CN102775460A - 人参皂苷Rb3在制备防治心肌重构药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种人参皂苷Rb3在制备防治心肌重构药物的应用，提供了人参皂苷Rb3在防治心肌重构中的医疗作用，可以制备成制备防治心肌重构药物。
Description
技术领域
本发明公开了一种人参皂苷Rb3，并提供了该化合物的制备方法；同时还公开了该化合物在防治心肌重构中的用途，属于中药学技术领域。
背景技术
关于人参皂苷的研究始于上个世纪60年代初，迄今为止,中外学者相继从人参，西洋参，三七等五加科植物的根，茎叶，花，果等从中分离出了人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rg3、Rf 、F1，F2，Rh1、Rh2等50多种四环三萜类人参皂苷。根据其母体结构主要分为3 类: 达玛烷型(Dammarane)型皂苷、奥克梯隆醇型(Ocotillol)以及侧连转化类型（Sidechain-changed- Protopanaxadiol）皂苷。其中人参皂苷Ra1、Ra2、Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2等它们具有相同的皂苷元，20（S）－原人参二醇，只是在3位和20为连接糖的数目和种类有区别，结构式通式如下
发明内容
本发明提供了一种人参皂苷Rb3，是以含有人参皂苷Rb3的西洋参茎叶总皂苷、人参根总皂苷，三七花皂苷为原料制备而成的。适用于工业化生产。
本发明进一步公开了人参皂苷Rb3在制备防治心肌重构药物中的用途。
本发明的人参皂苷-Rb3，其化合物结构式如下：
化学名称：20(s)-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-20-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]苷；
分子式：C53H90O22·4H2O；
分子量：1078。
本发明人参皂苷Rb3的制备工艺，包括以下步骤：
取1份的含有人参皂苷Rb3总皂苷溶于10~50份的醇中，再加入等体积的0.03~0.8%NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到人参茎叶二醇组皂苷。
取上述得到的产物，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，得本发明化合物。
本发明提供了一种人参皂苷-Rb3，是以含有人参皂苷-Rb3的西洋参茎叶总皂苷、人参根总皂苷，三七花皂苷为原料制备而成的。适用于工业化生产。
本发明进一步公开了人参皂苷-Rb3在制备防治心肌重构药物中的用途。
通过以下试验表明本发明人参皂苷Rb3在防治心肌重构中的医疗作用：
试验例1
人参皂苷Rb3对大鼠结扎腹主动脉建立压力超负荷性心室重构的影响
1. 材料与方法
1.1实验动物
Wistar大鼠，雄性，体重200~220g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（吉）2003-0001。
主要试剂与药品
| 人参皂苷Rb3(G-Rb3) | 吉林大学化学院陈燕萍教授提供 |
| 贝那普利片 | 北京诺华制药有限公司 |
| 丙二醛(MDA)测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 一氧化氮(NO)测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
| 6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
| 血栓素B2(TX B2)放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
| 内皮素(ET)放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
1.3实验仪器
| DY89-型电动玻璃匀浆机 | 宁波新芝科器研究所 |
| LG16-W低温高速离心机 | 北京医用离心机厂 |
| 754型紫外分光光度计 | 山东高密彩虹分析仪器厂 |
| LDZ5-2型普通离心机 | 北京医用离心机厂 |
| DR-HW-1电热恒温水温箱 | 北京西城区医疗器械厂 |
YKH- | 江西医疗器械厂 |
| RM-6000多道生理记录仪 | 日本光电株式会社 |
压力超负荷性心室重构模型的建立
