CN102781476A

CN102781476A - 改进经口递送的方法

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Publication number: CN102781476A
Application number: CN2010800616969A
Authority: CN
Inventors: M·麦克多诺; A·泰斯特; B·库克斯; R·克里滕登; J·王
Original assignee: Murray Goulburn Co Opeartive Co Ltd
Current assignee: Agriculture Victoria Services Pty Ltd; Murray Goulburn Co Opeartive Co Ltd
Priority date: 2009-11-18
Filing date: 2010-11-18
Publication date: 2012-11-14
Also published as: AU2010321884A1; US20120328591A1; JP2013511542A; CA2818241A1; EP2501411A4; EP2501411A1; WO2011063160A1

Abstract

本发明提供了一种改进经口递送治疗剂的方法，包括将治疗剂连接至含血管生成素的载体蛋白质的步骤，含有所述血管生成素和治疗剂的融合蛋白质或缀合物以及其在医学上的用途。

Description

改进经口递送的方法

技术领域

本发明涉及改进经口递送治疗性蛋白质或肽的方法，并且具体涉及设计当口服时具有改进的生物利用度的蛋白质或肽的方法以及具有改进的生物利用度的治疗性蛋白质和肽。

背景技术

口服治疗剂是需要的，因为它通常与患者对治疗方法的最佳顺应性联系在一起，并且使得给药方案有更大灵活性，以及避免与注射给药法有关的危险、不便和费用。但是，使用口服途径的能力受到药物的如下能力的限制：

(a)被通过口、食道或肠道的粘膜层吸收的能力，

(b)在消化道中酸和酶降解下存在的能力，以及

(c)经过上皮细胞层进入体循环的能力。

几乎所有的药理学肽都不可口服利用至可用程度。具体地，激素例如胰岛素、生长激素、促卵泡激素或降钙素，以及细胞因子例如干扰素或白细胞介素，已知在没有特殊剂型时的口服利用度远低于2%。在这种水平下，利用度的时间差异和个体差异通常较高，使得口服不实用、不经济或危险。

肽在药物治疗中的重要性逐渐增加。但是，它们的使用受到大部分肽必须通过注射给药这个事实的限制。虽然已建议全身给药的替代途径，例如肺、鼻或经皮路径，但是迄今仅被开发用于有限范围的药剂，并且受到耐受性和可以单剂量递送的化合物量的限制。

已经进行了多种尝试以改进药物的生物利用度。这些包括结合渗透促进剂，例如水杨酸盐、脂质-胆汁盐混合物、胶束、甘油酯和酰基肉毒碱，但是它们被发现在大多数情况下会引起毒性问题。

如果药物是蛋白质或肽，尝试改进口服生物利用度包括将蛋白质或肽与蛋白酶抑制剂——例如抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂和抑氨肽酶素——混合以限制所给予的治疗剂降解。遗憾的是这些蛋白酶抑制剂是非选择性的，并且内源性蛋白酶也被它们抑制而产生不良作用。

提供肽的口服制剂的其他尝试已使用保护性包衣例如肠溶衣，单独使用或与通过将蛋白质或肽与两性寡聚物或多聚物偶联的肽的化学修饰一起使用，所述两性寡聚物或多聚物包括例如亲水的聚乙二醇部分和亲脂的烷基部分。这些技术仅提供了非常有限的成功。另一个方法是加入疏松胃肠道紧密连接的赋形剂，但是这一方法引起了耐受性问题，因为所损坏的屏障可以允许附近的所有分子进入，包括细菌。也有藻酸钙包衣的脂质体制剂已用于肽的结肠递送。但是，到目前为止已发现这些方法只能有限应用。

一些使治疗性肽或蛋白质可口服生物利用的尝试依赖于使用载体蛋白质或肽，例如维生素B12。这些体系仍然在研究中。

因此，本领域需要用于改进经口递送药剂——尤其是蛋白质或肽——的新方法，以使它们能够完整的存在于肠道或能够穿过胃肠道进入体循环。

发明内容

在第一方面中，本发明提供了一种改进经口递送治疗剂的方法，包括将治疗剂连接到含有血管生成素的载体蛋白质的步骤。

申请人更早的申请PCT/AU2009/000602证明了血管生成素是可口服利用的，因为当在小鼠饮食中饲喂给小鼠时能够产生效果。还已经发现牛奶提取物中的血管生成素在任何剂量下都没有已知的毒性，并且可以从几天一次至持续的频率被有效给药。发明人目前已经发现，将血管生成素连接至本身不可口服生物利用（或只有有限的口服利用度）的治疗剂可以向治疗剂提供大的口服生物利用度。

在第二方面中，本发明提供了一种经口递送体系，含有血管生成素作为载体用于将治疗剂基本完整地转运进入或穿过胃肠道。

在第三方面中，本发明提供了一种含有连接至治疗剂的血管生成素的融合蛋白质或缀合物。

在第四方面中，本发明提供了一种药物组合物，含有本发明第三方面的融合蛋白质或缀合物以及可药用载体。

在一个实施方案中，所述药物组合物用于口服。

第五方面提供了血管生成素用于连接到治疗剂以改进所述治疗剂的口服生物利用度的用途。

在第六方面中，本发明还提供了预防或治疗需要用治疗剂治疗的动物中病理病症的方法，所述方法通过对动物口服给予有效量的本发明第三方面的融合蛋白质或缀合物或者本发明第四方面的药物组合物，其中所述治疗剂通常是基本不可口服生物利用的。

本发明的第七方面提供了血管生成素在制造含有治疗剂的药剂中的用途，其中所述药剂用于经口给予至需要用所述治疗剂治疗的患者。

还预料期，血管生成素可以用于经口递送剂，用于诊断和或监测病理病症的进程和或另一种治疗剂对病理病症进程的作用。

在一个实施方案中，所述治疗剂是蛋白质或肽。

在另一方面中，本发明提供了含有本发明第三方面的所述融合蛋白质或缀合物的食物、营养制品或饲料。

不希望受限于任何对观测到的有益效果提出的机制，认为血管生成素高度折叠的结构造成了它对胃肠道中存在的蛋白酶的抗性。另外，认为血管生成素具有特定膜结合性质以及亲脂和亲水的平衡，所述平衡增强了它穿过胃肠（GI）道中粘膜层的转运（以及它缀合于的任何物质的转运）。这种性质也被认为使血管生成素和它所缀合的任何物质能够转运穿过上皮细胞膜。

