CN102815792A - 一种用于城乡污染河道水体修复的微生物-酶复合制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于城乡污染河道水体修复的微生物-酶复合制剂及其制备的方法。本发明涉及的修复城乡污染河道的微生物-酶复合制剂，微生物主要是由30-60%的地衣芽孢杆菌、25-35%的硝化细菌和15-35%的恶臭假单胞菌组成；复合酶主要是由40%-60%的蛋白酶、15-25%的淀粉酶和25%-35的纤维素酶构成。针对不同污染程度的水体，优化组合的微生物与复合酶复配为微生物-酶复合制剂，使得微生物的投加量为1-5g/m3，复合酶的投加量为0.01-0.05g/m3。该微生物-酶复合制剂投入到城乡污染河道水体中，以曝气为辅助措施，进行微生物强化修复，可有效改善现有技术存在的微生物代谢活性低、环境耐受力低、在污染水体中停留时间短等缺陷，具有显著的水质净化效果。
Description
技术领域
本发明属于环保技术领域，具体地说涉及一种可以高效降解城乡污染河道水体氨氮和COD，修复河道环境的微生物-酶复合制剂，以及其制备方法。
背景技术
随着我国经济的飞速发展，我国水环境问题日益突出，城乡水环境遭遇到空前的威胁。已有调查表明长江三角洲地区农村水环境生态90%以上已丧失了基本功能，城乡河道因污染和生态系统严重退化，河道水质已基本处于V类和劣V类水质，多数河道水体污染严重、富营养化，最主要的污染指标是高锰酸钾指数（CODMn）和氨氮，此外河水大多变黑变臭、病原菌超标，造成了严峻的环境生态形势，严重影响了广大农村的生态、生产和生活安全。因而对城乡水环境的修复是急待解决的重要问题。
以原位生物修复为核心的技术是目前治理城乡污染水体的主要方法，鉴于微生物在水体生物地球化学循环过程中的重要作用，利用微生物原位修复污染水体具有高效、低成本的优势。利用微生物修复城乡河道污水技术的核心是提高水体中微生物的活性，当前常用的方法是在水体复氧的基础上投加微生物生长促进剂来激活水体中土著微生物的生长和活性，或者投加高密度的功能微生物菌剂，以加快水体中污染物的降解。中国发明专利ZL200610119430.0 公开了一种“用复合酶促进剂对污染水体进行原位生物修复的方法”，该发明建立了复合酶法修复污染水体的技术方法体系。杨磊等（杨磊，林逢凯，胥峥，等. 城市富营养化河道复合酶－原位生物修复技术研究[J]. 环境污染与防治，27（8）：607－610）的研究公布了脱氢酶、纤维素酶、脲酶和磷酸酶等组成的复合酶类生物激活剂有效促进了水体微生物的活性，增强对河道自净的促进作用。采用直接向污染水体投加功能微生物（菌群）的方式原位修复污染水体是更为常见的技术方法，其技术核心是投加的功能微生物的组成及其应用效果。中国发明专利ZL200810025135.8 公开了一种“水环境微生物修复剂及其制备方法”，该发明将枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、放线菌、反硝化细菌和光合细菌按一定比例组合为微生态制剂，且该制剂制备过程中某些菌株产生一定的蛋白酶和淀粉酶，应用于水产养殖水体起到了一定的积极效果。
对于以高锰酸钾指数（CODMn）和氨氮为主要污染物的城乡河道水体，尽管采用添加复合酶类生物激活剂或者投加功能微生物菌群的方式进行修复均取得了一定的效果，但存在的问题是复合酶类生物激活剂的作用无法持久，且不能有效除去氨氮等无机污染物，而投加功能微生物菌群的方式在应用过程中面临微生物代谢活性弱、环境耐受力低等问题。
发明内容
本发明的目的在于，针对以高锰酸钾指数（CODMn）和氨氮为主要污染物的城乡河道水体，综合复合酶类生物激活剂和功能微生物菌群在水体生物修复中的优点，提供一种适用于城乡河道水体修复的微生物－复合酶制剂。
本发明的另一个目的是提供上述适用于城乡河道水体修复的微生物－复合酶制剂的制备方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现。
一种用于城乡污染河道水体修复的微生物-酶复合制剂，所述微生物均从自然水体中分离、筛选，是对城乡河道水体有着良好适应性的功能菌株，所包含的地衣芽孢杆菌BFT-4（Bacillus Licheniformis BFT-4），CCTCC保藏号：CCTCC NO:M2011423，具有良好的有机物降解效果，可以有效去除城乡河道水体中的CODMn；施氏假单胞菌 BRH-6（Pseudomonas stutzeri BRH-6），CCTCC保藏号：CCTCC NO:M 2011425，具有一定的CODMn降解效果和良好的氨氮降解效果；恶臭假单胞菌 BRZ-1（Pseudomonas putida BRZ-1），CCTCC保藏号：CCTCC NO:M2011427，是一株具有较高效率的好氧反硝化菌株。
