CN102753144A - 炎性肠疾病的治疗 - Google Patents

Abstract

本文公开了利用下述化合物对炎性肠疾病的治疗：[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮。

Description

炎性肠疾病的治疗

发明领域

本发明关于一种为患有或易患炎性肠疾病的人和非人患者治疗的方法。

发明背景

肥大细胞介导的炎性病症(尤其是哮喘)是一个日益引起关注的公共健康问题。哮喘的特征通常为气管和支气管对免疫特异性过敏原和一般性化学或物理刺激的过度反应的进行性发展，这种进行性发展导致慢性炎症的发作。含有IgE受体的白细胞(尤其是肥大细胞和嗜碱性粒细胞)存在于支气管的上皮和下层平滑肌组织内。这些白细胞最初由吸入的特定IgE受体抗原的结合而激活，然后释放出许多化学介体。例如，肥大细胞的脱粒导致蛋白聚糖、过氧化物酶、芳基硫酸酯酶B、胃促胰酶和类胰蛋白酶的释放，结果造成细支气管的紧缩。

类胰蛋白酶储存于肥大细胞分泌颗粒内，是人肥大细胞的主要分泌蛋白酶。类胰蛋白酶涉及各种生物过程，包括使血管舒张和支气管舒张的神经肽的降解过程(Caughey,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1988,244,133-137页;Franconi,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1988,248,947-951页；以及Tam,etal.,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,1990,3,27-32页)以及对组胺的支气管应答的调节过程(Sekizawa,et al.,J.Clin.Invest.,1989,83,175-179页)。

因此，类胰蛋白酶抑制剂可作为抗炎药使用(K Rice,PA Sprengler,Current Opinion in Drug Discovery and Development,1999,2(5),463-474页)，尤其是在慢性哮喘的治疗方面(MQ Zhang,H.Timrnerman,MediatorsInflamm.,1997,112,311-317页)，且可能用于治疗或预防过敏性鼻炎(SJWilson et al,Clin.Exp.Allergy,1998,28,220-227页)、炎性肠疾病(SC Bischoffet al,Histopathology,1996,28,1-13页)、牛皮癣(A.Naukkarinen et al,Arch.Dermatol.Res.,1993,285,341-346页)、结膜炎(AAIrani et al,J.Allergy Clin.Immunol.,1990,86,34-40页)、特应性皮炎(A.Jarvikallio et al,Br.J.Dermatol.,1997,136,871-877页)、类风湿性关节炎(LC Tetlow et al,Ann.Rheum.Dis.,1998,54,549-555页)、骨关节炎(MG Buckley et al,J.Pathol.,1998,186,67-74页)、痛风性关节炎、类风湿性脊椎炎，以及破坏关节软骨的各种疾病。

此外，类胰蛋白酶已被证明是一种有效的成纤维细胞有丝分裂原，表明其涉及肺纤维化、哮喘和间质性肺病(Ruoss et al.,J.Clin.Invest.,1991,88,493-499页)。

因此，类胰蛋白酶抑制剂可用于治疗或预防纤维化症状(JA Cairns andAF Walls,J.Clin.Invest.,1997,99,1313-1321页)，例如纤维化、硬皮症、肺纤维化、肝硬化、心肌纤维化、神经纤维瘤和肥厚性瘢痕。

此外，类胰蛋白酶抑制剂可用于治疗或预防心肌梗塞、中风，心绞痛以及动脉粥样硬化斑块破裂的其他后果(M.Jeziorska et al,J.Pathol.,1997,182,115-122页)。

另外还发现，类胰蛋白酶可激活前基质溶素，后者又激活胶原酶，从而分别引起软骨和牙周结缔组织的损伤。

因此，类胰蛋白酶抑制剂可用于治疗或预防关节炎、牙周疾病、糖尿病视网膜病变以及肿瘤生长(WJ Beil et al,Exp.Hematol.,(1998)26,158-169页)。而且，类胰蛋白酶抑制剂可用于治疗过敏症(LB Schwarz et al,J.Clin.Invest.,1995,96,2702-2710页)、多发性硬化症(M.Steinhoff et al,Nat.Med.(NY),2000,6(2),151-158页)、消化性溃疡以及合胞病毒感染。

这种化合物应很容易用于为患者治疗可通过给药类胰蛋白酶抑制剂改善的症状，例如肥大细胞介导的发炎症状、炎症、以及与使血管舒张和支气管舒张的神经肽的降解过程相关的疾病或障碍，且对氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)的代谢具有降低的易感性。

尤其是，溃疡性结肠炎(UC)被认为是肥大细胞介导或改变的一种疾病：

·肥大细胞数量升高，且有证据显示UC患者肠粘膜内发生脱粒[World JGasteroenterol 2004,10(3),309-318]

·UC患者结肠组织中β-类胰蛋白酶显著增加[Scand J Gastroenterol2001,2,174-179]

·结肠内给药人β-类胰蛋白酶引起肠炎以及因PAR-2激活而使小鼠肠道渗透性增加[Am J Pathol 2002,161,1903-1915]

据报导，甲磺酸萘莫司他(Nafamostat mesilate,NM)在低剂量(Ki=95pM)时是一种选择性β-类胰蛋白酶抑制剂。在TNBS诱导的大鼠结肠炎模型中，对这种化合物进行了试验[Isozaki Y et al.Scand.J.Gast(2006),41:8,944-953]:

·每天在结肠内注射NM(10-9、10-11和10-13M)、5-ASA(25mg/Kg)或载体溶剂达6天。

·相对于假治疗大鼠，在TNBS的结肠粘膜内肥大细胞类胰蛋白酶增加。

·类似于5-ASA，NM显著地减轻了结肠粘膜发炎：

可注射的β-类胰蛋白酶抑制剂APC-2059临床研究的资料也提供了将类胰蛋白酶抑制剂用于UC的理论根据[Tremaine WJ et al.Aliment PharmacolTher 2002,16,407-413]

轻度至中度UC的第二期开放标签预实验：

ο入选标准：尽管经口服5-ASA治疗但仍有症状，疾病活动指数(DAI)为6-9

ο在口服5-ASA背景(患者现有治疗)的情况下给药APC-2059达28天(20mg，皮下，每日两次)

ο主要终点(EP)：DAI定义的应答≤3

ο次要终点：缓解(DAI=0)，改善(DAI≤3或从基线减少4点)

ο49/56名受试者完成研究(2例不良事件，1名失访(lost to f/u)，4名前期退出)

οAPC-2059安全且耐受性良好

ο主要终点：29%患者(16/56)达到”有应答”的主要终点

ο次要终点：9%(5/56)达到”缓解”标准，49%(27/56)达到”改善”标准

ο事后分析(post hoc)：与基线DAI评分为7-9(6/33，18%)相比，基线DAI评分为6-7具有较高应答率(10/22，45%)。一名基线DAI=11的患者无应答。

式I化合物是人β-类胰蛋白酶和小鼠MCPT-6(人β-类胰蛋白酶的小鼠直系同源物(othologue))的选择性和可逆性抑制剂，对重组酶的Ki分别为38和920nM。