附图说明

在随后的非限定性的实例中，参照附图描述了本发明，其中：

图1显示了在pH 3.0、酶与底物比例为1:20下以胃蛋白酶消化2小时天然bAng的消化抗性。泳道1给出分子量，对于胃蛋白酶消化的天然bAng，泳道4至12给出bAng的谱和强度。

图2显示了使用Nde I和Xho I限制酶切位点构建至pET30C载体的αMSH.bAng的N-末端载体构建体图谱。

图3显示了使用Nde I和Xho I限制酶切位点构建至pET30C载体的αAng.aMSH的C-末端载体构建图谱。

图4提供了用于构建使用Nde I和Xho I限制酶切位点构建至pET30C载体的αMSH.bAng和bAng.aMSH的引物序列。

图5提供了a.来自pET30C载体构建体的α-MSH-bAng的DNA序列和蛋白质序列，以及b.来自pET30C载体构建体的bAng-α-MSH的DNA序列和蛋白质序列。

图6显示了来自pET30C载体内构建体的在大肠杆菌中表达的纯化的αMSH.bAng和bAng-α-MSH融合蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶。

图7显示了C57Black/6J小鼠的血液(a.)和组织(b.)中放射性标记的αMSH.bAng融合蛋白质的比例，表示为总的口服饲喂所给予的百分比。

图8显示了C57Black/6J小鼠的血液(a.)和组织(b.)中放射性标记的bAng.αMSH融合蛋白质的比例，表示为总的口服饲喂所给予的百分比。

具体实施方式

发明人提出，由血管生成素提供的疏水残基和亲水残基的平衡使其保护与其一起给药的治疗剂免受消化道中酸和酶降解，并使得治疗剂通过口、食道或肠道的粘膜层吸收，并任选经过上皮细胞层基本完整地进入体循环。“基本完整”表示没有除去药剂的治疗活性。

本说明书中使用的术语“治疗剂”包括药物（drug）（例如小分子药物，例如抗生素）、药品（medicine）、可检测的标记物、蛋白质(例如，酶)、基于蛋白质的化合物(例如含有一条多肽链的蛋白质复合物)以及多肽(肽)。所述药剂不限于它们的治疗用途。

本文所指的“经口递送”或“口服”意在包括任何向GI道的给药或递送，并且包括直接向口咽腔给药以及经口给药，其中肽或多肽实际吸收进入肠道或体循环发生在胃肠道中，包括胃、小肠和大肠。本文使用的口服包括舌下给药(通过施用于受者的舌下给药，代表一种通过口咽腔的给药形式)和颊给药(一种在受者牙齿和面颊之间的剂型的给药)。

经口递送或口服在本文可以互换使用。

本文使用的生物利用度是指治疗剂在肠道、血液或体循环中的利用度。

优选所述载体影响的转运活性不影响GI道的完整性。治疗剂的转运可能导致例如将药剂递送至个体的体循环。

术语“缀合物”意指载体和非载体治疗剂的结合物。缀合在本质上可以是化学的，例如通过一个连接物，或在本质上是遗传学的，例如通过重组基因技术，例如在融合蛋白质中与例如报告分子（例如绿色荧光蛋白质、β-半乳糖苷酶、His标签等）。

本发明的缀合物和药物组合物还可以另外与其他化合物一块给药或与其他化合物结合给药以提供一种有效的结合物或结合治疗。意在包括药物活性剂的任何化学上兼容的结合物，只要该结合物没有消除本发明缀合物的活性。

当本发明的缀合物与其他药剂在结合治疗中给药时，它们可以被相继给药或同时给药至个体。或者，本发明的药物组合物可以包含本发明的载体-药剂缀合物与本文所述的可药用赋形剂以及本领域已知的另一治疗剂或预防剂结合的结合物。

用于经口递送的治疗剂可以用于治疗任何疾病或病症。

术语“治疗剂”或“药剂”意指用于治疗疾病或病况、损伤或感染的症状的药剂和/或药品和/或药物，包括但不限于抗生素、抗微生物剂、抗癌剂和抗血管生成剂。

术语“病况（condition）”意指引起个体疼痛、不适、患病（sickness）、疾病（disease）或残疾（精神或生理）的任何情形。

本文涵盖的可以用血管生成素载体递送或与血管生成素缀合用于递送进入或穿过GI道的蛋白质或基于蛋白质的治疗剂实例包括但不限于抗体、抗体片段(例如抗体结合片段，例如Fv片段、F(ab)2、F(ab)2′和Fab等)、基于肽或蛋白质的药物(例如正向药理学调节剂（激动剂）或药理学抑制剂（拮抗剂）)等。本文涵盖的药剂的其他实例包括细胞毒素(例如，单甲基auristatin E(MMAE)、来自细菌内毒素和外毒素的毒素；白喉毒素、肉毒杆菌（botunilum）毒素、破伤风毒素、百日咳（perussis）毒素、葡萄球菌肠毒素、中毒休克综合征毒素TSST-1、腺苷酸环化酶毒素、志贺毒素、霍乱弧菌肠毒素等)以及抗血管生成化合物(内皮抑素、儿茶素、营养制品、趋化因子IP-10、基质金属蛋白酶抑制剂(MMPI)、纤连蛋白片段（anastellin）、内生性微纤维、抗凝血酶、酪氨酸激酶抑制剂、VEGF抑制剂、反受体的抗体、

和帕尼单抗（panitumumab）等)、IFNα、IFNβ、IFNγ、G-CSF、TPO、EPO、PtHR、抗微生物剂如血管生成素、金环蛇抗菌肽（cathelicidin）、GPCR肽配体、人生长激素、抗炎（antiiflammatory）肽包括BPI和脂皮质蛋白、细胞因子包括白细胞介素10、4和13、胃肠激素包括肠促胰液素、促胃液素、胆囊收缩素、VIP、GIP、促胃动素和肠高血糖素以及设计用于激活受体的合成肽（肽模拟物）。

用于肠道健康和免疫性的治疗剂尤其适合从肠道内腔(尤其是穿过肠道粘膜)转运进入肠道，并且不需要完全穿过肠道上皮细胞进入血液。这些治疗剂可以用于增强肠道组织功能。所述治疗剂包括血管生成素，尤其对于肠道增强或抗微生物活性增强的，RNase 5、RNase 4、抗微生物剂、抗炎肽包括合成物、BPI和脂皮质蛋白、细胞因子包括白细胞介素10、4和13、胃肠激素包括肠促胰液素、促胃液素、胆囊收缩素、VIP、GIP、促胃动素和肠高血糖素以及经鉴定阻断腹腔（coelic）疾病或肠易激综合征中免疫反应的任何药剂。