上述保藏编号为CCTCC NO:M2011423、CCTCC NO:M 2011425、CCTCC NO:M2011427菌株的保藏单位均为中国典型培养物保藏中心（保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期：2011年11月25日）。
所述微生物制成固体菌剂，各组分微生物菌剂中活菌含量不低于60亿CFU/克，按一定的比例混合，各组分微生物在微生物总质量中的质量百分比为：地衣芽孢杆菌30-60%，施氏假单胞菌25-35%，恶臭假单胞菌15-35%；具体产品中各微生物组分之和为100％。
所述的复合酶主要是由淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶构成。在配方中使用商品化的酶，酶活在1万u/g以上；高效复合酶各组分的质量百分比为蛋白酶40%-60%，淀粉酶15-25%，纤维素酶25%-35%。
所述微生物菌剂的制备，由各组分微生物分别制备成固体菌剂后按前述比例组合制成，各组分微生物菌剂的制备方法，按以下步骤进行：
（1）各级培养基的配置，其中：
a）斜面培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基，备用；
b）摇瓶菌种培养基和种子罐发酵培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基，备用；
c）批量生产培养基：地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，培养基为：麸皮80－90％，砻糠：5－15％，葡萄糖3％，K2HPO4 2％，D生物素0.05％，按料水比1：1加入水分；施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1均采用牛肉膏蛋白胨液体培养基；
（2）摇瓶菌种扩增：分别将用斜面培养基活化的地衣芽孢杆菌BFT-4、施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1在无菌操作下，接入100 ml的摇瓶培养基中，在30℃，150 转/分的摇床中，培养24小时后备用；
（3）种子罐发酵：将步骤（1）种子罐发酵培养基放入种子罐中，在种子罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却后，按接种量5－10％接入步骤（2）的摇瓶菌种；开动搅拌机在转速180转/分，温度30℃，通气量4m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时后备用；
（4）批量产品的制备：
地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，将步骤（1）固体培养基灭菌并冷却，按制备菌剂重量的2－4％的比例称取步骤（3）种子罐液体菌种，按菌种与水1：5的比例放入无菌水中，而后接入固体培养基中并混匀；移入培养室，料厚1.5－2 厘米，室温控制在30－35℃，培养72小时后在45－50℃的条件下烘干、粉碎、装袋，备用；
施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1采用液体发酵，在发酵罐中装入牛肉膏蛋白胨培养基，在发酵罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却；将步骤（3）中种子液打入发酵罐中，接种量为发酵罐体积的8－10％，开动搅拌机在转速110－220转/分，温度28－35℃，通气量4m3/h，罐压0.1－0.18M Pa，自然pH的条件下培养24－32小时；单独发酵后的发酵液加载体吸附，形成固体，备用；
所述用于城乡河道水体修复的微生物-酶复合制剂，其制备方法由前述微生物制剂和复合酶按一定比例混合制成，其混合比例依据待修复城乡河道污染水体程度不同而调整，使得投入水体中的微生物的投加量为1-5g/m3，复合酶的投加量为0.01-0.05 g/m3。
本发明的有益效果
（1）本发明的微生物－酶复合制剂具有针对性强、适应性强、高效、无污染的特点