发明内容

我们发现，式I化合物或其药学上可接受的盐，可用于治疗炎性肠疾病。

换言之，本发明涉及一种预防或治疗炎性肠疾病的药物，其含有式I所示的化合物或其盐作为活性成分。

本文还公开了一种治疗哺乳动物炎性肠疾病方法，所述方法包括给药药学有效量的如下式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。

发明内容

本发明涉及一种使用式I化合物治疗炎性肠疾病的方法：

式I

此化合物又称为[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮。

本发明涉及式I化合物，现发现它对炎性肠疾病动物模型是有效的。

本发明的另一方面为治疗炎性肠疾病的药物组合物。

本发明的另一方面为对于炎性肠疾病的治疗。

本发明的又一方面为总体上用β-类胰蛋白酶抑制剂对患者的炎性肠疾病的治疗。

发明详述

因此，在一个方面，本发明涉及药物组合物，其含有通式I所示的化合物，又称为：[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮。

在本说明书中，术语“本发明的化合物”及其相当的表述，意为包括上述通式为(I)的化合物，在上下文允许的情况下该表述还可包括其酯类前药、药学上可接受的盐以及溶剂合物，例如水合物。类似地，当提及中间体时，无论是否就其本身提出专利权要求，在上下文允许的情况下均意为包括它们的盐和溶剂合物。为了明晰起见，有时当上下文允许时会在文中举出某些具体例子，但这些例子纯粹是作为例证，并非旨在排除上下文允许的其他例子。

制备细节

式I化合物可通过应用或改进已知方法来制备，所谓已知方法是指此前用过的方法或文献中叙述的方法，例如R.C.Larock在Comprehensive OrganicTransformations,VCH publishers,1989中所述的那些方法，或本文所述的方法。

在以下所述的那些反应中，可能有必要保护某些活性官能团，例如氨基，以免它们不必要地参加这些反应。传统的保护基可按照标准的操作使用，例如可参阅T.W.Green and P.G.M.Wuts的“Protective Groups in OrganicChemistry”(“有机化学中的保护基”),John Wiley and Sons(1991)。

尤其是，式1的化合物可按照反应方程式1-2所示而制备。

例如，本发明的化合物是一种非手性化合物，它的制备包括汇聚式合成。本发明的化合物，以其苯甲酸盐的形式，按照如下反应方程式所示而制备。

反应方程式1

(i)氯甲酸乙酯，吡啶，THF，0°C，100%；(ii)a：sec-BuLi，THF，-78°C，b：I₂，THF，-78°C，52-68%；(iii)TMS-乙炔，TEA，CuI，Pd(PPh₃)₂Cl₂，已脱气THF，60°C，93%；(iv)KOH，t-BuOH，70°C，91%；(v)粉末KOH，2-甲氧基乙基溴，DMSO，室温，95%；(vi)TFAA，DMF，40°C，89%；(vii)5M NaOH，MeOH，85°C，96%；(viii)2,2,2-三氟-N-(氟-3-哌啶-4-基苄基)-乙酰胺盐酸盐，EDCI，TEA，CH₂Cl₂(DCM)，室温，99%；(ix)a：K₂CO₃，MeOH/H₂O，b：1M HCl的Et₂O溶液，90%。

利用氨基保护试剂如氯甲酸乙酯保护氨基，在适宜的碱如吡啶存在下，将化合物1转化为化合物2，生成被保护的化合物2。

以三步方法，将化合物2转化为化合物5。通过将化合物2与强碱如仲丁基锂反应形成阴离子，该阴离子与碘源如分子碘反应，使得化合物2在紧靠氨基甲酸酯的位置发生碘化，从而形成化合物3。然后，利用催化条件如碘化铜(I)和双(三苯基膦)二氯合钯(II)，在三甲基硅基乙炔和碱如三乙胺存在下，将化合物3转化为炔化合物4。使用强碱如氢氧化钾并加热而使化合物4环化，得到吲哚化合物5。

在强碱如氢氧化钾存在下，在偶极非质子溶剂如二甲基亚砜中，于室温，使用烷基卤化合物使吲哚中的氮烷基化，从而将化合物5转化为化合物6。

以两步方法，将化合物6转化为化合物8。首先，在溶剂如N,N-二甲基甲酰胺存在下并加热，用三氟乙酸酐处理化合物6，将化合物6转化为化合物7。用强碱如氢氧化钠处理化合物7，得到化合物8，它在其3位具有羧酸官能团。

在酸偶联试剂如EDCI和有机碱如三乙胺存在下，在惰性溶剂如二氯甲烷中，通过酸8与2,2,2-三氟-N-(氟-3-哌啶-4-基苄基)-乙酰胺盐酸盐(化合物14)反应，从而将化合物8转化为酰胺9。

在溶剂混合物如甲醇/水中，用弱碱如碳酸钾处理N-苄基三氟乙酰胺使其脱保护，从而将化合物9转化为化合物10。在极性有机溶剂如乙醚存在下，可以形成盐酸盐，得到化合物10，为式I的[4-(5-氨基甲基-2-氟-苯基)-哌啶-1-基]-[7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-甲基-1H-吲哚-3-基]-甲酮的盐酸盐。

此反应方程式的反应如下所示。

步骤A：(2-氟-5-三氟甲氧基苯基)-氨基甲酸乙酯(2)的制备

于0°C，经30分钟，向化合物1(50.72g，0.26mol)和吡啶(27.3mL，0.34mol)的THF(500mL)溶液中滴加氯甲酸乙酯(32.2mL，0.39mol)。1小时之后，LC/MS和TLC均表明反应已完全。将反应混合物在H₂O和EtOAc之间分配。将两层分离，并将有机层用1M HCl、H₂O以及盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc(95/5至70/30)为洗脱剂，得到69.23g(99%)产物2，为无色透明液体。¹H NMR(CDCl₃)δ8.11(br s，1H)，7.07(dd，J=9.1，9.3Hz，1H)，7.00-6.80(m，2H)，4.27(q，J=7.1Hz，2H)，1.33(t，J=7.1Hz，3H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.84(s，3F)，-134.01(br s，1F)；MS 309(M+CH3CN+1，100%)，268(M+1)。

步骤B：(6-氟-2-碘-3-三氟甲氧基苯基)-氨基甲酸乙酯(3)的制备

于-78°C，经1小时，向化合物2(31.34g，117.2mmol)的THF(180mL)溶液中滴加sec-BuLi(1.4M的环己烷溶液，200mL，280mmol)。20分钟之后，经30分钟滴加I₂(44.6g，175.8mmol)的THF(150mL)溶液。然后将此混合物于-78°C搅拌30分钟。加入饱和NH₄Cl，并移去冷浴。将反应混合物在H₂O和EtOAc之间分配。将两层分离，并将有机层用10%Na₂SO₃、H₂O以及盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物悬浮在DCM(50mL)中，并加入庚烷(300mL)。通过抽滤从生成的悬浮液中收集白色粉末3(18.1g，39%)并风干。将滤液真空浓缩，并将残余物悬浮在庚烷(200mL)中。通过抽滤收集另一批化合物3(3.8g，8%)并风干。以硅胶层析纯化滤液可获得另外的产物。¹H NMR(CDCl₃)δ7.30-17.10(m，2H)，6.16(br s，1H)，4.26(q，J=7.1Hz，2H)，1.32(t，J=7.1Hz，3H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-56.90(s，3F)，-114.35(d，J=8.5Hz，1F)；MS 394(M+1，100%)，374，364，321，267。

