CN102746385B - 胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一类含有天然或者非天然氨基酸取代的胸腺素α1活性片段的环肽类衍生物，其制备方法，含他们的药物组合物，及它们在治疗或预防免疫缺陷、免疫功能低下等相关疾病的药物。

Description

胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物

本发明是申请号为201110034234.4的母案的分案申请，该母案的申请日为2004年12月1日，发明名称为“胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物”；并且申请号为201110034234.4的申请的母案的申请号为200410096459.2，申请日为2004年12月1日，发明名称为“胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物”。 

发明领域

本发明涉及天然或非天然氨基酸取代的胸腺素α1活性片段和环肽类似物，及其聚乙二醇化衍生物，及其制备方法，含他们的药物组合物及其在治疗或者预防与免疫缺陷、免疫功能低下等有关疾病当中的用途。 

背景技术

胸腺素α1(Tα1)是一种重要的多肽类免疫调节因子,具有显著的增强免疫功能的作用是一种针对T淋巴细胞的免疫增强剂，能促进T细胞的成熟和分化，并且促使成熟的淋巴细胞分泌多种淋巴因子（如白介素－2和γ－干扰素等）还能促进白介素－2受体的生成。Tα1由28个氨基酸残基组成，分子量3108，等电点4.2，N-端为乙酰化结构，其氨基酸序列如下： 

Ac－Ser－Asp－Ala－Ala－Val－Asp－Thr－Ser－Ser－Glu－Ile－Thr－Thr－Lys－Asp－Leu－Lys－Glu－Lys－Lys－Glu－Val－Val－Glu－Glu－Ala－Glu－Asp－OH 

近年来，Tα1的研究主要集中于临床应用，关于其构效关系的研究报道不多。1980年，Wong等合成Tα₁和desAc-Tα1₁,通过体外的硫唑嘌呤抑制E-玫瑰花结形成试验显示它们的活性与天然Tα₁相当,说明Tα₁的N-端乙酰化与否对其活性无影响。除Frasca等报道Tα₁的N-端片段1-14能在成年大鼠(6-18月)体内促进IL-2受体表达，增强辅助性T细胞的活性外，其它研究表明Tα₁的N-端片段基本上无活性，C-端部分片段具有较好的活性。Abiko等用体外的E-玫瑰花结形成试验证实Tα₁的某些C-端片段具有部分活性：Tα1(100%)，14-28(9.83%),19-28(1.04%)。Felix等用体内的免疫抑制小鼠试验证实 N-端片段1-4、4-10、1-10和1-14基本无活性；C-端片段15-28和18-28与Tα₁活性相当；21-28(75%)、23-28(50%)和25-28(50%)具有部分活性。Ciaredelli等用体外的混合淋巴细胞增殖试验(MLC)证实Tα₁的C-端20-26、25-27及25-28具有约90%活性。Ho等报道C-端片段13-19与Tα₁在体外具有相同的促脐带血T淋巴细胞分化成熟的活性，20-25和20-28具有部分活性。Ciaredelli等用体外的硫唑呤抑制E-玫瑰花结形成试验发现C-端17-28区域部分片段有较好的活性。 

Grottesi等通过圆二色谱(CD)和2D-NMR对Tα₁在溶液中的构象进行了研究，结果表明：Tα₁在水溶液中并不形成优势的二级构象，但在疏水环境中能形成一定的二级结构。在40%的三氟乙醇（TFE）水溶液中，Val⁵和Glu⁸之间形成β-转角，Lys¹⁷和Glu²⁴之间形成α-螺旋。由于Tα₁受体结构还尚未被发现，Grottesi等推测Tα₁与淋巴细胞的作用机制可能是：Tα₁首先通过极性氨基酸残基与细胞膜形成静电作用，然后诱导Lys¹⁷至Glu²⁴之间序列形成α-螺旋结构并嵌入细胞膜，进而与IL-2受体跨膜区发生静电作用。这一作用模型有助于解释Tα₁与IL-2在生物活性中的协同作用。 