本发明的微生物－酶复合制剂是针对城乡河道这一黑臭严重，CODMn和氨氮含量高的特殊水体开发的，具有较强的针对性。采用的微生物均是从自然水体中筛选的有益微生物，不会对环境造成二次污染。其中的微生物中每种菌的菌数含量均在60亿CFU/g以上，复合微生物具有CODMn降解活性高、脱氮能力强的特点，投入污染水体后能迅速称为优势功能菌群。同时，由于高活性复合酶的存在，污染河道水体中的大分子物质会得到快速、有效的降解，形成的小分子有机物提高了微生物的代谢活性，净水能力大幅提高的同时，也大大增强了投入的功能微生物对城乡污染河道污染水体环境的适应性。在城乡严重污染河道劣Ⅴ类水体中应用本发明的微生物－酶复合制剂后，CODMn和氨氮在6-10天之后就能得到有效降解，水体达到地表水标准的Ⅲ－Ⅳ类水质。
（2）本发明的处理污水方法标本兼治、成本低、运行费用低
本发明利用高效微生物和复合酶相结合的方法，污水治理见效快，脱氮效率高，真正达到了标本兼治的效果。运用本发明的方法治理城乡污染河道水体，一周后，污染水体的能见度从30-40cm提高到80-90cm，氨氮降解率达到99%以上。经过3-5个月的环境检测，发现氨氮一直维持在Ⅲ类水质以内，净水水质较好。本发明的方法突破了现有技术的治标不治本，一次投入治理后可多年维持生态平衡，不仅净水效果明显，水质检测指标稳定、不反弹，而且降低了运行成本。
附图说明
图1、 高效微生物－酶复合制剂处理城乡污染河道后水体氨氮含变化图，图中ZJ－1、ZJ－2、ZJ－3分别表示不同微生物－酶复合制剂，Control表示未经处理的对照。
图2 、高效微生物－酶复合制剂处理城乡污染河道后水体总氮含量变化图，图中ZJ－1、ZJ－2、ZJ－3分别表示不同微生物－酶复合制剂，Control表示未经处理的对照。
图3 、高效微生物－酶复合制剂处理城乡污染河道后水体COD含量变化图，图中ZJ－1、ZJ－2、ZJ－3分别表示不同微生物－酶复合制剂，Control表示未经处理的对照。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作更详细说明，但以下实施例仅是说明性的，本发明并不受这些实施例的限制。
一、培养基：
1、牛肉膏蛋白胨液体培养基：每升培养基中含牛肉浸膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化钠5.0 g，pH7.2-7.4，121℃灭菌30 min。
2、牛肉膏蛋白胨固体培养基：在牛肉膏蛋白胨液体培养基中加入15％的琼脂。
实施例1：
1）菌种的斜面活化和摇瓶培养。分别将保存编号：CCTCC NO:M 2011423地衣芽孢杆菌BFT-4、保藏号：CCTCC NO:M 2011425施氏假单胞菌 BRH-6、保藏号：CCTCC NO:M 2011427恶臭假单胞菌BRZ-1，接种于牛肉膏蛋白胨斜面固体培养基上，在30℃条件下培养24小时活化，随后接入装有100 ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中，在30℃，150 转/分的摇床中，培养24小时，备用；
2）种子罐发酵：将牛肉膏蛋白胨液体培养基放入种子罐中，在种子罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却后，按接种量5％接入步骤（1）的摇瓶菌种；开动搅拌机在转速180转/分，温度30℃，通气量4m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时，备用；
（3）批量产品的制备：
a) 地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，固体发酵的培养基为麸皮80％，砻糠：15％，葡萄糖3％，K2HPO4 2％，D生物素0.05％，按料水比1：1加入水分；将固体培养基灭菌并冷却，按制备菌剂重量的2％的比例称取步骤（2）种子罐液体菌种，按菌种与水1：5的比例放入无菌水中，而后接入固体培养基中并混匀；移入培养室，料厚1.5厘米，室温控制在30℃，培养72小时后在45－50℃的条件下烘干、粉碎，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为72亿CFU/克；
