CN102841067B - 一种检测微痕量克百威的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及化学农药的检测技术领域，尤其涉及氨基甲酸酯类农药中克百威检测方法，具体涉及一种检测微痕量克百威的方法；该方法以面粉、四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液为原料，分别制备出四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液和样品混合溶液，然后分别检测它们对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线，然后对检测到的两条光谱曲线进行对比，如果两个光谱曲线完全相同，则待测样品N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的检测限；如果两个光谱曲线不同，则待检测样品中含有克百威；本方法检测成本低，使用的地区广，检测结果的精确度、重复性和稳定性高，还可以进行现场检测，操作简单，且环境对检测结果的影响较小。
Description
技术领域
本发明涉及化学农药的检测技术领域，尤其涉及氨基甲酸酯类农药中克百威检测方法，具体涉及一种检测微痕量克百威的方法。
背景技术
克百威属于氨基甲酸酯类农药，氨基甲酸酯类农药是常用的三大农药之一。该类农药常用来处理农作物的种子，可以有效的抑制多种害虫。
克百威属高毒杀虫剂，对眼睛和皮肤无刺激作用。在试验剂量内对动物无致畸、致突变、致癌作用，对鱼、鸟高毒，对蜜蜂无毒害。 但是由于克百威的高毒性和难降解等性质，其适当的用量和正确的使用方式直接影响其对作用的发挥及对人和环境的影响，在蔬菜、水果等直接食用的农作物上，国内外一般的做法都是对其使用量做了严格的限制；在其他农作物上比如水稻、棉花、烟草、大豆等作物上也限制了其用量。这主要是由于，克百威高毒性和难降解等性质，一旦用量超标就会导致农产品和土壤中产生大量的农药残留，从而对人体和生态环境带来不利的影响。因此，对克百威残留量简单、快速和灵敏的检测非常重要。
近年来对农药残留检测用的较多的是色谱法，包括气相色谱(GC)、气相色谱～质谱联用(GC～MS)，高效液相色谱(HPLC)等。这些方法灵敏度高，准确性好。但是由于这类检测手段需要大型的设备、专业的操作人员以及需要消耗大量的试剂，这使色谱法检测的成本非常高，从而限制了色谱法的广泛应用。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明要解决的技术问题是：如何提供一种对植物中克百威残留量成本低廉，操作简单，且检测准确性高的检测方法。
解决该技术问题，本发明是这样实现的：一种检测微痕量克百威的方法，具体步骤如下：
一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于：具体步骤如下,
步骤1：将面粉和蒸馏水以1:5的重量比进行混合得到面糊，对该面糊进行搅拌使面粉与水均匀混合，然后将所述面糊在4000r/min的离心速度之下离心10min，收集上清液，即得粗酶；
步骤2：取1mL步骤1中的粗酶，将该粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，取出PEG相，将取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4/6%(NH4)2SO4 体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，对由磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相进行透析、浓缩和冷冻干燥，得到纯化后的植物酯酶粉末，然后再将该植物酯酶粉末用蒸馏水溶解得到植物酯酶酶液；
步骤3：配制浓度为70～165μmol/L四苯基锌卟啉溶液，其中四苯基锌卟啉的粉末为溶质， N,N-二甲基甲酰胺为溶剂；
步骤4：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液及pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液的体积比为1：0.5～2：48.5～47；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤6：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液均匀混合，再加入待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液，搅拌均匀混合后得到样品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：0.5～2：42～43.5：5；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线与步骤7测得的吸收光谱曲线进行比较，如果两个光谱曲线完全相同，则待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的检测限；如果两个光谱曲线不同，则待检测样品中含有克百威。
作为上述技术方案的优化，步骤3中制得四苯基锌卟啉溶液的浓度为70μmol/L；步骤4中加入的磷酸盐缓冲液pH值为6.5，制得的四苯基锌卟啉-植物酯酶复合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉的溶液和pH值为6.5的磷酸盐缓冲液的体积比为1：2：47；步骤6中，制得的样品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：2：42：5。由于加入的磷酸盐缓冲液pH值为6.5，此时植物酯酶的活力最高，因此检测的灵敏度会提高。
