CN102711809A - 使用抗-内皮因子抗体和抗-vegf剂联合治疗癌症 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF剂的组合物。另一个方面涉及嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗的用途。另一个方面涉及所述组合物用于抑制VEGF诱导的出芽的用途。另一个方面涉及所述组合物用于抑制血管生成的用途。

Description

使用抗-内皮因子抗体和抗-VEGF剂联合治疗癌症
交叉引用
本申请要求2009年8月17日提交的美国临时申请号61/234,574的权益，该申请通过引用整体并入本文。
背景技术
癌症是仅次于冠状动脉疾病第二大人类死亡原因。在世界上，每年有数百万人死于癌症。仅在美国，癌症每年造成超过50万人死亡，并且每年有140万新确诊的病例。尽管因心脏病死亡已经明显下降，由癌症引起的死亡通常是在增加。在下一世纪的早期，预测癌症会变成最主要的死因。
此外，即使对于最初度过他们的原发性癌的那些癌症患者，共同的经历已经证实，他们的寿命急剧改变。许多癌症患者会经历强烈的焦虑，所述焦虑由对复发或治疗失败的可能性的知晓驱动。许多癌症患者在治疗以后经历显著的身体虚弱。
一般而言，致命性癌症的控制的根本问题是，缺乏有效的且无毒的全身疗法。癌症是一种复杂的疾病，其特征在于导致失控的细胞生长的遗传突变。癌细胞存在于所有生物体中，在正常情况下，它们的过度生长受到不同生理因子的紧密调节。
血管生成是从现有血管形成新血管的生理过程。已经提出，血管生成在正常过程和病理过程中都起作用。例如，血管生成过程涉及动物器官和组织的血管系统的发育。
在某些病理状态下，血管生成受到刺激，作为为受累组织内的细胞提供充足的血液和营养物供给的方式。许多这样的病理状态包括异常的细胞增殖和/或调节。实体癌和渗出性黄斑变性依赖于为连续的生长以及转移募集新的血液供应。
发明内容
本文提供了结合内皮因子的嵌合抗体。这样的抗体具有体外和体内纯化、检测、诊断和治疗用途。本文也提供了这样的嵌合抗体：其结合内皮因子的一种或多种物质或变体，并抑制血管生成。本文另外提供了用结合内皮因子的嵌合抗体治疗血管生成相关疾病的方法。
嵌合的抗-内皮因子抗体可与抗-VEGF剂联合地用于治疗或预防不同形式的癌症、实体瘤和转移灶等。本文描述了通过施用本文所述组合物来治疗或预防不同形式的癌症、实体瘤和转移灶等的方法。本文所述组合物也可以收缩血管、抑制与疾病有关的内皮细胞增殖和/或防止血管的渗漏。
本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗或预防黄斑变性、脉络膜新血管生成（CNV）、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变。本文描述了通过施用本文所述的抗体和抗原结合片段来治疗或预防黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变的方法。本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以收缩血管、抑制与眼病有关的内皮细胞增殖、清除出血的征状、治疗视力模糊、提供视力损失的停滞和/或防止血管的渗漏。本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以用于药物中，所述药物用于治疗黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变。
本文提供了嵌合的抗-内皮因子抗体，其具有：具有SEQ ID NO: 3所述的氨基酸序列的重链可变区（VH）；具有SEQ ID NO: 4所述的氨基酸序列的重链恒定区（Fc）；具有SEQ ID NO: 1所述的氨基酸序列的轻链可变区（VL）；和具有SEQ ID NO: 2所述的氨基酸序列的轻链恒定区（CL）。
在一个方面，可以修饰本文所述的抗体，以改变化合物的药代动力学性质，例如，体内稳定性、溶解度、生物利用度或半衰期。这样的修饰包括、但不限于：聚乙二醇化和/或糖基化。
使用常规方式，可以将本文所述的抗体配制成用于快速的或延长递送。在一个非限制性实施方案中，快速递送是，例如，通过静脉内注射。在另一个非限制性实施方案中，延长的递送是，例如，通过皮下蓄池。
本文提供了本文所述的抗体和抗原结合片段和可接受的载体或赋形剂的组合物。
本文所述的抗体及其抗原结合片段可以用于治疗与血管生成有关的不同的疾病和病症，例如，不同形式的癌症、实体瘤和转移灶。另外，本文所述的这些抗体及其抗原结合片段可以用于药物制剂中，所述药物制剂用于预防、治疗或诊断与不同形式的癌症、实体瘤和转移灶有关的疾病和病症。
本文所述的抗体及其抗原结合片段可以用于治疗特征在于血管生成/新生血管形成的不同形式的眼的或非眼的疾病（例如，黄斑变性、糖尿病视网膜病变）、糖尿病肾病、慢性炎性疾病（例如，IBD）、类风湿性关节炎和骨关节炎。另外，本文所述的这些抗体及其抗原结合片段可以用于药物制剂中，所述药物制剂用于预防、治疗或诊断与血管生成有关的疾病和病症，例如，特征在于血管生成/新生血管形成的不同形式的眼的或非眼的疾病（例如，黄斑变性、糖尿病视网膜病变）、糖尿病肾病、慢性炎性疾病（例如，IBD）、类风湿性关节炎和骨关节炎。
本文提供了一种用于在患者中诱导宿主免疫应答的方法，其中给患者施用含有嵌合的抗-内皮因子抗体的第一组合物和含有抗-VEGF抗体或其抗原结合片段的第二组合物，由此诱导有效的宿主免疫应答。
本文提供了一种用于在患者中诱导宿主免疫应答的方法，其中给患者施用组合物，所述组合物含有嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体或其抗原结合片段，由此诱导有效的宿主免疫应答。
宿主免疫应答可以是体液免疫应答或细胞介导的免疫应答。所述免疫应答可以是抑制血管生成、血管生成依赖性的疾病或血管生成依赖性的障碍的应答。免疫应答也包括细胞信号传递途径（例如Smad信号传递）的诱导或阻滞。在一个实施方案中，应答会抑制血管生成。
本文提供了一种影响与血管生成有关的细胞信号传递途径的方法。可以使血管生成细胞与一种或多种本文所述的组合物接触（体外、体内或离体），所述组合物的量足以改变细胞信号传递途径。在一个实施方案中，抗体是嵌合的抗-内皮因子抗体。在一个非限制性实施例中，响应于抗体结合，血管生成细胞中的Smad 1、5和/或8信号传递被抑制了约1.5倍或更多。在另一个非限制性实施例中，Smad 3水平增加了约1.5倍或更多，提示细胞正在恢复至静止状态。含有抗-VEGF抗体或其抗原结合片段的组合物也与含有嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物结合地施用。
本文提供了一种抑制受试者的血管生成或血管生成依赖性的疾病或障碍的方法，其中将一种或多种本文提供的组合物施用给患者。所述血管生成依赖性的疾病或障碍可以下述的任一种：不同形式的癌症、实体瘤和转移灶。在一个实施方案中，抑制血管生成或血管生成依赖性的疾病或障碍会减轻与所述疾病或障碍有关的征状。在另一个实施方案中，抑制血管生成或血管生成依赖性的疾病或障碍会导致：肿瘤大小的减小、肿瘤进展的预防、细胞增殖的减少、细胞凋亡的增加或受试者存活期的增加。
本文提供了一种预防或治疗受试者的癌症或转移的方法，其中试验一种或多种本文提供的组合物。所述组合物的施用可以延长被治疗的受试者的寿命。要治疗的癌症/肿瘤包括实体瘤；肿瘤可以是原发性肿瘤或转移性肿瘤。示例性的实体瘤属于选自下述的组织或器官：皮肤、黑素瘤、肺、胰腺、乳房、卵巢、结肠、直肠、胃、甲状腺、喉部、卵巢、前列腺、结肠直肠、头部、颈部、眼、嘴、喉、食管、胸部、骨、睾丸、淋巴、骨髓、骨、肉瘤、肾、汗腺、肝、肾、脑（例如多形性胶质母细胞瘤）和类似的组织。在一个非限制性实施例中，实体瘤是结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肾肿瘤、肺肿瘤、前列腺癌、卵巢肿瘤或这些肿瘤中任一种的转移灶。
本文提供了一种预防或治疗下述任一种的方法：特征在于血管生成/新生血管形成的不同形式的眼的或非眼的疾病（例如，黄斑变性、糖尿病视网膜病变）、糖尿病肾病、慢性炎性疾病（例如，IBD）、类风湿性关节炎和骨关节炎。在一个实施方案中，抑制血管生成或血管生成依赖性的疾病或障碍会减轻与所述疾病或障碍有关的征状。在另一个实施方案中，抑制血管生成或血管生成依赖性的疾病或障碍会产生患者的功能。要治疗的眼组织是，例如，具有糖尿病视网膜病变、黄斑变性或新生血管性青光眼的患者的视网膜组织，要抑制的血管生成是视网膜组织血管生成，其中存在视网膜组织的新生血管形成。
所述方法可以另外包括：外科手术切除肿瘤，和/或施用一种或多种抗癌剂。可以在施用本文所述组合物之前、同时或之后，施用额外的抗癌剂。可以在所述组合物之前一周内、在所述组合物之后一周内，施用额外的抗癌剂，或者可以在所述组合物同一天施用额外的抗癌剂。如果在所述组合物同一天施用额外的抗癌剂，施用可以是并行的。
本文提供了一种抑制血管生成的方法，其中使细胞或组织接触足以抑制血管生成的治疗有效量的一种或多种本文所述的组合物。本文提供了一种抑制肿瘤细胞的生长的方法，其中使肿瘤细胞接触或给受试者施用足以抑制肿瘤细胞生长的治疗有效量的一种或多种本文所述的组合物。
本文提供了一种方法，所述方法包括：使组织接触一种或多种本文所述的组合物，其中接触会抑制血管生成、细胞生长、增殖、细胞分裂等。所述组织可以是培养的组织活组织检查样品，或可以存在于受试者中。
本文提供了一种预防或治疗细胞增殖障碍的方法，其中给具有细胞增殖障碍的受试者或处于该风险中的受试者施用有效量的一种或多种本文提供的组合物，以有效地治疗细胞增殖障碍。所述细胞增殖障碍可以是，例如良性或恶性实体瘤或非实体瘤，所述肿瘤可以是转移性的或非转移性的。所述治疗可以导致改善受试者的病症，且可以通过确定是否已经发生下述因素中的一个或多个来评估：细胞增殖的减少、细胞数目的减少、细胞凋亡的增加或至少一部分构成细胞增殖障碍的细胞的存活期减小。在某些情况下，这些事件中的一个或多个可能导致肿瘤或转移灶的部分或完全消除和患者存活期的延长。
本文提供了一种治疗患者的糖尿病视网膜病变、黄斑变性、脉络膜新血管生成或新生血管性青光眼的方法，其中给患者施用治疗有效量的一种或多种本文提供的组合物。所述治疗可以导致改善受试者的病症，且可以通过确定是否已经发生下述因素中的一个或多个来评估：黄斑水肿的减少、CNV面积的减小或视敏度的增加。
另一个方面是，通过施用一种或多种本文所述的组合物来治疗受试者的慢性炎性疾病。慢性炎性疾病的非限制性实施例包括IBD、克罗恩病和溃疡性结肠炎。
另一个方面是，通过施用一种或多种本文所述的组合物来治疗受试者的类风湿性关节炎。
另一个方面是，通过施用一种或多种本文所述的组合物来治疗受试者的骨关节炎。
通过不同的方式，包括根据公开的指南测量的ACR评分的适当分类的提高，可以评估具有类风湿性关节炎和/或骨关节炎的受试者的治疗。
在本文提供的方法中，要治疗的受试者可以是人或非人受试者。本文提供的组合物和抗癌剂或治疗可以施用一次或多次，取决于患者的健康、疾病或病症的进展、和治疗的效能。在治疗过程中，可以调节疗法和治疗（例如，组合物中抗体的剂量）。
可以局部地（locally）、区域性地（regionally）或全身地施用组合物，例如，通过皮下的、玻璃体内的、真皮内的、静脉内的、动脉内的、腹膜内的或肌肉内的注射来施用。
另外，嵌合的抗-内皮因子抗体也可以与其它已知的疗法和/或抑制VEGF途径的抗-VEGF抗体联合地使用。这样的化合物的实例包括、但不限于：ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。
另外，本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体或其抗原结合片段也可以与其它已知的疗法和/或化合物联合地用于治疗癌症。这样的化合物的实例包括、但不限于：ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。其它疗法的实例包括、但不限于：辐照、外科手术或施用一种或多种化疗剂。
本文提供了一种监测本文提供的方法中的任意一种或多种的效能的方法。增加的可溶性内皮因子的水平，已经与癌症患者的降低的存活期相关联。因而，在一个方面，可以在治疗之前和过程中，监测可溶性内皮因子的水平。因此，可溶性内皮因子的水平的降低可以指示，治疗方案有效地治疗患者。
本申请的一个实施方案预见到，本文所述的任一种组合物用于配制药物的用途，所述药物用于治疗本文所述的障碍。可以基于需要治疗的患者/受试者的身体特征来配制药物，且可以基于例如癌性组织的阶段，配制成单个制剂或多个制剂。可以将药物包装在具有适当标签的合适包中以分配给医院和诊所，其中所述标签是用于指示治疗受试者的本文所述的障碍。药物可以包装成单个或多个单元。在包中可以包括关于剂量和本文所述组合物的施用的说明书。
通过引用并入
在本说明书中提及的所有出版物和专利申请都通过引用并入本文中，其程度如同具体地且单个地指出每篇单独的出版物或专利申请通过引用整体并入，除非另外特别指出。
附图说明
图1提供了TGF-β/ALK5信号传递途径的简图。TGF-β/ALK5途径（A）会导致细胞增殖的抑制。TGF-β/ALK1途径（B）会诱导内皮细胞增殖，并需要CD105（内皮因子）进行ALK1信号传递。虚线指示无活性的或阻断的途径。加粗的箭头指示信号传递途径的刺激。
图2提供了本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体（TRC105）的氨基酸序列。图2A是嵌合的抗-内皮因子抗体的代表性的可变轻链（SEQ ID NO：1）；图2B是嵌合的抗-内皮因子抗体的代表性的恒定轻链（SEQ ID NO：2）；图2C是嵌合的抗-内皮因子抗体的代表性的可变重链（SEQ ID NO：3）；图2D是嵌合的抗-内皮因子抗体的代表性的恒定γ1重链（SEQ ID NO：4）。
图3表明，使用接种在胶原中的HUVEC球状体，TRC105会以剂量依赖性的方式抑制VEGF诱导的出芽（N=3）。
图4表明，尽管TRC105会阻断VEGF诱导的出芽（对角线阴影），它不会抑制bFGF诱导的HUVEC球状体的出芽（菱形阴影）（N=2）。
图5表明，当与VEGF抑制剂贝伐单抗（菱形阴影）组合时，会增强TRC105对VEGF诱导的出芽的抑制作用（对角线阴影），使得HUVEC出芽被完全抑制。
图6表明，当与VEGF受体激酶的抑制剂（菱形阴影）组合时，不会增强TRC105对VEGF诱导的出芽的抑制作用（对角线阴影）。
具体实施方式
应当理解，本申请不限于特定制剂或工艺参数，因为这些当然可以变化。还应当理解，在本文中使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，无意进行限制。此外，应当理解，与本文所述的那些类似或等效的许多方法和材料可以用于实践本发明。
根据本申请，可以采用常规的分子生物学、微生物学和重组DNA技术，如本领域完全解释的。
