CN102755355B - 抗a型流感病毒或肠病毒的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种抗病毒的药物组合物,所述药物组合物包含有效剂量的樟芝萃取物,所述樟芝萃取物可为樟芝发酵液或樟芝菌丝体萃取液。所述樟芝萃取物由有机溶剂萃取而得。本发明所述病毒可为A型流感病毒(H1N1或H3N2),或是肠病毒(EV71)。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物,尤其涉及一种抗A型流感病毒或肠病毒的药物组合物。
背景技术
樟芝[(Antrodia camphorate)(Zang&Su;S.-H Wu;Ryvaren&T.T.Chang)],又称樟菇,属于台湾国宝级的珍贵药用真菌,经常被应用于养生保健的用途。一般民间对于樟芝的称呼为樟菰、樟内菇、牛樟菇、牛樟芝、红樟或红樟芝,是台湾特有种的菇菌类,全世界只生长在台湾山区海拔450~1500公尺间的牛樟树干腐朽的心材内壁或枯死倒伏的牛樟木材阴暗潮湿的表面,非常珍贵稀少,因此又被成为“台湾森林中的宝石”。樟芝中含有的多醇体可活化细胞、改善体质,增进人体内的免疫调节,其中另一主要有效成份-三萜类化合物,应用于抗癌/抗发炎及保肝功能,亦已在市场行销广为认可,因而樟芝有药用真菌之王的美誉。
流行性感冒简称为流感,是由流行性感冒病毒所引起的急性呼吸道感染疾病,常伴随发烧、头痛、肌肉痛、疲倦、流鼻涕、喉咙痛以及咳嗽等症状,有些甚至会出现腹泻、呕吐的症状。相较于一般感冒,流行性感冒除了上述症状更为严重以外,对于抵抗力较弱的婴幼儿、老年人、或原本即已患其他疾病者,容易产生严重并发症而导致死亡。随着病毒的变异性越来越快,发生大规模流行的几率越来越高,同时流感病毒对于现有药物的抗药性越来越强。目前为控制流感病毒感染,有抗病毒治疗和疫苗可供选择,而预防流感的疫苗则是在新病毒株出现之前不可能研制疫苗;通常,一个疫苗的大规模研发和制造至少需要六个月时间。因此,每年世界卫生组织都会预测来年可能发生大规模感染的流感病毒种类,以提供药厂提早研发和生产疫苗,但由于全球生产能力有限及生产设施集中在发达国家,许多没有生产设施的国家在第一波流行期间将使用不到疫苗。
自2009年4月中旬,美国疾管局首先鉴定出有人类感染猪源新型流感病毒A型H1N1案例以来,不到一个半月之时间,全球已有53个国家共有15510件确认病例,其中99例死亡,死亡率为0.64%。此猪源新型流感病毒H1N1之传播能力强,已陆续在世界各地经由旅游传播,并有部分国家引起第二波传染,甚至造成社区感染的现象。近年来,流感病毒产生抗原移型(Antigenic Shin)的速度增加,从1997年在香港发生的新型流感,都造成民众以及各国卫生单位的紧张;而且,常用的抗流感病毒药物中,部分病毒已经对M2抑制剂产生抗药性,而最近新型流感病毒对抗流感产生抗药性的案例也被WHO所证实。
肠病毒(Enterovirus,EV)为一群病毒的总称,属于小RNA病毒科(Picornaviridae),为一种正向单股RNA病毒,大小约20-30nm。依照基因序列,可分为肠病毒A、B、C、C四型。肠病毒71型(Human Enterovirus 71)被归于人类肠病毒A型。肠病毒传播途径多元,主要经由肠胃道、呼吸道传染,也可由接触病人分泌物传染;肠病毒传染力极强,患者在发病前几天便可传播病毒,潜伏期约3到5天,传播期可达8至12周。目前肠病毒感染并无特殊用药与疫苗,治疗上多采用支持疗法。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗A型流感病毒或肠病毒的药物组合物。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:一种抗A型流感病毒或肠病毒药物组合物,其包含有效剂量的樟芝萃取物。
所述樟芝萃取物可为樟芝发酵液或樟芝菌丝体萃取液,所述樟芝萃取物可由水或有机溶剂进行萃取;较佳的,由有机溶剂进行萃取,所用有机溶剂可为醇类或酯类等常用的有机萃取溶剂,如乙酸乙酯。
萃取步骤可为有机溶剂直接萃取,或是进一步将有机溶剂萃取后的萃取液利用层析管柱进行分萃。