病毒性乙型肝炎和丙型肝炎可以导致肝硬化引起肝癌，全球目前有3.5亿乙型肝炎病毒携带者和1.5亿丙型肝炎携带者。我国是乙肝大国，有1.2亿以上的乙型肝炎携带者，有三千万以上的乙型肝炎患者，化学合成的Tα₁(日达仙)已于1996年首先在中国上市，单独使用或与α-干扰素联合使用治疗慢性乙型肝炎。日达仙在治疗乙型肝炎方面的疗效等同于或好于现有处方药品。日达仙对于许多其它疾病(如丙型肝炎、非小细胞肺癌、黑色素瘤和艾滋病等)都有一定的疗效。另外，日达仙还可作为疫苗辅助药，来加强流感疫苗和乙型肝炎疫苗的免疫效果。目前，日达仙正在美国进行治疗HCV的3期临床试验和治疗肝癌的2期临床试验，治疗HBV的3期临床试验正在日本进行，治疗恶性黑色素瘤的2期临床试验正在欧洲进行。由此可见，研究Tα1及其类似物，寻找更高效的免疫增强剂和抗病毒药具有良好的前景。 

目前临床使用的Tα1(日达仙）为化学合成品，价格昂贵、用药剂量大、周期长，因此进行构效关系研究发现更好的类似物有较好的应用前景。与其它肽类药物一样，Tα1具有诸如半衰期短、在体内易被降解等缺点，因此设计活性高、抗体内降解的Tα1类似物具有十分重要的意义。 

发明内容

本发明人及其所在实验室研究现已发现Tα1及其衍生物具有良好的预防或治疗免疫缺陷、免疫功能低下有关疾病的生物活性，它们与聚乙二醇形成的衍生物在能够保持活性的同时，延长了如下（Ⅰ）、(Ⅳ)、(Ⅶ)、（Ⅷ）组的化合物在体内代谢的半衰期，从而降低了如下（Ⅰ）、(Ⅳ)、(Ⅶ)、（Ⅷ）组的化合物的用量并且延长了其在体内作用时间。 

具体的，本发明涉及如下所示的Tα1活性片段衍生物及其立体异构体。 

本发明的一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其为（I）组的化合物： 

X₁-Y₁-Y₂-X₂

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇（Ⅰ） 

其中，X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇独立地为L-或D-型的天然或非天然的碱性、酸性或芳香性氨基酸及其衍生物，所述碱性氨基酸选自Arg、Lys、Glu、Cys、His、Trp、Mob、Nal、Pya、Phe（X）、和Phg（X），其中X为氢、卤素、硝基、羧基、或C1－C4烷基任选的单取代或者二取代，取代基选自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO₂；酸性氨基酸选自：Asp、Glu、His、Tyr、Trp、Mob、Nal、Pya、和Phg（X），其中X为氢、卤素、硝基、羧基、或C1－C4烷基任选的单取代或者二取代，取代基选自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO₂； 

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄独立的为L-或D-型的天然或非天然中性、亲脂性或者芳香性氨基酸及其衍生物，选自Gly、Ala、β-Ala、GABA、Val、Leu、Ile、Pro、His、Tyr、Trp、Mob、Nal、Pya、Phe（X）、Phg（X），其中X为氢、卤素、硝基、羧基、或C1－C4烷基任选的单取代或者二取代，取代基选自H、4-F、3-F、2-F、4-Cl、2-Cl、4-Br、2-Br、3-Br、2、5-2Cl、4-F、3-Cl、3-NO₂。 

本发明的另一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中上述（I）组中的化合物中任意位点的氨基经过PEG修饰，成为如下的（II）组所示的化合物，其中所述氨基包括N－端氨基和氨基酸侧链氨基： 

[PE G-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-Y₁-Y₂-X₂

[PE G-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

[PE G-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

[PE G-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

[PE G-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇(Ⅱ) 

其中PEG表示：RO(CH₂CH₂O)_n－CH₂CH₂,R=H或C和CH₃,其中n＝5－1000；X＝O、NH或NHCO;m＝0－6；Z=1-3、X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇，Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如上述所示。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中（I）组化合物的任意位点的羧基经PEG共价修饰为如下所示的（III）组的化合物，其中所述羧基包括C－端羧基，天冬氨酸和谷氨酸侧链羧基： 

[PEG-X-CO]_z-X₁-Y₁-Y₂-X₂

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

[PEG-X-CO]_z-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇（Ⅲ） 

其中X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如前述所示，X=O或NH，Z＝1－3。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中在（I）组化合物所示肽序列中任意位置，包括N端和C端以及肽片段中引入半胱氨酸，形成如下所示的（IV）组的化合物： 

Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇（Ⅳ） 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立 体异构体，其进一步将所述（IV）组的化合物经选自PEG-MAL、PEG-VS和PEG-IODS的方法修饰后形成如下所示的（V）组的化合物，其中PEG可以为链状、星状、环状、多臂型结构： 

