CN102836415A - 免疫力增强用组合物和癌症预防、治疗用药学组合物 - Google Patents

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CN102836415A CN2012101543398A CN201210154339A CN102836415A CN 102836415 A CN102836415 A CN 102836415A CN 2012101543398 A CN2012101543398 A CN 2012101543398A CN 201210154339 A CN201210154339 A CN 201210154339A CN 102836415 A CN102836415 A CN 102836415A
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Abstract

本发明涉及一种在精炼蚕茧或废丝来去除丝胶之后通过第一次中和及反中和而制备的免疫力增强组合物和癌症预防、治疗用药学组合物。

Description

免疫力增强用组合物和癌症预防、治疗用药学组合物
技术领域
本发明涉及一种包含丝水解物作为有效成分的免疫力增强用组合物及其制备方法。
背景技术
丝主要用作服装用高级材料,最近随着化学组份的阐明,正在踊跃进行将丝作为功能性食品材料的研究项目。尤其是,丝作为天然蛋白质,具有纯度较高且能够进行大量生产的优点。丝蛋白质由丝胶和蚕丝蛋白构成,若使其进行水解,则可获得包含寡肽的氨基酸混合物。来源于上述丝的氨基酸混合物,即丝水解物一般叫做丝肽,实际上呈具有约3重量百分比的寡肽及约97重量百分比的氨基酸的组成的包含寡肽的氨基酸混合物的形态。
另一方面,丝水解物根据丝的水解方法及过滤残渣的方法,在氨基酸的组成及寡肽的分子量上存在差异,丝水解物特有的生理活性也相当不同。目前开发出的大部分丝水解物是使蚕茧进行酸性水解及碱性水解而得的。
然而,以往丝水解物的生理活性出现如下问题:未考虑根据这种丝水解物的制备方法的生理活性的差异,局限于通过特定方法来制备的丝水解物的活性也被认作为通过另一种方法制备的普通丝水解物所具有。在先行专利申请10-2008-0098150号(含有丝肽及细胞因子作为有效成分的免疫增强或抗癌用组合物)中记载了丝肽,即丝水解物的免疫增强及抗癌活性,但是丝水解物的免疫增强及抗癌活性根据丝水解物的制备方法等,活性的偏差相当大,况且,即使借助普通的酸水解方法来制备的丝水解物等几乎没有免疫增强活性,在说明书中也没有记载丝水解物的具体的制备工序,因此伴随着实际上难以实施发明的难点。
本发明者在利用多种方法来由丝蛋白质制备出丝水解物,并对它们的生理活性进行研究的过程中,确认到通过特定方法来制备的丝水解物的免疫增强效能及抗癌效能较高,从而完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于,提供一种免疫力增强用组合物和癌症预防、改善、治疗用组合物。
解决问题的手段
为了实现上述目的,本发明提供一种包含丝水解物作为有效成分的免疫力增强组合物和癌症预防、改善、治疗用组合物,其中,上述丝水解物是通过精炼丝蛋白质之后使其进行酸水解并以pH9.2~9.3进行第一次中和之后以pH7.4~7.6进行反中和来制备的。
发明的效果
本发明的组合物具有免疫力增强及抗癌活性。
附图说明
图1表示根据丝水解物的制备方法的免疫力增强效能。
图2表示根据丝水解物的制备方法的抗癌活性。
图3表示根据丝水解物及细胞因子的复合处理的抗癌活性。
具体实施方式
本发明提供一种包含精炼蚕茧或废丝来去除丝胶之后使其进行水解而制备的丝水解物作为有效成分的食品组合物。
并且,本发明提供一种食品组合物,其包含丝水解物作为有效成分,其特征在于,上述丝水解物通过如下的制备方法制备而成,该方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