参考Anversa等方法进行造模[1]。大鼠术前禁食12小时，不禁水。以3%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台上，除毛常规消毒腹部皮肤，取上腹正中切口打开腹腔，分离右肾动脉起始部上段腹主动脉约10mm，将一直径约0.6mm的针头平行置于该段腹主动脉上，以4.0丝线将腹主动脉连同针头一起结扎，迅速抽去针头，造成腹主动脉狭窄（假手术组仅放置丝线，不予结扎），腹腔内注入青霉素20万u，关闭腹腔。术后常规抗炎3d，所有大鼠于23±1℃、30%～40%湿度下喂养6周。术中及术后平均死亡率18%，分别死于麻醉意外、术后感染及左心衰。
动物分组及给药
取术后存活大鼠72只随机分为6组，每组12只。各组给药如下：
1.假手术组：给蒸馏水10ml/kg/天；
2.模型组：给蒸馏水10ml/kg/天；
3.人参皂苷Rb3小剂量组：给G-Rb3 20mg/kg/天；
4.人参皂苷Rb3中剂量组：给G-Rb3 40mg/kg/天；
5.人参皂苷Rb3大剂量组：给G-Rb3 80mg/kg/天；
6.阳性药物组：给贝那普利2mg/kg/天；
每天上午8：30~9：30灌胃给药1次，共6周。杀鼠前一晚，动物禁食不禁水。
血流动力学检测
给药6周后，每组取10只大鼠以3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，固定后分离右侧颈总动脉，将内径1mm的塑料管插入左心室，与RM-6000型多道生理记录仪连接，稳定20min后测量左心室舒张末压（LVEDP）。通过股动脉记录收缩压（SBP）及舒张压（DBP），并计算平均动脉压（MAP）。并同步记录心率（HR）及心电图。
标本采集及测定
1.腹主动脉采血2ml，静置分离血清，根据MDA、SOD及NO测定试剂盒说明书测定血清MDA、SOD及NO含量；
2.腹主动脉采血2ml，用EDTA·Na2抗凝3000r/min离心10min分离血浆，根据6-Keto-PGF1α及TXB2放免盒说明书测定6-Keto-PGF1α (代表PGI2) 及TXB2 (代表TXA2) 含量；
3.腹主动脉采血1ml用抗凝剂，3500r/min离心10min分离血浆，根据AngⅡ放免盒说明书测定AngⅡ含量；
4.腹主动脉采血1ml用EDTA·Na2·消炎痛抗凝，3500r/min离心10min分离血浆，根据ET放免盒说明书测定ET含量；
5.取200mg心脏用冰盐水制成10%的心肌组织匀浆，根据ET放免盒说明书测定ET含量；
6.取部分心脏，置12%甲醛溶液中固定，经石蜡包埋，切块，HE染色，用作组织切片观察。
心室重量的测定
取出心脏，沿冠状沟将左、右心房剪掉，用生理盐水洗净血液，滤纸洗干，称心室重量，并计算脏器系数。
统计学处理
实验数据采用均数±标准差（±s）的形式表示，数据分析采用t检验。
2. 结果
2.1人参皂苷Rb3对心室重构大鼠心肌病理改变的影响
各组大鼠心脏病理观察结果如下：①假手术组：心肌纤维排列规整，心肌细胞核呈长椭圆形，位于肌纤维中央。心肌细胞无萎缩或肥大，无嗜伊红浓染和坏死。间质无明显水肿和结缔组织增生，未见血管扩张和管壁明显增厚，说明未发生心室重构（见图1）；②模型组：心肌纤维排列紊乱，心肌间质明显水肿，间质内可见较多结缔组织增生及少量炎细胞浸润，心肌纤维增粗，说明发生了明显的心室重构（见图2）；③贝那普利组：心肌纤维排列较规整，心肌间质无明显水肿，间质内可见少量结缔组织增生及炎细胞浸润，心肌纤维增粗不明显，说明发生轻度心室重构（见图3）；④G-Rb3大剂量组：心肌纤维排列较整齐，心肌间质内可见很少量结缔组织增生及少量炎细胞浸润，心肌纤维无明显增粗，说明仅出现轻度的心室重构（见图4）；⑤G-Rb3中剂量组：心肌纤维排列较紊乱，心肌间质有轻度水肿，间质内可见少量结缔组织增生及少量炎细胞浸润，心肌纤维轻度增粗，说明出现轻度心室重构（见图5）；⑥G-Rb3小剂量组：心肌纤维排列紊乱，心肌间质有轻度水肿，间质内可见结缔组织增生及炎细胞浸润，心肌纤维增粗，说明出现较明显的心室重构（见图6）。
人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血流动力学的影响
与假手术组比较，模型组大鼠SBP、DBP、MAP及LVDEP均明显升高（P<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药物贝那普利组大鼠SBP、DBP、MAP及LVDEP均明显降低（P<0.05），见表1。
表1 人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血流动力学的影响（
±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01
2.2人参皂苷Rb3对心室重构大鼠体重、心室重量以及脏器系数的影响
与假手术组比较，模型组大鼠体重明显降低，心室重量及脏器系数均明显升高（P<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药物贝那普利组大鼠心室重量及脏器系数均明显降低（P<0.05或P<0.01），见表2。
表2 人参皂苷Rb3对心室重构大鼠脏器系数的影响（