本发明所述病毒为肠病毒,例如EV71,以及A型流感病毒,例如H1N1和H3N2。
进一步地,本发明抗A型流感病毒或肠病毒药物组合物,包含药物上可接受的佐剂、载体或赋形剂。所述药物载体包含惰性成分,所述惰性成分不会与本发明化合物发生实质反应。所述载体为无菌水、生理食盐水、抑菌食盐水(包含约0.9%mg/ml苯基醇的食盐水)、磷酸缓冲食盐水、汉克溶液、林格式乳糖液或其他相似载体。
用于口服药物,可依照已知方法,将其制成粉末状、颗粒状、锭状、液状、胶状或膏状。
本发明的药物组合物,可以食品、饮品、药品、试剂或营养补充品的形式提供,或是由静脉、肌肉、上皮、腹腔、吸入、口含、口服、经皮等途径施用。
本发明所述的有效剂量,指该化合物计量在提供给已对象后能获得有益的效果,或者,该化合物的剂量能在体内或体外获得预期的活性。
针对抗H1N1的有效成分,以有机溶剂(如乙酸乙酯)直接萃取的樟芝萃取物,其有效浓度为3.125~300ug/ml,较佳为4.688~250ug/ml,最佳为6.25~200ug/ml。针对抗H3N2的有效成分,有效浓度为25~300ug/ml,较佳为37.5~250ug/ml,最佳为50~200ug/ml。针对抗EV71的有效成分,有效浓度为3.125~300ug/ml,较佳为4.688~250ug/ml,最佳为6.25~200ug/ml。
本发明利用深层液态发酵培养技术,培养制作充分的樟芝发酵产品,且保留其具有生物活性的有效成分及二次代谢物质,并完全保留原有樟芝的芳香味道及特殊有效成分。为进一步确认樟芝萃取物的抗病毒能力,本发明以4株樟芝发酵液(AC1-AC4)及4株樟芝菌丝体(AC1F-AC4F)在不同萃取条件下进行H1N1、H3N2以及EV71的抗性测试。结果显示,当发酵液AC1-AC4未进行任何萃取时,该4株发酵液在浓度200ug/ml时对于H1N1具有抑制活性;在浓度为100ug/ml时,对于EV71具有抑制活性;但对于H3N2则不具有任何抑制活性。在发酵液萃取后,得到AC1~AC4-LPEA、AC1~AC4-LPBU及AC1~AC4-LPWA等3种萃取液。其中H1N1的有效成分,AC1-LPEA在浓度100ug/ml时具有抑制活性,AC2-LPEA在浓度25ug/ml时具有抑制活性,AC3-LPEA及AC4-LPEA则在浓度50ug/ml时具有抑制活性;AC1-LPBU在浓度50μg/mL时具抑制活性,AC3-LPBU在浓度25μg/mL时具抑制活性,AC2-LPBU及AC4-LPBU则在浓度200μg/mL时具抑制活性;AC1~AC4-LPWA皆不具抑制活性。对于H3N2部分,AC1~AC4-LPEA均在浓度50μg/mL时具抑制活性;AC1-LPBU在浓度150μg/mL时具抑制活性,AC2-LPBU~AC4-LPBU则不具抑制活性;AC1~AC4-LPWA皆不具抑制活性。对于EV71部分,AC1-LPEA及AC4-LPEA在浓度6.25~100μg/mL时具抑制活性,AC2-LPEA及AC3-LPEA则在浓度100μg/mL时具抑制活性;AC1-LPBU~AC4-LPBU皆在浓度100μg/mL时具抑制活性;AC4-LPWA则在浓度100μg/mL时具抑制活性,而AC1~AC3-LPWA皆不具抑制活性。
当发酵液AC1-AC4直接以EA萃取,则得到萃取液AC1~AC4-EA。其中对于H1N1,AC1-EA不具任何抑制活性,AC2~AC4-EA分别在浓度6.25μg/mL、100μg/mL以及150μg/mL时具抑制活性。对于H3N2,AC1-EA及AC2-EA在浓度100μg/mL时具抑制活性,AC3-EA及AC4-EA在浓度200μg/mL以及50μg/mL时具抑制活性。
此外,对于发酵液AC2分萃后的EA层再继续进行粗分,得到AC2-LPEA-SI01~SI06。其中对于H1N1,AC2-LPEA-SI01~S106皆在3.125μg/mL时具抑制活性。对于H3N2,AC2-LPEA-SI01~SI06分别在100μg/mL、3.125μg/mL、25~50μg/mL、50~100μg/mL以及50~150μg/mL时具抑制活性,AC2-LPEA-SI06则不具抑制活性。对于EV71,AC2-LPEA-SI01~SI05分别在100~150μg/mL、6.25~25μg/mL、6.25~50μg/mL、6.25~50μg/mL以及100μg/mL时具抑制活性,AC2-LPEA-SI06仅在25μg/mL时具抑制活性。
