CN102762587B - 新的调节存活蛋白的抗老化肽及包括其的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及调节存活蛋白的通式（I）R1–(AA)n–X1–X2–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–X3–(AA)p–R2的肽化合物。而且，本发明涉及化妆品或药物组合物，其包括在生理学可接受的介质中的至少一种通式（I）的肽，以及涉及其预防和/或治疗表皮老化迹象和光老化和保护皮肤免受外部侵害的用途。另外，本发明的组合物可以用于预防和/或限制毛发脱落和/或刺激毛发生长。最后，本发明涉及用于预防和/或控制表皮老化迹象和光老化的化妆品治疗方法。

Description

新的调节存活蛋白的抗老化肽及包括其的组合物
本发明涉及化妆品和药物领域。本发明涉及通式（I）R1–(AA)n–X1–X2–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–X3–(AA)p–R2的肽化合物，其是存活蛋白的调节物，还涉及它们在化妆品和/或药物中的应用以（i）预防和/或校正皮肤老化的迹象和皮肤及角质附件中光老化，（ii）预防和/或限制脱发和/或刺激毛发生长，及（iii）保护皮肤抗外部侵害，包括UV辐射导致的那些。
老化相应于一系列生理和心理过程，在一定年龄后它们改变机体的结构和功能。老化有两种类型，即一方面是内在老化，另一方面是外在老化。内在老化是由于遗传因素、生化变化导致，所述生化变化在疲劳、压力、激素变化如妊娠期间等的条件下发生。另一方面，外在老化是由在整个生命期间机体所处的环境因素导致，所述环境因素如污染、太阳、疾病等。这是一种缓慢逐渐的过程，通过各种方式影响机体的每一个细胞并且以不同方式表现。例如，在皮肤情况中，其表观由各种类型的内部或外部侵害修饰，可以观察到皱纹和细纹的出现、色素沉着斑点和色素减少斑点、皮肤干燥或甚至脱水、皮肤变薄、弹性组织变性（élastose）、瑕疵（desimperfections）、老年斑等等。在毛发情况中，老化主要表现在头发变白（变灰），但是也表现在头发密度降低，头发稀疏，其可以导致甚至更广泛的毛发脱落，已知为脱发。
在哺乳动物特别是人类中，皮肤和眼睛是持续更新的器官。例如，皮肤表面脱落现象必须被表皮更新补偿，其由基底层中的角质形成细胞保证，所述角质形成细胞主动分裂和分化成角质层细胞。毛发更新周期也可以分为3个明显阶段，称作生长期、退化期和毛发生长终期。在毛发生长终期中形成新的毛球并起始新的毛发生长周期。这些更新活性以及损伤情况中如由UV照射或创伤导致的损伤情况中的皮肤或指甲修复活性依赖于体干细胞的存在，在皮肤中称为表皮成体干细胞，在毛发情况中称为毛囊成体干细胞。这些细胞是有些独特的，它们具有显著的自我更新和分化能力。它们已经通过一系列分子标记如β1-整联蛋白、α6-整联蛋白、角蛋白K15、角蛋白K19等在基底层中鉴别。细胞增殖和分化是依赖于细胞周期的过程。控制正确细胞周期功能的机制基本上基于一系列互补蛋白结构，如“染色体乘客复合体（chromosomal passenger complex）”(CPC)。CPC在有丝分裂进程和胞质分裂阶段起关键作用。CPC由4个蛋白质组成，它们是：INCENP(着丝粒内蛋白)、Borealin、Aurora B激酶和存活蛋白。存活蛋白以细胞周期依赖方式在点G2/M表达。已经示出存活蛋白或者Aurora B激酶由siRNA的失活诱导主要有丝分裂缺陷(Lens SM et al.,EMBO.J.2003,22(12):2934-47)。其它实验证实存活蛋白、其Crm-1载体（或核输出蛋白1)及其CPC配偶体在控制有丝分裂期间的关键作用。最后，其它研究允许存活蛋白被分类为是属于凋亡抑制剂蛋白家族的分子，也称为“凋亡蛋白抑制剂”（IAP）。事实上，存活蛋白看起来通过抑制caspase-9的信号传导途径而保护细胞免于凋亡。但是，看起来存活蛋白的有丝分裂活性优于其抗凋亡活性。已经确认与老年对象表皮中存在的相比，位于年轻对象表皮基底层中的成体干细胞中存在更高水平的存活蛋白。另外，已经证明胎儿组织含有大量存活蛋白，而其在分化的组织中基本上不存在(Adida et al.,Am J Pathol.1998,152:43-49)。这就是怎么建立了所述干细胞中存活蛋白的量与皮肤老化之间的关系(Marconi et al.,Stem Cells 2007;25:149-55)。正是基于这些发现，申请人令人惊奇地证实下述通式（I）的肽化合物：R1–(AA)n–X1–X2–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–X3–(AA)p–R2是存活蛋白的非常好的调节物及因此是CPC复合体的非常好的调节物并且对于治疗和/或预防皮肤老化迹象以及保护皮肤抗外部侵害如UV照射以及脱发具有显著作用。
