 561(MH+)。
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2,2,2-三氟乙酸1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙铵(0.024g,0.095mmol)、二异丙基乙基胺(0.10mL,0.56mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.033g,0.073mmol)和DMF(0.49mL)的溶液中一次性加入HATU(0.056g,0.15mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.57(s,1H),8.34(d,J=7.03Hz,1H),8.13(s,1H),7.79-7.92(m,2H),7.10-7.21(m,2H),6.97(s,1H),6.73(t,J=6.78Hz,1H),5.89(d,J=4.52Hz,1H),4.07(s,3H),2.97(d,J=5.02Hz,3H),2.34(s,6H),1.77-1.88(m,2H),1.50-1.63(m,2H)。LCMS保留时间:2.533分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 573(MH+)。
5-(5-(1-环己基环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-环己基环丙胺盐酸盐(0.020g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为20分钟)来纯化，得到5-(5-(1-环己基环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:13.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J=7.03Hz,1H),8.02-8.14(m,2H),7.84(dd,J=8.53,5.27Hz,2H),7.17(t,J=8.66Hz,2H),6.94(s,1H),6.76(t,J=6.78Hz,1H),5.97(宽单峰,1H),4.04(s,3H),2.98(d,J=4.77Hz,3H),2.33(s,3H),2.18(宽单峰,1H),1.87(d,J=11.80Hz,2H),1.76(d,J=12.55Hz,2H),1.20-1.31(m,2H),1.18(宽单峰,1H),1.10(d,J=2.76Hz,2H),1.08(宽单峰,1H),0.77-0.90(m,4H)。LCMS保留时间:2.726分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 573(MH+)。
Figure BDA00002387178601101
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-甲基环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-甲基环丙胺盐酸盐(0.012g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为20分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-甲基环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.7分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J=7.03Hz,1H),8.14(s,1H),8.10(s,1H),7.79-7.89(m,2H),7.12-7.21(m,2H),6.92(s,1H),6.75(t,J=6.78Hz,1H),5.97(d,J=3.76Hz,1H),4.03(s,3H),2.98(d,J=5.02Hz,3H),2.32(s,3H),1.50(s,3H),0.82-0.89(m,2H),0.68-0.78(m,2H)。LCMS保留时间:2.232分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 505(MH+)。
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(4-氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.022g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为20分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:12.1分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.46(s,1H),8.34(d,J=7.03Hz,1H),8.10(s,1H),7.79-7.90(m,2H),7.28-7.37(m,2H),7.11-7.23(m,2H),6.91-7.03(m,3H),6.74(t,J=6.78Hz,1H),5.93(d,J=4.52Hz,1H),4.06(s,3H),2.97(d,J=5.02Hz,3H),2.33(s,3H),1.35(dd,J=6.15,1.88Hz,4H)。LCMS保留时间:2.438分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 585(MH+)。
Figure BDA00002387178601121
5-(5-(联(环丙)基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有联(环丙烷)-1-胺盐酸盐(0.015g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为20分钟)来纯化，得到5-(5-(联(环丙)基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.7分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm8.35(d,J=7.03Hz,1H),8.09-8.20(m,2H),7.79-7.89(m,2H),7.12-7.23(m,2H),6.93(s,1H),6.76(t,J=6.78Hz,1H),5.96(宽单峰,1H),4.03(s,3H),2.98(d,J=5.02Hz,3H),2.33(s,3H),1.53(tt,J=8.28,5.02Hz,1H),0.78-0.84(m,2H),0.67-0.75(m,2H),0.41-0.50(m,2H),0.18-0.28(m,2H)。LCMS保留时间:2.405分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 531(MH+)。
Figure BDA00002387178601131
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-异丙基环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-异丙基环丙胺盐酸盐(0.016g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为15分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-异丙基环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:12.1分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J=7.03Hz,1H),8.06(s,2H),7.81-7.93(m,2H),7.13-7.23(m,2H),6.94(s,1H),6.76(t,J=6.78Hz,1H),5.95(d,J=4.52Hz,1H),4.04(s,3H),2.98(d,J=5.02Hz,3H),2.33(s,3H),1.61-1.72(m,1H),1.02(d,J=6.78Hz,6H),0.84-0.96(m,2H),0.73-0.84(m,2H)。LCMS保留时间:2.502分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 533(MH+)。
Figure BDA00002387178601141
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(3-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(3-氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.022g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为15分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(3-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:12.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.46(s,1H),8.34(d,J=7.03Hz,1H),8.11(s,1H),7.80-7.89(m,2H),7.22-7.27(m,1H),7.13-7.21(m,2H),6.96-7.06(m,3H),6.84-6.92(m,1H),6.75(t,J=6.78Hz,1H),5.92(d,J=4.02Hz,1H),4.08(s,3H),2.97(d,J=5.02Hz,3H),2.34(s,3H),1.36-1.45(m,4H)。LCMS保留时间:2.480分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 585(MH+)。
Figure BDA00002387178601151
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(2-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(2-氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.022g,0.12mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为15分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(2-氟苯基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:12.3分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.63(s,1H),8.32(d,J=7.03Hz,1H),8.05(s,1H),7.79-7.89(m,2H),7.67(td,J=7.65,1.76Hz,1H),7.13-7.25(m,3H),7.10(td,J=7.53,1.25Hz,1H),7.02(ddd,J=10.67,8.16,1.00Hz,1H),6.91(s,1H),6.70(t,J=6.78Hz,1H),5.87(宽单峰,1H),4.05(s,3H),2.96(d,J=5.02Hz,3H),2.30(s,3H),1.29(s,4H)。LCMS保留时间:2.553分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z585(MH+)。
Figure BDA00002387178601161
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(嘧啶-2-基)环丙胺(0.021g,0.089mmol)、二异丙基乙基胺(0.12mL,0.71mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.040g,0.089mmol)和DMF(0.60mL)的溶液中一次性加入HATU(0.067g,0.18mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度,分析时间为15分钟)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.3分钟。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.70(d,J=4.88Hz,2H),8.54(d,J=7.02Hz,1H),7.96(s,1H),7.86-7.94(m,2H),7.21-7.31(m,4H),6.92(t,J=6.87Hz,1H),4.85-4.95(m,14H),4.10(s,3H),3.28-3.38(m,21H),2.91(s,3H),2.38(s,3H),1.78-1.88(m,2H),1.50-1.59(m,2H)。LCMS保留时间:2.138分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z569(MH+)。
Figure BDA00002387178601171
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(嘧啶-2-基)环丙胺(0.030g,0.18mmol)、二异丙基乙基胺(0.16mL,0.95mmol)、3-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.050g,0.12mmol)和DMF(0.8mL)的溶液中一次性加入HATU(0.09g,0.24mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,10-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.1分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.77(d,J=5.02Hz,2H),8.40(d,J=7.03Hz,1H),7.76-7.87(m,3H),7.73(s,1H),7.43(d,J=7.78Hz,1H),7.29-7.36(m,2H),7.12-7.23(m,2H),6.79(t,J=6.78Hz,1H),5.97(宽单峰,1H),2.99(d,J=5.02Hz,3H),2.34(s,3H),1.92-2.00(m,2H),1.60-1.70(m,2H)。LCMS保留时间:2.000分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z539(MH+)。
Figure BDA00002387178601181
5,7-二氯-2-(4-氟苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
向冷却的(0℃,冰浴)含有2,4-二氯吡啶(4.0g,27.0mmol)和二氯甲烷(60mL)的溶液中快速滴加O-(均三甲苯基磺酰基)羟胺(10.2g,27.0mmol)/二氯甲烷(75mL)。将溶液在0℃保持15分钟，从冷却浴中取出并在环境温度保持20小时。将溶液浓缩，得到2,4,6-三甲基苯磺酸1-氨基-2,4-二氯吡啶鎓，其为浅黄色泡沫(165,MH+)。将由此得到的产物与3-(4-氟苯基)丙炔酰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(6.6g,24.0mmol)和THF(100mL)合并。将所得溶液冷却至-78℃(干冰-丙酮浴)且在快速搅拌下历时10分钟滴加DBU(7.2mL,48.0mmol)。在搅拌下将混合物保持在冷却浴中并使反应在环境温度进行15小时。然后过滤混合物并浓缩。用硅胶(0-80%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度)进行纯化，得到灰白色残留物。由此得到的残留物使用制备性HPLC(Phenomonex-Luna,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),15分钟梯度)来进一步纯化，得到5,7-二氯-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:14.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.81(d,J=2.26Hz,1H),7.71(dd,J=8.91,5.40Hz,2H),7.16(t,J=8.66Hz,2H),7.03(d,J=2.26Hz,1H),3.26(s,3H),1.12(s,9H)。LCMS保留时间:2.810分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 460(MNa+)。
Figure BDA00002387178601191
5-氯-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
在-35℃向含有四丁基氰化铵和THF的溶液(0.912mL,1.0M)中加入含有六氟苯和THF的溶液(0.760mL,0.2M)(注意放热)。将溶液从冷却浴中取出并在环境温度保持150分钟。将由此得到的溶液冷却至0℃(冰浴)并在搅拌下滴加到预冷却的(-50℃,干冰-丙酮)含有5,7-二氯-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和THF的溶液(0.608mL,0.38M)中。将由此得到的溶液从冷却浴中取出并使反应进行18小时。将溶液倒入水(25mL)中。然后含水部分用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机部分，然后用水(3×20mL)洗涤，然后用盐水(25mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并浓缩。由此得到的残留物用硅胶(0-20%乙酸乙酯/己烷,25分钟梯度)进行纯化，得到5-氯-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.65-7.76(m,3H),7.11-7.20(m,2H),6.64(dd,J=4.77,2.01Hz,1H),3.27(s,3H),1.12(s,9H)。LCMS保留时间:2.743分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z422(MH+)。
Figure BDA00002387178601192
3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
向脱气的含有5-氯-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.060g,0.14mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(0.047g,0.18mmol)、碳酸钠(0.043g,0.43mmol)、二噁烷(1.2mL)和水(0.24mL)的混合物中加入四(三苯基膦)钯(0)(0.005g,0.004mmol)。将混合物在95℃搅拌18小时。将混合物冷却至室温，过滤除去固体并用1N盐酸水溶液(2.0mL)调整至pH低于4。加入水(10mL)且含水部分用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。合并的有机部分用盐水(20mL)洗涤并用硫酸镁干燥。将混合物过滤并浓缩，得到3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸，其为残留物，所述残留物不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:2.725分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 522(MH+)。
Figure BDA00002387178601201
7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.010g,0.061mmol)、二异丙基乙基胺(0.086mL,0.49mmol)、3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.032g,0.061mmol)和DMF(0.41mL)的溶液中一次性加入HATU(0.047g,0.12mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物用硅胶(30-100%乙酸乙酯/己烷,45分钟梯度)进行纯化，得到7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为残留物。LCMS保留时间:2.938分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 637(MH+)。
7-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
在室温向含有7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.035g,0.053mmol)和二氯甲烷(4.0mL)的溶液中加入TFA(0.33mL,4.3mmol)。将溶液在室温保持15分钟并浓缩至干。由此得到的残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到7-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.15(d,J=1.51Hz,1H),7.70-7.83(m,4H),7.39(d,J=8.03Hz,1H),7.23-7.36(m,7H),6.91(s,1H),6.66(dd,J=5.52,1.51Hz,1H),5.57(d,J=4.27Hz,1H),2.87(d,J=5.02Hz,3H),2.40(s,3H),1.35-1.47(m,4H)。LCMS保留时间:2.510分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z537(MH+)。
Figure BDA00002387178601221
7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
向含有1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.011g,0.054mmol)、二异丙基乙基胺(0.075mL,0.43mmol)、3-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-7-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(0.028g,0.054mmol)和DMF(0.36mL)的溶液中一次性加入HATU(0.041g,0.11mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物用硅胶(30-100%乙酸乙酯/己烷,45分钟梯度)进行纯化，得到7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为残留物。LCMS保留时间:2.428分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z638(MH+)。
Figure BDA00002387178601222
7-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
在室温向含有7-氟-2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.022g,0.035mmol)和二氯甲烷(3.0mL)的溶液中加入TFA(0.22mL，2.8mmol)。将溶液在室温保持15分钟并浓缩至干。由此得到的残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到7-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.0分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.44-8.54(m,1H),8.18(d,J=1.51Hz,1H),7.79-7.85(m,2H),7.72-7.78(m,2H),7.61(td,J=7.78,1.76Hz,1H),7.41(dd,J=8.03,3.26Hz,2H),7.22-7.32(m,2H),7.20(s,1H),7.08(ddd,J=7.40,4.89,1.25Hz,1H),6.69(dd,J=5.65,1.63Hz,1H),5.58(d,J=4.52Hz,1H),2.87(d,J=5.02Hz,3H),2.42(s,3H),1.67-1.78(m,2H),1.39-1.48(m,2H)。LCMS保留时间:1.873分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3OH/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3OH/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 538(MH+)。
Figure BDA00002387178601231
5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶
将5-溴-3-碘吡啶-2-醇(6.7g,22mmol)(Heterocycles.57,1,pp 55)、1-乙炔基-4-氟苯(4.03g,33.5mmol)、碘化亚铜(I)(0.255g,1.34mmol)和反式-二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.784g,1.12mmol)合并且抽空/用氮气回填(3×)，然后用三乙胺(223mL)稀释并加热至90℃且保持2小时。蒸发溶剂且将反应混合物溶解在EtOAc中。有机相用水(50mL)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用Et2O研磨，得到所需产物5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(4.2g,14.4mmol,64%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.35-8.42(2H,m),8.03(2H,dd,J=8.78,5.27Hz),7.46(1H,s),7.39(2H,t,J=8.91Hz)。LC-MS保留时间:2.36分钟;m/z(MH+):292,294。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178601241
3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸
将3-羧基苯基硼酸(700mg,4.22mmol)、5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(750mg,2.57mmol)、Pd(Ph3P)4(30mg,0.026mmol)和Cs2CO3(1.25g,3.84mmol)在二噁烷(20mL)和水(4mL)中合并。将混合物抽空/用氮气回填(3×)。将反应混合物在N2(气体)下加热至95℃过夜。将混合物在EtOAc和1N HCl之间分配。有机相用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到棕色固体，其用Et2O研磨，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(255mg,30%收率)。LC-MS保留时间:1.83分钟;m/z(MH+):334。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%MeOH/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178601242
3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸
将NBS(125mg,0.702mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(215mg,0.645mmol)于THF(5mL)/DMF(1mL)中的混悬液中。固体溶解且将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后用10%Na2S2O3淬灭并用1N HCl酸化。蒸发溶剂且物质用水稀释，过滤并干燥，得到原料和产物的混合物。使物质再次经历反应条件(80mg NBS于3mL THF/0.5mL DMF中)。3小时后，通过加入10%Na2S2O3将反应淬灭且溶液用0.1N HCl酸化。除去挥发物并过滤收集所得灰白色析出物，用水和Et2O淋洗并风干，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(140mg,53%收率)，其为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.73(1H,d,J=2.26Hz),8.27-8.33(2H,m),8.19-8.26(2H,m),8.05-8.12(1H,m),8.03(1H,d,J=7.78Hz),7.68(1H,t,J=7.78Hz),7.45-7.55(2H,m)。LC-MS保留时间:1.20分钟;m/z(MH+):412,414。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178601251
5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备6-溴-2-碘吡啶-3-醇
在45℃将N-碘琥珀酰亚胺(6.47g,28.7mmol)加到搅拌的6-溴吡啶-3-醇(5g,28.7mmol)于MeOH(144mL)中的溶液中。将其搅拌3小时。浓缩混合物并用Et2O研磨。弃去析出物且浓缩滤液并用二氯甲烷研磨，LCMS和NMR表明得到所需产物6-溴-2-碘吡啶-3-醇(3150mg,10.50mmol,37%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.12(1H,s),7.42(1H,d,J=8.28Hz),7.10(1H,d,J=8.28Hz)。LC-MS保留时间:1.27分钟;m/z(MH+):300,302。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备乙酸6-溴-2-碘吡啶-3-基酯
在130℃将6-溴-2-碘吡啶-3-醇(150mg,0.500mmol)加到乙酸酐(2.4mL,25mmol)中。将其搅拌30分钟，然后浓缩并用甲苯吸收，NMR表明得到所需产物乙酸6-溴-2-碘吡啶-3-基酯(171mg,0.500mmol,100%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.74(1H,d,J=8.28Hz),7.62(1H,d,J=8.28Hz),2.36(3H,s)。LC-MS保留时间:1.66分钟;m/z(MH+):342,344。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备乙酸6-溴-2-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-基酯
将乙酸6-溴-2-碘吡啶-3-基酯(3.50g,10.24mmol)、1-乙炔基-4-氟苯(1.11g,9.21mmol)、碘化亚铜(I)(117mg,0.614mmol)和反式-二(三苯基膦)二氯化钯(II)(359mg,0.512mmol)合并且抽空/用氮气回填(3×)，然后用三乙胺(100ml)稀释并加热至85℃且保持2小时。蒸发溶剂且将反应混合物溶解在EtOAc中。有机相用水(50mL)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，NMR表明得到所需产物乙酸6-溴-2-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-基酯(2.26g,6.76mmol,66.1%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.77(2H,s),7.70(2H,dd,J=8.78,5.52Hz),7.34(2H,t,J=8.91Hz),2.41(3H,s)。LC-MS保留时间:2.18分钟;m/z:未观察到母体离子,-Ac:292,294。LC数据用配备有Waters SunFire5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-羧酸甲酯
在室温在帕尔瓶中将乙酸钠(15mg,0.18mmol)、K2CO3(25mg,0.18mmol)、氯化铜(II)二水合物(46mg,0.27mmol)和氯化钯(II)(2.0mg,0.012mmol)加到搅拌的乙酸6-溴-2-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-基酯(30mg,0.090mmol)于MeOH(2mL)中的溶液中。向容器中充入压力为300PSI的CO(气体)并在室温搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-羧酸甲酯(25mg,0.071mmol,80%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.16(1H,d,J=8.78Hz),8.04(2H,dd,J=8.91,5.40Hz),7.67(1H,d,J=8.78Hz),7.44(2H,t,J=8.78Hz),3.89(3H,s)。LC-MS保留时间:2.05分钟;m/z(MH+):350。LC数据用配备有Waters SunFire5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺
在60℃将NaOH(5mL,5.00mmol,1M水溶液)加到搅拌的5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-羧酸甲酯(350mg,1.00mmol)于THF(5mL)和MeOH(5mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-羧酸。粗残留物用DMF(10mL)稀释并先后用HATU(456mg,1.20mmol)、甲胺(2.5mL,5.00mmol,2.0M于THF中)和DIEA(524μL,3.00mmol)处理。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物(250mg,68%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.57(1H,宽单峰),8.10-8.18(3H,m),7.67(1H,d,J=8.53Hz),7.42(2H,t,J=8.78Hz),2.90(3H,d,J=4.52Hz)。LC-MS保留时间:2.03分钟;m/z(MH+):349,351。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基酯
步骤1：制备2-(苄基氧基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶
在0℃将NaH(1.2g,29.8mmol)加到搅拌的6-(苄基氧基)吡啶-3-醇(5.0g,24.85mmol)于DMF(100mL)中的溶液中。然后将其温热至室温并搅拌25分钟，然后用MOM-Cl(2.55mL,28.6mmol)处理且将反应混合物搅拌2小时。混合物用H2O淬灭，然后浓缩约80%，然后用EtOAc稀释且用H2O和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(苄基氧基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(5.41g,22.1mmol,89%收率)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.97(1H,d,J=3.01Hz),7.42-7.49(2H,m),7.29-7.41(4H,m),6.76(1H,d,J=9.03Hz),5.34(2H,s),5.12(2H,s),3.50(3H,s)。LC-MS保留时间:1.88分钟;m/z(MH+):246。LC数据用配备有Waters SunFire5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备2-(苄基氧基)-4-碘-5-(甲氧基甲氧基)吡啶
在-78℃将tBuLi(叔丁基锂)(27mL,46.2mmol)滴加到搅拌的2-(苄基氧基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(5.4g,22.06mmol)于THF(110mL)中的溶液中。将浅黄色溶液搅拌30分钟，然后用碘(8.4g,33.1mmol)于THF(55mL)中的溶液逐滴处理(每滴的紫色消散直到加入1.05当量后，然后其逐渐变为紫色)。将其搅拌1小时，然后用H2O淬灭并用EtOAc稀释，用饱和硫代硫酸钠溶液和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(苄基氧基)-4-碘-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(3.90g,10.5mmol,48%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.87(1H,s),7.28-7.44(6H,m),5.28(2H,s),5.21(2H,s),3.43(3H,s)。LC-MS保留时间:2.36分钟;m/z(MH+):372。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备2-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶
将2-(苄基氧基)-4-碘-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(3.0g,8.08mmol)、碘化亚铜(I)(92mg,0.485mmol)、PdCl2(PPh3)2(二(三苯基膦)二氯化钯)(284mg,0.404mmol)和1-乙炔基-4-氟苯(1.07g,8.89mmol)在二噁烷(40mL)和TEA(40mL)中合并，脱气并在80℃搅拌1.5小时。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaCl和H2O洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物2-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(2.52g,6.93mmol,86%收率)。LC-MS保留时间:2.71分钟;m/z(MH+):364。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备6-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-醇
在室温将三氟乙酸(0.95mL,12.4mmol)加到搅拌的2-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)-5-(甲氧基甲氧基)吡啶(450mg,1.24mmol)于二氯乙烷(5mL)中的溶液中。将其搅拌5小时，然后浓缩至干，LCMS表明得到6-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-醇(395mg,1.24mmol,100%收率)。LC-MS保留时间:2.49分钟;m/z(MH+):320。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸甲酯
在室温在帕尔瓶中将乙酸钠(1.14g,13.9mmol)、K2CO3(1.92g,13.9mmol)、氯化铜(II)二水合物(3.56g,20.9mmol)和氯化钯(II)(0.205g,1.15mmol)加到搅拌的6-(苄基氧基)-4-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-3-醇(2.22g,6.95mmol)于MeOH(150mL)中的溶液中。向容器中充入压力为300PSI的CO(气体)并在室温搅拌过夜。浓缩混合物，然后用EtOAc稀释并用H2O和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸甲酯(2.62g,6.95mmol,100%收率)。LC-MS保留时间:2.66分钟;m/z(MH+):378。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤6：制备5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸
在60℃将NaOH(27.8mL,27.8mmol,1M水溶液)加到搅拌的5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸甲酯(2.62g,6.94mmol)于THF(174mL)和MeOH(174mL)中的溶液中且保持2小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸(2.52g,6.94mmol,100%收率)。LC-MS保留时间:2.19分钟;m/z(MH+):364。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤7：制备5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺
在室温将甲胺(3.1mL,6.2mmol,2M于THF中)加到搅拌的DIEA(646μL,3.70mmol)、HATU(563mg,1.48mmol)和5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-羧酸(448mg,1.23mmol)于DMF(12mL)中的溶液中。将混合物浓缩，然后用EtOAc稀释并用饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(180mg,39%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.62(1H,s),8.37-8.45(1H,m),7.98-8.08(2H,m),7.29-7.50(7H,m),7.06(1H,s),5.42(2H,s),2.83(3H,d,J=4.52Hz)。LC-MS保留时间:2.00分钟;m/z(MH+):377。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤8：制备2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺
在室温将Pd/C(178mg,0.084mmol)(10%;50%湿)加到搅拌的5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(630mg,1.674mmol)于THF(83ml)中的溶液中。将其置于氢气气氛下并搅拌20分钟，然后形成析出物。反应混合物用氮气吹洗并用MeOH稀释直到所有固体已溶解。混合物用硅藻土垫过滤(用MeOH洗涤)且浓缩滤液，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(460mg,1.53mmol,91%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.30-8.40(2H,m),7.98(2H,dd,J=8.78,5.77Hz),7.35-7.45(3H,m),6.61(1H,s),2.81(3H,d,J=4.52Hz)。LC-MS保留时间:0.847分钟;m/z(MH+):287。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤9：三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基酯
在0℃将三氟甲磺酸酐(Tf2O,319μL,1.89mmol)加到搅拌的2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(270mg,0.943mmol)于吡啶(13mL)中的溶液中且将混合物温热至室温。将其搅拌1小时，然后浓缩并用EtOAc稀释且用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基酯(188mg,0.449mmol,34.8%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.91(1H,s),8.53-8.61(1H,m),8.01-8.11(2H,m),7.87(1H,s),7.46(2H,t,J=8.91Hz),2.85(3H,d,J=4.52Hz)。LC-MS保留时间:2.06分钟;m/z(MH+):419。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
Figure BDA00002387178601331
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
在室温将DIEA(210μL,1.20mmol)加到搅拌的HATU(228mg,0.600mmol)、2-苯基丙-2-胺(69.1μL,0.480mmol)和3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(165mg,0.400mmol)于DMF(4mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用Et2O研磨，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(180mg,0.340mmol,85%收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.78-8.86(1H,m),8.60(1H,s),8.34-8.38(1H,m),8.27(1H,s),8.19-8.26(2H,m),7.99(1H,d,J=7.93Hz),7.89(1H,d,J=7.93Hz),7.61(1H,t,J=7.63Hz),7.46-7.55(2H,m),7.42(2H,d,J=7.32Hz),7.30(2H,t,J=7.78Hz),7.18(1H,t,J=7.17Hz),1.72(6H,s)。LC-MS保留时间:1.97分钟;m/z(MH+):529,531。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
在室温将Pd(Ph3P)4(4.4mg,3.8μmol)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(20mg,0.038mmol)、三甲基环三硼氧烷(trimethylboroxine)(11μL,0.076mmol)和Na2CO3(12.0mg,0.11mmol)于DMF(1.4mL)和水(.14mL)中的溶液中。使其经历微波辐射(在180℃保持30分钟)。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(15mg,0.032mmol,85%收率)。LC-MS保留时间:1.87分钟;m/z(MH+):465。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺
将AIBN(1.0mg,6.1μmol)加到搅拌的NBS(4.6mg,0.026mmol)和3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(11mg,0.024mmol)于CCl4(1mL)中的溶液中。将混合物加热至76℃并搅拌2小时。将反应混合物浓缩并用DMSO(1mL)稀释且用NMO(3.4mg,0.028mmol)处理并经历微波辐射(在150℃保持5分钟)。反应混合物通过制备性反相HPLC(C 18柱)(使用经适当缓冲的H2O/CH3CN梯度)来纯化并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(7.5mg,0.016mmol,66%收率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.31(1H,s),8.84(1H,s),8.79(1H,s),8.65(1H,s),8.19-8.26(3H,m),7.89-7.97(2H,m),7.59-7.67(1H,m),7.54(2H,t,J=8.55Hz),7.42(2H,d,J=7.93Hz),7.30(2H,t,J=7.63Hz),7.13-7.23(1H,m),1.71(6H,s)。LC-MS保留时间:1.75分钟;m/z(MH+):479。LC数据用配备有Waters XBridge5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备2-(4-氟苯基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