步骤3中制得四苯基锌卟啉溶液的浓度为90μmol/L；步骤4中加入的磷酸盐缓冲液pH值为7.0，制得的四苯基锌卟啉-植物酯酶复合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉的溶液和pH值为7.0的磷酸盐缓冲液的体积比为1：1.5：47.5；步骤6中，制得的样品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：1.5：42.5：5。由于四苯基锌卟啉的浓度提高，紫外分光光度计在步骤5和步骤7两次检测得到的光谱曲线的峰值变大，从而相放大了检测信号，检测结果重现性提高，检测结果更准确。
更进一步地，上述检测方法适用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜、水果和食品中克百威残留量的检测。
相对于现有技术，本发明具有如下优点：
1、本发明中使用的植物酯酶来源广泛，价格便宜，价格稍高的四苯基锌卟啉溶液用量
非常少，从而大大降低了检测成本。
2、采用本发明对克百威残留量进行检测，最低检测限可达1ppt，因此可以对微痕量
的克百威进行检测，检测精度高。
3、本发明市售的紫外分光光度计进行吸收光谱的检测，紫外分光光度计操作简单，对
操作人员的技能要求低，而且其相比同类的检测仪价格更低，因此该检测方法在经济欠发达的地区也可适用。
4、本发明检测方法以液体化植物酯酶酶液、四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25
的磷酸盐缓冲液制得的复合溶液作为检测原件，检测时只需要准备待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液即可，检测时需准备的药品和仪器较少，因此该检测方法可适用于现场检测，更便于推广。
5、本发明检测方法检测速度快，用本发明方法进行检测时，将待测样品的N,N～二
甲基甲酰胺清洗液加入到植物酯酶酶液、四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液中，待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液可在几分钟内完成反应，因此检测效率高，对于现场实时检测非常适用。
6、本发明检测方法所使用的植物酯酶，经过双水相体系纯化，植物酯酶酶液的纯度非
常高，因此该检测结果的重复性和稳定性较高。
7、本发明检测方法具有广泛的应用，其可应用于对甘蔗、大豆和水稻等农作物中克百
威含量的检测，根据该检测方法的特性，还可应用于对蔬菜、水果和食品等易含克百威残留的物质进行检测，还可用于食品安全评估和环境检测。
附图说明
图1～为实施例1的方法检测甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
图2～为实施例2的方法检测甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
图3～为实施例3的方法检测甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
图4～为实施例4的方法检测甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
图5～为实施例5的方法检测水稻表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
图6～为实施例1的方法检测大豆表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液所得的光谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的详细说明。
本发明中27%PEG1000/13% NaH2PO4体系是指磷酸二氢钠水溶液和分子量为1000的聚乙二醇水溶液的混合溶液，其中磷酸二氢钠与分子量为1000聚乙二醇的质量份数比为13：27，该混合溶液静置过夜后会分成上下两层，该两层分别为磷酸二氢钠相和分子量为1000聚乙二醇相。
27%PEG1000/13% NaH2PO46%(NH4)2SO4 体系是指磷酸二氢钠水溶液、分子量为1000聚乙二醇水溶液和硫酸铵水溶液的混合溶液，其中磷酸二氢钠、分子量为1000聚乙二醇和硫酸铵的质量份数比为27 13：13 27：6，该混合溶液静置过夜后会分成上下两层，该两层分别为磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相、分子量为1000聚乙二醇相。
实施例1：结合附图1，一种检测微痕量克百威的方法，本实施例中待测样品为甘蔗，具体检测步骤如下：
步骤1：以市面销售的面粉为原料，面粉和蒸馏水以1:5的重量比进行混合得到面糊，对该面糊进行搅拌使面粉与水均匀混合，然后将该面糊在4000r/min的离心速度之下离心10min，收集上清液，即得粗酶；
步骤2：取1mL步骤1中的粗酶H将该粗酶加入到27%PEG1000/13% NaH2PO4体系中，搅拌混合均匀，静分相后，取出PEG相，将取出的PEG相加入到27%PEG1000/13% NaH2PO4 /6%(NH4)2SO4 体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，对由磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相进行透析、浓缩和冷冻干燥，得到纯化后的植物酯酶粉末，然后再将该植物酯酶粉末用蒸馏水溶解，制得植物酯酶酶液；
步骤3：配制浓度为70～165μmol/L四苯基锌卟啉溶液，其中四苯基锌卟啉的粉末为溶质， N,N-二甲基甲酰胺为溶剂；
步骤4：取步骤2制备的植物酯酶酶液0.1mL、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.75 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取步骤2制备的植物酯酶酶液0.1mL、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.25mL均匀混合，再加入0.5mL的甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明甘蔗表面含有克百威。