目前尚没有具有这种类型作用的化合物被建议用于治疗老化或脱发。一些类型的肽化合物已被建议通过调节存活蛋白表达而作为抗肿瘤治疗（专利EP1913947、EP1931376）。使用存活蛋白抑制剂肽的其它治疗已经被公开，例如抑制毛发生长（专利EP1841401），或者辅助鉴别肿瘤（专利EP2119726）等。专利申请FR 2 932 086的一部分描述了选自ColeusForskolii、Lepechinia caulescens、Limnophila conferta、Daniellia oliveri、NostocCommune、Scenedesmus dimorphus、Curcuma longa或Crocus sativus的提取物的化妆品制剂作为存活蛋白促进剂以预防或延迟皮肤老化迹象的出现或者用于促进毛发生长。但是，尚没有使用调节存活蛋白（及CPC蛋白）的化合物的治疗被建议用于（i）对抗皮肤老化迹象，（ii）保护皮肤抗外部侵害，包括UV照射导致的那些，及（iii）限制脱发或者激活毛发生长。然而，在这一领域真正需要创新治疗。因此，本发明描述的肽化合物可以提供新类型的有效治疗以对抗老化，其是通过直接作用于表皮成体干细胞的直接环境（environnement proche）以保护它们并且使它们最好地保证它们在更新和保护皮肤细胞过程中的作用。肽化合物具有保护表皮成体干细胞的环境及调节这些细胞中存活蛋白的量的优点，但是不增加它们的克隆发生。通常，本发明的肽通过保护干细胞的紧密环境及限制它们可能的耗竭而有助于保持干细胞的“干细胞势（Stemness Potential）”。通过对表皮和毛囊成体干细胞的保护作用，本发明的化合物也可以预防脱发和刺激毛发生长。
因此，本发明的第一个目的是提供下述通式（I）的肽化合物：
R1–(AA)n–X1–X2–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–X3–(AA)p–R2
其中
X1是亮氨酸、丙氨酸或者无氨基酸，
X2是赖氨酸、脯氨酸或者无氨基酸，
X3是亮氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸或者无氨酸，
AA是任意氨基酸，且n和p是0到2之间的整数，
R1是N-末端氨基酸伯胺官能团，其是游离的或者是用具有饱和或非饱和的C1-C30烃基链的酰基类型基团取代的，酰基类型基团可以选自乙酰基或者芳香基，其中后者可以选自苯甲酰基、甲苯磺酰基或者苄氧羰基类型，
R2是C-末端氨基酸羧基官能团的羟基，其是未取代的或者是用可以选自C1-C30烃基链或者NH2、NHY或者NYY基团的基团取代的，其中Y是C1-C4烃基链，
所述通式（I）的序列由5-12个氨基酸残基组成，且其中所述通式（I）的序列可以包括AA、X1、X2或X3氨基酸的衍生物或AA、X1、X2或X3氨基酸用其它化学等价氨基酸的取代。
本发明的第二个目的是提供化妆品组合物，其包含所述通式（I）的肽化合物作为活性成分。
另外，本发明的第三个目的是包含所述通式（I）的肽化合物的化妆品组合物的用途，用于（i）预防和/或治疗皮肤老化迹象和光老化及促进组织再生，（ii）保护皮肤抗外部侵害，特别是UV照射所致的那些，（iii）恢复存活蛋白最佳水平及保证“染色体乘客复合体”的更好发挥功能，及（iv）预防和/或限制脱发和/或刺激毛发生长。
最后，本发明的第四个目的是提供一种方法，使用包含所述通式（I）的肽化合物的组合物对待治疗的皮肤或角质附件进行化妆品治疗。
本发明的第一个目的涉及通式（I）的肽化合物：
R1–(AA)n–X1–X2–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–X3–(AA)p–R2    (I)
其中
X1是亮氨酸、丙氨酸或者无氨基酸，
X2是赖氨酸、脯氨酸或者无氨基酸，
X3是亮氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸或者无氨酸，
AA是任意氨基酸，且n和p是0到2之间的整数，
R1是N-末端氨基酸伯胺官能团，其是游离的或者是用具有饱和或不饱和的C1-C30烃基链的酰基类型基团取代的，所述酰基类型基团可以选自乙酰基或者芳香基，其中后者可以选自苯甲酰基、甲苯磺酰基或者苄氧羰基类型，