在室温将Oxone(过硫酸氢钾制剂)(28mg,0.046mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(2-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(20mg,0.042mmol)于DMF(.5mL)中的溶液中。将其搅拌3天。再加入Oxone(28mg,0.046mmol)并将反应混合物搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(7mg,0.014mmol,34%收率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 7.42(1H,d,J=2.14Hz),7.31-7.39(2H,m),6.93-7.02(2H,m),6.87(1H,s),6.59(2H,t,J=8.70Hz),6.34(1H,t,J=7.63Hz),6.20(2H,d,J=7.63Hz),5.97-6.07(4H,m),5.92(1H,t,J=7.32Hz),0.52(6H,s)。LC-MS保留时间:1.15分钟;m/z(MH+):495。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC 184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备标题化合物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在室温将甲胺(253μL,0.506mmol,2M于THF中)加到搅拌的2-(4-氟苯基)-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(50mg,0.10mmol)、DIEA(53μL,0.30mmol)、DMAP(1.2mg,10μmol)和HATU(58mg,0.15mmol)于DMF(1mL)中的溶液中。将其搅拌1小时，然后通过制备性反相HPLC(C 18柱)(使用经适当缓冲的H2O/CH3CN梯度)来纯化并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(7mg,0.013mmol,13%收率)。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 8.65(1H,d,J=2.14Hz),8.41(1H,d,J=2.14Hz),8.12-8.17(1H,m),8.00-8.06(2H,m),7.84-7.92(2H,m),7.62(1H,t,J=7.63Hz),7.43-7.50(2H,m),7.26-7.35(4H,m),7.19(1H,t,J=7.32Hz),2.98(3H,s),1.78(6H,s)。LC-MS保留时间:1.77分钟;m/z(MH+):508。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%MeOH/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/0.1%TFA,溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/0.1%TFA,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Waters Sunfire C-18,4.6×150mm,3.5mm，Rt=12.82分钟，纯度=95%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=11.20分钟，纯度=94%。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=14.10分钟，纯度=95%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=13.85分钟，纯度=95%。
Figure BDA00002387178601361
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺
在室温将DIEA(286μL,1.64mmol)加到搅拌的HATU(311mg,0.819mmol)、1-苯基环丙胺盐酸盐(111mg,0.655mmol)和3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(225mg,0.546mmol)于DMF(6mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(180mg,0.341mmol,63%收率)。LC-MS保留时间:1.89分钟;m/z(MH+):529。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺
在室温将Pd(Ph3P)4(16mg,0.014mmol)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(75mg,0.14mmol)、三甲基环三硼氧烷(40μL,0.28mmol)和Na2CO3(45mg,0.43mmol)于DMF(1.3mL)和水(.13mL)中的溶液中。使其经历微波辐射(在180℃保持30分钟)。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(61mg,0.132mmol,93%收率)。LC-MS保留时间:1.81分钟;m/z(MH+):463。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺
将AIBN(6.5mg,0.040mmol)加到搅拌的NBS(26mg,0.15mmol)和3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(61mg,0.13mmol)于CCl4(20ml)中的溶液中。将混合物加热至76℃并搅拌2小时。将反应混合物浓缩并用DMSO(1mL)稀释且用NMO(18.5mg,0.158mmol)处理并经历微波辐射(在150℃保持10分钟)。混合物用EtOAc稀释并先后用10%NaHSO4(2×)、H2O和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(34mg,0.071mmol,54%收率)。LC-MS保留时间:1.64分钟;m/z(MH+):477。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备标题化合物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在95℃将AIBN(3.6mg,0.022mmol)和NBS(17mg,0.095mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-N-(1-苯基环丙基)苯甲酰胺(35mg,0.073mmol)于CCl4(10mL)中的溶液中。将其搅拌30分钟。停止加热反应混合物并搅拌2分钟且用甲胺(0.184mL,0.367mmol,2M于THF中)处理。将反应混合物搅拌1小时并浓缩。残留物用EtOAc稀释并用10%硫酸氢钠和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-苯基环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(4mg,7.91μmol,11%收率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.36(1H,s),8.77(1H,d,J=2.14Hz),8.54-8.62(1H,m),8.41(1H,d,J=2.14Hz),8.31(1H,s),8.04-8.09(2H,m),7.99(1H,d),7.95(1H,d,J=7.63Hz),7.64(1H,t,J=7.63Hz),7.43(2H,t,J=8.85Hz),7.26-7.31(2H,m),7.21-7.26(2H,m),7.16(1H,t),2.87(3H,d,J=4.88Hz),1.31(4H,d,J=7.93Hz)。LC-MS保留时间:1.98分钟;m/z(MH+):506。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=14.12分钟，纯度=95%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=14.45分钟，纯度=96%。
Figure BDA00002387178601391
5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯
在室温将(重氮甲基)三甲基甲硅烷(467μL,0.934mmol)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(350mg,0.849mmol)于MeOH(5.7mL)和乙醚(2.8mL)中的溶液中。将其搅拌过夜。将混合物浓缩并再次经历反应条件(使用DCM作为溶剂)。再次重复该操作(使用THF作为溶剂)。将反应混合物浓缩，LCMS表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(350mg,0.821mmol,97%收率)。LC-MS保留时间:2.01分钟;m/z(MH+):426,428。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯
将2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(0.236mL,1.69mmol)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(360mg,0.845mmol)、碳酸钠(269mg,2.53mmol)和Pd(Ph3P)4(98mg,0.084mmol)于DMF(10mL)和水(1.0mL)中的溶液中。使其经历微波辐射(在180℃保持30分钟)。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗残留物用MeOH稀释并用(重氮甲基)三甲基甲硅烷(467μL,0.934mmol)处理以使所形成的酸再次酯化。将其搅拌1小时，然后浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(163mg,0.451mmol,53%收率)。LC-MS保留时间:1.79分钟;m/z(MH+):362。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯
将AIBN(22.2mg,0.135mmol)加到搅拌的NBS(88mg,0.49mmol)和3-(2-(4-氟苯基)-3-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(163mg,0.451mmol)于CCl4(40mL)中的溶液中并加热至76℃。将混合物搅拌2小时。将反应混合物浓缩并用DMSO(1mL)稀释且用NMO(63mg,0.54mmol)处理并经历微波辐射(在150℃保持10分钟)。混合物用EtOAc稀释并先后用10%NaHSO4(2×)、H2O和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(34mg,0.091mmol,20%收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.31(1H,s),8.79(1H,d,J=2.44Hz),8.74(1H,d,J=2.44Hz),8.28(1H,s),8.16-8.25(2H,m),8.00-8.13(2H,m),7.72(1H,t,J=7.78Hz),7.49-7.57(2H,m),3.92(3H,s)。LC-MS保留时间:1.72分钟;m/z(MH+):376。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯
在95℃将AIBN(4.6mg,0.028mmol)和NBS(21.6mg,0.121mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-甲酰基呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(35mg,0.093mmol)于CCl4(5mL)中的溶液中。将其搅拌30分钟，然后冷却，然后用甲胺(0.466mL,0.932mmol,2M于THF中)处理且将反应混合物搅拌10分钟，然后用MeOH稀释。滤出所形成的析出物且浓缩滤液并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝320nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(24mg,0.059mmol,64%收率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm8.60(1H,d,J=2.14Hz),8.44(1H,d,J=2.44Hz),8.32(1H,s),8.10(1H,d,J=7.93Hz),7.95-8.00(2H,m),7.84(1H,d,J=7.63Hz),7.59(1H,t,J=7.78Hz),7.22-7.26(2H,m),5.91(1H,宽单峰),3.98(3H,s),3.03(3H,d,J=4.88Hz)。LC-MS保留时间:1.46分钟;m/z(MH+):405。LC数据用配备有Waters XBridge5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸
在室温将NaOH(0.297mL,0.297mmol,1M水溶液)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(24mg,0.059mmol)于MeOH(2mL)中的溶液中。将其搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(22mg,0.056mmol,95%收率)。LC-MS保留时间:0.90分钟;m/z(MH+):391。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤6：制备标题化合物5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在室温将DIEA(31μL,0.18mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(23mg,0.059mmol)、2-甲基丙-2-胺(20μL,0.059mmol)和HATU(27mg,0.071mmol)于DMF(0.6mL)中的溶液中。将其搅拌2小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物5-(3-(叔丁基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(8mg,0.017mmol,29%收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.74(1H,d,J=2.14Hz),8.55-8.61(1H,m),8.39(1H,d,J=2.44Hz),8.16(1H,s),8.07(2H,dd,J=8.85,5.19Hz),7.94(1H,s),7.92(1H,d,J=7.63Hz),7.86(1H,d,J=7.93Hz),7.59(1H,t,J=7.63Hz),7.43(2H,t,J=8.85Hz),2.87(3H,d,J=4.58Hz),1.42(9H,s)。LC-MS保留时间:1.68分钟;m/z(MH+):446。LC数据用配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%MeOH/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=13.66分钟，纯度=98%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=13.69分钟，纯度=98%。
Figure BDA00002387178601431
5-(2-氯-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备4-氯-3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸
在室温将碳酸铯(167mg,0.514mmol)加到Pd(Ph3P)4(40mg,0.034mmol)、5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(100mg,0.342mmol)和3-二羟硼基-4-氯苯甲酸(103mg,0.514mmol)于DMF(3mL)和水(0.3mL)中的溶液中。将混合物脱气3次且将反应混合物在微波中加热至180℃且保持10分钟。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物用MeOH研磨，LCMS和NMR表明得到所需产物4-氯-3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(59mg,0.160mmol,47%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.22(1H,宽单峰),8.36(1H,d,J=2.26Hz),8.25(1H,d,J=2.26Hz),8.03-8.11(2H,m),7.97-8.02(2H,m),7.77(1H,d,J=7.78Hz),7.55(1H,s),7.41(2H,t,J=8.78Hz)。LC-MS保留时间:1.15分钟;m/z(MH+):368。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-氯苯甲酸
在室温将NBS(29.0mg,0.163mmol)加到搅拌的4-氯-3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(50mg,0.136mmol)于THF(4.5mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。再加入NBS(29mg,0.16mmol)并将其搅拌1小时，然后再加入NBS(29mg,0.16mmol)且将反应混合物搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用10%NaHSO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用DCM研磨，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-氯苯甲酸(57mg,0.128mmol,94%收率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.48(1H,d,J=2.14Hz),8.19-8.24(2H,m),8.17(1H,d,J=2.14Hz),7.99-8.05(2H,m),7.79(1H,d,J=8.24Hz),7.46-7.52(2H,m)。LC-MS保留时间:1.29分钟;m/z(MH+):447。LC数据用配备有WatersXBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备4-氯-3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸
在80℃在充有压力为150psi的CO(气体)的帕尔瓶中将1,3-二(二苯基膦基)丙烷(28mg,0.067mmol)加到搅拌的二乙酸钯(II)(7.5mg,0.034mmol)和3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-氯苯甲酸(75mg,0.17mmol)于MeOH(0.6mL)和DMSO(1.1mL)中的溶液中并搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物4-氯-3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(75mg,0.113mmol,67%收率)。LC-MS保留时间:2.28分钟;m/z(MH+):427。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：5-(2-氯-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在室温将DIEA(142μL,0.810mmol)加到搅拌的1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(84mg,0.405mmol)、4-氯-3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(115mg,0.270mmol)和HATU(154mg,0.405mmol)于DMF(2.7mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗5-(2-氯-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯。粗残留物用MeOH(4mL)稀释并用NaOH/H2O(810μL,0.810mmol)处理；将反应混合物加热至60℃并搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗5-(2-氯-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸。粗残留物用DMF(2mL)稀释并先后用HATU(154mg,0.405mmol)、甲胺(675μL,1.35mmol,2M于THF中)/THF和DIEA(142μL,0.810mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.40(1H,s),8.52(1H,d,J=4.77Hz),8.50(1H,d,J=2.01Hz),8.44(1H,d,J=4.77Hz),8.23(1H,d,J=2.01Hz),8.12(1H,d,J=2.01Hz),7.97-8.09(3H,m),7.78(1H,d,J=8.28Hz),7.67(1H,td,J=7.72,1.88Hz),7.39-7.47(2H,m),7.36(1H,d,J=8.03Hz),7.15(1H,dd,J=7.40,4.89Hz),2.83(3H,d,J=4.52Hz),1.50-1.60(2H,m),1.22-1.32(2H,m)。LC-MS保留时间:1.31分钟;m/z(MH+):541。LC数据用配备有WatersSunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=9.66分钟，纯度=98%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=9.69分钟，纯度=98%。
Figure BDA00002387178601461
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯
将Cs2CO3(379mg,1.164mmol)加到搅拌的5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(200mg,0.685mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(269mg,1.027mmol)和Pd(Ph3P)4(158mg,0.137mmol)于1,4-二噁烷(5.7mL)和水(1.1mL)中的溶液中。将其加热至90℃过夜。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用MeOH/DCM稀释并用TMS-重氮甲烷(685μL，1.369mmol,2M于乙醚中)处理。将混合物搅拌1小时。浓缩反应混合物并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯(250mg,0.692mmol,100%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.28(1H,d,J=2.26Hz),8.16(1H,d,J=2.01Hz),8.01-8.10(2H,m),7.93(1H,dd,J=7.91,1.88Hz),7.85(1H,d,J=1.76Hz),7.49-7.57(2H,m),7.36-7.44(2H,m),3.86(3H,s),2.34(3H,s)。LC-MS保留时间:2.55分钟;m/z(MH+):362。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯
反应烧瓶用铝箔包裹。在室温将NBS(175mg,0.983mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯(289mg,0.800mmol)于DCE(8mL)中的溶液中。将其搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释且用10%偏亚硫酸氢钠淬灭并用饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.41(1H,d,J=2.01Hz),8.16-8.26(2H,m),8.06(1H,d,J=2.26Hz),7.95(1H,dd,J=8.03,1.76Hz),7.87(1H,d),7.45-7.57(3H,m),3.86(3H,s),2.34(3H,s)。LC-MS保留时间:2.85分钟;m/z(MH+):440,442。LC数据用配备有WatersSunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
在60℃将NaOH(3.3mL,3.3mmol,1M水溶液)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯(294mg,0.668mmol)于MeOH(7mL)和THF(7mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(275mg,0.645mmol,97%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.90(1H,宽单峰),8.40(1H,d,J=2.26Hz),8.18-8.25(2H,m),8.05(1H,d,J=2.26Hz),7.92(1H,dd,J=7.78,1.76Hz),7.85(1H,d,J=1.76Hz),7.43-7.54(3H,m),2.35(3H,s)。LC-MS保留时间:2.42分钟;m/z(MH+):426,428。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