步骤C：(6-氟-3-三氟甲氧基-2-三甲基硅基乙炔基苯基)-氨基甲酸乙酯(4)的制备

将化合物3(18.1g，45.9mmol)、Et₃N(12.8mL，91.9mmol)、Pd(PPh)₂Cl₂(1.6g，5%mol)、CuI(0.7g，8%mol)以及TMS-乙炔(19.6mL，137.8mmol)在已脱气THF(180mL)中的混合物于60°C加热过夜。将此混合物冷却至室温，然后在H₂O和EtOAc分配之间。将此混合物通过硅藻土过滤以除去不溶物。将滤液的两层分离，并将有机层用H₂O和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc为洗脱剂，得到15.6g(93%)产物4，为米黄色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ7.15-7.00(m，2H)，6.41(br s，1H)，4.26(q，J=7.1Hz，2H)，1.31(t，J=7.1Hz，3H)，0.27(s，9H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.59(s，3F)，-118.15(s，1F)；MS 364(M+1，100%)。

步骤D：7-氟-4-三氟甲氧基-1H-吲哚(5)的制备

将化合物4(28.9g，79.6mmol)和KOH(35.7g，636.7mmol)在已脱气t-BuOH(300mL)中的混合物于70°C加热过夜。LC/MS表明反应已完全。将此混合物冷却至室温，然后在H₂O和Et₂O之间分配。将两层分离，用Et₂O(2X)萃取水层。将合并的有机层用H₂O和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc(100/0至60/40)为洗脱剂，得到16g(91%)化合物5，为黄色液体。¹H NMR(CDCl₃)δ8.47(br s，1H)，7.35-7.20(m，1H)，6.95-6.80(m，2H)，6.68(d，J=2.5Hz，1H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.63(s，3F)，-136.10(d，J=8.5Hz，1F)；MS 220(M+1，100%)，200。

步骤E：7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚(6)的制备

将化合物5(16g，72.8mmol)和粉末KOH(20.4g，364.2mmol)在DMSO(150mL)中的混合物于室温搅拌10分钟。加入2-甲氧基乙基溴(10.3mL，109.2mmol)。将此混合物于室温搅拌过夜。LC/MS表明反应已完全。将混合物在H₂O和Et₂O之间分配。将两层分离，用Et₂O(2X)萃取水层。将合并的有机层用H₂O和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc(100/0至50/50)为洗脱剂，得到19.3g(95%)化合物6，为黄色液体。¹H NMR(CDCl₃)δ7.15(d，J=2.1Hz，1H)，6.90-6.75(m，2H)，6.56(t，J=2.5Hz，1H)，3.72(t，J=5.2Hz，2H)，3.72(t，J=5.2Hz，2H)，3.31(s，3H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.54(s，3F)，-137.00(d，J=11.3Hz，1F)；MS 278(M+1，100%)。

步骤F：2,2,2-三氟-1-[7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]-乙酮(7)的制备

向化合物6(19.3g，69.7mmol)在DMF(135mL)中的混合物加入TFAA(26.2mL，188.2mmol)。将此混合物于40°C加热过夜。TLC表明反应已完全。将此混合物冷却至室温，然后在H₂O和Et₂O之间分配。将两层分离，并将有机层用饱和NaHCO₃(2X)、H₂O和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc(100/0至50/50)为洗脱剂，得到23.4g(89%)化合物7，为淡绿色固体.¹H NMR(CDCl₃)δ8.03(d，J=1.4Hz，1H)，7.20-6.95(m，2H)，4.54(t，J=4.9Hz，2H)，3.76(t，J=4.8Hz，2H)，3.33(s，3H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.74(s，3F)，-71.10(s，3F)，-134.95(d，J=11.5Hz，1F)；MS 374(M+1，100%)。

步骤G：7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-羧酸(8)的制备

将化合物7(23.4g，62.6mmol)在MeOH(100mL)和5M NaOH(100mL)中的混合物于80°C加热过夜。LC/MS表明反应已完全。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩以除去大部分MeOH。将残余物溶于H₂O，然后用Et₂O洗涤一次。用浓HCl将水层缓慢地酸化至pH~2。用Et₂O萃取酸化的悬浮液，并用H₂O和浓盐水洗涤有机萃取液，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物悬浮在DCM/庚烷(10/90)中。通过抽滤集悬浮液中的白色粉末8(19.4g，96%)并风干。¹H NMR(CDCl₃)δ8.02(s，1H)，7.15-7.05(m，1H)，7.00-6.90(m，1H)，4.49(t，J=5.0Hz，2H)，3.75(t，J=4.9Hz，2H)，3.33(s，3H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.74(s，3F)，-135.65(d，J=11.3Hz，1F)；MS 363(M+CH₃CN+1)，322(M+1，100%)。

步骤H：2,2,2-三氟-N-(4-氟-3-{1-[7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-羰基]-哌啶-4-基}-苄基)-乙酰胺(9)的制备

将化合物8(19.1g，59.6mmol)、Et₃N(24.8mL，177.9mmol)、2,2,2-三氟-N-(4-氟-3-哌啶-4-基苄基)-乙酰胺盐酸盐(11，26.4g，77.5mmol)(14)以及EDCI(17.1g，89.3mmol)在CH₂Cl₂中的混合物于室温搅拌过夜。TLC和LC/MS均表明反应已完全。将此混合物在H₂O和CH₂Cl₂之间分配。将两层分离，并将有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩。在硅胶上纯化粗产物，以庚烷/EtOAc(40/60至0/100)为洗脱剂，得到化合物9(36g，99%)，为白色泡沫。¹H NMR(CDCl₃)δ7.37(s，1H)，7.20-7.10(m，2H)，7.10-6.85(m，4H)，4.95(br s，1H)，4.60-4.35(m，4H)，3.90(br s，1H)，3.73(t，J=5.0Hz，2H)，3.32(s，3H)，3.25-2.70(m，3H)，2.05-1.50(m，4H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.54(s，3F)，-75.39(s，3F)，-119.31(s，1F)，-134.96(d，J=11.3Hz，1F)；MS 608(M+1，100%)。

步骤I：[4-(5-氨基甲基-2-氟-苯基)-哌啶-1-基]-[7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]-甲酮盐酸盐(10)的制备

向化合物9(36g，59.3mmol)在MeOH(400mL)中的混合物加入K₂CO₃水溶液(65.5g，474mmol，溶于120mL H₂O)。将此混合物于室温搅拌过夜。LC/MS表明反应已完全。将反应混合物真空浓缩以除去大部分甲醇。将残余物在H₂O和EtOAc之间分配。将两层分离，并将有机层用H₂O和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到27.5g(90%)化合物10，为无色透明粘胶。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.42(s，1H)，7.25-7.10(m，2H)，7.05-6.85(m，3H)，4.92(br s，1H)，4.46(t，J=5.2Hz，2H)，3.86(br s，3H)，3.74(t，J=5.1Hz，2H)，3.32(s，3H)，3.30-2.75(m，3H)，2.24(br s，2H)，2.05-1.55(m，4H)；¹⁹F NMR(CDCl₃)δ-57.52(s，3F)，-121.64(s，1F)，-136.03(d，J=11.3Hz，1F)；MS 512(M+1，100%)。