R2是C-末端氨基酸羧基官能团的羟基，其是未取代的或者是用可以选自C1-C30烃基链或者NH2、NHY或者NYY基团的基团取代，其中Y是C1-C4烃基链，
所述通式（I）的序列由5-12个氨基酸残基组成，且其中所述通式（I）的序列可以包括AA、X1、X2或X3氨基酸的衍生物或者AA、X1、X2或X3氨基酸用其它化学等价氨基酸的取代。
术语“肽化合物”或“肽”是指由肽键或者修饰的肽键连接在一起的两个或更多个氨基酸的链。
“肽化合物”或“肽”是指如上所述的本发明的天然发生的或者合成的肽，或者至少是其通过蛋白酶解或者合成获得的片段之一，或者也是其序列完全或者部分由上述肽序列组成的任何天然发生的或合成的肽。
组成本发明肽化合物的氨基酸可以呈左旋构型，即L-构型，和/或可以呈右旋构型，即D-构型。本发明的肽因此可以是L-、D-或者DL-形式。
为了改善对降解的抗性，可能需要使用被保护形式的本发明的肽。保护形式显然必须是生物学相容形式，并且应该与化妆品和药物领域应用相容。优选地，为保护N-末端氨基酸伯胺官能团，使用由具有C1-C30饱和或不饱和烃基链取代的酰基类型的基团R1，其可以选自乙酰基团或者芳香基团。优选地，为保护C-末端氨基酸羧基官能团，用C1-C30烃基链类型或者NH2、NHY或NYY基团取代基团R2，其中Y是C1-C4烃基链。
本发明的肽可以在N-末端、C-末端或者这两个末端被保护。
在第一个优选的实施方案中，在式（I）中，
X1是亮氨酸或者无氨基酸，
X2是赖氨酸或者无氨基酸，
X3是酪氨酸或者无氨酸，
在AA中，整数n和p等于0，
R1是N-末端氨基酸伯胺官能团，其是游离的或者是用具有饱和或不饱和的C1-C30烃基链的酰基类型基团取代，所述酰基类型基团可以选自乙酰基或者芳香基，其中后者可以选自苯甲酰基、甲苯磺酰基或者苄氧羰基类型，
R2是C-末端氨基酸羧基官能团的羟基，其是游离的或者是用可以选自C1-C30烃基链或者NH2、NHY或者NYY基团的基团取代，其中Y是C1-C4烃基链。
在第二个优选的实施方案中，所述肽化合物相应于下式之一：
(SEQ ID No 1)Ile–Leu–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–Gly–NH2
(SEQ ID No 2)Arg–Glu–Met–Asn–Trp–NH2
(SEQ ID No 3)Asp–Ala–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–Asp–Thr
(SEQ ID No 4)Leu–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–Tyr–NH2
(SEQ ID No 5)Arg–Glu–Met–Asn–Trp-Phe–Met–Val
(SEQ ID No 6)Leu–Lys-Arg–Glu–Met–Asn–Trp–Tyr–NH2。
本发明还涉及这些序列的同源形式。本发明“同源”是指与选自序列SEQ ID No 1至SEQ ID No 6的所述肽序列至少50%、或者优选至少80%及更优选至少90%相同的任何肽序列。“至少X%相同的肽序列”是指经过两个序列的最佳对比后获得的进行比较的两个序列的氨基酸残基之间的百分比或相似性。最佳对比是用局部同源性算法如得自NCBI网站的BLAST P计算机软件中使用的那些算法获得的。
术语“同源”也可以指肽，其由于化学等价氨基酸的取代即由于由具有相同特征的另一残基取代一个残基而与序列SEQ ID No 1至SEQ ID No 6的肽序列不同。传统的取代因此在Ala、Val、Leu和Ile之间进行；在Ser和Thr之间进行；在酸性残基Asp和Glu之间进行；在Asn和Gln之间进行；以及在碱性残基Lys和Arg之间进行或在芳香残基Phe和Tyr之间进行。
本发明的通式（I）的肽可以通过传统化学合成（固相或者液体均质相中）或者通过酶合成(Kullman et al.,J.Biol.Chem.1980,225,8234)从其组成氨基酸或衍生物获得。
本发明的肽可以是天然发生的或者合成的。优选地，根据本发明，肽通过化学合成获得。
最后，活性成分可以是单个肽、肽混合物或者肽衍生物和/或由氨基酸衍生物组成。
本发明的肽化合物可以用作药物。
根据本发明的一个有利的实施方案，本发明的肽化合物溶解在一或多种本领域技术人员常规使用的生理学适合的溶剂中，如水、乙醇、丙二醇、丁二醇、双丙二醇（dipropylène glycol）、乙氧基二甘醇或丙氧基二甘醇（diglycols éthoxylés or propoxylés）、环状多元醇（polyols cycliques）或者这些溶剂的任意混合物。
