CN102749298A

CN102749298A - 虾中铅的测定方法

Info

Publication number: CN102749298A
Application number: CN2012102378896A
Authority: CN
Inventors: 钟耀广; 何平
Original assignee: Shanghai Maritime University
Current assignee: Shanghai Maritime University
Priority date: 2012-07-10
Filing date: 2012-07-10
Publication date: 2012-10-24
Anticipated expiration: 2032-07-10
Also published as: CN102749298B

Abstract

一种虾中铅的测定方法，包括：（a）制备样品：虾肉在坩埚中先炭化，然后灰化，调pH，制成样液a；移取样液a于比色管中，加入Na₂CO₃，离心，弃上清液；然后加入NaOH，混匀，离心取上清液移入比色管中，制成待测样液b。（b）制备标准曲线：制备系列浓度的铅标准液，移入比色管，依次加入显色剂，氢氧化钠，然后放入沸水浴中加热，再冷却至室温，加增敏剂，最后定容，测其吸光度，绘制标准曲线。（c）检测结果：移取样液b于比色管中，加入显色剂，然后将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，测其吸光值，得出铅含量。本发明操作简单提高了准确性。

Description

虾中铅的测定方法

技术领域

本发明涉及一种铅的测定方法，具体涉及一种虾中铅的测定方法，属于食品检验的技术领域。

背景技术

目前，有关铅浓度的检测方法已经很多，常用的有分子光谱法、火焰原子吸收光谱法、石墨炉原子吸收光谱法、氢化物-原子荧光光谱法等。

火焰原子吸收光谱法、石墨炉原子吸收光谱法和氢化物-原子荧光光谱法仪器昂贵，成本高，无法广泛应用到实际检测中，而分光光度法成本相对低，操作也简单。

测铅的新型显色剂Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉被称为“超高灵敏显色剂”，常被用在水中铅的快速检测中。但是显色反应条件为强碱性，此条件下，样品中的钙镁等离子会生成沉淀，干扰检测结果，而且受分光光度计本生的检测限限制，无法满足国标中对虾中铅最低限的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供虾中铅的测定方法，以解决现有技术所存在的诸多不足之处。本发明用沉淀的方法对虾中铅进行了富集，采用Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉分光光度法检测虾中铅的含量，并避免使用催化剂8-羟基喹啉，简化操作步骤，提高方法准确性，本发明适用于规模化检测。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

虾中铅的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）制备样品：

取虾肉在坩埚中先炭化，然后置马弗炉中灰化，取出坩埚，放冷后再加硝酸，加热直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，用碱调节样液的pH，移入容量瓶用去离子水定容，制成样液a；

移取样液a于3只比色管中，分别加入的Na₂CO₃，然后分别移入1、2、3号离心管，离心，弃上清液；

在1号离心管加入氢氧化钠，混匀，离心，取上清液倒入2号离心管，混匀，离心，取上清液倒入3号离心管，混匀，离心，取上清液移入比色管中，此操作重复3次，制成待测样液b；

（b）制备标准曲线：

移取铅标准液于容量瓶中，用去离子水定容，得到铅标准系列，然后移入比色管中，依次加入显色剂，氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，用去离子水定容，用试剂空白作参比，在分光光度计中，470~490nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线；

（c）检测结果：

移取样液b于比色管中，然后加入显色剂，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，用试剂空白作参比，470~490nm处测其吸光值，根据标准曲线得出样液中铅含量。

步骤（a）中，所述马弗炉的温度为400~600℃，灰化时间为4~10h。

步骤（a）中，所述虾肉：硝酸=10~40g：1.00~5.00ml。

步骤（a）中，所述碱为氢氧化钠，所述pH为2~5。

步骤（a）中，所述容量瓶为50ml。

步骤（a）中，所述移取样液a为5.00~20.00ml。

步骤（a）中，所述Na₂CO₃的浓度为0.01~1mol/l，体积为1.00~5.00ml。

步骤（a）中，所述离心2~10min，转速为3000~8000rpm。

步骤（a）中，所述的氢氧化钠浓度为0.1~1mol/l，体积为1.00~5.00ml。

步骤（b）和（c）中，所述显色剂为Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉。

步骤（b）中，铅标准液定容得到浓度为0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.30μg/ml、0.40μg/ml、0.50μg/ml、0.60μg/ml、0.70μg/ml、0.80μg/ml、0.90μg/ml、1.00μg/ml铅标准系列。

步骤（b）中，然后，容量瓶的体积为10ml，移入比色管中的铅标准液为1.00~10.00ml，显色剂浓度为0.01%~0.05%，体积为0.50~10.00ml，氢氧化钠浓度为0.1~1mol/l，体积为2.00~10.00ml。