PEG-M-Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

PEG-M-Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

PEG-M-Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇（Ⅴ）， 

其中 

Cys为半胱氨酸，通过侧链硫原子和M基团共价相连；X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如前述。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中在所述（I）组的化合物之C端引入亲电性基团或者亲核性基团，而对应在N端引入相反的亲核性基团或者亲电性基团，得到如下所示的（Ⅵ）组的化合物，其中所述亲核试剂选自碘负离子、 水、羟基负离子、甲氧基负离子、乙酰基负离子、氨基、硝酸根负离子、亚硝酸根负离子、叠氮基负离子、氰基负离子、1－丙炔基负离子、丙二酸二甲酯负离子、巯基负离子、甲硫基负离子、硫氰基负离子、二甲硫醚、三甲磷；所述亲电试剂选自硫代羧基乙酰氨、卤素、无机酸、有机酸、醛、活泼酮、羧酸、酯、硝基化合物： 

Z₁-X₁-Y₁-Y₂-X₂-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇-Z₂

Z₁-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇-Z₂（Ⅵ）， 

其中Z₁和Z₂为一组具有亲核性基团和亲电性基团的氨基酸残基或者其它片段，当Z₁带有亲核性基团时Z₂带有亲电性基团，当Z₁带有亲电性基团时Z₂带有亲核性基团。 

优选的，上述四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其为： 

CEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEVVEE-SCH₂CH₂CONH₂

CEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEVVEKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEVVEEAE-SCH₂CH₂CONH₂

CKEVVEEA-SCH₂CH₂CONH₂，或 

CKEVVEEAEN-SCH₂CH₂CONH₂。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中在（IV）和（VI）组的化合物的任意位点引入脂肪族链、脂肪醚链、硫醚链、氨基酸以及其它柔性的链状结构单元，得到如下所示的（Ⅶ）组的化合物： 

Cys-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇

Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇

Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇， 

或者是以下结构： 

Z₁-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇-Z₂

Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇-Z₂

Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇-Z₂（Ⅶ） 

其中，L表示任何柔性的链状结构单元，n＝1－4，以上通式中所示的L所在位点并不是可以引入的唯一位点，L可以在肽序列中除两端以外的任意位置。 

优选的，本发明所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其包括： 

CLEVVE 

CLKEVVE 

CLKKEVVE 

CLKEVVEE 

CLEKKEVVE 

CLKEKKEVVE 

CLKEVVEKEVVE 

CLKEVVEEAE 

CLKEVVEEA 

CLKEVVEEAEN 

CLLEVVE 

CLLKEVVE 

CLLKKEVVE 

CLLKEVVEE 

CLLEKKEVVE 

CLLKEKKEVVE 

CLLKEVVEKEVVE 

CLLKEVVEEAE 

CLLKEVVEEA 

CLLKEVVEEAEN， 

或者是以下结构的化合物： 

CLEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVEE-SCH₂CH₂CONH₂

CLEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVEKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVEEAE-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVEEA-SCH₂CH₂CONH₂

CLKEVVEEAEN-SCH₂CH₂CONH₂

CLLEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVEE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEKKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVEKEVVE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVEEAE-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVEEA-SCH₂CH₂CONH₂

CLLKEVVEEAEN-SCH₂CH₂CONH₂，其中，L= 

-NHCH₂CH₂OCH₂COO-。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中将任一前述（Ⅰ）、（Ⅳ）、（Ⅶ）组的化合物以任何已知的环合方法进行环合，得到（VIII）组所示的环状化合物： 

环（X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

环（X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

或是以下结构： 

环(Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆) 

环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇) 

环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇) 

或者是以下化合物： 

环（Z₁-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇）（Ⅷ） 

其中，X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如前述所示，Z₁的定义如前述所示、L_n的定义如前述所示。 

