CN102846705B - 一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法，药效学实验研究表明依照本发明制备方法得到的紫丹参有效部位在治疗心血管疾病方面具有较好的疗效。同时，本发明制备方法是经过严密的工艺筛选实验得到，能够有效提取紫丹参中的有效部位，节省药材，降低生产成本；减少了有效组分的损失；提取到的紫丹参有效部位纯度较高，避免不明成分引起的不良反应。

Description

一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法

发明领域

本发明涉及医药领域，特别涉及一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法。

背景技术

紫丹参为云南鼠尾草的干燥根及根茎，首载于《紫南本草》，其中记载：“丹参味苦，性微寒。色赤象火，入心经。补心，生血，养心，定志，安神宁心，健忘怔忡，惊悸不寐，生新血，去瘀血，安生胎，落死胎。一味可抵四物之功”。后经考证，此记载“丹参”即为紫丹参，在大理民间特别是彝医常用于调经、活血、散瘀、镇静止痛，用于月经不调、风湿痹痛、子宫出血、吐血、乳腺炎等症。功用与丹参相仿，该品是云南长期作丹参药用的品种之一，已收载于1974年版和1996年版《云南省药品标准》。紫丹参中化学成分与丹参中相似，分为脂溶性和水溶性两部分，前者为丹参酮类，主要有丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、二氢丹参酮、羟基丹参酮等等；后者主要为丹酚酸类，主要包括丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B等。从紫丹参的药理研究来看，其具有多方面的作用，例如，紫丹参能够增加冠脉血流、防止血栓形成、改善血液流变学、清除自由基、改善血管内皮功能等。

目前，关于紫丹参的研究主要以复方制剂为主，关于紫丹参的提取方式，主要有水提醇沉、二氧化碳超临界萃取，但是水提取紫丹参，由于提取后需要浓缩大量水，需要加热减压去除大量水，比较消耗能源，污染环境；超临界二氧化碳萃取成本较高；紫丹参中水溶性成分为丹酚酸类，丹酚酸类样品不稳定，加热时间过长，容易引起降解；紫丹参中的化学成分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类，用水提取不到丹参酮，超临界二氧化碳萃取不能提取到丹酚酸，所以造成有效组分不能完全提取，浪费药材；药理研究表明，紫丹参药材中的有效组分有治疗冠心病的作用，可以单独用紫丹参来治疗疾病。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位，本发明的目的还在于提供该有效部位的制备方法，本发明的第三个目的在于提供其在制备治疗心血管疾病药物中的应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明紫丹参有效部位的制备方法包括如下步骤：

A.将紫丹参用药用乙醇加热回流提取；

B.合并两次乙醇提取液，浓缩，水沉，分离上清液与沉淀；

C.水沉沉淀部分先用常规溶剂溶解，再用碳酸钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位Ⅰ，按照常规高效液相色谱法检测显示，有效部位Ⅰ中主要为丹参酮；

D.将步骤A中残留的药渣用水提取，将水提液与步骤B中水沉上清液合并；

E.将合并液过大孔树脂柱，即得有效部位Ⅱ，按照常规的亚硝酸钠-硝酸铝显色测定方法测定，有效部位Ⅱ中总丹酚酸的含量不少于90％；

F.将步骤C中的有效部位Ⅰ与有效部位Ⅱ合并即得。

其中，所述步骤A中将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入5～30重量倍的60％～100％的乙醇，加热回流提取0.5～5小时，再用5～30重量倍的乙醇加热回流提取0.5～5小时；优选加入10重量倍的95％的乙醇，加热回流提取1.5小时，再用10重量倍的乙醇加热回流提取1.0小时；

所述步骤B中合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/5～4/5，加入1～10重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为3～7，静置12～72小时，分离上清液与沉淀；优选浓缩至生药量的1/2，加入6重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为5，静置48小时，分离上清液与沉淀；

所述步骤C中常规溶剂为正己烷、环己烷、乙酸乙酯、正庚烷、正戊烷、石油醚、甲基叔丁基醚、乙醚、二氯甲烷、甲苯、乙酯、四氢呋喃、甲酸乙酯、甲酸丁酯、乙酸丁酯中的一种或几种，优选为环己烷；所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0.2％～5％，优选碳酸钠溶液的浓度为0.5％；所述碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钙溶液替代；

所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入1～10重量倍的水，提取0.5～5小时，再用1～10重量倍的水提取0.2～4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并；优选加入6重量倍的水，提取1小时，再用6重量倍的水提取0.5小时；

所述步骤E中将合并液调pH值为1～7先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得；优选将合并液调pH值为2，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80％乙醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积；所述大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825，优选型号为LS-105；

所述步骤F中有效部位Ⅰ与有效部位Ⅱ按照0～8∶0～8的比例合并即得，优选比例为1∶5。

本发明紫丹参有效部位可以单独或与其他药物按任意比例配伍，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、丸剂、胶囊剂、口服液体制剂、注射剂等药学上可接受的各种剂型。

药效学实验研究表明依照本发明制备方法得到的紫丹参有效部位在治疗心血管疾病方面具有较好的疗效。同时，本发明制备方法是经过严密的工艺筛选实验得到，能够有效提取紫丹参中的有效部位，节省药材，降低生产成本；减少了有效组分的损失；提取到的紫丹参有效部位纯度较高，避免不明成分引起的不良反应。