嵌合的抗-内皮因子抗体可以与抗-VEGF剂联合地用于治疗或预防不同形式的癌症、实体瘤和转移灶等。本文描述了通过施用本文所述组合物来治疗或预防不同形式的癌症、实体瘤和转移灶等的方法。本文所述组合物也可以收缩血管、抑制与疾病有关的内皮细胞增殖和/或防止血管的渗漏。
抗体术语
本文使用的术语“抗体”表示免疫球蛋白（Ig），无论天然的还是部分地或完全地合成生产的。该术语也涵盖具有结合域的任意多肽或蛋白，所述结合域是抗原结合域或与抗原结合域同源。该术语另外包括“抗原结合片段”和诸如下述的类似结合片段的其它可互换的术语。该术语也包括嵌合抗体。
天然抗体和天然免疫球蛋白通常是约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，其由2个相同的轻（L）链2个相同的重（L）链组成。每个轻链通常通过一个共价二硫键与重链相连，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链之间存在差异。每个重链和轻链也具有规则分布的链内二硫键。每个重链具有在一个末端处的可变结构域（“VH”或“VH”），其后是许多恒定结构域（“CH”或“CH”）。每个轻链具有在一个末端处的可变结构域（“VL”或“VL”）和在它的另一个末端处的恒定结构域（“CL”或“CL”）；轻链的恒定结构域与重链的第一个恒定结构域对齐，轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。认为特定氨基酸残基会形成轻链和重链可变结构域之间的接口。
本文使用的术语“合成的多核苷酸”、“合成的基因”或“合成的多肽”表示，对应的多核苷酸序列或其一部分或氨基酸序列或其一部分源自已经设计的序列，或从新合成，或与等效的天然存在的序列相比被修饰。通过本领域已知的方法，可以制备合成的多核苷酸（抗体或抗原结合片段）或合成的基因，所述方法包括但不限于：核酸或氨基酸序列的化学合成。合成的基因通常在氨基酸或多核苷酸水平（或在两个水平）不同于天然存在的基因，且通常位于合成的表达控制序列的背景内。与天然的基因相比，合成的基因多核苷酸序列可能不一定编码具有不同氨基酸的蛋白；例如，它们也可以包括合成的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列掺入不同的密码子，但是它们编码相同的氨基酸（即，核苷酸变化代表在氨基酸水平的沉默突变）。
关于抗体，术语“可变结构域”表示，在每个特定抗体与它的特定抗原的结合和特异性中使用的抗体可变结构域。但是，变异性不均匀地分布在抗体的可变结构域中。相反，它集中在3个称作高变区（也称作CDR）的区段中，所述区段在轻链和重链可变结构域中。可变结构域的更高度保守的部分被称作“框架区”或“FR”。未修饰的重链和轻链的可变结构域各自含有4个FR（FR1、FR2、FR3和FR4），它们主要采取β-折叠构型，其间散布着3个CDR，所述CDR形成环，并在某些情况下连接β-折叠结构部分。每个链中的CDR被FR保持紧密靠在一起，并与来自其它链的CDR一起，促进抗体的抗原结合位点的形成（参见Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. （1991）, 第647-669页）。
在本文中使用的术语“高变区”和“CDR”表示，抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。CDR包括来自3个序列区的氨基酸残基，所述序列区以互补方式结合抗原，并被称作CDR1、CDR2和CDR3（对于每个VH和VL链）。根据Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. （1991）），在轻链可变结构域中，CDR通常大致对应着残基24-34（CDRL1）、50-56（CDRL2）和89-97（CDRL3），在重链可变结构域中，CDR通常大致对应着残基残基31-35（CDRH1）、50-65（CDRH2）和95-102（CDRH3）。应当理解，不同抗体的CDR可以含有插入序列，因而氨基酸编号可能不同。Kabat编号系统用下述编号方案来补偿这样的插入序列：所述方案利用与特定残基相连的字母（例如，在轻链中，CDRL1的27A、27B、27C、27D、27E和27F）来反映在不同抗体之间的编号的任何插入。或者，根据Chothia和Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917（1987）），在轻链可变结构域中，CDR通常大致对应着残基26-32（CDRL1）、50-52（CDRL2）和91-96（CDRL3），在重链可变结构域中，CDR通常大致对应着残基26-32（CDRH1）、53-55（CDRH2）和96-101（CDRH3）。
本文使用的“框架区”或“FR”表示，形成抗原结合槽或沟的一部分的框架氨基酸残基。在有些实施方案中，所述框架残基形成环，所述环是抗原结合槽或沟的一部分，且在所述环中的氨基酸残基可以接触或不接触抗原。框架区通常包括在CDR之间的区域。根据Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. （1991）），在轻链可变结构域中，FR通常大致对应着残基0-23（FRL1）、35-49（FRL2）、57-88（FRL3）和98-109，在重链可变结构域中，FR通常大致对应着残基0-30（FRH1）、36-49（FRH2）、66-94（FRH3）和103-133。如上面关于轻链的Kabat编号所讨论的，重链也以类似的方式补偿插入（例如，在重链中，CDRH1的35A、35B）。或者，根据Chothia和Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917（1987）），在轻链可变结构域中，FR通常大致对应着残基0-25（FRL1）、33-49（FRL2）53-90（FRL3）和97-109（FRL4），在重链可变结构域中，FR通常大致对应着残基0-25（FRH1）、33-52（FRH2）、56-95（FRH3）和102-113（FRH4）。
抗体的恒定结构域（Fc）不直接参与抗体与抗原的结合，但是相反地表现出不同的效应子功能，诸如通过与例如Fc受体（FcR）的相互作用，抗体参与抗体依赖性的细胞毒性。Fc结构域也可以增加抗体在施用给患者以后在循环中的生物利用度。用鼠Fc结构域置换人Fc结构域，也可以减少HAMA副反应。
根据它们的重链的恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归入不同的类别。存在5个主要的免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，它们中的几个可以进一步分成子类（同种型），例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白相对应的重链恒定结构域（Fc）分别被称作α、δ、ε、γ和 μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
基于它们的恒定结构域的氨基酸序列，可以将来自任意脊椎动物物种的抗体的“轻链”归入2个明显不同的类型（称作κ和λ）之一。
术语“抗体的抗原结合部分”、“抗原结合片段”、“抗原结合域”、“抗体片段”或“抗体的功能片段”在本文中互换地用于表示抗体的一个或多个片段，所述片段保留特异性地结合抗原的能力。在这样的术语内包括的抗体片段的非限制性实施例包括、但不限于：（i）Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；（ii）F(ab’)2片段，即含有2个通过在铰链区处的二硫键相连的Fab片段的二价片段；（iii）由VH和CH1结构域组成的Fd片段；（iv）含有抗体的单臂的VL和VH结构域的Fv片段；（v）dAb片段（Ward等人, （1989）Nature 341:544 546），其含有VH结构域；和（vi）分离的CDR。在该定义中另外包括含有单个重链和单个轻链的“一半”抗体。在本文中也包括其它形式的单链抗体，诸如双特异抗体。
通过用蛋白酶（诸如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶）处理Ig，可以生产“F(ab’)2”和“Fab'”部分，且包括通过在二硫键附近消化免疫球蛋白所产生的抗体片段，所述二硫键存在于2个重链中的每一个内的铰链区之间。例如，木瓜蛋白酶会在存在于2个重链中的每一个内的铰链区之间的二硫键的上游切割IgG，以产生2个同源的抗体片段，其中由VL和CL组成的轻链（轻链恒定区）和由VH和CHγ1（γ1）区组成的重链片段（在重链的恒定区中）在它们的C端区域通过二硫键相连。这2个同源的抗体片段中的每一个被称作Fab'。胃蛋白酶也会在存在于2个重链中的每一个内的铰链区之间的二硫键的上游切割IgG，以产生这样的抗体片段：所述片段稍微大于2个上述的Fab'在其中在铰链区处相连的片段。该抗体片段被称作F(ab’)2。
Fab片段也含有轻链的恒定结构域和重链的第一个恒定结构域（CH1）。Fab' 片段与Fab片段的差别在于，在重链CH1结构域的羧基端处添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH在本文中表示这样的Fab'：其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离的巯基。F(ab’)2抗体片段最初被生产为Fab'片段对，它们具有在它们之间的铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
“Fv”表示含有完整抗原识别和抗原结合位点的抗体片段。该区域由紧密地非共价或共价结合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成（本领域已经描述了二硫键连接的Fv，Reiter等人（1996）Nature Biotechnology 14:1239-1245）。在该构型中，每个可变结构域的3个CDR相互作用，以限定在VH-VL二聚体的表面上的抗原结合位点。来自每个VH和VL链的一个或多个CDR的组合一起赋予抗体抗原结合特异性。例如，应当理解，例如，当转移至受体抗体的VH和VL链或其抗原结合片段上时，CDRH3和CDRL3足以赋予抗体抗原结合特异性，且可以使用本文所述的任意技术测试该CDR组合的结合、亲和力等。甚至单个可变结构域（或仅包含对抗原特异性的3个CDR的Fv的一半）具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力可能比与第二个可变结构域相组合时更低。此外，尽管Fv片段的2个结构域（VL和VH）由单独的基因编码，使用重组方法，通过合成的连接物可以连接它们，所述连接物使它们能够制成单个蛋白链，其中VL和VH区配对形成单价分子（称作单链Fv（scFv）; Bird等人（1988）Science 242:423-426; Huston等人（1988）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；和Osbourn等人（1998）Nat. Biotechnol. 16:778）。在术语抗体的“抗原结合部分”内，也意图包括这样的scFv。可以将特定scFv的任意VH和VL序列连接到Fc区cDNA或基因组序列上，以便制备编码完整Ig（例如，IgG）分子或其它同种型的表达载体。VH和VL也可以用于制备Fab、Fv或Ig的其它片段，其中使用蛋白化学或重组DNA技术。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。在有些实施方案中，所述Fv多肽另外包含在VH和VL结构域之间的多肽连接物，其使sFv能够形成抗原结合所希望的结构。关于sFv的综述，参见，例如，Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg和Moore编Springer-Verlag, New York,第269-315页（1994）。
术语“AVIMER?”表示一类人起源的治疗蛋白，它们与抗体和抗体片段无关，由几个模块的且可重复使用的结合域组成，所述结合域称作A-结构域（也称作A类模块、补体型重复序列或LDL-受体类A结构域）。它们通过体外外显子改组和噬菌体展示从人胞外受体结构域发展而成（Silverman等人, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1493-1494; Silverman等人, 2006, Nat. Biotechnol. 24:220）。得到的蛋白可以含有多个独立结合域，它们与单表位结合蛋白相比，可以表现出提高的亲和力（在某些情况下，低于纳摩尔）和特异性。参见，例如，美国专利申请公开号2005/0221384、2005/0164301、2005/0053973和2005/0089932、2005/0048512和2004/0175756，它们各自特此通过引用整体并入本文。
已知的217个人A-结构域中的每一个包含约35个氨基酸（约4 kDa）；这些结构域被连接物隔开，所述连接物的长度是平均5个氨基酸。天然A-结构域快速地且有效地折叠成均匀的、稳定的结构，这主要由钙结合和二硫键形成来介导。该共有结构需要仅12个氨基酸的保守支架基序。最终结果是含有多个结构域的单个蛋白链，每个结构域代表单独的功能。所述蛋白的每个结构域独立地结合，且每个结构域的活力贡献是累加的。这些蛋白被称作来自亲合力多聚体的“AVIMERs?”。
术语“双特异抗体”表示具有2个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在相同多肽链（VH-VL）中与轻链可变结构域（VL）相连的重链可变结构域（VH）。通过使用太短而不允许在相同链上的2个结构域之间配对的连接物，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域配对，并建立2个抗原结合位点。双特异抗体更完整地描述在，例如，EP 404,097; WO 93/11161；和Hollinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444 6448（1993）。
抗原结合多肽也包括重链二聚体，例如，来自骆驼类（camelids）和鲨鱼的抗体。骆驼类和鲨鱼抗体包括V-样和C-样结构域的2条链的同源二聚体对（都不具有轻链）。因为骆驼类的重链二聚体IgG的VH区不一定与轻链产生疏水相互作用，在骆驼类中，通常接触轻链的重链中的该区域变成亲水氨基酸残基。重链二聚体IgG的VH结构域称作VHH结构域。鲨鱼Ig-NAR包括1个可变结构域（称作V-NAR结构域）和5个C-样恒定结构域（C-NAR结构域）的同源二聚体。在骆驼类中，抗体所有组成部分的多样性由VH或VHH区中的CDR 1、2和3决定。骆驼VHH区中的CDR3的特征在于它的相对长的长度，平均16个氨基酸（Muyldermans等人, 1994, Protein Engineering 7（9）: 1129）。这不同于许多其它物种的抗体的CDR3区。例如，小鼠VH的CDR3具有平均9个氨基酸。通过例如在美国专利申请系列号20050037421中公开的方法，可以制备骆驼类-衍生的抗体可变区（它们维持骆驼类可变区的体内多样性）的文库。
