CN102784134A

CN102784134A - 带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN102784134A
Application number: CN2012103062725A
Authority: CN
Inventors: 唐于平; 李念光; 段金廒
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2012-08-27
Filing date: 2012-08-27
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2032-08-27
Also published as: CN102784134B

Abstract

本发明公开了带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的新应用，本发明通过大量实验筛选出具有强抗肿瘤活性的带一氧化氮的阿魏酸或咖啡酸衍生物，实验结果表明，具有很好的抑制肿瘤细胞生长和能促进肿瘤细胞凋亡的作用，且对多种恶性肿瘤细胞均具有强的杀灭作用，应用范围更广泛。尤其是(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯3个化合物显示出非常强的抗多种肿瘤活性，有望开发成新的抗肿瘤药物。

Description

带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种药物，具体涉及带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的应用。

背景技术

肿瘤已成为21世纪威胁人类生存的头号杀手，平均每年有670万人死于各种肿瘤疾病。中国为世界癌症高发国家之一，每年新增220万名癌症患者，占全球总数达20%，现有癌症患者450万人，并且每年呈快速增长趋势。临床上目前治疗肿瘤的药物，抗肿瘤效果有效，且药物毒性大，在杀死肿瘤细胞的同时也无选择性的杀死白细胞、淋巴细胞等人体自身免疫细胞，导致病人常常由于因自身免疫能力低下并发感染，患者使用不良反应大，且疗程长，费用高，在临床使用中有较大的局限性。

芳香酸类化合物，如阿魏酸、咖啡酸、肉桂酸、异阿魏酸以及香豆酸报道具有很好的抗血栓活性，临床上常用于心血管疾病，尽管芳香酸类化合物具有多种药理活性，但是, 由于他们的分子亲水性较强, 较难透过生物膜脂质双分子层而影响其药效作用（王汝涛, 周四元, 张峰, 等. 阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2004, 9(7): 763-765.）限制了该类化合物的应用。中国专利201010214044.6，报道了带有一氧化氮供体的芳香酸前体药物及其制备方法和其应用，但目前还未有带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在抗恶性肿瘤疾病药物中的应用的报道。因此，很有必要在现有技术的基础之上研发设计抗肿瘤效果好，不良反应低的抗肿瘤新药。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的新应用。实验结果表明，带有一氧化氮供体的芳香酸衍生物对多种肿瘤细胞具有强抗肿瘤活性，临床使用安全，不良反应低。

技术方案：为了实现以上目的，本发明所采取的技术方案如下：

具有通式（Ⅰ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE002

其中A代表下列官能团：3,4-二羟基苯基或3-甲氧基-4-羟基苯基；R₁代表丙基、丁基、戊基、已基或2-丁烯基。

当A为3-甲氧基-4-羟基苯基，R₁分别为丙基、丁基、戊基、已基、2-丁烯基时，化合物分别为化合物1至5。

当A为3,4-二羟基苯基，R₁分别为丙基、丁基、2-丁烯基时，化合物分别命名为化合物6至8。

本发明提供的具有通式（Ⅱ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE004

其中A代表下列官能团： 3-甲氧基-4-羟基苯基；R₂代表邻位或对位-PhCH₂-，或者是邻位或对位-Ph-。其中当R₂代表邻位、对位-Ph-时，化合物分别为化合物9至10。其中当R₂代表邻位、对位-PhCH_2-时，化合物分别为化合物11至12。

本发明提供的具有通式（Ⅲ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE006

其中A代表下列官能团： 3-甲氧基-4-羟基苯基；R₃代表-CH₂CH₂-、-CH(CH₃)CH₂CH₂ ^-；-CH₂CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂OCH₂CH₂ -。其中；R₃代表-CH₂CH₂-、-CH(CH₃)CH₂CH₂ ^-；- CH₂CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂OCH₂CH₂-的化合物分别为化合物13至16，并且分别命名为：(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯。