步骤（b）和（c）中，所述沸水浴中加热时间为1~30min。

步骤（b）和（c）中，所述增敏剂为1%~20%曲拉通X-100（OP），体积为1.00~5.00ml。

步骤（c）中，移取样液b 1.00~10.00ml于比色管中，然后加入0.50~10.00ml显色剂。

本发明的有益效果：

本发明采用的显色剂Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉被称为“超高灵敏显色剂”，常被用在水中铅的快速检测中。本发明采用的沉淀法不仅对待测样液进行了富集，克服了仪器及显色剂检测限的局限，同时避免了钙镁等离子对检测结果的干扰，并使操作更加简单易操作，同时节约了成本。

附图说明

以下结合附图和具体实施方式来进一步说明本发明。

图1为本发明的工艺流程图。

图2为本发明的显色剂和络合物的的光谱扫描图。

图3为本发明的T(DBHP)P用量的影响图。

图4为本发明的NaOH用量的影响图。

图5为本发明的OP用量的影响图。

图6为本发明的温度的影响图。

图7为本发明的时间的影响图。

图8为本发明的标准曲线图。

图9为本发明的标准曲线图。

具体实施方式

为了使本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。

实施例1 虾中铅的测定方法的影响因素

（1）测定显色剂及其络合物的吸收曲线，获得最大吸收波长。只要分别把把显色剂和络合物放入比色皿中，用分光光度计进行波长扫描即可，只要操作人员会使用分光光度计就可以。

通过络合物最大波长的选择实验，显色剂Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉的最大吸收波长为380nm，而生成的络合物的吸收峰在479nm处，见图2，系列1为显色剂的吸收光谱，系列2为生成络合物的吸收光谱。

（2）分别研究显色剂用量、pH值调节剂、增敏剂用量、反应温度、时间对反应的影响。具体操作是其他条件不变，单因素改变。

1）显色剂用量的选择

在6只比色管中依次各加入4.00ml 1μg/ml铅标准溶液，1.00ml氢氧化钠溶液（0.3mol/l），0.50ml、0.80ml、1.30ml、1.50ml、1.80ml、2.00ml T(DBHP)P（0.016%），混匀后放入沸水浴中加热5min，加入1.00ml OP(5%)，用水定容至10.00ml，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果如图3。

2）氢氧化钠用量选择

吸取4.00ml 1μg/ml铅标准溶液于8支比色管中，分别加入T(DBHP)P（0.016%）1.0ml，依次再加入氢氧化钠溶液（0.3mol/l）0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.70ml、0.80ml、1.00ml、1.20ml，混匀后放入沸水浴中加热5min，加入1.00ml OP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果见图4。

3）增敏剂用量的选择

吸取4.00mL 1μg/ml铅标准溶液于8支比色管中，各加入T(DBHP)P（0.016%）1.50ml，氢氧化钠溶液（0.3mol/l）0.50mL，混匀后放入沸水浴中加热5min，分别加入0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.50ml、0.60ml、0.70ml、0.80ml、1.00ml OP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，见图5。

4）反应温度的选择

吸取4.00ml 1μg/ml铅标准溶液于6支比色管中，各加入T(DBHP)P（0.016%）1.50ml，氢氧化钠溶液（0.3mol/l）0.50mL，混匀后放入水浴锅中加热5min，温度分别设定为25℃、40℃、55℃、70℃、85℃、100℃，然后加入1.00ml OP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，见图6。

5）时间对反应的影响

吸取4.00ml 1μg/ml铅标准溶液于5支比色管中，分别加入T(DBHP)P（0.016%）1.50ml，氢氧化钠溶液（0.3mol/l）0.5ml，混匀后放入沸水浴中加热，加热时间分别设定为1min、2min、3min、4min、5min，加入1.00mLOP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果见图7。

实施例2 本发明的检测应用

虾中铅的测定方法，如图1所示，包括以下步骤：

（a）制备样品：取虾肉20~25g于坩埚中，先炭化，然后置马弗炉中550℃，灰化5h，取出坩埚，放冷后再加1.00ml硝酸，小火加热不是干涸，直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，用2.88mol/l氢氧化钠调节样液的pH至2~5，移入50ml容量瓶用去离子水定容，制成样液a；

移取样液a 10.00ml于3只比色管中，分别加入的Na₂CO₃，然后分别移入1、2、3号离心管，离心，弃上清液；

在1号离心管加入氢氧化钠（2.00ml 0.3mol/l），混匀，离心，取上清液倒入2号离心管，混匀，5000rpm离心3min，取上清液倒入3号离心管，混匀，5000rpm离心3min，取上清液移入比色管中，此操作重复3次，制成待测样液b。