“嵌合”形式的非人（例如，鼠）抗体包括：含有源自非人Ig的最小序列的嵌合抗体。在极大程度上，嵌合抗体是这样的鼠抗体：其中插入了免疫球蛋白恒定区（Fc）的至少一部分（通常人免疫球蛋白的至少一部分）来替代鼠Fc。关于细节, 参见Jones等人, Nature 321: 522-525 (1986)； Reichmann等人, Nature 332: 323-329 (1988)；和Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992)。
本文使用的术语“单克隆抗体”表示从基本上同质的抗体群体得到的抗体，即，除了可能以微量存在的可能天然存在的突变以外，构成该群体的单个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，不同于常规的（多克隆的）抗体制品（它们可以包括针对不同决定簇（表位）的不同抗体），每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。修饰词“单克隆”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体得到，不应解释为需要通过任何特定方法生产抗体。例如，单克隆抗体可以通过Kohler等人, Nature 256:495 (1975)首先描述的杂交瘤方法来制备，或可以通过重组DNA方法（参见，例如，美国专利号4,816,567）来制备。在某些实施方案中，使用例如在Clackson等人, Nature 352:624-628（1991）和Marks等人, J. Mol. Biol. 222:581-597（1991）中所述的技术，可以从噬菌体抗体文库分离出单克隆抗体。
通过饱和硫酸铵沉淀、优球蛋白沉淀法、己酸方法、辛酸方法、离子交换色谱法（DEAE或DE52）或使用抗-Ig柱或蛋白A、G或L柱的亲和色谱法（诸如下面更详细地描述的那些），可以从上述的培养物上清液或腹水分离和纯化抗体。
当构建免疫球蛋白分子时，可变区或其部分可以与一个或多个恒定区或其部分融合、连接或以其它方式相连，以生成本文所述的任意抗体。这可以以本领域已知的多种方式来实现，包括但不限于：分子克隆技术，或直接合成编码所述分子的核酸。
本文使用的“免疫反应性的”表示这样的结合剂、抗体或其片段：它们对氨基酸残基的序列（“结合位点”或“表位”）是特异性的，且如果与其它肽/蛋白具有交叉反应性，则在它们为了施用于人用途而配制的水平是无毒的。术语“结合”表示在生理条件下由于例如共价、静电、疏水和离子和/或氢键相互作用而发生的2个分子之间的直接结合，包括相互作用诸如盐桥和水桥和任意其它常规结合方式。术语“优选地结合”是指，与它结合无关的氨基酸序列相比，结合剂以更大的亲和力结合结合位点。与结合剂对无关的氨基酸序列的亲和力相比，亲和力可以是至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍或至少1000倍。术语“免疫反应性的”和“优选地结合”在本文中可互换地使用。
本文使用的术语“亲和力”表示2种试剂的可逆结合的平衡常数，并表示为Kd。结合蛋白对配体的亲和力（诸如抗体对表位的亲和力）可以是，例如，约100纳摩尔（nM）至约0.1 nM、约100 nM至约1皮摩尔（pM）或约100 nM至约1飞摩尔（fM）。本文使用的术语“亲合力”表示，2种或更多种试剂的复合物在稀释以后对解离的抵抗力。通过诸如酶联免疫吸附测定（ELISA）或本领域技术人员熟悉的任意其它技术等方法，可以测定表观亲和力。通过诸如Scatchard分析或本领域技术人员熟悉的任意其它技术等方法，可以测定亲合力。
“表位”表示，抗原或其它大分子的能够与抗体的可变区结合槽形成结合相互作用的部分。这样的结合相互作用可以显示为与一个或多个CDR的一个或多个氨基酸残基的分子间接触。抗原结合可以涉及，例如，CDR3或CDR3对，或在某些情况下，VH和VL链的多达所有6个CDR的相互作用。表位可以是线性肽序列（即，“连续的”），或可以由不连续的氨基酸序列（即，“构象的”或“不连续的”）组成。抗体可以识别一个或多个氨基酸序列；因此，表位可以限定超过一个独特的氨基酸序列。通过肽作图和本领域技术人员众所周知的序列分析技术，可以测定由抗体识别的表位。结合相互作用显示为与CDR的一个或多个氨基酸残基的分子间接触。TRC105是一种鼠抗体，它是与在美国专利号5,928,641、6,200,566、6,190,660和7,097,836中描述为Y4-2F1或SN6j的鼠抗体相同的氨基酸序列。以前已经鉴别出Y4-2F1和SN6j识别（因而TRC105也识别）的表位。
术语“特异性的”表示这样的情形：其中抗体不再显示出对除了含有抗体识别的表位的抗原以外的分子的任何显著结合。该术语也适用于这样的情形：例如，抗原结合域对许多抗原携带的特定表位是特异性的，在该情况下，抗体能够结合携带所述表位的不同抗原。术语“优选地结合”或“特异性地结合”是指，与它结合无关的氨基酸序列相比，抗体以更大的亲和力结合表位，且如果与其它含有所述表位的多肽具有交叉反应性，则在它们为了施用于人用途而配制的水平是无毒的。在一个方面，与抗体对无关的氨基酸序列的亲和力相比，这样的亲和力是至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍或至少1000倍。术语“免疫反应性的”、“结合”、“优选地结合”和“特异性地结合”在本文中可互换地使用。术语“结合”表示在生理条件下由于例如共价、静电、疏水和离子和/或氢键相互作用而发生的2个分子之间的直接结合，包括相互作用诸如盐桥和水桥以及任意其它常规结合方式。
当应用于多肽时，“分离的”（与“基本上纯的”可互换地使用）是指多肽或其一部分，其因为它的来源或操作而：（i）存在于宿主细胞中，作为表达载体的一部分的表达产物；或（ii）与它在自然界中相连的那些以外的蛋白或其它化学部分相连；或（iii）在自然界中不存在，例如，如下化学操作的蛋白：向所述蛋白附加或添加至少一个疏水部分，使得所述蛋白处于在自然界中不存在的形式。“分离的”另外表示这样的蛋白，其：（i）是化学合成的；或（ii）在宿主细胞中表达，并从结合的蛋白和污染蛋白中纯化出来。该术语通常是指这样的多肽：其已经与它天然地伴随的其它蛋白和核酸分离开。通常，所述多肽也与用于纯化它的物质分离，所述物质例如抗体或凝胶基质（聚丙烯酰胺）。
血管生成术语
本文使用的术语“血管生成抑制性的”、“抑制血管生成的”或“抗血管生成的”包括血管发生的抑制，且意在表示实现新生血管形成的范围、量或速率的减小。实现内皮细胞增殖或组织迁移的范围、量或速率的减小，是抑制血管生成的具体实例。
术语“血管生成抑制性的组合物”表示这样的组合物：其抑制血管生成介导的过程，诸如内皮细胞迁移、增殖、管形成，并随后导致从现有血管产生新血管的抑制，并从而影响血管生成依赖性的病症。
本文使用的术语“血管生成依赖性的病症”意在表示这样的病症：其中血管生成或血管发生的过程支持或增加病理状态，或有利地影响正常的生理过程。因此，其中血管生成支持病理状态的血管生成依赖性的病症的治疗可能导致疾病的迁移，而其中血管生成有利地影响正常的生理过程的血管生成依赖性的病症的治疗可能导致例如正常过程的增强。
血管生成是从预先存在的毛细血管或毛细血管后微静脉形成新血管。血管发生源自新血管的形成，所述新血管从成血管细胞（它们是内皮细胞前体）产生。两个过程导致新血管形成，并被包括在术语血管生成依赖性的病症的含义中。本文使用的术语“血管生成”意图包括，血管的重新形成，诸如从血管发生产生的血管以及从现有血管、毛细血管和微静脉的分支和生长产生的血管。血管生成也可以包括，诱导ALK1信号传递和有关的Smad 1/5/8磷酸化和/或信号传递。还已知CD105涉入ALK1信号传递途径，因而也被包括在血管生成的含义内。
已经在人肾癌中发现了启动肿瘤的CD105+细胞群体。CD105+细胞呈现出以前关于在其它肿瘤类型中存在的癌症干细胞所述的肿瘤干细胞的特征。观察到的CD105+细胞是形成无性系的，表达干细胞标志物，并缺少分化标志物，可以在体外分化成上皮和内皮细胞类型，且可以在体内产生可连续移植的肿瘤。尽管源自表达间质标志物的克隆，所述肿瘤是上皮癌（作为来源肿瘤），且特征在于：CD105+ 致瘤群体的维持，和非致瘤性的分化的CD105- 群体的存在。
“诱导宿主免疫应答”是指，患者经历疾病的征象或征状的减轻或减少，具体地包括但不限于生存期的延长。
本文使用的术语“增殖障碍”和“增殖病症”是指，特征在于异常的或不希望的增殖的任何病理学的或非病理学的生理状况。术语“细胞增殖障碍”和“细胞增殖病症”是指，特征在于异常的或不希望的细胞增殖的任何病理学的或非病理学的生理状况，以及包括：特征在于不希望的或不需要的细胞增殖或细胞存活（例如，由于有缺陷的细胞凋亡）的病症，特征在于有缺陷的或异常的或有缺陷的细胞凋亡的病症，以及特征在于异常的或不希望的或不需要的细胞存活的病症。术语“分化障碍”是指，特征在于异常的或有缺陷的分化的任何病理学的或非病理学的生理状况。
顺从治疗的增殖或分化障碍包括：特征在于异常的或不希望的细胞数目、细胞生长或细胞存活的良性的和肿瘤性的疾病状况。这样的障碍或病症因此可以构成疾病状态，且包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移组织或恶性转化的细胞、组织或器官。
包含增殖或分化障碍的细胞可以聚集成细胞团，或是分散的。“非实体瘤”表示：造血系统的瘤形成，诸如淋巴瘤、骨髓瘤和白血病，或在性质上是扩散的瘤形成，因为它们通常不形成实体块。白血病的具体实例包括：例如，急性和慢性淋巴母细胞性白血病、成髓细胞白血病和多发性骨髓瘤。
术语“实体瘤”表示通常聚集在一起并形成块的瘤形成或转移灶。这样的障碍包括肿瘤或癌症，它们可以影响基本上任意细胞或组织类型，例如，癌、肉瘤、黑素瘤、转移性障碍或造血肿瘤性障碍。转移性肿瘤可以源自多种原发性肿瘤类型，包括但不限于乳房、肺、甲状腺、头颈部、脑、淋巴样、胃肠道（嘴、食道、胃、小肠、结肠、直肠）、泌尿生殖道（子宫、卵巢、宫颈、膀胱、睾丸、阴茎、前列腺）、肾、胰腺、肝、骨、肌肉、皮肤等。
癌表示上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，且包括呼吸系统癌、胃肠道系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳癌、前列腺癌、内分泌系统癌和黑素瘤。示例性的癌包括：从宫颈、肺、前列腺、乳房、头颈部、结肠、肝和卵巢形成的那些。该术语也包括癌肉瘤，例如，它们包括由癌性和肉瘤性组织组成的恶性肿瘤。腺癌包括腺组织的癌，或其中肿瘤形成腺样结构。
要治疗的癌性组织是，例如，表达异常水平的内皮因子的内皮组织。本文使用的术语“转化的细胞”是指，已经自发地转化成无限制生长状态的细胞，即，它们已经获得通过在培养物中无限数目的分裂来生长的能力。在它们生长控制缺失方面，可以用诸如肿瘤性的、间变性的和/或增生性的等术语来表征转化的细胞。为了本发明的目的，术语“恶性哺乳动物细胞的转化表型”和“转化表型”意图包括、但不限于，与哺乳动物细胞的细胞转化有关的任何下述表型特性：永生化、形态或生长转化和致肿瘤性（通过在细胞培养物中的延长生长、在半固体培养基中的生长或在无免疫能力的或同源的动物中的致肿瘤生长来检测）。
术语“肿瘤细胞抗原”在本文中被定义为，与无关的肿瘤细胞、正常细胞或在正常体液中相比，抗原以更高的量存在于肿瘤细胞上或在体液中。通过本领域技术人员已知的任意数目的试验，可以测试抗原存在，所述试验包括但不限于使用抗体的阴性和/或阳性选择，诸如ELISA试验、放射免疫测定或通过蛋白印迹。
术语“细胞凋亡”或“程序化细胞死亡”表示这样的生理过程：在发育和其它正常生物学过程中，通过该过程来消除不希望的或无用的细胞。细胞凋亡是在正常生理条件下发生的细胞死亡模式，细胞是它自身的死亡的主参加者（“细胞自杀”）。它最常见于下述过程中：正常的细胞更新和组织体内稳态、胚胎发生、免疫耐受性的诱导和维持、神经系统的发育和内分泌依赖性的组织萎缩。经历细胞凋亡的细胞表现出特有的形态学和生化特征。这些特征包括：染色质聚集、细胞核和细胞质浓缩、细胞质和细胞核分隔成膜结合的囊泡（凋亡小体，它们含有核糖体）、形态学上完整的线粒体和核质。在体内，这些凋亡小体快速地被巨噬细胞、树突细胞或邻近的上皮细胞识别和吞噬。由于在体内去除凋亡细胞的这种有效机制，不会引起炎症应答。在体外，凋亡小体以及剩余的细胞碎片最终膨胀，并最后裂解。该体外细胞死亡的末期已经被称作“次要坏死”。通过本领域技术人员已知的方法，可以测量细胞凋亡，所述方法如DNA片段化、膜联蛋白V的暴露、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的活化、细胞色素C的释放等。已经诱导死亡的细胞在本文中称作“凋亡细胞”。
“细胞凋亡诱导剂”在本文中定义为诱导细胞凋亡/程序化细胞死亡，且包括，例如，抗-内皮因子抗体、抗-VEGF抗体、辐照、化疗剂或受体连接剂，其中细胞（例如，肿瘤细胞或内皮细胞）被诱导经历程序化细胞死亡。在下面更详细地描述了示例性的细胞凋亡诱导剂。
使用标准的膜联蛋白V细胞凋亡试验，可以测试细胞凋亡：在6-孔平板（NUNC）中培养NIH:OVCAR-3细胞，辐照，或用拮抗剂（或与另一种抗癌药相组合）处理4-48小时，洗涤，并用膜联蛋白V-FITC（BD-Pharmingen）染色1小时。通过流式细胞术（Becton-Dickinson, CellQuest）分析细胞，用碘化丙啶复染色，并在流式细胞计中再次分析。
制备和表达抗体的方法
借助于基因工程，已经构建了嵌合的免疫球蛋白。以前已经描述的大多数嵌合的免疫球蛋白已经包含来自小鼠单克隆抗体的VH和VL和人抗体的CL和Fc。可以使用来自本文所述的任意同种型的Fc区。本文所述的嵌合的也可以包括这样的标准：通过所述标准，修饰轻链可变区和/或重链可变链的框架中的有限数目的氨基酸，以便增加抗体的亲和力。
就用于人治疗而言，嵌合抗体通常具有几个优于小鼠抗体的潜在优点。因为抗体的效应部分是人的，认为它会与人免疫系统的其它部分更好地相互作用（例如，通过补体依赖性的细胞毒性（CDC）或抗体依赖性的细胞的细胞毒性（ADCC）更有效地破坏靶细胞）。另外，人免疫系统不会将嵌合抗体的恒定区识别为外来物，因此针对这样的注射的抗体的抗体应答通常小于针对完全外来的小鼠抗体的抗体应答。最后，已知小鼠抗体在人循环中的半衰期远远短于人抗体的半衰期。据推测，嵌合抗体可以具有与天然存在的人抗体更类似的半衰期，这允许施用更小的且更低频率的剂量。
当希望增加的嵌合抗体的亲和力时，可以额外地用其它氨基酸置换抗体的CDR内的残基。通常，改变CDR中的不超过4个氨基酸残基，更通常地，改变CDR中的不超过2个残基，但是重链CDR2除外，这时可以改变多达10个残基。通过常规方法，例如本文所述的那些（例如，Biacore），可以测量亲和力的变化。
