CN102757925B - 一株海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ及其产生的多糖 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株海洋细菌Aerococcus？urinaeequi？HZ，该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC？NO：M？2011455。本发明还公开了一种多糖，是由培养海洋细菌Aerococcus？urinaeequi？HZ所得到的。经实验证明，该多糖对重金属离子（尤其是Pb²⁺）具有较高的清除率，对自由基也有较好的清楚效率，抗氧化性能优良。该多糖对浑浊污水也有较好的絮凝能力。可见，在污水处理方面，本发明的菌株、多糖有着得天独厚的优势，比如制成添加剂等，相信在不久的将来，本发明的菌株、多糖在污水处理领域将占据一席之地。

Description

一株海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ及其产生的多糖

技术领域

本发明涉及一株海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ及其产生的多糖，以及其应用。

背景技术

随着工农业生产的发展和人们生活水平的提高，污水的排放量迅速增加，处理污水成为当前社会的难题之一。利用细菌处理污水是目前的热门研究，但尚无一种较为理想的菌种。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一株可以用于污水处理的海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ及其产生的多糖，以及其应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一株海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ，该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2011455。

该菌株的特征为：Aerococcus urinaeequi HZ为革兰氏阴性菌，长杆状，在Zobell 2216E固体培养基菌落较大（直径2mm），乳白色，圆形，隆起，边缘较圆整，不透明，无迁移性。

本发明的菌株是通过以下方式筛选得到的：样品采集自山东荣成海域，取样时间为鲍鱼苗期幼体从附着基剥离时（5月中旬）。样品为刮取的板上10cm²面积上的附着物，存放在2ml灭菌冻存管中，密闭保存在冰盒中，24小时内送回实验室。进行异养菌的分离和DNA的提取。将采集的样品用无菌海水稀释为10^-3、10^-4、10^-5、10^-6四个浓度，用灭菌的涂布器均匀涂布于2216E固体培养基平板上，25℃恒温培养48h，挑取形态差别显著的的菌落。用划线法进行纯化。通过苯酚-硫酸法对所得菌株是否产多糖进行检测，初筛多糖产量超过0.5g/L，得到该产多糖菌株，通过DNA序列分析确定了其种属关系，属于气球菌。

一种多糖，是由培养海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ所得到的，具体如下：

（1）培养：海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量2%～5%（体积百分数），温度20～35℃，150～250r/min摇床培养30～40h，得发酵液；

（2）提取：发酵液5000rpm/min离心20min，过滤去除菌体，向上清液中加入3倍体积的95%乙醇（体积百分数），静置8～12h，离心得到沉淀，即为蛋白质和多糖的混合物；

（3）除杂蛋白：将上述得到的蛋白质和多糖的混合物溶于水中，加入总体积1/4体积的Sevag溶剂（氯仿：正丁醇=4：1，体积比），充分震荡10min，离心去除有机相；重复进行7 次，得到粗多糖溶液；

（4）分离纯化：采用DEAE-52对粗多糖进行分级，用0-2M NaCl Tris-HCl（0.01M）进行梯度洗脱，收集主峰；将收集到的主峰浓缩脱盐、冷冻干燥后，溶于0.1M NaCl溶液，用Sephadex G100层析，用0.1M NaCl洗脱，收集第一个洗脱峰，冷冻干燥后即得到多糖，命名为EPS-2。

所述斜面培养、种子培养对所属领域技术人员而言是常规的技术操作，在此不再赘述。

所述培养所用的斜面培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，琼脂20.0g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8。

所述培养所用种子培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8。

所述发酵培养基为：牛肉膏0.25%，蔗糖3%，海盐（硝酸铵0.00016％，硼酸0.0022％，氯化钙0.18％，磷酸氢二钠0.0008％，柠檬酸铁0.01％，氯化镁0.88％，溴化钾0.008％，氯化钾0.055％，碳酸氢钠0.016％，氯化钠1.945％，硅酸钠0.0004％，硫酸钠0.0324％，氯化锶0.0034％，氟化钠0.00024％），余量为水，pH7.6～7.8。所述百分数均为质量百分数。

