CN102846501A - 银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途。所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等,可通过化学分离方法,从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到。含有银杏酚酸的美白祛斑换肤的药物或化妆品,含银杏酚酸0.001-80%(以重量百分比计),以及药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体;所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型。药理学试验研究表明,本发明具有抑制皮肤酪氨酸酶活性和黑色素生成,并能明显促进角质形成细胞的增殖和细胞凋亡,具有显著的美白祛斑换肤效果。临床试用表明,本发明对面色暗黄、面部色斑具有显著的改善和防治作用,有效率达100%,使用安全,无副作用。
Description
技术领域
本发明属于治疗性化妆及生物医药领域,具体涉及银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途。
背景技术
近年来,随着人口老化、环境污染、全球气温上升,越来越多的人出现皮肤色素失调性疾病。寻找更安全和有效的新型外用皮肤美白祛斑剂是当今药妆品的研究热点之一。一直以来,美白祛斑都是人们所热切关注的话题,人们希望通过美白护理品的使用而得到白皙、光洁的皮肤,并利用功能型美白化妆品来减轻老年斑、黄褐斑等色素沉积。随着生化科技的发展,人们对黑色素合成生物学机制的认识正不断深入,越来越多的科研工作者倾向于从天然植物中寻找安全高效的美白祛斑活性物质。但市场上部分美白祛斑产品铅、汞等重金属超标,对人体健康造成了严重的损害;因此市场需要研制开发来源于天然、效果显著、无不良反应的美白祛斑换肤化妆品产品,以满足人们对美的追求和治疗需要;开发此类产品具有良好的市场前景,是十分有益和必要的。
银杏是我国珍贵的药用植物,银杏的叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值。据《本草纲目》记载,银杏性甘、苦、平、涩;有定喘止咳、止带浊、止痛之功;主治寒嗽痰喘、哮喘、小便频数、赤白带下、手足皲裂等。特别是近几十年来人们发现银杏叶中含有多种有效成分,主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物,具有防治心脑血管疾病的功能。我国民间早有将银杏外种皮浸泡液作为农药使用,对蚜虫、稻螟虫等害虫有杀灭作用。
银杏酚酸为无色或淡黄色的油状或粉末状物质,是存在于银杏叶、果和外种皮中一类具有重要生理活性的组分。本发明所涉及的银杏酚酸为烷基或烯基苯酚酸类物质,根据分子中苯环上是否连接有羧基,将其分为银杏酸和银杏酚两大类。银杏酸是水杨酸分子在苯环C6位上有饱和或不饱和长链烷基的系列化合物,按化学结构可分为5种,侧链R为C13H27、C15H29、C15H31、C17H31和C17H33,对应的分子量分别为320、346、348、372、374。银杏酚酸包括白果酸、氢化白果酸、白果新酸、白果亚酸、氢化白果亚酸、漆树酸、银杏酚、银杏二酚、白果醇等。银杏酚酸(银杏酸、银杏酚、银杏二酚)结构见下。
银杏酚酸的结构
随着对银杏酚酸类物质研究的逐渐深入,发现银杏酚酸具有多种生物活性。已有研究表明,银杏酚酸对体外多种细菌有良好的抑制作用,能抑制部分农业病原菌的生长;银杏酚酸对肿瘤细胞株的生长有良好的抑制作用。有关银杏酚酸的提取、分析及体外抗菌活性、抗农业病原菌和病原虫、抗肿瘤活性已有文献报道。目前尚未见银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途的报道。因此,有关银杏酚酸美白祛斑换肤新型化妆品、药物的研究开发,以及对银杏资源的充分开发利用,将产生巨大的社会和经济效益。
发明内容
本发明的目的是提供银杏酚酸的新用途,即银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途。它具有美白祛斑换肤效果好,疗效显著、使用安全的特点。
本发明的目的是这样实现的:
提供银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途。