下述实验例和实施例用于进一步证明但不限于本发明。

实验例1：本发明紫丹参有效部位药效学实验

1.紫丹参有效部位口服药效实验

1.1 紫丹参有效部位口服给药对冠脉结扎致大鼠心肌缺血的影响

1.1.1 实验材料

实验药物：

按实施例1方法制备：A为药丹参酮累积部位、B为药丹酚酸累积部位、C为药其他部位、AB复方药为丹参酮和丹酚酸混合物。

丹参舒心胶囊：规格：0.3克/粒，批号：20081004。成分：丹参提取物，由河南辅仁堂制药有限公司生产。

试剂：聚乙二醇：无色透明液体，分子量400，分析纯，汕头市光华化学厂生产。

试验仪器：BL-410生物机能试验系统：成都泰盟科技有限责任公司生产并提供。

1.1.2：实验方法

动物分组：

将SD大鼠随机分为10组，分别为阴性对照组，阳性对照药丹参舒心胶囊组，本发明提取物A药大(0.44g/kg)、小(0.22g/kg)剂量组，B药大(0.48g/kg)、小(0.24g/kg)剂量组，AB复方药大(0.73g/kg)、小(0.37g/kg)剂量组，C药大(4.88g/kg)、小(2.44g/kg)剂量组。

A药配制：A药大、小剂量组分别称取0.44g、0.22g A药，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按1ml/100g体重灌胃给药。

B药配制：B药大、小剂量组分别称取0.48g、0.24g B药，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按1ml/100g体重灌胃给药。

C药配制：C药大、小剂量组分别称取4.88g、2.44g C药，放入烧杯，加蒸馏水配成最终容积为10ml的药液，按1ml/100g体重灌胃给药。

AB药配制：AB大剂量分别取A药0.12g、B药0.61g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按100g体重/ml灌胃给药。AB小剂量分别取A药0.06g，B药0.31g，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按1ml/100g体重灌胃给药。

丹参舒心胶囊的配制：

丹参舒心胶囊每日人用量为1.8g，即0.03g/kg。折算成大鼠剂量为0.162g/kg，10倍临床剂量为1.62g/kg。配制方法：称取1.62g丹参舒心胶囊，配成10ml药液。按1ml/100g体重灌胃给药。

1.1.3 实验步骤

大鼠按相应分组及剂量灌胃，阴性对照组给予30％聚乙二醇溶液，连续4天，每天一次，第4天末次给药后以10％水合氯醛按0.35ml/100g体重腹腔注射进行麻醉，背位固定，75％乙醇擦拭四肢，联接标准Ⅱ导联心电图，调整BL-410生物机能试验系统参数，监测心电图。分别左右两侧颈总动脉及气管，并行左侧颈总动脉插管，通过压力转换器与BL-410生物机能试验系统连接，观察血压曲线，记录血压；行气管插管，连接呼吸机以保持呼吸通畅。呼吸比5∶4；于第4肋间隙开胸，剪破心包膜，轻压挤出心脏，以冠状动脉主干为标志，左心耳根部下方2mm冠状动脉左前降支根部穿线，备结扎用；行右侧颈总动脉插管，用BL-410生物机能实验系统，将一末端连接压力换能器的心导管插入左心室，导管内充满肝素。当动脉血压波形突然变宽大，且最小值接近0时，说明导管已进入左心室；结扎冠状动脉左前降支，观察心电图判断有无心肌缺血的发生。若无心电的改变，则再穿线结扎(假手术组动物只穿线，不结扎)，记录结扎前后心率，动脉血压(收缩压SBP、舒张压DBP}、左心室内压(左室收缩压LVSP、左室舒张末压LVDP、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)等；结扎后记录上述指标时间分别为：结扎后3min、5min、10min、15min、30min、60min。

1.1.4 实验数据

实验结果以平均值±标准差表示，采用SPSS13.0统计软件进行组间t检验，检验水准α＝0.05。本发明紫丹参有效部位口服对心肌缺血大鼠心率(HR)的影响见表1

1.1.5 实验结果：

紫丹参系列提取物A药、B药、AB药均能一定程度的抑制大鼠心肌缺血时的HR、SBP、DBP、LVSP、LVEDP、+dp/dtm、-dp/dtm的下降和LVEDP的升高，C药作用较弱，与阴性对照组相似。

紫丹参提取物A药、B药、AB药比较，AB药作用较强，且AB药大剂量组对HR、LVEDP、-dp/dtm作用稍强于丹参胶囊组；A、B药作用总体上相似。

1.2.紫丹参提取物口服给药对大鼠颈总动脉电刺激致血栓形成的影响

1.2.1 实验材料同1.1.1

1.2.2：实验方法同1.1.2

1.2.3 实验步骤

用10％水合氯醛以0.35ml/100g体重腹腔注射麻醉大鼠，背位固定，分离股静脉备用；分离右侧颈总动脉并插管，通过压力转换器与BL-410生物机能试验系统连接，观察血压曲线；之后按相应剂量股静脉给药，阴性对照组给予等体积30％聚乙二醇溶液股静脉推注；给药10分钟后，于颈总动脉插管下方0.5cm(近心端)处，用保护电极接触颈总动脉，并将动脉适度提起，阻断血流，使血压曲线消失，变为直线，启动刺激(刺激强度为6mA，刺激频率为10Hz)，刺激过程中观察刺激处动脉颜色变化。当颜色变紫后，每隔15秒放松电极一次，但电极仍与动脉接触，观察有无压力曲线出现，如放松后压力曲线完全消失，则停止刺激，记录刺激开始至压力曲线消失的时间，即血栓形成时间。

