CN102813683B - 一种具有延缓衰老功效的银杏叶提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗衰老功效的银杏叶提取物及其制备方法与应用。该银杏叶提取物是按照包括以下步骤方法制备得到的：将银杏叶粉碎后与水混合，采用超声波进行预处理，然后再进行煮沸提取，得到银杏叶提取液。对银杏叶提取液进行离子交换层析，以脱盐和脱色，收集流出液，浓缩，得到银杏叶提取物。本发明的银杏叶提取物的制备方法，不需要有机试剂，提取分离方法简便，有效成分浸出率高，采用本发明方法制备的银杏叶提取物质量稳定，抗衰老功效显著，离子浓度低，可作为延缓衰老的功效添加剂广泛应用于化妆品之中。

Description

一种具有延缓衰老功效的银杏叶提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种具有延缓衰老功效的银杏叶提取物及其制备方法与应用。

背景技术

现代自由基医学研究表明，生物体的衰老、癌变、炎症以及免疫性疾病等都与自由基代谢失衡有关。因此，提高机体的抗氧化能力，可以对抗由活性氧及其引起的脂质过氧化产生的疾病。多糖和黄酮类化合物能有效的清除自由基，并且在美容方面具有淡化色斑、抗皱、抗氧化、抗衰老和防护皮肤等美容功效。

目前，“绿色、自然与环保”已成为全球日化、食品等非耐用消费品业的主流呼声，从日常食用的瓜果蔬菜中摄取人体所需的各种微量元素，既能抗衰老、润肤，而且又绿色天然、经济实惠。

银杏(学名：Ginkgo biloba)，别名白果、公孙树，属裸子植物，和它同门的所有其他植物都已灭绝，被称为“孑遗植物”。全国大部分地区有产，主产广西、四川、河南、山东、湖北、辽宁、江苏等地。银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶，其主要化学成分为多糖、黄酮类和萜内酯类化合物，有毒成分含量低。同时，银杏叶中营养成分丰富，蛋白质含量高，维生素C、维生素E、胡萝卜素及钙、磷、硼、硒等含量也十分丰富。因此，银杏叶不仅是一种天然药物，其药制品在国际上十分走俏，而且还是一种优良的功能性食品添加剂，是一种集营养和保健功能为一体、药食兼用的优良资源，具有广阔的开发利用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种银杏叶提取物及其制备方法。

本发明所提供的银杏叶提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的：将银杏叶粉碎后与水混合，采用超声波进行预处理，然后再进行煮沸提取，得到银杏叶提取液。

所述方法还包括下述步骤：对得到的银杏叶提取液进行离子交换层析纯化，以脱盐和脱色，收集流出液并浓缩至固含量大于5％，得到银杏叶提取物。

所述离子交换层析的方法为：将银杏叶提取液先通过阳离子树脂001×7，再通过阴离子树脂D309。

所述方法中，在煮沸提取结束后还需进行过滤；所述过滤的方法为先采用滤布进行粗滤，再用硅藻土作滤饼进行精滤。

上述方法中，银杏叶与水的质量比可为1∶(18-22)，优选为1∶20。

所述超声波的频率可为30-50kHz，功率120-160W，所述预处理的温度可为50-60℃，时间为30-50min；所述煮沸提取的时间可为1-2h。

本发明中所用的银杏叶为风干银杏叶，粉碎后能通过40目筛。所用的水优选去离子水。

本发明还提供了一种组合物及其制备方法。

本发明所提供的组合物由下述质量份的物质组成：本发明提供的银杏叶提取物100份、甘油10-20份和防腐剂K.G.P 0.5-0.6份。

制备方法如下：在所述银杏叶提取物中加入甘油得到混合液，对所述混合液进行灭菌，冷却后加入防腐剂L.G.P，得到所述组合物；所述灭菌的条件为85-90℃灭菌20-30min。

本发明的再一个目的是提供上述银杏叶提取物以及含银杏叶提取物的组合物的应用。

本发明所提供的银杏叶提取物以及组合物的应用是其在制备下述产品中的应用：1)制备具有延缓衰老功效的产品；2)制备清除DPPH自由基的产品；3)制备清除超氧阴离子自由基的产品；4)制备清除羟自由基的产品。所述产品可为保健品或化妆品。

含有本发明银杏叶提取物的产品也属于本发明的保护范围。

本发明的银杏叶提取物的制备方法，不需要有机试剂，提取分离方法简便，有效成分浸出率高，得到一种天然多糖和黄铜的相对稳定、离子浓度低的体系；采用本发明方法制备的银杏叶提取物质量稳定，抗衰老功效显著，离子浓度低，可作为延缓衰老的功效添加剂广泛应用于化妆品之中。