（b）制备标准曲线：移取浓度为10.0μg/ml铅标准液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00ml于8个10ml比色管中，移取铅标准液于10ml容量瓶中，用去离子水定容得到浓度为0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.30μg/ml、0.40μg/ml、0.50μg/ml、0.60μg/ml、0.70μg/ml、0.80μg/ml、0.90μg/ml、1.00μg/ml铅标准系列.移入比色管中的铅标准液为4ml，然后依次加入1.50ml显色剂，2.00ml 0.3mol/l的氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热3min，放冷水中冷却至室温，用5%曲拉通X-100（OP）定容，用试剂空白调零，479nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线，见图8。

（c）检测结果：移取待测样液b 6.00ml于比色管中，然后依次加入1.50ml显色剂，将比色管放入沸水浴中加热3min，放冷水中冷却至室温，加1.00ml 5%曲拉通X-100（OP），最后用去离子水定容，用试剂空白调零，479nm处测其吸光值为0.035，根据标准曲线得出样液b中铅含量为0.037μg/ml，计算得出虾中铅的含量为0.099mg/kg。

步骤（b）和（c）中，显色剂为Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉。使用剂量为1.50ml 0.016% Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉。

实施例3本发明与石墨炉原子吸收光谱法应用的比较

石墨炉原子吸收光谱法的主要步骤：

（a）样品制备

取虾肉5.00~10.00g在坩埚中先炭化，然后置马弗炉中灰化，取出坩埚，放冷后再加硝酸，加热直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，再用去离子水反复洗涤坩埚，洗液并入25ml容量瓶中，定容至刻度，备用。

（b）测定

仪器条件：波长283.3nm，狭缝0.2nm~1.0nm，灯电流5mA~7mA，干燥温度120℃，20s;灰化温度450℃，持续15s，原子化温度2000℃，持续4s，背景矫正为氘灯。

标准曲线的绘制：吸取系列铅标准10.0，20.0，40.0，60.0，80.0，100.0ng/ml各10μl，注入石墨炉，测得吸光度值，并制成标准曲线，如图9。

试样的测定：分别吸取样液和试剂空白各10μl，注入石墨炉，测得吸光度值，代入标准曲线，求得样液中铅的含量，见表1。

本发明与石墨炉原子吸收光谱法的对比，见表2。

表1 石墨炉原子吸收光谱法的检测结果

表2 本发明与石墨炉原子吸收光谱法的比较

比较项目	本发明方法	石墨炉原子吸收法
			检出限	0.035(μg/L)	0.7ng/L
精密度	1.2	5.6
			回收率	83.5~93.3	85.3~101.2

本发明用沉淀法对待测样液进行了富集，采用显色剂Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉分光光度法对虾中铅进行了检测。沉淀法不仅对待测样液进行了富集，克服了仪器及显色剂检测限的局限，同时避免了钙镁等离子对检测结果的干扰，提高了结果的准确性。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims

1.虾中铅的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）制备样品：

（b）制备标准曲线：

移取铅标准液于容量瓶中，然后用去离子水定容，得到铅标准系列，然后移入比色管中，依次加入显色剂，氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，用去离子水定容，以试剂空白作参比，在分光光度计中，470~490nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线；

（c）检测结果：

移取样液b于比色管中，然后加入显色剂，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，以试剂空白作参比调零，470~490nm处测其吸光值，根据标准曲线得出样液中铅含量。

2.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述马弗炉的温度为400~600℃，灰化时间为4~10h。

3.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述虾肉：硝酸=10~40g：1.00~5.00ml。

4.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述碱为氢氧化钠，所述pH为2~5。

5.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述容量瓶为50ml。

6.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述移取样液a为5.00~20.00ml。

7.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述Na₂CO₃的浓度为0.01~1.0mol/l，体积为1.00~5.00ml。

8.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述离心2~10min，转速为3000~8000rpm。

9.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（a）中，所述的氢氧化钠浓度为0.1~1.0mol/l，体积为1.00~5.00ml。

10.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（b）和（c）中，所述显色剂为Meso-四-（3，5-二溴-4-羟基苯）卟啉。

11.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（b）中，铅标准液定容得到浓度为0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.30μg/ml、0.40μg/ml、0.50μg/ml、0.60μg/ml、0.70μg/ml、0.80μg/ml、0.90μg/ml、1.00μg/ml铅标准系列。

12.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（b）中，容量瓶的体积为10ml，移入比色管中的铅标准液为1.0~10.0ml，显色剂的浓度为0.01%~0.05%，体积为0.50~10.00ml，氢氧化钠浓度为0.1~1.0mol/l，体积为2.00~10.00ml。

13.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（b）和（c）中，所述沸水浴中加热时间为1~30min。

14.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（b）和（c）中，所述增敏剂为1%~20%曲拉通X-100（OP），体积为1.00~5.00ml。

15.根据权利要求1所述的虾中铅的测定方法，其特征在于：步骤（c）中，移取样液b1.00~10.00ml于比色管中，然后加入0.50~10.00ml显色剂。