并且,本发明提供一种包含丝水解物作为有效成分的食品组合物的制备方法,该制备方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
同时,本发明提供一种包含精炼蚕茧或废丝来去除丝胶并仅仅使蚕丝蛋白进行水解而制备的丝水解物作为有效成分的免疫力增强及抗癌用药学组合物。
并且,本发明提供一种免疫力增强及抗癌用药学组合物,包含丝水解物作为有效成分,其特征在于,上述丝水解物通过如下的制备方法制备而成,该制备方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
并且,本发明提供一种包含丝水解物作为有效成分的免疫力增强及抗癌用药学组合物的制备方法,该制备方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
以下,将对本发明进行详细说明。
本发明的丝水解物利用蚕茧或废丝制备而成。优选的是,本发明的丝水解物精炼蚕茧或废丝来去除丝胶而使用。在本发明中,所谓的“废丝”是指从蚕茧抽取丝线时一起带出来的所有副产物,其中包含滞头(bisu)、汤茧、丝棉(floss silk)、穿孔茧、茧衣、长吐(frison)及下茧等。
本发明的食品组合物为免疫力增强用食品组合物或者癌症预防、及改善用食品组合物。
在本发明中优选的是,上述步骤2)中,对在上述步骤1)中制备的精炼物进行清洗及脱水,并对其进行干燥之后水解。
在本发明中,丝蛋白质的水解可以是酸水解或碱水解,优选为酸水解。此时使用的酸及碱不受特别限制,本发明所属技术领域的普通技术人员可以适当选择酸及碱。
在本发明中优选的是,上述步骤3)的第一次中和步骤中,使用33%氢氧化钠溶液,将pH9.2~9.3设为第一中和点进行中和之后,搅拌4小时以抑制3-单氯-1,2-丙二醇(3-monochloropropane-1,2-diol,MCPD)类和1,3-二氯-2-丙醇(1,3-dichloro-2-propanol,DCP)类的物质生成。
在本发明中优选的是,上述步骤4)的反中和步骤中,使用2N-盐酸溶液,将pH7.5设为中和点。
本发明的食品及药学组合物包含丝水解物作为有效成分,优选地包含丝水解物及细胞因子作为有效成分。此时,上述细胞因子可以是IL-2、IL-6、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18及IFN-γ等,优选的是,上述细胞因子为IL-15。
就本发明的上述食品及药学组合物而言,作为其有效成分的丝水解物的制备方法还可包括如下步骤:
步骤5)对在上述步骤4)中制备的反中和物进行脱色及除臭;
步骤6)对经过上述脱色及除臭的反中和物进行过滤;
步骤7)对上述过滤物进行脱盐;
步骤8)对经过上述脱盐的过滤物进行浓缩;以及
步骤9)对上述浓缩物进行干燥。
并且,本发明的上述食品及药学组合物的制备方法还可包括如下步骤:
步骤5)对在上述步骤4)中制备的反中和物进行脱色及除臭;
步骤6)对经过上述脱色及除臭的反中和物进行过滤;
步骤7)对上述过滤物进行脱盐;
步骤8)对经过上述脱盐的过滤物进行浓缩;以及
步骤9)对上述浓缩物进行干燥。
上述抗癌及癌症治疗是指癌症的改善、治疗及抑制癌细胞转移等。
本发明的癌症不受特别限制。例如,本发明的癌症包含肺癌、卵巢癌、胰脏癌、结肠癌、胃癌、大肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、脑肿瘤、肝癌、乳房癌、子宫癌、睪丸癌、肾癌、胆管癌、白血病、胃肠癌、宫颈癌、尿道癌、食道癌、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、上颌窦癌、口腔癌、膀胱癌、造血器神经母细胞瘤、细胞癌、绒毛突起癌等,但并不局限于此。
本发明的药学组合物可以投用于免疫功能下降的患者及癌症患者等,还可以投用于因免疫功能降低而患病的危险性高的对象。