在80℃在充有压力为150psi的CO(气体)的帕尔瓶中将1,3-二(二苯基膦基)丙烷(160mg,0.387mmol)加到搅拌的二乙酸钯(II)(44mg,0.19mmol)和3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(275mg,0.645mmol)于MeOH(2.1mL)和DMSO(4.3mL)中的溶液中并搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用DCM研磨，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(176mg,0.434mmol,67%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.95(1H,宽单峰),8.42(1H,d,J=2.01Hz),8.34(1H,d,J=2.01Hz),8.14-8.21(2H,m),7.93(1H,dd,J=8.03,1.76Hz),7.84(1H,d,J=1.76Hz),7.45-7.53(3H,m),3.89(3H,s),2.32(3H,s)。LC-MS保留时间:2.16分钟;m/z(MH+):406。LC数据用配备有WatersSunFire 5μC18 4.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备标题化合物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在室温将许尼希碱(Hunig’s Base)(65μL,0.37mmol)加到搅拌的HATU(56mg,0.15mmol)、3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲氧基羰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(50mg,0.12mmol)和1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(31mg,0.15mmol)于DMF(1.2mL)中的溶液中。将其搅拌30分钟。混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3、1M NaOH和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯。粗残留物用MeoH(2mL)稀释并用NaOH(0.617μL,0.617mmol,1M水溶液)处理。将混合物在60℃搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸。残留物用DMF(1.2mL)稀释并先后用HATU(56mg,0.15mmol)、甲胺(308μL,0.617mmol,2M于THF中)和许尼希碱(65μL,0.37mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(19mg,0.035mmol,29%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(1H,s),8.48-8.54(1H,m),8.46(1H,d,J=4.02Hz),8.42(1H,d,J=2.01Hz),8.13(1H,d,J=2.26Hz),8.05-8.11(2H,m),7.90-7.95(2H,m),7.68(1H,td,J=7.78,1.76Hz),7.51(1H,d,J=8.78Hz),7.41-7.47(2H,m),7.36(1H,d,J=8.03Hz),7.16(1H,dd,J=7.03,5.27Hz),2.85(3H,d,J=4.52Hz),2.35(3H,s),1.53-1.59(2H,m),1.25-1.30(2H,m)。LC-MS保留时间:1.34分钟;m/z(MH+):521。LC数据用配备有Waters Xterra MS 7μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%MeOH/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=13.32分钟，纯度=97%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=13.90分钟，纯度=97%。
Figure BDA00002387178601501
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺
将2’-(二环己基膦基)-2,6-二甲氧基联苯-3-磺酸钠(18mg,0.034mmol)、PdOAc2(二乙酸钯)(3.9mg,0.017mmol)、Cs2CO3(168mg,0.516mmol)和4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(68mg,0.26mmol)加到搅拌的5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺(60mg,0.17mmol)于DMF(3.1mL)和水(310μL)中的溶液中。将其脱气且加热至60℃并搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[3,2-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸。残留物用DMF(3.1mL)稀释并在室温先后用HATU(98mg,0.26mmol)、1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(54mg,0.260mmol)和DIEA(150μL,0.859mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M NaOH和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺(27mg,0.049mmol,29%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.29(1H,s),8.98-9.07(1H,m),8.45(1H,d,J=4.02Hz),8.25-8.34(3H,m),8.10(1H,d,J=1.76Hz),7.94(1H,dd,J=8.03,1.76Hz),7.73(1H,d,J=8.53Hz),7.67(1H,td,J=7.65,1.76Hz),7.50(1H,d,J=7.78Hz),7.39-7.46(2H,m),7.35(1H,d,J=8.03Hz),7.14(1H,dd,J=6.53,4.77Hz),2.91(3H,d,J=4.77Hz),2.45(3H,s),1.52-1.59(2H,m),1.23-1.31(2H,m)。LC-MS保留时间:1.46分钟;m/z(MH+):521。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=13.35分钟，纯度=98%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=12.68分钟，纯度=98%。
Figure BDA00002387178601511
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺
将2’-(二环己基膦基)-2,6-二甲氧基联苯-3-磺酸钠(8.8mg,0.017mmol)、PdOAc2(1.9mg,8.6μmol)、Cs2CO3(84mg,0.26mmol)和3-二羟硼基苯甲酸(21mg,0.13mmol)加到搅拌的5-溴-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺(30mg,0.086mmol)于DMF(1.6mL)和水(160μL)中的溶液中。将其脱气并加热至60℃且搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[3,2-b]吡啶-5-基)苯甲酸。残留物用DMF(1.6mL)稀释并在室温先后用HATU(49mg,0.13mmol)、1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(27mg,0.13mmol)和DIEA(75μL,0.43mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M NaOH和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且通过制备性反相HPLC(C18柱)(使用经适当缓冲的H2O/CH3CN梯度)来纯化并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[3,2-b]吡啶-3-甲酰胺(12mg,0.023mmol,27%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.44(1H,s),9.09-9.18(1H,m),8.73(1H,s),8.46(1H,d),8.39(1H,d),8.27-8.35(3H,m),8.19(1H,d,J=8.78Hz),8.01(1H,d),7.65-7.74(2H,m),7.39-7.46(3H,m),7.13-7.20(1H,m),2.98(3H,d,J=4.77Hz)。LC-MS保留时间:1.50分钟;m/z(MH+):507。LC数据用配备有Waters Xterra MS 7μC183.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=25.18分钟，纯度=99%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=25.85分钟，纯度=99%。
Figure BDA00002387178601521
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺
将2’-(二环己基膦基)-2,6-二甲氧基联苯-3-磺酸钠(9.8mg,0.019mmol)、PdOAc2(2.2mg,9.6μmol)、Cs2CO3(93mg,0.29mmol)和4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(38mg,0.14mmol)加到搅拌的三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基酯(40mg,0.096mmol)于DMF(1.7mL)和水(170μL)中的溶液中。将其脱气并加热至60℃且搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸。残留物用DMF(1.7mL)稀释并在室温先后用HATU(55mg,0.15mmol)、1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(30mg,0.15mmol)和DIEA(84μL,0.48mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M NaOH和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(5.4mg,9.85μmol,10%收率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 7.68-7.73(1H,m),7.10-7.18(1H,m),6.75-6.82(2H,m),6.68-6.72(1H,m),6.61-6.66(1H,m),6.54-6.59(1H,m),6.38-6.46(1H,m),6.15-6.24(2H,m),6.02-6.09(2H,m),5.85-5.92(1H,m),1.69(3H,s),1.12(3H,s),0.38-0.43(2H,m),0.07-0.13(2H,m)。LC-MS保留时间:0.913分钟;m/z(MH+):521。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Plaform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/0.1%TFA,溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/0.1%TFA,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Waters Sunfire C-18,4.6×150mm,3.5mm，Rt=5.61分钟，纯度=95%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=6.00分钟，纯度=96%。其它HPLC方法：溶剂A=5%MeOH/95%H2O/10mM碳酸氢铵,溶剂B=95%MeOH/5%H2O/10mM碳酸氢铵,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Phenomenex Gemini C1C-18,4.6×150mm,3mm，Rt=9.41分钟，纯度=97%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=9.38分钟，纯度=100%。
Figure BDA00002387178601531
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺
将2’-(二环己基膦基)-2,6-二甲氧基联苯-3-磺酸钠(9.8mg,0.019mmol)、PdOAc2(2.2mg,9.6μmol)、Cs2CO3(93mg,0.29mmol)和3-二羟硼基苯甲酸(24mg,0.14mmol)加到搅拌的三氟甲磺酸2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基酯(40mg,0.096mmol)于DMF(1.7mL)和水(170μL)中的溶液中。将其脱气并加热至60℃且搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-c]吡啶-5-基)苯甲酸。残留物用DMF(1.7mL)稀释并在室温先后用HATU(55mg,0.15mmol),1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(24mg,0.12mmol)和DIEA(84μL,0.48mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M NaOH和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤且浓缩并通过制备性反相HPLC(C18柱)(使用经适当缓冲的H2O/MeOH梯度)来纯化并浓缩，LCMS和NMR表明得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺(14mg,0.028mmol,29%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.45(1H,s),9.14(1H,s),8.67(1H,s),8.55-8.61(1H,m),8.51(1H,d,J=5.02Hz),8.34(1H,d,J=7.78Hz),8.27(1H,s),8.07(2H,dd,J=8.78,5.52Hz),7.99(1H,d,J=7.78Hz),7.80-7.91(1H,m),7.64(1H,t,J=7.78Hz),7.49(1H,d,J=8.03Hz),7.45(2H,t,J=8.91Hz),7.25-7.34(1H,m),2.89(3H,d,J=4.52Hz),1.58-1.69(2H,m),1.36-1.45(2H,m)。LC-MS保留时间:1.26分钟;m/z(MH+):507。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。其它HPLC方法：溶剂A=5%CH3CN/95%H2O/0.1%TFA,溶剂B=95%CH3CN/5%H2O/0.1%TFA,起始%B=10,最终%B=100,梯度时间=15分钟,停止时间=18分钟,流速=1ml/min。柱：Waters Sunfire C-18,4.6×150mm,3.5mm，Rt=13.20分钟，纯度=100%；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm,3.5mm，Rt=12.12分钟，纯度=100%。
Figure BDA00002387178601541
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：制备5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶
将5-溴-3-碘吡啶-2-醇(6.7g,22mmol)(Heterocycles.57,1,pp 55)、1-乙炔基-4-氟苯(4.03g,33.5mmol)、碘化亚铜(I)(0.255g,1.34mmol)和反式-二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.784g,1.12mmol)合并且抽空/用氮气回填(3×)，然后用三乙胺(223mL)稀释并加热至90℃且保持2小时。蒸发溶剂且将残留物溶解在EtOAc中。有机相用水(50mL)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用Et2O研磨，得到所需产物5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(4.2g,14.4mmol,64%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.35-8.42(2H,m),8.03(2H,dd,J=8.78,5.27Hz),7.46(1H,s),7.39(2H,t,J=8.91Hz)。LC-MS保留时间:2.36分钟;m/z(MH+):292,294。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤2：制备3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
将碳酸铯(379mg,1.164mmol)加到搅拌的5-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(200mg,0.685mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(269mg,1.027mmol)和Pd(Ph3P)4(158mg,0.137mmol)于1,4-二噁烷(5.7mL)和水(1.1mL)中的溶液中。将其加热至90℃过夜。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩且用MeOH/DCM稀释并用TMS-重氮甲烷(685μL,1.37mmol,2M于乙醚中)处理。将混合物搅拌1小时。浓缩反应混合物并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(247mg,0.685mmol,定量)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.28(1H,d,J=2.26Hz),8.16(1H,d,J=2.01Hz),8.01-8.10(2H,m),7.93(1H,dd,J=7.91,1.88Hz),7.85(1H,d,J=1.76Hz),7.49-7.57(2H,m),7.36-7.44(2H,m),3.86(3H,s),2.34(3H,s)。LC-MS保留时间:2.55分钟;m/z(MH+):362。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤3：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯
反应烧瓶用铝箔包裹。在室温将NBS(175mg,0.983mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯(289mg,0.800mmol)于二氯乙烷(8mL)中的溶液中。将其搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用10%偏亚硫酸氢钠淬灭且用饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤且浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ＝254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.41(1H,d,J=2.01Hz),8.16-8.26(2H,m),8.06(1H,d,J=2.26Hz),7.95(1H,dd,J=8.03,1.76Hz),7.87(1H,d),7.45-7.57(3H,m),3.86(3H,s),2.34(3H,s)。LC-MS保留时间:2.85分钟;m/z(MH+):440,442。LC数据用配备有WatersSunFire 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤4：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸
在60℃将NaOH(3.3mL,3.3mmol,1M水溶液)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸甲酯(294mg,0.668mmol)于MeOH(7mL)和THF(7mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(275mg,0.645mmol,97%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.90(1H,宽单峰),8.40(1H,d,J=2.26Hz),8.18-8.25(2H,m),8.05(1H,d,J=2.26Hz),7.92(1H,dd,J=7.78,1.76Hz),7.85(1H,d,J=1.76Hz),7.43-7.54(3H,m),2.35(3H,s)。LC-MS保留时间:2.42分钟;m/z(MH+):426,428。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤5：制备3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯
在80℃将N,N-二甲基甲酰胺缩二叔丁醇(653μL,2.72mmol)加到搅拌的3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸(290mg,0.680mmol)于甲苯(6.8mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌1小时。将混合物浓缩至干并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS表明得到所需产物3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯(231mg,0.479mmol,70%收率)。LC-MS保留时间:2.34分钟;m/z(MH+):482。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%乙腈/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%乙腈/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤6：制备5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯
在80℃在帕尔瓶中将1,3-二(二苯基膦基)丙烷(119mg,0.287mmol)加到搅拌的二乙酸钯(II)(32mg,0.144mmol)和3-(3-溴-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯(231mg,0.479mmol)于MeOH(1.6mL)和DMSO(3mL)中的溶液中，然后向所述帕尔瓶中充入压力为300psi的CO(气体)且搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释并用硅藻土垫过滤。滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物粗5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯(211mg,0.457mmol,95%收率)，其直接用于下一步。LC-MS保留时间:2.32分钟;m/z(MH+):462。LC数据用配备有Waters XBridge5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤7：制备5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
在60℃将NaOH(1.4mL,1.37mmol)加到搅拌的5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯(211mg,0.457mmol)于MeOH(2.3mL)和THF(2.3mL)中的溶液中。将其搅拌4小时。混合物用EtOAc稀释并用1M HCl和饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，LCMS表明得到所需产物粗5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(205mg,0.457mmol,定量)，其直接用于下一步。LC-MS保留时间:1.88分钟;m/z(MH+):448。LC数据用配备有Waters XBridge5μC184.6×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。