优选的，本发明所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其为以下结构： 

环（EVVE） 

环（KEVVE） 

环（KKEVVE） 

环（KEVVEE） 

环（EKKEVVE） 

环（KEKKEVVE） 

环（KEVVEKEVVE） 

环（KEVVEEAE） 

环（KEVVEEA） 

环（KEVVEEAEN） 

或者是 

环（CEVVE） 

环（CKEVVE） 

环（CKKEVVE） 

环（CKEVVEE） 

环（CEKKEVVE） 

环（CKEKKEVVE） 

环（CKEVVEKEVVE） 

环（CKEVVEEAE） 

环（CKEVVEEA） 

环（CKEVVEEAEN） 

或者是： 

环（CLEVVE） 

环（CL KEVVE） 

环（CLKKEVVE） 

环（CLKEVVEE） 

环（CLEKKEVVE） 

环（CLKEKKEVVE） 

环（CLKEVVEKEVVE） 

环（CLKEVVEEAE） 

环（CLKEVVEEA） 

环（CLKEVVEEAEN） 

或者是： 

环（CLLEVVE） 

环（CLLKEVVE） 

环（CLLKKEVVE） 

环（CLLKEVVEE） 

环（CLLEKKEVVE） 

环（CLLKEKKEVVE） 

环（CLLKEVVEKEVVE） 

环（CLLKEVVEEAE） 

环（CLLKEVVEEA） 

环（CLLKEVVEEAEN）。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中所述（Ⅷ）组的化合物中任意位点的氨基经过PEG修饰的，得到如下所示（XI）组的化合物，其中所述氨基包括N－端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的侧链氨基， 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇) 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇) 

或者是： 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n -X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

[PEG-X-(CH₂)_MCO-NH]_Z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇）（XI）， 

其中所述PEG表示：RO(CH₂CH₂O)_n－CH₂CH₂,R=H或C和CH₃，n＝5－1000；X＝O、NH或NHCO;m＝0－6；Z=1-3、X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如前述所示,Z₁、L_n的定义如前述所示。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，包括以下化合物： 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVEE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVEKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVEEAE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVEEA） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CKEVVEEAEN） 

或者是以下结构： 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CL KEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEVVEE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEVVEKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEVVEEAE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEVVEEA） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLKEVVEEAEN） 

或者是以下结构的化合物： 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVEE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEKKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVEKEVVE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVEEAE） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVEEA） 

PEG-CH₂CH₂-X-(CH₂)_mCO-环（CLLKEVVEEAEN） 

其中，X=O、NH、或NHCO；M＝0－6。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中（VIII）组的化合物中任意位点的羧基经过PEG修饰，得到如下（IX）所示的化合物，其中所述氨基包括C－端氨基和天然氨基酸或者非天然氨基酸的侧链羧基： 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

[PEG-X-C O]_z-环（X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

[PEG-X-CO]_z-环（X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4–X₇） 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃) 

[PE G-X-C O]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅) 

[PE G-X-C O]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄) 

[PE G-X-C O]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅) 

[PE G-X-C O]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇) 

[PEG-X-CO]_z-环(Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇)或者是以下结构： 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

[PEG-X-CO]_z-环（Z₁-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

[PE G-X-C O]_z-环（Z₁-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y3-Y4-X₇）（Ⅸ） 

其中，X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如权利要求1所示，Z₁、L_n的定义如前述所示；X=O或NH，Z＝1－3。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，选自： 

[PEG-X-CO]_z-环（EVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVEE） 

[PEG-X-CO]_z环（EKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVEKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVEEAE） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVEEA） 

[PEG-X-CO]_z环（KEVVEEAEN） 

[PEG-X-CO]_z-环（CEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVEE） 

[PEG-X-CO]_z环（CEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVEKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVEEAE） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVEEA） 

[PEG-X-CO]_z环（CKEVVEEAEN） 

或者是以下结构： 

[PEG-X-CO]_z环（CLEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVEE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVEKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVEEAE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVEEA） 

[PEG-X-CO]_z环（CLKEVVEEAEN） 

或者是以下结构的化合物： 

[PEG-X-CO]_z环（CLLEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVEE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEKKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVEKEVVE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVEEAE） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVEEA） 

[PEG-X-CO]_z环（CLLKEVVEEAEN）。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其中（VIII）组的化合物在肽序列或已有半胱氨酸位置或序列中任意位置引入半胱氨酸后，经选自PEG-MAL,PEG-VS和PEG-IODS的方法修饰，得到如下所示的（X）组的化合物，其中PEG可以为链状、星状、环状、多臂型结构： 

PEG-M-环（Cys-X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

也可以是以下结构： 

PE G-M-环（Cys-L_n-X₁-Y₁-Y₂-X₂） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃） 

PE G-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₃-X₄-Y₃-X₅-Y₄） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-Y₃-X₆-Y₄） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-Y₁-Y₂-X₇） 

PEG-M-环（Cys-X₁-X₂-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-Y₁-Y₂-X₄-X₅-X₆-Y₃-Y₄-X₇） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-Y₁-Y₂-X₅） 

PEG-M-环（Cys-L_n-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-Y₁-Y₂-X₆）（Ⅹ） 

其中， 

其中X₁、Z₁可以为半胱氨酸，通过侧链硫原子和M基团共价相连；X₁、X₂、Y₁、Y₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇,Y₁、Y₂、Y₃、Y₄的定义如前述所示，Z₁、L_n的定义如前述所示。 