本发明的药学组合物,相对于100重量份的组合物,可以包含0.01重量份至99.99重量份的上述丝水解物,优选地可以包含60重量份至98重量份的上述丝水解物。
更优选的是,本发明的药学组合物,相对于100重量份的组合物,可以包含90重量份至95重量份的上述丝水解物。但是,这可以根据投药者的需要增减,也可以根据饮食生活、营养状况、疾病的进展程度、脑功能障碍等状况适当增减。并且,本发明的药学组合物除了丝水解物以外还可以与药学上允许的载体一同剂型化为合适的形态。所谓的“药学上允许的”是指生理学上允许,当投用于人体时,通常不引起胃肠障碍、眩晕等过敏性反应或与其类似的反应的组合物。
本发明的药学组合物可以以口服或非口服方式投用,并可以以普通的医药品制剂的形态得以使用。作为优选的药剂学制剂可举例片剂、硬质或软质胶囊剂、液剂、悬浮剂等口服用制剂,这些药剂学制剂可通过使用药剂学上允许的常用的载体来制备而成,例如,就口服制剂而言,作为上述载体可使用赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、保存剂或增量剂等进行调配。
包含本发明的丝水解物的药学组合物的投用量可以根据患者的状况、年龄、性别及并发症等的多种因素由专家来决定,但是一般情况下,成人可投用的量是每1kg投用0.1mg至10g,优选投用10mg至5g的用量。并且,设为每单位剂型含有上述药学组合物的一日用量或其1/2、1/3或1/4的用量,一天可以投用1次至6次。然而,当以健康及卫生为目的或者以调节健康为目的而长时间服用时,上述量可以为上述范围以下,并且由于有效成分在安全性方面上没有任何问题,因此可以使用上述范围以上的量。
本发明的食品可举例健康辅助食品、健康功能食品、功能性食品等,但并不局限于此,还包含天然食品、加工食品、患者食品及在普通食材等中添加本发明的丝水解物的食品。
就本发明的食品组合物而言,可以直接添加上述组合物或者可以与其他食品或食品组合物一同使用,并可根据常用的方法来适当地使用。有效成分的混合量可根据其使用目的(预防、改善或治疗性处置)来适当地决定。一般而言,在制备食品或饮料时,相对于食品或饮料的原料100重量份,可添加0.1重量份至70重量份的本发明的丝水解物,优选地添加2重量份至50重量份。上述丝水解物的有效用量可遵照上述药学组合物的有效用量来使用,但是当以健康及卫生为目的或者以调节健康为目的而长时间服用时,可以使用上述范围以下的量,并且由于有效成分在安全性方面上没有任何问题,因而可以使用上述范围以上的量。
上述食品的种类不受特别限制。上述食品组合物可以以片剂、硬质或软质胶囊剂、液剂、悬浮剂等口服用制剂的形态得以利用,这些制剂可通过使用药剂学上允许的常用的载体来制备而成,例如,就口服制剂而言,可使用赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、保存剂或增量剂等作为上述载体。
作为可添加上述丝水解物的食品的例子,可举例肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、点心类、饼干类、披萨、方便面、其他面类、口香糖类、包含冰淇淋类的乳制品、各种汤类、饮料、茶、健康饮料、酒精饮料、维生素复合剂及其他营养剂等,但并不局限于这些种类的食品。
下面,根据以下实施例及实验例更详细地说明本发明。但是,以下实施例及实验例只用以例示出本发明的内容,并不表示发明的范围局限于实施例及实验例。
<材料及方法>
就本实验中使用的自然杀伤细胞而言,利用人淋巴细胞分离液(Histopaque)(西格玛,美国)及人自然杀伤细胞分离试剂盒(humanNK Cell Isolation Kit)(美天旎,德国)从人外周血分离出自然杀伤细胞,并对其进行离心分离,在-70℃条件下保管而使用。另一方面,6周龄的雄性巴比赛小鼠(BALB/c mouse)则在该小鼠长到5周龄时接收之后使其适应一周温度为21℃~22℃、湿度为50%~60%、明暗度为12小时明亮/12小时黑暗交替(12h-light/dark cycle)的环境。