还依据本发明，所述药剂还可以是小分子药物，例如抗癌药物。本发明所涵盖的抗癌药物可以包括，例如具有使得其缀合到本发明载体的基团的药物。抗癌药物的实例包括但不限于例如可以选自以下的药物：紫杉醇（Taxol）、紫杉萜（docetaxel）、长春碱、长春新碱、依托泊苷、多柔比星、环磷酰胺、紫杉特尔（taxotere）、美法仑、苯丁酸氮芥或任意结合物，来普汀可以用于治疗肥胖症（obsesity）。

表述“小分子药物”意指分子量为1000g/mol或更小的药物。

在本文中应理解，当超过一个载体缀合位点可利用或存在时，超过一种药剂可以缀合至本发明的载体。因此，缀合物可以包含一种或多种药剂。缀合物可以是自身具有活性，也就是即使当与所述载体结合时所述药剂也可以是有活性的。还依据本发明，所述化合物可以从载体释放或不释放，即通常在转运至或穿过胃肠道后。因此，所述化合物可以从缀合物（或从载体）释放的，并可以在释放后变为有活性的。更具体地，所述药剂可以在转运至或穿过胃肠道后从载体释放。

在另一方面中，本发明还涉及一种治疗需要治疗的哺乳动物（例如患者）的方法，包括对所述哺乳动物给予本发明的缀合物和/或药物组合物。

血管生成素

本发明所用的血管生成素可以来自任何物种，但是特别包括来自人、牛、猪、马、鸟、绵羊、大鼠、鸡、火鸡或小鼠血管生成素。血管生成素可以包括SEQ ID NO:1（人）、SEQ ID NO:2（牛）、SEQ ID NO:3（小鼠）、SEQ ID NO:4（鸡）、SEQ ID NO:5（兔）、SEQ ID NO:6（猪）、SEQ ID NO:7（马）或编码血管生成素或能够诱导细胞培养物中成肌细胞生长的其功能片段的任何其他序列。

10 20 30 40 50 60

MVMGLGVLLL VFVLGLGLTP PTLAQDNSRY THFLTQHYDA KPQGRDDRYC ESIMRRRGLT

70 80 90 100 110 120

SPCKDINTFI HGNKRSIKAI CENKNGNPHR ENLRISKSSF QVTTCKLHGG SPWPPCQYRA

130 140

TAGFRNVVVA CENGLPVHLD QSIFRRP(SEQ ID NO：1)

10 20 30 40 50 60

MVMVLSPLLL VFILGLGLTP VAPAQDDYRY IHFLTQHYDA KPKGRNDEYC FNMMKNRRLT

70 80 90 100 110 120

RPCKDRNTFI HGNKNDIKAI CEDRNGQPYR GDLRISKSEF QITICKHKGG SSRPPCRYGA

130 140

TEDSRVIVVG CENGLPVHFD ESFITPRH (SEQID NO：2)

10 20 30 40 50 60

MAISPGPLFL IFVLGLVVIP PTLAQDDSRY TKFLTQHHDA KPKGRDDRYC ERMMKRRSLT

70 80 90 100 110 120

SPCKDVNTFI HGNKSNIKAI CGANGSPYRE NLRMSKSPFQ VTTCKHTGGS PRPPCQYRAS

130 140

AGFRHVVIAC ENGLPVHFDE SFFSL(SEQ ID NO：3)

10 20 30 40 50 60

MAMSSLWWTA ILLLALTVSM CYGVPTYQDF LRTHVDFPKT SFPNIAAYCN VMMVRRGINV

70 80 90 100 110 120

HGRCKSLNTF VHTDPRNLNT LCINQPNRAL RTTQQQLPVT DCKLIRSHPT CSYTGNQFNH

130

RVRVGCWGGL PVHLDGTFP(SEQ ID NO：4)

10 20 30 40 50 60

QDDSRYKHFL TQHYDAKPFG RNDRYCETMM KRRDLTSPCK DTNTFVHGNK GSIKDVCEDK

70 80 90 100 110 120

NGKPYGKNFR ISKSSFQVTT CKHVGGSPWP PCRYRATSGS RNIVIACENG LPVHFDESVF

QQKVH (SEQ ID NO：5)

10 20 30 40 50 60

KDEDRYTHFL TQHYDAKPKG RDGRYCESIM KQRGLTRPCK EVNTFIHGTR NDIKAICNDK

70 80 90 100 110 120

NGEPYNNFRR SKSPFQITTC KHKGGSNRPP CGYRATAGFR TIAVACENGL PVHFDESFII

TSQ (SEQID NO：6)

10 20 30 40 50 60

MAMSLCPLLL VFVLGLGLTP PSLAQDDSRY RQFLTKHYDA NPRGRNDRYC ESMMVRRHLT

70 80 90 100 110 120

TPCKDTNTFI HGSKSSIKAI CGNKNGNPYG ETLRISKTRF QVTTCKHAGG SPRPPCRYRA

130 140

TPGFRSIVIA CENGLPVHFD ESFFRP (SEQID NO：7)

血管生成素可以包括与已知血管生成素的氨基酸序列相比一个或多个保守的氨基酸置换。保守氨基酸替换的非限制性实例是Phe/Tyr；Ala/Val；Leu/Ile；Arg/His；Ser/Thr等。血管生成素还可以包括与已知血管生成素的氨基酸序列相比一个或多个氨基酸残基的插入或缺失（包括平截）。另外，血管生成素可以包括一种或多种天然发生的多态现象。血管生成素可以是全部或部分合成的。血管生成素还可以是衍生的共有序列，例如通过使用标准方法比较来自两个或多个物种的编码序列，并且由其衍生共有序列。也可以使用优化的血管生成素序列，例如含有提供更高活性、更大蛋白酶抗性等的突变的序列。特别优化的血管生成素序列是RNase活性降低或被阻断的序列。

具体的片段和变体包括一个或多个保守的结构域，例如编码催化核心或细胞结合位点的序列。“催化核心”是指去除了信号肽和N-和C-末端可变区的多肽内部区域。

血管生成素的两个不同区域是其血管生成活性所需要的，所述区域包括能够切割RNA的催化位点，含有His-13、Lys-41和His-115；以及非催化的细胞结合位点，最少含有第60-68位残基。虽然需要，但是RNase活性和受体结合能力对于血管生成活性并不是充分的：还需要胞吞作用和核易位。