步骤8：制备3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯
在室温将HATU(209mg,0.550mmol)加到搅拌的甲胺(1.2mL,2.4mmol,2M于THF中)、DIEA(240μL,1.37mmol)和5-(5-(叔丁氧基羰基)-2-甲基苯基)-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(205mg,0.458mmol)于DMF(4.5mL)中的溶液中。将其搅拌1小时。混合物用EtOAc稀释并用饱和NaCl洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤且浓缩并用硅胶(Biotage,EtOAc/己烷梯度,在λ=254nm进行馏分收集)进行纯化，LCMS和NMR表明得到所需产物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯(190mg,0.413mmol,90%收率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.28(1H,d,J=2.26Hz),8.08(1H,d,J=2.01Hz),7.99-8.06(2H,m),7.92(1H,dd,J=8.03,1.76Hz),7.86(1H,d,J=1.51Hz),7.45(1H,d,J=8.03Hz),7.30(2H,t,J=8.78Hz),2.95(3H,s),2.34(3H,s),1.60(9H,s)。LC-MS保留时间:2.70分钟;m/z(MH+):461。LC数据用配备有Waters SunFire 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%乙腈/90%H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
步骤8：制备标题化合物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在室温将TFA(544μL,7.06mmol)加到搅拌的3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-4-甲基苯甲酸叔丁酯(65mg,0.141mmol)于DCE(1.4mL)中的溶液中。将其搅拌2小时，然后浓缩。将白色固体吸收在DMF(1.5mL)中并在室温先后用DIEA(123μL,0.706mmol)、1-(嘧啶-2-基)环丙胺盐酸盐(29.1mg,0.169mmol)和HATU(81mg,0.212mmol)处理。将反应混合物搅拌1小时，然后通过制备性反相HPLC(C18柱)(使用经TFA缓冲的H2O/MeOH梯度)来纯化并浓缩，LCMS和NMR表明得到所需产物2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(45mg,0.086mmol,61.1%收率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 9.19(1H,s),8.66(2H,d,J=4.76Hz),8.45-8.57(1H,m),8.40(1H,d,J=1.83Hz),8.10(1H,d,J=1.83Hz),8.00-8.08(2H,m),7.85-7.94(2H,m),7.35-7.50(3H,m),7.26(1H,t,J=4.76Hz),2.83(3H,d,J=4.39Hz),2.31(3H,s),1.55-1.67(2H,m),1.27-1.39(2H,m)。LC-MS保留时间:1.75分钟;m/z(MH+):522。LC数据用配备有Waters XBridge 5μC184.6×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5ml/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%MeOH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%MeOH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
将三氟甲磺酸6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯(0.07g,0.13mmol,1当量)、4-甲基-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(0.054g,0.14mmol,1.1当量)、四(三苯基膦)钯(0.0045g,0.0039mmol,0.03当量)和碳酸铯(0.12g,0.39mmol,3当量)溶解在1,4-二噁烷(10ml)和水(2ml)中。使氮气通过溶液且将反应混合物在90℃加热14小时。溶液用硅藻土过滤。将水加到滤液中，然后用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层且所得残留物通过制备性HPLC来纯化。收率:22mg(26%)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ1.12(宽单峰,3H),1.35(s,2H),1.66(s,2H),2.34(s,3H),2.85(s,3H),3.00-3.32(br,3H),3.51(br,2H),7.13(m,1H),7.24(m,2H),7.46(m,2H),7.68(m,1H),7.97(m,4H),8.0(s,1H),8.41-8.42(d,J=4Hz,1H),8.92(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=641.2(M+H)。方法：柱：Ascentis Express C18(5×2.1mm-2.7μm)；流动相A：2%MeCN-98%H2O-10mM NH4COOH；流动相B：98%MeCN-2%H2O-10mMNH4COOH；流速：1mL/min；RT(分钟)：1.796；波长：220nm。HPLC方法：柱：SUNFIRE C18(4.6×150)mm,3.5微米；缓冲液：0.05%TFA/水(pH 2.5)；流动相A：缓冲液:MeCN(95:5)；流动相B：MeCN:缓冲液(95:5)；流速：1ml/min；波长：254nm；RT(分钟)：8.675；纯度：96.6%。
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
将三氟甲磺酸6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基酯(0.1g,0.17mmol,1当量)、N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(0.0.65g,0.18mmol,1.1当量)、四(三苯基膦)钯(0.0058g,0.0051mmol,0.03当量)和碳酸铯(0.165g,0.51mmol,3当量)溶解在1,4-二噁烷(10ml)和水(2ml)中且将反应混合物在90℃加热14小时。溶液用硅藻土过滤。将水加到滤液中，然后用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层且所得残留物通过制备性HPLC来纯化。收率:22mg(26%)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ.1.05(t,J=8Hz,3H),1.65-1.66(m,2H),1.78-1.82(m,2H),2.89(s,3H),3.20(s,3H),3.62(宽单峰,2H),7.28-7.30(t,J=7.76Hz,2H),7.57(宽单峰,1H),7.67(t,J=7.72Hz,1H),7.75(d,J=8.20Hz,1H),7.86-7.88(m,3H),7.96(s,1H),8.02(d,J=2.09Hz,1H),8.18(br,1H),8.23(s,1H),8.55(d,J=5.32Hz,1H),8.98(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=627.2(M+H)。方法：柱：Ascentis Express C18(5×2.1mm-2.7μm)；流动相A：2%MeCN-98%H2O-10mMNH4COOH；流动相B：98%MeCN-2%H2O-10mM NH4COOH；流速：1mL/min；RT(分钟)：1.768。
3-碘-4-甲基苯甲酸
向3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(3g,109mmol,1当量)于MeOH(30ml)中的溶液中先后加入氢氧化钠(1.3g,327mmol,3当量)和水(15ml)。将上述溶液在室温搅拌14小时。真空浓缩溶液，然后加入水。使用浓HCl使反应混合物的pH为3。过滤所得固体并真空干燥。收率:2.7g(96%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.44(s,3H),7.45(d,J=8.00Hz,1H),7.85(d,J=3.18Hz,1H),8.31(s,1H)。
3-碘-4-甲基-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)苯甲酰胺
将3-碘-4-甲基苯甲酸(2.5g,9.5mmol,1当量)、1-(吡啶-2-基)环丙胺(1.41g,10.4mmol,1.1当量)、EDCI·HCl(2.1g,11.4mmol,1.2当量)、HOBT(1.5g,11.4mmol,1.2当量)和DIPEA(4.9ml,28.62mmol,3当量)溶解在DCM中且将上述溶液在室温搅拌18小时。加入水且产物用DCM萃取。浓缩有机层且粗产物使用二氯甲烷和己烷来结晶。收率:2.3g(55%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.26(m,2H),1.53(m,2H),2.43(s,3H),7.13(m,1H),7.29(d,J=8.00Hz,1H),7.44(d,1H),7.67(t,J=3.46Hz,1H),7.87(d,J=3.24Hz,1H),8.38(s,1H),8.44(d,J=1.10Hz,1H),9.29(s,1H)。
4-甲基-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
将3-碘-4-甲基-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)苯甲酰胺(2.2g,5.8mmol,1当量)、联硼酸二频哪醇酯(2.21g,8.7mmol,1.5当量)、Pd(dppf)Cl2(0.18g,0.23mmol,0.04当量)和乙酸钾(1.7g,17.4mmol,3当量)溶解在DMF中并用氮气吹洗15分钟。将上述溶液在90℃搅拌15小时。溶液用硅藻土过滤且将水加到滤液中，所述滤液用乙酸乙酯萃取。粗产物通过Combflash色谱来纯化，得到灰白色固体。收率:1.5g(68%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.25(s,2H),1.32(s,12H),1.54(s,2H),2.53(s,3H),7.13(m,1H),7.29(m,2H),7.69(t,J=7.48Hz,1H),7.92(m,1H),8.18(s,1H),8.45(d,1H),9.29(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=379(M+H)。方法：柱：Chromolith SpeedROD C18(4.6×30)；流动相A：10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；流动相B：90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA；流速：5mL/min；RT(分钟)：1.658；波长：220nm。
3-碘-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)苯甲酰胺
将3-碘苯甲酸(2.7g,11.1mmol,1当量)、1-(吡啶-2-基)环丙胺(1.5g,11.1mmol,1当量)、EDCI·HCl(3.2g,16.7mmol,1.5当量)、HOBT(2.2g,16.7mmol,1.5当量)和DIPEA(6ml,33.5mmol,3当量)溶解在DCM中且将所得混合物在室温搅拌18小时。将水加到混合物中且产物用DCM萃取。浓缩有机层且产物使用二氯甲烷和己烷来结晶。收率:2.3g(57%)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.26(m,2H),1.54(m,2H),7.13(t,J=4.04Hz,1H),7.29(m,2H),7.69(t,J=8.06Hz,1H),7.92(d,J=3.05Hz,2H),8.29(s,1H),8.45(d,J=4.56Hz,1H),9.33(s,1H)。
N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
将3-碘-N-(1-(吡啶-2-基)环丙基)苯甲酰胺(1g,2.7mmol,1当量)、联硼酸二频哪醇酯(1.04g,4.1mmol,1.5当量)、Pd(dppf)Cl2(0.044g,0.054mmol,0.02当量)和乙酸钾(1.04g,13.5mmol,3当量)溶解在DMF中且用氮气吹洗15分钟且将上述混合物在90℃搅拌15小时。溶液用硅藻土过滤且将水加到滤液中，然后用乙酸乙酯萃取。粗产物通过Combiflash色谱来纯化，得到灰白色固体。收率:0.7g(70%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.27(m,2H),1.32(s,12H),1.54(m,2H),7.12(s,1H),7.30(d,J=8.00Hz,1H),7.49(t,J=7.56Hz,1H),7.65(t,J=3.44Hz,1H),7.80(d,J=7.32Hz,1H),8.03(m,1H),8.24(s,1H),8.44(m,1H),9.35(s,1H)。
4-(苄基氧基)吡啶-3-胺
将4-(苄基氧基)-3-硝基吡啶(15g,65mmol,1当量)溶解在THF中，然后在氮气气氛下加入兰尼镍(2.25g,10%w/w)(用THF洗涤)且将反应混合物在室温在压力为2kg的氢气下搅拌6小时。反应溶液用硅藻土过滤且真空浓缩滤液，得到棕色油状物。然后产物不经纯化即用于下一步。收率:12.3g(94%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.86(s,2H),5.18(s,2H),6.88(d,1H,J=5.32Hz),7.31(t,1H,J=3.90Hz),7.4(t,2H,J=5.08Hz),7.5(t,2H,J=8.08Hz),7.71(d,J=2.05Hz,1H),7.89(s,1H)。
N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)-N-(甲基磺酰基)甲磺酰胺
将4-(苄基氧基)-3-硝基吡啶(14g,69.8mmol,1当量)溶解在二氯甲烷中并冷却至0℃。然后在0℃先后加入TEA(29.2ml,209.6mmol,3当量)和碳酸钾(9.96g,69.8mmol,1当量)并搅拌15分钟。在0℃将甲磺酰氯(20g,174mmol,2.5当量)缓慢加到上述混合物中并搅拌14小时。反应完成(通过TLC来监测)后，混合物用水稀释并分离有机层。水层用200ml二氯甲烷萃取两次且合并的二氯甲烷混合物用水(500ml)和盐水(500ml)洗涤。真空浓缩有机溶液，得到纯产物。收率:19.5g(78%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.47(s,6H),5.35(s,2H),7.32(d,J=5.76Hz,1H),7.40-7.49(m,3H),7.51(t,J=4.12Hz,2H),8.52(d,J=5.68Hz,1H),8.57(s,1H)。
N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺
在室温将浓度为1M的四丁基氟化铵/THF(12.2ml,42mmol,2.5当量)加到N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)-N-(甲基磺酰基)甲磺酰胺(6g,16.8mmol,1当量)于THF中的溶液中。将反应混合物在60℃回流10小时。充分浓缩溶液并用水(5mL)稀释且搅拌15分钟。过滤固体析出物，用水洗涤并真空干燥，得到所需产物，其为浅棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.35(s,3H),5.27(s,2H),7.21(d,J=5.64Hz,1H),7.36-7.54(m,3H),7.54(d,J=7.28Hz,2H),8.30(s,1H),8.33(d,J=5.64Hz,1H),9.34(s,1H)。
4-(苄基氧基)吡啶-3-基(甲基磺酰基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(4-(苄基氧基)吡啶-3-基)甲磺酰胺(3g,10mmol,1当量)溶解在THF中并冷却至0℃。然后加入TEA(4.4ml,32.1mmol,3当量)和DMAP(0.13g,1.07mmol,0.1当量)并搅拌15分钟。在0℃缓慢加入一缩二碳酸二叔丁酯(2.3g,10mmol,1当量)且将混合物在室温搅拌14小时。浓缩溶液并用水稀释且产物用二氯甲烷(125ml)萃取两次且通过Combflash色谱(使用12g柱和50%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。收率:3.1g(77%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.33(s,9H),3.41(s,3H),5.32(d,J=10.4Hz,2H),7.28(d,J=5.76Hz,1H),7.30-7.46(m,5H),8.47(s,1H),8.47(d,J=5.68Hz,1H)。
N-氨基-4-(苄基氧基)吡啶-3-基(甲基磺酰基)氨基甲酸叔丁酯
向冷却的4-(苄基氧基)吡啶-3-基(甲基磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(1g,1当量)于二氯甲烷中的溶液中加入O-(均三甲苯基磺酰基)羟胺(0.85g,1.5当量)/二氯甲烷，将溶液在0℃搅拌20分钟。移开冰浴并在室温搅拌7小时。将反应混合物在室温浓缩并重新溶解在二氯甲烷和甲醇的混合物(10/1)中，然后再次浓缩。将固体置于高真空下，得到白色泡沫，所述泡沫不经纯化即用于下一步。收率:1.3g。LCMS:(ES+)m/z测量值394.0。
5-(苄基氧基)-6-(N-(叔丁氧基羰基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸乙酯
将3-(4-氟苯基)丙炔酸乙酯(0.87g,2.8mmol,1.3当量)溶解在DMF中并冷却至0℃。向上述溶液中加入碳酸钾(1.68g,8.8mmol,4当量)且将反应混合物搅拌15分钟。然后将N-氨基-4-(苄基氧基)吡啶-3-基(甲基磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g,2.2mmol 1当量)于DMF中的溶液加到上述混合物中，然后在室温搅拌24小时。溶液用硅藻土过滤并通过Combiflash色谱(使用35%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。收率:0.37g(22%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.21-1.25(t,J=7.08Hz,3H),1.33(s,9H),3.49(s,3H),4.20-4.25(m,2H),5.37-5.45(m,2H),7.33(t,J=8.9Hz,2H),7.42(m,3H),7.50(d,J=6.8Hz,2H),7.57(s,1H),7.78(m,2H),9.28(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=584.0(M+H)。
5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)-6-(甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯
将5-(苄基氧基)-6-(N-(叔丁氧基羰基)甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.32g,0.54mmol,1当量)溶解在二氯甲烷中并冷却至0℃。然后加入三氟乙酸(3.2ml)。将上述混合物在室温搅拌12小时。将溶液浓缩并使pH为8且用二氯甲烷萃取。浓缩有机层，得到所需产物，其不经进一步纯化即用于下一步。收率:0.23g(88%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.21-1.24(t,3H),3.33(s,3H),4.1-4.23(q,2H),5.39(s,2H),7.27(t,J=5Hz,2H),7.38(d,J=2Hz,1H),7.43(m,2H),7.53(s,1H),7.61(d,J=2Hz,2H),7.78(t,J=6Hz,2H),8.73(s,1H),9.58(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=484.0(M+H)。
5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯
将5-(苄基氧基)-2-(4-氟苯基)-6-(甲基磺酰氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.2g,0.41mmol,1当量)溶解在DMF中并冷却至0℃。然后加入碳酸钾(0.171g,1.6mmol,3当量)且将反应混合物搅拌15分钟。缓慢滴加碘乙烷(0.037ml,0.45mmol,1.1当量)且将所得混合物在室温搅拌4小时。充分浓缩溶液并用水稀释且产物用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用水洗涤且浓缩，得到所需产物。收率:0.16g(76%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.07-1.10(t,J=7.16Hz,3H),1.21-1.24(t,3H),3.04(s,3H),3.64(m,2H),4.19-4.24(q,J=7.04Hz,2H),5.38(s,2H),7.28(t,J=8.8Hz,2H),7.42-7.54(m,3H),7.57-7.65(m,3H),7.77-7.95(m,2H),9.02(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=512.0(M+H)。
5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
将5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.15g,0.29mmol,1当量)溶解在乙醇中。然后加入氢氧化钠(0.035g,1.17mmol,3当量)，然后加入水(1ml)。将反应混合物温热至45℃且保持14小时。将溶液浓缩并用水稀释且使用浓HCl使反应混合物的pH为3。过滤固体析出物并真空干燥。收率:0.12g(86%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.06-1.10(t,J=7.14Hz,3H),3.01(s,3H),3.62(m,2H),5.34(s,2H),7.27(t,J=8.9Hz,2H),7.32-7.46(m,4H),7.56(d,J=7.0Hz,2H),7.63(s,1H),7.80(t,J=4.77Hz,2H),8.98(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=484.0(M+H)。
5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
将5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(0.11g,0.22mmol,1当量)、EDCI-HCl(0.048g,0.25mmol,1.1当量)、HOBT(0.036g,0.27mmol,1.2当量)和DIPEA(0.12ml,0.68mmol,3当量)溶解在二氯甲烷中且将反应混合物在室温搅拌10分钟。然后将甲胺(1M于THF中,0.6ml,5当量)加到上述溶液中且将反应混合物在室温搅拌14小时。然后混合物用水稀释且产物用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤，干燥并浓缩。收率:0.1g(90%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.06(t,J=7.12Hz,3H),2.77(s,3H),3.00(s,3H),3.62(宽多重峰,2H),5.30(s,2H),7.307.32(m,3H),7.33(d,J=5.8Hz,1H),7.40-7.43(m,2H),7.53-7.55(m,2H),7.81(t,J=3.52Hz,1H),7.95(s,2H),8.88(s,1H)。LCMS:(ES+)m/z=497.0(M+H)。