使用本领域已知的常规技术，可以构建和生产嵌合抗体。另外，经常可以大量生产重组制备的抗体，特别当使用高水平表达载体时。
对于兽医学应用，通过使用非人Fc，可以合成用于施用给非人类（例如，灵长类动物、牛、马、猪等）的抗体。
使用在限制性内切核酸酶位点处的重组技术，可以使用本领域公认的技术（诸如本文提供和并入的那些）修饰编码氨基酸序列的核苷酸。
为了表达，表达系统是这样的系统：其利用GS系统（Lonza），使用谷氨酰胺合成酶基因作为选择标记。简而言之，使用GS系统（Lonza），使用谷氨酰胺合成酶基因作为选择标记，通过电穿孔（250V），在CHO细胞中进行转染。在含有10%透析的胎牛血清（FCS，含有2 mM谷氨酰胺）的DMEM（Sigma）中，培养野生型CHO细胞。通过电穿孔，用300μg线性化的DNA，转染6x107 CHO细胞。在电穿孔以后，将细胞重新悬浮于含有谷氨酰胺的DMEM中，涂布在36x96-孔平板（50μl/孔）上，在5% CO2中在37 ℃温育。次日，加入150μl/孔的选择性培养基（没有谷氨酰胺的DMEM）。在大约3周以后，使用无关的抗体作为阴性对照，通过ELISA（参见下面）筛选菌落。在24-孔平板中繁殖生产>20μg/ml的所有菌落，然后在双份T25烧瓶中繁殖。
为了高水平生产，广泛使用的哺乳动物表达系统是这样的系统：其利用由脱氢叶酸盐还原酶缺陷型（“dhfr-”）中国仓鼠卵巢细胞提供的基因扩增操作。所述系统是基于脱氢叶酸盐还原酶“dhfr”基因，该基因编码DHFR酶，该酶催化脱氢叶酸盐向四氢叶酸盐的转化。为了实现高产量，用含有功能性DHFR基因（以及编码目标蛋白的基因）的表达载体转染dhfr- CHO细胞。在该情况下，目标蛋白是重组抗体重链和/或轻链。
通过增加竞争性DHFR抑制剂甲氨蝶呤（MTX）的量，重组细胞会通过扩增dhfr基因来产生抗性。在标准情况下，采用的扩增单元远远大于dhfr基因的大小，结果共扩增抗体重链-。
当希望大规模生产蛋白（诸如抗体链）时，考虑采用的细胞的表达水平和稳定性。在长期培养中，重组CHO细胞群体在扩增过程中丧失在它们的特异性抗体生产力方面的同质性，即使它们源自单个亲代克隆。
本申请提供了编码本文所述的抗体或其一部分的分离的多核苷酸（核酸）、含有这种多核苷酸的载体以及用于将这种多核苷酸转录和翻译成多肽的宿主细胞和表达系统。
本申请也提供了质粒、载体、转录或表达盒形式的构建体，其包含至少一个上述的多核苷酸。
本申请也提供了重组宿主细胞，其包含一个或多个上述的构建体。编码本文所述的任意抗体的核酸形成本申请的一个方面，抗体的生产方法也形成本申请的一个方面，所述方法包括：从来源的编码核酸进行表达。通过在适当条件下培养含有所述核酸的重组宿主细胞，可以方便地进行表达。在通过表达来生产以后，使用任意合适的技术，可以分离和/或纯化抗体或其一部分，然后适当地使用。
可以从例如它们的天然环境中，以基本上纯的或同质的形式提供、分离和/或纯化编码特定抗体（或其部分）的核酸分子和含有本文所述的核酸分子的载体。在核酸的情况下，除了编码具有所需功能的多肽的序列以外，游离的或基本上游离的核酸或基因来源。核酸序列可以包括DNA或RNA，且可以是完全或部分合成的。纯化方法是本领域众所周知的。
用于在多种不同的宿主细胞中克隆和表达多肽的系统是众所周知的。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、酵母和杆状病毒系统。在本领域中可用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括、但不限于：中国仓鼠卵巢细胞、HeLa细胞、幼仑鼠肾细胞、NS0小鼠骨髓瘤细胞和许多其它细胞。
多种单细胞宿主细胞也可用于表达DNA序列。这些宿主包括众所周知的真核和原核宿主，诸如在组织培养物中的大肠杆菌、假单胞菌属、芽孢杆菌属、链霉菌属、真菌（诸如酵母）和动物细胞（诸如CHO、YB/20、NS0、SP2/0、Rl.l、B-W和L-M细胞、非洲绿猴肾细胞（例如，COS 1、COS 7、BSC1、BSC40和BMT10））、昆虫细胞（例如，Sf9）和人细胞和植物细胞的菌株。
抗体或其部分在原核细胞（诸如大肠杆菌）中的表达在本领域中是非常确定的。关于综述，参见例如Plückthun, A. Bio/Technology 9: 545-551 (1991)。
在培养的真核细胞中的表达也是本领域技术人员可利用的，作为生产本文所述的抗体的一个选择，最新的综述参见，例如Raff, M.E. （1993）Curr. Opinion Biotech. 4: 573-576; Trill J.J. 等人（1995）Curr. Opinion Biotech 6: 553-560，它们中的每一篇通过引用整体并入本文。
可以选择或构建合适的载体，其含有适当调节的序列，包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标志物基因和适当的其它序列。载体可以是适当的质粒、病毒载体，例如噬菌体或噬粒。关于其它细节，参见，例如，Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 第2版, Sambrook等人, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press。许多已知的核酸操作技术和方法，例如核酸构建体的制备、诱变、测序、将DNA导入细胞中和基因表达以及蛋白的分析，详细描述在：Short Protocols in Molecular Biology, 第2版, Ausubel等人编, John Wiley & Sons, 1992。Sambrook等人和Ausubel等人的方法和公开内容通过引用整体并入本文，且是本领域众所周知的。
因而，另一个方面提供了一种宿主细胞，其含有本文公开的核酸。另一个方面提供了一种方法，所述方法包括：将这样的核酸导入宿主细胞中。所述导入可以采用任何可利用的技术。对于真核细胞，合适的技术可以包括，例如，磷酸钙转染、DEAE葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染和使用逆转录病毒或其它病毒（例如，牛痘，或者对于昆虫细胞，杆状病毒）的转导。对于细菌细胞，合适的技术可以包括，例如，氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体的转染。
在导入之后，可以造成或允许核酸的表达，例如通过在基因表达条件下培养宿主细胞。
在一个实施方案中，将核酸整合进宿主细胞的基因组（例如染色体）中。根据标准技术，通过包含促进与基因组的重组的序列，可以促进整合。根据需要，可以初始化Ig增强，以使表达最大化。
本申请也提供了一种方法，所述方法包括：在表达系统中使用上述的构建体，以便表达上述的抗体（或其部分）。
本申请也涉及分离的核酸，诸如重组DNA分子或克隆的基因或其简并变体、突变体、类似物或其片段，它们编码结合内皮因子的嵌合抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的抗体或其一部分的重组DNA分子或克隆的基因的完整DNA序列可以可操作地连接到表达控制序列上，后者可以导入适当宿主中。本申请因此延伸至单细胞宿主，所述宿主被抗体的克隆基因或包含编码抗体的VH、VL、CL和/或Fc的DNA序列的重组DNA分子转化。
另一个特征是，本文公开的DNA序列的表达。如本领域众所周知的，可以如下表达DNA序列：将它们可操作地连接至适当表达载体中的表达控制序列上，并采用该表达载体来转化适当的单细胞宿主。
DNA序列与表达控制序列的这种可操作连接当然地包括（如果不是DNA序列的一部分）：在DNA序列上游的正确读码框中，提供起始密码子ATG。
可以以分离的和/或纯化的形式（例如，编码具有所需功能的多肽的多核苷酸以外的来源的游离的或基本上游离的多核苷酸）提供多核苷酸和载体。本文使用的“基本上纯的”和“基本上游离的”表示，含有少于例如约20%或更少外来物、约10%或更少外来物、约5%或更少外来物、约4%或更少外来物、约3%或更少外来物、约2%或更少外来物或约1%或更少外来物的溶液或悬浮液。
多种宿主/表达载体组合可以用于表达本发明的DNA序列。有用的表达载体，例如，可以由染色体的、非染色体的和合成的DNA序列的区段组成。合适的载体包括、但不限于：SV40和已知的细菌质粒的衍生物，例如，大肠杆菌质粒col El、Pcr1、Pbr322、Pmb9和它们的衍生物，质粒诸如RP4；噬菌体DNA，例如，噬菌体λ的众多衍生物，例如，NM989和其它噬菌体DNA，例如，M13和丝状单链噬菌体DNA；酵母质粒诸如2u质粒或其衍生物；可用于真核细胞中的载体，诸如可用于昆虫或哺乳动物细胞中的载体；源自质粒和噬菌体DNA的组合的载体，诸如已经被修饰成采用噬菌体DNA或其它表达控制序列的质粒；等。
本文也提供了一种重组宿主细胞，其包含一种或多种多核苷酸构建体。编码本文提供的抗体的多核苷酸形成本申请的一个方面，抗体的生产方法也形成本申请的一个方面，所述方法包括：从一种或多种多核苷酸进行表达。例如，通过在适当条件下培养含有所述多核苷酸的重组宿主细胞，可以实现表达。然后使用任意合适的技术，可以分离和/或纯化抗体，并适当地使用。
多种表达控制序列（控制可操作地连接到它上的DNA序列的表达的序列）中的任一种可以用于这些载体中，以表达DNA序列。这样的有用的表达控制序列包括，例如，SV40的早期或晚期启动子、CMV、牛痘、多瘤或腺病毒、lac系统、trp系统、TAC系统、TRC系统、LTR系统、噬菌体λ的主要操纵基因和启动子区、fd外壳蛋白的控制区、3-磷酸甘油酸酯激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶的启动子（例如，Pho5）、酵母交配因子的启动子和已知控制原核或真核细胞的基因或它们的病毒和它们的不同组合的表达的其它序列。
应当理解，并非所有载体、表达控制序列和宿主同样好地起表达DNA序列的功能。也并非所有宿主对相同的表达系统同样好地起作用。但是，无需过多实验，本领域技术人员能够选择适当的载体、表达控制序列和宿主，以实现希望的表达，而不脱离本申请的范围。例如，在选择载体时，必须考虑宿主，因为所述载体必须在所述宿主中发挥功能。还会考虑载体的拷贝数、控制该拷贝数的能力以及由所述载体编码的任意其它蛋白（诸如抗生素标志物）的表达。本领域普通技术人员可以选择适当的载体、表达控制序列和宿主，以实现希望的表达，而不脱离本申请的范围。例如，例如，在选择载体时，考虑宿主，因为所述载体必须在所述宿主中发挥功能。还可以考虑载体的拷贝数、控制该拷贝数的能力以及由所述载体编码的任意其它蛋白（诸如抗生素标志物）的表达。
本申请也提供了在本文别处所述的质粒、载体、转录或表达盒形式的构建体，它们包括至少一个上述的多核苷酸。可以选择或构建合适的载体，其含有适当的调节序列，包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、选择标记和适当的其它序列。载体可以是适当的质粒、病毒载体，例如适当的噬菌体、噬粒等。关于其它细节，参见，例如，Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 第2版, Sambrook等人, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press。许多已知的核酸操作技术和方法，例如核酸构建体的制备、诱变、测序、将DNA导入细胞中和基因表达以及蛋白的分析，详细描述在：Short Protocols in Molecular Biology, 第2版, Ausubel等人编, John Wiley & Sons, 1992。Sambrook等人和Ausubel等人的方法和公开内容通过引用整体并入本文。
在选择表达控制序列时，通常考虑多种因素。这些因素包括，例如，系统的相对强度、它的可控性和它与要表达的特定DNA序列或基因的相容性，特别是在潜在二级结构方面。通过考虑例如它们与选择的载体的相容性、它们的分泌特征、它们的正确折叠蛋白的能力、和它们的发酵需要以及由要表达的DNA序列编码的产物对宿主的毒性和表达产物的纯化容易性，选择合适的单细胞宿主。
另一个方面提供了一种宿主细胞，其含有一种或多种本文公开的多核苷酸。另一个方面提供了通过任意可利用的技术将这样的一种或多种多核苷酸导入宿主细胞中的方法。对于真核细胞，合适的技术可以包括，例如，磷酸钙转染、DEAE葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染和使用逆转录病毒或其它病毒（例如，牛痘，或者对于昆虫细胞，杆状病毒）的转导。对于细菌细胞，合适的技术可以包括，例如，氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体的转染。
在导入之后，可以造成或允许一个或多个多核苷酸的表达，例如通过在从一个或多个多核苷酸表达一种或多种多肽的条件下培养宿主细胞。可以使用可诱导的系统，并通过加入活化剂来诱导表达。
在一个实施方案中，可以将多核苷酸整合进宿主细胞的基因组（例如染色体）中。根据标准技术，通过包含促进与基因组的重组的序列，可以促进整合。在另一个实施方案中，所述核酸维持在宿主细胞中的附加型载体上。
本文提供了这样的方法，所述方法包括：在表达系统中使用上述的构建体，以便表达特定多肽。
考虑到这些和其它因素，本领域技术人员能够构建多种载体/表达控制序列/宿主组合，它们在发酵或大规模动物培养中表达所述DNA序列。
除了克隆以外，或作为克隆的替代，可以重组地/合成地制备编码抗体或其一部分的多核苷酸。可以将多核苷酸设计成具有适当的密码子。一般而言，如果序列要用于表达，可以选择对于目标宿主而言优选的密码子。可以从通过标准方法制备的重叠寡核苷酸装配完整多核苷酸，并装配成完整编码序列。参见，例如，Edge, Nature, 292:756 (1981)； Nambair等人, Science, 223:1299 (1984)； Jay等人, J. Biol. Chem., 259:6311 (1984)。
通过本领域技术人员已知的多种方法，包括例如重组方法和化学合成，可以同时掺入编码抗体（或其一部分）的核酸和选择的氨基酸位置变化。
抗-内皮因子抗体
内皮因子（CD105）在细胞表面上表达为180 kDa同源二聚体跨膜蛋白。外部结构域以高亲和力（50 nM）结合TGF-β1和-3亚型，且CD105的跨膜和细胞内结构域与β聚糖具有71%序列相似性。人CD105基因位于染色体9q34上（使用荧光原位杂交进行鉴别），编码区含有14个外显子，已经表征了具有结合TGF- β的能力的CD105的2个不同亚型（L和S）。L-CD105由633个氨基酸残基组成，其中47个氨基酸残基在细胞质尾巴中，这不同于S-CD105，后者由600个氨基酸残基组成，其具有14个氨基酸细胞质尾巴。但是，L-CD105是优势形式。CD105在内皮细胞中组成性地磷酸化，主要在丝氨酸和苏氨酸残基上，且该磷酸化是由于在细胞内组成活性的TGF- βRII。TGF- β与CD105的结合导致磷酸化的减量调节，这类似于用蛋白激酶C抑制剂观察到的效应。人CD105氨基酸序列含有位于胞外结构域的暴露区域中的三肽精氨酸-甘氨酸-门冬氨酸（RGD）。RGD肽是在ECM蛋白（诸如纤连蛋白、玻璃体结合蛋白、von Willebrand因子（vWF）、I型胶原和纤维蛋白原）上发现的关键识别结构，且被细胞表面整联蛋白识别。整联蛋白附着已经涉入止血、血栓形成、血管生成和炎症，它们是内皮在其中起关键作用的过程（Duff等人, FASEB J., 17:984-992（2003））。