<实施例1>
将100g的脱壳蚕茧投入到1000ml的2%重碳酸钠溶液中,精炼1小时,来去除丝胶成分。取出精炼物之后,用60℃的纯净水清洗三次,每次30分钟。对清洗好的精炼物进行离心分离来脱水,并对其进行干燥,使得含水率达到10%以下。从而得到70.5g的干燥的精炼物。在干燥的精炼物投入705ml的2N盐酸溶液,在容器上安装冷凝器,一边往冷凝器供应冷却水,一边在120℃条件下加热48小时来进行水解。往结束水解的溶液添加199.1ml的33%氢氧化钠溶液,使得pH达到9.2之后搅拌5小时。搅拌之后,添加123ml的2N盐酸溶液,以pH7.5进行反中和。往经过反中和的溶液投入56g的活性炭并搅拌1小时之后,通过离心分离进行过滤来去除活性炭。对已过滤的溶液进行电渗析,来去除溶液中所包含的盐,在50℃条件下进行真空浓缩。对已浓缩的溶液进行热风喷雾干燥,从而获得52.9g的丝水解物(实施例1)。
<实施例2>
将150g的脱壳蚕茧投入到1500ml的2%重碳酸钠溶液,精炼1小时,获得1310ml的精炼液。用微型过滤器(孔隙大小:20-25μm)对上述精炼液进行过滤,来去除废液中含有的杂质。一边在夹套式反应器中使用冷却水将去除杂质后的废液冷却至25℃,一边添加393ml的2N盐酸溶液来进行中和。中和之后,使用微型过滤器(孔隙大小:5-10μm)对已中和的精炼液进行过滤,从而回收在中和液内形成为沉淀物的丝胶。用纯净水清洗4次上述回收的过滤物,来去除粘在丝胶内的微量的氯化钠。通过清洗去除氯化钠之后,利用蒸汽干燥箱对过滤物进行干燥,从而获得31g的丝胶。
往上述31g的丝胶投入310ml的2N盐酸溶液,在容器上安装冷凝器,一边往冷凝器供应冷却水,一边在120℃条件下加热48小时来进行水解。往结束水解的溶液添加86ml的33%氢氧化钠溶液,使得pH达到9.2之后搅拌5小时。搅拌之后,添加53ml的2N盐酸溶液,以pH7.5进行反中和。往经过反中和的溶液投入23.2g的活性炭,搅拌1小时之后,通过离心分离进行过滤来去除活性炭。对已过滤的溶液进行电渗析,来去除溶液中所包含的盐,在50℃条件下进行真空浓缩。对已浓缩的溶液进行热风喷雾干燥,从而获得23.31g的丝水解物(实施例2)。
<实施例3>
不精练150g的脱壳蚕茧,而用60℃的纯净水清洗三次,每次30分钟。对清洗好的蚕茧进行离心分离来脱水,并对其进行干燥,使得含水率达到10%以下。往141g上述干燥后的蚕茧投入1410ml的2N盐酸溶液,在容器上安装冷凝器,一边往冷凝器供应冷却水,一边在120℃条件下加热48小时来进行水解。往结束水解的溶液添加390.1ml的33%氢氧化钠溶液,使得pH达到9.2之后搅拌5小时。搅拌之后添加2N盐酸溶液,以pH7.5进行反中和。往经过反中和的溶液投入108.9g的活性炭,搅拌1小时之后,通过离心分离进行过滤来去除活性炭。对已过滤的溶液进行电渗析,来去除溶液中所包含的盐,在50℃条件下进行真空浓缩。对已浓缩的溶液进行热风喷雾干燥,从而获得107.4g的丝水解物(实施例3)。
<比较例1>
将100g的脱壳蚕茧切细之后,于98℃条件下在0.5%碳酸钠溶液中,精炼两次上述脱壳蚕茧,每次30分钟。结束精炼之后,在110℃条件下在4.8L的盐酸水溶液(2.7N)中水解48小时之后,利用氢氧化钠溶液以pH7.1进行中和。从上述中和液去除盐分之后进行浓缩冷冻干燥,从而获得48.1g的丝水解物(比较例1)。
<比较例2>
往150g的脱壳蚕茧投入1500ml的2%重碳酸钠溶液,精炼1小时,来获得1310ml的精炼废液。用微型过滤器(孔隙大小:20-25μm)进行过滤来去除废液中所含有的杂质。一边在夹套式反应器中使用冷却水将去除杂质后的废液冷却至25℃,一边添加393ml的2N盐酸溶液来进行中和。中和之后,使用微型过滤器(孔隙大小:5-10μm)对已中和的废液进行过滤,从而回收在中和液内形成为沉淀物的丝胶。用蒸馏水清洗4次上述回收的过滤物,来去除粘在丝胶内的微量的氯化钠。通过清洗去除氯化钠之后,利用蒸汽干燥箱对过滤物进行干燥,从而获得31g的丝胶。