活性可以通过改变活性位点处或其附近的关键氨基酸而增加或降低，一个活性增加的实例是Asp-116替换为His。功能研究显示，Arg-5和Arg-33对活性也是重要的。

RNase的蛋白酶或热稳定性增加是可能的，因此可以改进RNase5/血管生成素稳定性和蛋白酶抗性，所述改进可以辅助递送所述缀合物或药物组合物。

在增生的内皮细胞中细胞摄取血管生成素是由几个结构域介导的，并且不依赖于RNase活性，因为酶失活突变可被内化。例如，K41Q和H13A突变体是酶失活的但是被易位的。更易被细胞内化且更有效的改良形式的血管生成素在本发明的范围内，而且这些变体可以通过如下方式被测试：在培养物中对上皮细胞和肌肉细胞进行体外摄取和活性测试。

对于细胞转运血管生成素，受体结合和胞吞作用可能需要被保持或被增强。具有增强的肠道和细胞递送功能的变体可以在caco-2肠上皮细胞体系中进行体外测试和筛选。

可设想可以更易于被细胞内化且更有效的改良形式的血管生成素，并且这些变体可以通过如下方式被测试：在培养物中对上皮细胞和肌肉细胞进行体外摄取和活性测试，同时在小鼠中进行测试。

依据本发明可使用任何已知的血管生成素，包括来自小鼠、人、牛、羊等的血管生成素。

用于血管生成素的适合氨基酸序列通常与已知的血管生成素序列有至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、或至少约98%或更高的氨基酸序列一致性。序列相似性是基于参考序列计算的，所述参考序列可以是更大序列的子集，例如保守的基序。序列分析的算法是本技术领域已知的，例如Altschul et al.(1990),J.Mol.Biol.215:403-10中所述的BLAST(使用默认设定)。

由在严谨杂交条件下与已知的血管生成素编码序列杂交的核酸分子编码的血管生成素序列也是适合的。严谨杂交条件的实例是在50℃或更高以及0.1×SSC(15mM NaCl/1.5mM柠檬酸钠)条件下进行杂交。严谨杂交条件的另一个实例是在以下溶液中42℃孵育过夜，然后在约65℃下用0.1×SSC洗涤过滤器：50%甲酰胺、1×SSC(150mM NaCl,15mM柠檬酸钠)、50mM磷酸钠（pH 7.6）、5×Denhardt's溶液、10%硫酸葡聚糖和20μg/ml变性的剪切鲑鱼精DNA。例如，高严谨性条件包括在6×SSC(其中20×SSC含有3.0M NaCl和0.3M柠檬酸钠)、1%十二烷基硫酸钠（SDS）水溶液(例如，不含甲酰胺)中于65℃杂交约8小时(或更久)，然后用0.2×SSC,0.1%SDS在65℃下洗一次或多次。例如，中等严谨性条件包括在6×SSC,1%SDS水溶液(例如，不含甲酰胺)中于65℃杂交约8小时(或更久)，然后用2×SSC,0.1%SDS在室温下洗一次或多次。

治疗剂

本文所述的治疗剂是指没有口服生物利用度或具有有限的口服生物利用度的治疗剂。

所述治疗剂优选在GI道中足够稳定，但是很难穿过肠道粘膜或进入血液。或者，所述治疗性蛋白质或肽在GI中通过封装、肠溶衣等保护的。理想地，维持这种保护直至血管生成素和治疗性蛋白质或肽到达较低的肠道，在此血管生成素能够主动或被动转运治疗剂穿过肠道粘膜并任选穿过肠道上皮细胞，其在此释放到血液中。

本文使用的足够稳定是指至少20%的所给予的药剂在GI道暴露30分钟后还保留。

在一个实施方案中，治疗性蛋白质或肽是含有20个或者更少氨基酸的肽，当用本发明的经口递送体系给药时潜在地提供基本的口服活性。这种治疗性肽的实例包括α-促黑激素、加压素、催产素、脑啡肽、生长抑素和芋螺毒素包括ACV1。

在一个实施方案中，所述治疗性蛋白质或肽是含有21个至40个之间的氨基酸的肽，例如实施例中所述的甲状旁腺激素(PTH 1-34)。这种治疗性蛋白质或肽的其他实例包括胰高血糖素样肽(GLP-1)、降钙素、PYY3-36、胃泌酸调节素、抑胃肽(GIP)、内啡肽及该超家族的相关成员。

在一个实施方案中，所述治疗性蛋白质或肽是含有41个至60个之间的氨基酸的肽。这种治疗性肽的实例是胰岛素和胰岛素样生长因子-1(IGF-I)。

在一个实施方案中，所述治疗性蛋白质或肽是含有61个至80个之间的氨基酸的肽。

在一个实施方案中，所述治疗性蛋白质或肽含有超过80个氨基酸。这种治疗性蛋白质或肽的实例包括生长激素、白细胞介素或其他的大生长因子。

通过本发明方法递送的关键分子包括干扰素α、干扰素β、G-CSF、TPO、EPO、PtHR、抗微生物剂如金环蛇抗菌肽、GPCR肽配体、hGH以及设计用于激活受体的合成肽（肽模拟物）和上述的肠道增强剂。

连接

为改进治疗剂的口服生物利用度，所述治疗剂必须连接到血管生成素。所述连接可以是共价连接或非共价连接。本领域技术人员知道保留治疗剂功能和血管生成素穿过胃肠道能力的合适连接物。

在一个实施方案中，血管生成素通过其N末端连接至所述治疗剂。在另一个实施方案中，血管生成素是通过其C末端连接至所述治疗剂。如果所述药剂是蛋白质或肽，它可以通过其N或C末端连接至血管生成素。

血管生成素和所述治疗剂可以通过赋予所述治疗剂生物活性的任何方便的方法连接。由于血管生成素相对较大(超过100个氨基酸)，优选将其用重组方法合成或从牛奶或血浆中分离，并随后用酶学方法分离和连接到所述治疗剂，或者整个缀合物或融合蛋白质可以用重组方法合成。合适的方法是本领域技术人员熟知的，并且用于任何给定情况的最方便的方法可以很容易地选择。