(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯的结构解析数据为：¹H NMR (CDCl₃) δ: 1.40 (d, J = 6.2 Hz, 3H, CH₃), 2.22 (m, 2H, CH₂), 3.92 (s, 3H, OCH₃), 4.53 (t, J = 6.2 Hz, 2H, CH₂O), 5.26 (q, J = 6.2 Hz, 1H, COOCH), 5.90 (brs, 1H, OH), 6.29 (d, J = 15.9 Hz, 1H, C=CH), 6.90-7.08 (m, 3H, Ar-H), 7.61 (d, J = 15.9 Hz, 1H, CH=C), 7.60-7.77 (m, 3H, Ar-H), 8.08 (m, 2H, Ar-H). ESI-MS: 513 [M+Na]⁺

(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯的结构解析数据为：浅褐色粉末，收率92.0%，Mp: 143.3-146.9 °C。¹H NMR (CDCl₃) δ: 1.88-2.05 (m, 4H, 2CH₂), 3.91 (s, 3H, OCH₃), 4.30 (t, J = 6.2 Hz, 2H, CH₂O), 4.50 (t, J = 6.2 Hz, 2H, COOCH₂), 5.88 (brs, 1H, OH), 6.29 (d, J = 15.9 Hz, 1H, C=CH), 6.91-7.09 (m, 3H, Ar-H), 7.62 (d, J = 15.9 Hz, 1H, CH=C), 7.62-7.77 (m, 3H, Ar-H), 8.06 (m, 2H, Ar-H). ESI-MS: 513 [M+Na]⁺。

(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯的结构解析数据为：白色粉末，收率82.8%，Mp: 115.5-115.8 °C。¹H NMR (CDCl₃) δ: 3.86 (t, J = 4.7 Hz, 2H, OCH₂), 3.91 (s, 3H, OCH₃), 3.93 (t, J = 3.5 Hz, 2H, CH₂O), 4.39 (t, J = 4.7 Hz, 2H, CH₂O), 4.59 (t, J = 3.5 Hz, 2H, COOCH₂), 5.89 (br s, 1H, OH), 6.29 (d, J = 15.9 Hz, 1H, C=CH), 6.88-7.09 (m, 3H, Ar-H), 7.63 (d, J = 15.9 Hz, 1H, CH=C), 7.51-7.74 (m, 3H, Ar-H), 8.06 (m, 2H, Ar-H). ESⅠ-MS: 529 [M+Na]⁺。

作为优选方案，所述的具有通式（Ⅰ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。

作为优选方案，所述的具有通式（Ⅱ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。

作为优选方案，所述的具有通式（Ⅲ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。

本发明提供的通式（Ⅰ）、（Ⅱ）和（Ⅲ）所示的化合物和要学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、注射剂、丸剂、滴丸剂等剂型的药物。

有益效果：本发明提供的中药组合物和现有技术相比具有以下优点：

本发明通过大量实验筛选出具有强抗肿瘤活性的带一氧化氮的阿魏酸或咖啡酸衍生物，实验结果表明，具有具有很好的抑制肿瘤细胞生长和能促进肿瘤细胞凋亡的作用，且对多种恶性肿瘤细胞均具有强的杀灭作用，应用范围更广泛。尤其是(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯，(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯3个化合物体内、体外显示出强的抗多种肿瘤活性，有望开发成新的抗肿瘤药物。

本发明提供的抗肿瘤化合物可以方便和药学载体制备成多种剂型，临床上服用方便。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施列1 体外抗肿瘤实验

采用MTT法检测以上化合物1至化合物16对肺癌，恶性黑色素瘤（Melanoma），宫颈癌(cervical)，头颈部肿瘤，乳腺癌体外抗肿瘤作用。

以每孔800-1000个细胞种至384孔细胞板中，每孔45ul培养液，37℃，5%CO₂培养24小时。将以上化合物1至化合物16化合物以DMSO倍比稀释至化合物板中，将不同浓度化合物0.5ul加入细胞培养板中，培养72小时，加入5ul Alamablue并孵育4小时，然后在酶标仪上读结果，计算各药物的抑制率。具体实验结构如表1所示：