本发明的又一个方面涉及如下所述的四肽至十一肽衍生物及其立体异构体，其选自： 

[PEG-M]-环（CEVVE） 

[PEG-M]-环（CKEVVE） 

[PEG-M]-环（CKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CKEVVEE） 

[PEG-M]-环（CEKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CKEKKEVVE） 

[PEG-M]环（CKEVVEKEVVE） 

[PEG-M]环（CKEVVEEAE） 

[PEG-M]-环（CKEVVEEA） 

[PEG-M]-环（CKEVVEEAEN） 

或者是以下结构： 

[PEG-M]-环（CLEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKEVVEE） 

[PEG-M]-环（CLEKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKEKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKEVVEKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLKEVVEEAE） 

[PEG-M]-环（CLKEVVEEA） 

[PEG-M]-环（CLKEVVEEAEN） 

或者是以下结构的化合物： 

[PEG-M]-环（CLLEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVEE） 

[PEG-M]环（CLLEKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKEKKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVEKEVVE） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVEEAE） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVEEA） 

[PEG-M]-环（CLLKEVVEEAEN）。 

本发明还涉及至少一种选自上述（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）、、（Ⅳ）、（Ⅴ）、（Ⅵ）、（Ⅶ）、（Ⅷ）、（Ⅸ）、（Ⅹ）组的化合物或其任一组合在制备用于治疗和／或预防免疫缺陷或免疫力低下有关疾病的药物中用途。 

本发明还涉及药物组合物，其中包括至少一种选自上述（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）、（Ⅳ）、（Ⅴ）、（Ⅵ）、（Ⅶ）、（Ⅷ）、（Ⅸ）、（Ⅹ）组的化合物，及药用载体或赋形剂。 

本发明还涉及制备上述（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）、、（Ⅳ）、（Ⅴ）、（Ⅵ）、（Ⅶ）、（Ⅷ）、（Ⅸ）、（Ⅹ）组的化合物的方法，其包括用已知的溶液法和固相法合成。 

本发明所用的PEG-OH结构为：RO(CH₂CH₂O)NCH₂CH₂OH，其中R=H或者CH₃，平均分子量由几百到几万的PEG-OH可以作为商品化试剂购买到，PEG-NH₂、PEG-NHCOCH₂CH₂COOH可以通过如下途径反应获得： 

具体的，在PEG的一端先引入氨基、羧基或制备PEG化的氨基酸，再用溶液法或者固相合成法偶联到肽序列中去，可实现对多肽的N-端氨基，C-端羧基，Lys侧链氨基，Asp或Glu侧链羧基的修饰，将PEG-NH₂与马来酸酐，乙烯基亚砜、碘代乙酸酐反应可得到PEG-MAL、PEG-VS、PEG-IODO。 

本发明所涉及的Wang Resin、MBHA Resin、DCC、HOBt、HBTU、BOP、Fmoc氨基酸、BOC保护氨基酸，TFA、DIEA、m PEG-OH、NMM等试剂均通过购买获得。所有非天然氨基酸均由本实验室合成并拆分。 

根据本发明，与免疫缺陷或免疫功能低下有关的疾病有：乙型肝炎、丙型肝炎、非小细胞肺癌、黑色素瘤、艾滋病等。 

根据本发明，所用的术语如Tα1（17－27），指的是在Tα1中从N-端到C－端相应位置的序列。 

本发明所示（I）－（Ⅹ）组的Tα1活性片段衍生物及其立体异构体或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。 

给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。 

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子，包括例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳 糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸钙、氯化钠、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式（I）－（Ⅹ）T α1活性片段衍生物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分（I）－（Ⅹ）组的三肽衍生物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中制成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。 

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。 

本发明（I）－（Ⅹ）组的化合物，衍生物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗（I）－（Ⅹ）组的Tα1活性片段衍生物疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、在、四个剂量形式给药。 

在本发明中使用的缩写具有下面的含义： 

本发明中，所有氨基酸构型除注明为D-型外，均为L-型。 

实施例 

下列实施例代表本发明的说明性实施方案，但并不意味本发明受此实施例的限制。 

实施例所用的固相合成载体Wang树脂从ACT公司购得，DCC、HOBt、HBTU、Fmoc保护氨基酸均由上海吉尔生化购得，TFA为ACROS公司产品，平均分子量为2000的PEG-OH为Sigma公司产品。 