所述培养条件为：温度26℃，230r/min摇床培养35h，此条件下，多糖产量可达到2.34g/L。

经实验证明，该多糖对重金属离子（尤其是Pb²⁺）具有较高的清除率，对自由基也有较好的清楚效率，抗氧化性能优良。该多糖对浑浊污水也有较好的絮凝能力。可见，在污水处理方面，本发明的菌株、多糖有着得天独厚的优势，比如制成添加剂等，相信在不久的将来，本发明的菌株、多糖在污水处理领域将占据一席之地。

附图说明

一株海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ，该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2011455，保藏地址：湖北省武汉市武汉大学，邮编：430072。

图1：菌体生长曲线和多糖发酵曲线。

图2：紫外扫描数据示意图。

图3：梯度洗脱收集得到的主峰示意图。

图4：洗脱得到的洗脱峰示意图。

图5-1：多糖分子量线性回归方程，横坐标：洗脱体积，纵坐标，摩尔质量，图由机器得出。

图5-2：多糖分子量及分子量分布示意图，横坐标：洗脱体积；纵坐标：检测器响应，此 为扫描图片。

图6：EPS-2的红外谱图。

图7：EPS-21H核磁共振谱图（30℃）。

图8：EPS-213C核磁共振谱图（30℃）。

图9：胞外多糖EPS2对污水絮凝的作用示意图。

图10：胞外多糖和Vc对·OH的清除率示意图。

图11：胞外多糖EPS2和Vc对O^2-·的清除率示意图。

图12：EPS2红外光谱图。

图13：EPS2吸收Pb²⁺红外光谱图。

图14：铅元素的线性标准曲线。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1菌株的获得 

样品采集自山东荣成海域，取样时间为苗期幼体（鲍鱼）从附着基剥离时（5月中旬）。样品为刮取的板上10cm²面积上的附着物，存放在2ml灭菌冻存管中，密闭保存在冰盒中，24小时内送回实验室。进行异养菌的分离和DNA的提取。将采集的样品用无菌海水稀释为10^-3、10^-4、10^-5、10^-6四个浓度，用灭菌的涂布器均匀涂布于2216E固体培养基平板上，25℃恒温培养48h，挑取形态差别显著的的菌落。用划线法进行纯化。通过苯酚-硫酸法对所得菌株是否产多糖进行检测，筛选到一株多糖产量超过0.5g/L的菌株，通过DNA序列分析确定了其种属关系，属于气球菌，对其进行了保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2011455，保藏日期为2011年12月09日。

实施例2提取多糖

是培养海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ所得到的，具体如下：

（1）培养：海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量5%（体积百分数），温度26℃，230r/min摇床培养35h，得发酵液；菌体生长曲线和多糖发酵曲线如图1所示，多糖产量达到2.34g/L。

（2）提取：发酵液5000rpm/min离心20min，过滤去除菌体，向上清液中加入3倍体积的95%乙醇（体积百分数），静置10h，离心得到沉淀，即为蛋白质和多糖的混合物；

（3）除杂蛋白：将上述得到的蛋白质和多糖的混合物溶于水中，加入总体积1/4体积的Sevag溶剂（氯仿：正丁醇=4：1，体积比），充分震荡10min，离心去除有机相；重复进行7 次，得到粗多糖溶液；采用紫外扫描检测杂蛋白是否除干净（检测260nm和280nm波长处若没有出现吸收峰，即表明无核酸和蛋白质残存），紫外扫描数据如图2所示。

（4）分离纯化：采用DEAE-52对粗多糖进行分级，用0-2M NaCl Tris-HCl（0.01M）进行梯度洗脱，收集主峰（如图3所示）；将收集到的主峰浓缩脱盐、冷冻干燥后，溶于0.1MNaCl溶液，用Sephadex G100层析，用0.1M NaCl洗脱，收集第一个洗脱峰，冷冻干燥后即得到多糖，命名为EPS-2，如图4所示。

所述培养所用的斜面培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，琼脂20.0g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8。