在上述物质(2.856g，5.59mmol)的Et₂O(30mL)溶液中滴加2NHCl/Et₂O(3mL，6mmol)。固体沉淀形成，倾析出乙醚溶液。再用一些Et₂O洗涤固体，然后再倾析。将剩余的淡黄色固体溶于热MeOH(10mL)，然后加入Et₂O(50mL)直至溶液略显混浊。大约2小时之后出现固体沉淀。再加入一些Et₂O(5-10mL)，然后将悬浮液放入冰箱过夜。收集白色晶状产物(2.475g，4.52mmol)，并在高真空中干燥4小时。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ8.32(br s，2H)，7.71(s，1H)，7.43(d，1H，J=7.2Hz)，7.36(m，1H)，7.26-7.20(m，1H)，7.12-7.08(m，2H)，4.49(t，J=5.1Hz，2H)，4.00(s，2H)，3.71(t，J=5.1Hz，2H)，3.32(s，3H)，3.21-3.07(m，3H)，2.99(br s，2H)，1.80-1.62(m，4H)；¹⁹F NMR(DMSO-d₆)δ-56.79(s，3F)，-119.34(s，1F)，-134.53(d，J=9.6Hz，1F)；MS 512(M+1，100%)。CHN：理论值：C 53.06％，H 5.16％，N 7.42%(以1.0H₂O计)。实验值：C 53.03％，H 4.82%，N 7.22，Cl 6.64%。

[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮苯甲酸盐(化合物10苯甲酸盐)

将已经盛有甲苯溶液(认为包含[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮(1320g，2.58mol))的20-L玻璃夹套反应器搅拌并加热至61°C。加入苯甲酸(316g，2.58mol)，在所有苯甲酸溶解之后，加入环己烷(6.04L)。将反应加热至77°C，在该温度用前一批[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮苯甲酸盐(0.100g)种晶。结晶于77°C进行，在15分钟之后，以-10°C/h的速率冷却反应。当反应达到61°C时，停止搅拌和冷却，并将反应冷却至室温。静置过夜后，恢复搅拌并以过滤收集产物。用从甲苯(3L)和环己烷(1.5L)配制的溶剂混合物洗涤滤饼。通过抽滤进行部分干燥之后，将此产物转移至干燥烘箱内于40°C干燥，得到[4-(5-氨基甲基-2-氟苯基)哌啶-1-基][7-氟-1-(2-甲氧基乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]甲酮苯甲酸盐，为无色固体：1408.8g(86%)，熔点=156-159°C。元素分析：C₂₅H₂₆F₅N₃O₃.C₇H₆O₂计算值：C，60.66；H，5.09；N，6.63。实验值：C，60.44；H，5.01；N，6.87。红外光谱特征(cm-1)：1612，1526，1511，1501，1394，1362，1256，1232，1211，1158，1117，999，826。

反应方程式2

3-溴-4-氟苄胺盐酸盐(Wychem)与吡啶-4-硼酸(Clariant或BoronMolecular)在沸点至少为异丙醇的沸点的醇溶剂(如正丙醇、正丁醇等)，极性非质子溶剂(如二甲基甲酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮、二甲亚砜等)，醚类溶剂(如2-甲基四氢呋喃、二甲氧基乙烷)等)中反应。在上述任何一种溶剂和水的混合物中，在适宜的催化剂(如1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物与二氯甲烷的络合物(PdCl₂dppf-CH₂Cl₂、Pd(PPh₃)₄、PdCl₂(PPh₃)₂、Pd(dtbpf)Cl₂等)存在下，将化合物12和化合物13从约70°C充分加热至Suzuki偶联反应混合物的沸点温度，得到吡啶。

在三氟乙酰基化条件下使用适宜的三氟乙酰基化试剂如三氟乙酸酐、三氟乙酰氟、五氟苯基三氟乙酸酯等，在三氟乙酰基化溶剂如酯溶剂如乙酸乙酯、乙酸异丙酯或类似物，芳香烃溶剂如甲苯或类似物，氯代烃溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或类似物中，于约-20至约30°C的三氟乙酰基化反应温度下反应，再用盐酸处理，此吡啶被转化为三氟乙酰胺化合物2,2,2-三氟-N-(4-氟-3-吡啶-4-基苄基)-乙酰胺盐酸盐。

在氢化催化剂如PtO₂、Pd/C、Pd(OH)₂、Rh/C等存在下，加或不加无机酸如HCl等或有机酸如乙酸等的情况下，在氢化反应溶剂如醇溶剂如乙醇、异丙醇等；或乙酸；或醇溶剂或乙酸和水的混合物中，于约10°C至约60°C的氢化反应温度下，以及约20至约1000psi的氢化压力下，在氢化条件下用氢处理，将2,2,2-三氟-N-(4-氟-3-吡啶-4-基苄基)-乙酰胺盐酸盐还原为化合物14。

本发明的化合物是碱性的，而且这种化合物以游离碱或以其药学上可接受的酸加成盐的形式存在时是很有用的。

酸加成盐可能是更便于使用的形式；实际上，以盐的形式使用在本质上相当于以游离碱的形式使用。用于制备酸加成盐的酸最好是这样一些酸，当它们与游离碱结合时，将形成药学上可接受的盐，换言之，在药用剂量条件下该盐的阴离子对患者无毒性，使得该游离碱内在的有益抑制作用不会因阴离子的副作用而受到损害。虽然上述碱性化合物的药学上可接受的盐是优选的，但所有的酸加成盐作为游离碱形式的来源都是有用的，即使是某种特定的盐本身只是作为中间产品，例如，当仅仅是出于纯化和鉴别的目的而制备该盐时，或当使用该盐作为中间体以离子交换步骤制备一种药学上可接受的盐时。属于本发明范围内的药学上可接受的盐包括从无机酸和有机酸衍生的各种盐，包括氢卤化物如盐酸盐和氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氨基磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、草酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸盐、苯甲酸盐、甲苯磺酸盐、龙胆酸盐、羟乙基磺酸盐、二对甲苯酰基酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐以及奎尼酸盐。一种优选的式I化合物的盐是盐酸盐。另一种优选的本发明的盐是式I化合物的富马酸盐。一种优选的本发明药学上可接受的盐是式I化合物的苯甲酸盐。

本发明的化合物的盐不但其本身作为活性化合物是很有用的，从纯化该化合物的目的而言，它们也是很有用的，例如，以本领域熟练技术人员众所周知的技术，利用该盐与母体化合物、副产物和/或初始材料之间在溶解性上的差别。

依照本发明的另一个特点，本发明的化合物的酸加成盐可通过应用或改进已知的方法通过游离碱与适当的酸进行反应来制备。例如，本发明的化合物的酸加成盐可通过以下任一步骤制备：或者是将该游离碱溶于水或醇的水溶液，或其他含有适当酸的适当溶剂，并通过蒸发该溶液而分离出该盐；或者是让该游离碱在有机溶剂中与酸反应，在此情况下可直接分离出该盐或可通过浓缩该溶液的方式而获得该盐。

