CN102875513B

CN102875513B - 一种微晶体儿茶素及其制备方法

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Publication number: CN102875513B
Application number: CN 201210156179
Authority: CN
Inventors: 王孝仓
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-05-17
Filing date: 2012-05-17
Publication date: 2013-08-07
Anticipated expiration: 2032-05-17
Also published as: CN102875513A

Abstract

本发明涉及医药领域，公开了一种微晶体儿茶素及其制备方法，所述微晶体儿茶素使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的x-射线粉末衍射光谱特征进行表征，所述制备方法包含蒸煮、膜技术、有机溶剂萃取，回收溶剂和浓缩干燥五道工序。本发明所述微晶体儿茶素质量稳定，保质期长，用于治疗高脂血症、心脑血管疾病效果好，且具有优异的抗氧化性能和消炎除菌、清除自由基、抗肿瘤、抗突变、降血脂和预防动脉粥样硬化功能，是一种很有价值的天然药物，具有广泛的临床应用前景。

Description

一种微晶体儿茶素及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及一种微晶体儿茶素及其制备方法。

背景技术

茶叶（Tea,camellia sinenxis）在我国已有4700年历史，茶文化在中国源远流长，我国每年生产茶叶70万吨行销世界，茶树现在已有30多个国家在栽种。研究表明茶叶不仅提神健脑，而且具有消炎除菌，消除自由基，抗癌抗突变，降低血压、血糖，抗氧化、抗衰老等功效。茶叶富含多酚类化合物的生物活性即茶多酚，约占茶干重的20-25％，按其化学结构可分为4类：

1、儿茶素（catcnins），属黄烷醇类，占茶干重12-24%，其中又可分成许多种类，且结构如下：

Ec:R₁=R₂=H

EGC:R₁=OH.R₂=H

ECG:R₁=H.R₂=X

EGCG:R₁=OH.R₂=X

含量比重如表1所示。

表1

2、黄酮及黄酮醇类，主要是黄酮及其苷类，占茶干重3-4%。

3、花白素及花青素，花白素占茶干重的2-3%，花青素只占0.01%左右；

4、酚酸类和缩酚酸类，约占5%；

茶多酚的药用价值受到国内外医学界的极大关注，根据近年来研究表明，其药用功效如下：

1、抗肿瘤、抗突变、防治癌症；

2、预防肝脏及冠状动脉粥样硬化、降低血压和血糖、增强微血管强韧性；

3、抑制和杀灭病原菌及病毒的生长；

4、缓和肠胃紧张、防炎止泻和利尿，保肝护肝；

5、促进VC的吸收，防治坏血病的发生；

6、抗脂质过氧化、对衰老有调控效应；

7、对重金属盐和生物碱中毒起抗解剂作用；

8、对预防和治疗辐射起抗解剂作用。

目前的茶多酚产品质量不稳定，易氧化、保质期很短，功能性差，工艺手段存在问题，包括儿茶素茶多酚均含有很多酚性羟基，性质极其活跃，极易氧化成醌类化合物，目前茶多酚因其自身抗氧化问题没有解决，保质期太短而不能单方制药，仅停留在动物试验、药效机理研究或体外模拟实验阶段。因此，亟需开发一种新型的茶多酚类药物以满足临床药用需求。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种质量稳定，有效药份儿茶素含量纯度在60-85％的微晶体儿茶素。

本发明通过微晶状工艺技术提纯的多酚类化合物复合体形成微晶体儿茶素，解决了茶叶提取物产品20多年来一直未解决的自身氧化的技术难题。本发明所述微晶体儿茶素是一种从绿茶中提取的水溶性和脂溶性儿茶素复合体所组成，其中以表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯为主体，具有以下物化性质：

（1）外观：浅黄色、白色、浅绿色

（2）呈涩味易溶于水、乙醇和乙酸乙酯；耐热性稳定，小于150℃温度条件下不分解；酸性条件下不分解；有吸湿性。

本发明所述微晶体儿茶素，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的x-射线粉末衍射光谱图见图1，其特征如下表所示。