所述培养所用种子培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8。

所述发酵培养基为：牛肉膏0.25%，蔗糖3%，海盐（硝酸铵0.00016％，硼酸0.0022％，氯化钙0.18％，磷酸氢二钠0.0008％，柠檬酸铁0.01％，氯化镁0.88％，溴化钾0.008％，氯化钾0.055％，碳酸氢钠0.016％，氯化钠1.945％，硅酸钠0.0004％，硫酸钠0.0324％，氯化锶0.0034％，氟化钠0.00024％），余量为水，pH7.6～7.8。所述百分数均为质量百分数。

多糖纯度和分子量确定：

使用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定多糖EPS-2的分子量，色谱柱：SHODEX SB-806HQ（8.0m×300mm）；流动相：0.2M NaCl（取氯化钠17.85g，叠氮化钠0.15g，加纯水使药品溶解并稀释至1500mL）溶液；对照样品：0.1mg/mL聚苯乙烯硫酸酯钠盐系列对照品；流速0.5mL/min，柱温35℃，取对照品各100μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图，由GPC软件进行普适校正计算线性回归方程，如图5-1所示，对照品K值为0.0006，α值为0.75，取供试样品溶液100μL，同法测定，用GPC软件计算出样品的分子量及分子量分布，如图5-2所示。

根据标准品和标准曲线积分得出分子量信息如表1所示。

表1

常用的平均分子量有以数量为统计权重的数均分子量(Mn)和以重量为统计权重的重均分子量(Mw)。该多糖的分散系数为1.28，说明该细菌多糖分子量分散程度较小。

EPS-2的单糖组成分析：

EPS-2水解液的质谱解析结果见表2。经标准质谱库检索对比分析,检出7种单糖，其中 主要包括两种五碳糖(阿拉伯糖和木糖)，两种六碳糖(甘露糖和葡萄糖)，并含有少量的葡萄糖甙、半乳糖和甘油醛。

表2  EPS-2单糖组成分析表

EPS-2的红外光谱分析：

从EPS-2的红外谱图（如图6所示）可见，EPS-2具有多糖类物质的特有吸收峰，其中3200cm^-1～3600cm^-1处的宽峰为多糖EPS-2上的O-H伸缩振动峰；2935.6cm^-1、2887.4cm^-1为-CH₂、-CH₃的C-H伸缩振动，1319.3cm^-1～1454.33cm^-1是C-H的变角振动吸收峰；1651.07cm^-1为C=O的伸缩振动峰，也可能是N-H的变角振动，需要进一步证实；1140cm^-1左右为C-O的吸收很强的伸缩振动峰，有可能是吡喃糖环特征吸收峰；927.7cm^-1为吡喃环非对称伸缩振动峰，但也可能是呋喃衍生物的特征吸收，812cm^-1有可能为呋喃环的C-H变角振动，但由于仪器、操作技术、样品处理等原因有可能造成的偏差，还需要进一步验证。

EPS-2的核磁共振波谱分析：

为进一步确定EPS-2的结构，对其进行¹H-NMR（图7）和¹³C-NMR（图8）分析，在¹H-NMR谱中，异头碳C-1上质子的δ值在4.7ppm附近，未超过5ppm，表明这些葡萄糖残基均为β构型，这与红外光谱分析一致。在¹³C-NMR谱中，在160-180ppm处未出现羰基碳信号，说明多糖不含糖醛酸和糖蛋白，95-105ppm区间有7组信号峰且都大于102，根据文献可确定该多糖有7种不同的单糖残基，且均为β构型；67-70ppm没有吸收峰，说明没有C6发生取代，78-85ppm处有3处吸收，表明各种单糖残基2、3、4位有3碳原子发生取代，具体位置有待进一步确定δ<20ppm处未出现碳信号，表明EPS-2不含甲基糖。