根据本发明另一个有利的实施方案，本发明的肽化合物溶解在化妆品或药物载体如脂质体中，或者吸附到粉末状有机聚合物、矿物支持物如滑石粉和膨润土上，更通常溶解于或固定于任何生理学合适载体。
本发明肽化合物特征在于其允许存活蛋白的量和/或CPC活性被调节。
“允许存活蛋白的量被调节”的肽化合物是指能够通过增加或降低CPC和/或存活蛋白的合成（经直接或间接调节基因表达）或者通过其它生物学过程如RNA信使转录物的稳定化或不稳定化而增加或降低CPC复合体和/或存活蛋白的活性的任何肽或生物学活性衍生物。
本发明的第二个目的涉及包含所述通式(I)的肽化合物作为活性成分的化妆品组合物。
优选地，本发明的组合物呈适于局部应用的形式，其包含化妆品可接受的介质。“化妆品可接受的”是指适于与皮肤或人类角质附件接触、无任何毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等风险的介质。用于应用于皮肤的组合物可以是乳霜（crème）、水包油或油包水乳液或复乳（émulsionmultiple）、溶液、悬液、微乳液、水性凝胶或无水凝胶、精华素（sérum）形式，或者也可以是小泡分散液、贴（patch）、喷雾、软膏、发膏、乳液、胶体、乳（lait）、化妆水（lotion）、口红，或者也可以是粉末，所有均适用于应用于皮肤、嘴唇和/或角质附件。
优选地，所述肽化合物以在大约0.0005和500ppm之间的浓度、优选大约0.01和5ppm之间的浓度存在于组合物中。
更优选地，本发明的组合物进一步含有至少一种其它活性成分，其促进所述肽化合物的作用。例子包括但不限于下列类别成分：其它活性肽物质、植物提取物、愈合、抗老化、抗皱、舒缓（apaisants）、自由基清除剂和抗UV物质，刺激真皮大分子合成或能量代谢的物质、水合、抗细菌、抗真菌、抗炎物质、麻醉剂、调节皮肤分化、色素沉积或色素脱失的物质，刺激指甲或毛发生长的物质等等。优选地，使用具有抗皱活性的物质如自由基清除剂或抗氧化剂或者刺激真皮大分子合成物质或者刺激能量代谢的物质。特别地，活性成分选自维生素、植物甾醇、黄酮类化合物、DHEA和/或其前体或者其化学或生物学衍生物、金属蛋白酶抑制剂或者类视黄醇。
在一个更特别的实施方案中，本发明的组合物除了通式（I）的肽化合物之外还包含，
-一（或多个）细胞色素c促进剂化合物；和/或
-一（或多个）水通道蛋白促进剂化合物；和/或；
-一（或多个）sirtuine促进剂化合物；和/或
-一（或多个）刺激细胞粘附的化合物；和/或
-一（或多个）增加胶原型基质蛋白、层粘连蛋白等产生的化合物；
-一（或多个）调节蛋白酶体活性的化合物；
-一（或多个）调节昼夜节律的化合物；
-一（或多个）调节hsp蛋白的化合物；
-一（或多个）)增加细胞能量的化合物；
-一（或多个）调节色素沉积的化合物；
-一（或多个）诱导辅酶Q10的化合物；
-一（或多个）改善皮肤屏障功能的化合物；
-一（或多个）线粒体保护化合物。
上述化合物可以是天然发生的，如植物肽水解物或者是合成来源的，如肽化合物。
另外，添加剂如溶剂、稀释剂、染料、防晒剂、仿晒剂（agentsauto-bronzants）、颜料、填充剂、防腐剂、气味吸收剂、增稠剂、乳化剂、湿润剂、软化剂、香料、抗氧化剂、成膜剂、螯合剂、掩蔽剂（séquestrants）、调节剂（conditionnants）等可以加入组合物中。
在所有情况中，本领域技术人员会保证选择这些佐剂及其比例以不损害本发明组合物的有利性质。例如，这些佐剂可以以组合物总重量的0.01-20%的量存在。当本发明的组合物是乳液时，脂肪相可以占组合物总重量的5-80%（重量）并且优选地占5-50%（重量）。组合物中使用的乳化剂和辅助乳化剂选自本领域常用的那些。这些可以例如组合物总重量的0.3-30%（重量）的量使用。
本发明的第三个目的涉及包含本发明的肽化合物的组合物的应用，用于恢复皮肤、毛发和角质附件的细胞中存活蛋白的最佳水平，以及保证“染色体乘客复合体”更好发挥功能。“恢复存活蛋白的最佳水平”是指本发明化合物增加或降低皮肤细胞特别是表皮和毛囊成体干细胞中存在的存活蛋白的量的能力，从而后者可以最佳控制它们的有丝分裂，因此最佳满足表皮细胞更新的需求。