6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
将5-(苄基氧基)-6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(2.5g,5mmol,1当量)溶解在二氯甲烷中并冷却至-78℃。将四丁基碘化铵(0.19g,0.5mmol,0.1当量)加到上述混合物中，然后在-78℃缓慢滴加BCl3(25ml)。将上述溶液在室温搅拌14小时。溶液用10%碳酸氢钠溶液淬灭且产物用二氯甲烷萃取。蒸发二氯甲烷溶液，得到灰棕色固体。收率:1.6g(79%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.08(t,J=7.14Hz,3H),2.71(d,J=4.52Hz,3H),3.11(s,3H),3.62(q,J=6.92Hz,2H),7.14(s,1H),7.30(t,J=8.86Hz,2H),7.57(d,J=4.56Hz,1H),7.81-7.82(m,2H),8.72(s,1H),11.32(宽单峰,1H)。LCMS:(ES+)m/z=407.0(M+H)。
三氟甲磺酸6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1，5-a]吡啶-5-基酯
将6-(N-乙基甲基磺酰氨基)-2-(4-氟苯基)-5-羟基-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(0.2g,0.49mmol,1当量)溶解在二氯甲烷中并冷却至0℃。然后加入三乙胺(0.2ml,1.47mmol,3当量)，然后逐份加入N-苯基二(三氟甲磺酰胺)(0.21g,0.58mmol,1.2当量)。然后将反应混合物在室温搅拌2小时。将水加到上述混合物中，然后用二氯甲烷萃取。粗产物通过Combiflash色谱(使用20%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化。收率:0.07g(70%)。LCMS:(ES+)m/z=539.0(M+H)。
O-(均三甲苯基磺酰基)羟胺
将N-羟基亚氨代乙酸乙酯(10.3g,47mmol,1.1当量)和三乙胺(25.5ml,94mmol,2当量)溶解在DMF(40ml,2体积)中且将混合物冷却至0℃。然后逐份加入均三甲苯基氯(20g,47mmol,1当量)且将混合物在0℃搅拌45分钟。将上述溶液倒入冰水中且过滤所得固体并用水洗涤。收率:23g(92%)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.16(t,3H),2.03(s,3H),2.31(s,3H),2.64(s,6H),3.89(q,2H),6.96(s,2H)。
将N-均三甲苯基磺酰基氧基亚氨代乙酸乙酯(20g,65.7mmol,1当量)溶解在1,4-二噁烷(6ml)中且将溶液冷却至0℃。向混合物中滴加高氯酸(10ml)，然后将反应混合物在0℃搅拌45分钟。将溶液倒入冰水中且过滤所析出的固体并用水洗涤且真空干燥15分钟。将样品在-20℃贮存在塑料容器中。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.32(s,3H),2.64(s,6H),4.98(宽峰,2H),6.99(s,2H)。
3-(4-氟苯基)丙炔酸乙酯
将4-氟苯基乙炔(1g,8.3mmol,1当量)溶解在乙醚中并冷却至-78℃。在-78℃向混合物中缓慢滴加正丁基锂(6.9ml,2当量)并在-78℃搅拌2小时。然后将冷却至-78℃的氯甲酸乙酯(3.06ml,33.3mmol,4当量)尽快加到上述溶液中且将混合物在-78℃搅拌1小时。溶液用饱和氯化铵溶液淬灭且产物用乙酸乙酯萃取并通过硅胶柱(60-120)(使用5%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)来纯化，得到浅灰棕色固体。收率:1.3g(81%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.35(t,J=7.14Hz,3H),4.30(q,J=7.14Hz,2H),7.07(t,J=4.33Hz,2H),7.59(m,2H)。
除非对在个别操作中提及的其它条件另有说明，所有制备性HPLC纯化在以下条件下进行：溶剂A：10%MeOH-90%H2O-0.1%TFA；溶剂B：90%MeOH-10%H2O-0.1%TFA；柱：Phenomenex-LUNAAXIA 5μ21×100mmS5。LCMS方法：除非在个别操作中另有说明，所有LCMS分析条件使用方法1。方法1：起始%B：0；最终%B：100；梯度时间：4分钟；停止时间：5分钟；流速：5ml/min；波长：220；溶剂A：10%MeOH/90%H2O/0.1%三氟乙酸；溶剂B：10%H2O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸；柱：Phenomenex-luna3.0×50mm S 10。
2-(4-氟苯基)-6-(2-甲氧基-5-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)-N-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00002387178601681
步骤1：制备化合物1
向在0℃冷却的3-(4-氟苯基)-3-氧代丙酸乙酯(0.42g,2.01mmol)于DCM(8.0mL)中的溶液中加入四正丁基三溴化铵(0.97g,2.01mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时，然后在室温搅拌16小时。将反应混合物加载到80g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-80%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物1(0.50g,1.73mmol,86%收率)，其为澄清油状物。LC/MS m/z 288(M+H)+289.04,RT=2.44分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 7.94-8.00(2H,m),7.06-7.13(2H,m),5.61(1H,s),4.20(2H,q,J=7.30Hz),1.10-1.21(3H,m)。
步骤2：制备化合物2
向化合物1(1.5g,5.2mmol)于乙醇(30mL)中的溶液中加入5-溴吡啶-2-胺(3.1g,18.0mmol)。将反应混合物在70℃在氮气下搅拌16小时。真空除去溶剂。将反应残留物溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3和水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体。固体用DCM溶解并加载到80g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-60%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物2(0.7g,1.9mmol,36%收率)，其为浅黄色固体。LC/MS m/z 363(M+H)+363.2,RT=2.90分钟[Phenomenex Luna C184.6×50mm,4分钟梯度,0-100%B(A:95/5/10H2O/ACN/10mM乙酸铵;B:95/5/10ACN/H2O/10mM乙酸铵)]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)ppm 9.45(1H,d,J=1.83Hz),7.81-7.85(2H,m),7.80(1H,s),7.74-7.77(1H,m),7.28-7.33(2H,m),4.29(2H,q,J=7.22Hz),1.20(3H,t,J=7.17Hz)。
步骤3：制备化合物3
向化合物2(0.42g,1.16mmol)于THF(5mL)和MeOH(1mL)中的溶液中加入1.0N NaOH(2.3mL,2.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。真空除去溶剂。残留物用EtOAc稀释，用1N HCl和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物3(0.39g,1.16mmol,100%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 334(M+H)+335.15,RT=1.48分钟[Phenomenex Luna C183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤4：制备化合物4
向化合物3(0.39g,1.16mmol)于DMF(5mL)中的溶液中加入EDC(0.34g,1.75mmol)、HOBT(0.27g,1.75mmol)、盐酸甲胺(0.16g,2.33mmol)和DIEA(0.61mL,3.49mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤。过滤白色固体并用EtOAc洗涤，然后干燥，得到化合物4(0.20g,0.57mmol,49%收率)，其为黄色固体。LC/MS m/z 347(M+H)+348,RT=1.24分钟[Phenomenex Luna C183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤5：制备化合物5
向化合物4(0.058g,0.17mmol)于二噁烷(1mL)和水(0.2mL)中的溶液中加入3-二羟硼基-4-甲氧基苯甲酸(0.049g,0.25mmol)和CS2CO3(0.081g,0.25mmol)。搅拌反应混合物并脱气5分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(tetrakis)(3.9mg,3.3μmol)。将反应混合物在85℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用1N HCl洗涤，滤出固体。分离滤液中的两相且有机相用饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物5(0.056g,0.13mmol,76%收率)，其为黄色固体。化合物5不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z 419(M+H)+420.21,RT=1.478分钟[Phenomenex LunaC183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤6：制备化合物6
向化合物5(0.055g,0.13mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入EDC(0.038g,0.20mmol)、HOBT(0.030g,0.20mmol)、2-苯基丙-2-胺(0.018g,0.13mmol)和DIEA(0.07mL,0.39mmol)。将反应混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物在MeOH中稀释，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到呈单TFA盐形式的化合物6(0.022g,0.033mmol,25.01%收率)，其为黄色固体。LC/MS m/z 536(M+H)+537.40,RT=2.86分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 9.46(1H,s),8.04(1H,d,J=9.32Hz),7.93(1H,dd,J=9.32,1.51Hz),7.81(1H,dd,J=8.56,2.27Hz),7.77(1H,d,J=2.27Hz),7.68-7.73(2H,m),7.41-7.45(2H,m),7.29-7.34(2H,m),7.19-7.26(3H,m),7.01(1H,d,J=8.56Hz),6.63(1H,s),6.42(1H,d,J=4.78Hz),3.87(3H,s),2.89(3H,d,J=4.78Hz),1.78-1.82(6H,m)。
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(8)
步骤1：制备化合物7
向化合物4(0.12g,0.33mmol)于二噁烷(1mL)和水(0.2mL)中的溶液中加入4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(0.13g,0.50mmol)和CS2CO3(0.16g,0.50mmol)。搅拌反应混合物并脱气5分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(7.7mg,6.7μmol)。将反应混合物在85℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用1N HCl洗涤，滤出固体。分离滤液中的两相且有机相用饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物7(0.050g,0.12mmol,36%收率)，其为黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z 403(M+H)+404.2,RT=1.54分钟[PhenomenexLuna C183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤2：制备化合物8
向化合物7(0.050g,0.12mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入EDC(0.036g,0.19mmol)、HOBT(0.028g,0.19mmol)、1-(吡啶-2-基)环丙胺(0.020g,0.15mmol)和DIEA(0.087mL,0.50mmol)。将反应混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物在MeOH中稀释，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到化合物8的单TFA盐(0.022g,0.029mmol,24%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 519(M+H)+520.34,RT=1.99分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 9.96(1H,s),9.40(1H,s),8.64(1H,d,J=5.54Hz),8.27-8.35(1H,m),8.12(1H,d,J=9.32Hz),7.99(1H,d,J=8.06Hz),7.87(1H,dd,J=8.06,1.76Hz),7.82(1H,s),7.68-7.79(4H,m),7.37(1H,d,J=8.06Hz),7.25-7.30(2H,m),6.01(1H,d,J=4.53Hz),2.87(3H,d,J=5.04Hz),2.32(3H,s),1.59-1.66(2H,m),1.49-1.56(2H,m)。
6-(2-氯-5-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺(10)
Figure BDA00002387178601721
步骤1：制备化合物9
向化合物4(0.058g,0.17mmol)于二噁烷(1mL)和水(0.200mL)中的溶液中加入3-二羟硼基-4-氯苯甲酸(0.050g,0.25mmol)和CS2CO3(0.081g,0.25mmol)。搅拌反应混合物并脱气5分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(4mg,3μmol)。将反应混合物在85℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用1N HCl洗涤，滤出固体。分离滤液中的两相且有机相用饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物9(0.074g,0.175mmol)，其为黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z423(M+H)+424.22,RT=1.65分钟[Phenomenex Luna C 183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤2：制备化合物10
向化合物9(0.074g,0.17mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入EDC(0.050g,0.26mmol)、HOBT(0.040g,0.26mmol)、2-苯基丙-2-胺(0.024g,0.18mmol)和DIEA(0.091mL,0.52mmol)。将反应混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物在MeOH中稀释，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。将来自主要峰的馏分蒸发，得到澄清油状物。将油状物溶解在二氯甲烷中并加载到4g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为15分钟的0-100%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物10(0.022g,0.040mmol,22%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 540(M+H)+541.27,RT=1.91分钟[Phenomenex LunaC183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。1H NMR(500MHz,氯仿-d)ppm 9.50(1H,s),7.80(1H,d,J=2.14Hz),7.73(1H,dd,J=8.39,2.29Hz),7.66-7.70(3H,m),7.53(1H,d,J=8.24Hz),7.42-7.46(3H,m),7.33(2H,t,J=7.63Hz),7.17-7.26(3H,m),6.59(1H,s),5.77(1H,d,J=4.58Hz),2.84(3H,d,J=4.58Hz),1.81(6H,s)。
2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(2-甲基-5-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺(11)
步骤1：制备化合物11
向化合物7(0.050g,0.12mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入EDC(0.036g,0.19mmol)、HOBT(0.028g,0.19mmol)、2-苯基丙-2-胺(0.017g,0.12mmol)和DIEA(0.065mL,0.37mmol)。将反应混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物在MeOH中稀释，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。将来自主要峰的馏分蒸发，得到澄清油状物。将油状物溶解在二氯甲烷中并加载到4g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为15分钟的0-100%EtOAc/己烷洗脱。合并含有所需产物的馏分并浓缩，得到化合物11(0.015g,0.029mmol,23%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 520(M+H)+521.38,RT=2.91分钟。1HNMR(500MHz,氯仿-d)ppm 9.42(1H,s),7.66-7.73(5H,m),7.45(2H,d,J=7.32Hz),7.31-7.37(4H,m),7.19-7.24(3H,m),6.46(1H,s),5.74(1H,d,J=4.58Hz),2.85(3H,d,J=4.88Hz),2.34(3H,s),1.82(6H,s)。
反式-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((1S,2R)-2-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)环丙基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺和顺式-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((1S,2R)-2-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)环丙基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA00002387178601741
步骤1：制备化合物12
在氮气下向4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.31g,2.0mmol)和PdOAc2(4.5mg,0.02mmol)于无水乙醚(3mL)中的溶液中滴加2-重氮基乙酸乙酯(0.57g,5.0mmol)于乙醚(2mL)中的溶液。当加入一半时，再加入PdOAc2(4.49mg,0.02mmol)。当不再放出N2时，反应混合物用经活化的中性氧化铝过滤并用乙醚洗涤。浓缩滤液，得到化合物12(0.50g,2.0mmol)，其为黄色油状物。粗产物不经进一步纯化即使用。
步骤2：制备化合物13
在氩气下向搅拌的脱气的化合物4(0.060g,0.17mmol)、化合物12(0.083g,0.35mmol)和碳酸钾(0.119g,0.862mmol)于DME(2mL)中的溶液中加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(4mg,5μmol)和水(0.2mL)。将反应混合物加热至85℃且保持4小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，过滤并浓缩，得到黄色固体。将固体溶解在二氯甲烷中并加载到12g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-100%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物13的非对映异构体混合物(0.036g,0.094mmol,55%收率)，其为黄色固体。LC/MS m/z381(M+H)+382.3,RT=1.91分钟。LC/MS m/z 381(M+H)+382.3,RT=2.14分钟。
步骤3：制备化合物14
向化合物13(0.036g,0.094mmol)于THF(1mL)和MeOH(0.250mL)中的溶液中加入10N NaOH(0.028mL,0.28mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。浓缩反应混合物。残留物用EtOAc稀释，用5%枸橼酸和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物14的非对映异构体混合物(0.033g,0.093mmol)，其为黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MSm/z 353(M+H)+354.26,RT=1.497分钟。LC/MS m/z 353(M+H)+354.26,RT=1.663分钟。
步骤4：制备化合物15和16
向化合物14(0.033g,0.093mmol)于DMF(2mL)中的溶液中加入EDC(0.036g,0.19mmol)、HOBT(0.029g,0.19mmol)、DIEA(0.13mL,0.75mmol)和1-(吡啶-2-基)-环丙胺三HCl盐(0.025g,0.19mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应混合物溶解在MeOH中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。非对映异构体混合物用制备性HPLC分离。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到化合物15二TFA盐(0.008g,0.011mmol,12%收率)[其为白色固体。LC/MS m/z 469(M+H)+470.28,RT=1.44分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 8.82(1H,s),8.23(1H,d,J=5.04Hz),7.68-7.74(2H,m),7.46-7.55(2H,m),7.19-7.29(3H,m),6.96(1H,dd,J=7.43,4.91Hz),6.91(1H,d,J=8.06Hz),2.81-2.85(3H,m),2.64(1H,q,J=8.23Hz),2.25(1H,td,J=8.37,5.67Hz),1.70-1.79(1H,m),1.26-1.48(3H,m),1.06-1.15(1H,m),0.85-0.95(1H,m)]；和呈二TFA盐形式的化合物16(0.008g,0.011mmol,12%收率)[其为白色固体。LC/MS m/z 469(M+H)+470.28,RT=1.61分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm8.97(1H,s),8.58(1H,dd,J=6.04,1.51Hz),8.34(1H,td,J=7.93,1.76Hz),7.79-7.85(1H,m),7.71-7.78(5H,m),7.32-7.38(2H,m),2.86-2.90(3H,m),2.59-2.67(1H,m),2.13-2.20(1H,m),1.68-1.76(2H,m),1.60-1.66(1H,m),1.54-1.59(2H,m),1.47(1H,ddd,J=8.56,6.30,4.78Hz)]。