附图说明

图1为本发明制备银杏叶提取物的工艺流程图。

图2为实施例1制备的银杏叶提取物清除DPPH自由基实验结果。

图3为实施例1制备的银杏叶提取物清除超氧阴离子自由基实验结果。

图4为实施例1制备的银杏叶提取物清除羟自由基实验结果。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

下述实施例中所用银杏叶购于药材公司。所用的防腐剂L.G.P(丙二醇/双咪唑烷基脲/碘代丙炔基丁基甲胺酸酯)购自美国ISP公司。所用的阳离子树脂001×7和阴离子树脂D309均购自辽宁丹东明珠特种树脂有限公司。

实施例1、制备银杏叶提取物

银杏叶提取物的生产工艺流程如图1所示，具体制备过程如下：

将风干的银杏叶粉碎，过40目的筛子；粉碎的银杏叶与去离子水以质量比1∶20混合；以频率50kHz、功率160W的超声波，在55℃超声预处理40min；接着煮沸(100℃)提取2h；提取液用200目滤布粗过滤后，用硅藻土作滤饼进行精滤，收集滤液，得到澄清透亮橘红色的银杏叶提取液；提取液分别过阳离子树脂001×7和阴离子树脂D309，以脱盐降低其离子浓度并脱色，收集流出液；用旋转蒸发仪浓缩至固含量为5％，得到银杏叶提取物。

采用苯酚-硫酸比色法测定银杏叶提取物中的总糖含量。用葡萄糖作为参照标准品，以葡萄糖溶液的吸光度值和葡萄糖溶液的浓度进行线性回归，标准曲线方程为Y＝[(X+0.0049)/0.0101]×稀释倍数，R²＝0.9999，式中X代表吸光度值，Y代表多糖含量(μg/mL)。测得上述银杏叶提取物中总糖含量为30.4mg/ml。

采用NaNO₂-Al(NO3)₃比色法测定银杏叶提取物中的总黄酮含量。用芦丁作为参照标准，以芦丁溶液的吸光度值和芦丁溶液的浓度进行线性回归，标准曲线方程为Y＝(0.0956X-0.0024)×稀释倍数，R²＝0.9994，式中X代表吸光度值，Y代表黄酮含量(mg/mL)。测得上述银杏叶提取物中总黄酮的含量2.0mg/ml。

功效试验：

1、清除DPPH自由基(DPPH·)实验

DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自由基，若提取物能将其清除，则提示提取物具有降低羟自由基、烷自由基或氧化自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用。DPPH·在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，在517nm处有一个特征吸收峰，当其遇到自由基清除剂时，DPPH·的孤电子被配对，使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小。因此，可通过测定吸光度的变化来评价其对DPPH·的清除效果。

准确称取20mg DPPH·(sigma公司)，用无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到浓度为20mmol/L的DPPH·溶液，将上述实施例1制备的银杏叶提取物分别用蒸馏水稀释成不同浓度的测试液。分别取2ml不同浓度的测试液及2ml 20mmol/L DPPH·溶液，混匀后反应30min，测定517nm波长下吸光度的变化，对照溶剂用无水乙醇代替，按下式计算清除率。

清除率(％)＝{1-[(A₁-A₃)/A₂]}×100％。

式中，A₁为2ml DPPH·液与2ml不同浓度的银杏叶提取物组成的混合液的吸光度；A₃为2ml不同浓度的银杏叶提取物与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度；A₂为2mlDPPH·液与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度。

上述实施例1制备的银杏叶提取物对DPPH·的清除作用结果如图2所示。结果表明，银杏叶提取物溶液的浓度越大，对DPPH·的清除能力越强，质量浓度在4％时清除率达到86.8％，5％时清除率达到87.7％，实际应用时可以适当考虑银杏叶提取液添加量问题。

2、清除超氧阴离子自由基实验

取0.05mol/L pH 8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml，置于25℃水浴中预热20min，分别加入1ml不同浓度的上述实施例1制备的银杏叶提取物水溶液和0.4ml 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1.0ml 8mol/L的HCl终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测定吸光度，计算清除率。空白对照组以1ml去离子水代替样品，每个处理均做三个重复。

清除率的计算公式：超氧阴离子自由基清除率(％)＝(A₁-A₂)/A₁×100％，其中A₁为空白对照的平均吸光度，A₂为银杏叶提取物的平均吸光度。

上述实施例1制备的银杏叶提取物对超氧阴离子自由基的清除作用结果如图3所示。结果表明，提取液对超氧阴离子自由基有一定的清除作用，从图3中可以看出，随着银杏叶提取液浓度的增大，对超氧阴离子的清除作用也逐渐增强。当提取液浓度到达5％时，其清除率为75.5％，表明提取物对超氧阴离子自由基具有很好的清除效果。

