CN102866153B - 前列腺炎联合检测试剂盒 - Google Patents

前列腺炎联合检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种前列腺炎联合检测试剂盒,包括标本稀释液、显色液以及设置有六个反应孔的检测卡体,在检测卡体的六个反应孔内分别设置有用于检测卵磷脂小体、白细胞酯酶、柠檬酸、锌、酸性磷酸酶和pH值的固体试剂。本发明的优点在于针对前列腺炎具有代表性的六个指标联合起来在临床上进行检测,不需要镜检,仅根据标本在这六个反应孔内的颜色变化即可判断出这六个指标的正常与否,为前列腺炎的辅助诊断和初步分型提供了有效帮助,避免了因为检测人员的视觉疲劳造成的漏检,易于在临床上推广。

Description

前列腺炎联合检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生化检测领域,尤其是涉及一种前列腺炎联合检测试剂盒。
背景技术
前列腺炎是成年男性的常见疾病,困扰着全球接近50%的人群。尽管前列腺炎患者一般不会有生命危险,但会严重影响患者的生活质量,同时,其庞大的患者人群和高昂的医疗费用也会给公共卫生事业带来巨大的经济负担。
从对前列腺炎的分类来说,传统的Meares-Stamey“四杯法”是对前列腺炎第一个进行规范性分类的方法,即通过比较初始尿液(VB1)、中段尿液(VB2)、前列腺按摩液(EPS)和前列腺按摩后尿液(VB3)四杯标本中白细胞数和细菌培养结果将前列腺炎分为:急性细菌性前列腺炎(ABP)、慢性细菌性前列腺炎(CBP)、慢性非细菌性前列腺炎(CNP)和前列腺痛(PD)。该分类方法主要是基于前列腺炎是病原体感染造成的基础之上。但是由于前列腺炎的病因非常复杂,到现在为止人们还没有完全清楚造成前列腺炎症的所有病因,特别是慢性非细菌性前列腺炎和前列腺痛,所以该分类方法存在很大的片面性。
1995年美国国立卫生研究院(NIH)根据当前对前列腺炎的基础和临床研究情况制定了一种显得更科学的分类方法,即:I型相当于传统方法的ABP,发病急,临床表现为明显的尿路感染症状,白细胞数量升高,细菌培养阳性;Ⅱ型相当于传统方法的CBP,有反复发作的尿路感染症状,持续时间长,白细胞数量增多;Ⅲ型慢性前列腺炎/慢性盆骨疼痛综合症,相当于传统方法中的CNP/PD,是前列腺疾病中最常见的类型,约占慢性前列腺炎的90%以上,该类型根据镜检结果又可分为ⅢA、ⅢB两个亚型;Ⅳ型即无症状性前列腺炎,对不孕不育和血清PSA的升高患者的诊断有很大帮助。该分类方法经过临床实践相对比较科学,但对发病原因和临床治疗缺乏足够的支持。
无论前列腺炎如何分类,目前所用的检测方法都是镜检法,既通过显微镜观察前列腺按摩液中卵磷脂小体、白细胞数量来进行检查,这种方法检测的指标较少,不能完全明确患者炎症的类型和治疗过程中的治疗效果的评价。而且这种镜检方法人为因素对结果造成的影响较大,如长时间观察显微镜引起的视觉疲劳而造成的漏检等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种前列腺炎联合检测试剂盒,采用该试剂盒可以从不同角度对前列腺炎进行较为客观的检测和判断,并可以对治疗效果进行科学的评价。
为实现上述目的,本发明可采取下述技术方案:
本发明所述的前列腺炎联合检测试剂盒,包括标本稀释液、显色液以及设置有六个反应孔的检测卡体,所述检测卡体的六个反应孔内分别设置有用于检测卵磷脂小体、白细胞酯酶、柠檬酸、锌、酸性磷酸酶和pH值的固体试剂,其中:
检测卵磷脂小体的固体试剂由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液反应后涂覆于载体上,经真空冷冻干燥而成;所述硼酸盐缓冲液的pH为7.0~10.0,其中氯化钾:0.1~100g/L,硼酸:0.1~100g/L,氢氧化钠:0.01~10g/L;所述锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;所述氯化锌溶液中氯化锌:0.1~100g/L;
检测白细胞酯酶的固体试剂由Tris-HCl缓冲液,糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于载体上,除湿干燥而成;所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.01~2 mol/L, pH 7.0~10.0,所述糖为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖,浓度为30~60g/L,所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的浓度为0.001~1mol/L;
检测柠檬酸的固体试剂由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液按1:15的比例配制后涂覆于载体上,除湿干燥而成;其中的硫酸铁铵溶液为0.001~1mol/L,磺基水杨酸溶液为0.001~1mol/L;
检测锌的固体试剂由硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液按10:1的比例反应、稀释后涂覆于载体上,经真空冷冻干燥而成;所述硼酸盐缓冲液包括以下组份:氯化钾 0.1~100g/L,硼酸 0.1~100g/L,氢氧化钠 0.01~10g/L,pH值7.0~10.0;所述锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;
检测酸性磷酸酶的固体试剂由配制的底物液涂覆于载体上,除湿干燥而成;所述的底物液包括以下组分:柠檬酸0.1~75g/L, 磷酸苯二钠:0.1~90g/L,4-氨基安替比林:0.1~65g/L,氢氧化钠:0.1~88g/L;