±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01
2.3人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血浆PGI2及 TXA2的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血浆TXA2水平明显升高（p<0.01），PGI2水平及PGI2/TXA2比值明显降低（p<0.05~P<0.001）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药物贝那普利组大鼠血浆TXA2水平明显降低，PGI2水平及PGI2/TXA2比值明显升高（P<0.05或P<0.01），见表3。
表3 人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血浆PGI2及TXA2的影响（
±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
2.4人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血浆及心肌ET含量的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血浆及心肌ET含量均明显升高（p<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药物贝那普利组大鼠血浆及心肌ET含量均明显降低（P<0.05或P<0.01），见表4。图10。
表4 人参皂苷Rb3对心室重构大鼠ET含量的影响（±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01
2.5人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血浆AngⅡ及血清NO含量的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血浆AngⅡ含量明显升高，血清NO含量明显降低（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组大鼠血浆AngⅡ含量明显降低（P<0.05或P<0.01），NO含量无明显变化，见表5。
表5人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血浆AngⅡ及血清NO含量的影响
（
±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01
2.6人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血清MDA及SOD的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血清MDA含量明显升高，SOD活性明显降低（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药物贝那普利组大鼠血清MDA含量明显降低，SOD活性明显升高（P<0.05或P<0.01），见表6。
（
±s，n=10）
与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01
试验例2
人参皂苷Rb3对大鼠结扎左冠状动脉前降支致心肌梗死后心室重构的影响
1. 材料与方法
1.1实验动物
Wistar大鼠，雌雄各半，体重180～200g，由吉林大学实验动物中心供给，动物合格证号：SCXK-（吉）2007-0003。
主要试剂与药品
| 人参皂苷Rb3（G-Rb3） | 吉林大学化学院陈燕萍教授提供 |
| 贝那普利片 | 北京诺华制药有限公司 |
| 水合氯醛 | 上海化学试剂公司 |
| 丙二醛（MDA）测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒 | 南京建成生物工程研究所 |
| 血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
| 醛固酮（ALD）放免药盒 | 解放军总医院科技开发中心放免所 |
| 甲醛 | 沈阳市联邦试剂厂 |
| 戊二醛 | 山东利尔康消毒科技有限公司 |
| Ⅰ型胶原 | 福州迈新生物技术开发有限公司 |
| Ⅲ型胶原 | 福州迈新生物技术开发有限公司 |
| DAB显色试剂盒 | 福州迈新生物技术开发有限公司 |
1.3实验仪器
1.4心肌梗死后心室重构模型的建立