1.2.4 实验数据

表8 紫丹参口服对电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的影响

1.2.5 实验结果

电刺激阴性对照组大鼠颈总动脉后，其血栓形成时间平均为332.70秒；阴性对照组比，除C药外，丹参舒心胶囊、A药、B药、AB复方药各剂量组血栓形成时间明显延长(P＜0.05～0.01)；与丹参舒心胶囊组比，A药大剂量、B药大剂量、AB复方药大剂量组延长血栓形成时间与之相似(P＞0.05)。

实验结果表明紫丹参系列提取物A药、B药、AB复方药口服均有延长血栓形成时间作用，具备传统意义上的活血化瘀中药的特性。

1.3 紫丹参两个有效部位不同配比口服给药对大鼠冠脉结扎导致心肌缺血的影响

1.3.1 试验材料

(1)试验动物

健康SD大鼠，体重250g左右，雌雄兼用。由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：川实动管质第10号。

(2)药品与试剂

按实施例1方法制备AB复方药(A∶B＝5∶0；A∶B＝5∶1；A∶B＝5∶5；A∶B＝1∶5；A∶B＝0∶5)为丹参酮和丹酚酸混合物；

丹参舒心胶囊：规格：0.3克/粒，批号：20081004。成分：丹参提取物，由河南辅仁堂制药有限公司生产。

聚乙二醇分析纯：分子量400，批号：20080213；成都科龙化工试剂厂生产；

(3)主要器械与仪器

BL-410生物机能试验系统：成都泰盟科技有限责任公司生产；

HX-300动物呼吸机：成都泰盟科技有限责任公司生产；

电子分析天平：精密度：1/1000g，Sartorius公司生产。

1.3.2 试验方法

(1)动物分组

将健康SD大鼠随机分为7组，分别为不给药心肌缺血组(阴性对照组)，丹参舒心胶囊组(1.62g/kg)，A∶B＝5∶0(简称配比1)，A∶B＝5∶1(简称配比2)，A∶B＝5∶5(简称配比3)，A∶B＝1∶5(简称配比4)，A∶B＝0∶5(简称配比5)。

(2)药物配制

配比1的配制：称取A药0.4914g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按1ml/100g体重灌胃给药。

配比2的配制：称取A药0.4914g、B药0.0983g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按1ml/100g体重灌胃给药。

配比3的配制：称取A药0.4914g、B药0.4914g，放入烧杯，加蒸馏水配成最终容积为10ml的药液，按1ml/100g体重灌胃给药。

配比4的配制：分别取A药0.0983g、B药0.4914g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按100g体重/ml灌胃给药。

配比5的配制：称取B药0.4914g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为10ml的药液(聚乙二醇浓度为30％)，按100g体重/ml灌胃给药。

丹参舒心胶囊的配制：

丹参舒心胶囊每日人用量为1.8g，即0.03g/kg。折算成大鼠剂量为0.162g/kg，10倍临床剂量为1.62g/kg。配制方法：称取1.62g丹参舒心胶囊，配成10ml药液。按1ml/100g体重灌胃给药。

(3)急性心肌缺血阴性对照的建立

大鼠按相应分组及剂量灌胃，阴性对照组给予30％聚乙二醇溶液，连续4天，每天一次，第4天末次给药后用10％水合氯醛(3.6mL/kg)腹腔注射麻醉动物，背位固定，75％乙醇擦拭四肢，联接标准Ⅱ导联心电图，调整BL-410生物机能试验系统参数，监测心电图。分离左右两侧颈总动脉及气管，并行左侧颈总动脉插管，通过压力转换器与BL-410生物机能试验系统连接，观察血压曲线，记录血压；行气管插管，连接呼吸机以保持呼吸通畅。呼吸比5∶4；于第4肋间隙开胸，剪破心包膜，轻压挤出心脏，以冠状动脉主干为标志，左心耳根部下方2mm冠状动脉左前降支根部穿线，备结扎用；行右侧颈总动脉插管，用BL-410生物机能实验系统，将一末端连接压力换能器的心导管插入左心室，导管内充满肝素。当动脉血压波形突然变宽大，且最小值接近0时，说明导管已进入左心室；结扎冠状动脉左前降支，观察心电图判断有无心肌缺血的发生。若无心电的改变，则再穿线结扎(假手术组动物只穿线，不结扎)，记录结扎前后心率，动脉血压{收缩压、舒张压}、左室收缩压LVSP、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升和下降速(±dp/dtmax)等；分别记录结扎后3min、5min、10min、15min、30min、60min各项指标。