本发明的另一个目的涉及包含所述肽化合物和化妆品可接受的介质的化妆品组合物的应用，用于预防和/或治疗皮肤老化迹象和光老化及促进组织再生。“皮肤老化迹象”包括但不限于由皮肤老化导致的所有明显表现。特别地，这表示皱纹、深粗皱纹、细纹、裂痕（crevasses）、皮肤和皮下组织的下垂皮肤弹性丧失、呆滞（sluggishness）、紧致性和色调丧失（la perte de fermetéet de tonicité）以及真皮萎缩。另外，“皮肤老化迹象”还指毛孔增大、瑕疵、褪色（décoloration）、老年斑、角化病、胶原丧失和真皮及表皮中的其它变化，也指皮肤、毛发和指甲由于老化所致的任何外观变化，例如角质层表面粗糙，也指不系统性表现为改变的外观的皮肤的任何内部改变，例如真皮变薄。“光老化”是指由长期和累积暴露于太阳导致的皮肤过早老化。
“组织再生”是指从一或多个细胞的组织重建。组织再生过程特别涉及伤口和愈合。本发明的肽化合物可以促进这种再生过程，特别是通过保护表皮和毛囊成体干细胞的环境而进行。体外进行的测试显示形成特异于这种干细胞的紧密环境的蛋白质表达增加。表达被增加的蛋白质是β1-整联蛋白、α6-整联蛋白、角蛋白K15以及角蛋白K19，后者是高度特异于毛球中成体干细胞的角蛋白。
本发明的另一目的涉及本发明的组合物保护皮肤抗外部侵害特别是UV照射所致那些侵害的用途。“外部侵害”是指能由环境导致的侵害。例子包括如污染、UV照射或者也包括刺激性化学物如表面活性剂、防腐剂或香料，机械侵害如磨损、刮或脱毛。气氛的干燥也是表皮侵害的主要因素。所有这些现象导致基底层厚度降低。因为后者变薄并含有较少的表皮成体干细胞，皮肤再生以更不合适方式发生，老化加速。体外进行的测试显示应用包含本发明肽化合物的组合物使得由于UV照射组成基底层的细胞所致的侵害的影响受到限制，原因是这种化合物的保护作用。
在一个特别优选的实施方案中，本发明涉及包含所述肽化合物的组合物预防和/或限制脱发和/或刺激毛发生长的用途。在皮肤和毛囊活检样品上进行的测试显示本发明的活性成分对毛囊有保护作用，特别是当暴露于UVA和UVB照射时。本发明的化合物因此对于毛囊细胞产生了抗外部侵害特别是抗UV照射的保护作用。
最后，本发明的最后一个目的涉及化妆品治疗方法，特征在于包含有效量的本发明肽化合物的组合物被局部应用于待治疗的皮肤或角质附件，以预防和/或治疗皮肤老化迹象和光老化及促进组织再生。
下述实施例描述和证实了肽化合物的功效如本发明描述的那些，但是不应被理解为限制本发明。
图1是显示在富含表皮成体干细胞的细胞级分上进行的comets测试结果的柱形图。
实施例1：细胞级分的制备和存活蛋白的定量
为研究CPC蛋白质在各种类型应激下维持和保护表皮成体干细胞的作用，制备若干人类表皮原代细胞级分。分级分离基于细胞对胶原IV的粘附时间：小于20分钟相应于快速粘附（级分RA），小于5小时相应于慢粘附No 1（级分SA1），小于16小时相应于慢粘附No 2（级分SA2），最后无粘附角质形成细胞（级分NA）。细胞级分RA含有最快粘附及因此分化更少的细胞，结果是RA是富含表皮成体干细胞的级分。相反，级分SA1、SA2和NA分别是含有越来越少干细胞的级分。之后，用Western印迹鉴定存活蛋白水平。
结果：
这个鉴定之后，可见存活蛋白在RA细胞中过表达，表达水平在SA1、SA2细胞中逐渐降低直至在NA细胞中数值接近为0。
实施例2：肽SEQ ID No 2对细胞级分RA和SA1中存活蛋白表达的促进作用的证实
肽SEQ ID No 2调节作用的研究通过在培养的细胞级分RA和SA1上经Western印迹评估存活蛋白的表达而进行。Western印迹技术是常规的半定量方法，用于评估细胞中蛋白质的比例。
方案
级分RA和SA1在直径100mm的盒子中于37℃、含有5%CO2的湿润气氛下生长48小时，含有或不含有稀释至3%（从10-4M溶液稀释）的化合物。漂洗细胞，然后用提取缓冲液(25mM Tris-HCl pH 7.6,150mM NaCl,1%NP-40,1%脱氧胆酸钠和0.1%SDS)在蛋白酶抑制剂组合(Halt蛋白酶抑制剂PIERCE)存在下从载体分离。如此提取的蛋白质以10,000rpm在4℃离心10分钟，之后用BCA蛋白质测定试剂盒（Pierce）测定。细胞裂解物与变性缓冲液混合，进行SDS-PAGE电泳。所用凝胶是4-12%Nupage(invitrogen)。蛋白质然后用Iblot转移仪器（Invitrogen）转移到膜上。膜用5%TBS-乳/0.1%Tween 20在室温饱和2小时，然后与稀释至1/1000th的抗存活蛋白第一抗体(Cell signaling #2808-rabbit)在4℃保温过夜，随后在TBS,0.1%Tween中洗涤3次，接着与稀释至1/5000th的偶联过氧化物酶的抗兔第二抗体(Immunotech)保温。用化学发光底物进行显色。用Chemiimager软件(AlphaInnotech Corporation USA)进行细胞中蛋白质的定量评估。蛋白质的量表示为与未接受处理的对照条件相比的光密度的百分比。