至于樟芝菌丝体部分,菌丝体AC1F~AC4F直接以EA萃取可得AC1F~AC4F-EA。其中对于H1N1,AC1F-EA不具抑制活性,AC2F~AC4F-EA分在浓度12.5μg/mL、25μg/mL以及150μg/mL时具抑制活性。对于H3N2,AC1F-EA及AC2F-EA在浓度100μg/mL时具抑制活性,AC3F-EA不具抑制活性,AC4F-EA则在浓度150μg/mL时具抑制活性。对于EV71,AC1F~AC3F-EA分在浓度100μg/mL、50μg/mL以及6.25μg/mL时具抑制活性,AC4F-EA则不具任何抑制活性。
菌丝体AC2F直接以EA萃取后(AC2F-EA),再进行粗分,可得到AC2F-EA-SI01~SI10。其中对于H1N1,AC2F-EA-SI01、SI03、SI04、SI05、SI07及SI09在浓度3.125μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI02在浓度6.25μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI06及SI10在浓度6.25~50μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI08在浓度6.25~100μg/mL时具抑制活性。对于H3N2,AC2F-EA-SI01~SI04及SI06~SI07在浓度3.125μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI05在浓度100μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI08在浓度100~150μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI09在浓度50~100μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI10不具抑制活性。对于EV71,AC2F-EA-SI01在浓度100μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI02在浓度6.25~150μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI03仅在浓度6.25μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI04在浓度6.25μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI05~SI06仅在浓度12.5μg/mL时具抑制活性,AC2F-EA-SI07在浓度6.25~50μg/mL时具抑制活性AC2F-EA-SI08~SI10不具任何抑制活性。
因此,由本发明的实验结果可知,发酵液及菌丝体直接以EA萃取后,在抗H1N1上具较强的抑制活性,其在萃取液浓度6.25~200μg/mL时具有显著的抑制病毒效果;在抗H3N2上,则浓度须提升到50~200μg/mL才有明显的抑制活性;在抗EV71上,抑制活性的浓度亦为6.25~200μg/mL。
附图说明
图1为本发明一种实施例AC1的萃取流程图。
图2为本发明一种实施例AC1F的萃取流程图。
图3为本发明一种实施例AC2的萃取及分离流程图。
图4为本发明一种实施例AC2F的萃取及分离流程图。
具体实施方式
为更进一步说明本发明的目的、技术方案和优点,下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
一、材料:
1、细胞:
a:Madin-Darby犬肾细胞(MDCK细胞):来源为BCRC NO.60004,接种H1N1与H3N2;