所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等,可通过化学分离方法,从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到;或对银杏叶、果、外种皮、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收;或从其它植物含有本类化合物的各部分提取物中获得;或通过化学合成的方法获得。本发明要求保护该类化合物及其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、结晶形态等物质。
还提供含有银杏酚酸的美白祛斑换肤的药物或化妆品,含有银杏酚酸0.001-80%,以重量百分比计,以及药学上常用的外用制剂基质或外用制剂可接受的载体。
更进一步的,含有银杏酚酸0.001-30%,以重量百分比计。
更进一步的,含有银杏酚酸0.1-20%,以重量百分比计。
按上述重量比范围取银杏酚酸、药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体制备得到银杏酚酸外用制剂;以及包含银杏酚酸和任何物质组合用于美白祛斑换肤的药物或化妆品。所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型,可以是液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、粉剂、膜剂、洗剂、气雾喷雾剂、透皮吸收制剂、皮下注射剂等。
本发明的有益效果是,药理药效学试验研究表明,本发明银杏酚酸外用制剂具有抑制皮肤色素沉着、抑制黑素细胞酪氨酸酶活性和黑色素生成,抑制黑素细胞增生,并能明显地促进HaCaT角质形成细胞的增殖和细胞凋亡;具有显著的美白祛斑换肤效果。局部刺激性实验研究表明本发明安全,无皮肤刺激、过敏等不良反应。临床试用结果表明,本发明对面色暗黄、面部色斑具有显著的改善和防治作用,有效率达100%,使用安全无副作用。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明作进一步地描述。
实施例1:
银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺如下:将银杏果外种皮剥离下来,晒干,用粉碎机将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏外种皮,加入料液比为1∶6(W/V)的80%乙醇,在水浴温度60℃下,搅拌浸提2次,每次提取时间4小时,(注:加液后,烧杯口用保鲜膜封住,以防止乙醇的挥发)。浸提结束后,用抽滤器抽滤,收集滤液。用真空旋转蒸发仪浓缩滤液,条件为温度55℃,压强0.008-0.009MPa,减压浓缩。于60℃真空干燥,得银杏酚酸浸膏,性状为:浅褐色浸膏,微臭,溶于醇,不溶于水;称重,并测定银杏酚酸含量(mg/g)。
银杏酚酸含量测定:采用HPLC法进行测定。银杏酚酸的标准品溶液在100-1200μg/ml之间,相应峰面积与银杏酚酸质量浓度有显著的线性关系,制订了标准曲线。用无水乙醇(色谱纯)将银杏酚酸浸膏溶解,过滤。在柱温:室温;流动相:甲醇-水(9∶1,v/v);流速lml/min;进样量:20μl;检测波长310nm;分析时间:25min条件下测定浸膏中银杏酚酸含量。根据标样的保留时间进行定性,用外标法计算银杏酚酸的含量。浸膏中银杏酚酸含量为652.05mg/g。
银杏酚酸提取工艺和含量测定方法为公知公用的方法。
凝胶剂的制备:将卡波普10g洒在500ml蒸馏水表面,溶胀过夜。称取甘油60g,丙二醇120ml,分别加入至溶胀好的卡波普中,迅速研磨均匀,得到透明的凝胶基质。取上述银杏酚酸浸膏40g,溶解于100ml 95%乙醇溶液中,缓慢加入至凝胶基质中,搅拌均匀。再缓慢加入三乙醇胺15ml,补蒸馏水至足量1000g,即得淡黄色银杏酚酸凝胶1000g,银杏酚酸含量为2.61%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
凝胶剂制备工艺为公知公用的方法。
实施例2:
银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺如下:将白果去皮,放入组织捣碎机中粉碎。准确称取一定量经粉碎的白果,加入料液比为1∶10(W/V)的80%乙醇,在水浴温度60℃下,搅拌浸提2次,每次提取时间4小时,(注:加液后,烧杯口用保鲜膜封住,以防止乙醇的挥发)。浸提结束后,离心(5000转/分,15分钟),取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液,条件为温度55℃,压强0.008-0.009MPa,减压浓缩,并于60℃真空干燥,得银杏酚酸浸膏,性状为:浅褐色浸膏,微臭,溶于醇,不溶于水。称重,并测定银杏酚酸含量(mg/g)。