结果：
肽SEQ ID No 2使得非常富含表皮成体干细胞的那些级分（RA）以及较不富含表皮成体干细胞的那些级分（SA1）中存活蛋白表达增加。
实施例3：在细胞级分RA上的Comets测试
Comets测试是允许在细胞水平定量DNA损伤的测试。
为此，为了证实本发明的肽化合物的保护作用，将RA类型的细胞与浓度为1%的序列SEQ ID No 2的肽化合物培养24小时，然后用60mJ/cm2的UVB照射。对照条件为使用无肽活性成分存在。细胞然后通过胰蛋白酶化从它们的载体移除，然后在900rpm离心5分钟，之后浓缩和计数。
然后特定细胞计数（25000个细胞）掺入0.75%低熔点琼脂糖凝胶中，然后沉积在预先用1%琼脂糖包被的玻片上。玻片然后浸没在裂解缓冲液中4℃、1.5小时，然后在碱性溶液中4℃、20分钟。然后裂解细胞，变性DNA。玻片浸没在电泳溶液中，之后施加电场(20V–250mA)。如此变性的DNA在琼脂糖凝胶中在4℃迁移。在玻片上施加DNA荧光染料(2μg/ml碘化丙啶)使得在DNA被损伤情况中DNA以comets形式被观测到。
使用定量软件确定应用于每种被测条件的平均尾矩（Tail moment）。这个参数提供了DNA损伤水平的信息。
结果：
结果示于图1。当施加肽时尾矩降低44.7%，即细胞比施加UVB照射的对照条件遭受更少损伤。结果确实证实SEQ ID No 2的肽化合物对衍生自富含表皮成体干细胞的级分（RA）的细胞的保护作用。
实施例4：MITOSOX测试
Mitosox是由Invitrogen销售的反应物(molecular probes M36008)。其在UV和H2O2氧化应激期间使用。其使用显微成像测量细胞中线粒体产生的自由基（ROS）。更特别地，Mitosox特异于超氧阴离子，其是ROS的主要形式。
Mitosox应用于活细胞：其穿透细胞膜，并且在细胞内，其迅速并特异性地在线粒体内扩散。一旦在线粒体中，Mitosox被超氧阴离子氧化成提供红色荧光的化合物。这个反应物很容易被超氧阴离子氧化但是不容易被其它自由基氧化，也不被活性氮（NOS）氧化。
方案：
RA和总角质形成细胞（其中“总”表示完整细胞级分）每天用浓度为1%和3%的SEQ ID No 3的肽化合物处理3次，共48小时。
在第二步中，细胞被置于应激下，所述应激如下导致：
-暴露于5mM H2O2溶液30分钟；
-或者以100mJ/cm2进行UVB照射。
施加应激后，漂洗细胞，然后返回到合适培养基中，置于培养箱中，37℃、1小时。然后用Hanks培养基洗涤2次，施加Mitosox溶液5分钟，最后用相同培养基进行新的洗涤。细胞用甲醛固定10分钟，施加DAPI 5分钟，之后用PBS漂洗2次。结果用荧光显微镜读取。
结果：
使用荧光显微镜术，注意到在对照条件下，被UV照射和H2O2损伤的细胞数非常高。在这些条件下荧光确实非常强，表明自由基的高度产生。相反，当在暴露于应激之前将肽加入细胞时，注意到荧光细胞数极其低。这暗示肽保护细胞抗自由基的过量产生。
实施例5：肽化合物SEQ ID No 2对维持培养的并用角蛋白K19标记的毛囊的作用
毛囊培养和包涵（inclusions）：
用解剖刀和细钳从活检样品中取样毛囊，然后用William’s E培养基在抗生素(0.2%Primocin)、10μg/ml胰岛素、10ng/ml氢化可的松和2mmol/LL-谷氨酰胺存在下于24孔板中培养。
毛囊用或不用在Williams'培养基中的1%肽化合物SEQ ID No 2处理，然后保温24小时。然后施加UV照射(UVA：5J/cm，UVB 200mJ/cm2)，然后再培养毛囊24小时。在实验结束时，毛囊被掺入到OCT中并在-196℃(液氮)中冷冻。毛囊然后置于低温恒温器中以在-23℃制备6-μm切片。含有切片的玻片置于丙酮浴中10分钟（固定），然后漂洗。
角蛋白K19的免疫标记：
固定的切片用PBS漂洗一次5分钟，然后包裹在Pappen中。每个切片与5μl 5%-BSA保温30分钟。然后加入50μl稀释至1/50th的抗细胞角蛋白K19第一抗体(Progen，Mouse monoclonal)，在恒湿箱中搅拌保温1小时。用PBS漂洗30分钟后，加入50μl荧光标记的第二抗体，在恒湿箱中黑暗下搅拌放置1小时。玻片然后在PBS中漂洗，在Fluoromount G中封固玻片和盖玻片，用落射荧光显微镜进行观测。
结果：
UV照射毛囊导致在所述毛囊中角蛋白K19的荧光强度有-48%的降低（通过图像分析定量）。在照射前用肽化合物SEQ ID No 2处理的毛囊具有的角蛋白K19荧光值为+102.7%。这意味着本发明的肽化合物使得细胞的损伤表观特别是以角蛋白K19产生而言被防止和避免。