2θ	d值	FWHM	I/I₀%
				15.120	5.8548	0.118	58
23.740	3.7448	0.212	100

本发明所述微晶体儿茶素，因其药份纯度高、质量稳定性强，可以做成单方生物药品和生物制剂。研究表明，本发明所述微晶体儿茶素具有以下药效：

（1）降血脂；

（2）抗老化，预防心脑血管疾病；

（3）对致病菌有抑制和杀灭作用；

（4）抗突变和抗癌作用。

可广泛用于健康食品和医药领域。

本发明所述微晶体儿茶素是从绿茶叶中提取的多酚类化合物的复合体，其中儿茶素占其60-85％。本发明所述微晶体儿茶素在萃取过程中，以晶体状形成，儿茶素纯度可达到60-85％，质量稳定性可达15年。

本发明还提供所述微晶体儿茶素的工艺方法，主要包括：蒸煮、膜技术浓缩、有机溶剂萃取，回收溶剂和浓缩干燥五道工序。

其具体步骤优选如下：

（1）蒸煮：将绿茶和去离子水放入锅中加热蒸煮，便于茶中的有效物质溶于水中，去离子水与干绿茶比例为（2.5-3）：1，加热温度为85-100℃，加热时间为15-30分钟，然后将茶汤滤出到容器中。

（2）膜技术：将滤出的茶汤利用膜技术手段进行，去掉茶汤里的杂质并浓缩，浓缩至40-50％的浓茶汤。

（3）乙酸乙酯萃取：将工序（2）所得的浓茶汤泵入萃取塔内，加乙酸乙酯萃取儿茶素，乙酸乙酯与浓茶汤重量比为2：1，萃取时间为50-80分钟。

（4）回收乙酸乙酯：将工序（3）所得的两项液体泵入转溶离心器中加热，回收乙酸乙酯，加热温度为70-80℃，加热时间为25-40分钟。

（5）浓缩干燥：先将工序（4）所得的水相药液送入真空浓缩器内加热至90-100℃，以使儿茶素水相药液浓缩成半膏状乳液，然后将乳液送入真空干燥器内加热至90-100℃干燥，即可得到含有60-85％的微晶体儿茶素产品。

实验表明，利用本发明从高等干绿茶中，在萃取工艺之前，利用膜技术手段将茶汤中的杂质清除掉，并浓缩茶汤，提取的微晶体儿茶素产品具有很高的抗氧化活性，其稳定性可达15年以上。本产品适用于各类相关的药品制备工艺原料。微晶体儿茶素的药份含量纯度达到60-85％以上，因此，本发明所述微晶体儿茶素用于治疗疾病具有很好的疗效。

用同位素技术研究以茶多酚为主要成分的护肤产品的透皮性，结果达到66.7％，表明茶多酚有良好地透皮性。本发明微晶体儿茶素属于小分子结构，透皮性比普通茶多酚更强更有效果，还可减轻老年斑和皱纹，改善皮肤粗糙和干燥，对继发性色素沉着-外伤后沉着、单纯疮疹后沉着也有抑制效果。

自由基医学理论认为，活性氧自由基能使机体细胞发生脂质过氧化作用，使人衰老和功能丧失，导致病变。用可见光光度法进行测定，微晶体儿茶素及其制剂对活性氧自由基的清除作用，结果表明：微晶体儿茶素清除效果比绿茶提取物、普通茶多酚，以及维生素C的效果更优。

与现有技术相比，本发明所述微晶体儿茶素具有以下优点：

（1）微晶体儿茶素有效药份含量高，质量稳定，可以生产单方的终端药品，保质期可达15年。

（2）本发明所述微晶体儿茶素用于高脂血症、心脑血管疾病患者效果极好，2-3个疗程基本冶愈。

（3）微晶体儿茶素具有优异的抗氧化性能和显著的消炎除菌、清除自由基、抗肿瘤、抗突变、降血脂和预防动脉粥样硬化等功能。是一类很有研发价值的天然药物。

附图说明

图1为本发明所述微晶体儿茶素的x-射线粉末衍射光谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种微晶体儿茶素及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品、方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1：制备本发明所述微晶体儿茶素