银杏酚酸含量测定:同实施例1。浸膏中银杏酚酸含量为405.19mg/g。
软膏剂的制备:取上述银杏酚酸浸膏40g,溶解于100ml95%乙醇溶液中,再向其中加入三乙醇胺50ml,加温至70℃。将石蜡300g、硬脂酸300g、丙二醇100ml分别加入搅拌融化,补蒸馏水至足量1000g,搅拌均匀至膏状,即得淡黄色银杏酚酸软膏1000g,银杏酚酸含量为1.62%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
软膏剂制备工艺为公知公用的方法。
实施例3:
银杏叶中银杏酚酸提取工艺如下:将银杏叶剪碎,放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶,加入料液比为1∶6(W/V)的80%乙醇,在水浴温度60℃下,搅拌浸提2次,每次提取时间4小时,(注:加液后,烧杯口用保鲜膜封住,以防止乙醇的挥发)。浸提结束后,离心(5000转/分,15分钟),取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液,条件为温度55℃,压强0.008-0.009MPa,减压浓缩,并于60℃真空干燥,得银杏酚酸浸膏,性状为:浅褐色浸膏,微臭,溶于醇,不溶于水。称重,并测定银杏酚酸含量(mg/g)。
银杏酚酸含量测定:同实施例1。浸膏中银杏酚酸含量为511.33mg/g。
酊剂的制备:取上述银杏酚酸浸膏80g,溶解于600ml 95%乙醇溶液中,再向其中分别加入三乙醇胺50ml,丙二醇200ml搅拌,补95%乙醇溶液至足量1000ml,即得淡黄色银杏酚酸酊剂1000ml,银杏酚酸含量为4.09%(W/V)。分装于50支小管中,每支20ml。
酊剂制备工艺为公知公用的方法。
实施例4:
银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为634.91mg/g。取银杏酚酸浸膏80g,按实施例1凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g,银杏酚酸含量为5.08%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
实施例5:
银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2,含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为501.27mg/g。取银杏酚酸浸膏10g,按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g,银杏酚酸含量为0.50%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
实施例6:
银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3,含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为526.03mg/g。取银杏酚酸浸膏200g,按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml,银杏酚酸含量为10.52%(W/V)。分装于50支小管中,每支20ml。
实施例7:
银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为636.01mg/g。取银杏酚酸浸膏300g,按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml,银杏酚酸含量为19.08%(W/V)。分装于50支小管中,每支20ml。
实施例8:
银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3,含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为557.24mg/g。取银杏酚酸浸膏200g,按实施例1凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g,银杏酚酸含量为11.14%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
实施例9:
