CN102824375A

CN102824375A - 乌灵胶囊在制备抑制u251细胞增殖药物中的应用

Info

Publication number: CN102824375A
Application number: CN2012103464085A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Nanjing Zhengliang Pharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zhengliang Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2012-09-18
Filing date: 2012-09-18
Publication date: 2012-12-19

Abstract

本发明公开了乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用，乌灵胶囊主要成分乌灵菌粉，内含腺苷、多糖、甾醇类及谷氨酸、Y-氨基丁酸、赖氨酸等19种氨基酸，还含有维生素(VitE、B1、B6、K1等)和微量元素（Zn、Fe、Ca等）等多种成份，补肾健脑，养心安神，适用于神经衰弱的心肾不交证，症见失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸软，脉细或沉无力等，口服，一次3粒，一日3次，或遵医嘱，每粒装0.33克，现发现其能抑制U251细胞增殖。

Description

乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种中成药的新用途，尤其涉及乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。

背景技术

神经胶质瘤又被称为胶质细胞瘤，或者简称为胶质瘤，它是一种发生在神经外胚层的肿瘤，所以又被称做是神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。肿瘤起源于神经间质细胞，即神经胶质、室管膜、脉络丛上皮和神经实质细胞，即神经元。大多数肿瘤起源于不同类型的神经胶质，但根据组织发生学来源及生物学特征类似，对发生于神经外胚层的各种肿瘤，一般都称为神经胶质瘤。神经胶质瘤的病程依其病理类型和所在部位长短不一，自出现症状至就诊时间一般多为数周至数月，少数可达数年。恶性程度高的和后颅窝肿瘤病史多较短，较良性的肿瘤或位于所谓静区的肿瘤病史多较长。肿瘤如有出血或囊肿形成、症状发展进程可加快，有的甚至可类似脑血管病的发展过程。

乌灵胶囊是浙江佐力药业股份有限公司的独家产品，目前还没有其抑制神经胶质细胞瘤（U251）细胞增殖的文献报道。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。

技术方案：乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。

乌灵胶囊主要成分乌灵菌粉，内含腺苷、多糖、甾醇类及谷氨酸、Y-氨基丁酸、赖氨酸等19种氨基酸，还含有维生素(VitE、B1、B6、K1等)和微量元素（Zn、Fe、Ca等）等多种成份，补肾健脑，养心安神，适用于神经衰弱的心肾不交证，症见失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸软，脉细或沉无力等，口服，一次3粒，一日3次，或遵医嘱，每粒装0.33克，现发现其能抑制U251细胞增殖。

有益效果：乌灵胶囊抑制U251细胞增殖，效果良好。

具体实施方式

乌灵胶囊抑制U251细胞增殖的实验研究资料

1实验材料

1.1实验用细胞株

神经胶质细胞瘤（U251），来自本公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。

1.2实验药物

研究药物：乌灵胶囊，浙江佐力药业股份有限公司，批号：20110423

药液储液：称取100mg乌灵胶囊内容物，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。

1.3实验试剂

DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司批号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）；

1.4实验器材

莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。

2实验方法

1）U251细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。

2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。

3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入乌灵胶囊溶液，继续培养24h。

4）24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。

5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。

6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。

7）结果以药物对细胞的抑制率表示：

细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。

3统计处理

采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。

4实验结果

MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对U251细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。

表1乌灵胶囊对U251细胞增殖抑制影响研究

Figure 2012103464085100002DEST_PATH_IMAGE001

注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001

5实验结论

乌灵胶囊可以抑制U251细胞增殖，减少U251细胞的细胞生长数目，该作用呈时间和剂量依赖性。

Claims

1.乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。