具体工艺如下：

（2）膜技术：将滤出的茶汤利用超滤膜进行处理，去掉茶汤里的杂质并浓缩，浓缩至40-50％的浓茶汤。

制得的微晶体儿茶素，外观呈浅黄色、白色或浅绿色，口感呈涩味易溶于水、乙醇和乙酸乙酯；耐热性稳定，小于150℃温度条件下不分解；酸性条件下不分解；有吸湿性。

实施例2：本发明所述微晶体儿茶素的x-射线粉末衍射光谱分析

取实施例1制备的微晶体儿茶素进行X-射线粉末衍射，使用Cu-Kα辐射，送南开大学中心实验室X射线衍射分析。

仪器：日本理学D/MAX-2500型衍射仪

靶：Cu-Kα辐射（λ=1.5405A），2θ=3°～50°

阶跃角：0.04°

管压：40KV

管流：100mA

扫描速度：8°/min

滤片：石墨单色器

计数器：闪烁计数器

实施例1制备的微晶体儿茶素x-射线粉末衍射图如图1所示，使用Cu-Kα辐射，以2 θ角度表示的x-射线粉末衍射光谱特征如下表所示。

2θ	d值	FWHM	I/I₀%
				15.120	5.8548	0.118	58
23.740	3.7448	0.212	100

经分析该样品（TPI）为微晶体态。

实施例3：微晶体儿茶素成分分析

本发明所述微晶体儿茶素的含量、成分测定如下表：

测定项目	标准	测定结果	检验结论
				多酚含量%	≥40	97.1	符合标准
干燥失重%	≤5.0	4.4	符合标准
				灼烧残渣%	≤0.5	0.13	符合标准
砷（以AS计）%	≤0.0002	0.00003	符合标准
				铅（以Pb计）%	≤0.0004	＜0.00004	符合标准

微晶体儿茶素（茶多酚）还有很强的供氢能力，利用儿茶素在黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中能对自由基清除达到98%的能力。浙江中医学院分子医学研究所用黄嘌呤Lminol反应发光法检测，显示茶多酚具有明显的清除自由基作用，效果远远超过已知抗氧剂VE、VC。实验表明，微晶体儿茶素在剌激人多形核白细胞体系（PMIV）中，对活性氧自由基具有很强的清除作用，其清除能力同样比VE、VC强得多。由此可见，儿茶素的良好药效与其自身抗氧化能力是分不开的。

本发明人研究表明，微晶体儿茶素（茶多酚）能调动和激活机体的内源性抗氧化系统，有利于预防或减轻自由基造成的损伤。

有实验证明，给SKH-1小鼠0.2%茶多酚溶液30天后，小鼠小肠、肝和肺的谷胱苷肽、过氧化物酶、过氧化物还原酶的活性明显增高，肝和小肠的谷胱苷肽硫转酶（GST）的活性也明显增强。这可以说明微晶体儿茶素（茶多酚）的肿瘤化学预防作用与通过提高抗氧化和生物转化二相酶的活性，来清除体内过量的自由基有关。

实施例4：微晶体儿茶素毒理学实验及其评价

在天津卫生防病中心（食品卫生监督检验所）按国家标准对微晶体儿茶素的毒理学方面做了五项实验。

1、急性毒性试验：用霍恩氏法，选40只昆明种小鼠分4组，以1.00g/kg、2.15 g/kg、4.64 g/kg、10.0 g/kg剂量分别染毒；选一级SD大鼠40只分4组，以2.15g/kg、4.64g/kg、10.0 g/kg、21.5g/kg、剂量分别染毒，都观察一周，结果证明本品实际无毒。

2、小鼠骨髓微核试验：选小鼠50只分5组，按0.46g/kg、10.0g/kg、2.15g/kg、2.6g/kg剂量分别染毒，试验结果为阴性反应。

3、Ames试验：试验浓度为50ml/m1、10ml/m1、2ml/m1、三个剂量，菌种：TA97a、TA98、TA100、TA102，采用平板渗入法，将样液以5mg/m、1mg/m和0.2mg/m三个剂量进行非活化和活化试验，并设阴性对照和阳性对照，结论样品四个浓度对四菌株的平均回变菌落数与阴性对照比较，检验为阴性。

4、小鼠睾丸染色体畸变试验：选昆明雄鼠25只分五组，按0.73g/kg、1.49g/kg、2.92g/kg和正常对照组给药5天，检验结果为阴性。

5、30天喂养试验：选Wistar大鼠80只分四组，按国际GB15193-94中30天喂养标准实验，试验结论未见有意义的病理变化。

6、浙江农学院和中科院昆虫研究所生化毒理研究室共同研究表明，茶多酚为无蓄积毒性，无遗传毒性，作为食用安全，属实际无毒。结论与我们的研究相一致。陈国祥等对大鼠长期毒性实验，结果提示茶多酚对大鼠是无毒的，剂量是350mg/（kg·d）。