3、清除羟自由基(·OH)实验

羟基自由基是活性氧中化学性质最活泼的自由基，它几乎能与活细胞中任何生物大分子发生反应，且反应速度极快，是对机体危害最大的自由基。通过测定水杨酸捕获羟自由基所得到的产物来确定羟自由基的清除率，反应体系中若加入具有清除羟自由基作用的物质即可降低反应液的吸光度值。因此可通过分光光度法来描述羟自由基的量及待测物质清除羟基自由基的能力。具体实验过程如下：

取稀释20倍的上述实施例1制备的银杏叶提取物。羟基自由基由Fenton反应产生，·OH氧化水杨酸产生对510nm光有特征吸收的2，3-二羟基苯甲酸，通过测定水杨酸捕获·OH所得到的产物确定·OH的清除率。在25ml比色管中加入3ml 2mmol/LFeSO₄和3ml 1mmol/L H₂O₂，摇匀，接着再加入3ml 6mmol/L水杨酸，摇匀，于37℃水浴加热15min后取出，测定其吸光度A₀。然后分别加入浓度为5％的上述实施例1制备的银杏叶提取物溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml和1.0ml，然后再分别加入蒸馏水0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml，摇匀，继续水浴加热15min，取出测定其吸光度Ax。为消除后加的共1.0ml银杏叶提取物和蒸馏水所造成的体系吸光度值的降低，采用上述相同方法，恒温15min后测定其吸光度值A₀₀，然后再加入1ml蒸馏水，摇匀后再测一次其吸光度Axx，A_降低＝A₀₀-Axx。

银杏叶提取物对·OH清除率为：·OH清除率(％)＝(A₀-Ax-A_降低)/A₀×100％。

上述实施例1制备的银杏叶提取物对羟自由基的清除作用结果如图4所示。结果表明，随着加入的样品量增加，其清除效果加强，当5％浓度的提取液的加入量为1.0ml时，清除率达到72.6％。通过以上实验可以看出，低浓度的上述实施例1制备的银杏叶提取物即具有很好的抗衰老功效。

实施例2、制备银杏叶提取物的组合物

将实施例1制备的银杏叶提取物与甘油以质量比100∶10混合；90℃灭菌30分钟；冷却至40℃以下，加入防腐剂L.G.P，使L.G.P和银杏叶提取物的质量比为0.6∶100，混合均匀，得到澄清透亮橘红色银杏叶提取物组合物。该组合物可直接作为化妆品添加剂使用。

Claims (10)

1.一种制备银杏叶提取物的方法，包括下述步骤：将银杏叶粉碎后与水混合，采用超声波进行预处理，然后再进行煮沸提取，得到银杏叶提取液；

所述超声波的频率为30-50kHz；功率为120-160W；所述预处理的温度为50-60℃，时间为30-50min；所述煮沸提取的时间为1-2h；

所述方法还包括在煮沸提取结束后进行过滤的步骤；所述过滤的方法为先采用滤布进行粗滤，再用硅藻土作滤饼进行精滤；

所述方法还包括下述步骤：对得到的银杏叶提取液进行离子交换层析纯化，收集流出液并浓缩至固含量大于5%，得到银杏叶提取物；所述离子交换层析的方法为：使银杏叶提取液先通过阳离子树脂001×7，再通过阴离子树脂D309。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述超声波的频率为50kHz；功率为160W；所述预处理的温度为50-60℃，时间为40min；所述煮沸提取的时间为2h。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述银杏叶与水的质量比为1:（18-22）。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述银杏叶与水的质量比为1:20。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述银杏叶为风干银杏叶，所述银杏叶粉碎后能通过40目筛；所述水为去离子水。

6.权利要求1-5中任一项方法制备得到的银杏叶提取物。

7.一种组合物，由下述质量份的物质组成：权利要求6所述的银杏叶提取物100份、甘油10-20份和丙二醇/双咪唑烷基脲/碘代丙炔基丁基甲胺酸酯0.5-0.6份。

8.一种制备权利要求7所述组合物的方法，包括下述步骤：在所述银杏叶提取物中加入甘油得到混合液，对所述混合液进行灭菌，冷却后加入丙二醇/双咪唑烷基脲/碘代丙炔基丁基甲胺酸酯，得到所述组合物；所述灭菌的条件为85-90℃灭菌20-30min。

9.权利要求6所述的银杏叶提取物在制备下述产品中的应用：1）制备具有延缓衰老功效的产品；2）制备清除DPPH自由基产品；3）制备清除超氧阴离子自由基的产品；4）制备清除羟自由基产品；所述产品选自下述至少一种：保健品和化妆品。

10.权利要求7所述的组合物在制备下述产品中的应用：1）制备具有延缓衰老功效的产品；2）制备清除DPPH自由基产品；3）制备清除超氧阴离子自由基的产品；4）制备清除羟自由基产品；所述产品选自下述至少一种：保健品和化妆品。

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