b) 施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1采用液体发酵，在发酵罐中装入牛肉膏蛋白胨液体培养基，在发酵罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却；将步骤（3）中种子液打入发酵罐中，接种量为发酵罐体积的8％，开动搅拌机在转速110转/分，温度28℃，通气量4 m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时，单独发酵后的发酵液加载体吸附，在40℃烘干，形成固体，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为64亿CFU/克；
4）将步骤3）获得的菌剂按如下比例进行混合：地衣芽孢杆菌BFT-4、施氏假单胞菌BRH-6和恶臭假单胞菌BRZ-1在微生物菌剂混合物总质量中的质量百分比分别为30％、35％、35％；将购买获得的酶活在1万u/g以上淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶按质量百分比为蛋白酶40%，淀粉酶25%，纤维素酶35%复配成复合酶；在使用时，微生物菌剂和复合酶以质量比99：1的比例混合后形成微生物－酶复合制剂。
实施例2：
1）菌种的斜面活化和摇瓶培养。具体实施同实施例1的步骤1）；
2）种子罐发酵：将牛肉膏蛋白胨液体培养基放入种子罐中，在种子罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却后，按接种量8％接入步骤（1）的摇瓶菌种；开动搅拌机在转速180转/分，温度30℃，通气量4m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时，备用；
（3）批量产品的制备：
a) 地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，固体发酵的培养基为麸皮85％，砻糠：10％，葡萄糖3％，K2HPO4 2％，D生物素0.05％，按料水比1：1加入水分；将固体培养基灭菌并冷却，按制备菌剂重量的3％的比例称取步骤（2）种子罐液体菌种，按菌种与水1：5的比例放入无菌水中，而后接入固体培养基中并混匀；移入培养室，料厚1.8厘米，室温控制在33℃，培养72小时后在45－50℃的条件下烘干、粉碎，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为69亿CFU/克；
b) 施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1采用液体发酵，在发酵罐中装入牛肉膏蛋白胨液体培养基，在发酵罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却；将步骤（3）中种子液打入发酵罐中，接种量为发酵罐体积的9％，开动搅拌机在转速170转/分，温度32℃，通气量4 m3/h，罐压0.5M Pa，自然pH的条件下培养24小时，单独发酵后的发酵液加载体吸附，在40℃烘干，形成固体，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为65亿CFU/克；
4）将步骤3）获得的菌剂按如下比例进行混合：地衣芽孢杆菌BFT-4、施氏假单胞菌BRH-6和恶臭假单胞菌BRZ-1在微生物菌剂混合物总质量中的质量百分比分别为50％、30％、20％；将购买获得的酶活在1万u/g以上淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶按质量百分比为蛋白酶50%，淀粉酶20%，纤维素酶30%复配成复合酶；在使用时，微生物菌剂和复合酶以质量比99：1的比例混合后形成微生物－酶复合制剂。
实施例3：
1）菌种的斜面活化和摇瓶培养。具体实施同实施例1的步骤1）；
2）种子罐发酵：将牛肉膏蛋白胨液体培养基放入种子罐中，在种子罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却后，按接种量10％接入步骤（1）的摇瓶菌种；开动搅拌机在转速180转/分，温度30℃，通气量4m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时，备用；
（3）批量产品的制备：
a) 地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，固体发酵的培养基为麸皮90％，砻糠：5％，葡萄糖3％，K2HPO4 2％，D生物素0.05％，按料水比1：1加入水分；将固体培养基灭菌并冷却，按制备菌剂重量的4％的比例称取步骤（2）种子罐液体菌种，按菌种与水1：5的比例放入无菌水中，而后接入固体培养基中并混匀；移入培养室，料厚2厘米，室温控制在35℃，培养72小时后在45－50℃的条件下烘干、粉碎，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为75亿CFU/克；