本发明的化合物的酸加成盐可通过应用或改进已知的方法从盐再生。例如，通过用碱例如碳酸氢钠水溶液或氨水溶液处理，本发明的母体化合物可从它们的酸加成盐再生。

初始材料和中间体可通过应用或改进已知的方法来制备，例如对照实例中所述的方法或明显与它们相当的化学方法。

本发明还系关于如上反应方程式1中所示的某些中间体，就此而论，本文所述的这些中间体的制备过程构成了本发明的进一步特点。

缩写词表

如上文所用及贯穿本发明的说明，下列缩写词应被理解为具有以下含义，除非另行说明：

ACN     乙腈

AIBN    2,2'-偶氮二异丁腈

bid         每日两次

BOC或Boc    氨基甲酸叔丁酯

BOP         苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)鏻

n-Bu₃SnH    三正丁基锡氢

t-Bu        叔丁基

Cbz         氨基甲酸苄酯

PTC         相转移催化剂

DAST        (二乙氨基)三氟化硫(Et₂NSF₃)

DCC         二环己基碳二酰亚胺

DCM         二氯甲烷(CH₂Cl₂)

DIC         1,3-二异丙基碳二亚胺

DIPEA       二异丙基乙胺

DMAP        4-(N,N-二甲氨基)吡啶

DMP试剂     戴斯-马丁高碘烷试剂

DMF         二甲基甲酰胺

DMSO        二甲基亚砜

EA          元素分析

EDCI        1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐

eq          当量

Et          乙基

Et₂O        乙醚

EtOH        乙醇

EtOAc       乙酸乙酯

FMOC        9-芴基甲氧基羰基

HOAt        1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HOBT        1-羟基苯并三唑

HOSu        N-羟基琥珀酰胺

HPLC        高效液相层析法

LAH         氢化锂铝

Me          甲基

MeI         碘甲烷

MeOH       甲醇

MeOC(O)    氯甲酸甲酯

MOMCI      甲氧基甲基氯

MOM        甲氧基甲基

MS         质谱法

NaBH₄      硼氢化钠

Na₂C₄H₄O₆  酒石酸钠

NMR        核磁共振

P          聚合物键

PO         口服给药

PyBOP      苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐

TBD        1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]-癸-5-烯

RP-HPLC    反相高压液相层析法

TBSCI      叔丁基二甲基硅基氯

TCA        三氯乙酸

TFA        三氟乙酸

Tf₂O       三氟甲磺酸酐

THF        四氢呋喃

THP        四氢吡喃

TLC        薄层层析法

定义

如上文所用及贯穿本发明之说明，下列术语应被理解为具有以下含义，除非另行说明：

“酸性生物电子等排体”意指在化学和物理方面类似于羧基且其生物特性与羧基很类似的基团(参阅Lipinski,Annual Reports in Medicinal Chemistry,“Bioisosterism In Drug Design”(“药物设计中的生物电子等排性”)21,283(1986);Yun,Hwahak Sekye,“Application of Bioisosterism To New DrugDesign”(“生物电子等排性在新药物设计中的应用”)33,576-579,(1933);Zhao,Huaxue Tongbao,“Bioisosteric Replacement And Development Of LeadCompounds In Drug Design”(“药物设计中的生物等排取代与先导化合物的展开”)34-38,(1995);Graham,Theochem,“Theoretical Studies Applied To DrugDesign ab initio Electronic Distributions In Bioisosteres”(“理论研究用于药物设计：生物等排体中电子分布”)343,105-109,(1995))。代表性的酸性生物电子等排体包括-C(O)-NHOH、-C(O)-CH₂OH、-C(O)-CH₂SH、-C(O)-NH-CN、磺基、膦酰基、烷基磺酰基氨基甲酰基、四唑基、芳基磺酰基氨基甲酰基、N-甲氧基氨基甲酰基、杂芳基磺酰基氨基甲酰基、3-羟基-3-环丁烯-1,2-二酮、3,5-二氧代-1,2,4-

二唑烷基，或羟基杂芳基如3-羟基异唑基、3-羟基-1-甲基吡唑基等等。

“有效量”意为能有效地产生所希望治疗效果的本发明的化合物/组合物的量。

“水合物”是指其中的溶剂分子是H₂O的溶剂合物。

“患者”包括人和其他哺乳动物。

“药学上可接受的酯”是指可在体内水解并包括在人体内容易分解而剩下母体化合物或其盐的那些酯，适宜的酯基包括例如从药学上可接受的脂族羧酸尤其是链烷基羧酸、链烯基羧酸、环烷基羧酸以及烷基二羧酸所衍生的那些酯基，其中每个链烷基或链烯基有利地含有不超过6个碳原子。代表性的酯包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯、乙基琥珀酸酯，等等。

本文所述的“药学上可接受的前药”，是指本发明的化合物的这样一些前药：在合理的医学判断范围内，对于那些易呈现过度的毒性、刺激和过敏性反应等的患者，它们适合于与身体组织接触的用途，且具有合理的受益/风险比；而且，它们在本发明的化合物的预期用途方面是有效的。术语“前药”是指这样一些化合物，它们在体内迅速地转化，例如通过在血液中水解，从而产生具有上述结构式的母体化合物。可通过代谢裂解迅速地转化的官能团，在体内形成了一类能与本发明的化合物的羧基反应的基团。它们包括但不限于这样一类基团：烷酰基(如乙酰基、丙酰基、丁酰基等)、未取代的和取代的芳酰基(如苯甲酰基和取代的苯甲酰基)、烷氧基羰基(如乙氧基羰基)、三烷基硅基(如三甲基硅基和三乙基硅基)、与二羧酸形成的单酯(如丁二酰基)，等等。由于本发明的化合物的可代谢裂解基团易于在体内裂解，含有这类基团的化合物可像前药那样起作用。含有可代谢裂解基团的化合物的优点在于，由于该可代谢裂解基团的存在，提高了母体化合物的溶解性和/或吸收速率，故可显示出更好的生物利用度。以下文献提供了详尽的讨论：Design ofProdrugs(前药的设计),H.Bundgaard,ed.,Elsevier(1985);Methods inEnzymology(酵素化学之方法);K.Widder et al,Ed.,Academic Press,42,309-396(1985);A Textbook of Drug Design and Development(药物设计和研发教程),Krogsgaard-Larsen and H.Bandaged,ed.,Chapter 5;"Design andApplications of Prodrugs"(“前药的设计和应用”)113-191(1991);AdvancedDrug Delivery Reviews,H.Bundgard,8,1-38,(1992);J.Pharm.Sci.,77.,285(1988);Chem.Pharm.Bull.,N.Nakeya et al,32,692(1984)；Pro-drugs as NovelDeliver Systems(“作为新颖给药系统的前药”),T.Higuchi and V.Stella,14A.C.S.Symposium Series，以及Bioreversible Carriers in Drug Design(“药物设计中的生物可逆性载体”),E.B.Roche,ed.,American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press,1987，它们均通过引证纳入本文。