实施例5：本发明所述微晶体儿茶素降血脂，抗动脉粥样硬化的药效实验及研究

具体方法：选用中国医学科学院实验动物中心Wistar雄性大鼠40只分4组，按低剂量组1 00mg/kg，bw、中剂量组200mg/kg、bw、高剂量400 mg/kg，bw（分别相当于人日推荐量的5、10、20倍）和对照组。在实验第14天、28天、42天时对各组大鼠血清TC浓度进行检查，14天时大鼠血清总胆固醇（TC）与对照组无显著差异；28天时，中剂量TC浓度低于对照组；42天时中、低剂量组TC浓度均显著低于对照组，高剂量组TC亦低于对照组；本实验还观察到三个剂量组血清甘油三脂（TG）、血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）都有显著变化，TG明显低于对照组，HDL-C明显高于对照组（HDL-C高，有利于防止动脉粥样硬化，是心血管系统的一种保护因子）。实验证实，微晶体儿茶素（茶多酚）具有较强的调节血脂（降低总胆固醇）的作用。

国外报道Ishigakie对大鼠试验绿茶儿茶素（含量90%），对大鼠体内和肝内脂肪积累的作用，结果表明大鼠肝内和体内脂肪含量随着儿茶素量的增加而减少。

中国茶叶研究所与浙江医大、上海医大共同研究，利用儿茶素类43%，儿茶素氧化物54.5%的混合物进行治疗高脂肪或高胆固醇或甘油三脂病人，治疗效果显著。我们用微晶体儿茶素（茶多酚）降脂胶囊，对高脂血病患者作降血脂作用的临床观察，共52例病人采用自身对照法：服用本产品前及服用4周后，检查空腹血脂水平（TC、TG、HDL、LP(a)、APOAI、APOB）、生化（ALT、AST、TBA、CREA、BUN、GIU、CRK）,及服用本产品后的副作用（如头痛、心悸、失眠、胃肠反应、面红等），仪器为美国Beckman700型自动生化分析仪；TC、TG用酶法测定，APOAI、B采用免疫比浊法，LP（a）用ELISA法测定。结果：治疗四周后，TC、TG、LDL、APOB显著降低，LP（a）亦有降低。结果分析：在TC增高的病人27例中，显效率63%，有效率25.9%，总有效率88.8%；在TG增高的病人25例中显效率22.5%，有效率58.5%，总有效率81.0%。不良反应方面：用本品4周后测病人心、肝、肾功能与治疗前相比均无显著差异。实验评价：微晶体儿茶素（茶多酚）具有很好降脂功能，无毒副作用，可以长期使用。

人体肾脏的功能之一是分泌有使血压增高的血管紧张素和使血压降低的舒缓激肽，以保持血压的平衡。促进这两类物质转换的酶是ACE，当ACE活性过强时，血管紧张素增加，血压就上升。然而茶多酚主要成份儿茶素就具有较强的抑制ACE的作用。我们通过研究注意到，儿茶素的抗凝、促进纤溶和抗血小板聚集、降血压、降脂、防治动脉粥样硬化，可能是儿茶素具有较强的供给电子能力，易与酶蛋白结合，可与凝血酶形成复合物，不使纤维蛋白原变成纤维蛋白。同时，儿茶素还能够通过治疗中的自身抗氧化，抑制胆固醇及不饱和脂肪的氧化，这一方面便减少了胆固醇及其氧化物在动脉上的沉积。儿茶素还可通过动脉面膜效应明显减少脂肪凝集，降低动脉内表细胞的通透性，阻止血栓形成。实验表明，微晶体儿茶素在降低血清TC的同时，还能提高HDL-C含量，而后者既能清除动脉壁上胆固醇的蓄积，又能抑制细胞对LDL-C的摄取，有利于防止动脉粥样硬化。

实施例6：本发明所述微晶体儿茶素的抗癌、抗突变功效的药效实验及研究

国内外大量茶多酚试验表明，茶多酚不仅可以抑制多种化学致癌物苯并芘、黄曲霉素、亚硝基甲脲（NMU）,乙酰基氨基芴（AFF），3-甲基胆蒽（3-MCA）诱致的突变，而且还可抑制一些混合致癌物如烟草雾浓缩物、煤焦油、熏鱼提取物、X射线的致突变作用。研究还表明，绿茶可以明显抑制黄曲霉素诱致的大鼠肝癌；抑制由二甲基苯并蒽（DMBA）/12-0-十四烷酰附拜醇-B-醋酸酯（TPA）诱致的小鼠皮肤癌；由氨基甲的乙酯和二乙基亚硝胺（DE-NA）诱致的小鼠肺癌和由N-甲基-N硝基-亚硝基胍（MMNG）诱致的大鼠肠胃癌；以及抑制由苯并芘、亚硝酸钠和甲基苯甲胺诱致的大鼠食道癌。