采用结扎大鼠左冠状动脉前降支[2] 4周建立心肌梗死后心室重构模型。用乙醚将大鼠麻醉后仰位固定在手术操作台上，至胸骨左侧3～4肋间开胸，挤出心脏，寻找位于肺动脉圆锥和左心房之间的冠状动脉左前下降支，用0号丝线距离其根部2～3mm处穿出，假手术组仅穿线不结扎，其余各组立即结扎后将心脏送回胸腔，挤出胸腔内血液和气体，关闭胸腔，开胸时间不得超过30 s。术后24 h，存活大鼠行心电图检查，ST段抬高证明冠脉结扎成功，继续饲养四周后建立心肌梗死后心室重构模型，通过大鼠4周后的心脏形态学及血流动力学等指标可进一步证明心室重构模型是否建立成功。
动物分组及给药
取术后存活大鼠120只随机分为6组，每组20只。各组给药如下：
1. 假手术组： 给蒸馏水10ml/kg/天；
2. 模型组： 给蒸馏水10ml/kg/天；
3. 人参皂苷Rb3小剂量组：给G-Rb3 20mg/kg/天；
4. 人参皂苷Rb3中剂量组：给G-Rb3 40mg/kg/天；
5. 人参皂苷Rb3大剂量组：给G-Rb3 80mg/kg/天；
6. 阳性药物组：给卡托普利100mg/kg/天；
每天上午8：30~9：30灌胃给药1次，共4周。杀鼠前一晚，动物禁食不禁水。
血流动力学指标的测定
将大鼠以10%水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉后，固定、分离右侧颈总动脉，将内径为1mm的塑料插管插入左心室，并与RM-6000型多道生理记录仪连接，稳定10min 后测量左室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压最大上升和下降速率（±dp/dtmax）；分离左侧颈总动脉，插管测量动脉收缩压（SBP）及舒张压（DBP），计算平均动脉压（MAP），并同时记录心率（HR）。
心室脏器系数的测定
血流动力学指标测定后，剖取大鼠心脏，用氯化钠注射液清洗心腔内残余血液，剪去血管及脂肪等非心肌组织，用滤纸轻轻将心脏拭干，沿冠状沟切除心房，称量左心室绝对重量（LVAW），然后与体重（BW）相除，计算得出左心室相对重量（LVRW）即心室脏器系数。
心肌组织病理学检测
1. 光镜HE染色观察 血流动力学指标测定后，剖取大鼠心脏，用预冷PBS清洗心腔内残留血液，去除血管及脂肪等非心肌组织，横向切取厚度大约为2mm的心肌组织，浸入4%多聚甲醛中固定，然后脱水、浸蜡、石蜡包埋制备石蜡切片，再依次经过二甲苯脱蜡、降梯度酒精水化、苏木素及伊红染色、升梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片等操作，制备HE染色的心肌组织切片，于光学显微镜下观察心肌组织的病理改变。
2. 型胶原、
型胶原免疫组化染色 蜡块制作同上。将石蜡切片脱蜡至水，用3%甲醇-双氧水室温孵育10分钟。蒸馏水及缓冲液冲洗，经0.1m枸橼酸缓冲液微波抗原修复98℃20分钟后，冷却至室温用PBS缓冲液冲洗5分钟，滴加10%正常山羊血清以封闭游离的结合位点。滴加一抗，经缓冲液稀释后放置4℃冰箱过夜，用PBS缓冲液冲洗3次。滴加生物素标记二抗IgG工作液，37℃孵育30分钟。滴加辣根酶HRP标记链酶卵白素工作液（三抗）37℃孵育。DAB显色5分钟，以自来水终止显色。经常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。实验结果判定：阳性反应均呈棕黄色，结果用成都泰盟BI2000免疫组化分析系统进行分析。统计中不包括血管本身胶原的成分，每张切片随机选6个视野进行统计分析并求得平均光密度（OD）值，每只大鼠I型和III型胶原在同一参数下进行测量，并计算I型及III型胶原平均光密度的比值。
生化指标的测定
1. 腹主动脉采血，分离血清，按照试剂盒说明书测定血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；
2. 腹主动脉采血，加入相应的抗凝剂，分离血浆，用放射免疫测试盒测定血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）含量；
3. 取血后剖取大鼠心脏，留取心肌组织，按照试剂盒说明书的方法测定心肌组织AngⅡ及ALD含量。
统计学处理
实验数据采用均数±标准差（
±s）的形式表示，数据分析采用t检验。
2. 结果
2.1 对心室重构大鼠血流动力学指标的影响
与假手术组比较，模型组大鼠SBP、DBP、MAP、LVSP、±dp/dtmax均明显降低，HR、LVEDP则明显升高（P<0.01）。与模型组比较，G-Rb3中、大剂量组及阳性药卡托普利组大鼠SBP、DBP、MAP、LVSP、±dp/dtmax明显升高， HR、LVEDP明显降低（P<0.05或P<0.01），表明G-Rb3能明显改善心室重构大鼠左心收缩和舒张功能，见表1。
表1 G-Rb3对心室重构大鼠对心室重构大鼠血流动力学的影响(
±s,n=10)
与假手术组比较 △△ P <0.01；与模型组比较 *P <0.05，**P <0.01
2.2 对心室重构大鼠心室脏器系数的影响