2-(4-氟苯基)-6-(3-(异丁基氨甲酰基)-4-(吡啶-3-基)苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(19)
步骤1：制备化合物17
向化合物4(0.10g,0.29mmol)于二噁烷(1mL)和水(0.2mL)中的溶液中加入5-二羟硼基-2-氯苯甲酸(0.087g,0.44mmol)和CS2CO3(0.14g,0.44mmol)。搅拌反应混合物并脱气5分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(7mg,6μmol)。将反应混合物在85℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释。有机相用1N HCl和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物17，其为浅黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z423(M+H)+424.10,RT=2.40分钟
步骤2：制备化合物18
向化合物17(0.12g,0.28mmol)于DMF(2mL)中的溶液中加入EDC(0.081g,0.43mmol)、HOBT(0.065g,0.43mmol)、DIEA(0.15mL,0.85mmol)和异丁基胺(0.042mL,0.43mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到浅黄色固体。将固体混悬在二氯甲烷中并加载到40g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-15%MeOH/CH2Cl2洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物18(0.050g,0.10mmol,37%收率)，其为浅黄色固体。LC/MS m/z 478(M+H)+479.26,RT=2.66分钟。
步骤3：制备化合物19
向微波瓶中加入化合物18(0.050g,0.104mmol)、吡啶-3-基硼酸(0.038g,0.313mmol)、Pd(OAc)2(4.69mg,0.021mmol)、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯(8.57mg,0.021mmol)、磷酸钾(0.089g,0.418mmol)、二噁烷(1mL)和水(0.100mL)。将反应混合物脱气并用氮气填充。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热15分钟。反应混合物用EtOAc稀释饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色残留物。将残留物溶解在MeOH和DMF中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。将来自主要峰的馏分蒸发，得到白色固体。将固体溶解在二氯甲烷和CHCl3中并加载到4g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-15%MeOH/CH2Cl2洗脱。将含有所需产物的馏分浓缩，得到化合物19(0.004g,7μmol,6%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 521.58(M+H)+522.25,RT=2.05分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 9.77(1H,s),8.72(1H,宽单峰),8.62(1H,宽单峰),7.88(1H,d,J=2.01Hz),7.86(1H,d,J=8.06Hz),7.74-7.81(2H,m),7.65-7.73(3H,m),7.47(1H,d,J=8.06Hz),7.39(1H,dd,J=7.55,5.04Hz),7.19-7.24(2H,m),5.78(1H,宽单峰),5.61(1H,t,J=5.79Hz),3.07(2H,t,J=6.42Hz),2.88(3H,d,J=4.78Hz),1.60(1H,dt,J=13.41,6.77Hz),0.68-0.76(6H,m)。
2-(4-氟苯基)-6-(2-(异丁基氨甲酰基)联苯-4-基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(20)
Figure BDA00002387178601781
步骤1：制备化合物20
向微波瓶中加入化合物18(0.030g,0.063mmol)、苯基硼酸(0.023g,0.19mmol)、PdOAc2(3mg,0.01mmol)、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯(5mg,0.01mmol)、磷酸钾(0.053g,0.25mmol)、二噁烷(1mL)和水(0.1mL)。将反应混合物脱气并用氮气填充。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热15分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体。将固体溶解在MeOH和DMF中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到化合物20单TFA盐(0.024g,0.036mmol,58%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 520(M+H)+521.12,RT=2.88分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 9.39(1H,s),8.31(1H,dd,J=9.32,1.51Hz),7.98(1H,d,J=9.32Hz),07.88(1H,dd,J=8.06,2.01Hz),7.76-7.85(3H,m),7.60(1H,d,J=8.06Hz),7.45-7.51(2H,m),7.32-7.45(5H,m),2.96-3.00(2H,m),2.89(3H,s),1.63(1H,dt,J=13.53,6.70Hz),0.71(6H,d,J=6.80Hz)。
6-(2’-氯-2-(异丁基氨甲酰基)联苯-4-基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺(21)
Figure BDA00002387178601791
步骤1：制备化合物21
向微波瓶中加入化合物18(0.030g,0.063mmol)、2-氯苯基硼酸(0.029g,0.19mmol)、PdOAc2(2.8mg,0.01mmol)、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯(5mg,0.01mmol)、磷酸钾(0.053g,0.25mmol)、二噁烷(1mL)和水(0.1mL)。将反应混合物脱气并用氮气填充。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热15分钟。反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体。将固体溶解在MeOH和DMF中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到黄色残留物。将残留物溶解在二氯甲烷中并加载到4g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为15分钟的0-100%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物21(0.003g,4μmol,6%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z554(M+H)+555.15,RT=3.16分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 9.27(1H,s)7.84-7.92(3H,m)7.73-7.80(3H,m)7.38-7.48(3H,m)7.32-7.37(2H,m)7.21-7.29(2H,m)3.00(2H,d,J=6.80Hz)2.87(3H,s)1.61-1.66(1H,m)0.77(7H,d,J=6.80Hz)。
6-(2-氯-4-甲氧基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(23)
Figure BDA00002387178601801
步骤1：制备化合物22
向化合物4(0.040g,0.12mmol)于二噁烷(2mL)和水(0.4mL)中的溶液中加入5-二羟硼基-4-氯-2-甲氧基苯甲酸(0.040g,0.17mmol)和CS2CO3(0.056g,0.17mmol)。搅拌反应混合物并脱气5分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(3mg,3μmol)。将反应混合物在85℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释且有机相用5%枸橼酸和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物22(0.052g,0.12mmol)，其为浅黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z 453(M+H)+454.10,RT=2.37分钟。
步骤2：制备化合物23
向化合物22(0.052g,0.12mmol)于DMF(1mL)中的溶液中加入1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.020g,0.12mmol)、EDC(0.022g,0.12mmol)、HOBT(0.018g,0.12mmol)和DIEA(0.080mL,0.46mmol)。将反应混合物在室温搅拌。将反应混合物溶解在MeOH中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到澄清油状物。将油状物溶解在二氯甲烷中并加载到4g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-15%MeOH/CH2Cl2洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物23(0.006g,10μmol,9%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 569(M+H)+570.01,RT=2.206分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 9.00(1H,s),8.40(1H,d,J=4.03Hz),7.90(1H,s),7.73-7.78(2H,m),7.66-7.73(2H,m),7.52-7.60(2H,m),7.41(1H,s),7.21-7.27(2H,m),7.15(1H,ddd,J=7.43,4.91,1.26Hz),4.06(3H,s),2.82(3H,s),1.63-1.68(2H,m),1.34-1.38(2H,m)。
2-(4-氟苯基)-N,7-二甲基-6-(2-甲基-5-(2-苯基丙-2-基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺(28)
Figure BDA00002387178601821
步骤1：制备化合物24
向化合物1(3g,12.8mmol)于乙醇(16mL)中的溶液中加入5-氯-4-甲基吡啶-2-胺(2g,14.0mmol)，将反应混合物在70℃在氮气下搅拌16小时。将反应混合物在EtOAc中稀释，用饱和NaHCO3、水和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物。将油状物溶解在DCM中并加载到80g硅胶柱上，所述柱用梯度时间为20分钟的0-80%EtOAc/己烷洗脱。浓缩含有所需产物的馏分，得到化合物24(1.2g,3.5mmol,27%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 332(M+H)+333,RT=1.96分钟[Phenomenex Luna C183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤2：制备化合物25
向化合物24(0.8g,2.4mmol)于THF(8mL)和MeOH(2mL)中的溶液中加入1N NaOH(6mL,6mmol)。将反应混合物在45℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去大部分溶剂。反应残留物用1N HCl酸化，析出白色固体。过滤固体并干燥，得到化合物25(0.58g,1.9mmol,79%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 304(M+H)+305.1,RT=1.58分钟[Phenomenex LunaC183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤3：制备化合物26
向化合物25(0.58g,1.9mmol)于DMF(5mL)中的溶液中加入EDC(0.55g,2.9mmol)、HOBT(0.44g,2.9mmol)、盐酸甲胺(0.26g,3.8mmol)和DIEA(1.0mL,5.7mmol)。将反应混合物在50℃搅拌2小时。反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3和饱和NaCl洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到化合物26(0.60g,1.9mmol)，其为黄色固体。粗产物不经进一步纯化即使用。LC/MS m/z 317(M+H)+318.11,RT=1.257分钟[Phenomenex Luna C183.0×50mm,2分钟梯度,0-100%B(A:90/10/0.1H2O/MeOH/TFA;B:90/10/0.1MeOH/H2O/TFA)]。
步骤4：制备化合物27
向微波瓶中加入化合物26(0.030g,0.09mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(0.025g,0.09mmol)、PdOAc2(4mg,0.02mmol)、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯(8mg,0.02mmol)、磷酸钾(0.060g,0.3mmol)、二噁烷(1mL)和水(0.1mL)。将反应混合物脱气并用氮气填充。将反应混合物在微波反应器中在130℃加热15分钟。将反应残留物溶解在MeOH和DMF中，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发，得到化合物27(0.040g,0.09mmol,100%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 417(M+H)+418.35,RT=2.35分钟。
步骤5：制备化合物28
向化合物27(0.040g,0.09mmol)于DMF(8mL)中的溶液中加入O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(0.058g,0.18mmol)、TEA(0.033mL,0.24mmol)和2-苯基丙-2-胺(0.016g,0.12mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应混合物在MeOH中稀释，过滤并通过反相制备性HPLC来纯化。来自主要峰的馏分用SpeedVac蒸发过夜，得到化合物28单TFA盐(0.012g,0.018mmol,15%收率)，其为白色固体。LC/MS m/z 534(M+H)+535.19,RT=2.79分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)ppm 8.90(1H,s),7.87(1H,dd,J=8.06,1.76Hz),7.83(1H,s),7.76-7.81(2H,m),7.64(1H,d,J=2.01Hz),7.49(1H,d,J=8.06Hz),7.33-7.44(4H,m),7.23-7.30(2H,m),7.11-7.18(1H,m),2.79-2.85(3H,m),2.28(3H,s),2.19(3H,s),1.73(6H,s)。
Figure BDA00002387178601841
3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基硼酸
将4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.45g,1.80mmol)、5-氯-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.50g,1.18mmol)、乙酸钾(0.35g,3.56mmol)、2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯(0.011g,0.024mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.011g,0.012mmol)在圆底烧瓶中合并且用氮气真空吹洗。加入二噁烷(2.4mL)且将混合物在70℃搅拌3小时。将混合物冷却至室温，过滤除去固体且浓缩成残留物。残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M TFA,0-100%B(B=10%H2O/CH3OH)/A(A=90%H2O/CH3OH),12分钟梯度)来纯化，得到3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-5-基硼酸，其为白色固体。LCMS保留时间:2.820分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 432(MH+)。
Figure BDA00002387178601851
5-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯
将溴(3.59mL,69.7mmol)滴加到冷却的(0℃,冰浴)含有氢氧化钠(15.6g,390mmol)和水(120mL)的溶液中。将溶液在0℃保持15分钟并温热至室温。加入2-羟基-6-甲基吡啶-3-甲酸，将所得溶液保持20分钟。将溶液再次冷却(0℃,冰浴)并通过滴加浓盐酸(20mL)来酸化至pH 1-2。析出呈白色固体形式的5-溴-2-羟基-6-甲基吡啶-3-甲酸且过滤收集。其用水(500mL)洗涤并风干。m/z 233(MH+)。
向含有由此得到的5-溴-2-羟基-6-甲基吡啶-3-甲酸(5.0g,21.5mmol)、碘甲烷(8.08mL,129mmol)和氯仿(431mL)的溶液中加入碳酸银(29.7g,108mmol)。将混合物避光快速搅拌4天，用硅藻土过滤并浓缩成残留物。残留物用硅胶(25-100%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度,240g柱)进行纯化，得到5-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯，其为白色固体。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.23(1H,s),3.97(3H,m),3.87(3H,s),2.58(3H,s)。LCMS保留时间:2.382分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 261(MH+)。
Figure BDA00002387178601861
5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯
向脱气的含有二乙酸钯(II)(0.014g,0.063mmol)和DMF(0.70mL)的溶液中加入1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁。将溶液加热至50℃并保持15分钟。将溶液冷却至室温并加入3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基硼酸(0.10g,0.21mmol)和5-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯(0.054g,0.21mmol)。然后加入三乙胺且将溶液在90℃加热3小时。将混合物冷却至室温，过滤除去固体且浓缩。用硅胶(0-75%乙酸乙酯/己烷,60分钟梯度,25g柱)进行纯化，得到5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯，其为白色残留物。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.60(1H,d,J=7.03Hz),8.13(1H,s),7.77(2H,d,J=3.26Hz),7.75(1H,s),7.24(2H,s),6.99(1H,s),4.07(3H,s),3.89(3H,s),3.29(3H,s),2.45(3H,s),1.01-1.13(9H,m)。LCMS保留时间:3.803分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mMTFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z567(MH+)。
Figure BDA00002387178601871
5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯
在室温向含有5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯(0.07g,0.13mmol)和二氯甲烷(2.5mL)的溶液中加入TFA(0.39mL,5.0mmol)。将溶液保持15分钟并浓缩至干，得到5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯，其为棕色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS保留时间:1.777分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 489(MNa+)。
Figure BDA00002387178601872
5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸
向含有5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯(0.041g,0.088mmol)和二噁烷(0.44mL)的溶液中加入氢氧化钠水溶液(0.44mL,2.0M)。将溶液在室温保持18小时。用HCl水溶液(1.0mL,1.0N)将溶液调整至pH低于4。滤出以白色固体形式析出的5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸，用水(3×2mL)洗涤并风干。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.98(1H,宽单峰),8.73(1H,d,J=7.03Hz),8.44(1H,q,J=4.52Hz),8.06(1H,s),7.87-7.98(2H,m),7.29-7.39(2H,m),7.04(1H,t,J=7.03Hz),3.98(3H,s),2.76(3H,d,J=4.52Hz),2.42(3H,s)。LCMS保留时间:1.798分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为5分钟，其中溶剂A为5%CH3CN/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3CN/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 453(MH+)。
Figure BDA00002387178601881
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.0067g,0.040mmol)、二异丙基乙基胺(0.14mL,0.79mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸(0.018g,0.040mmol)和DMF(0.27mL)的溶液中一次性加入HATU(0.030g,0.080mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:13.94分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.54(1H,d,J=7.03Hz),8.16(1H,s),7.84-7.95(2H,m),7.29(4H,d,J=4.27Hz),7.14-7.26(3H,m),6.93(1H,t,J=6.90Hz),4.18(3H,s),2.85-2.96(3H,m),2.48(3H,s),1.37(4H,d,J=6.27Hz)。LCMS保留时间:1.847分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 568(MH+)。