为了证实微晶体儿茶素在治疗癌症临床上的效果，我们通过城区医院对50例（自愿者）肝癌、肺癌进行临床疗效观察。肝癌20例（男15，女5）年龄在30～70岁间；肺癌30例（男20、女10），年龄30～70岁间，其中最小年龄30岁，最大年龄70岁。采用自身对照法，服药前与服药后二个月、半年复查两次，服药1-2个疗程，半年期临床观察，结果证实带瘤存活率显著提高，见表3。

表3

结果分析：服药1-2个疗程，病人没有不良反应，部分病人服药后较前有食欲增加、体力改善、睡眠好转；无效原因，是病人无序无控制造成转移，2是疗程短，疗效不到位，病人因癌变死亡。临床观察后分析，只服用微晶体儿茶素2-3个疗程，大部分病人可以控制癌症不再发展，如继续服用6-9个疗程后可使癌症肿瘤细胞开始萎缩，直到消失。经研究表明，自绿茶中提纯的微晶体儿茶素为天然成份，有突出的药效物质，抗肿瘤、抗突变、防癌抑瘤为其主要作用之一，而且无毒副作用，可以长期使用，加之其自身抗氧化特性，不仅在治疗癌症疾病上是一种可行良药，在其它疾病治疗上也有广阔的前景。

国内报道阎玉森等利用绿叶提取物（GTE）对不同胃病及胃癌患者进行饮服，分别收集病人尿液，GTE对3组不同人群体内N-亚硝基脯氨酸形成，均具有明显的阻断作用。还有报道杨贤强等以90%的茶多酚，用生理盐水配制成0.1%浓度的水液喂NIH纯系小鼠对腹水型肿瘤（Ehrlich Ascitic Carinoma）和肉瘤（Sarcma 180）作治疗试验，结果表明1、茶多酚对小鼠腹水型肿瘤具有明显的治疗作用；2、对小鼠实体型肿瘤具有明显的抑制作用。Mukhtar等研究表明，绿茶多酚具有抑制-苯并花、黄曲霉素等致突变作用。若干生物测定系统的试验表明，绿茶多酚可显著抑制皮肤、肺、胃的肿瘤发生。阎玉森用一定浓度的绿茶提取物（GTE）对肉瘤180荷瘤小鼠导致的细胞免疫功能低下，经26周实验，具有明显的改善作用；GTE对小鼠艾氏腹水癌实体（EAC）、肉瘤180实体（S180）和肝癌实体肿瘤生长抑制分别为45%、54%、57%。Hiroset等用N-二乙基亚硝胺、N-甲基乙硝基脲等化学致癌物处理6周龄344雄大鼠建立荷瘤模型，用二甲苯并蒽处理7周龄雌鼠建立乳腺癌模型，用1%儿茶素喂饲实验，结果表明均显示出减少小肠中肿瘤的发生，在乳腺癌模型实验中，虽然儿茶素处理不能明显减少乳腺中肿瘤发生，但显著延长大鼠的存活时间。Wang等利用绿茶多酚防止由B紫外辐射诱导的雌性SKH-1无毛小鼠皮肤癌变作用的影响，结果表明长期饮服0.1%儿茶素的小鼠其肿瘤发生量和与正常饮水的小鼠要小。

根据以上多项研究证实，儿茶素抗肿瘤、抗突变、防治癌症的作用机能，是由于儿茶素具有极强的消除由于化学致癌物引起体内增多的有害自由基有关，因此儿茶素有提高细胞免疫功能。根据张燕等的研究表明复合表儿茶素能抑制促癌剂引起的与癌变正相关基因C-fos和C-Myc的基因表达，而对Rb基因表达则有正调控作用。

在不同绿茶组分中，其抑制致癌代谢形成活性按如下次序递减：EGCG＞ECG＞EGC＞EC。

实施例7：本发明所述微晶体儿茶素的抗菌抗病毒药效的药效实验及研究

经研究表明，茶叶中的儿茶素成分EGC和GCG对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、黄色溶血性葡萄球菌、金黄色链球菌和痢疾等病原细菌具有明显的抑制作用。我们在天津疾病预防控制中心对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪大肠杆菌、绿脓杆菌、霉菌和酵母菌进行抑菌试验。试验证明，微晶体儿茶素对有害细菌具有较强的抑菌作用：