CD105是TGF-β受体家族的一个成员，其由增殖中的内皮细胞表达。内皮细胞增殖需要正常的CD105水平。CD105表达会被细胞低氧增加（通过低氧诱导因子-1-α（HIF-1-α）的生产），并保护低氧细胞免于细胞凋亡。CD105的几种功能与TGF-β信号传递有关。TGF-β通过异源二聚体受体发信号，所述受体由丝氨酸激酶、受体I（RI）和受体II（RII）组成。TGF-β与受体的外部结构域的结合，会暴露细胞质的RII激酶活性，所述活性会磷酸化TGF-βRI，后者然后可以与下游信号传递物（诸如Smad蛋白）相互作用。CD105形成TGF-β受体复合物的一部分，但是它可以独立地存在于细胞表面上。在许多体外细胞中，CD105会抑制TGF-β信号传递。
CD105也结合其它生长因子，诸如激活蛋白A和骨形态发生蛋白（BMP）-10、-9、-7和-2。TGF-β或其它生长因子配体与CD105的结合，需要至少存在受体RII，且它自己不能结合配体。CD105与受体的结合不会改变它们对配体本身的亲和力。在结合以后，CD105的细胞质结构域被TGF-βRI和TGF-βRII磷酸化；然后TGF-βRI（但是TGF-βRII不会）激酶从受体复合物解离。
CD105表达会抑制TGF-βRII的磷酸化水平，但是增加TGF-βRI的磷酸化水平，导致增加的Smad 2的磷酸化，但是不增加Smad 3的磷酸化。由于Smad 2可以与多种转录因子、辅活化剂和抑制剂相互作用，磷酸化的Smad 2可以起多种信号的积分器的作用，以调节基因转录。因而，CD105会调节TGF-β功能（通过与TGF-βRI和TGF-βRII的相互作用），并修饰下游Smad蛋白的磷酸化。
CD105起调节TGF-β超家族的多种激酶受体复合物的信号传递的作用，包括TGF-β受体（TGF-βR）、激活蛋白受体-样激酶（ALK）和激活蛋白受体。在没有CD105存在下，TGF-β受体的活化会导致SMAD蛋白（SMAD 2和3）的磷酸化，这会抑制内皮细胞生长。但是，TGF-β对CD105的活化会调节SMAD蛋白磷酸化（包括SMAD 1、5和8的磷酸化）。最终结果是TGF-β受体活化对内皮细胞的生长抑制作用的释放（参见图1）。不足令人惊奇的是，抗-CD105抗体或反义寡核苷酸对CD105活化的阻止，会与TGF-β协同地起抑制内皮细胞生长的作用。
CD105启动子的长度是2.6 kb，但是不含有TATA或CAAT转录起始盒。但是，它具有2个富含GC的区域：Sp1、ets、GATA、AP-2、NGF-β和Mad的共有基序，以及TGF-β应答元件。虽然如此，CD105具有相对受限的细胞分布。基础转录水平似乎需要ets位点（在位置-68处）和Sp1位点，但是表达的相对受限（例如，限于内皮细胞）似乎涉及多个调节区，具体地，一个在-1294至-932处，另一个非常接近转录起始位点。CD105被TGF-β增量调节，这已经被证实需要在-37至-29处的Sp1位点，也涉及一个或多个紧靠的在上游的SBE位点，所述位点结合Smads 3和/或4（它们被TGF-β信号传递活化）。低氧是缺血组织和肿瘤的共同特征，且是血管内皮细胞（EC）中的CD105基因表达的有效刺激物。与TGF-β1的组合会增强这样的效应。增量调节的CD105可以在低氧应激下的EC中发挥自我保护作用。
血管EC是CD105的主要来源。其它细胞类型（包括血管平滑肌细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、前-B和骨髓单核细胞起源的白血病细胞以及红细胞前体）在更低的程度上表达CD105。
CD105涉入血管生成。反义实验已经证实，与TGF-β1组合地抑制HUVEC中CD105表达，会导致体外血管生成的显著抑制，这表明CD105是内皮细胞中的促血管生成组分。CD105在血管生成中的重要作用的其它证据来自CD105敲除的小鼠。没有CD105的小鼠表现出多种血管和心脏缺陷，导致在胚胎早期死亡。在没有CD105的小鼠中观察到的严重血管病损指示，成熟的血管在胚胎外脉管系统中的形成需要CD105，这进一步证实了内皮因子在血管生成中的直接作用。
内皮因子（除了别的以外，也称作CD105或edg-1）是I型同源二聚体膜糖蛋白，其以高水平在增殖中的血管内皮细胞中表达。因而，内皮因子主要是经历活跃的血管生成的内皮细胞的增殖相关的标志物。但是，正常组织的血管内皮可能存在有限的内皮因子表达。已知人内皮因子会特异性地结合转化生长因子-β（TGF-β），推论的内皮因子氨基酸序列与β-聚糖（TGF-β受体的一种类型）具有强同源性。
在基于抗体的减少肿瘤脉管系统的方法中，已经靶向内皮因子（EDG），因为EDG是在内皮和白血病细胞上的增殖相关的抗原。它在肿瘤相关的血管内皮中的表达受到增量调节，EDG是血管生成所必需的。血管生成包括新毛细血管的形成，这会导致新生血管形成以及现有脉管系统的维持。这是一个复杂的过程，该过程包括一系列相继的步骤，包括内皮细胞介导的血管基膜和间质基质的降解、内皮细胞的迁移、内皮细胞的增殖和内皮细胞的毛细血管袢的形成。
本文提供了结合内皮因子的嵌合抗体。内皮因子可以存在于：构成和支持现有的脉管系统的细胞上，以及促进新脉管系统的生长并变成新脉管系统的一部分的细胞上。这些抗体可以结合内皮因子，并从而抑制血管生成、抑制现有的脉管系统或现有脉管系统的维持和/或抑制小血管膨胀。除了它们用于纯化内皮因子的用途以外，这些抗体可用于纯化、检测和诊断目的以及治疗目的。本文提供的抗体可以用于配制用于治疗多种病症和疾病的药物、治疗所述病症和疾病的方法和检测方法或诊断方法。本文使用的血管生成包括新血管的生长和/或发育（也称作新生血管形成）、小血管的膨胀、过度的或延长的血管生长和现有脉管系统的维持。血管生成病症和疾病表示与血管生成有关、由血管生成造成或伴随血管生成的那些疾病和病症。这样的疾病的非限制性实施例包括，例如，不同形式的癌症（原发性肿瘤和转移灶）。
已经产生了针对内皮因子的鼠单克隆抗体（mAb），它们会调节内皮因子活性，并从而抑制血管生成和/或抑制小血管的血管舒张。这些鼠抗体描述在美国专利5,928,641、6,200,566、6,190,660和7,097,836中，它们中的每一篇整体并入本文。另外，已经证实了许多这样的抗体的离体和体内有效性；结合内皮因子的单克隆抗体作为调节内皮因子的化合物是令人感兴趣的。但是，鼠抗体的治疗性应用是不可行的，因为鼠抗体的施用具有许多限制，包括例如人抗-小鼠抗体（HAMA）形式的免疫原性。
已经描述了几种抗-内皮因子抗体，尤其是抗-内皮因子单克隆抗体（“mAb”）。MAb SN6是用人白血病细胞的细胞膜的糖蛋白混合物免疫小鼠所生成的抗体（Haruta和Seon, 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. 83:7898-7902）。SN6是一种识别人内皮因子的鼠mAb。MAb 44G4是用人前-B白血病细胞的全细胞悬浮液免疫小鼠所生成的抗体（Gougos和Letarte, 1988, J. Immunol. 141:1925-1933; 1990, J. Biol. Chem. 265:8361-8364）。44G4也是一种识别人内皮因子的鼠mAb。MAb MJ7/18是用发炎的小鼠皮肤免疫大鼠所生成的抗体（Ge和Butcher, 1994, 同上）。MJ7/18也是一种识别鼠内皮因子的mAb。mAb Tec-11是用人脐静脉内皮细胞免疫小鼠所生成的抗体（Burrows等人, 1995, Clin. Cancer Res. 1:1623-1634）。Tec-11是一种具有限于人内皮因子的反应性的鼠mAb。本文描述了结合内皮因子的嵌合抗体，其表现出减小的免疫原性，同时维持和/或提高它们的特异性。另外，为了解决与鼠抗体有关的问题，本文描述了结合内皮因子并减少和/或抑制血管生成的嵌合抗体，其表现出减小的免疫原性，同时维持和/或提高它们的特异性。这些嵌合的抗-内皮因子抗体可用于诊断和治疗各种病症和疾病，以及用于纯化和检测内皮因子。针对内皮因子的抗体代表用于治疗多种疾病和病症（它们涉及血管生成，受血管生成的影响）的疗法的发展的一个重要领域。
本文提供了结合内皮因子的嵌合抗体。也提供了它们的嵌合抗体，所述嵌合抗体结合内皮因子，并抑制（部分地或完全地）或控制/治疗（部分地或完全地）血管生成/新生血管形成、小血管膨胀、抑制细胞增殖或抑制肿瘤生长。类似地，在抑制或结合内皮因子的含义内，也包括抑制内皮因子功能（例如，信号传递、结合、活化等）。在另一个实施方案中，嵌合抗体通过结合内皮因子来抑制血管生成。本申请也提供了可以用于生产嵌合抗体的细胞系、用于生产所述细胞系的方法、用于表达抗体和纯化它们的方法。
可以认识到，使用常规方法（包括，但不限于ELISA），使用本文提供的或本领域已知的试验，可以测试使用本文所述方法制备的特异性地结合内皮因子的抗体的结合内皮因子的能力。使用常规方法,包括但不限于Biacore或表面等离子体共振，也可以测定本文所述抗体的亲和力。
本文提供了结合内皮因子的嵌合抗体。本文也提供了结合内皮因子并抑制血管生成的嵌合抗体。
本文提供了一种嵌合抗体，其包含：具有SEQ ID NO: 1所述的氨基酸序列的轻链可变区、具有SEQ ID NO: 2所述的氨基酸序列的轻链恒定区、具有SEQ ID NO: 3所述的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO: 4所述的氨基酸序列的γ1（γ1）恒定区（Fc）。
在另一个方面，本申请提供了一种嵌合抗体，其能够在一定条件下与本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体竞争，其中在ELISA试验中，与这样的抗体的竞争会阻止至少5%的具有所述抗体的VH和VL序列的抗体与内皮因子结合。
本文提供了中和嵌合抗体，其结合内皮因子，并调节内皮因子的活性。中和抗体可以例如通过结合内皮因子来抑制血管生成。
嵌合的抗-内皮因子抗体使血管生成、细胞增殖和/或肿瘤生长与阴性对照相比抑制至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍或更大的百分比（%），指示抗体抑制血管生成。嵌合的抗-内皮因子抗体使血管生成、细胞增殖和/或肿瘤生长与阴性对照相比抑制小于2倍的百分比（%），指示抗体不会抑制血管生成。
嵌合抗体与内皮因子的结合可以部分地（例如5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%或它们之间的任意数字）或完全地抑制血管生成、细胞增殖和/或肿瘤生长。使用体外试验和/或在体内使用本领域公认的试验（诸如本文所述的或本领域以其它方式已知的那些），可以测定嵌合抗体的中和或抑制活性。
本文描述的抗体可用于在下面更详细地描述的检测或诊断用途。本文描述的抗体可用于结合内皮因子，这又可以抑制本文所述的血管生成。
抗-VEGF剂
已经将血管内皮生长因子（VEGF）鉴别为这样的蛋白：其在体外诱导内皮细胞的增殖和迁移，并在体内诱导血管透化和血管生成。它调节血管增殖和通透性。也称作血管通透性因子（VPF），因为它对血管内皮的特异性和能力，它在促血管生成因子中是独特的。它也在新形成的血管中起内皮细胞的抗细胞凋亡因子的功能。VEGF在肿瘤细胞、巨噬细胞、T细胞、平滑肌细胞、肾细胞、系膜细胞、角质化细胞、星形细胞和成骨细胞中表达。
在一个实施方案中，“人VEGF”表示165-氨基酸人血管内皮细胞生长因子和如Leung等人, Science 246: 1306 (1989)和Houck等人, Mol. Endocrin., 5: 1806 (1991)所述的有关的121-、189-和206-氨基酸血管内皮细胞生长因子以及这些生长因子的天然存在的等位基因形式和加工形式。术语“VEGF”也表示来自非人物种（诸如小鼠、大鼠或灵长类动物）的VEGF。在某些情况下，用术语指示来自特定物种的VEGF，例如hVEGF指示人VEGF，mVEGF指示鼠VEGF，等。术语“VEGF”也用于表示所述多肽的截短形式，其包含165-氨基酸人血管内皮细胞生长因子的氨基酸8-109或1-109。如在天然VEGF序列中所指示的，对“截短的”天然VEGF的氨基酸位置编号。例如，在截短的天然VEGF中的氨基酸位置17（蛋氨酸）也是在天然VEGF中的位置17（蛋氨酸）。截短的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-1受体的结合亲和力。根据一个实施方案，所述VEGF是人VEGF。
VEGF家族包括7个成员，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和胎盘生长因子（PIGF）。它们都具有在VEGF同源性结构域中的8个半胱氨酸残基的共同结构。另外，与VEGF-A有关的是，存在6个不同的亚型，VEGF-A165是主要亚型。所有这些亚型在血管生成中具有独特且重叠的功能。VEGF基因位于染色体6p.21上。VEGF家族的不同成员具有不同的物理和生物性质，它们通过特定酪氨酸激酶受体（VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3）起作用。VEGFR-3受体和它的配体VEGF-C和VEGF-D与淋巴管生成有关，而PIGF与动脉生成相关联。
已经表征了VEGF的2种高亲和力受体：VEGFR-1/Flt1（fms-样酪氨酸激酶-1）和VEGFR-2/Kdr/Flk-1（含有受体/胎儿肝激酶-1的激酶插入结构域）。第三种受体VEGFR-3也是已知的。这些受体被分类为PDGF-受体家族。但是，VEGF受体在它们的胞外结构域中具有7个免疫球蛋白-样环（与PDGF家族的其它成员中的5个不同）和一个更长的激酶插入片段。VEGF受体的表达主要发生在血管内皮细胞中，尽管有些也可能存在于单核细胞和黑素瘤细胞系上。仅内皮细胞被证实响应于VEGF而增殖，来自不同来源的内皮细胞表现出不同的应答。因而，通过VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3介导的信号似乎是细胞类型特异性的。
VEGFR-1和VEGFR-2以高亲和力（Kd分别是约20 pM和200 pM）结合VEGF 165。还已经证实，Flk-1受体会响应于VEGF而经历自磷酸化。VEGFR-2介导的信号造成过表达该受体的猪主动脉内皮细胞的形态学、肌动蛋白再机化和膜边缘波动的显著变化。在这些细胞中，VEGFR-2也介导配体诱导的趋化性和促有丝分裂性；而VEGFR-1转染的细胞缺少对VEGF的促有丝分裂应答。相比而言，VEGF对表达VEGFR-1的大鼠窦状内皮细胞具有强生长刺激效应。与VEGFR-1和VEGFR-2共沉淀的磷蛋白是不同的，提示不同的信号传递分子与受体特异性的细胞内序列相互作用。