(4)统计方法

试验根据动物对各剂量的反应，确定有效安全剂量，每组均从该剂量组中采纳6只动物数据进行统计处理，以平均值±标准差表示，采用SPSS13.0统计软件进行组间t检验，检验水准α＝0.05。

1.3.3 试验结果

(1)配比1对急性心肌缺血损伤大鼠血流动力学指标的影响

实验结果表明，A、B药不同配比作用特征相近，即均有明显改善急性心肌缺血大鼠血流动力学、心功能作用。其中，配比4作用慢但较强且持久，显示比其他配方具有较好的作用。

1.4 紫丹参两个有效部位不同配比口服给药对大鼠颈总动脉电刺激致血栓形成的影响

1.4.1 试验材料同1.3.1。

1.4.2.动物分组、药物配制同1.3.2部分。

1.4.3 试验方法

用10％水合氯醛以0.35ml/100g体重腹腔注射麻醉大鼠，背位固定，分离股静脉备用；分离右侧颈总动脉并插管，通过压力转换器与BL-410生物机能试验系统连接，观察血压曲线；之后按相应剂量股静脉给药，阴性对照组给予等体积30％聚乙二醇溶液股静脉推注；给药10分钟后，于颈总动脉插管下方0.5cm(近心端)处，用保护电极接触颈总动脉，并将动脉适度提起，阻断血流，使血压曲线消失，变为直线，启动刺激(刺激强度为6mA，刺激频率为10Hz)，刺激过程中观察刺激处动脉颜色变化。当颜色变紫后，每隔15s放松电极一次，但电极仍与动脉接触，观察有无压力曲线出现，如放松后压力曲线完全消失，则停止刺激，记录刺激开始至压力曲线消失的时间，即血栓形成时间。

1.4.4 试验结果

表16 不同配比提取物对电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的影响

根据电刺激大鼠颈总动脉致血栓形成的试验结果显示，A、B药不同配比均具有活血化瘀作用，其中配方4尤为突出。

实验例2：紫丹参有效部位的提取工艺的研究

2.紫丹参有效部位的提取工艺的研究

2.1 提取方法的选择

取药材50g，按加热回流提取法，渗漉法和温浸法分别各提取3次，比较出膏量和总丹酚酸、丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素钠含量。

加热回流法：取正己烷提取后的紫丹参药材各50.00g，3份，各加10倍量的水加热回流3次(2.0h、1.5h、1.5h)，合并提取液，过滤，60℃减压浓缩至稠膏，水浴蒸干，60℃减压干燥过夜。

温浸法：取正己烷提取后的紫丹参药材各50.00g，3份，各加10倍量的水80℃温浸3次，每次4小时，合并提取液，过滤，60℃减压浓缩至稠膏，水浴蒸干，60℃减压干燥过夜。

渗漉法：取正己烷提取后的紫丹参药材各50.00g，3份，各加2倍量的水浸泡18小时，然后用30倍量的水渗漉，合并渗漉液，过滤，60℃减压浓缩至稠膏，水浴蒸干，60℃减压干燥过夜。结果见表17、表18：

表17 紫外法测定总丹酚酸含量

表18 高效液相测定丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛的含量

从表17、表18中可以看出，总丹酚酸的量回流法得到要多一些，温浸法中丹酚酸B的含量要多于回流法，但丹酚酸B、丹参素钠和原儿茶醛的总和还是回流法要多一些，所以从时间上来看，回流法优于温浸法。

2.2 提取溶剂的选择

蒸馏水作为提取溶剂：称取正己烷提取后的紫丹参药材各50.00g，3份，各加10倍量的水加热回流3次(2.0h、1.5h、1.5h)，合并提取液，得到提取液体积均为1260ml。

80％乙醇作为提取溶剂：称取正己烷提取后的紫丹参药材各50.00g，3份，各加10倍量的80％乙醇加热回流3次(2.0h、1.5h、1.5h)，合并提取液，得到提取液体积分别为1420ml、1400ml、1400ml。将醇提液各取500ml，60℃减压浓缩至无醇味，定容至200ml。然后比较三个不同样品的干重，丹酚酸B、原儿茶醛、丹参素钠和总丹酚酸的转移率。具体数据见下表19、表20：

表19 紫外法总丹酚酸含量

表20 高效液相测定丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛含量

从表19、表20中可以看出：丹酚酸B和丹参素的总体转移率偏低，均在50％以下，对醇提后药渣进行丹酚酸B的含量测定，发现醇提后药渣中丹酚酸B含量较低，仅占1.19％，正己烷提取后药材中丹酚酸B的含量占药材中的97.97％，损失为2.13％，醇提液中只占47.92％，所以推测丹酚酸B可能是在药材提取过程中降解的。

丹参素钠的转移率分别为35.81％、6.55％、8.84％。因为测定药材中丹参素钠的含量时，用0.6％的碳酸氢钠溶液加热回流2h，这样可以把丹参药材中含有酯键的结构均打开，所以丹参素钠提取含量较高，而采用水提和醇提不能完全把酯键破坏，所以丹参素钠的转移率偏低。

应用同样的方法对乙醇提取后的药材进行丹参素钠含量测定，得到醇提后药材中丹参素钠含量为原药材含量的23.32％，所以进一步说明乙醇不能把药材中的丹参素钠完全提取出来。