Figure BDA00002387178601891
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(吡啶-2-基)环丙胺盐酸盐(0.0078g,0.046mmol)、二异丙基乙基胺(0.049mL,0.28mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸(0.016g,0.035mmol)和DMF(0.24mL)的溶液中一次性加入HATU(0.027g,0.071mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:12.49分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm8.55(1H,d,J=7.03Hz),8.41-8.46(1H,m),8.20(1H,s),7.82-7.93(2H,m),7.72(1H,td,J=7.78,1.76Hz),7.52(1H,d,J=8.03Hz),7.15-7.27(3H,m),6.95(1H,t,J=6.90Hz),4.19(3H,s),2.91(3H,s),2.49(3H,d,J=1.00Hz),1.65-1.73(2H,m),1.36-1.42(2H,m)。LCMS保留时间:1.695分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10μ,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 569(MH+)。
Figure BDA00002387178601901
5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.0067g,0.040mmol)、二异丙基乙基胺(0.43mL,0.25mmol)、2-(二氟甲氧基)-5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-6-甲基吡啶-3-甲酸(0.015g,0.031mmol)和DMF(0.21mL)的溶液中一次性加入HATU(0.023g,0.061mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.1分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.46-8.49(1H,m),8.39(1H,d,J=7.03Hz),7.98(1H,s),7.78-7.89(2H,m),7.73(1H,s),7.29-7.39(5H,m),7.14-7.25(3H,m),6.71(1H,t,J=6.78Hz),5.80(1H,d,J=4.52Hz),2.98(3H,d,J=4.77Hz),2.49(3H,d,J=1.25Hz),1.41(4H,d,J=1.00Hz)。LCMS保留时间:1.823分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 604(MH+)。
5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.0082g,0.040mmol)、二异丙基乙基胺(0.43mL,0.25mmol)、2-(二氟甲氧基)-5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-6-甲基吡啶-3-甲酸(0.015g,0.031mmol)和DMF(0.21mL)的溶液中一次性加入HATU(0.023g,0.061mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.2分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.47-8.56(2H,m),8.40(1H,d,J=7.03Hz),8.09(1H,宽单峰),7.80-7.90(2H,m),7.75(1H,s),7.57(1H,s),7.42(1H,d,J=8.03Hz),7.09-7.22(3H,m),6.73(1H,t,J=6.78Hz),5.80(1H,d,J=4.52Hz),2.98(3H,d,J=5.02Hz),2.51(3H,d,J=1.25Hz),1.77-1.86(2H,m),1.39-1.50(2H,m)。LCMS保留时间:2.288分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 605(MH+)。
Figure BDA00002387178601921
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(嘧啶-2-基)环丙胺盐酸盐(0.0058g,0.034mmol)、二异丙基乙基胺(0.36mL,0.21mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-6-甲基-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-甲酸(0.014g,0.026mmol)和DMF(0.17mL)的溶液中一次性加入HATU(0.020g,0.052mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.6分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.65(2H,d,J=5.02Hz),8.55(1H,d,J=7.03Hz),8.25(1H,s),7.83-7.93(2H,m),7.18-7.28(3H,m),6.95(1H,t,J=6.90Hz),4.52(2H,d,J=6.27Hz),3.99(2H,dd,J=11.29,3.01Hz),3.48(2H,td,J=11.80,2.01Hz),2.88-2.94(3H,m),2.48(3H,d,J=1.00Hz),2.17-2.29(1H,m),1.83(1H,d,J=1.76Hz),1.75-1.82(3H,m),1.48-1.60(4H,m)。LCMS保留时间:2.333分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 654(MH+)。
Figure BDA00002387178601931
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(吡啶-2-基)环丙胺二盐酸盐(0.0054g,0.026mmol)、二异丙基乙基胺(0.36mL,0.21mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-6-甲基-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-甲酸(0.014g,0.026mmol)和DMF(0.17mL)的溶液中一次性加入HATU(0.020g,0.052mmol)。将溶液在室温保持1小时并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C 18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.1分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.55(1H,d,J=7.03Hz),8.44(1H,d,J=4.02Hz),8.14(1H,s),7.82-7.94(2H,m),7.72(1H,td,J=7.65,1.76Hz),7.53(1H,d,J=8.03Hz),7.15-7.28(3H,m),6.94(1H,t,J=6.90Hz),4.50(2H,d,J=6.53Hz),4.00(2H,dd,J=11.29,3.26Hz),3.48(2H,td,J=11.73,1.88Hz),2.90(3H,s),2.47(3H,s),2.18-2.30(1H,m),1.80(2H,dd,J=13.05,1.76Hz),1.65-1.73(2H,m),1.48-1.60(2H,m),1.34-1.42(2H,m)。LCMS保留时间:2.332分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为4分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 653(MH+)。
Figure BDA00002387178601941
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(4-氟吡啶-2-基)环丙胺(0.011g,0.044mmol)、二异丙基乙基胺(0.62mL,0.35mmol)、5-(4-氟-2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲酸(0.020g,0.044mmol)和DMF(0.30mL)的溶液中一次性加入HATU(0.034g,0.088mmol)。将溶液在室温保持15分钟并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:11.0分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm8.55(1H,d,J=7.03Hz),8.44(1H,dd,J=8.66,5.65Hz),8.17(1H,s),7.83-7.93(2H,m),7.19-7.31(3H,m),6.91-7.01(2H,m),4.20(3H,s),2.91(3H,s),2.49(3H,d,J=1.00Hz),1.69-1.77(2H,m),1.38-1.46(2H,m)。LCMS保留时间:2.018分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×30mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 587(MH+)。
Figure BDA00002387178601951
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡嗪-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(吡嗪-2-基)环丙胺2,2,2-三氟乙酸盐(0.014g,0.058mmol)、二异丙基乙基胺(0.050mL,0.30mmol)、5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.020g,0.036mmol)和DMF(0.24mL)的溶液中一次性加入HATU(0.027g,0.073mmol)。将溶液在室温保持15分钟。然后先后加入二氯甲烷(0.25mL)和三氟乙酸(0.078mL，1.0mmol)。将溶液再保持15分钟并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡嗪-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:10.6分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.70(1H,d,J=1.51Hz),8.51(1H,s),8.50(1H,dd,J=3.51,1.76Hz),8.35(1H,d,J=2.51Hz),7.84-7.90(2H,m),7.79(1H,s),7.17-7.26(3H,m),6.89(1H,t,J=6.90Hz),4.09(3H,s),2.90(3H,s),2.36(3H,s),1.69-1.75(2H,m),1.41-1.46(2H,m)。LCMS保留时间:1.942分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的Micromass Platform以电喷雾模式来确定。m/z 569(MH+)。
Figure BDA00002387178601961
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-羟基嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有2-(1-氨基环丙基)嘧啶-4-醇盐酸盐(0.025g,0.13mmol)、二异丙基乙基胺(0.15mL,0.89mmol)、5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.070g,0.11mmol)和DMF(0.74mL)的溶液中一次性加入HATU(0.085g,0.22mmol)。将溶液在室温保持15分钟。然后先后加入二氯甲烷(0.22mL)和三氟乙酸(0.068mL,0.88mmol)。将溶液再保持15分钟并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-羟基嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.4分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.50(1H,d,J=7.03Hz),7.78-7.90(4H,m),7.17-7.29(3H,m),6.87(1H,t,J=6.90Hz),6.22(1H,宽单峰),4.10(3H,s),2.87-2.93(3H,m),2.30-2.39(3H,m),1.81(2H,宽单峰),1.40-1.48(2H,m)。LCMS保留时间:1.798分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 585(MH+)。
Figure BDA00002387178601971
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(哒嗪-4-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺
向含有1-(哒嗪-4-基)环丙胺三氟乙酸盐(0.018g,0.076mmol)、二异丙基乙基胺(0.076mL,0.44mmol)、5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨甲酰基)-4-氟-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.030g,0.054mmol)和DMF(0.37mL)的溶液中一次性加入HATU(0.041g,0.11mmol)。将溶液在室温保持15分钟。然后先后加入二氯甲烷(0.36mL)和三氟乙酸(0.11mL,1.4mmol)。将溶液再保持15分钟并浓缩。所得残留物使用制备性HPLC(Waters-Xbridge,50×100mm,5微米,C18柱;0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)来纯化，得到4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(哒嗪-4-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间:9.7分钟。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 9.05-9.15(3H,m),8.50(1H,d,J=7.03Hz),7.83-7.92(2H,m),7.76-7.80(1H,m),7.56(1H,dd,J=5.65,2.64Hz),7.15-7.26(3H,m),6.88(1H,t,J=6.78Hz),4.04-4.13(3H,m),2.88-2.92(3H,m),2.36(3H,s),1.63(5H,s)。LCMS保留时间:1.798分钟。LC数据用配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0×30mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱记录，其中使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，且分析时间为3分钟，其中溶剂A为5%CH3OH/95%H2O/10mM乙酸铵且溶剂B为5%H2O/95%CH3OH/10mM乙酸铵。MS数据使用针对LC的MicromassPlatform以电喷雾模式来确定。m/z 569(MH+)。
本领域技术人员应该理解的是，本发明不限于上述示例性实施例，且在不背离本发明基本属性的情况下，本发明可按其它具体形式来实施。因此，应该理解的是，所述实施例在各个方面都应该被视为示例性而非限制性，应该参考所附权利要求书而非上述实施例，且因此落入权利要求书的等价意义和范围内的所有变化形式都应该包括在本发明范围内。

Claims (3)

1.权利要求1的化合物或其药用盐，所述化合物选自：
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(6-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺；
5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺；
5-(6-(二氟甲氧基)-2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)-4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-(吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-氟吡啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(吡嗪-2-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺；
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(5-(1-(4-羟基嘧啶-2-基)环丙基氨甲酰基)-4-甲氧基-2-甲基苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺；和
4-氟-2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(哒嗪-4-基)环丙基氨甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酰胺。
2.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药用盐和药用载体。
3.治疗丙型肝炎感染的方法，所述方法包括向患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106459070A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 百时美施贵宝公司 用于治疗丙型肝炎的含有氰基的氮杂苯并呋喃化合物
CN110759860A (zh) * 2018-07-27 2020-02-07 江苏瑞科医药科技有限公司 一种3-甲酸甲酯-4-甲氧基-5-氰基吡啶的制备方法

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103298791B (zh) * 2010-10-20 2016-02-03 生物科学管理有限责任公司 病毒聚合酶抑制剂
MX2013004655A (es) 2010-10-26 2013-08-27 Presidio Pharmaceuticals Inc Inhibidores del virus de la hepatitis c.
US8785478B2 (en) 2012-04-11 2014-07-22 Biota Scientific Management Pty Ltd. Viral polymerase inhibitors
US8962651B2 (en) * 2013-03-13 2015-02-24 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C
JP6510559B2 (ja) 2014-05-08 2019-05-08 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺線虫剤としてのピラゾロピリジンスルホンアミド類
WO2016022513A1 (en) * 2014-08-05 2016-02-11 Bristol-Myers Squibb Company Furopyridine compounds for the treatment of hepatitis c
WO2017015449A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzodiazepine derivatives as rsv inhibitors
TWI773657B (zh) 2015-12-18 2022-08-11 美商亞德利克斯公司 作爲非全身ｔｇｒ５促效劑之經取代之4-苯基吡啶化合物
KR20210138684A (ko) 2019-03-18 2021-11-19 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 Rsv 억제제로서의 벤조디아제핀 유도체
EP4037688A4 (en) 2019-10-04 2023-09-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. ANTIVIRAL HETEROCYCLIC COMPOUNDS
US11505558B1 (en) 2019-10-04 2022-11-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Antiviral heterocyclic compounds
US11945824B2 (en) 2020-10-19 2024-04-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds as anti-viral agents
UY39642A (es) * 2021-02-26 2022-09-30 Enanta Pharm Inc Compuestos heterocíclicos antivirales
WO2023227698A1 (en) * 2022-05-25 2023-11-30 Katholieke Universiteit Leuven New derivatives for treating trpm3 mediated disorders

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040162318A1 (en) * 2002-11-01 2004-08-19 Saha Ashis K. Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis C viral infections and associated diseases
US20060189606A1 (en) * 2004-07-14 2006-08-24 Karp Gary M Methods for treating hepatitis C

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007084435A2 (en) * 2006-01-13 2007-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis c
JP2010535773A (ja) * 2007-08-10 2010-11-25 グラクソスミスクライン エルエルシー ウイルス感染を治療するための窒素含有二環式化学物質
US8198449B2 (en) * 2008-09-11 2012-06-12 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C
US8293909B2 (en) * 2008-09-11 2012-10-23 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040162318A1 (en) * 2002-11-01 2004-08-19 Saha Ashis K. Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis C viral infections and associated diseases
US20060189606A1 (en) * 2004-07-14 2006-08-24 Karp Gary M Methods for treating hepatitis C

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106459070A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 百时美施贵宝公司 用于治疗丙型肝炎的含有氰基的氮杂苯并呋喃化合物
CN110759860A (zh) * 2018-07-27 2020-02-07 江苏瑞科医药科技有限公司 一种3-甲酸甲酯-4-甲氧基-5-氰基吡啶的制备方法
CN110759860B (zh) * 2018-07-27 2022-10-14 江苏瑞科医药科技有限公司 一种3-甲酸甲酯-4-甲氧基-5-氰基吡啶的制备方法

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