依据治疗剂的性质，优选的连接位点可以变化。在一个具体的实施方案中，所述缀合物包括连接到所述治疗性蛋白质或肽的C末端的血管生成素的N末端，但是这主要依赖于保持生物活性的加入点。

在一个实施方案中，血管生成素和治疗剂是由间隔物分开的，例如多聚甘氨酸。使用间隔物可以防止空间位阻，随后防止所述治疗剂活性降低。

间隔物或连接物可以包含介于血管生成素和所述治疗剂之间的在肠道上皮细胞或蛋白酶中存在的酶的切割位点，以便一旦其进入粘膜层或穿过GI道并进入血液后血管生成素被从所述治疗剂中切割，目的是为了阻止由于存在血管生成素造成的对所述治疗剂活性的任何抑制。

对所述蛋白质加入化学修饰，例如所述融合蛋白质末端的保护基团，能够提供蛋白酶抗性，例如加入在C或N末端整合D-氨基酸或者在C和N末端整合其他氨基酸修饰的合成缀合物。

缀合物

本文所定义的缀合物包括以任何顺序连接到本文所定义的治疗剂的本文所定义的血管生成素。

所述的血管生成素可以缀合至一个或多个治疗剂，所述治疗药剂可以是相同的或不同的。为了缀合多个治疗剂，可以使用多聚赖氨酸连接物。

药物组合物

本发明一方面提供可用于预防或治疗病理病况的多种药物组合物。依据本发明的一个实施方案，所述药物组合物是通过使用载体、赋形剂和添加剂或助剂将本发明第三方面的融合蛋白质或缀合物，或其类似物、衍生物或盐引入适于给药至受试者的形式而制备的。

通常所用的载体或助剂包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露醇和其他糖、滑石、乳蛋白质、明胶、淀粉、维生素、纤维素及其衍生物、动物油、植物油、聚乙二醇和溶剂，例如无菌水、醇、甘油和多元醇。其他可药用载体包括无毒赋形剂，包括盐、防腐剂和缓冲液等，如《Remington’s药物科学》（Remington’s Pharmaceutical Sciences）,第20版.Williams&Wilkins(2000)和《英国国家处方集》（TheBritish National Formulary）第43版.(英国医学会和大不列颠皇家要学会（Medical Association and Royal Pharmaceutical Society of GreatBritain）,2002;http://bnf.rhn.net)所述，其内容通过引证的方式纳入本文。

防腐剂包括抗微生物剂、抗氧化剂和螯合剂。药用组合物的pH和各组分的准确浓度依据本领域常规技术调节。见Goodman和Gilman著The Pharmacological Basis for Therapeutics(第7版,1985)。

所述药物组合物优选以剂量单位形式制备和给药。固体剂量单位包括片剂、胶囊和栓剂。为了治疗受试者，依据化合物的活性、给药方式、病症的性质和严重度、受试者的年龄和体重，可以使用不同的日剂量。但是，在一些情形下，较高或较低的日剂量可以是恰当的。给予日剂量可以独立剂量单位或几个较小的剂量单位形式单次给药，也可以在具体时间间隔以分开的剂量多次给药。

本发明的药物组合物可以受益于封装或肠溶衣以减少在GI道内的降解。

本发明的药物组合物可以以治疗有效剂量给药。当然，用于该用途的有效量依赖于疾病的严重度和受试者的体重及整体状态。通常，体外所用的剂量可以对用于药物组合物原位给药的用量提供有用的指导，并且动物模型可以用于确定用于治疗细胞毒素副作用的有效剂量。

口服使用的剂型可以是硬明胶胶囊形式，其中所述活性成分与惰性固体稀释剂——例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土——混合。所述口服使用剂型还可以是软明胶胶囊形式，其中所述活性成分与水或油介质——例如花生油、液体石蜡或橄榄油——混合。

水性悬浮液也适于口服使用，通常含有与适于制造水性悬浮液的赋形剂——例如盐水——混合的所述活性材料。所述赋形剂可以是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，其可以是

(a)天然存在的磷脂，例如卵磷脂；

(b)环氧烷与脂肪酸的缩合物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；

(c)环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合物，例如十七乙烯氧基十六醇；

(d)环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生出的部分酯的缩合物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或

(e)环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生出的部分酯的缩合物，例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯。

本发明缀合物的剂量水平依据缀合物的效能而可在宽范围内变化，通常每天约1μg至约5mg/千克体重，约100μg至约500mg/患者。可以与所述载体材料结合以产生单一剂量的活性成分的量可有变化，取决于待治疗的宿主和具体的给药方式。例如，准备用于对人口服的制剂可以含有约100μg至500mg活性化合物以及合适和方便的量的载体材料，可以在总组合物的约5%至95%之间变化。剂量单位形式通常含有约5mg至500mg的活性成分。

但是，可以理解的是，用于任何具体患者的特定剂量水平将取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、整体健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合和进行治疗的具体疾病的严重度。

食物和营养制品

所述融合蛋白质或缀合物可以在食物组合物中给予，例如功能性食物或动物饲料。这些食物适于由任何个体的消费。本文所使用的术语“个体”包括人和非人个体。非人个体包括动物，尤其是哺乳动物，例如农场动物，例如牛、猪、绵羊、山羊和家禽，宠物和伴侣动物，例如马、猫、狗、豚鼠、大鼠和小鼠，以及水生动物，例如鱼和用于水产养殖等的动物。

术语“营养制品制剂”是指提供医疗和/或健康益处——包括预防或治疗疾病——的食物或食物的部分。

营养制品包括从分离的营养素、膳食补充剂和饮食至遗传工程设计的食物、功能性食物、草本制品和加工的食物，例如谷物食品、汤和饮料。术语“功能性食物”是指包括“可以提供超过其所含常规营养素的健康益处的任何改良的食物或食物成分”的食物。

感兴趣的营养制品制剂包括兽用和人用的食物，包括食物棒（例如谷物棒、早餐棒、能量棒、营养棒）、口香糖、饮料、加强饮料、饮料补充剂（例如用于添加到饮料的粉末）、片剂等。

受试者食品或营养制品制剂包括第三方面的融合蛋白质或缀合物以及至少一种另外的食品级组分。适合的组分包括但不限于单糖、二糖、碳水化合物、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、脂质、稳定剂、防腐剂、调味剂、着色剂、增甜剂、抗氧化剂、螯合剂、载体、质地形成剂（texturant）、营养素、pH调节剂、乳化剂、稳定剂、牛奶基固体物、食用纤维等。所述食物组分可以从天然来源中分离，也可以是合成的。所有组分都是适于人消费的食品级组分。