与假手术组比较，模型组大鼠左心室绝对重量、心室脏器系数明显增加，（P<0.001），体重有下降趋势（P>0.05）；与模型组比较，G-Rb3 中、大剂量组及阳性药卡托普利组大鼠心室脏器系数明显降低（P<0.001），左心室绝对重量有下降趋势（P>0.05），见表2。
表2 G-Rb3对心室重构大鼠心室脏器系数的影响 (
±s, n=10 )
与假手术组比较 △△△ P <0.001；与模型组比较 **P <0.01，***P <0.001
2.3 对心室重构大鼠心肌组织病理学的影响
2.3.1 心肌组织HE染色光镜观察结果
镜下观察结果显示：假手术组心肌纤维排列整齐，心肌细胞无萎缩或肥大，间质无明显水肿、结缔组织增生，表明心肌为正常结构；心室重构模型组心肌纤维排列紊乱、增粗明显，心肌间质明显水肿，可见大量结缔组织增生及炎细胞的浸润，表明心室重构模型建立成功；G-Rb3大剂量组心肌纤维排列较整齐，增粗不明显，心肌间质轻度水肿，间质内可见很少量结缔组织及炎细胞浸润，G-Rb3小、中剂量组心肌纤维排列较整齐，增粗较明显，心肌间质水肿，间质内可见很少量结缔组织及炎细胞浸润，表明G-Rb3对心室重构具有明显抑制作用；卡托普利组心肌纤维排列较规整，增粗不明显，心肌间质水肿无明显，间质内偶见少量结缔组织增生及炎细胞的浸润，表明ACE抑制剂对心室重构具有明显抑制作用。各组大鼠心肌组织HE染色照片见图7。
2.3.2 心肌组织I、III型胶原免疫组化染色观察结果
（1）I、III型胶原免疫组化染色观察结果
假手术组：心肌细胞排列整齐呈浅黄灰色，细胞核大小、形态基本一致，染色质均匀，未见肥大、坏死、断裂等现象，细胞间质可见不连续黄褐色胶原纤维。心室重构模型组：部分区域心肌细胞肥大、断裂明显，细胞间质可见棕黄色胶原反复重叠排列，与假手术组比较，胶原纤维增生明显。G-Rb3大剂量组：心肌细胞肥大、断裂不明显，细胞间质胶原纤维稍增生，不如模型组增生明显。卡托普利组：心肌组织病理改变与G-Rb3组接近。各组大鼠心肌组织I、III型胶原免疫组化染色照片见图8、9。
（2）G-Rb3对
型胶原/型胶原光密度（OD）比值的影响
与假手术组比较，模型组大鼠
型胶原/
型胶原OD值升高（P<0.01）；与模型组比较，G-Rb3 中、大剂量组及阳性药卡托普利组大鼠
型胶原/
型胶原OD值明显降低（P<0.05或P<0.01），见表3。
表3 G-Rb3对心室重构大鼠
/
型胶原OD值的影响 (
±s, n=10 )
| 组 别 | 剂量 (mg·kg-1) | I/ III型胶原OD值 |
| 假手术组 | — | 1.44±0.08 |
| 模型组 | — | 1.85±0.19 △△ |
| G-Rb3 | 20 | 1.73±0.15 |
| 40 | 1.63±0.13* | |
| 80 | 1.50±0.09** | |
| 卡托普利 | 100 | 1.61±0.13* |
与假手术组比较 △△ P <0.01；与模型组比较 *P <0.05，**P <0.01
2.4对血清MDA含量、SOD及GSH-Px活性的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血清MDA含量明显增加，SOD及GSH-Px活性明显降低（P<0.001）；与模型组比较，G-Rb3 中、大剂量组及阳性药卡托普利组大鼠血清MDA含量明显减少，SOD及GSH-Px活性明显升高（P<0.05或P<0.01），见表4。
表4 G-Rb3对心室重构大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px的影响 (
±s, n=10 )
与假手术组比较 △△△ P <0.001；与模型组比较 *P <0.05，**P <0.01
2.5 对血浆及心肌组织AngⅡ及ALD含量的影响
与假手术组比较，模型组大鼠血浆及心肌组织AngⅡ及ALD含量均明显增加（P<0.01或P<0.001）；与模型组比较，G-Rb3 中、大剂量组及阳性药卡托普利组大鼠血浆及心肌组织AngⅡ及ALD含量均明显降低（P<0.05或P<0.01），见表5。
表5 G-Rb3对心室重构大鼠AngⅡ及ALD含量的影响 (
±s, n=10 )
与假手术组比较 △△ P <0.01，△△△ P <0.001；与模型组比较 *P <0.05，**P <0.01
本发明的积极效果在于：提供了人参皂苷Rb3在防治心肌重构中的医疗作用，可以制备成制备防治心肌重构药物。
附图说明
图1心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），假手术组；
图2心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），模型组；
图3心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），贝那普利组；
图4心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），G-Rb3大剂量组；