实施例1 

BocNHCH₂CH₂OCH₂COOH的合成： 

●BocNHCH₂CH₂OH的合成 

将水30ml加入250ml反应器中，NH₂CH₂CH₂OH6.1g（100mmol）加入反应器中，冷却到0℃。在冰浴条件下，（Boc）₂O21.82g（100mmol）溶于30ml二氧六环中加入到反应器中，控制温度在0℃以下，滴加1mol/LnaOH溶液100ml，40min滴加完，自然升至室温，继续反应12小时，（Boc）₂O消失，停止反应，点板检测，反应液用乙酸乙酯萃取三次，用饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na₂SO4干燥，减压蒸干，得到15.6g无色油状物，收率97.2％。 

●BocNHCH₂CH₂OCH₂COOH的合成 

于500ml三口瓶中加入重蒸DMF350ml，BocNH₂CH₂OH10.54g（0.1mol），加入NaH（52％）8.15g（0.2mol），至溶液中无气泡冒出，然后滴加BrCH₂COOH13.65g（0.15mmol）的DMF溶液，室温 搅拌20小时，进行处理，减压蒸去DMF，以适量水溶解，用适量乙醚萃取两次，水相用饱和硫酸钠调节pH值于2－3之间，用乙酸乙酯萃取水相三次，然后用饱和NaCl溶液洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压蒸干，得到5.51g浅黄色油状物，收率38％。 

实施例2： 

Cys－Glu－Val－Val－Glu－SCH₂CH₂CONH₂的合成： 

350mgMBHA树脂（负载量为0.57mmol/g，0.2mmol），悬浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL3-巯基丙酸（1.2mmol），160mg DCC,加入少量的DCM溶解充分，在室温下磁力搅拌4个小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗涤两次，每次两分钟。茚三酮检验呈阴性。然后用50mg半胱氨酸甲酯盐酸盐（0.2mmol），100mg（0.2mmol）三苯基磷和120μlDIEA（0.2mmol）混合溶于DMF，五分钟后加入树脂中，室温反应两小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤各两次，4倍量的BOC保护的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分钟后混合物加入到反应器中，室温反应2小时，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤，用定性的Ellman实验检测，阴性溶液树脂为无色或淡黄色，如果呈橘红色则再以上述缩合配料量减半反应一个小时，应用BOC/Bzl固相缩合体系从C端逐步延长肽链，以4NHCl/DIOX（0.05％吲哚）脱保护，缩合反应以2倍量的BOC-AA与2倍量的DCC/HOBt反应1小时，每步缩合均用茚三酮实验检测，如果为阳性则再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反应半个小时，肽链合成结束以后，线性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol（93/2/5，v/v/v），在0℃反应1.5小时后从树脂上切下，HF抽干后用钠丝干燥的冰冻的无水乙醚洗涤数次，用10％的冰醋酸提取粗肽，冻干保存。 

实施例三：环（CEVVE）的合成： 

350mgMBHA树脂（负载量为0.57mmol/g，0.2mmol），悬浮于 DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL3-巯基丙酸（1.2mmol），160mg DCC,加入少量的DCM溶解充分，在室温下磁力搅拌4个小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗涤两次，每次两分钟。茚三酮检验呈阴性。然后用50mg半胱氨酸甲酯盐酸盐（0.2mmol），100mg（0.2mmol）三苯基磷和120μlDIEA（0.2mmol）混合溶于DMF，五分钟后加入树脂中，室温反应两小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤各两次，4倍量的BOC保护的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分钟后混合物加入到反应器中，室温反应2小时，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤，用定性的Ellman实验检测，阴性溶液树脂为无色或淡黄色，如果呈橘红色则再以上述缩合配料量减半反应一个小时，应用BOC/BZL固相缩合体系从C端逐步延长肽链，以4NHCl/DIOX（0.05％吲哚）脱保护，缩合反应以2倍量的BOC-AA与2倍量的DCC/HOBt反应1小时，每步缩合均用茚三酮实验检测，如果为阳性则再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反应半个小时，肽链合成结束以后，线性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol（93/2/5，v/v/v），在0℃反应1.5小时后从树脂上切下，HF抽干后用钠丝干燥的冰冻的无水乙醚洗涤数次，用10％的冰醋酸提取粗肽，冻干保存。也可将环合的缓冲溶液直接提取线性肽硫酯进行环合反应。如果肽硫酯溶解度不好，还可以考虑使用CH₃CN/H₂O提取粗肽，然后减压抽去CH₃CN后冻干保存。 