合适单糖的实例包括山梨糖醇、甘露醇、赤藓糖、苏糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、核酮糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖和山梨糖。合适二糖的非限定性实例包括蔗糖、麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽酮糖和乳糖。

合适碳水化合物包括寡糖、多糖和/或碳水化合物衍生物。本文所使用的术语“寡糖”指含有3至9个单糖单元的可消化的线性分子，其中所述单元是通过糖苷键共价连接的。本文所使用的术语“多糖”是指含有超过9个单糖单元的可消化（即能够被人体代谢）的大分子，其中所述单元是通过糖苷键共价连接的。多糖可以是线性链或支链的。碳水化合物衍生物，例如多元醇（例如丙三醇），也可以在本文中用作复合糖。本文所使用的在碳水化合物上下文中的术语“可消化的”是指能够被人体产生的酶代谢的碳水化合物。为不可消化的碳水化合物的多糖实例是纤维素、抗性淀粉(例如原料玉米淀粉)和老化直链淀粉(例如高直链玉米淀粉)。碳水化合物的非限定性实例包括棉子糖、水苏糖、麦芽三糖、麦芽四糖、糖原、直链淀粉、支链淀粉、聚葡萄糖和麦芽糊精。

合适的脂肪包括但不限于甘油三酯，包括短链甘油三酯(C₂-C₄)和长链甘油三酯(C₁₆-C₂₂)。

合适的质地形成剂(也称为可溶性纤维)包括但不限于果胶（高酯、低酯）、角叉菜胶、海藻酸盐(例如海藻酸、海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸钙)、瓜尔胶、刺槐豆胶、欧车前、黄原酸胶、阿拉伯胶、低聚果糖、菊粉、琼脂和上述两种或多种的功能性混合物。

合适的乳化剂包括但不限于丙二醇单硬脂酸酯(PGMS)、硬脂酰乳酸钠(SSL)、硬脂酰乳酸钙(CSL)、单酸甘油酯、甘油二酯、单甘油二酸酯、聚甘油酯、乳酸酯、聚山梨醇酯、蔗糖酯等。

食用纤维包括多糖、寡糖、木质素和相关的植物物质。合适的食用纤维包括但不限于甜菜纤维、苹果纤维、豌豆纤维、小麦纤维、燕麦纤维、大麦纤维、黑麦纤维、稻纤维、马铃薯纤维、番茄纤维、其他的植物非淀粉多糖纤维及其组合。

合适的调味剂包括天然的和合成的香料，“褐色调味剂”（例如咖啡、茶）、乳品调味剂、水果调味剂、香草调味剂、香精、提取物、油性树脂、果汁和饮料浓缩剂、香料基础材料(例如δ内酯类、酮类)等，以及这些香料的组合。植物香料的实例包括，例如茶(例如优选红茶和绿茶)、芦荟、瓜拉那、人参、银杏、山楂果、木槿、蔷薇果、甘菊、薄荷、茴香、姜、欧亚甘草、莲子、五味子、沙巴棕、菝葜、红花、圣约翰草、姜黄、小豆蔻、肉豆蔻、山扁豆皮、布枯、肉桂、茉莉、山楂果、菊花、荸荠、甘蔗、荔枝、竹笋、香草、咖啡等。

合适的增甜剂包括但不限于阿力甜、葡萄糖、果糖、乳糖醇、聚葡萄糖、木糖醇、木糖、阿司帕坦、糖精、环己氨基磺酸盐、乙酰舒泛K、L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸低级烷基酯增甜剂、L-天冬氨酰-D-丙氨酰胺、L-天冬氨酰-D-丝氨酰胺、L-天冬氨酰-羟甲基烷酰胺增甜剂、L-天冬氨酰-1-羟乙基烷酰胺增甜剂等。

合适的抗氧化剂包括但不限于生育酚(天然的、合成的)、棕榈酸抗坏血酸酯、没食子酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、叔丁基氢醌(TBHQ)等。

合适的营养素包括维生素和矿物质，包括但不限于烟酸、硫胺素、叶酸、泛酸、生物素、维生素A、维生素C、维生素B₂、维生素B₃、维生素B₆、维生素B₁₂、维生素D、维生素E、维生素K、铁、锌、铜、钙、磷、碘、铬、钼和氟化物。

合适的着色剂包括但不限于FD&C染料(例如，黄色#5、蓝色#2、红色#40)、FD&C色淀、核黄素、β-胡萝卜素、天然着色剂，包括例如水果、蔬菜和/或植物提取物，例如葡萄、黑加仑、花楸（aronia）、胡萝卜、甜菜根、红球甘蓝（red cabbage）和木槿。

示例性防腐剂包括山梨酸酯、苯甲酸酯和聚磷酸酯防腐剂。

合适的乳化剂包括但不限于甘油二酯、单酸甘油酯、单酸甘油酯的乙酸酯、甘油二酯的乙酸酯、单酸甘油酯的二乙酰基酒石酸酯、甘油二酯的二乙酰基酒石酸酯、单酸甘油酯的柠檬酸酯、甘油二酯的柠檬酸酯、单酸甘油酯的乳酸酯、甘油二酯的乳酸酯、脂肪酸、脂肪酸的聚甘油醇酯、脂肪酸的丙二醇酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、硬脂酰乳酸钠、硬脂酰乳酸钙等。

合适的pH调节剂包括有机可食用酸和无机可食用酸。所述酸可以其未离解的形式或其各自的盐的形式存在，例如盐磷酸氢钾或磷酸氢钠、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。示例性酸为可食用有机酸，包括柠檬酸、苹果酸、延胡索酸、己二酸、磷酸、葡糖酸、酒石酸、抗坏血酸、乙酸、磷酸和其混合物。

所述融合蛋白质或缀合物可以以如下的量存在于食品和/或营养制品制剂中：约0.01重量%至约50重量%，例如约0.01重量%至约0.1重量%、约0.1重量%至约0.5重量%、约0.5重量%至约1.0重量%、约1.0重量%至约2.0重量%、约2.0重量%至约5重量%、约5重量%至约7重量%、约7重量%至约10重量%、约10重量%至约15重量%、约15重量%至约20重量%、约20重量%至约25重量%、约25重量%至约30重量%、约30重量%至约35重量%、约35重量%至约40重量%、约40重量%至约45重量%或约45重量%至约50重量%。