实施例6：组合物
1.防晒组合物
2.毛发生长精华素
将Natrosol 250HHR和EDTA二钠搅拌分散于水中。加热至50-60℃并搅拌直至达到均匀表观。加入CC-10并搅拌直至达到均匀表观。冷却至室温并依列表顺序加入成分并搅拌直至它们的每一个之间均获得均匀表观。

Claims (20)

1.下式的肽化合物，特征在于其相应于下式之一：
(SEQ ID No：2)Arg–Glu–Met–Asn–Trp–NH2
(SEQ ID No：3)Asp–Ala–Arg–Glu–Met–Asn–Trp–Asp–Thr。
2.权利要求1的肽化合物，特征在于其溶解在一或多种生理学合适的溶剂中。
3.权利要求2的肽化合物，特征在于所述溶剂选自以下组中：水、甘油、乙醇、丙二醇、丁二醇、双丙二醇、乙氧基二甘醇或丙氧基二甘醇、环状多元醇或者这些溶剂的任意混合物。
4.权利要求1-3之一的肽化合物，用作药物。
5.一种化妆品组合物，其包含权利要求1-3之一的所述肽化合物作为活性成分。
6.权利要求5的化妆品组合物，特征在于其呈适合局部应用的形式，包含化妆品可接受的介质。
7.权利要求5或6的组合物，特征在于所述肽化合物以0.0005和500ppm之间的浓度存在于组合物中。
8.权利要求7的组合物，特征在于所述肽化合物以0.01和5ppm之间的浓度存在于组合物中。
9.权利要求5-8之一的组合物，特征在于其进一步含有至少一种促进所述肽化合物作用的其它活性成分。
10.权利要求9的组合物，特征在于所述活性成分是具有抗皱活性的物质，或者是刺激真皮大分子合成的物质，或者是刺激能量代谢的物质。
11.权利要求10的组合物，特征在于所述具有抗皱活性的物质是自由基清除剂或抗氧化剂。
12.权利要求1-3之一的肽化合物和化妆品可接受介质在制备用于恢复皮肤、毛发、眉毛、睫毛和指甲中存活蛋白的最佳水平，以及保证“染色体乘客复合体”更好发挥功能的化妆品组合物中的应用。
13.权利要求12的应用，用于预防和/或治疗皮肤老化迹象和光老化以及促进组织再生。
14.权利要求13的应用，特征在于皮肤老化迹象是指皱纹、裂痕、皮肤和皮下组织下垂、皮肤弹性丧失、呆滞、紧致性和色调丧失以及真皮萎缩。
15.权利要求14的应用，特征在于所述皱纹包括深粗皱纹和细纹。
16.权利要求12的应用，用于保护皮肤抗外部侵害。
17.权利要求16的应用，特征在于所述外部侵害是由于UV照射所致的侵害。
18.权利要求12的应用，用于预防和/或限制脱发和/或刺激毛发生长。
19.权利要求12-18之一的应用，用于刺激眼眉生长。
20.有效量的权利要求1-3之一的肽化合物在制备用于化妆品治疗方法的组合物中的应用，特征在于在早晨和/或晚上将所述组合物局部施用于待治疗的皮肤、毛发、眉毛、睫毛或指甲上，以预防和/或治疗皮肤老化迹象和光老化，促进组织再生，预防和/或限制脱发，和/或促进毛发生长。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2955113B1 (fr) * 2010-01-14 2013-03-29 Isp Investments Inc Nouveaux peptides modulateurs de la survivine et compositions les comprenant
WO2016105365A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Avon Products, Inc. Peptides and their use in the treatment of skin
CN117088944B (zh) * 2023-10-20 2023-12-19 深圳市维琪科技股份有限公司 一种五肽及其组合物和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001073014A1 (en) * 2000-03-24 2001-10-04 Merck Patent Gmbh Human survivin interacting protein 1 (sip-1)
WO2002002622A2 (en) * 2000-06-29 2002-01-10 The Salk Institute For Biological Studies Crystal structure of survivin