线性肽硫酯在用凝胶柱层析初步纯化或者HPLC纯化后进行环合反应，反应在NaHCO₃的水溶液中进行，如果溶解度不好可以适当加入CH₃CN的浓度，控制pH值在7.3-7.6，加入TCEP防止巯基的氧化，反应由HPLC监控，反应在4小时内完成，产物用ESI－MS进行鉴定。 

实施例四：PEG-MAL-环（CKEVVEE的合成 

1 mPEG₅₀₀₀-MAL的合成 

称取mPEG₅₀₀₀–OH20g(4mmol)置于250ml反应瓶中，加入100ml CH₂Cl₂，固体溶解后再加入3.0ml Et₃N(20mmmol)和3.8g Ts-Cl(20mmol),室温搅拌反应。TLC(CH₃OH:CH₂Cl₂=1:6）监测反应完全后，旋转蒸发除去溶剂，加100ml无水乙醚沉淀出固体，再用无水乙醇重结晶两次，得15.2g mPEG₅₀₀₀-OTs，收率70%。 

将15g mPEG₅₀₀₀-OTs(3mmol)溶于30ml DMF，加入1.68g（18mmol）邻苯二甲酰亚胺钾盐，在N₂保护下，120℃反应4小时。减压蒸去溶剂，将残余物溶于50ml无水乙醇，加入2.0ml水合肼，回流反应4小时。旋转蒸发除去溶剂，将残余物溶于CH₂Cl₂，过滤除去不溶物，再将滤液旋转蒸发除去溶剂，用无水乙醚沉淀出固体，再以无水乙醇-乙醚重结晶，得12.5g mPEG₅₀₀₀-NH₂,收率83%。 

将1.25g mPEG₅₀₀₀-NH₂溶于10ml二氧六环，加入马来酸酐0.1g，80°C搅拌反应30min。减压蒸去溶剂，加入50ml无水乙醚，冷却沉淀出固体，滤集固体，干燥后得1.10g。将所得固体溶于15ml乙酸酐，加入0.5g乙酸钠，100°C搅拌反应45min。减压蒸去溶剂，将残余物用二氯甲烷溶解，滤去不溶物，向滤液中加入适量活性炭，放置30min，滤除活性炭，将滤液浓缩至干，加入无水乙醚，沉淀出固体，滤集、干燥后得浅黄色固体0.61g mPEG₅₀₀₀-MAL，收率48%。RP-HPLC分析:t_R=36.79min。 

色谱条件：Waters600HPLC 

色谱柱:Inersil ODS-3(10×250mm）紫外检测波长：215nm 

流动相：A-0.05%TFA/H₂OB-0.05%TFA/70%CH₃CN/H₂O 

流速：2.0mL/min 

350mgMBHA树脂（负载量为0.57mmol/g，0.2mmol），悬浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL3-巯基丙酸（1.2mmol）， 160mg DCC,加入少量的DCM溶解充分，在室温下磁力搅拌4个小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗涤两次，每次两分钟。茚三酮检验呈阴性。然后用50mg半胱氨酸甲酯盐酸盐（0.2mmol），100mg（0.2mmol）三苯基磷和120μlDIEA（0.2mmol）混合溶于DMF，五分钟后加入树脂中，室温反应两小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤各两次，4倍量的BOC保护的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分钟后混合物加入到反应器中，室温反应2小时，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤，用定性的Ellman实验检测，阴性溶液树脂为无色或淡黄色，如果呈橘红色则再以上述缩合配料量减半反应一个小时，应用BOC/Bzl固相缩合体系从C端逐步延长肽链，以4NHCl/DIOX（0.05％吲哚）脱保护，缩合反应以2倍量的BOC-AA与2倍量的DCC/HOBt反应1小时，每步缩合均用茚三酮实验检测，如果为阳性则再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反应半个小时，肽链合成结束以后，线性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol（93/2/5，v/v/v），在0℃反应1.5小时后从树脂上切下，HF抽干后用钠丝干燥的冰冻的无水乙醚洗涤数次，用10％的冰醋酸提取粗肽，冻干保存。 

