CN102885824B - Gypensapogenin A在治疗缺血性脑损伤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了GypensapogeninA在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。本发明涉及的GypensapogeninA在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑损伤显然具有显著的进步。
Description
技术领域
本发明涉及Gypensapogenin A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。
背景技术
本发明人通过大量的实验发现，Gypensapogenin A有抗缺血性脑损伤、抗脑缺血/再灌注损伤的药理作用，具有预防或者治疗缺血性脑损伤的医药用途。
本发明涉及的化合物Gypensapogenin A是一个2012年发表（Li, N.et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry 50, 173–178.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及人肿瘤细胞株的细胞毒活性（Li, N. et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry 50, 173–178.），对于本发明涉及的Gypensapogenin A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑损伤显然具有显著的进步。
发明内容
本发明提供了Gypensapogenin A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。
所述化合物Gypensapogenin A结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）
本发明涉及的Gypensapogenin A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑损伤显然具有显著的进步。
本发明人通过具体实施方式中的实验证明了Gypensapogenin A具有治疗或预防缺血性脑损伤的作用。
具体实施方式
本发明所涉及化合物Gypensapogenin A的制备方法参见文献（Li,N. et al., 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal ofMedicinal Chemistry 50, 173–178.和Wei, J.X. et al.,1982. Two new dammaran sapogenins from leaves of Panax notoginseng. Planta Medica, 45(3): 167-171.）。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物Gypensapogenin A片剂的制备：
取20克化合物Gypensapogenin A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物Gypensapogenin A胶囊剂的制备：
取20克化合物Gypensapogenin A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
实验例1：Gypensapogenin A对大鼠局部脑缺血损伤的影响
（1）实施材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190~210g。 阳性对照药：天保宁，康恩贝集团制药有限公司生产，每片含银杏叶精提取物40mg。
（2）方法与结果
1）Gypensapogenin A对大鼠中动脉血栓（MCAO）模型试验
将60只大鼠随机分为六组，即假手术对照组、MCAT模型组、给药组3组，天保宁组（24mg/kg）。造模前灌胃给药，一日一次，共给药七次，假手术对照组、MCAT模型组、给予等量的饮用水（1ml/100g），造模后灌胃给药一次。大鼠腹腔注射12%水合氯醛溶液（350mg/kg）麻醉，大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约115cm，夹断颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处做一直径215mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉（位于嗅束及大脑下静脉之间）。将吸有50%氯化铁溶液10ul的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上30min后，取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。假手术组除不滴加氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。
MCAT大鼠神经症状和梗塞范围的评定：在手术不同时间（6h，24h），按Bederson等方法并加以改进，对动物进行行为评分。1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、时屈曲、肩内旋或既有腕时的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检测阻力。如双侧阻力对等且有力者记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转着，记为1分；否则记为0分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组间比较，t检验。结果见表1。动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在4℃下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中（每5ml染液中含4%TTC1.5ml，1M K2HPO40.1ml），37℃避光温孵30min，再取出置于10%甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占右侧半脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验，结果见表2。
表1 Gypensapogenin A对MCAT大鼠脑梗塞范围及神经症状的影响（n=10）
注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
表2 Gypensapogenin A对光化学诱导脑血栓形成大鼠脑梗塞的影响（n=10）
注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
结果显示，除假手术未见行为异常改变，MCAT模型组大鼠在术后6h、24h均出现偏瘫样症状。给药组与天保宁组的大鼠在术后6h、24h其神经症状均有不同程度的改善（P<0.01，P<0.05）。术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组相比具有显著差异（P<0.01，P<0.05）。Gypensapogenin A可减轻梗塞灶，结果显示出一定的量效关系。
实验例2：Gypensapogenin A对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的影响
（1）实验材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190~210g。MDA，SOD，蛋白定量（考马斯亮蓝）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
（2）方法与结果
1）实验方法：120只大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、3个给药组，每组25只。除假手术组不插线外，其余4组造模（MCAO）。给药组各剂量组ig每天1次，连续13d。术前1h ig 再给药1次。6%水合氯醛（350mg/kg）腹腔麻醉，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）。结扎颈总动脉近心端、颈外动脉起始端后，在颈总动脉处剪一“V”形小口，沿颈总动脉插入线栓（线栓采用直径为0.235mm的鱼线，头端烧成球状，并于距线球18.5mm处作标记）经颈内动脉向颅内插至大脑中动脉分支叉处，插入深度为18~20mm，将线与颈内动脉一起结扎。术中维持体温（37±015）℃。在灌注时外拉线使球端回至ECA，拔除插线，结扎ECA即可。假手术组除不插线外，其余步骤同上。大脑中动脉栓塞后2h恢复血供，神经行为学评分参照ZeaLonga5分制标准，术后出现左前肢屈曲，行走时向左侧转圈即视为造模成功，然后保温常规饲养，至24h断头处死取材。实验过程中，因麻醉意外、MCAO手术失败、造模不成功及24h内死亡的均弃去不用。
脑组织含水量的测定：大鼠造模24h后断头取脑，称量两侧半脑湿重。再置于烘箱中，100℃烘烤24h至恒重，精确称量干重，计算含水量。脑组织含水量=（湿重-干重）/湿重×100%。
脑梗塞体积测定：断头取脑，将大脑作连续2mm冠状切片，共5片，然后将脑片放入2%TTC磷酸盐缓冲液中37℃恒温孵育30min，正常脑组织染为红色，梗死灶呈白死。滤纸吸去表面液体后用刀片小心刻取未着色部分的质量百分比，以此反应梗死体积比。
脑组织匀浆SOD活力、MDA含量的检测：右侧半脑称重后按1：10加入冰生理盐水制成匀浆，参照SOD、MDA试剂盒说明书，检测脑组织中SOD、MDA含量。
应用SPSS 13.0 for windows 软件对数据进行处理；计量数据以x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析。
2）结果
脑组织含水量：左脑组织含水量各组间相比无统计学意义，模型组右脑组织含水量明显高于各组（P<0.05），高于假手术组（P<0.05），给药组各剂量组可降低模型脑组织含水量（P<0.05）（表3）。
表3 Gypensapogenin A对脑组织含水量、梗死体积、SOD、MDA含量的影响（n=8）
与模型组相比*p<0.05
脑梗塞体积：模型组脑组织脑梗塞体积高于各组（P<0.05），给药组各剂量组可降低模型脑组织梗死体积（P<0.05）。
结论： Gypensapogenin A可减少脑缺血后脑组织水肿，缩小梗死体积，提高SOD活性，降低MDA含量，减轻自由基反应对脑组织的损害，对缺血脑组织具有明显的保护作用。Gypensapogenin A可以用于制备治疗缺血性脑损伤药物。
Claims (1)
1.Gypensapogenin A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，所述化合物Gypensapogenin A结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）。
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