b:横纹肌肉瘤细胞(RD细胞):取自食品工业研究所,接种肠病毒71;
c:培养液:达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM,BIOLOGICALINDUSTRIES)加2mM L-麸酰胺酸、1.5g/L碳酸氢钠、4.5g/L葡萄糖及10%胎牛血清(Hyclone)。
2、病毒:
a:流感病毒A(H1N1):来源为台湾疾病管制局,此一病毒株经定序后近似于流感病毒A/香港/470/97,其培养液为不含血清的DMEM标准培养液外加0.2%TPCK处理的胰蛋白酶(Tosylsulfonyl Phenylalanyl Chloromethyl Ketone-treatedtrypsin)(Sigma)、0.3%BSA(Sigma)及25mM HEPES(GIBCO);
b:流感病毒A(H3N2):来源为台湾疾病管制局,此一病毒株经定序后近似于流感病毒A/纽约/469/2004,其培养液为不含血清的DMEM标准培养液外加0.2%TPCK处理的胰蛋白酶(Sigma)、0.3%BSA(Sigma)及25mM HEPES(GIBCO);
c:肠病毒71(EV71):取自疾病管制局,其培养液为含2%血清的DMEM标准培养液;
d:流感病毒A/WSN/33(H1N1):来源为预医所,其培养液为含2%血清的DMEM标准培养液。
3、其它:Dulbecco氏磷酸缓冲生理食盐水(DPBS,BIOLOGICAL STRIES)、DMSO及96微孔盘(NunclonTMΔ)。
二、方法:
1、实验前一天先进行次细胞培养,在96微孔盘中分别种入2×104细胞/孔槽的MDCK细胞及4×104细胞/孔槽的RD细胞后,置于5%二氧化碳、37℃的培养箱培养;
2、隔天(约18-24小时)即实验当天,将细胞培养液吸去,以DPBS清洗两次,加入100μL/槽的病毒培养液,先放置于培养箱中,等待测物稀释完成后再取出进行后续实验;
3、待测物先以DMSO溶解,配成浓度200mg/mL的储备溶液(stock solution),再以病毒培养液稀释成200、150、100、50、25、12.5、6.25及3.125μg/mL;
4、将96微孔盘取出,吸去旧的病毒培养液,加入50μL/槽稀释好的待测物,等一个小时后再加入50μL/槽0.01MOI的病毒;
5、培养1-3天后,以显微镜观察病毒,待其细胞凋亡达75%以上时才进行细胞存活率测定(MTT assay);
6、重复实验两次以上,求其平均。
实施例1
发酵液AC1与其菌丝体AC1F:
1、AC1分萃步骤:
a:AC1放入烧杯中,加入20倍体积的M.Q水回溶,并将其倒入分液漏斗;
b:加等体积的乙酸乙酯(EA,已经过水饱和)进行分萃(partition),待分层后将上层(即EA层)取出,下层(即水层)再加入等体积的水饱和EA继续进行分萃,共萃取5次后,将5次的EA层合并浓缩,即得其EA层分萃物(AC1-LPEA);
c:EA分萃后的水层再继续以等体积的正丁醇(n-BuOH,已经过水饱和)进行分萃,方法同b,但最后合并的正丁醇层需再以等体积的M.Q.水反萃一次,这样即可得其正丁醇层分萃物(AC1-LPBU);
d:浓缩正丁醇分萃后的水层,即可得其水层分萃物(AC1-LPWA);
e:将AC1-LPEA、AC1-LPBU及AC1-LPWA置于防潮箱中干燥,称重。
2、AC1直接萃取步骤:
a:称取AC1放入血清瓶或锥形瓶中,加入10倍体积的EA;
b:在搅拌/加热板上,搅拌萃取(转速5)约1-3天;
c:抽气过滤,浓缩;
d:置于防潮箱中干燥,称重,即得AC1的EA萃取物AC1-EA。
3、AC1F萃取步骤:
a:称取AC1F放入血清瓶或锥形瓶中,加入10倍体积的EA;
b:在搅拌/加热板上,搅拌萃取(转速5)约1-3天;
c:抽气过滤,浓缩;
d:置于防潮箱中干燥,称重,即得AC1F的EA萃取物AC1F-EA。
4、抗病毒活性测试结果:H1N1、H3N2及EV71
a.H1N1:
b.H3N2:
c.EV71
5、结果:
a、AC1在浓度200μg/mL时具抗H1N1的活性;100μg/mL时具抗EV1的活性,但无抗H3N2的活性