“药学上可接受的盐”是指相对无毒性的本发明的化合物的无机酸和有机酸加成盐以及碱加成盐。这些盐可在该化合物最终分离和纯化期间在现场制备。尤其是，酸加成盐可通过让游离碱形式的纯化后化合物与适当的有机或无机酸分别反应、然后分离所形成的盐来制备。代表性的酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐、氨基磺酸盐、丙二酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸盐、龙胆酸盐、羟乙基磺酸盐、二对甲苯酰基酒石酸盐、甲磺酸盐、乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐,、环己基氨基磺酸盐和月桂基磺酸盐，等等。参阅，例如S.M.Berge,et al.,“Pharmaceutical Salts”(“药用盐”),J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)，此文通过引证纳入本文。碱式加成盐也可通过让酸形式的纯化后化合物与适当的有机碱或无机碱分别反应，然后分离所形成的盐来制备。碱式加成盐包括药学上可接受的金属盐和胺盐。适当的金属盐包括钠、钾、钙、钡、锌、镁以及铝的盐。钠盐和钾盐是优选的。适当的无机碱式加成盐是从金属的碱制备的，金属碱包括氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌等。适宜的胺的碱式加成盐是从某些胺制备的，这些胺具有足够的碱性以形成稳定的盐，优选的包括医药化学中经常使用的那些胺因为它们具有适合于医学用途的低毒性和可接受性：氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、二乙胺、呱嗪、三(羟基甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵、三乙胺、二苄基胺、二苯羟甲胺、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苄基胺、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、乙胺、碱性氨基酸如赖氨酸和精氨酸，以及二环己基胺，等等。

“溶剂合物”意为本发明的化合物与一个或数个溶剂分子的物理性缔合。这种物理性缔合包括氢键键合。在某些情况下，例如当结晶固体的晶格内含有一个或数个溶剂分子时，溶剂合物可以被分离。“溶剂合物”包括溶液相以及可分离的溶剂合物。代表性的溶剂合物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物，等等。

术语“治疗”无论是名词还是动词均意为给药化合物以改善或预防一种病症或障碍。或减缓这种病症或障碍的发展。这些又称为降低某种病症或障碍的易感性。此术语还包括但不限于非治愈性的姑息性治疗。

实施例

以下是与本文叙述的发明相关的具体实施方案。

本发明的一个具体的实施方案，是一种治疗炎性肠疾病的方法，包括：给需要治疗的患者给药有效量的式I的化合物，或其对应的N-氧化物、前药、药学上可接受的盐或溶剂合物。

本发明的另一个具体的实施方案，是一种治疗炎性肠疾病的药物组合物，其含有式I化合物，或其对应的N-氧化物、前药、药学上可接受的盐，并与一种药学上可接受的赋形剂结合。.

本发明的另一个具体的实施方案，是一种治疗炎性肠疾病的方法，包括：给需要治疗的患者给药一种有效量的化合物，即β-类胰蛋白酶抑制剂。

本发明的化合物可任选地以盐的形式提供。药学上可接受的那些盐尤其令人感兴趣，因为它们在前述化合物的给药过程中可用于医学目的。非药学上可接受的盐可在制造过程中用于分离和提纯的目的，在某些情况下可用于分离本发明的化合物的立体异构形式。后一种情况对于从光学活性胺制备的胺盐而言尤其如此。

当本发明的化合物含有羧基或足够酸性的生物电子等排体时，可形成碱式加成盐，而且该盐是更便于使用的形式；实际上，使用盐的形式在本质上相当于使用游离酸形式。

同样，当本发明的化合物含有碱基或足够碱性的生物电子等排体时，可形成酸加成盐，而且该盐是更便于使用的形式；实际上，使用盐的形式在本质上相当于使用游离碱形式。

本发明的另一目的是提供药物组合物，它包含药学有效量的式1的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明的另一目的是提供药物组合物，它本身在一种有益的结合治疗中是有效的，因为它含有多种可依照本发明而利用的活性成分。

本发明还提供包括两种或多种活性成分的试剂盒或单一包装，可用于为患者治疗或预防黄斑变性。试剂盒可能提供式1的化合物(单独或与药学上可接受的稀释剂或载体结合)和其他的活性成分(单独或与药学上可接受的稀释剂或载体结合)。

式1的化合物可通过应用或改进已知的方法制备，如此前用过或文献中所述的方法，或通过本文所公开的方法。

在前述的任何应用中，式1的化合物的量可以是药学有效量或低于最佳的有效量，或两者的结合，只要这些成分的最终组合包含有效地治疗或预防患者黄斑变性的药学有效量的化合物。

药理学

本文所述的本发明的化合物因能抑制β-类胰蛋白酶故很有用，它们也可用于治疗炎性肠疾病。

本发明的一个特别方面提供了一种以药物组合物形式给药的本发明的化合物，尽管该化合物也可单独给药。取决于给药方式的性质、剂量和形式，“药物组合物”意为含有式1的化合物以及至少一种选自以下的组分的组合物：药学上可接受的载体、稀释剂、包衣、佐剂、赋形剂或媒介，如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、乳液稳定剂、悬浮剂、等渗剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、着色剂、抗细菌剂、抗真菌剂、其他治疗剂、润滑剂、吸附延缓或促进剂、以及分配剂。该组合物可以下列形式给药：片剂、丸剂、颗粒、粉剂、水溶液或悬浮液、注射溶液、酏剂、或糖浆。代表性的悬浮剂包括乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素，偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，或这些物质的混合物。代表性的预防微生物作用的抗细菌剂和抗真菌剂包括对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。代表性的等渗剂包括糖、氯化钠等等。代表性的用于延缓吸收的吸附延缓剂包括单硬脂酸铝和明胶。代表性的用于增加吸收的吸附促进剂包括二甲基亚砜和相关类似物。代表性的载体、稀释剂、溶剂、媒介、增溶剂、乳化剂和乳液稳定剂包括水、氯仿、蔗糖、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、四氢糠醇、苯甲酸苯甲酯、多元醇、丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、聚乙二醇、二甲基甲酰胺、

60，

60，鲸蜡醇/硬脂醇混合物、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠、失水山梨糖醇脂肪酸酯、植物油(如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)以及可注射的有机酯如油酸乙酯等，或这些物质的适当混合物。代表性的赋形剂包括乳糖、牛奶糖、柠檬酸钠、碳酸钙和磷酸氢钙。代表性的崩解剂包括淀粉、藻酸以及某些络合硅酸盐类。代表性的润滑剂包括硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、滑石粉，以及高分子量聚乙二醇。

其他治疗剂可与本发明的的化合物结合使用。与本发明的化合物结合使用的其他治疗剂可单独、同时或依次给药。除式1的化合物以外药物组合物中其他物质的选择，通常取决于活性化合物的化学性质如可溶性、给药的特定方式和用药过程中须遵守的规定。例如，某些赋形剂如乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙，某些崩解剂如淀粉、藻酸以及某些与如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠及滑石粉等润滑剂相结合的络合硅酸盐类都可用于制备片剂。

药物组合物可以下列各种形式给药：片剂、丸剂、颗粒、粉剂、水溶液或悬浮液、注射溶液、酏剂、或糖浆。

“液体剂型”意为欲向患者给药的活性化合物的剂量是处于液态，例如药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物之外，液体剂型可含有本领域内常用的惰性稀释剂，例如溶剂、增溶剂和乳化剂等。