由于丹酚酸B在提取过程中降解，并根据徐德然、王康才等的文章丹参中丹参素、原儿茶醛来源的初步研究中得出，丹参中丹参素和原儿茶杯醛主要是由丹酚酸B降解形成的。所以就采用丹酚酸B作为检测指标，而溶剂则选择乙醇加热回流提取。

2.3 考察药材规格：

称取紫丹参药材各50.00g，然后分别制成厚片(片厚2～4mm)，薄片(片厚1～2mm)，最粗粉(能完全通过20号筛，通过50号筛不超过20％)，细粉(能完全通过24号筛，通过65号筛不超过40％)各两份。分别置1000ml的圆底烧瓶中，加入10倍量的95％乙醇于85℃加热回流2小时，第2、3次分别加热回流1小时。放凉后，将提取液过滤合并，浓缩并定容至500ml。测定样品中丹参酮和丹酚酸的含量。

2.3.1 丹参酮含量测定

标品的制备：取丹参酮ⅡA标品(13.65mg/50ml)1.0ml置10ml量瓶中，取丹参酮Ⅰ(1.95mg/10ml)2.5ml置10ml量瓶中，取隐丹参酮(4.97mg/10ml)0.2ml置10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，待液相进样，进样量为10μl。

样品的制备：上述浓缩的样品各取适量，用0.45μm的有机滤膜过滤，待液相进样，进样量为10μl。

色谱条件：乙腈∶水＝50∶50

实验结果：

表21 隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量及转移率

2.3.2 丹酚酸B的含量测定

取浓缩样品1ml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，取适量用0.45μm的滤膜过滤，待液相进样，进样量为10μl。

色谱条件：甲醇∶甲酸水＝34∶66，甲酸∶水＝1∶59。

实验结果：

表22 丹酚酸B含量及转移率

原儿茶醛和丹参素钠在液相标品的地方无峰出现。

2.3.3 结论：从以上数据可以看出，粗粉提取出来的丹酚酸B和丹参酮比较高，丹参酮的转移率能达到80％，丹酚酸B在提取过程中，有一部分被破坏，所以转移率不高，总体比较来说，选择粗粉提取比较合适。

2.4 提取次数考察：

紫丹参药材用95％乙醇、10倍体积、加热回流进行第1次、第2次、第3次、第4次提取，然后将每次提取样品定容至200ml，测定提取液中丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的含量，丹酚酸B、原儿茶醛、丹参素钠的含量并计算其转移率。

表23 丹参酮的含量及转移率

表24 丹酚酸B的含量及转移率：

原儿茶醛在标品的地方无峰出现，丹参素钠峰分为两个，无法计算。

结论：从以上结果可以看出，用95％乙醇提取2次能把药材中丹参酮基本提取完全，而丹酚酸B 3次基本上能提取出来，丹酚酸B的转移率较低，由于在提取加热过程中降解被破坏，丹参素钠和原儿茶醛不能完全提取出来，考虑再用水提，所以醇提次数定为2次。

2.5 对乙醇浓度考察：

称取紫丹参20.00g，5份，分别用75％，80％，85％，90％，95％乙醇85℃水浴加热回流提取，提取三次，每次为1小时，将提取液过滤，分别合并，定容至一定的体积，然后测定各提取液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量，然后量取一定量提取液，浓缩，浓缩至原体积的1/35～1/45时，加入4倍体积的水，进行水沉，水沉24小时后，将沉淀和提取液分开，各自定容至一定的体积，然后测定沉淀中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量。

表25 提取液中丹参酮含量

表26 沉淀中丹参酮的含量

从以上结果来看，95％提取水沉后得到的丹参酮含量要高些。并且95％乙醇提取得到的样品水沉损失率较少，所以乙醇浓度定为95％。

2.6 考察提取时间：

称取紫丹参20.00g，2份，分别用95％乙醇加热回流提取，提取3次，时间分别为0.5、1.0、1.5小时，将提取液过滤，分别合并，定容至一定的体积，然后测定各提取液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量和丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素钠的含量。

表27 提取液中丹参酮的含量

表28 提取液中丹酚酸的含量

丹参素钠和原儿茶醛在对应标品的地方无峰出现。

实验结论：对于丹参酮来说，提取时间为1.5小时提取得到的丹参酮要多些，对于丹酚酸B来说，1小时得到的丹酚酸B要多些，但是丹酚酸1.0小时和1.5小时得到的差别不是很大。所以我们选项取提取时间为1.5小时。后来经过单因素分析，1.5小时和1小时没有显著差异，因此选择提取时间为第一次1.5小时，第二次1小时。

2.7 考察紫丹参的提取溶剂体积：

称取紫丹参20.00g，6份，分别加入95％乙醇12倍体积、10倍体积、8倍体积水浴加热回流提取，提取两次，时间为1.5小时，将提取液过滤，分别合并，定容至500ml，然后测定各提取液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量和丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素钠的含量。

表29 提取液中丹参酮的含量

表30 提取液中丹酚酸的含量

丹参素钠和原儿茶醛在对应标品的地方无峰出现。

实验结论：从丹参酮和丹酚酸两者来看均是第一次为12倍体积95％乙醇提取，第二次为10倍体积95％乙醇提取得到的量要高些，所以我们选择提取溶剂95％乙醇的体积为第一次12倍，第二次为10倍体积。经单因素分析，调整为第一次和第二次均为10倍量乙醇提取。