1、对金黄色葡萄球菌的平均抑菌率为99.43%；

2、对大肠杆菌的平均抑菌率为90.56%；

3、对粪大肠杆菌群检测结果为0（未检出）；

4、对绿脓杆菌检测结果为0（未检出）；

5、对霉菌和酵母菌检测结果CFV/g＜10,国家标准≤100；

国内多项实验也表明，儿茶素抗菌活性比黄芩素强，抗菌谱也比黄芩素广。国外Shimamura研究表明，儿茶素能够抑制霍乱毒素、霍乱血溶素、溶血弧菌（Vi-brio paraha e moluticas）溶血素以及金黄色葡萄球菌（staphy lococus aureus）a-毒素的活性，还可抑制流感A型和B型病毒的感染，建议用于临床使用。

我们经实验研究分析，微晶体儿茶素的抗菌作用，对九种代表性致病菌抑制繁殖的最低浓度：黄色葡萄球菌为0.045％，肠炎弧菌为0.02％，弗氏弧菌为0.02％，霍乱弧菌为0.05％，产气荚膜杆菌为0.04％，蜡样芽孢杆菌为0.06％，类志贺邻单孢杆菌为0.01％，产气气杆菌为0.04％，肉毒梭状芽孢杆菌为0.01％。微晶体儿茶素还对弯曲杆菌、病原大肠菌、细胞侵入性大肠菌、沙门氏菌、伤寒杆菌有抑制作用，特别对呼吸道感染症的病原体百日咳菌、支原菌、流感病毒也有防治的功能，尤其是对流感病毒的抑制效果更是令人惊奇。

茶多酚药效对口腔中链球菌streps-ococcus mutans和s sdbrinus各种生物活动也有抑制作用，主要抑菌成份是儿茶素，细菌葡萄糖转移酶的葡萄糖合成受到儿茶素的强烈抑制。儿茶素不仅对细菌有较强的抑菌作用，而且对某些病毒也有抑制作用。如儿茶素具有清除自由基和抗菌、抗病毒的作用，我们选用微晶体儿茶素作为清理肠道病毒，再通过肠道吸收儿茶素达到护肝成为保护因子，从而清除肝肠中淤集的脂肪及病毒，达到保肝护肝，清肠排毒的目的。

安徽农业大学张国营等用绿茶及茶多酚对人轮状病毒（病毒性腹泻）进行了试验，结果表明，绿茶和茶多酚稀释浓度分别在1：1 00（每毫升细胞培养液含200hg绿茶）和1：8（每毫升细胞培养液含6.25hg茶多酚）时，表现对该病毒的完全抑制作用。浙江大学胡秀芳等研究茶多酚对家兔肾病的药效研究，结果表明，茶多酚明显降低两种肾炎模型兔（C-B SA、Masugi）的尿蛋白、血清肌酐及尿素氨含量（P＞0.05或P∠0.01）；降低肾炎兔的血清循环免疫复合物（CIC）含量（P∠0.05）；减轻肾小球肿胀、细胞增生、血栓形成及白细胞浸润，修复肾小球病理改变，对水负荷兔有明显的利尿作用。安徽省食品科技中心董金甫等用茶多酚进行抑菌的药效试验，结果证明，茶多酚对酵母菌、乳酸菌及醋酸菌无抑制作用，而对金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、志贺氏痢疾菌、伤寒沙白氏杆菌、枯草杆菌、大肠埃希氏杆菌抑制作用明显。被抑制的细菌中既有革兰氏阳性菌、也有革兰氏阴性菌；既有球菌、也有杆菌。实验证明微晶体儿茶素，对危害人体健康细菌有广泛的抑制及清除作用。

另外，茶多酚还能有效抑制发藓菌引起的皮肤病，茶叶对引起人体皮肤病的多种病原真菌（如头部白癣、斑状水泡白癣和顽癣等寄生性真癣）有很强的抑制作用。浙江大学胡秀芳做过茶多酚对皮肤的保护与治疗作用的研究，结论，除乌龙茶外，各种茶的提取物按5mg/ml的浓度即可完全抑制白癣菌的发育。