检测PH值的固体试剂由溴百里酚蓝钠盐0.5~100g/L和纯化水配制的溶液涂覆于载体上,除湿干燥而成。
所述的标本稀释液为生理盐水,即质量百分比浓度为8.5~9.0%的氯化钠水溶液。
所述的显色液中包括以下组分:铁氰化钾 0.1~100g/L,碳酸氢钠0.1~100g/L、氢氧化钠 0.01~10g/L。
所述的载体为滤纸、玻璃纤维膜或层析纸。
本发明的优点在于针对前列腺炎具有代表性的六个指标联合起来在临床上进行检测,不需要镜检,仅根据标本在这六个反应孔内的颜色变化即可判断出这六个指标的正常与否,为前列腺炎的辅助诊断和初步分型提供了有效帮助,避免了因为检测人员的视觉疲劳造成的漏检,易于在临床上推广。
具体实施方式
本发明所述的前列腺炎联合检测试剂盒,包括标本稀释液、显色液以及设置有六个反应孔的检测卡体,在检测卡体的六个反应孔内分别设置有用于检测卵磷脂小体、白细胞酯酶、柠檬酸、锌、酸性磷酸酶和pH值的固体试剂,该固体试剂为含有检测试剂的由滤纸、玻璃纤维膜或层析纸等载体制作的试剂垫。
六个反应孔中试剂垫的具体制作方法如下:
1、检测卵磷脂小体的固体试剂垫:由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液反应后涂覆于载体上,经真空冷冻干燥而成;硼酸盐缓冲液的pH为7.0~10.0,其中氯化钾:0.1~100g/L,硼酸:0.1~100g/L,氢氧化钠:0.01~10g/L;锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;氯化锌溶液中氯化锌:0.1~100g/L;
首先将硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液按1:1比例进行反应,得到的产物记为A,取氯化锌溶液500μL,加入20μL生理盐水,得到的溶液记为B,将A和B按1:5的比例进行反应,得到的产物记为C,取10μL的产物C置于直径5.5mm的试剂垫载体上,经真空冷冻干燥即可。
2、检测白细胞酯酶的固体试剂垫:由Tris-HCl缓冲液,糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于载体上,除湿干燥(温度18~25℃,湿度≤30%)而成;其中Tris-HCl缓冲液的浓度为0.01~2 mol/L, pH 7.0~10.0,糖为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖,浓度为30~60g/L,5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的浓度为0.001~1mol/L;
先制备Tris-HCl缓冲液,再加入海藻糖(或其他糖类),最后加入5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液,得到液体试剂,取10μL液体试剂置于直径5.5mm的试剂垫载体上,除湿干燥即可。
3、检测柠檬酸的固体试剂垫:由硫酸铁铵溶液(0.001~1mol/L)和磺基水杨酸溶液(0.001~1mol/L)按1:15的比例配制后取10μL置于直径5.5mm的试剂垫载体上,除湿干燥(温度18~25℃,湿度≤30%)即可。
4、检测锌的固体试剂垫:由硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液按10:1的比例反应、稀释后置于直径5.5mm的试剂垫载体上,经真空冷冻干燥而成;其中的硼酸盐缓冲液包括以下组份:氯化钾 0.1~100g/L,硼酸 0.1~100g/L,氢氧化钠 0.01~10g/L,pH值7.0~10.0;锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;
首先制备硼酸盐缓冲液,将硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液按10:1的比例反应后,再加入6倍的硼酸盐缓冲液进行稀释,然后取稀释后的液体试剂10μL置于直径5.5mm的试剂垫载体上,经真空冷冻干燥即可。
5、检测酸性磷酸酶的固体试剂垫:将包含有柠檬酸0.1~75g/L, 磷酸苯二钠:0.1~90g/L,4-氨基安替比林:0.1~65g/L,氢氧化钠:0.1~88g/L组分的底物液倍比稀释2次后取得到的稀释液10μL置于直径5.5mm的试剂垫载体上,除湿干燥(温度18~25℃,湿度≤30%)即可。
6、检测pH值的固体试剂垫:将0.5~100g/L溴百里酚蓝钠盐和20倍的纯化水配制的溶液取10μL置于直径5.5mm的试剂垫载体上,除湿干燥(温度18~25℃,湿度≤30%)即可。
本发明试剂盒所用的标本稀释液为生理盐水,即质量百分比浓度为8.5~9.0%的氯化钠水溶液。
所用的显色剂中包括以下组分:铁氰化钾 0.1~100g/L,碳酸氢钠0.1~100g/L、氢氧化钠 0.01~10g/L。
本试剂盒的检测方法如下:
(1)、标本预处理:将EPS(前列腺按摩液)使用标本稀释液稀释(1:4),记为A,再用生理盐水稀释(1:20),记为B。
(2)、加样:第1、2、3、4、6孔中加A液,25μl/孔;第5孔(酸性磷酸酶检测孔)中加B液 25μl。
(3)、温育:37℃,15min。
(4)、加显色液:在第五孔(酸性磷酸酶检测孔)中加显色液25μl。
(5)、记录结果:观察颜色变化,和试剂盒提供的比色卡进行比对,判读结果:
第1孔,卵磷脂小体指标:阴性显粉红色,阳性显蓝色;
第2孔,白细胞指标:阴性显无色,弱阳性显绿色,强阳性显蓝色;
第3孔,柠檬酸指标:阴性显米黄色,阳性显橙红色;
第4孔,锌指标:阴性显蓝色,阳性显桔红色;
第5孔,酸性磷酸酶指标:阴性显红色,弱阳性显橙红色,强阳性显黄色;
第6孔,pH指标:阴性显黄色,弱阳性显绿色,强阳性显蓝色。