2.8 对水沉体积的考察：

称取紫丹参20.00g，6份，分别95％乙醇水浴加热回流提取，提取2次，时间为1.5小时，将提取液过滤，分别合并，定容至500ml，然后测定各提取液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量和丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素钠的含量。然后将提取液取一定量浓缩至一定体积，然后加入水进行水沉，水沉体积分别为2、4、6倍。测定水沉后沉淀中丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ以及水溶液中丹酚酸B原儿茶醛和丹参素钠的含量。计算其转移率和样品中丹参酮的百分率和丹酚酸的百分率。

表31 沉淀中丹参酮的含量

表32 上清液中丹酚酸的含量

实验结论：从丹参酮和丹酚酸两者来看均是加入6倍体积的水沉淀要比加入2倍和4倍得到的丹酚酸和丹参酮均要多些，并且6倍体积得到的丹参酮的干重要少些，说明去除杂质较多，所以选择加入6倍的水进行水沉。

2.9 对水沉水pH值的考察：

称取紫丹参200.00g，加入95％乙醇加热回流提取，提取2次，两次加入醇体积均为2000ml，提取时间第一次为1.5小时，第二次为1.0小时，将提取液过滤，合并，定容至5000ml，然后测定提取液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量和丹酚酸B、原儿茶醛和丹参素钠的含量。然后将提取液取一定量浓缩至一定体积，然后加入水进行水沉，水沉体积为6倍，加入水后水溶液的pH值分别调为2，3，4，5，6，7。静置48小时，然后将上清液与沉淀分离，测定水沉后沉淀中丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ以及水溶液中丹酚酸B原儿茶醛和丹参素钠的含量。计算其转移率和样品中丹参酮的百分率。

实验结果：

表33 沉淀用乙醇溶解后其中丹参酮的含量

表34 水溶液中丹酚酸的含量：

表3 5沉淀中丹酚酸B的含量：

实验结论：

丹参素钠和原儿茶醛的转移率明显增高，可能是由于丹酚酸B降解导致。

pH值为5～7时，沉淀用乙醇溶解后其中丹酚酸的含量不到水沉前溶液中含量的1％，可以说明沉淀中几乎不含丹酚酸B。

丹参酮在水溶液pH值为5左右时得到的丹参酮量较多，占干重比例也比较大。

丹酚酸在水溶液pH值为6左右时得到的丹酚酸的量较多。

总结以上几点，水溶液的pH值为5～6时比较好，所以选择醇提水沉时水溶液的pH值为5～6较佳。

2.10 总丹酚酸的纯化工艺

2.10.1 丹酚酸树脂型号考察

2.10.1.1 不同大孔树脂对丹酚酸吸附性能和洗脱性能的考察

药材800.00g，加入10倍量乙醇，加热回流1.5小时，倒出提取液，再加入10倍量乙醇，加热回流1.0小时，倒出提取液，合并，浓缩至400ml，加入6倍量水，调pH值为5，水沉24小时，分离上清液与沉淀，将上清液定容至3000ml，测其丹酚酸B总量、总丹酚酸总量、丹参素钠和原儿茶醛的量。将提取液上样，每次为100ml，每根柱子上样3次，接其残留液，然后用pH值为2的水洗脱，接其洗脱液，洗至Molish反应呈阴性。最后用80％乙醇洗脱，接其醇洗液，洗至三氯化铁反应为阴性。然后测各残留液、水洗液、醇洗液中丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛和总丹酚酸的含量并计算各自的比上柱量、比吸附量和比洗脱量。

大孔树脂型号：

表36 不同型号树脂对丹酚酸B吸附和洗脱性能的影响

表37 不同型号树脂对丹参素钠吸附和洗脱性能的影响

表38 不同型号树脂对原儿茶醛吸附和洗脱性能的影响

表39 不同型号树脂对总丹酚酸吸附和洗脱性能的影响

表40 总丹酚酸、丹酚酸B、丹参素钠和原儿茶醛分别占干重

实验结论：

丹参素钠用水就可以从柱子上洗脱下来，8种型号的树脂对丹参素钠均不是很好吸附。相比较sp-825与LS-105效果较好一些。

2.10.1.2 两种大孔树脂流速的测定：

两种大孔树脂体积均为30ml，先用醇洗10倍柱体积，然后再用水洗10倍柱体积，然后再用醇洗5倍柱体积，测定两根柱子的全打开的流速。

LS-105大孔树脂柱流速为25ml/min，而SP-825大孔树脂柱流速为9.6ml/min，LS-105柱子的流速为SP-825柱子的2.6倍。

2.10.1.3 大孔树脂刚性的考察

大孔树脂型号：

大孔树脂振摇后，可以看出ME-1、LS-105、LS-300和SP-825四种树脂上清液比较澄清。超声半小时以后，只有LS-105和SP-825两种树脂上清液比较澄清。LS-105价格与SP-825相比较相对偏宜一些，LS-105为65元/L，而SP-825为350元/L。再根据树脂的比上柱量、比吸附量、比洗脱量以及树脂的可压性综合比较，选择大孔树脂LS-105作为分离丹酚酸类成份。