我们还可以通过差谱曲线（3）计算出甘蔗表面克百威的含量，根据差谱曲线（3）的吸光度与喷洒的克百威的浓度建立线性回归方程如式（a）
y=（-9.1408×10-4）X+0.0868 （a）
其中y表示甘蔗表面克百威的含量，X表示吸光度值，计算得甘蔗表面含有1ppt的克百威残留。
实施例2：结合附图2，本实施例中的步骤1、步骤2与实施例1中的步骤1、步骤2相同，步骤3-8具体如下：
步骤3：四苯基锌卟啉溶液的浓度为70μmol/L；
步骤4：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.05 mL及pH值为6.9的磷酸盐缓冲液4.7 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.05 mL及pH值为6.9的磷酸盐缓冲液4.7mL均匀混合，再加入0.5mL的甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明甘蔗表面含有克百威。
实施例3：结合附图3，本实施例中的步骤1、步骤2与实施例1中的步骤1、步骤2相同，步骤3-8具体如下：
步骤3：四苯基锌卟啉溶液的浓度为90μmol/L；
步骤4：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.1 mL及pH值为7.0的磷酸盐缓冲液4.81 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.1 mL及pH值为7.0的磷酸盐缓冲液4.81mL均匀混合，再加入0.5mL的甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明甘蔗表面含有克百威。
实施例4：结合附图4，本实施例中的步骤1、步骤2与实施例1中的步骤1、步骤2相同，步骤3-8具体如下：
步骤3：四苯基锌卟啉溶液的浓度为140μmol/L；
步骤4：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.2 mL及pH值为7.25的磷酸盐缓冲液4.85 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.2 mL及pH值为7.0的磷酸盐缓冲液4.85mL均匀混合，再加入0.5mL的甘蔗表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明甘蔗表面含有克百威。
实施例1-4中采用了来自同一块地的甘蔗作为待检测样品，通过最终的检测结果可以看出，四个实施例检测的结果一致即甘蔗表面中含有克百威，由此推出，本发明检测方法检测结果的重现性和稳定性很高。
实施例5：结合附图5，本实施例中样品采用水稻，其检测方法中步骤1、步骤2与实施例1中的步骤1、步骤2相同，步骤3-8具体如下：
步骤3：四苯基锌卟啉溶液的浓度为165μmol/L；
步骤4：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.75 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.25mL均匀混合，再加入0.5mL的水稻表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明水稻表面含有克百威。
根据实施例1提到的我们还可以通过差谱曲线（3）计算出水稻表面克百威的含量，根据差谱曲线（3）的吸光度与喷洒的克百威的浓度建立线性回归方程，最终得到水稻表面含有10ppt的克百威。
实施例6：结合附图6，本实施例中样品采用大豆，其检测方法中步骤1、步骤2与实施例1中的步骤1、步骤2相同，步骤3-8具体如下：
步骤3：四苯基锌卟啉溶液的浓度为165μmol/L；
步骤4：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.75 mL均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（1）；
步骤6：取植物酯酶酶液0.1mL、四苯基锌卟啉溶液0.15 mL及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液4.25mL均匀混合，再加入0.5mL的大豆表面N,N～二甲基甲酰胺清洗液,搅拌使均匀混合得到样品混合溶液；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线即曲线（2）；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线（1）与步骤7测得的吸收光谱曲线（2）进行比较，发现两个吸收光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线（3），因此说明大豆表面含有克百威。
根据实施例1提到的我们还可以通过差谱曲线（3）计算出大豆表面克百威的含量，根据差谱曲线（3）的吸光度与喷洒的克百威的浓度建立线性回归方程，最终得到大豆表面含有5ppt的克百威。
结合上述实施例和附图，本发明检测方法操作方法极其简单，检测结果的重现性和一致性高，而且本发明检测方法应用非常广泛可适用于甘蔗、水稻和大豆等农作物，还可推广到蔬菜、水果、食品等领域中克百威含量残留的微痕量进行检测。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (4)
1.一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于：具体步骤如下,
步骤1：将面粉和蒸馏水以1:5的重量比进行混合得到面糊，对该面糊进行搅拌使面粉与水均匀混合，然后将所述面糊在4000r/min的离心速度之下离心10min，收集上清液，即得粗酶；