图5心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），G-Rb3中剂量组；
图6心肌细胞组织病理切片（HE染色 10×40），G-Rb3中剂量组；
图7各组大鼠心肌组织HE染色照片（×200）；
图8各组大鼠心肌组织I型胶原免疫组化染色照片（×200）；
图9各组大鼠心肌组织III型胶原免疫组化染色照片（×200）；
图10人参皂苷Rb3对心室重构大鼠血清MDA及SOD的影响。
具体实施方式
实施例1
取西洋参茎叶总皂苷20溶于200mL95%乙醇中，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到西洋参茎叶二醇组皂苷产物8g。
取上述产物8g，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，得人参皂苷-Rb3。
实施例2
取人参根总皂苷20溶于200mL95%乙醇中，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到人参二醇组皂苷产物5g。
取上述产物5g，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，得本发明化合物。
实施例3
取三七花总皂苷20溶于200mL95%乙醇中，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到三七二醇组皂苷产物7g。
取上述产物7g，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，得本发明化合物。
实施例4
取西洋参茎叶总皂苷20溶于250mL95%乙醇中，再加入250mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入200mL0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到西洋参茎叶二醇组皂苷产物7.6g。
取上述产物7.6g，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，得本发明化合物。
实施例5
按照医药工业中已知的方法，将人参皂苷Rb3与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂相混合，可以制成各种不同剂型的防治心肌重构药物组合物；包括口服药剂或注射药剂，所述口服药剂可为滴丸、软胶囊或冻干粉针等，所述注射药剂可为注射用乳剂等，注射用乳剂可为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂等。
Claims (3)
1. 一种人参皂苷-Rb3，其化合物结构式如下：
化学名称：20(s)-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-20-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]苷；分 子 式：C53H90O22·4H2O；分 子 量：1078。
2. 权利要求1所述参皂苷-Rb3的制备工艺，包括以下步骤：取1份的含有人参皂苷Rb3总皂苷溶于10~50份的醇中，再加入等体积的0.03~0.8%NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣水溶解，再加入0.03% NaOH乙醇溶液，不断搅拌，产生沉淀，过滤，残渣用盐酸调节pH值至中性，过树脂除盐，蒸干，得到人参茎叶二醇组皂苷；取上述得到的产物，用硅胶柱层析，用正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:2，上层）洗脱，薄层检测，以人参皂苷Rb3为对照，接收相同流分，回收溶剂，蒸干，即得。
3. 人参皂苷-Rb3在制备防治心肌重构药物中的用途。
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|---|---|---|---|---|
| CN104119416A (zh) * | 2014-07-08 | 2014-10-29 | 浙江维康药业有限公司 | 一种人参皂苷Rb3化合物及含有该化合物的七叶神安分散片和七叶神安片 |
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| CN101054400A (zh) * | 2007-05-28 | 2007-10-17 | 尹建元 | 一种新人参二醇及其衍生物、其制备方法及其医药用途 |
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