b、AC1分萃后的水层(AC1-LPWA)无任何活性;EA层(AC1-LPEA)具抗H1N1(100μg/mL)、H3N2(50μg/mL)及EV71(6.25-100μg/mL)活性;n-BuOH层(AC1-LPBU)具抗H1N1(50μg/mL)活性及些微抗H3N2(150μg/mL)、EV71(100μg/mL)活性。
c、直接以EA萃取,其发酵液AC1及菌丝体AC1F皆不具抗H1N1活性,但均有抗H3N2(100μg/mL)及EV71(100μg/mL)的活性。
实施例2
发酵液AC2及其菌丝体AC2F
1.AC2分萃步骤:
a.称取AC2于烧杯中,加入20倍体积的M.Q水回溶,并将其倒入分液漏斗。
b.加等体积的EA(已经过水饱和)进行分萃(partition),待分层后将上层(即EA层)取出,下层(即水层)再加入等体积的水饱和EA继续进行分萃,共萃取5次后,将5次的EA层合并浓缩,即得其EA层分萃物(AC2-LPEA)。
c.EA分萃后的水层再继续以等体积的正丁醇(已经过水饱和)进行分萃,方法同b,但最后合并的正丁醇层需再以等体积的M.Q.水反萃一次,这样即可得其正丁醇层分萃物(AC2-LPBU)。
d.浓缩正丁醇分萃后的水层,即可得其水层分萃物(AC2-LPWA)。
e.将AC2-LPEA、AC2-LPBU及AC2-LPWA置于防潮箱中干燥,称重。
2.AC2-LPEA粗分步骤:使用快速管柱层析分离。
a.称取AC2-LPEA于浓缩瓶中,以EA及三氯甲烷(CHC13)溶解(可用超音波洗净机加速溶解)。
b.加入硅胶(silica gel)浓缩至干后,倒入放样品的空管中。
c.将快速管柱层析用正向分离管柱(normal phase column)(硅胶)装于仪器上,以正己烷洗至整支管柱完全充满正己烷。
d.将已填好样品的管子装于仪器放样品的地方。
e.设定分离条件:溶剂为正己烷、EA及甲醇(MeOH)。(如下表)
f.开始分萃(收集用的样品盘其使用的试管大小可为18×150mm或16×150mm)。
g.分萃完后,再另外用甲醇将管柱中剩下的样品洗出。
h.以随身碟存档,空气清洁(air purge)样品及管柱,关机。
i.将收集的试管进行合并浓缩,共合并成6个部分(SI01-SI06)。
3.AC2直接萃取步骤:
a.称取AC2于血清瓶或锥形瓶中,加入10倍体积的EA。
b.置于搅拌/加热板上,搅拌萃取(转速5)约1-3天。
c.抽气过滤,浓缩。
d.置于防潮箱中干燥,称重,即得AC2的EA萃取物AC2-EA。
4.AC2F萃取步骤:
a.称取AC2F于血清瓶或锥形瓶中,加入10倍体积的EA。
b.置于搅拌/加热板上,搅拌萃取(转速5)约1-3天。
c.抽气过滤,浓缩。
d.置于防潮箱中干燥,称重,即得AC2F的EA萃取物AC2F-EA。
5.AC2F粗分步骤:使用快速管柱层析分离
a.称取AC2F于浓缩瓶中,以EA及三氯甲烷溶解(可用超音波洗净机加速溶解)。
b.加入硅胶浓缩至干后,倒入放样品的空管中。
c.将快速管柱层析用的正向分离管柱装于仪器上,以n-己烷洗至整支管柱完全充满正己烷。
d.将已填好样品的管子装于仪器放样品的地方。
e.设定分离条件:溶剂为正己烷、EA及甲醇。(如下表)
f.开始进行分离(收集用的样品盘其使用的试管大小可为18×50mm或16×150mm)。
g.分离完后,再另外用甲醇将管柱中剩下的样品洗出。
h.以随身碟存档,空气清洁样品及管柱,关机。
i.将收集的试管进行合并浓缩,共合并成10个部分(SI01-SI10)。
6.抗病毒活性测试结果:H1N1、H3N2及EV71。
a.H1N1:
b.H3N2:
c.EV71:
7、结果
a.AC2在浓度200μg/mL时具抗H1N1活性,但无抗H3N2及EV71活性。
b.AC2分萃后的EA层(AC2-LPEA)具抗H1N1(25μg/mL)、H3N2(50μg/mL)及EV71(100μg/mL)活性;正丁醇层(AC2-LPBU)具些微抗H1N1(200μg/mL)及抗EV71(100μg/mL)活性,但无抗H3N2活性;水层(AC2-LPWA)则无任何活性。