实施例3多糖的用途 

一、EPS-2对污水的絮凝作用

（1）获取生活污水

取自山东轻工业学院生活污水处理厂，经检测其A值为1.626。

（2）微生物絮凝剂胞外多糖的制备

将海洋细菌HZ菌株接种到1L经灭菌的无氮培养液中，28℃培养2d至瓶底产生絮凝物质，采用沉淀法经离心后冷冻干燥获得海洋细菌Pseudoalteromonus isachenkonii HZ的胞外多糖，经过sevage法除蛋白，并用DEAE-52和Sephadex G100进一步分离纯化，得到多糖EPS-2（即采用实施例2的方式提取得到多糖EPS-2）。

（3）对生活污水的处理

在250mL三角瓶中加入100mL的待处理废水，加入0.2g制备好的海洋细菌Pseudoalteromonus isachenkonii HZ的胞外多糖EPS-2，混合均匀，静置lh，采用如下指标检测胞外多糖对废水的处理效果。

（4）絮凝率的测量

用752分光光度计以550nm波长测定，原废水的上相液D_γ值记为A₁；经处理后废水的上相液吸光度值(D_γ值)记为B₁。絮凝效果以絮凝率来表示：

絮凝率(%)=(A₁-B₁)/A₁×100%

污水絮凝实验结果分析如图9所示。静置1h后，测得絮凝率为79.90%，从对生活废水的处理结果来看，由海洋细菌Pseudoalteromonus isachenkonii HZ菌株所制备得到的胞外多糖EPS-2已达到对生活污水进行处理的要求，效果完全达到预期，可以当做絮凝剂进行应用。

二、EPS2对清除自由基的应用研究

（1）对羟自由基的清除

1.采用H₂O₂／Fe²⁺体系，通过Fenton反应生成·OH，在体系内加入水杨酸捕捉·OH并产生有色物质，该物质在510nm下有最大吸收。反应体系中含9.8mmol/LH₂0₂ 1mL，9mmol/LFeS0₄ lmL，9mmol/L水杨酸-乙醇lmL，不同浓度的海洋细菌Pseudoalteromonus isachenkonii HZ EPS2多糖溶液lmL，其中H₂0₂是最后加入并启动整个反应。37℃反应30min，5000r/min离心10min，以蒸馏水为参比，在510nm下测量各浓度的吸光度。

考虑待测溶液本身的吸光值不同，以9mmol/LFeS0₄ lmL，9mmol/L水杨酸-乙醇1mL，不同浓度的多糖溶液lmL和蒸馏水lmL作为待测溶液的本底吸收值。清除率计算公式为：

清除率=[A₀-(A_x-A_x0)]／A₀×100％

式中：A₀为空白对照液的吸光度，A_x为加入多糖溶液后的吸光度，A_x0为多糖溶液的本底吸收值。

2．采用2／Fe²⁺体系，通过Fenton反应生成·OH，在体系内加入水杨酸捕捉·OH并产生有色物质，该物质在510nm下有最大吸收。反应体系中含9．8mmol/LH₂0₂ lmL，9mmol/L FeS0₄lmL，9mmol/L水杨酸-乙醇lmL，不同浓度的Vc溶液lmL，其中H₂0₂是最后加入并启动整个反应。37℃反应30min，5000r/min离心10min，以蒸馏水为参比，在510nm下测量各浓度的吸光度。

考虑待测溶液本身的吸光值不同，以9mmol/LFeS0₄ lmL，9mmol/L水杨酸-乙醇1mL，不同浓度的Vc溶液1mL和蒸馏水1mL作为待测溶液的本底吸收值。清除率计算公式为：

清除率=[A₀-(A_x-A_x0)]／A₀×100％

式中：A₀为空白对照液的吸光度，A_x为加入Vc溶液后的吸光度，A_x0为Vc溶液的本底吸收值。

清除羟自由基（·OH）实验结果分析如图10所示。EPS2胞外多糖对羟自由基的清除效果较明显，随着多糖浓度的增加并呈现明显的量效关系，在多糖浓度为100μg/mL时，清除率达到45.65%。与Vc对羟基自由基的清除率相比，EPS2相对较低，效果比较理想。