2.10.2LS-105大孔树脂丹酚酸洗脱曲线考察：

取紫丹参醇沉水提液和水提液的混合液，加盐酸调pH值为2，滤过，加到预处理好的LS-105大孔树脂上(柱高/柱径：10∶1，30ml树脂)，以树脂柱床体积3～4倍流速通过树脂柱，上液量根据以上泄露曲线的最大吸附量的70％计算，上样完成后，用10％乙醇洗脱，洗脱体积为Molish反应为阴性即可，然后用80％乙醇冲洗大孔树脂柱，以每10ml为一流份接收流出液，测定丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、迷迭香酸、总丹酚酸的含量。

表41 丹酚酸各成份洗脱流份重量表：

表42 丹酚酸各成份洗脱流份累计百分比

从测定结果看出，10％乙醇不能将主要有效成分洗脱下来；丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和总丹酚酸用80％乙醇4个柱体积基本能洗完全，从累计洗脱百分率来看，80％乙醇4个柱体积能把迷迭香酸、丹参素钠和原儿茶醛洗脱下来，可以将98％以上的丹酚酸B和总丹酚酸洗脱下来，所以选择先用10％乙醇洗脱杂质，洗至Molish反应阴性即可，80％乙醇洗脱大孔树脂4个柱体积得到总丹酚酸。

2.11 药渣水提工艺研究：

醇提药渣各取20.00g，加热回流提取，其他条件按下面正交设计进行。然后将各提取液定容至500ml，第7份定容至600ml，测定各提取液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和总丹酚酸的含量。

表43 紫丹参药渣水提工艺正交设计表

实验结果：

表44 紫丹参药渣水提工艺正交实验数据

表45 丹参素钠方差分析表

表46 原儿茶醛方差分析表

表47 迷迭香酸方差分析表

表48 丹酚酸B方差分析表

表49 总丹酚酸方差分析表

从以上结果可以看出，以丹参素钠选A₁B₃C₃，原儿茶醛选用A₃B₃C₃，迷迭香酸选用条件A₂B_2，3C₃，丹酚酸B选用条件A₁B₁C₂，总丹酚酸选用条件A₁B₁C₃，综合五项指标，按照最小值与最大值的差值百分比计算，则选择的提取条件为A₁B₂C₂，因为从方差分析结果来看，只有丹酚酸B中提取次数影响显著，因此选择提取次数为2，由于其提取次数较多，因此提取时间暂定为水提第一次为1小时，第二次为0.5小时，这样比较节省时间，又能保证丹酚酸B不被破坏的程度上最大量的提取丹酚酸。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：片剂

将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入10重量倍的95％的乙醇，加热回流提取1.5小时，再用10重量倍的乙醇加热回流提取1.0小时；合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/2，加入6重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为5，静置48小时，分离上清液与沉淀；将水沉沉淀部分先用环己烷溶解，再浓度为0.5％的碳酸钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；将乙醇回流提取中残留的药渣加入6重量倍的水，提取1小时，再用6重量倍的水提取0.5小时，将两次水提液与水沉上清液合并；将合并液调pH值为2，过LS-105大孔树脂柱，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80％乙醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得有效部位II；将有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。

实施例2：胶囊剂

将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入6重量倍的90％的乙醇，加热回流提取2小时，再用6重量倍的乙醇加热回流提取0.6小时；合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的3/5，加入8重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为4，静置36小时，分离上清液与沉淀；将水沉沉淀部分先用乙酸乙酯溶解，再浓度为0.8％的氢氧化钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；将乙醇回流提取中残留的药渣加入8重量倍的水，提取0.8小时，再用5重量倍的水提取0.6小时，将两次水提液与水沉上清液合并；将合并液调pH值为3，过SP-825大孔树脂柱，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用8％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用75％乙醇洗脱，洗脱体积为5倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得有效部位II；将有效部位I与有效部位II按照5∶1的比例合并，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。

实施例3：丸剂

将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入12重量倍的85％的乙醇，加热回流提取1.2小时，再用12重量倍的乙醇加热回流提取1.2小时；合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的2/5，加入5重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为6，静置50小时，分离上清液与沉淀；将水沉沉淀部分先用正己烷溶解，再浓度为0.4％的氨水进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；将乙醇回流提取中残留的药渣加入4重量倍的水，提取1.2小时，再用8重量倍的水提取0.4小时，将两次水提液与水沉上清液合并；将合并液调pH值为2，过聚酰胺大孔树脂柱，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用12％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用90％乙醇洗脱，洗脱体积为3倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得有效部位II；将有效部位I与有效部位II按照5∶0的比例合并，加入常规辅料，按照常规工艺，制成丸剂。

实施例4：口服液体制剂

将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入5重量倍的100％的乙醇，加热回流提取4.5小时，再用6重量倍的乙醇加热回流提取0.5小时；合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的4/5，加入9重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为3，静置12小时，分离上清液与沉淀；将水沉沉淀部分先用石油醚溶解，再浓度为4％的氢氧化钾溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；将乙醇回流提取中残留的药渣加入9重量倍的水，提取0.6小时，再用2重量倍的水提取3小时，将两次水提液与水沉上清液合并；将合并液调pH值为5，过D101大孔树脂柱，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用6％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用65％乙醇洗脱，洗脱体积为8倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得有效部位II；将有效部位I与有效部位II按照0∶5的比例合并，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液体制剂。