本发明所述微晶体儿茶素对引起化脓性感染、烧伤、创伤的金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌等有显著抑制作用。而这三种菌株对药物又易产生耐药性，由其引起的败血症死亡率高达80％以上，所以用微晶体儿茶素制备的药物可用于化脓性感染的烧伤、创伤疾病的治疗。

实施例7：本发明所述微晶体儿茶素的抗衰老、抗氧化及其它功效的药效实验及研究

王志远等在绿茶中的茶多酚和EGCG处理小鼠后发现可以利用茶多酚抑制皮肤线粒体中脂氧合梅和脂质过氧化作用，起着抗衰老的效应。Nakano等利用Wistar大鼠实验结果与之相似，认为儿茶素可使细胞色素氧化酶活性提高，因此在年龄较老的动物体内线粒体活性可以维持较高水平，这样对预防衰老有调控效应。我们在微晶体儿茶素抗衰老实验也表明，微晶体儿茶素可以增强肝脏中还原谷酰甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性，降低肝脏和血清中脂质过氧化物酶活性并延迟脂褐质的形成。人们服用维生素C、维生素E等抗氧化活性的化合物可以增强抵抗力，延缓衰老作用。Yang研究表明，20ppm儿茶素的抗氧性明显优于200PP维生素E和50PPmBHA，且与维生素C、E有增效作用。我们利用微晶体儿茶素在机体内的抗氧化效果的研究，已证实这项功能。相应研制抗衰老功能制品（保健胶囊、护肤水），使用后反应，特别是老年人反应良好，食欲睡眠比以往好，体力有所增强，身心舒畅。

方瑞英等利用原代培养大鼠杆细胞的方法，研究右旋儿茶素d-c对ccl4或d-GaIN肝细胞培养液中的GOT,GPT及LDH活性显著降低，并呈量放关系，提示儿茶素具有护肝作用。D-c对急性病毒性肝炎具有较好的治疗作用。

儿茶素具有抑制口臭的效果，日本宇井美树等研究表明，添加10mg儿茶素对甲基硫醇消臭率达62%，img儿茶素消臭效果EGCG＞ECG＞ECG＞EC。茶多酚还具有护齿、固齿、坚齿的效果，目前日本已有含有茶多酚成份的口腔清洁剂和牙膏投放市场。

儿茶素还具有抗过敏功效，Sugiyama等利用EC、EGC、ECG、EGCG对化合物48/80诱导大鼠肥大细胞胺释放的抑制作用，结果表明，0.1-0.15mg/ml的儿茶素EGC和EG-CG能强烈抑制胺的释放作用。60%抑制浓度的ECG、ECG、EGCG比目前常用的抗过敏药Tranilast的抑制效果分别强2倍、8倍、10倍。

本发明微晶体儿茶素对各种脂肪有非常高的抗氧化效果试验如下：

将茶多酚添加到食用油中，用AOM法研究过氧化物上升情况，结果表明，要达到与O-生育酚200ppm同样程度防氧化效果，只需添加10ppm儿茶素就能获得。微晶体儿茶素的抗氧化功能添加在富含油脂的食品中，可以提高食品品质和保质期；在夏季添加在冷饮中，则有效防止食物中毒及痢疾等肠道传染病。而且茶多酚对光氧化和紫外线氧化的防冶效果也得到证实。

本发明所述微晶体儿茶素解决了产品自身氧化的难题，质量稳定、药份含量在97％以上，在质量上和儿茶素含量纯度上，达到国际先进水平。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种微晶体儿茶素的制备方法，其特征在于，包含蒸煮、膜技术、有机溶剂萃取，回收溶剂和浓缩干燥五道工序；

（1）蒸煮：将绿茶和去离子水放入锅中加热蒸煮，便于茶中的有效物质溶于水中，去离子水与干绿茶比例为（2.5-3）：1，加热温度为85-100℃，加热时间为15-30分钟，然后将茶汤滤出到容器中；

（2）膜技术：将滤出的茶汤利用超滤膜进行处理，去掉茶汤里的杂质并浓缩，浓缩至40-50％的浓茶汤；

（3）乙酸乙酯萃取：将工序（2）所得的浓茶汤泵入萃取塔内，加乙酸乙酯萃取儿茶素，乙酸乙酯与浓茶汤重量比为2：1，萃取时间为50-80分钟；

（4）回收乙酸乙酯：将工序（3）所得的两项液体泵入转溶离心器中加热，回收乙酸乙酯，加热温度为70-80℃，加热时间为25-40分钟；