（2）对超氧自由基的清除

1.连苯三酚在碱性条件下会发生自动氧化反应，自氧化过程中产生O^2-·，O^2-·加速邻苯三酚自氧化速率，同时生成有色物质。连苯三酚在自氧化过程中，形成一系列在400～420nm处有光吸收的中间产物，由于自氧化速率依赖于O^2-·的浓度，清除0^2-·则抑制自氧化反应，阻止中间产物的积累，从而评价受试物清除O^2-·的能力。

2.采用邻苯三酚自氧化法测定，取4．5mLpH8．2浓度为50mmol/Ltris-HCl缓冲液，15μL蒸馏水，混匀后在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚151μL(以10mmol／LHCl配制，空白管用10mmol／LHCl代替邻苯三酚的HCl溶液)，迅速摇匀后倒入比色皿中，325nm下每隔30s测定吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加。在加入邻苯三酚前，先加入1mL的EPS2多糖溶液，蒸馏水减少，然后按上述方法计算清除率。

清除率=(ΔA₀—ΔA)／(ΔA₀)×100％

其中：△A₀邻苯三酚的自氧化速率，△A为加入多糖溶液后邻苯三酚的自氧化速率。

3.采用邻苯三酚自氧化法测定，取4．5mLpH8．2浓度为50mmol/Ltris-HCl缓冲液，15μL蒸馏水，混匀后在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚151μL(以10mmol／LHCl配制，空白管用10mmol／LHCl代替邻苯三酚的HCl溶液)，迅速摇匀后倒入比色皿中，325nm下每隔30s测定吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加。在加入邻苯三酚前，先加入1mL的Vc多糖溶液，蒸馏水减少，然后按上述方法计算清除率。

清除率=(ΔA₀—ΔA)／(ΔA₀)×100％

其中：△A₀邻苯三酚的自氧化速率，△A为加入Vc溶液后邻苯三酚的自氧化速率。

清除超氧自由基（O^2-·）实验结果分析如图11所示。

可以看出EPS2对超氧自由基的清除作用较明显，随着多糖浓度的增加，清除效果逐渐加强。在一定浓度范围内，呈量效关系。当浓度为250μg/mL时，清除率达到67.31%。与Vc清除率相比结果相近，基本达到预期效果。

三、EPS-2对Pb²⁺的清除作用 

1.①配制浓度为50μg/mL的醋酸铅溶液25mL，加入0.2g海洋细菌胞外多糖Pseudoalteromonus isachenkonii HZ EPS2粉末，在恒温振荡器上震荡2小时，加入95%乙醇醇沉至乙醇浓度达80%，静置，在离心机中高速离心15分钟，将上清液移入蒸馏烧瓶中，减压浓缩回收乙醇，剩余液定容25mL，待测。

消化瓶中加入待测溶液10mL，加入硝酸—高氯酸（4：1）约10mL，通风橱中加热至棕色，冷却加约5mL浓硫酸继续加热至淡黄色或无色，定容25mL，测定。

②样品测定：用原子吸收分光光度法测定。

2.以去离子水配置的浓度50μg/mL的醋酸铅25mL，加入海洋细菌Pseudoalteromonus isachenkonii HZ胞外多糖EPS2粉末，在恒温振荡器上震荡2小时加入95%乙醇醇沉至乙醇浓度达80%，静置，在离心机中高速离心15分钟，所得沉淀冻干，研细，进行红外光谱检测。将干燥的样品与KBr压制成片，使用Necolet一Nexus470傅立叶变换红外光谱仪，扫描600一4000cm^-1波长范围的光谱吸收值。

清除重金属离子结果分析如图12、13、14所示。

对海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2（图12）和海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2-Pb（图13）的红外光谱在3500-1700cm-1基本相同，而在500-1700cm^-1和3650-3200cm^-1范围内，海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2（图12）和海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2-Pb（图13）的红外光谱有较大差异。海洋细菌EPS2中的O-H振动3543.39cm^-1、3494.45cm^-1、3404.72cm^-1处吸收Pb²⁺后分别在3540.92cm^-1、3462.54cm^-1、3400.88c^m-1、3375.43cm^-1处；C=O伸缩振动在1701.01cm^-1，羧基的对称吸收峰在1438.19cm^-1，海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2-Pb中的C=O伸缩振动在1689.64cm^-1，羧基的对称吸收峰在1443.02cm^-1。由此可见，海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2的化学结构出现了变化，发生了化学变化，既海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2可以结合Pb²⁺。通过图14的铅的标准曲线我们计算得到海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2对Pb²⁺的清除率为 95.16%，可见海洋细菌Aerococcus urinaeequi HZ EPS2对Pb²⁺的清除率非常高，完全能够满足我们的需要。