实施例5：滴丸

将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入25重量倍的65％的乙醇，加热回流提取1小时，再用28重量倍的乙醇加热回流提取4小时；合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/5，加入2重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为6，静置72小时，分离上清液与沉淀；将水沉沉淀部分先用四氢呋喃溶解，再浓度为0.2％的碳酸钾进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；将乙醇回流提取中残留的药渣加入2重量倍的水，提取3.5小时，再用8重量倍的水提取0.2小时，将两次水提液与水沉上清液合并；将合并液调pH值为1，过HPD-450大孔树脂柱，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用45％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用100％乙醇洗脱，洗脱体积为2倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得有效部位II；将有效部位I与有效部位II按照5∶5的比例合并，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸。

Claims (55)

1.一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

A.将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入10重量倍的95％乙醇，加热回流提取1.5小时，再用10重量倍的95％乙醇加热回流提取1.0小时；

B.合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/5～4/5，加入1～10重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为3～7，静置12～72小时，分离上清液与沉淀；

C.水沉沉淀部分先用常规溶剂溶解，再用碳酸钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I；

D.将步骤A中残留的药渣用水提取，将水提液与步骤B中水沉上清液合并；

E.将合并液过大孔树脂柱，即得有效部位II；

F.将步骤C中的有效部位I与有效部位II合并即得。

2.如权利要求1所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤B中合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/2，加入6重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为5，静置48小时，分离上清液与沉淀。

3.如权利要求1-2任一所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中常规溶剂为正己烷、环己烷、乙酸乙酯、正庚烷、正戊烷、石油醚、甲基叔丁基醚、乙醚、二氯甲烷、甲苯、乙酯、四氢呋喃、甲酸乙酯、甲酸丁酯、乙酸丁酯中的一种或几种。

4.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法中所述步骤C中常规溶剂为环己烷。

5.如权利要求1、2或4所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0.2％～5％。

6.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0.2％～5％。

7.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法中所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0.5％。

8.如权利要求6所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法中所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0.5％。

9.如权利要求1、2、4、6、7或8所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钙溶液替代。

10.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钙溶液替代。

11.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制各方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钙溶液替代。

12.如权利要求1、2、4、6、7、8、10或11所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入1～10重量倍的水，提取0.5～5小时，再用1～10重量倍的水提取0.2～4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

13.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入1～10重量倍的水，提取0.5～5小时，再用1～10重量倍的水提取0.2～4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

14.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入1～10重量倍的水，提取0.5～5小时，再用1～10重量倍的水提取0.2～4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

15.如权利要求9所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入1～10重量倍的水，提取0.5～5小时，再用1～10重量倍的水提取0.2～4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

16.如权利要求12所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入6重量倍的水，提取1小时，再用6重量倍的水提取0.5小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

17.如权利要求13-15任一所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入6重量倍的水，提取1小时，再用6重量倍的水提取0.5小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并。

18.如权利要求1、2、4、6、7、8、10、11、13、14、15或16所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为1～7，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

19.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为1～7，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

20.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为1～7，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

21.如权利要求9所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为1～7，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

22.如权利要求12所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为1～7，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5％～50％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60％～100％乙醇洗脱，洗脱体积为2～10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

23.如权利要求18所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为2，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80％乙醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

24.如权利要求19-22任一所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为2，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10％的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80％乙醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。

25.如权利要1、2、4、6、7、8、10、11、13、14、15、16、19、20、21、22或23所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

26.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

27.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

28.如权利要求9所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

29.如权利要求12所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

30.如权利要求17所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

31.如权利要求18所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-11、D101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-1、SP-825。

32.如权利要求25所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为LS-105。

33.如权利要求26-31任一所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为LS-105。

34.如权利要求1、2、4、6、7、8、10、11、13、14、15、16、19、20、21、22、23、26、27、28、29、30、31或32所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

35.如权利要求3所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

36.如权利要求5所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

37.如权利要求9所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

38.如权利要求12所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

39.如权利要求17所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

40.如权利要求18所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

41.如权利要求24所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

42.如权利要求25所述的紫丹参有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照1∶5的比例合并即得。

43.如权利要求1、2、4、6、7、8、10、11、13、14、15、16、19、20、21、22、23、26、27、28、29、30、31、32、35、36、37、38、39、40、41或42所述的方法制各得到的紫丹参有效部位。

44.如权利要求3所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

45.如权利要求5所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

46.如权利要求9所述的方法制各得到的紫丹参有效部位。

47.如权利要求12所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

48.如权利要求17所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

49.如权利要求18所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

50.如权利要求24所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

51.如权利要求25所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

52.如权利要求33所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

53.如权利要求34所述的方法制备得到的紫丹参有效部位。

54.如权利要求43所述的紫丹参有效部位在制各治疗心血管疾病药物中的应用。

55.如权利要求44-53任一所述的紫丹参有效部位在制备治疗心血管疾病药物中的应用。