b) 施氏假单胞菌 BRH-6和恶臭假单胞菌 BRZ-1采用液体发酵，在发酵罐中装入牛肉膏蛋白胨液体培养基，在发酵罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却；将步骤（3）中种子液打入发酵罐中，接种量为发酵罐体积的10％，开动搅拌机在转速220转/分，温度35℃，通气量4 m3/h，罐压0.18M Pa，自然pH的条件下培养24小时，单独发酵后的发酵液加载体吸附，在40℃烘干，形成固体，所得样品经平板计数法计数，菌含量约为69亿CFU/克；
4）将步骤3）获得的菌剂按如下比例进行混合：地衣芽孢杆菌BFT-4、施氏假单胞菌BRH-6和恶臭假单胞菌BRZ-1在微生物菌剂混合物总质量中的质量百分比分别为60％、25％、15％；将购买获得的酶活在1万u/g以上淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶按质量百分比为蛋白酶60%，淀粉酶15%，纤维素酶25%复配成复合酶；在使用时，微生物菌剂和复合酶以质量比99：1的比例混合后形成微生物－酶复合制剂。
实施例4：
为了检验利用微生物－酶复合制剂净化城乡污染河道的实际应用效果，明确其对氨氮、总氮和COD等的降解性能，进行了本试验。
1 材料与方法
1.1 试验用微生物－酶复合制剂：采用了3种配比的微生物－酶复合制剂，分别标记为ZJ-1、ZJ-2、ZJ-3，各复合制剂中微生物菌剂和复合酶的质量分数比为99：1。其中ZJ-1、ZJ-2、ZJ-3中微生物菌剂分别包含30％、50％、60％的地衣芽孢杆菌BFT-4，35％、30％、25％的施氏假单胞菌BRH-6和35％、20％、15％恶臭假单胞菌BRZ-1；复合酶分别包含40%、50％、60％的蛋白酶，25%、20％、15％的淀粉酶和35%、30％、25％的纤维素酶。其中微生物中各组分的活菌数不低于60亿CFU/g，复合酶中各组分的酶活不低于1万U/g。
1.2 试验方法：试验在浙江杭州市城乡结合部选择3条长约60－130 m，平均水深1.5－2 m的半封闭河道进行，以相连河道未处理部分做为对照。初始调查数据显示，3条河道水体CODMn和氨氮的含量差异不大。试验开始前，采用微孔曝气管从水下1.2－1.5 m深对河道进行曝气，将污水中的溶解氧提高到1-3 mg/L，于2010年9月28日开始，按照约1 g/ m3的量在3条河道分别投加微生物－酶复合制剂ZJ-1、ZJ-2、ZJ-3，在10月4日和11月4日分别再投加一次。从试验河道中部水体中隔天采样一次，测定水体中CODMn、氨氮、总氮的含量，待所测水质参数稳定后，每月采样检测一次。CODMn、氨氮、总氮含量的测定采用国标规定的相关方法进行。
2 结果与分析
2.1氨氮含量的变化
从图1中可以看出，投放了不同微生物－酶复合制剂的河道中氨氮含量的变化虽然有差异，但差异不显著（P>0.05），它们均一直呈下降趋势，到第10天时，氨氮的降解渐趋平稳，此时氨氮的降解率均在80％以上，而同期未经处理的对照河道中的氨氮含量基本保持不变（P<0.05）。表明投加的微生物－酶复合制剂对河道水体中氨氮有着显著的去除效果。
2.2 总氮含量的变化
从图2中可以看出，投放了不同微生物－酶复合制剂的河道中总氮含量的变化也有不显著的差异（P>0.05），总体而言它们在起初一周内变化较小，从第6天开始显著下降，到第16天时，总氮的降解率均在40％以上，而同期未经处理的对照河道中的总氮含量虽有一定波动，但基本保持不变（P<0.05）。表明投加的微生物－酶复合制剂具有显著的反硝化作用，可显著去除河道水体中氮素。
2.3 CODMn含量的变化
从图3中我们可以看出，两池的COD变化都比较平稳。但通过比较可以看出，投放了高效微生物复合菌制剂和复合酶的2号池中的COD有缓慢下降趋势，从投放前的14.48mg/L下降到试验结束时的10.14mg/L，而对照池无明显变化。
从图3中可以看出，投放了不同微生物－酶复合制剂的河道中CODMn含量的变化虽然有差异，但差异不显著（P>0.05），它们在复合制剂投加2天后均一直呈显著下降趋势，到第14天后，CODMn的去除率开始降低，此时CODMn的去除率均在30％以上，而同期未经处理的对照河道中的CODMn含量虽有一定波动，但基本保持不变（P<0.05）。表明投加的微生物－酶复合制剂对河道水体中的CODMn有着显著的去除效果。