综合前面实验结果可知，海洋细菌多糖EPS2在多种领域有着许多独特作用。在促进污水絮凝方面，海洋细菌多糖EPS2有着显著的作用。这种作用不仅可以使我们在处理污水方面有了更好的认识也开辟了一条利用微生物快速絮凝的途径，为以后的水质净化，污水处理研究提供了强劲的支持。在清除自由基方面，海洋细菌多糖EPS2对羟基自由基、超氧自由基的清除作用可以与Vc相媲美。虽然在结果上不如Vc更明显，但同处于同一数量级，而且Vc本身就是一种很好的抗氧化剂，结果比较满意。在清除重金属离子铅离子方面，EPS2更是达到良好的清除率，可见这种多糖在清除重金属离子方面有着突出的作用。再加上海洋细菌胞外多糖对浑浊污水有较好的絮凝能，Pseudoalteromonus isachenkonii HZ EPS2在用作污水处理添加剂方面拥有得天独厚的优势，相信在不久的将来，在污水处理领域将占据一席之地。

Claims (5)

1.一株气球菌(Aerococcus urinaeequi)HZ，其特征在于：该菌株属于气球菌，命名为Aerococcus urinaeequi HZ，已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2011455。

2.一种多糖，其特征在于：是由培养权利要求1所述的气球菌Aerococcus urinaeequiHZ所得到的；是通过以下方法得到的：

(1)培养：气球菌Aerococcus urinaeequi HZ菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量2％～5％，温度20～35℃，150～250r/min摇床培养，得发酵液；

(2)提取：发酵液5000r/min离心20min，过滤去除菌体，向上清液中加入3倍体积的95％乙醇，静置8～12h，离心得到沉淀，即为蛋白质和多糖的混合物；

(3)除杂蛋白：将上述得到的蛋白质和多糖的混合物溶于水中，加入总体积1/4体积的Sevag溶剂，充分震荡10min，离心去除有机相；重复进行8次，得到粗多糖溶液；

(4)分离纯化：采用DEAE-52对粗多糖进行分级，用0-2M NaCl Tris-HCl进行梯度洗脱，Tris-HCl的浓度为0.01M，收集主峰；将收集到的主峰浓缩脱盐、冷冻干燥后，溶于0.1MNaCl溶液，用Sephadex G100层析，用0.1M NaCl洗脱，收集第一个洗脱峰，冷冻干燥后即得到多糖；

所述斜面培养所用的斜面培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，琼脂20.0g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8；

所述种子培养所用种子培养基为：Zobell 2216E培养基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，磷酸铁0.01g，陈海水1000ml，调ph至7.6～7.8；

所述发酵培养基为：牛肉膏0.25％，蔗糖3％，硝酸铵0.00016％，硼酸0.0022％，氯化钙0.18％，磷酸氢二钠0.0008％，柠檬酸铁0.01％，氯化镁0.88％，溴化钾0.008％，氯化钾0.055％，碳酸氢钠0.016％，氯化钠1.945％，硅酸钠0.0004％，硫酸钠0.0324％，氯化锶0.0034％，氟化钠0.00024％，余量为水，pH7.6～7.8；所述百分数均为质量百分数；

所述摇床培养的培养条件为：温度26℃，230r/min摇床培养35h。

3.权利要求1所述的气球菌Aerococcus urinaeequi HZ在污水处理中的应用。

4.根据权利要求2所述的一种多糖在污水处理中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述多糖作为金属离子清除剂、自由基清除剂以及絮凝剂的应用。