固体组合物也可作为软填充的明胶胶囊和硬填充的明胶胶囊的填充剂，以乳糖、牛奶糖以及高分子量聚乙二醇等为赋形剂。

当使用水基悬浮液时，它们可含有乳化剂或促进悬浮的试剂。

乳液药物组合物的油相可以已知的方式由已知的成分构成。虽然该油相可仅由乳化剂组成，但它最好含有由至少一种乳化剂与脂肪或油，或与脂肪和油两者所组成的混合物。在一项具体的实施方案中，亲水乳化剂与作为稳定剂的亲脂乳化剂一起使用。该乳化剂单独或与稳定剂一起构成乳化蜡，与油和脂肪一起则构成乳化软膏基质，后者形成乳膏制剂的油性分散相。

如果需要，乳膏基质的水相可包括例如至少30%w/w的多元醇，即含有两个或两个以上羟基的醇，如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部应用的制剂可理想地含有能促进活性成分吸收或促进活性成分穿透皮肤或其他受影响部位的化合物。

适合于某种制剂的油类或脂肪的选择是基于能否达到理想的性质。因此，该乳膏最好应是一种非油脂、不着色及容易洗去的产品，并具有适当的稠度以避免从管或其他容器中渗漏。直链或支链、一元或二元的烷基酯如豆蔻酸二异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸-2-乙基己酯或被称为Crodamol CAP的支链酯混合物均可使用。取决于所需的性质，这些助剂可单独使用或结合使用。或者，也可使用高熔点脂质如白色软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。

实际上，本发明的化合物/药物组合物可以一种适合于人和动物的制剂形式，通过局部性或全身性给药方式给药，包括口服、吸入、直肠、鼻腔、口腔、舌下、阴道、结肠、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉、皮内、鞘内和硬膜外)、脑池内，以及腹腔内给药。应该理解，优选的途径可随例如受药者的身体状况而改变。

“药学上可接受的剂型”系指本发明的化合物的剂型，包括例如片剂、糖衣丸、粉剂、酏剂、糖浆、包括悬浮液在内的液体制剂、喷雾剂、吸入片剂、锭剂、乳液、溶液、颗粒、胶囊和栓剂，以及用于注射的液体制剂，包括脂质体制剂。其技术和配方通常可在雷氏药学大全(Remington's PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,latest edition)中找到。

“适合于口腔给药的制剂”可制成独立的单元如每剂含有预定量活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂；或粉末或颗粒；或水性或非水性溶液或悬浮液；或水包油乳液或油包水乳液。活性成分也可制成大丸剂、药糖剂或糊剂。

片剂可以压制或模制的方式制备，还可任选地含有一种或多种辅助成分。压制片剂可通过将活性成分以自由流动形式如粉末或颗粒，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合，再在适当的机器中压制而成。模制片剂可通过用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物混合物在适当的机器中模制而成。片剂可任选地包覆或刻痕，也可配制成使所含活性成分得以缓慢地或控制性释放。

用于直肠给药的固体组合物包括按照已知方法配制的栓剂，并含有至少一种本发明的化合物。

如果需要，并为了更有效地分布，该化合物可用缓释或靶向给药的体系微囊密封或附着于一种缓释或靶向给药的体系，例如生物相容的、可生物降解的聚合物基质(如聚d,l-乳酸/羟基乙酸共聚物)、脂质体和微球体，并通过一种被称为皮下或肌内贮库的技术进行皮下注射或肌内注射，使该化合物在两周或更长时间内得以持续缓慢地释放。该化合物可以各种方式灭菌，例如，通过除菌滤器过滤，或将除菌剂以无菌固体组合物形式加入，其可在使用前立即溶于无菌水或其他无菌注射介质。

“适合于经鼻腔或吸入途径给药的制剂”意为适合于经鼻腔或吸入途径给患者给药的制剂形式。此制剂可含有粉末状载体，其粒径为例如1至500微米的范围(包括20和500微米之间的范围，以5微米为增量，例如30微米、35微米等)。其载体为液体的适当制剂，例如作为鼻腔喷剂或鼻腔滴剂而给药的药剂，包括活性成分的水溶液或油溶液。适合于以气雾剂方式给药的药剂可按照传统方法制备，并可与其他治疗剂一起给药。吸入治疗剂可容易地通过计量吸入器给药。

“适合于口腔给药的制剂”意为适合于经口腔给患者给药的制剂形式。该制剂可制成所需的独立单元如每剂含有预定量活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂；或粉末或颗粒；或水性或非水性溶液或悬浮液；或水包油乳液或油包水乳液。活性成分也可制成大丸剂、药糖剂或糊剂。

“适合于肠胃外给药的制剂”意为适合于给患者肠胃外给药的制剂形式。此制剂是无菌的，且包括乳液、悬浮液、水性与非水性注射溶液，可含有悬浮剂和增稠剂以及抗氧剂、缓冲液、抑菌剂，以及使该制剂与预期受药者的血液等渗，并调节至适当pH值的溶质。

“适合于直肠或阴道给药的制剂”意为适合于经直肠或阴道给患者给药的制剂形式。栓剂是这类制剂的一种具体形式，可将本发明的化合物与适当的无刺激性赋形剂或载体如可哥脂、聚乙二醇或某种栓剂用蜡混合的方式来制备。这些赋形剂或载体在常温下是固体但在体温下成为液体，因此可在直肠或阴道腔中融化并释放活性组分。

“适合于全身性给药的制剂”意为适合于给患者全身性给药的制剂形式。此制剂最好是以包括肌肉、静脉内、腹腔内和皮下注射在内的注射方式给药。为了注射，本发明的化合物可配制在液体溶液中，尤其是生理上相容的缓冲液如汉克(Hank)溶液或林格氏(Ringer)溶液中。此外，该化合物可配制成固态形式并在紧接使用之前再重新溶解或悬浮。冻干的形式也包括在内。全身性给药也可采取经粘膜或经皮的方式，或者该化合物也可经口腔途径给药。对于经粘膜或经皮方式给药，在制剂中使用适合于欲穿透障碍的渗透剂。这类渗透剂是本领域内周知的，且包括用于经粘膜给药的例如胆汁盐和梭链孢酸衍生物。此外，还可使用洗净剂促进渗透。经粘膜给药可通过使用例如鼻腔喷剂或栓剂来实现。对于经口给药方式，该化合物被配制成常规的经口给药形式如胶囊、片剂以及滋补剂。

“适合于局部给药的制剂”意为适合于给患者局部给药的制剂形式。可将此制剂配制成本领域内众所周知的局部使用的软膏、油膏、粉剂、喷雾剂和吸入剂、凝胶剂(水基或醇基)、乳膏；或者，加入一种基质以贴片形式敷用，使得化合物可经由皮肤障碍控制性释放。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，活性成分可以水包油乳膏基质配制成乳膏。适合于在眼睛里局部给药的制剂包括滴眼剂，其中活性成分系溶解或悬浮于一种适当的载体中，尤其是适合于该活性成分的水性溶剂。适合于在口腔内局部给药的制剂包括调味基质中含有活性成分的锭剂，该基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；还包括惰性基质中含有活性成分的软锭剂(pastille)，该惰性基质的例子为明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；还包括在适当液体载体中含有活性成分的漱口剂。