当所述食品是饮料时，所述食品通常含有超过约50体积%的水，例如约50体积%至约60体积%、约60体积%至约95体积%的水，例如约60体积%至约70体积%、约70体积%至约80体积%、约80体积%至约90体积%，或约90体积%至约95体积%的水。

当所述食品是棒时，所述食品通常含有少于约15体积%的水，例如约2体积%至约5体积%、约5体积%至约7体积%、约7体积%至约10体积%、约10体积%至约12体积%或约12体积%至约15体积%的水。

在一些实施方案中，所述食品/营养制品基本是干的，例如含有少于约5%的水。

如果存在的话，单糖、二糖和复合糖通常均以如下的量存在：约0.1重量%至约15重量%，例如约0.1重量%至约1重量%、约1重量%至约5重量%、约5重量%至约7重量%、约7重量%至约10重量%或约10重量%至约15重量%。如果存在的话，可溶性纤维、食用纤维和乳化剂通常均以如下的量存在：约0.1重量%至约15重量%，例如约0.1重量%至约1重量%、约1重量%至约5重量%、约5重量%至约7重量%、约7重量%至约10重量%或约10重量%至约15重量%。

如果存在的话，上述的其他组分以如下的量范围存在：所述组合物的约0.001重量%至约5重量%。

治疗方法

本发明的融合蛋白质、缀合物、药物、食物、营养制品或饲料组合物可以用于治疗可以用所述治疗剂治疗的任何病理病症的方法中，其中所述治疗剂被口服。

本文提及治疗意图包括预防所述病理病症或缓解所述病理病症。

由本发明治疗的病理病症可以是可用所述治疗剂治疗的任何病症。

在本发明的说明书以及随后的权利要求书中，除非上下文由于表达语言或必需含义而需要别样以外，用语“包含（comprise）”或变体例如“包含（comprises）”或“包含（comprising）”均使用包括的意义，即指明所述及特征的存在，但不排除本发明的多个实施方案中更多特征的存在或加入。

除非上下文中另外清楚指出，否则本文所使用的单数形式“一（a）”、“一个（an）”和“该（the）”也包括复数的对应提及物。因此，例如，提及“一个肽”包括多个这种肽，提及“一个氨基酸”是指一个或多个氨基酸。

当表达数值范围时，应清楚地理解为该范围包含该范围的上限和下限以及上下限之间的所有数值。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员的通常理解相同的含义。虽然与本文所述材料和方法类似或等同的任何材料和方法可以用于实施或测试本发明，本文对优选的材料和方法进行了描述。

应清楚理解的是，本发明不限于本文所述的具体材料和方法，因为这些可以有变化。还应理解的是，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并不意图限定本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限定。

除非另有说明，本发明使用本领域技术人员能力范围内的常规的化学、蛋白质化学、分子生物学和酶学技术。这些技术是技术人员所熟知的，并且在文献中有充分的解释。

下面将对本发明通过参考下述非限定性实施例和图进行详细描述。

实施例1测试重组牛血管生成素的蛋白酶抗性

制备30ug等份的bAng，用于胃蛋白酶(A型猪胃粘膜;Sigma900-75-6)消化。消化是在酶/底物比例为1:20下实施的，并且所述的试验被控制在恒温37℃和恒定pH 3下。在总消化时间120分钟内每15分钟取样。立即将每个样品在-80℃下速冻以终止消化过程。胃蛋白酶消化后，完整bAng的水平用SDS PAGE确定。凝胶用考马斯蓝染色，并且条带密度用Odyssey imaging system V3.0定量。图1显示胃蛋白酶对天然bAng的消化。对图1中条带强度定量表明，在模拟胃的条件下消化2小时后，75%的bAng蛋白质作为完整的未降解蛋白质存在。

实施例2用重组细菌产生血管生成素融合蛋白质

产生N-末端αMSH.bAng和C-末端αMSH.bAng构建体使用pET30C载体进行，将所述构建体装配并通过PCR进行扩增，包括Nde I和XhoI限制酶切位点及αMSH(见图2和3)。在消化Nde I和Xho I后，将产物克隆至pET30C载体的相同位点。得到引物序列（图4），并且所述构建体序列通过DNA测序证实(图5a和5b)。

将大肠杆菌菌株BL21(DE3)pLysS，携带pET30C/bAng.α-MSH和pET30C/α-MSH.bAng，用于表达rbAng融合蛋白质。在蛋白质浓度约5mg/ml下，将所分离的包涵体溶解在含有6M盐酸胍（GdnHCl）、100mMTris/HCl(pH 8)、1mM EDTA、100mM NaCl、10mM DTT的变性缓冲液中。然后，用100mM Tris/HCl(pH 8)、1mM EDTA、0.3mM GSSG、1.5mM GSH将所述变性溶液缓慢稀释至0.2mg蛋白质/ml、0.5mMDTT、0.3M GdnHCl的重折叠缓冲液。然后，将所述溶液在对空气开放的容器中于4℃下不搅拌孵育72小时。在重折叠完成后，将所述溶液通过超滤浓缩并在4℃下对milliQ水进行透析，然后按照制造说明书将其装载至Pierce强阳离子交换小型离心柱（Pierce strong cation Exchange minispin column）上。将rbAng融合蛋白质用1M NaCl洗脱。纯化的重组蛋白质示于图6中。

实施例3在小鼠中口服饲喂15分钟内放射性标记的N-末端血管生成素融合蛋白质和C-末端血管生成素融合蛋白质被吸收进入血液

使用上述实施例2概述的方案，纯化共200μg的bAng.α-MSH和αMSH.bAng。使用氯胺-T、焦亚硫酸钠(CT/SMB)碘化，将每等份20ug的每种融合蛋白质用1.0mCi I125标记。将游离或未结合的125I使用具有PD10蛋白质柱的HPLC从标记的bAng.α-MSH和αMSH.bAng分离。125I对于两种蛋白质的结合率是79%，使得共790μCi的标记的bAng.α-MSH和αMSH.bAng构建体可用于小鼠的口服饲喂。在饲喂个体动物之前，将全部标记的bAng.α-MSH和αMSH.bAng分别稀释至3.0ml。

共30只8周龄的雄性C57Black/6J小鼠用于本实验。上午11点将小鼠称重，然后分配用于在饲喂后15、30、45、60、120或180分钟取样(在每个时间点，对于bAng.α-MSH和αMSH.bAng，n=2或3只小鼠)。将每只动物用200μl的合适比例的放射标记的溶液(等于53μCi)经口服饲喂给药，并在第15、30、45、60、120或180分钟通过颈脱位法处死。