2、环（CEVVE）的合成： 

350mgMBHA树脂（负载量为0.57mmol/g，0.2mmol），悬浮于DMF中，依次加入0.12gHOBt，150μL3-巯基丙酸（1.2mmol），160mg DCC,加入少量的DCM溶解充分，在室温下磁力搅拌4个小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM各洗涤两次，每次两分钟。茚三酮检验呈阴性。然后用50mg半胱氨酸甲酯盐酸盐（0.2mmol），100mg（0.2mmol）三苯基磷和120μlDIEA（0.2mmol）混合溶于DMF，五分钟后加入树脂中，室温反应两小时，用DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤各两次，4倍量的BOC保护的氨基酸、BOP、6倍量的DIEA混合，溶于DMF，五分钟后混合物加入到反应器中，室温反应2小时，以DMF、DCM、MeOH、DCM洗涤，用定性的Ellman实验检测，阴性溶液树脂为无色或淡黄色，如果呈橘红色则再以上述缩合配料量 减半反应一个小时，应用BOC/BZL固相缩合体系从C端逐步延长肽链，以4NHCl/DIOX（0.05％吲哚）脱保护，缩合反应以2倍量的BOC-AA与2倍量的DCC/HOBt反应1小时，每步缩合均用茚三酮实验检测，如果为阳性则再用4倍量的BOC-AA、BOP和6倍量的DIEA反应半个小时，肽链合成结束以后，线性肽硫酯用HF/P-thiocresol/m-cresol（93/2/5，v/v/v），在0℃反应1.5小时后从树脂上切下，HF抽干后用钠丝干燥的冰冻的无水乙醚洗涤数次，用10％的冰醋酸提取粗肽，冻干保存。也可将环合的缓冲溶液直接提取线性肽硫酯进行环合反应。如果肽硫酯溶解度不好，还可以考虑使用CH₃CN/H₂O提取粗肽，然后减压抽去CH₃CN后冻干保存。 

线性肽硫酯在用凝胶柱层析初步纯化或者HPLC纯化后进行环合反应，反应在NaHCO₃的水溶液中进行，如果溶解度不好可以适当加入CH₃CN的浓度，控制pH值在7.3-7.6，加入TCEP防止巯基的氧化，反应由HPLC监控，反应在4小时内完成，产物用ESI－MS进行鉴定。 

3、环肽的PEG－MAL修饰 

将经RP-HPLC纯化后的环（CEVVE）溶于水中，以碳酸氢钠调pH至8,加入3倍当量的mPEG₅₀₀₀-MAL，室温反应，用RP–HPLC监测反应进程和分离产物,反应一般在四小时内完成。Cys(mPEG₅₀₀₀-MAL)-Tα₁(17-24)经MALDI-TOF-MS分析,在6173附近有一系列峰，相邻两峰分子量相差约44，具有聚乙二醇的典型结构特征。通过和没有接上环肽分子的mPEG－NH₂比较，减去作为活化官能团的马来酰亚氨的式量，其值基本和环肽的分子量相对应，证明成功实现了环肽类化合物的mPEG化修饰。 

实施例5：³H-tdR掺入法检测对小鼠脾淋巴细胞的增值反应： 

脾细胞悬液的制备：无菌取出脾脏，用毛玻璃片将小鼠脾脏磨碎，制成脾细胞悬液。裂解红细胞后，洗涤三次，计数（活细胞在95％以上）。用含10％FBS的RPMI1640培养液将脾细胞浓度调为4×10⁶细胞/ml。本 实验加入ConA（刀豆蛋白A）5ug/ml诱导T淋巴细胞增殖。以³H-TdR掺入法定量测定细胞的增殖。在37°C，5%CO₂培养箱中培养48小时。在结束培养前7-8小时，每孔加入25μl³H-胸腺嘧啶核苷酸(含2×10⁴Bq)。在培养结束后，用细胞收集仪(HARVESTER,TOMTEC)收集细胞于玻璃纤维膜上，用液闪记数仪（MicroBeta Trilux,PerkinElmer）检测[³H]-胸腺嘧啶核苷在DNA中的掺入量，以cpm值代表细胞增殖情况。具体检测结果参见表1。 

结果评定：淋巴细胞的增殖反应采用被检测样品cpm值减去阳性对照样品cpm值，然后除阳性对照样品cpm值，标记为+增强/-抑制的%。鉴于测试样品没有非特异细胞毒性作用，结果标记为+(增强)/-(抑制)的15%以上（根据P值时通常10%以上也可），就表示样品有活性。 

表1Tα₁及其类似物的T淋巴细胞增殖反应结果 

cpm值代表细胞增殖情况，SD为数据的标准差，P值表示实验数据与ConA对照组数据这间进行统计分析的有无差异的概率，P<0.05表示两组数据间有显著性差异。L=-NHCH₂CH₂OCH₂COOH 。

Claims (1)

1.如下的环肽：

环（CL KEVVE），

其中L为-NHCH₂CH₂OCH₂COO-。