WO2007039192A2 (en) * 2005-09-27 2007-04-12 Merck Patent Gmbh Compositions and methods for treating tumors presenting survivin antigens

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1913947E (pt) 2004-04-22 2012-01-19 Lilly Co Eli Terapia combinada para o tratamento de cancro
MX2007007624A (es) 2004-12-22 2007-08-03 Gillette Co Reduccion del crecimiento del pelo con inhibidores de survivina.
HUE024541T2 (hu) 2008-05-14 2016-01-28 Immatics Biotechnologies Gmbh Szurvivinbõl és neurocanból származó új és hatásos II-es osztályú MHC peptidek
FR2932086A1 (fr) 2008-06-06 2009-12-11 Lvmh Rech Methode de soin cosmetique anti-age par stimulation de l'expression de la survivine
CH706016A2 (de) * 2011-12-30 2013-07-15 Labo Cosprophar Ag Auf Stammzellen der Epidermis und Dermis und auf deren Mikro-Umgebung wirkende kosmetische Zusammensetzung.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001073014A1 (en) * 2000-03-24 2001-10-04 Merck Patent Gmbh Human survivin interacting protein 1 (sip-1)
WO2002002622A2 (en) * 2000-06-29 2002-01-10 The Salk Institute For Biological Studies Crystal structure of survivin
WO2007039192A2 (en) * 2005-09-27 2007-04-12 Merck Patent Gmbh Compositions and methods for treating tumors presenting survivin antigens
CN101267833A (zh) * 2005-09-27 2008-09-17 默克专利有限公司 用于治疗呈现存活蛋白抗原的肿瘤的组合物和方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
INCENP-aurora B interactions modulate kinase activity and chromosome passenger complex localization;Xu Z.等;《J Cell Biol》;20100222;第188卷(第4期);全文 *
Marconi A.等.Survivin identifies keratinocyte stem cells and is downregulated by anti-beta1 integrin during anoikis.《Stem Cells》.2006,第25卷(第1期),第149－155页.
Survivin identifies keratinocyte stem cells and is downregulated by anti-beta1 integrin during anoikis;Marconi A.等;《Stem Cells》;20060928;第25卷(第1期);全文 *
Xu Z.等.INCENP-aurora B interactions modulate kinase activity and chromosome passenger complex localization.《J Cell Biol》.2010,第188卷(第4期),第611页.

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