Claims (4)

1.一种前列腺炎联合检测试剂盒,包括标本稀释液、显色液以及设置有六个反应孔的检测卡体,其特征在于:所述检测卡体的六个反应孔内分别设置有用于检测卵磷脂小体、白细胞酯酶、柠檬酸、锌、酸性磷酸酶和pH值的固体试剂,其中:
检测卵磷脂小体的固体试剂由硼酸盐缓冲液、锌试剂溶液和氯化锌溶液反应后涂覆于载体上,经真空冷冻干燥而成;所述硼酸盐缓冲液的pH为7.0~10.0,其中氯化钾:0.1~100g/L,硼酸:0.1~100g/L,氢氧化钠:0.01~10g/L;所述锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;所述氯化锌溶液中氯化锌:0.1~100g/L;
检测白细胞酯酶的固体试剂由Tris-HCl缓冲液,糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于载体上,除湿干燥而成;所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.01~2 mol/L, pH 7.0~10.0,所述糖为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖,浓度为30~60g/L,所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的浓度为0.001~1mol/L;
检测柠檬酸的固体试剂由硫酸铁铵溶液和磺基水杨酸溶液按1:15的比例配制后涂覆于载体上,除湿干燥而成;其中的硫酸铁铵溶液为0.001~1mol/L,磺基水杨酸溶液为0.001~1mol/L;
检测锌的固体试剂由硼酸盐缓冲液和锌试剂溶液按10:1的比例反应、稀释后涂覆于载体上,经真空冷冻干燥而成;所述硼酸盐缓冲液包括以下组份:氯化钾 0.1~100g/L,硼酸 0.1~100g/L,氢氧化钠 0.01~10g/L,pH值7.0~10.0;所述锌试剂溶液中含有0.1~100g/L 的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐;
检测酸性磷酸酶的固体试剂由配制的底物液涂覆于载体上,除湿干燥而成;所述的底物液包括以下组分:柠檬酸0.1~75g/L, 磷酸苯二钠:0.1~90g/L,4-氨基安替比林:0.1~65g/L,氢氧化钠:0.1~88g/L;
检测PH值的固体试剂由溴百里酚蓝钠盐0.5~100g/L和纯化水配制的溶液涂覆于载体上,除湿干燥而成。
2.根据权利要求1所述的前列腺炎联合检测试剂盒,其特征在于:所述的标本稀释液为生理盐水。
3.根据权利要求1所述的前列腺炎联合检测试剂盒,其特征在于:所述的显色液中包括以下组分:铁氰化钾 0.1~100g/L,碳酸氢钠0.1~100g/L、氢氧化钠 0.01~10g/L。
4.根据权利要求1、2或3所述的前列腺炎联合检测试剂盒,其特征在于:所述的载体为滤纸、玻璃纤维膜或层析纸。
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