CN103462994A - Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，属于药物新用途技术领域。Neonectrolide A对治疗缺血性脑损伤具有治疗作用，因此具有良好的开发应用前景，属于首次公开，而且其对于治疗缺血性脑损伤活性强。

Description

Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及化合物Neonectrolide A的新用途，尤其涉及Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。

背景技术

本发明人通过大量的实验发现，Neonectrolide A有抗缺血性脑损伤、抗脑缺血/再灌注损伤的药理作用，具有预防或者治疗缺血性脑损伤的医药用途。

本发明涉及的化合物Neonectrolide A是一个2012年发表（Jinwei Ren,et al.,Neonectrolide A,a New Oxaphenalenone Spiroketal from the Fungus Neonectria sp.Organic Letters，2012,14（24）6226–6229.）的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅抑制部分肿瘤细胞增殖（Jinwei Ren,et al.,Neonectrolide A,a NewOxaphenalenone Spiroketal from the Fungus Neonectria sp.Organic Letters，2012,14（24）6226–6229.），本发明涉及的Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开。

发明内容

本发明的目的在于根据现有Neonectrolide A研究中未发现其具有治疗缺血性脑损伤的报道的现状，提供了Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。

所述化合物Neonectrolide A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）

本发明涉及的Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑损伤显然具有显著的进步。

本发明人通过具体实施方式中的实验证明了Neonectrolide A具有治疗或预防缺血性脑损伤的作用。

具体实施方式

本发明所涉及化合物Neonectrolide A的制备方法参见文献（Sheng-Dian Huang，etal.,2012.Neonectrolide A，a New Alkaloid with an Unprecedented HeteropentacyclicSkeleton from Myrioneuron faberi.Organic Letters3(15),590–593.）

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物Neonectrolide A片剂的制备：

取5克化合物Neonectrolide A加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物Neonectrolide A胶囊剂的制备：

取5克化合物Neonectrolide A加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例1：Neonectrolide A对大鼠局部脑缺血损伤的影响

（1）实施材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，南京医科大学实验动物中心。阳性对照药：天保宁，康恩贝集团制药有限公司生产，每片含银杏叶精提取物40mg。

（2）方法与结果

1）Neonectrolide A对大鼠中动脉血栓（MCAO）模型试验

将60只大鼠随机分为六组，即假手术对照组、MCAO模型组、给药组3组，天保宁组（24mg/kg）。造模前灌胃给药，一日一次，共给药七次，假手术对照组、MCAT模型组、给予等量的饮用水（1ml/100g），造模后灌胃给药一次。大鼠腹腔注射12%水合氯醛溶液（350mg/kg）麻醉，大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约115cm，夹断颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处做一直径215mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉（位于嗅束及大脑下静脉之间）。将吸有50%氯化铁溶液10ul的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上30min后，取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。假手术组除不滴加氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。MCAO大鼠神经症状和梗塞范围的评定：在手术不同时间（6h，24h），按Bederson等方法并加以改进，对动物进行行为评分。1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、时屈曲、肩内旋或既有腕时的屈曲又有内旋者，记为1分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检测阻力。如双侧阻力对等且有力者记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转着，记为1分；否则记为0分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组间比较，t检验。结果见表1。动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在4℃下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中（每5ml染液中含4%TTC1.5ml，1M K₂HPO₄0.1ml），37℃避光温孵30min，再取出置于10%甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占右侧半脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验，结果见表2。

表1Neonectrolide A对MCAO大鼠脑梗塞范围及神经症状的影响（n=10）

注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

表2Neonectrolide A对光化学诱导脑血栓形成大鼠脑梗塞的影响（n=10）

注：与模型组相比*p<0.05，**p<0.01。

结果显示，除假手术未见行为异常改变，MCAO模型组大鼠在术后6h、24h均出现偏瘫样症状。给药组与天保宁组的大鼠在术后6h、24h其神经症状均有不同程度的改善（P<0.01，P<0.05）。术后24h，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组相比具有显著差异（P<0.01，P<0.05）。Neonectrolide A可减轻梗塞灶，结果显示出一定的量效关系。

实验例2：Neonectrolide A对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的影响

（1）实验材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g。MDA，SOD，蛋白定量（考马斯亮蓝）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

（2）方法与结果

1）实验方法：120只大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、3个给药组，每组25只。除假手术组不插线外，其余4组造模（MCAO）。给药组各剂量组ig每天1次，连续13d。术前1h ig再给药1次。6%水合氯醛（350mg/kg）腹腔麻醉，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）。结扎颈总动脉近心端、颈外动脉起始端后，在颈总动脉处剪一“V”形小口，沿颈总动脉插入线栓（线栓采用直径为0.235mm的鱼线，头端烧成球状，并于距线球18.5mm处作标记）经颈内动脉向颅内插至大脑中动脉分支叉处，插入深度为18～20mm，将线与颈内动脉一起结扎。术中维持体温（37±015）℃。在灌注时外拉线使球端回至ECA，拔除插线，结扎ECA即可。假手术组除不插线外，其余步骤同上。大脑中动脉栓塞后2h恢复血供，神经行为学评分参照ZeaLonga5分制标准，术后出现左前肢屈曲，行走时向左侧转圈即视为造模成功，然后保温常规饲养，至24h断头处死取材。实验过程中，因麻醉意外、MCAO手术失败、造模不成功及24h内死亡的均弃去不用。

脑组织含水量的测定：大鼠造模24h后断头取脑，称量两侧半脑湿重。再置于烘箱中，100℃烘烤24h至恒重，精确称量干重，计算含水量。脑组织含水量=（湿重-干重）/湿重×100%。

脑梗塞体积测定：断头取脑，将大脑作连续2mm冠状切片，共5片，然后将脑片放入2%TTC磷酸盐缓冲液中37℃恒温孵育30min，正常脑组织染为红色，梗死灶呈白死。滤纸吸去表面液体后用刀片小心刻取未着色部分的质量百分比，以此反应梗死体积比。脑组织匀浆SOD活力、MDA含量的检测：右侧半脑称重后按1：10加入冰生理盐水制成匀浆，参照SOD、MDA试剂盒说明书，检测脑组织中SOD、MDA含量。应用SPSS13.0for windows软件对数据进行处理；计量数据以x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析。

2）结果

脑组织含水量：左脑组织含水量各组间相比无统计学意义，模型组右脑组织含水量明显高于各组（P<0.05），高于假手术组（P<0.05），给药组各剂量组可降低模型脑组织含水量（P<0.05）（表3）。

表3Neonectrolide A对脑组织含水量、梗死体积、SOD、MDA含量的影响（n=8）

与模型组相比*p<0.05,**p<0.01

脑梗塞体积：模型组脑组织脑梗塞体积高于各组（P<0.05），给药组各剂量组可降低模型脑组织梗死体积（P<0.05）。

结论：Neonectrolide A可减少脑缺血后脑组织水肿，缩小梗死体积，提高SOD活性，降低MDA含量，减轻自由基反应对脑组织的损害，对缺血脑组织具有明显的保护作用。Neonectrolide A可以用于制备治疗缺血性脑损伤药物。

Claims (1)

1.Neonectrolide A在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，所述化合物Neonectrolide A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。