VEGF代表抗肿瘤治疗的一个靶标，因为它的表达在多种实体瘤中被增量调节。VEGF是血管生成（从预先存在的血管生长出新血管）的一种主要调节剂。该过程是实体瘤的生长的基础，其依赖于新血管的形成。某些小分子治疗剂能够靶向血管内皮生长因子受体（“VEGFR”）；小分子治疗剂的这种靶向可以导致抗癌效应。靶向VEGF受体的试剂通过抑制新血管形成来间接地阻断肿瘤生长。抑制VEGF诱发的血管生成可以发挥抗肿瘤效应或提高的抗肿瘤效应，而不显著抑制巨噬细胞、破骨细胞或破软骨细胞的VEGF刺激。
在本文提供的一个实施方案中，VEGF拮抗剂是抗体，包括但不限于单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体和人源化的抗体。根据一个具体实施方案，所述抗-VEGF抗体是贝伐单抗（阿伐他汀?）。根据另一个实施方案，所述抗-VEGF抗体选自：Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv（scFv）、半抗体、单链结合多肽、Fv片段、双特异抗体和线性抗体。
“VEGF拮抗剂”表示这样的分子：其能够中和、阻断、抑制、, 消除、减小或干扰VEGF活性，包括它与VEGF或一种或多种VEGF受体或编码它们的核酸的结合。在某些情况下，所述VEGF拮抗剂结合VEGF或VEGF受体。根据一个实施方案，VEGF拮抗剂结合VEGF，并抑制VEGF诱导的内皮细胞体外增殖。
根据一个实施方案，VEGF拮抗剂以比非-VEGF或非-VEGF受体更大的亲和力结合VEGF或VEGF受体。根据另一个实施方案，VEGF拮抗剂以在1 uM至1μM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。根据另一个实施方案，VEGF拮抗剂以在500 nM至1μM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。
“抗-VEGF抗体”是以足够的亲和力和特异性结合VEGF的抗体。本发明的抗-VEGF抗体可以用作靶向和干扰其中涉及VEGF活性的疾病或病症的治疗剂。抗-VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同源物（诸如VEGF-B或VEGF-C）或其它生长因子（诸如P1GF、PDGF或bFGF）。
抗-VEGF抗体“贝伐单抗”也称作“rhuMAb VEGF”或“阿伐他汀?”，是根据Presta等人（1997）Cancer Res. 57:4593-4599所述的方法制备的重组人源化的抗-VEGF单克隆抗体。它含有突变的人IgG1框架区和来自鼠抗-hVEGF单克隆抗体A.4.6.1（它阻断人VEGF与它的受体的结合）的抗原结合互补性决定区。贝伐单抗的大约93%的氨基酸序列（包括大部分框架区）源自人IgG1，且约7%的序列源自鼠抗体A4.6.1。贝伐单抗具有约149,000道尔顿的分子质量，且被糖基化。与贝伐单抗的鼠单克隆形式和人源化有关的氨基酸序列被提供为SEQ ID NO: 5-11。
在某些实施方案中，要在联合组合物中施用的VEGF受体抑制剂是VEGF的小分子抑制剂。在其它实施方案中，要在联合组合物中施用的VEGF受体抑制剂是抗-VEGF抗体。在一个非限制性实施例中，要在联合组合物中施用的VEGF受体抑制剂是贝伐单抗（阿伐他汀?）。在下面和在实施例中更详细地讨论了贝伐单抗的示例性的、非限制性剂量。
修饰的抗体或其部分
本文所述的抗体可以另外包含用于治疗用途的治疗部分。
本文所述的抗体也可以用作免疫缀合物。如本文使用的，为了说明书和权利要求书的目的，免疫缀合物表示由根据本发明的嵌合的抗-内皮因子抗体或其片段和至少一种治疗标记组成的缀合物。治疗标记包括抗肿瘤试剂和血管生成抑制剂。这样的抗肿瘤试剂是本领域已知的，包括但不限于：毒素、药物、酶、细胞因子、放射性核素、光动力剂和血管生成抑制剂。毒素包括、但不限于：蓖麻蛋白A链、突变型假单胞菌外毒素、白喉类毒素、链黑霉素、博安霉素（boamycin）、皂草素、白树毒素和美洲商陆抗病毒蛋白。药物包括柔红霉素、甲氨蝶呤和卡奇霉素。放射性核素包括放射性金属。细胞因子包括、但不限于：转化生长因子（TGF）-β、白介素、干扰素和肿瘤坏死因子。光动力剂包括、但不限于：卟啉类和它们的衍生物。额外的治疗标记是本领域已知的，且也在本文中预见到。用于使抗-内皮因子mAb或其片段与至少一种抗肿瘤剂复合的方法是本领域技术人员众所周知的（即，Ghetie等人, 1994, Pharmacol. Ther. 63:209-34所综述的抗体缀合物）。这样的方法可以利用几种可使用的用于偶联或连接分子的杂双功能试剂之一。额外的放射性核素与额外的连接分子（诸如治疗和诊断标记）的方法一起在本文中予以另外描述。
使用本领域已知的用于不同目的的技术，例如，通过添加聚乙二醇（PEG），可以修饰抗体。PEG修饰（聚乙二醇化）可以导致下述的一项或多项：提高的循环时间、提高的溶解度、提高的对蛋白酶解的抗性、降低的抗原性和免疫原性、提高的生物利用度、降低的毒性、提高的稳定性和更容易配制（关于综述，参见，Francis等人, International Journal of Hematology 68:1-18, 1998）。
可以修饰抗体的Fc部分，以增加当施用给患者时在血液中的循环半衰期。使用本领域的常规方式，例如，在美国专利号7,217,798（它通过引用整体并入本文）中所述的方式，可以测定修饰。
提高基于抗体的融合蛋白在循环中的半衰期的其它方法也是已知的，例如，在美国专利号7,091,321和6,737,056（它们各自通过引用并入本文）中所述的方法。另外，可以生产或表达抗体，使得它们不含有在它们的复杂的N-糖苷-连接的糖链上的岩藻糖。已知从复杂的N-糖苷-连接的糖链去除岩藻糖会增加抗体和抗原结合片段的效应子功能，包括但不限于：抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性（ADCC）和补体依赖性的细胞毒性（CDC）。类似地，可以将结合内皮因子的抗体在它们的C-端末端连接在源自任意抗体同种型（例如，IgG、IgA、IgE、IgD和IgM）和任意同种型亚类（尤其是IgG1、IgG2b、IgG2a、IgG3和IgG4）的所有或一部分免疫球蛋白重链上。
另外，还可以修饰本文所述的抗体，使得它们能够穿过血脑屏障。本文所述的抗体的这种修饰允许治疗脑疾病，诸如多形性胶质母细胞瘤（GBM）。在美国专利公开20070082380（它通过引用整体并入本文）中描述了允许蛋白（诸如抗体）穿过血脑屏障的示例性的修饰。
已经证实，免疫球蛋白的糖基化对它们的效应子功能、结构稳定性和从抗体生产细胞分泌的速率具有显著影响（Leatherbarrow等人, Mol. Immunol. 22：407（1985））。负责这些性质的碳水化合物基团通常连接在抗体的恒定（C）区上。例如，IgG的活化补体依赖性的细胞溶解的经典途径的完全能力，需要IgG在CH 2结构域中的天冬酰胺297处的糖基化（Tao和Morrison, J. Immunol. 143:2595（1989））。IgM在CH 3结构域中的天冬酰胺402处的糖基化，是抗体的适当装配和细胞溶解活性所必需的（Muraoka和Shulman, J. Immunol. 142:695（1989））。在IgA抗体的CH 1和CH3结构域中的位置162和419处的糖基化位点的去除，会导致细胞内降解和至少90%的分泌抑制（Taylor和Wall, Mol. Cell. Biol. 8:4197（1988））。另外，可以生产或表达抗体，使得它们不含有在它们的复杂的N-糖苷-连接的糖链上的岩藻糖。已知从复杂的N-糖苷-连接的糖链去除岩藻糖会增加抗体和抗原结合片段的效应子功能，包括但不限于：抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性（ADCC）和补体依赖性的细胞毒性（CDC）。利用本领域已知的分子克隆技术，通过多种系统，可以生产这些“去岩藻糖基化的”抗体，包括但不限于转基因动物、转基因植物或细胞系，它们已经遗传地工程化，使得它们不再含有在复杂的N-糖苷-连接的糖链中包含岩藻糖所必须的酶和生化途径（也称作岩藻糖基转移酶敲除的动物、植物或细胞）。可以工程化成岩藻糖基转移酶敲除的细胞的细胞的非限制性实施例包括：CHO细胞、SP2/0细胞、NS0细胞和YB2/0细胞。
还已经观察到免疫球蛋白在可变（V）区中的糖基化。Sox和Hood报道，约20%的人抗体在V区中被糖基化（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 66:975（1970））。认为V结构域的糖基化源自N-连接的糖基化信号Asn-Xaa-Ser/Thr在V区序列中的偶然出现，且本领域尚未认为在免疫球蛋白功能中起作用。
在可变结构域框架残基处的糖基化可以改变抗体与抗原的结合相互作用。本发明包括这样的标准：通过所述标准，选择要突变（例如，通过残基的置换、删除或添加）的嵌合免疫球蛋白链的框架或CDR中的有限数目的氨基酸，以便增加抗体的亲和力。
通常，通过将一个或多个突变导入V区框架中，通常在邻近一个或多个CDR的区域中和/或在一个或多个框架区中，可以调节结合抗原的亲和力。通常，这样的突变涉及保守氨基酸置换的导入，所述置换会破坏或建立糖基化位点序列，但是基本上不会影响多肽的水疗（hydropathic）结构性质。通常，避免导入脯氨酸残基的突变。在美国专利号6,350,861（它关于糖基化通过引用并入本文）中进一步描述了抗体的糖基化。
可以配制用于短期递送或延长的（长期）递送的抗体。
结合内皮因子的抗体也可以用于纯化内皮因子和/或检测样品或患者中的内皮因子水平，以检测或诊断在下面更详细地描述的与内皮因子有关的疾病或障碍。
可以测试使用这样的方法制备的结合内皮因子的嵌合抗体的结合亲和力、亲合力和中和能力中的一项或多项。有用的嵌合抗体可以用于施用给患者，以预防、抑制、控制或治疗与血管生成有关的病症、疾病或障碍。
可以评价抗体的结合亲和力、结合速率、解离速率和亲合力中的一项或多项。在一个方面，可以评价抗体的中和内皮因子或VEGF的活性的能力。使用本领域公认的试验，包括但不限于：酶联免疫吸附测定（ELISA）、Scatchard分析、BIACORE分析（表面等离子体共振）等以及本领域普通技术人员通常使用的和已知的其它试验，可以测量结合亲和力、结合速率、解离速率和亲合力。
使用例如酶联免疫吸附测定（ELISA）、竞争性结合试验、ELISPOT试验或本领域已知的任意其它有用的试验，可以测量抗体与内皮因子的结合和/或测定例如抗体的抑制血管生成的能力。这些试验是本领域普通技术人员通常使用的和众所周知的。
在一个非限制性实施方案中，ELISA试验可以用于测量结合内皮因子的特定抗体的结合能力。
诸如ELISA等试验也可以用于鉴别与其它抗体相比表现出增加的对内皮因子的特异性的抗体。诸如ELISA等试验也可以用于鉴别这样的抗体：所述抗体结合跨一种或多种多肽的表位和跨一种或多种内皮因子或VEGF的表位。通过运行平行的ELISA，可以进行特异性试验，在所述ELISA中，在单独的试验室中同时地筛选实验抗体的结合一种或多种表位（在含有内皮因子表位的不同多肽上）的能力，以鉴别结合内皮因子的抗体。本领域技术人员熟悉的另一种测量表观结合亲和力的技术是表面等离子体共振技术（在BIACORE 2000系统上分析）（Liljeblad, 等人, Glyco. J. 2000, 17:323-329）。Heeley, R. P., Endocr. Res. 2002, 28:217-229描述了标准测量和传统的结合试验。
也可以测试结合内皮因子的嵌合抗体的治疗与血管生成有关的不同疾病和病症以及不同形式的癌症（例如，原发性肿瘤、复发性肿瘤和转移灶）的能力。本领域技术人员已知的任意合适的试验可以用于监测这种效应。本文描述了几种这样的技术。在一个实施例中，测试本文描述的抗体的结合内皮因子的能力。在另一个实施例中，通过表面等离子体共振（SPR），测定本文描述的抗体的亲和常数。在另一个实施例中，测定本文描述的抗体对血管生成抑制的作用。
II.     组合物
当与可接受的载体或赋形剂相组合时，本文所述的每种化合物可以用作组合物。这样的组合物可用于体外或体内分析，或用于与公开的化合物一起在体内或离体施用给受试者，以治疗受试者。
本文提供了含有嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物（药物），所述抗体能够抑制内皮因子的一种或多种生物活性，诸如血管生成活性。
本文提供了含有抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的组合物（药物），所述抗体能够抑制VEGF的一种或多种生物活性，诸如它的促有丝分裂活性，在一个实施方案中，或血管生成活性。
本文也提供了含有嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的组合的组合物（药物）。
含有嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物可以与含有抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的组合物相继地或同时地施用。这样的施用包括、但不限于下述施用：在彼此的约4周内、在彼此的约3周内、在彼此的约2周内、在彼此的约1周内、在彼此的1天内、在彼此的约12小时内、在彼此的约6小时内、在彼此的约3小时内、在彼此的约1小时内、在彼此的约30分钟内、在同一天、在同时或它们的组合。当预见到本发明组合物和/或组合的治疗部分的多次剂量时，应当理解，使用可商业得到的产品的标准品，使用基于受试者的年龄、身高、体重、健康和其它身体特征的已知剂量和浓度，可以以经验为主地确定各自的剂量。
当相继地施用组合物时，可以例如在抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）之前和/或之后，施用包含本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物。或者，在抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）之后，施用包含本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物。
当同时地施用组合物时，可以在与含有抗-VEGF抗体的组合物相同的部位或不同的部位，施用含有嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物。
在另一个实施方案中，本文提供了含有嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的组合物（药物），其能够分别抑制内皮因子和VEGF的一种或多种生物活性，诸如促有丝分裂活性、细胞增殖、肿瘤生长、新生血管形成或血管生成活性。
应当理解，治疗方案可以包括施用一次或多次本文所述组合物中的每一种。可以在单次剂量或多次剂量中施用组合物。单独组合物的施用可以是通过相同的途径或通过不同的途径。