“固体剂型”意为本发明的化合物的剂型是固态形式，例如胶囊、片剂、丸剂、粉末、糖衣丸或颗粒。在这种固体剂型中，本发明的化合物与至少一种常用的惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸氢钙或(a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，(c)保湿剂，例如甘油，(d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些络合的硅酸盐类和碳酸钠，(e)溶液阻滞剂，例如石蜡，(f)吸收促进剂，例如季铵化合物，(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸附剂，例如高岭土和膨润土，(i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，(j)遮光剂，(k)缓冲剂，以及可在肠道内某一部分以缓释方式释放本发明的化合物的试剂。

本发明的组合物所含活性成分的实际剂量水准可以改变，以便确定活性成分的疗效量，使得患者对某种特定的组合物和给药方法产生理想的治疗反应。因此，为任何具体患者选择的剂量水准取决于各种因素，包括所希望的治疗作用、给药途径、所希望的治疗持续时间、疾病的病因和严重性、患者的病情、体重、性别、饮食和年龄、每种活性成分的类型和效价、吸收、代谢和/或排泄的速率及其它因素。

患者每日单次或分次服用的本发明的化合物的日总剂量可以是，例如，每天按每千克体重计约0.001至约100mg/kg，优选的是0.01至10mg/kg。例如，一个成年人每日按每千克体重计的吸入剂量通常是约0.01至100mg/kg，优选的是约0.01至约10mg/kg；每日按每千克体重计的口服剂量是约0.01至100mg/kg，优选的是约0.1至70mg/kg；尤其优选的是0.5至10mg/kg；每日按每千克体重计的静脉内给制剂量是约0.01至约50mg/kg，优选的是0.01至10mg/kg。组合物中活性组分的百分比可以改变，但它仍应构成一定的比例，以获得某一适当的剂量。单位剂量组合物的量可以是每日剂量的一部分，由若干单位剂量组成每日剂量。显然，几种单位剂量形式可在几乎同时给药。为了获得理想的治疗效果，可以根据需要而频繁地给药某一剂量。某些患者可能会对较高或较低的剂量迅速地作出反应，也可能会发现低得多的维持剂量就已经足够。对于另一些患者，可能有必要按照每个具体患者的生理要求，进行每日1至4剂的长期治疗。自不待言，对于另一些患者，将有必要规定每日不超过一剂或两剂。

该制剂可用药剂学领域中众所周知的任何方法制备成单位剂量形式。这些方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，这些制剂通过将活性组分与液体载体或磨得很细的固体载体或这两者一起均匀和密切地结合，然后，若有必要，使产品成形而制备。

这些制剂可置于单位剂量或多剂量容器内，例如密封的安瓿和带胶塞的管形瓶，并可在冻干(冷冻干燥)条件下储存，只需在即将使用之前加入无菌液状载体如注射用水。即时的注射溶液和悬浮液可从前述的那类无菌粉末、颗粒和片剂制备。

根据文献和下文所述的试验，本发明范围内的化合物展示了显著的药理学活性，该试验结果据信是与人和其他哺乳动物的药理学活性相关的。

就化学反应在本发明的化合物制备方面最广义的应用而言，以上引述的参考文献只是一般性地披露了其所述的化学反应。有时，上述化学反应对本文所披露化合物范围内的每种化合物可能并非都适用。出现这种情况的化合物将为本领域熟练技术人员很容易地识别。在所有这类情况下，或者可以通过本领域熟练技术人员周知的常规性修改措施例如适当保护干扰基团、通过改用替代的常规反应剂、通过例行的修改反应条件等等而成功地实现这些反应；或者将本文披露的其他反应或其他常规反应应用于本发明相应化合物的制备。在所有的制备方法中，所有初始原料均是已知的或可从已知的初始原料制备。

用本发明的化合物和/或组合物治疗肾小球性肾炎患者时，所采用的疗法是根据各种因素而选择的，包括年龄、体重、性别、饮食以及患者的病情、感染的严重性、给药途径、药理学方面的考量如所用具体化合物的活性、功效、药代动力学和毒性，以及是否使用某种给药系统等因素。本文披露的药物组合的给药通常应持续一段时期直至被接受，显示疾病已被控制或根除。接受本文所披露的药物组合治疗的患者可通过以常规方法测量肾功能而得到定期监护，以确定治疗的有效性。对于用这些方法所获数据的连续分析，使得可对治疗期间治疗方案做出修改，从而使药物组合中每种组分的给药量达到最优量，还有助于确定治疗的持续时间。因此，在治疗过程中可合理地修改治疗方案/给药计划，使得药物组合中每种化合物的给药量为最低却又能展现出令人满意的效果，并可根据成功治愈肾病所必需的时间来决定药物组合中这些化合物的用药期需持续多久。

式I化合物是人β-类胰蛋白酶抑制剂和小鼠MCPT-6(人β-类胰蛋白酶的小鼠直系同源物)的选择性和可逆性抑制剂，对重组酶的Ki分别为38和920nM。

式I化合物在鼠科TNBS引起的溃疡性结肠炎中的作用。

已知通过结肠蛋白的半抗原化，TNBS(三硝基苯磺酸)能引起某些种系小鼠和大鼠的结肠炎，从而产生免疫应答。此模型与人炎性肠疾病(IBD)(尤其是节段性回肠炎)在许多特征上都相似，包括组织学和免疫学特征。

试验方案：

在某些实验中，于试验开始7天前用1%TNBS经表皮给药使雄性balb/小鼠预敏化。在第0日，用TBNS(2.5mg/100mcl)的35%乙醇溶液或100mg/kgTNBS的50%乙醇溶液经直肠给药，并于4日后测量与结肠炎相关的读数。将在1%羧甲基纤维素-吐温中的式I化合物的盐酸盐或富马酸盐经口给药。给予100mg/kg柳氮磺吡啶(sulfazalazine)。两种化合物均每日给药一次。

目视评分：

结果：

当剂量范围为3-30mg/kg时，式I化合物使目视损伤减少约20-50%。此化合物还在实验性结肠炎的多方面显示了保护作用，与柳氮磺吡啶阳性对照相当。

其结果如表1所示。

表I

上述数据表明使用式I化合物(以及其他类胰蛋白酶抑制剂)来治疗IBD(节段性回肠炎和溃疡性结肠炎)的有用性。

目前的IBD治疗由5-ASA(柳氮磺吡啶)作为一线治疗构成，且使用甾体化合物控制红肿(flares)。已知5-ASA最多只能显示中度功效，甾体化合物的使用则受多种毒性的限制。抗-TNFα用于对口服治疗无反应的患者。手术用于突发性或顽固性病例。式I化合物的潜在优势包括比5-ASA更好的疗效，比甾体化合物更安全，以及相对于抗-TNFα治疗可口服给药。

本发明也可以其他特定形式实施而不背离其精神或基本属性。

Claims (3)

1.一种治疗肠疾病的方法，包括向需要治疗的患者给药有效量的式I化合物：

式I

或其对应的N-氧化物、前药，或药学上可接受的盐或溶剂合物。

2.用于治疗炎性肠疾病的药物组合物，其包含式I化合物，或其对应的N-氧化物、前药、药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。

3.一种治疗患有或易患可通过给药药学有效量的式I化合物而改善的疾病的人或非人动物患者的方法：

式I

其中所述疾病选自节段性回肠炎和溃疡性结肠炎。