使干燥的上述31g的丝胶于110℃条件下在1.9L的盐酸水溶液(2.7N)中水解48小时之后,利用氢氧化钠溶液以pH7.1进行中和。从上述中和液去除盐分之后进行浓缩冷冻干燥,从而获得25.1g的丝水解物(比较例2)。
<比较例3>
不精练150g的脱壳蚕茧,而用干净的热水清洗三次,每次30分钟。对清洗好的蚕茧进行离心分离来脱水,并对其进行干燥,使得含水率达到10%以下。使141g上述干燥后的蚕茧于110℃条件下在9.3L的盐酸水溶液(2.7N)中水解48小时之后,利用氢氧化钠溶液以pH7.1进行中和。从上述中和液去除盐分之后进行浓缩冷冻干燥,由此获得98.7g的丝水解物(比较例3)。
<实验例1>
利用人淋巴细胞分离液(Histopaque)(西格玛,美国)及人自然杀伤细胞分离试剂盒(human NK Cell Isolation Kit)(美天旎,德国)从人外周血分离出自然杀伤细胞,并对其进行离心分离,在-70℃条件下保管。利用12.5μg/ml及25μg/ml的实施例1至实施例3及比较例1至比较例3的丝水解物分别对上述自然杀伤细胞进行处理,经过5天之后确认自然杀伤细胞的增殖与否。此时,上述自然杀伤细胞的增殖与否是通过作为自然杀伤细胞的活化表面蛋白质的NKG2D的表达量来确认的,具体而言,利用附着有荧光物质(phycoerythrin,PE)的小鼠抗人NKG2D抗体(碧迪医疗器械(BD pharmingen),美国)来测定NKG2D的表达量。
其结果确认到,丝水解物大体上具有自然杀伤细胞增殖能力,以25μg/ml处理时,相比以12.5μg/ml处理时自然杀伤细胞更加得以增殖。尤其是,使丝蛋白质进行第一次中和及反中和来制备的实施例1至实施例3的自然杀伤细胞增殖能力突出,其中,使用精炼蚕茧的实施例1显现出最高的效果(表1,图1)。
(表1)
  12.5μg/ml   25μg/ml
  实施例1   178.8   213.4
  实施例2   110.4   128.4
  实施例3   153.2   183.7
  比较例1   112.4   119.9
  比较例2   86.7   85.3
  比较例3   97.5   104.5
自然杀伤细胞增殖能力(%,相对控制)
<实验例2>
淋巴瘤癌细胞株(人成巨核细胞白血病细胞株Daudi及人淋巴瘤细胞株Raji)(美国模式培养物集存库(ATCC),美国)在洛斯维公园纪念研究所RPMI 1640培养基中培养而得,并利用细胞染色试剂CFSE进行荧光标记。
利用人淋巴细胞分离液(Histopaque)(西格玛,美国)及人自然杀伤细胞分离试剂盒(human NK Cell Isolation Kit)(美天旎,德国)从人外周血分离出自然杀伤细胞,并对其进行离心分离,在-70℃条件下保管。利用50μg/ml的实施例1至实施例3及比较例1至比较例3的丝水解物分别对上述自然杀伤细胞进行处理,或者一起利用50μg/ml的上述实施例1至实施例3及比较例1至比较例3与10ng/ml的IL-15进行处理。并且,仅利用IL-1510ng/ml对上述自然杀伤细胞进行处理,除此之外,作为对照组使用无处理自然杀伤细胞。
将进行了上述丝水解物和/或IL-15等处理的自然杀伤细胞及对照组与上述淋巴瘤细胞株一起进行同量培养,培养2小时之后,添加7-ADD(碧迪医疗器械(BD pharmingen)
Figure BDA00001651516200121
),经过2小时之后,利用流式细胞仪(ELITE ESP,美国)来测定同时染色了CFSE和7-AAD的细胞中凋亡的癌细胞数量,并分析癌细胞凋亡率。
其结果确认到,使用精炼蚕茧的实施例1具有最高的抗癌活性(表2,图2)。
(表2)
Figure BDA00001651516200131
<实验例3>