表 1 带NO供体阿魏酸和咖啡酸衍生物对人癌细胞列的体外抗肿瘤活性（IC₅₀，单

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE007

M）

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE009

由以上表1的实验结果表明，本发明提供的带NO供体阿魏酸和咖啡酸衍生物对人癌细胞列均具有很好的抗肿瘤效果，尤其是化合物8、9、14、15和16显示出了非常强的抗多种肿瘤的活性，取得了非常好的技术效果。

实施例2 采用CCK-8细胞增殖检测法测定化合物14、15和16对人癌细胞体外增殖的影响

1、采用CCK-8细胞增殖检测法测定化合物(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯，即化合物14；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯，即化合物15；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯，即化合物16对人胃癌细胞MGC-803、人结肠癌细胞SW620、人肝癌细胞SMMC-7721、人肾癌细胞Ketr-3、人乳腺癌细胞MCF-7、人白血病细胞HL-60体外增殖的影响。

2、测试药物：化合物14、15、16分别稀释成100uM、50uM和10uM；对照药物：紫杉醇注射液稀释成10μg/mL（太极集团四川太极制药有限公司，批号：10090029）；同时设立阴性组：0.1%DMSO。

3、实验方法：

3.1、细胞消化、计数、配制成浓度为3～5×10⁴个/mL的细胞悬液，96孔细胞培养板中每孔加入100μL细胞悬液（每孔3～5×10³个细胞）；

3.2、96孔细胞培养板置于37℃，5%CO₂培养箱中培养24小时；

3.3、用完全培养基稀释各药物至所需浓度，每孔加入100μL不同浓度的含以上测试药物的培养基，同时设立阴性对照组，阳性对照组；

3.4、 96孔细胞培养板置于37℃，5% CO₂培养箱中培养72小时；将96孔板进行CCK-8染色，每孔加入10μL CCK-8，在培养箱继续培养4小时；摇床10分钟轻轻地混匀；λ=450nm，酶标仪读出每孔的OD值，计算抑制率。

Figure 2012103062725100002DEST_PATH_IMAGE011

4、实验结果

具体实验结果如表2所示：

表2 化合物14、15和16体外抗人癌细胞活性测试结果

由表2的实验结果表明，本发明提供的化合物14至16，即化合物(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯对人胃癌细胞MGC-803、人结肠癌细胞SW620、人肝癌细胞SMMC-7721、人肾癌细胞Ketr-3、人乳腺癌细胞MCF-7和人白血病细胞HL-60也均具有非常强的抗肿瘤活性。

由以上实验结果表明，本发明提供的带一氧化氮的阿魏酸或咖啡酸衍生物，具有很好的抗肿瘤作用，尤其是化合物(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-2-丁酯；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-1-丁酯；(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-2-{2-[4-苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-5-氧-3-氧基]-乙氧基}乙酯对多种肿瘤细胞均显示出了非常强的活性，很有希望开发成为新一代抗肿瘤药物。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.具有通式（Ⅰ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

Figure 2012103062725100001DEST_PATH_IMAGE001

2.具有通式（Ⅱ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

Figure 2012103062725100001DEST_PATH_IMAGE003

其中A代表下列官能团： 3-甲氧基-4-羟基苯基；R₂代表邻位或对位-PhCH₂-，或者是邻位或对位-Ph-。

3.具有通式（Ⅲ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，

其中A代表下列官能团： 3-甲氧基-4-羟基苯基；R₃代表-CH₂CH₂-、-CH(CH₃)CH₂CH₂ ^-；- CH₂CH₂CH₂CH₂-或CH₂CH₂OCH₂CH₂ -。

4.根据权利要求1所述的具有通式（Ⅰ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。

5.根据权利要求2所述的具有通式（Ⅱ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。

6.根据权利要求3所述的具有通式（Ⅲ）所示的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为恶性黑色素瘤、宫颈癌、头颈部肿瘤、胃癌、结肠癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病或肺腺癌。