银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为668.95mg/g。取银杏酚酸浸膏500g,按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml,银杏酚酸含量为33.45%(W/V)。分装于50支小管中,每支20ml。
实施例10:
银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2,含量测定方法同实施例1,得银杏酚酸浸膏,银杏酚酸含量为454.25mg/g。取银杏酚酸浸膏1g,按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g,银杏酚酸含量为0.045%(W/W)。分装于50支小管中,每支20g。
用以上方法制成的银杏酚酸外用制剂,进行相关的药理药效学试验、局部刺激性安全性评价实验和临床试用试验。下面是本发明的实验数据:
以色素沉着动物模型研究与评价本发明的应用效果。对成年雌性棕黄色豚鼠背部剃毛后进行UVB照射,首次照射亚红斑量,以后隔日照射1次五分之一亚红斑量,共照射6次总量为8500mj/cm2,以诱导色素沉着。于第2次照射开始,每天向实验动物背部皮肤的相应区域分别外涂本发明银杏酚酸凝胶,以进行干预治疗。3周后进行评价:肉眼观察豚鼠皮肤红斑、鳞屑及色素沉着情况并进行计分。结果表明,本发明对UVB照射诱导豚鼠皮肤色素沉着具有明显的抑制作用。
体外培养正常表皮黑素细胞,将传代黑素细胞计数按种于6个培养瓶中,确保每瓶细胞数相同,另设1瓶为空白对照组。6个培养瓶中分别加入本发明银杏酚酸酊剂100μl,200μl,400μl,600μl,800μl,1000μl,培养3天。消化细胞,重新按种于96孔板(每孔细胞数2×103)。采用氢氧化钠溶解法测定细胞黑素含量,每孔加入100μl lmol/L的氢氧化钠,37℃保温1小时,测其在450nm处的吸光度值,绘制黑素标准曲线,计算黑素含量。结果表明(见表1),与空白对照组相比,本发明银杏酚酸外用制剂可使黑素细胞内黑素含量明显降低。说明本发明具有抑制黑色素生成的作用。
采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色测定细胞增殖活力,将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2×103),仍用上述6种药物剂量培养3天后,吸出培养液,于每孔加入MTT溶液100μl于37℃反应4小时,弃去MTT,每孔加入100μl DMSO并振荡10分钟,充分溶解结晶物,490nm处测定吸光度A值,实验结果用细胞增殖率表示(实验组A值/对照组A值×100)。结果表明(见表2),与空白对照组相比,本发明银杏酚酸外用制剂可使黑素细胞增殖率明显降低。说明本发明具有抑制黑素细胞增生的作用。
以L-Dopa为底物,采用体外氧化多巴反应方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性。将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2×103),仍用上述6种药物剂量培养72小时后,收集细胞,离心弃去上清液,用0.01mol/L的PBS洗2次,加入200μL0.1%TritonX-100裂解液,置于-80℃冰箱中0.5小时,37℃水浴箱中复温0.5小时,加2mg/mL L-Dopa400μL,继续37℃孵育2小时,分光光度计读取450nm处吸光度A值,用L-Dopa的自动氧化进行校正。重复3次。实验结果用酪氨酸酶活性(%)=实验组A值/对照组A值×100%表示。结果表明(见表3),与空白对照组相比,本发明银杏酚酸外用制剂对黑素细胞酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用。酪氨酸酶是一种含铜酶,是哺乳动物细胞中黑素生成的关键酶。说明本发明可通过抑制黑素细胞酪氨酸酶活性,抑制黑素细胞内黑色素的生成。
表1.对黑素细胞内黑素含量的影响
x±s.n=12.与空白对照相比,*P<0.05,**P<0.01.
表2.对黑素细胞增殖的影响
x±s.n=12.与空白对照相比,**P<0.01.
表3.对酪氨酸酶活性的影响
x±s.n=12.与空白对照相比,**P<0.01.