利用人淋巴细胞分离液(Histopaque)(西格玛,美国)及人自然杀伤细胞分离试剂盒(human NK Cell Isolation Kit)(美天旎,德国)从人外周血分离出自然杀伤细胞,并对其进行离心分离,在-70℃条件下保管。使用在上述实验例2中被确认为抗癌活性最高的实施例1的丝水解物与除了IL-15以外的细胞因子复合使用时,测定了抗癌活性增加与否。
具体说明如下,对上述自然杀伤细胞单独处理细胞因子或者与25μg/ml的实施例1的丝水解物一起处理,并与同量的癌细胞株一起培养,利用流式细胞仪来测定癌细胞凋亡能力。此时,使用0.5ng/ml的IL-2、1000u/ml的IL-6、5ng/ml的IL-12、50ng/ml的IL-18及1ng/ml的IFN-γ作为细胞因子,并利用这些细胞因子分别对作为肺癌细胞株的A549进行处理。
其结果确认到,相比单独使用各细胞因子时,与实施例1的丝水解物复合使用时,癌细胞凋亡能力明显增加(表3及图3)。
(表3)
Figure BDA00001651516200141
<实验例4>
使用在上述实验例2中被确认为抗癌活性最高的实施例1的丝水解物来测定基于癌细胞的种类的抗癌活性与否。具体说明,通过使用与实验例2的方法相同的方法,从外周血分离出自然杀伤细胞,单独利用10ng/ml的IL-15对上述自然杀伤细胞进行处理,或者复合10ng/ml的IL-15和实施例1的丝水解物25μg/ml进行处理,与同量的癌细胞株一起培养,经过2小时之后使用流式细胞仪来确认抗癌效果。此时使用的癌细胞株为肝癌细胞株Hep3B、胃癌细胞株SNU0719、子宫癌细胞株HeLa、乳房癌细胞株MCF-7及大肠癌细胞株HT-29。就各实验组的癌细胞凋亡能力而言,培养未处理丝水解物及细胞因子的自然杀伤细胞和各个癌细胞株时,将癌细胞凋亡能力看作控制组(control),来表示相对于该控制组的实验组的相对癌细胞凋亡能力。
接收从韩国细胞株文库出让的上述癌细胞株用于实验,就胃癌细胞株SNU-719、大肠癌细胞株HT-29及子宫癌细胞株HeLa而言,往RPMI-1640培养基添加10%胎牛血清(FBS),并添加1%青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin)及250μl的2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol)用于实验,就乳房癌细胞株MCF-7及肝癌细胞株Hep3B细胞而言,往密理博高糖培养基(DMEM)添加10%胎牛血清(FBS),并添加1%青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin)及250μl的2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol)。将这些移植到T-75培养瓶(culture flask)之后,在37℃、5%CO2培养箱(incubator)中进行细胞培养。
并且,每周2次~3次将细胞株更换到新的培养基,如果在瓶(flask)中增殖癌细胞株增殖到5×104 cells/ml程度,就用磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline,PBS,pH7.0)清洗两次之后,用胰酶细胞消化液(trypsin-EDTA)进行处理,从底面分离出细胞之后,用培养液稀释癌细胞,使得该癌细胞均匀分散,然后注入到T-75培养瓶(culture flask),每次注入10ml,每隔4天~5天进行继代培养,用于实验。
由其结果可知,在除了淋巴瘤和肺癌以外的癌细胞株中也是,相比单独处理细胞因子时,与实施例1的丝水解物一起处理时,针对癌细胞的自然杀伤细胞的杀伤能力明显增加(表4)。
(表4)

Claims (12)

1.一种免疫力增强用组合物,包含丝水解物作为有效成分,其特征在于,上述丝水解物通过如下的丝水解物的制备方法制备而成,该制备方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