3 结论
从本研究的实验结果可以看出，用本发明所述方法制备的微生物－酶复合制剂，在城乡河道水体中有着良好的环境适应性，能在投加后快速去除水体中的CODMn和氨氮，且对水体总氮的去除有着显著的效果，可高效地生物修复城乡河道污染水体，显著改善城乡河道污染水体的水质。
Claims (3)
1.一种用于城乡污染河道水体修复的菌-酶复合制剂，包含微生物和复合酶两类组分，其特征在于：
(1)、所述微生物由保藏号为CCTCCM 2011423的地衣芽孢杆菌BFT-4(BacillisLicheniformis BFT-4)，保藏号为CCTCC M 2011425的施氏假单胞菌BRH(Pseudomonas stutzeri BRH)，和保藏号为CCTCC M 2011427的恶臭假单胞菌BRZ-1(Pseudomonas putida BRZ-1)组成，其中，各组分微生物在微生物总质量中的质量百分比为：地衣芽孢杆菌30-60％，施氏假单胞菌25-35％，恶臭假单胞菌15-35％；
(2)、所述复合酶包括蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶，复合酶各组分的质量百分比为：蛋白酶40％-60％，淀粉酶15-25％，纤维素酶25％-35％，其中，酶活均不小于1万U/g。
2.一种制备如权利要求1所述的菌-酶复合制剂的方法，其中，微生物由各组分微生物分别制备成固体菌剂后按比例混合制成，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
(1)、各级培养基的配置的方法如下：
a)、斜面培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基，备用；
b)、摇瓶菌种培养基和种子罐发酵培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基，备用；
c)、批量生产培养基：地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，培养基为：麸皮80-90％，砻糠：5-15％，葡萄糖3％，K2HPO42％，D生物素0.05％，按料水比1∶1加入水分；施氏假单胞菌BRH和恶臭假单胞菌BRZ-1均采用牛肉膏蛋白胨液体培养基；
(2)、摇瓶菌种扩增：分别将用斜面培养基活化的地衣芽孢杆菌BFT-4、施氏假单胞菌BRH和恶臭假单胞菌BRZ-1在无菌操作下，接入100ml的摇瓶培养基中，在30℃，150转/分的摇床中，培养24小时后备用；
(3)、种子罐发酵：将步骤(1)种子罐发酵培养基放入种子罐中，在种子罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却后，按接种量5-10％接入步骤(2)的摇瓶菌种；开动搅拌机在转速180转/分，温度30℃，通气量4m3/h，罐压0.1M Pa，自然pH的条件下培养24小时后备用；
(4)、批量产品的制备方法如下：
(a)、地衣芽孢杆菌BFT-4采用固体发酵，将步骤(1)固体培养基灭菌并冷却，按制备菌剂重量的2-4％的比例称取步骤(3)种子罐液体菌种，按菌种与水1∶5的比例放入无菌水中，而后接入固体培养基中并混匀；移入培养室，料厚1.5-2厘米，室温控制在30-35℃，培养72小时后在45-50℃的条件下烘干、粉碎、装袋，备用，所获地衣芽孢杆菌BFT-4制剂每克中活菌的含量不低于60亿CFU；
(b)、施氏假单胞菌BRH和恶臭假单胞菌BRZ-1采用液体发酵，在发酵罐中装入牛肉膏蛋白胨培养基，在发酵罐内进行蒸汽高温灭菌并冷却；将步骤(3)中种子液打入发酵罐中，接种量为发酵罐体积的8-10％，开动搅拌机在转速110-220转/分，温度28-35℃，通气量4m3/h，罐压0.1-0.18M Pa，自然pH的条件下培养24-32小时；单独发酵后的发酵液加载体吸附，形成固体，备用，所获施氏假单胞菌BRH和恶臭假单胞菌BRZ-1制剂每克中活菌的含量不低于60亿CFU。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：组合的微生物和复合酶按照待处理河道污染程度的不同复配为微生物-酶复合制剂，使得微生物的投加量为1-5g/m3，复合酶的投加量为0.01-0.05g/m3。
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