用完全培养基培养角质形成细胞株HaCaT,置于37℃5%CO2孵育箱中培养,每3d-4d传代1次。取对数生长期的细胞用于实验。用MTT法测定细胞增殖情况。将HaCaT细胞以2×104的密度接种于96孔板,200μL/孔,24h细胞贴壁后弃去原培养液,加入含本发明银杏酚酸酊剂的培养基培养,每组均设3个复孔,培养24h,加入MTT液(20μL/孔),继续培养4h,小心吸弃孔内上清液,每孔加入150μLDMSO,振荡10min后,在酶标仪上测OD值,波长为492nm。取对数生长期细胞1瓶,稀释成1×101/mL细胞悬液。取100mL培养瓶,每瓶加入细胞悬液10mL(1×105个细胞/瓶),预培养24h。按实验分组加入含本发明银杏酚酸酊剂培养基后,细胞继续培养24h。制备成细胞悬液,加入70%冷乙醇,离心去除固定液,加入3mL PBS洗两遍,加入lmLPI染色液,4℃冰箱避光孵育30min,500目铜网过滤。用流式细胞仪检测。结果表明,本发明银杏酚酸外用制剂能明显地促进HaCaT角质形成细胞的增殖和细胞凋亡,且呈浓度依赖性,与对照组比较有显著性差异。说明本发明具有促进皮肤角质形成细胞增殖和凋亡的作用,从而达到换肤的功效。
局部刺激性实验:取成年家兔8只,雌雄各半,每只动物分笼饲养,先在实验室条件饲养3-4天。然后将家兔脊柱两侧背毛用电动剃毛器剃去,每侧面积5×10cm2。仔细检查脱毛区是否有红肿和损伤,如有应弃之,不能进行试验。采用多次给药的试验方法,在脱毛区涂抹本发明银杏酚酸外用制剂,每日2次,连续涂抹7天。末次涂抹24小时后用温水洗去涂抹物,分别于1、24、48、72小时后观察局部皮肤反应,如红斑、水肿、脱屑、结痂等,是否有出血点、皮肽粗糙或菲薄等,记录发生时间及消退时间。实验结果表明,在连续涂抹本发明银杏酚酸外用制剂7天后,各家兔皮肤均未表现出明显的皮肤刺激和过敏反应。表明本发明产品安全,无不良反应。
临床试用试验:用以上方法制成的银杏酚酸外用制剂,经面色暗黄、面部色斑人群试用,年龄18-50岁。临床疗效判定标准:治愈;皮损全部或基本消失,颜色正常或接近正常;有效:皮损明显缩小,颜色明显降低;无效:皮损无明显缩小,颜色可以稍淡。所有患者用本发明外涂面部,每天2次,连续30天;在使用本发明期间面部均不使用任何其它化妆品或皮肤外用药物。治愈率=治愈人数/总病例X100%;有效率=(治愈人数+有效人数)/总病例X100%。结果见表4。临床试用结果表明,面色暗黄、面部色斑人群使用本发明银杏酚酸外用制剂均有效,有效率达100%;治愈率超过90%。所有患者在应用本发明期间均未出现皮肤刺激、过敏等不良反应。因此本发明是一种理想的美白祛斑换肤的外用制剂,疗效显著,使用安全可靠。
表4本发明银杏酚酸外用制剂美白祛斑换肤的临床效果
本发明与现有技术相比:本发明来源于天然珍贵药用植物银杏,从银杏叶、果、外种皮等部位提取分离银杏酚酸,以银杏酚酸为有效成分制成皮肤外用制剂,具有抑制皮肤色素沉着、抑制黑素细胞酪氨酸酶活性和黑色素生成、抑制黑素细胞增生,并能明显地促进角质形成细胞的增殖和细胞凋亡;具有显著的美白祛斑换肤效果。对面色暗黄、面部色斑具有显著的改善和防治作用,疗效突出、使用安全无副作用,具有良好的临床应用前景。
Claims (7)
1.银杏酚酸在美白祛斑换肤中的用途。
2.银杏酚酸在制备美白祛斑换肤的外用制剂中的用途。
3.如权利要求2所述的银杏酚酸外用制剂,为含有银杏酚酸的美白祛斑换肤的药物或化妆品;以及包含银杏酚酸和任何物质组合用于美白祛斑换肤的药物或化妆品;其特征是,所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型,可以是液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、粉剂、膜剂、洗剂、气雾喷雾剂、透皮吸收制剂、皮下注射剂等。
4.如权利要求3所述的药物或化妆品,其特征是,含有银杏酚酸0.001-80%,以重量百分比计。
5.如权利要求3所述的药物或化妆品,其特征是,含有银杏酚酸0.001-30%,以重量百分比计。
6.如权利要求3所述的药物或化妆品,其特征是,含有银杏酚酸0.1-20%,以重量百分比计。
7.所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等,可通过化学分离方法,从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到;或对银杏叶、果、外种皮、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收;或从其它植物含有本类化合物的各部分提取物中获得;或通过化学合成的方法获得;包括银杏酚酸药学上可接受的盐、酯、溶剂化物,结晶形态的物质。
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CN107072903A (zh) * | 2014-10-30 | 2017-08-18 | 欧莱雅 | 亲脂性水杨酸衍生物的用途 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130102 |