2.根据权利要求1所述的免疫力增强用组合物,其特征在于,在上述步骤2)中,对在上述步骤1)中制备的精炼物进行清洗及脱水,并对其进行干燥之后水解。
3.根据权利要求1所述的免疫力增强用组合物,其特征在于,
使用33%氢氧化钠溶液,将pH9.2~9.3设为第一中和点进行中和之后,搅拌4小时以抑制3-单氯-1,2-丙二醇类和1,3-二氯-2-丙醇类的物质生成,来进行上述步骤3)的第一次中和步骤;或者
使用2N-盐酸溶液,将pH7.5设为中和点,来进行上述步骤4)的反中和步骤。
4.根据权利要求1所述的免疫力增强用组合物,其特征在于,上述丝水解物的制备方法还包括如下步骤:
步骤5)对在上述步骤4)中制备的反中和物进行脱色及除臭;
步骤6)对经过上述脱色及除臭的反中和物进行过滤;
步骤7)对上述过滤物进行脱盐;
步骤8)对经过上述脱盐的过滤物进行浓缩;以及
步骤9)对上述浓缩物进行干燥。
5.根据权利要求1所述的免疫力增强用组合物,其特征在于,上述免疫力增强用组合物为食品组合物或者药学组合物。
6.根据权利要求1所述的免疫力增强用组合物,其特征在于,上述组合物具有预防、改善或治疗癌症的功能。
7.一种免疫力增强用组合物,其特征在于,包含精炼蚕茧或废丝来去除丝胶之后使其进行水解而制备的丝水解物作为有效成分。
8.一种癌症预防、治疗用药学组合物,包含丝水解物作为有效成分,其特征在于,上述丝水解物通过如下的制备方法制备而成,该制备方法包括如下步骤:
步骤1)精炼蚕茧或废丝;
步骤2)使在上述步骤1)中制备的精炼物进行水解;
步骤3)以pH9.2~9.3使上述水解后的精炼物第一次中和;以及
步骤4)以pH7.4~7.6使在上述步骤3)中制备的第一中和物进行反中和。
9.根据权利要求8所述的癌症预防、治疗用药学组合物,其特征在于,在上述步骤2)中,对在上述步骤1)中制备的精炼物进行清洗及脱水,并对其进行干燥之后水解。
10.根据权利要求8所述的癌症预防、治疗用药学组合物,其特征在于,
使用33%氢氧化钠溶液,将pH9.2~9.3设为第一中和点进行中和之后,搅拌4小时以抑制3-单氯-1,2-丙二醇类和1,3-二氯-2-丙醇类的物质生成,来进行上述步骤3)的第一次中和步骤;或者
使用2N-盐酸溶液,将pH7.5设为中和点,来进行上述步骤4)的反中和步骤。
11.根据权利要求8所述的癌症预防、治疗用药学组合物,其特征在于,上述丝水解物的制备方法还包括如下步骤:
步骤5)对在上述步骤4)中制备的反中和物进行脱色及除臭;
步骤6)对经过上述脱色及除臭的反中和物进行过滤;
步骤7)对上述过滤物进行脱盐;
步骤8)对经过上述脱盐的过滤物进行浓缩;以及
步骤9)对上述浓缩物进行干燥。
12.一种癌症预防、治疗用药学组合物,其特征在于,包含精炼蚕茧或废丝来去除丝胶之后使其进行水解而制备的丝水解物作为有效成分。
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KR102253715B1 (ko) * 2020-12-07 2021-05-27 유광진 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR100443785B1 (ko) * 2001-09-19 2004-08-09 월드웨이(주) 실크아미노산의 생산방법
KR20100038968A (ko) * 2008-10-07 2010-04-15 숙명여자대학교산학협력단 실크 펩타이드 및 사이토카인을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 증강 또는 항암용 조성물

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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