在一个实施方案中，每1-3周施用组合物，持续6-12个循环，或直到肿瘤进展。所述方法可以另外包括下述步骤：每1-12周施用组合物，持续多达2年。在另一个非限制性实施例中，嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的并行施用发生在第1周，随后在第1、2、3或4周额外施用组合物，其中重复并行施用6-12个循环，或直到肿瘤进展，然后每1-12周施用组合物，持续多达2年。
在治疗患者的癌症的方法的一个非限制性实施例中，所述方法包括：外科手术切除癌症，并在1-3周施用嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段），持续12个月或直到肿瘤进展，随后在1-12周并行施用一定剂量的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）。另外，可以每1-3周重复嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）的并行施用，持续多达6个循环。任选地，所述方法另外包括：每1-12周施用嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段），持续多达2年。应当理解，治疗方案可以与本文提供的监测方法相组合，以确定是否需要和何时需要施用额外剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）。
联合治疗可以提供协同作用和/或有益作用，或可以允许更低的组合剂量，以提供更大的安全界限。本发明包括这样的治疗方案：其增强嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF（或其抗原结合片段）用于预防、控制、治疗或消除癌症或其它疾病的预防效果或治疗效果。
在一个实施方案中，给受试者施用额外的治疗性处理，例如，血管生成抑制剂（如本文所述）。含有这样的额外的治疗性处理的组合物可以与本文所述的其它组合物联合地（相继地或同时地）施用。
在用于治疗本文提供的癌症的一种非限制性方法中，额外的治疗性处理包括：外科手术切除癌症、辐照、一种或多种化疗剂或它们的组合，和并行施用一种或多种本文所述的组合物。在一个方面，组合物的施用可以是，例如，20分钟静脉内输注。
因而，除了活性成分以外，组合物可以包括：药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其它物质。这样的物质应当是无毒的，且不会干扰活性成分的效能。载体或其它物质的精确性质取决于给药途径。
可以如下制备包含抗体或抗原结合片段的制剂（通过本文所述的方法鉴别）用于贮存：混合具有希望的纯度程度的蛋白和任选的生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂（Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版, Osol, A.编（1980）），制成低压冻干制剂或水溶液的形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂是在采用的剂量和浓度对受体无毒的那些，包括：缓冲剂诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂（诸如十八基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚）；低分子量（小于约10个残基）多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水的聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖类、二糖类和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；形成盐的抗衡离子诸如钠；金属络合物（例如，Zn-蛋白络合物）；和/或非离子型表面活性剂诸如TWEEN?、PLURONICS?或聚乙二醇（PEG）。
可接受的载体是施用的患者在生理上可接受的，并保留与其一起/在其中施用的化合物的治疗性质。可接受的载体和它们的制剂是，且通常描述在，例如，Remington’pharmaceutical Sciences（第18版, A. Gennaro编, Mack Publishing Co., Easton, PA 1990）。一种示例性的载体是生理盐水。本文使用的短语“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料，它们涉入主题化合物从一个器官或身体部分的施用部位携带或运输至另一个器官或身体部分，或在体外试验系统中。每种载体是可接受的，其含义是，与制剂的其它成分相容，且对它所施用的受试者无害。可接受的载体也不会改变主题化合物的比活。
在一个方面，本文提供了药学上可接受的或生理上可接受的组合物，包括与施用相容的溶剂（水性的或非水性的）、溶液、乳剂、分散介质、包衣剂、等张剂和吸收促进剂或吸收延迟剂。因此，组合物或制剂表示，适合在受试者中的治疗和/或诊断应用的组合物。组合物和制剂包括一定量的本文所述的化合物和药学上或生理上可接受的载体。
可以将组合物配制成与特定给药途径（即，全身的或局部的）相容。因而，组合物包括适合通过不同途径来施用的载体、稀释剂或赋形剂。
在另一个实施方案中，所述组合物可以另外包括：如果需要的话，可接受的添加剂，以便提高化合物在组合物中的稳定性和/或控制组合物的释放速率。可接受的添加剂不会改变主题化合物的比活。示例性的可接受的添加剂包括、但不限于：糖，诸如甘露醇、山梨醇、葡萄糖、木糖醇、海藻糖、山梨糖、蔗糖、半乳糖、葡聚糖、葡萄糖、果糖、乳糖及其混合物。可接受的添加剂可以与可接受的载体和/或赋形剂（诸如葡萄糖）相组合。或者，示例性的可接受的添加剂包括、但不限于：表面活性剂诸如聚山梨酯20或聚山梨酯80，以增加肽的稳定性和减轻溶液的胶凝。可以将表面活性剂加入组合物中，其量为溶液的0.01%-5%。这样的可接受的添加剂的加入会增加组合物在贮存时的稳定性和半衰期。
可以施用组合物，例如，通过注射，包括但不限于：皮下的、玻璃体内的、真皮内的、静脉内的、动脉内的、腹膜内的或肌肉内的注射。在本文中预见到用于每类注射的组合物制剂中的赋形剂和载体。下面的描述仅仅作为实例，无意限制组合物的范围。用于注射的组合物包括，例如，水溶液（在水溶性的情况下）或分散物和无菌粉末，所述粉末用于临时制备无菌注射溶液或分散物。对于静脉内的施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL?（BASF, Parsippany, N.J.）或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。所述载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等）和它们的适当混合物的溶剂或分散介质。可以维持流动性，例如，通过使用涂层诸如卵磷脂，通过维持需要的粒度（在分散物的情况下）和通过使用表面活性剂。抗细菌剂和抗真菌剂包括，例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸和硫柳汞。可以在组合物中包括等张剂，例如，糖类、多元醇（诸如甘露醇、山梨醇）和氯化钠。可以将得到的溶液包装后原样使用，或低压冻干；所述低压冻干的制品可以在以后在施用之前与无菌溶液相组合。对于静脉内注射或在累及部位处的注射，活性成分可以是肠胃外地可接受的水溶液的形式，所述水溶液是无热原的，且具有合适的pH、等张度和稳定性。本领域的相关技术人员能够熟练地制备合适的溶液，其中使用例如等张媒介物，诸如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸盐化的林格注射液。根据需要，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。可以如下制备无菌注射溶液：将需要量的活性成分掺入适当溶剂中，所述溶剂含有一种或多种上面列举的成分的组合（根据需要），然后过滤除菌。通常，如下制备分散物：将活性成分掺入无菌的媒介物中，所述媒介物含有基础分散介质和来自上面列举的那些的需要的其它成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分和来自以前无菌过滤的溶液的任意额外希望的成分的粉末。
可以通过玻璃体内地、皮下地或通过玻璃体内植入来常规地施用组合物。
可以静脉内地（诸如通过注射例如单位剂量）来常规地施用组合物。为了注射，活性成分可以是肠胃外地可接受的水溶液的形式，所述水溶液是基本上无热原的，且具有合适的pH、等张度和稳定性。可以制备合适的溶液，其中使用例如等张媒介物，诸如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸盐化的林格注射液。根据需要，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。另外，可以通过气雾化来施用组合物（Lahn等人, Aerosolized Anti-T-cell-Receptor Antibodies Are Effective against Airway Inflammation and Hyperreactivity, Int. Arch. Allegery Immuno., 134: 49-55 (2004)）。
在一个实施方案中，低压冻干所述组合物，例如，以增加贮存的贮存期限。当考虑将组合物用于药物或本文提供的任意方法中时，预见到，所述组合物可以是基本上无热原的，使得所述组合物当施用给人患者时不会造成炎症反应或不安全的变态反应。测试组合物的热原和制备基本上无热原的组合物，是本领域普通技术人员容易理解的，且可以使用可商业得到的试剂盒来实现。
可接受的载体可以含有稳定化组合物、增加或延迟吸收、或增加或延迟清除的化合物。这样的化合物包括，例如，碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；低分子量蛋白；减少肽的清除或水解的组合物；或赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲剂。延迟吸收的试剂包括，例如，单硬脂酸铝和明胶。也可以使用去污剂来稳定化组合物或增加或减少组合物的吸收，包括脂质体载体。为了保护免于消化，可以使化合物与组合物形成复合物，以使它耐受酸性和酶促水解，或可以使化合物在适当耐受性的载体（诸如脂质体）中形成复合物。保护化合物免于消化的方法是本领域已知的（参见，例如，Fix (1996)  Pharm Res. 13:1760 1764; Samanen (1996)  J. Pharm. Pharmacol. 48:119 135；和美国专利号5,391,377，它们描述了用于口服递送治疗剂的液体组合物）。
短语“药学上可接受的”表示这样的分子实体和组合物：当施用给受试者时，其是生理上可耐受的，且通常不会产生变应性的或类似的不良反应，诸如胃不适、头晕等。
当提及治疗组合物时，术语“单位剂量”表示适合作为受试者的单位剂量的物理上分离的单位，每个单位含有经计算会产生希望的治疗效果的预定量的活性物质以及需要稀释剂（即，载体或媒介物）。
可以以与剂量制剂相容的方式和以治疗有效量施用组合物。要施用的量取决于待治疗的受试者、受试者的免疫系统利用活性成分的能力和希望的结合能力的程度。需要施用的活性成分的精确量取决于从业人员的判断，且随每个个体而异。适合初次施用和加强注射的方案也是可变的，但是可以表征为：初次施用，随后以1小时或几小时间隔重复施用后续注射或其它施用。或者，预见到足以维持血液中的浓度的连续静脉内输注。
一个实施方案预见到本文所述组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗本文所述的病症、疾病或障碍。可以基于需要治疗的患者/受试者的身体特征来配制药物，且可以基于病症、疾病或障碍的阶段配制成单个或多个制剂。可以将药物包装在合适的包装中，所述包装具有适合分配给医院和诊所的标签，其中所述标签用于指示治疗具有本文所述疾病的受试者。可以将药物包装成单个或多个单位。可以在下文所述的包装中，包括关于组合物的剂量和施用的说明书。本申请涉及上文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体和药学上可接受的载体的药物。在另一个实施方案中，本申请涉及上文所述的抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）和药学上可接受的载体的药物。在另一个实施方案中，本申请涉及上文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（或其抗原结合片段）和药学上可接受的载体的药物。
在本发明的一个实施方案中，将所述组合物配制成不含有热原，使得它们可接受施用给人患者。测试组合物的热原和制备无热原的组合物，是本领域普通技术人员所熟知的。
本发明的一个实施方案预见到本发明的任意组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗本发明的障碍。可以基于需要治疗的患者/受试者的身体特征来配制药物，且可以基于障碍配制成单个或多个制剂。可以将药物包装在合适的包装中，所述包装具有适合分配给医院和诊所的标签，其中所述标签用于指示治疗受试者中本文所述的障碍。可以将药物包装成单个或多个单位。可以在包装中包括关于组合物的剂量和施用的说明书。
III.    使用方法
本文提供了一种治疗受试者（人或非人）的方法，其中给受试者施用嵌合抗体的组合物，所述嵌合抗体优选地结合内皮因子。本文所述的方法另外包括：通过给受试者施用抗-VEGF抗体的组合物，治疗受试者（人或非人）。在某些情况下，所述方法包括：给受试者施用单一组合物，所述组合物含有嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体。在其它情况下，所述方法包括：给受试者施用单一组合物，所述组合物含有嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗。
当受试者经历疾病的征象或征状的部分或完全减轻或减少（具体地，包括但不限于生存期的延长）时，实现本发明的有效应答。可以按月至年来测量预期的无进展存活时间，这取决于预后因素，包括复发的次数、疾病的阶段和其它因素。延长存活期包括但不限于至少1个月（mo）、约至少2个月、约至少3个月、约至少4个月、约至少6个月、约至少1年、约至少2年、约至少3年、约至少4年、约至少5年等的时间。也可以按月至年来测量总存活或无进展存活。或者，有效应答可以是，受试者的征状或癌症负荷保持静止且不再恶化。在下面更详细地描述了适应症的治疗的其它指示。