通过心脏穿刺从心脏收集血液并将其置于冰上的含肝素的管中，然后于-20℃储存。将脑取出并称重，随后在液氮中速冻。将心脏、肝脏、肾脏和四头肌通过钳夹术被快速切离，然后称重和速冻，并置于液氮中。然后将离体的组织于-80℃下保存。

为分析组织中的放射性，将约40mg组织置入含有300μl冰冷RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl pH7.4、150mM NaCl、1mM EDTA、1%NP-40、25%脱氧胆酸钠、1μg/ml Pics 1、1μg/ml Pics 2、2mM PMSF、1mM焦磷酸钠、10mM NaF、1mM NaVO4)的2ml eppendorf管中。然后，将所述组织用手持Pro 200匀化器(Pro Scientific Inc,Oxford,CT，USA)匀化约10秒或直到没有可见的组织块存在。匀化后，将所述样品在液氮中冷冻保存，然后在分析之前置于冰上融化。一旦融化后，将所述样品剧烈涡旋5秒，然后于4℃、3000g下在离心机中离心30秒。然后，将样品以100μl的两份重复在γ计数器(CobraII,auto-gamma,PackardBioscience Company)上计数1分钟。

每个匀化样品的蛋白质浓度用Pierce BCA蛋白质测定法(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA)进行分析。将样品按照1:40稀释于RIPA缓冲液中用于测定。

将血液样品通过按照1:30稀释于MQ水中，随后通过涡旋充分混匀进行分析。然后，将100μl样品的两份重复加入管中用于如上述的计数。

图7.a表明，口服饲喂15分钟内超过8%的摄入的αMSH.bAng出现在C57Black/6J小鼠血液中。在整个实验过程中均保持该水平。bAng.αMSH吸收入血液被观察到有类似吸收(图8.a)。对于αMSH.bAng(图7.b.)和bAng.αMSH(图8.b.)二者，在肝脏(总摄入量的约0.6%)和肾脏(总摄入量的约0.2%)中观察到相对较低水平。摄入四头肌、心脏和脑组织均少于αMSH.bAng和bAng.αMSH总摄入量的0.1%。

对于被消化的蛋白质的一般情况是，在口服饲喂15分钟内快速吸收至少8%的两种融合蛋白质，并且保持该水平超过3小时。蛋白质消化后经过胃肠道吸收的游离氨基酸和小的二肽或三肽显示了在该3小时取样期间内吸收的更进一步逐渐增加和明显的浓度峰值，反映了消化和吸收。游离氨基酸通过结合至组织——包括皮肤、肌肉、肾脏、肝脏、心脏和脑组织——还被从血液中快速清除。肝脏和肾脏中累积低百分比标记物是可预计的，因为这些组织的高代谢活性以及血液之外的非特异性吸收。缺乏结合至骨骼肌、心脏和脑，清楚地表明，在血液中存在的标记物不是游离的氨基酸而是完整的蛋白质。

Mansanès et.al.(2001)证明了，在大鼠中在饲喂后第1小时内吸收进入门静脉血液的80%的氨基酸被隔离进入包括骨骼肌、肾脏、脑和肝脏的组织。在小鼠中，超过90%的来自水解蛋白质源的氨基酸是在饲喂后的最初6小时内经过肠吸收(Oesser et.al.,1999)并且被从循环系统隔离进入皮肤、肝脏、肾脏、脾脏、软骨和骨骼肌。

R.M.Masanés，I.Rafecas and X.Remesar(2001)Absorption of a Protein Gavagein Zucker Lean Rats.Influence of Protein Content in the Diet.Archives of Physiology andBiochemistry 109：168-174.

S.Oesser，M.Adam，W，Babel and J.Seifert(1999)Oral Administration of 14CLabeled Gelatin Hydrolysate Leads to an Accumulation of Radioactivity in Cartilage of Mice(C57/BL).Journal of Nutrition129：1891-1895.

Claims

1.一种改进经口递送治疗剂的方法，包括将所述治疗剂连接至含血管生成素的载体的步骤。

2.一种经口递送体系，含有血管生成素作为载体用于将治疗剂转运进入或穿过胃肠道。

3.一种融合蛋白质或缀合物，含有连接至治疗剂的血管生成素。

4.一种药物组合物，含有权利要求3的融合蛋白质或缀合物和可药用载体。

5.权利要求4的药物组合物，用于口服给药。

6.血管生成素用于连接到治疗剂以改进所述治疗剂的口服生物利用度的用途。

7.一种预防或治疗需要用治疗剂治疗的动物的病理病症的方法，通过对所述动物口服给予有效量的权利要求3的融合蛋白质或缀合物或权利要求4的药物组合物，其中所述治疗剂是通常基本不能口服生物利用的。

8.权利要求3的缀合物，其中所述治疗剂是蛋白质或肽。

9.权利要求1的方法，其中所述治疗剂是蛋白质或肽。

10.权利要求2的递送体系，其中所述治疗剂是蛋白质或肽。

11.权利要求8的药物组合物，其中所述治疗剂是蛋白质或肽。

12.权利要求8的缀合物，其中所述治疗的蛋白质或肽有20个或更少的氨基酸。

13.权利要求8的缀合物，其中所述治疗的蛋白质或肽有21至40个氨基酸。

14.权利要求8的缀合物，其中所述治疗的蛋白质或肽有41至60个氨基酸。

15.权利要求8的缀合物，其中所述治疗的蛋白质或肽有61至80个氨基酸。

16.权利要求8的缀合物，其中所述治疗的蛋白质或肽有81个或更多的氨基酸。

17.权利要求3的融合蛋白质或缀合物，含有连接至治疗剂的SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6或7的血管生成素。

18.权利要求17的缀合物，其中所述治疗剂含有抗微生物肽。

19.权利要求17的缀合物，其中所述治疗剂含有甲状旁腺激素。

20.权利要求17的缀合物，其中所述治疗剂含有胰岛素。

21.权利要求17的缀合物，其中所述治疗剂含有干扰素α、干扰素β、G-CSF、TPO、EPO、PtHR、抗微生物剂、血管生成素、抗炎剂、金环蛇抗菌肽、GPCR肽配体、hGH或设计用于激活受体的合成肽（肽模拟物）。