步骤2：取1mL步骤1中的粗酶，将该粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，取出PEG相，将取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4/6%(NH4)2SO4体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，对由磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相进行透析、浓缩和冷冻干燥，得到纯化后的植物酯酶粉末，然后再将该植物酯酶粉末用蒸馏水溶解得到植物酯酶酶液；
步骤3：配制浓度为70 μmol/L四苯基锌卟啉溶液，其中四苯基锌卟啉的粉末为溶质， N,N-二甲基甲酰胺为溶剂；
步骤4：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液及pH值为6.5的磷酸盐缓冲液均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5的磷酸盐缓冲液的体积比为1： 2：47；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤6：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5的磷酸盐缓冲液均匀混合，再加入待测样品N,N～二甲基甲酰胺清洗液，搅拌均匀混合后得到样品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1： 2：42：5；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线与步骤7测得的吸收光谱曲线进行比较，如果两个光谱曲线完全相同，则待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的检测限；如果两个光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线，根据所述差谱曲线建立线性回归方程如式（a）：
y=（-9.1408×10-4）X+0.0868 （a）
其中，y表示甘蔗表面克百威的含量，X表示吸光度值，计算得到待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中克百威的含量。
2.如权利要求1所述的一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于:所述方法适用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜和水果中克百威残留量的检测。
3.一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于：具体步骤如下,
步骤1：将面粉和蒸馏水以1:5的重量比进行混合得到面糊，对该面糊进行搅拌使面粉与水均匀混合，然后将所述面糊在4000r/min的离心速度之下离心10min，收集上清液，即得粗酶；
步骤2：取1mL步骤1中的粗酶，将该粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，取出PEG相，将取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH2PO4/6%(NH4)2SO4体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，对由磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相进行透析、浓缩和冷冻干燥，得到纯化后的植物酯酶粉末，然后再将该植物酯酶粉末用蒸馏水溶解得到植物酯酶酶液；
步骤3：配制浓度为90 μmol/L四苯基锌卟啉溶液，其中四苯基锌卟啉的粉末为溶质， N,N-二甲基甲酰胺为溶剂；
步骤4：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液及pH值为7.0的磷酸盐缓冲液均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液和pH值为7.0的磷酸盐缓冲液的体积比为1： 1.5：47.5；
步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤6：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液和pH值为7.0的磷酸盐缓冲液均匀混合，再加入待测样品N,N～二甲基甲酰胺清洗液，搅拌均匀混合后得到样品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1： 1.5：42.5：5；
步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；
步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线与步骤7测得的吸收光谱曲线进行比较，如果两个光谱曲线完全相同，则待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的检测限；如果两个光谱曲线不同，同时得到了两个吸收光谱曲线的差谱曲线，根据所述差谱曲线建立线性回归方程如式（a）：
y=（-9.1408×10-4）X+0.0868 （a）；
其中，y表示甘蔗表面克百威的含量，X表示吸光度值，计算得到待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中克百威的含量。
4.如权利要求3所述的一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于:所述方法适用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜和水果中克百威残留量的检测。
Priority Applications (1)
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