c.直接以EA萃取,其发酵液AC2及菌丝体AC2F皆具抗H1N1、H3N2及EV71的活性,有效浓度H1N1:AC2-EA 6.25μg/mL、AC2F-EA 12.5μg/mL;H3N2:AC2-EA 100μg/mL、AC2F-EA 100μg/mL;EV71:AC2-EA 100μg/mL、AC2F-EA 50μg/mL。
d.AC2-LPEA经分离后各部分均在一定浓度下有抗病毒活性,其对H1N1活性较强,而对H3N2及EV71较弱。
e.AC2F-EA经分离后SI01-SI04对三种病毒均具活性,但对H1N1活性较强;SI05-SI07对三种病毒亦具有活性,但较弱;而SI08-SI10对H1N1具有较强之活性,对H3N2仅具些微活性,但并无抗EV71活性。
实施例3
发酵液AC3及其菌丝体AC3F:
AC3发酵液及其菌丝体萃取步骤及流程同AC1。
1.抗病毒活性测试结果:H1N1、H3N2及EV71。
a.H1N1:
b.H3N2:
c.EV71:
2.结果:
a.AC3在浓度200μg/mL时具抗H1N1活性,但无抗H3N2及EV71活性。
b.AC3分萃后的水层(AC1-LPWA)无任何活性;EA层(AC3-LPEA)具抗H1N1(50μg/mL)、H3N2(50μg/mL)及EV71(100μg/mL)活性;正丁醇层(AC3-LPBU)具抗H1N1(25μg/mL)及抗EV71(100μg/mL)活性,但对H3N2并活性。
c.直接以EA萃取,其发酵液AC3-EA具较强的抗H1N1(100μg/mL)及EV71(6.25μg/mL)活性,并具些微抗H3N2(200μg/mL)活性,而菌丝体AC3F-EA则具有抗H1N1(25μg/mL)及EV71(6.25μg/mL)活性,但并无抗H3N2活性。
实施例4
发酵液AC4及其菌丝体AC4F:
AC4发酵液及其菌丝体萃取步骤及流程同AC1。
1.抗病毒活性测试结果:H1N1、H3N2及EV71。
a.H1N1
b.H3N2:
c.EV71:
2.结果:
a.AC4在浓度200μg/mL时具抗H1N1活性,浓度100μg/mL时具抗EV71活性,但无抗H3N2活性。
b.AC4分萃后的水层(AC1-LPWA)仅具抗EV71(100μg/mL)活性;EA层(AC4-LPEA)具抗H1N1(50μg/mL)、H3N2(50μg/mL)及EV71(6.25-100μg/mL)活性;正丁醇层(AC4-LPBU)具抗H1N1(200μg/mL)及抗EV71(100μg/mL)活性,但对H3N2并无活性。
c.直接以EA萃取,其发酵液AC4-EA具较强抗H3N2(50μg/mL)活性,并具些微抗H1N1(150μg/mL)活性,而菌丝体AC4F-EA则具有些微抗H1N1(150μg/mL)及H3N2(150μg/mL)活性,但并无抗EV71活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式而非对本发明保护范围的限制,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,可以对本发明技术方案进行修改或等同替换,这些修改或等同替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.樟芝萃取物在制备抗A型流感病毒或肠病毒的药物组合物中的用途,所述药物组合物包含有效剂量的樟芝萃取物;其中,所述A型流感病毒为H1N1或H3N2,肠病毒为EV71;所述樟芝萃取物抗H1N1的有效浓度为3.125ug/ml~300ug/ml,抗H3N2的有效浓度为25ug/ml~300ug/ml,抗EV71的有效浓度为3.125ug/ml~300ug/ml。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于所述樟芝萃取物包含樟芝发酵液或樟芝菌丝体萃取液。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于所述樟芝萃取物以有机溶剂萃取。
4.如权利要求3所述的用途,其特征在于所述有机溶剂为乙酸乙酯。
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