本文所述的抗体的组合物可以用作非治疗剂（例如，作为亲和纯化试剂）。通常，在一个这样的实施方案中，使用本领域已知的常规方法，将目标蛋白固定化在固相（诸如Sephadex树脂或滤纸）上。使固定化的蛋白接触要纯化的含有目标靶物（或其片段）的样品，然后用合适的溶剂洗涤支持物，所述溶剂会去除样品中除了靶蛋白以外基本上所有的物质，所述靶蛋白结合在固定化的抗体上。最后，用另一种合适的溶剂（诸如甘氨酸缓冲液, pH 5.0）洗涤支持物，所述溶剂将释放出靶蛋白。除了纯化以外，组合物可以用于检测、诊断和治疗与内皮因子、VEGF和血管生成有关的疾病和障碍。
本文使用的术语“接触”表示，将化合物的溶液或组合物与浸泡来自生物体的多肽、细胞、组织或器官的液体介质加到一起。或者，“接触”表示，将化合物的溶液或组合物与液体（诸如源自生物体的血液、血清或血浆）混合到一起。对于体外用途，组合物还可以包含另一种组分，诸如二甲亚砜（DMSO）。DMSO会促进化合物的摄入或化合物的溶解度。通过利用递送装置，诸如基于吸液管的装置或基于注射器的装置，可以将包含实验化合物的溶液加入浸泡细胞、组织或器官的介质中，或与另一种液体（诸如血液）相混合。对于体内用途，通过例如经由任意合适的装置将组合物施用给患者，可以发生接触；上面已经更详细地描述了含有药学上可接受的赋形剂和载体的组合物。
“受试者”或“患者”（例如，哺乳动物诸如人或非人动物，诸如灵长类动物、啮齿动物、牛、马、猪、绵羊、骆驼、骆马等）可以是表现出本文所述的疾病或障碍的一种或多种临床表现和/或征状的哺乳动物。在某些情形中，受试者可以是无症状的，且仍然具有所述疾病或障碍的临床表现。可以将抗体缀合到治疗部分上，或是含有治疗部分的融合蛋白。可以将抗体缀合到可检测部分上，或是含有可检测部分的融合蛋白。在一个实施方案中，可以将抗体缀合到治疗部分和可检测部分上。可以将抗体缀合到亲和标签（例如，纯化标签）上，或用亲和标签（例如，纯化标签）重组地工程化。亲和标签（例如，His6标签、抗生物素蛋白等）在本领域中是常规的。
本文提供的抗体或其片段使得，它们可以缀合或连接至治疗部分和/或成像部分或可检测部分和/或亲和标签上。用于缀合或连接多肽的方法是本领域众所周知的。化合物和标记之间的缀合（结合）包括本领域已知的任意方法，包括但不限于：共价和非共价相互作用、化学缀合以及重组技术。
“血管生成”在本文中用于包括血管维持和发育的所有方面。因而，血管生成包括：导致新生血管形成的新毛细血管形成（无论从新形成还是从预先存在的血管形成），以及现有脉管系统和小血管的维持和控制。血管生成是一个复杂的过程，该过程包括一系列相继的步骤，包括内皮细胞介导的血管基膜和间质基质的降解、内皮细胞的迁移、内皮细胞的增殖和内皮细胞的毛细血管袢的形成。血管生成包括新血管的生长和/或发育（也称作新生血管形成）、小血管的膨胀、过度的或延长的血管生长和现有脉管系统的维持。
为了说明书和权利要求书的目的，术语“血管生成相关的疾病”在本文中用于表示人类的某些病理过程，其中血管生成异常地延长。这另外包括：血管生成病症和疾病，诸如与血管生成有关、由血管生成造成或伴随血管生成的那些疾病和病症。这样的疾病的非限制性实例包括：不同形式的癌症和转移灶、黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变。通过结合内皮因子和抑制血管生成，本文所述的抗体可以用于治疗血管生成相关的疾病。
术语“抗血管生成疗法”在本文中用于表示，靶向表达内皮因子（与静止的脉管系统相比，在增殖中的脉管系统上以更高的水平表达）的细胞和/或脉管系统的疗法；这另外包括：针对血管生成（即，导致新生血管形成的新毛细血管形成）的疗法，针对现有脉管系统和/或过度血管生成或血管生长的疗法，针对小血管膨胀的疗法，和针对疾病或病症的疗法（例如，血管靶向疗法）。在本发明内预见到的示例性的疾病或病症包括、但不限于：不同形式的癌症和转移灶。
术语“复现”、“复发”或“复发的”表示，在临床评估疾病消失以后，癌症或疾病的复发。远端转移或局部复发的诊断，可以视作复发。
术语“维持疗法”表示，为了帮助维持以前的治疗效果而施用的有计划的再治疗。经常施用维持疗法来帮助保持癌症处于减轻中或延长对特定疗法的应答（无论疾病进展）。
术语“无进展存活”在肿瘤学中表示，在治疗过程中和以后，癌症没有生长的时间的长度。无进展存活包括：患者已经经历完全应答或部分应答的时间的量，以及患者已经经历稳定的疾病的时间的量。
在一个方面，本文提供了一种预防或治疗受试者的癌症或转移的方法，其中将本文提供的任意组合物施用给遭受癌症或转移的患者。这样的患者可以是有症状的或无症状的。
在某些情况下，组合物的施用会延长被治疗的患者的寿命、减小肿瘤体积、消除肿瘤、减少细胞增殖、增加肿瘤细胞的细胞凋亡或它们的组合。
如果需要的话，所述方法可以另外包括：外科手术切除癌症和/或施用额外的抗癌剂或治疗。已经在本文别处提供了抗癌剂。
在一个方面，遭受癌症的患者的征状得到改善。改善可以表现为，例如，疼痛的减轻、肿瘤大小的减小、肿瘤的消除、肿瘤大小增加或疾病进展的阻止、转移形成的阻止、或转移性生长的抑制或它们的组合。
在一个方面，组合物的施用会减轻或消除患者对外科手术或使用一种或多种额外抗癌剂或治疗的治疗的需求。
使用嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF剂的治疗
本文提供了预防或治疗与血管生成/新生血管形成、过度血管生成、肿瘤生长、肿瘤细胞增殖或小血管膨胀有关的一种或多种疾病或障碍的方法，所述方法包括：同时或在不同时间施用含有嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物和含有抗-VEGF抗体的组合物，从而预防、治疗、改善或减轻疾病或它的严重性。
本文提供了预防或治疗与血管生成/新生血管形成有关的一种或多种疾病或障碍的方法，所述方法包括：施用组合物的组合。
本文使用的“预防”表示预防、征状发作的阻止、与血管生成有关或与内皮因子活性相关的疾病或障碍的进展的预防。本文使用的“抑制”、“治疗”可互换地使用，并表示，例如，征状的停滞、存活期的延长、征状的部分或完全改善以及肿瘤或转移灶的部分或完全消除。
可以以治疗有效量将组合物施用给患者，所述治疗有效量会通过以适合任何医学治疗的合理的收益/风险比抑制疾病或障碍，有效地产生一些希望的治疗效果。为了将本发明的组合物施用给人患者，可以通过本领域技术人员已知的方法来配制组合物。治疗有效量是在器官或组织中至少部分地实现希望的治疗效果或预防效果的量。实现疾病或障碍的预防性和/或治疗性处理所需的嵌合的抗-内皮因子抗体或抗-VEGF抗体的量本身是不固定的。施用的抗体的量可以随疾病的类型、疾病的范围和遭受疾病或障碍的哺乳动物的大小而变化。在一个实施方案中，以上述的组合，将本文描述的两种抗体施用给患者。联合施用可以表示在单一组合物中或在分开的组合物中施用。
“施用”在本文中表示，以导致组合物在患者体内的方式，将一种或多种组合物提供给患者。这样的施用可以通过任意途径，包括、但不限于：局部地、区域地、或全身地，通过皮下的、玻璃体内的、真皮内的、静脉内的、动脉内的、腹膜内的或肌肉内的施用（例如，注射）。
可以改变组合物中活性成分的实际剂量水平，从而得到有效地实现特定患者、组合物和给药模式希望的治疗应答且对患者无毒的活性成分的量。选择的剂量水平取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、给药途径、给药时间、采用的具体化合物的排泄速率、治疗持续时间、其它药物、与采用的特定组合物联合使用的化合物和/或物质、待治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和先前的医疗史以及医学领域众所周知的类似因素。
本文所述的抗体可以以不同的给药量和在不同的时间范围内施用给受试者。非限制性剂量包括约0.01 mg/kg、约0.05 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1 mg/kg、约5 mg/kg、约10 mg/kg、约20 mg/kg、约30 mg/kg或它们之间的任何整数。另外，可以如下施用抗体的所述剂量：每周2次、每周1次、每2周1次、每3周1次、每4周1次、每6周1次、每8周1次、每12周1次或它们之间的任意周组合。也预见到给药循环，例如，每周1次或2次地施用抗体，持续2、3、4、5或6周，继之以不治疗的1、2、3、4、5或6周。或者，根据受试者对治疗的应答，治疗之间的循环时间可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。在本发明内也预见到额外的给药循环，包括例如：本文描述的剂量和每周循环的不同组合。
“接触”在本文中被定义为，使本文提供的组合物物理地接近本文所述的细胞、器官组织或流体的方式。接触包括本文提供的任意组合物的全身或局部施用，包括但不限于体外、体内和/或离体操作和方法。“组合”和“接触”在本文中可互换地使用，且意图以相同的方式进行定义。
医师或兽医可以容易地确定和指示需要的组合物的有效量（ED50）。例如，医师或兽医可以从低于实现希望的治疗效果所需要的水平的、在组合物中采用的化合物的剂量开始，并逐渐增加剂量，直到实现希望的效果。或者，剂量可以保持恒定。
通过任意方便的途径，诸如上述的途径，可以将组合物施用给患者。无论选择的给药途径，或通过本领域技术人员已知的其它常规方法，将本发明的化合物（其可以以合适的水合形式使用）和/或组合物配制成可接受的剂型，诸如下述的剂型。
通过在细胞培养物或实验动物中的标准规程，例如，用于测定LD50（50%群体的致死剂量）和ED50（50%群体的治疗有效剂量）的标准规程，可以测定化合物的毒性和治疗效果。毒性效果和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，它可以表示为LD50/ED50之比。尽管可以使用表现出毒性副作用的化合物，应当小心地设计将这样的化合物靶向受累组织的部位的递送系统，以便使对健康细胞的潜在损伤最小化，并从而减少副作用。
从细胞培养试验和/或动物研究得到的数据可以用于配制用于人类的剂量范围。这样的化合物的剂量优选地在几乎不具有毒性或不具有毒性的循环浓度范围（包括ED50）内。所述剂量可以在该范围内随采用的剂型和使用的给药途径而变化。对于任意化合物，可以从细胞培养试验初步估测治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量，以实现包括在细胞培养物中测定的IC50（即，实现半数最大抑制的实验化合物的浓度）的循环血浆浓度范围。可以测量在血浆中的水平，例如，通过高效液相色谱法。这样的信息可以用于更准确地测定在人类中有用的剂量。使用这些方法中的任一种，也可以评估含有化合物组合的组合物。
在一个实施方案中，本发明预见到抑制组织中的血管生成。通过多种方法，诸如本文所述的方法，可以评价组织中的血管生成的程度，并从而评价实现的抑制程度。
识别（例如，优先结合）内皮因子或VEGF和抑制血管生成的抗体的独特特异性，会为特征在于血管生成（新生血管形成）、小血管膨胀、过度血管生成、肿瘤细胞增殖和/或肿瘤生长的疾病提供诊断和治疗应用。可以将抗体施用给遭受不同形式的癌症（原发性肿瘤和转移灶）的受试者。
应当理解，除了施用本文所述组合物以外，在本文中预见到，也可以用一种或多种额外的血管生成抑制剂治疗受试者。
为了说明书和权利要求书的目的，术语“血管生成抑制剂”在本文中用于表示起抑制血管生成的功能的化合物或分子，包括、但不限于：肽、蛋白、酶、多糖、寡核苷酸、DNA、RNA、重组载体和药物。血管生成抑制剂是本领域已知的，在本文中预见到所有类型。化合物和分子的非限制性实例包括：天然的和合成的生物分子，诸如紫杉醇、O-（氯乙酰基-氨基甲酰基）烟霉醇（“TNP-470”或“AGM 1470”）、凝血酶敏感蛋白-1、凝血酶敏感蛋白-2、血管生成抑制因子、人软骨细胞-衍生的血管生成抑制剂（“hCHIAMP”）、软骨-衍生的血管生成抑制剂、血小板因子-4、gro-β、人干扰素诱导蛋白10（“IP10”）、白介素12、Ro 318220、三环癸-9-基黄原酸酯（“D609”）、伊索拉定、8,9-二羟基-7-甲基-苯并[b]喹嗪鎓溴化物（“GPA 1734”）、甲羟孕酮、肝素和可的松的组合、葡糖苷酶抑制剂、染料木黄酮、沙利度胺、二氨基-蒽醌、除莠霉素、熊果酸和齐墩果酸。抗体的非限制性实例包括针对诸如VEGF、VEGF受体或内皮因子的不同表位等分子的那些。另外，VEGF受体的小分子抑制剂是已知的，且在本文中预见到。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括ranibizumab（Lucentis）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（Sutent）、索拉非尼（Nexavar）、axitinib、培加尼布和pazopanib。
在一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是ranibizumab。ranibizumab的示例性的眼剂量包括每个月玻璃体内地施用的约0.5 mg。在一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是VEGF-Trap。VEGF-Trap的示例性的剂量包括每2或3周施用的约0.5至约10 mg/kg。VEGF-Trap的示例性的眼剂量包括每个月或每季度玻璃体内地施用的约0.5至约2.0 mg。
在另一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是舒尼替尼。舒尼替尼的示例性的方案包括：施用约50 mg 4周，继之以不施用药物的2周。可以循环地或非循环地重复治疗方案。
在另一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是索拉非尼。索拉非尼的示例性的剂量包括每天施用的约400 mg。
在另一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是axitinib。Axitinib的示例性的剂量包括每天施用2次的约3、约5或约10 mg。
在另一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是培加尼布。培加尼布的示例性的剂量包括每6周玻璃体内地施用的约0.3- 约3 mg。
在另一个非限制性实施方案中，所述VEGF受体抑制剂是pazopanib。Pazopanib的示例性的剂量包括每天施用的约200至约1000 mg。
这些VEGF受体抑制剂的多种组合可以与本文所述组合物一起施用。在一个实施方案中，组合可以导致将更低的剂量用于所述的抗体或抗原结合。这样的剂量改变可以源自抗体组合的协同效应。
癌症
CD105与肿瘤血管生成有关，且与正常组织中的内皮相比，在不同肿瘤组织的内皮中被强烈地增量调节。CD105在广范围的肿瘤内皮中被增量调节。另外，与对应的正常组织相比，在肿瘤内皮中存在更强的CD105表达。因而，用嵌合的抗-内皮因子抗体抑制血管生成，代表癌性肿瘤的一种治疗选择。本文所述组合物可以用于治疗癌性肿瘤和转移灶。所述组合物也可以用于药物的配制中，所述药物用于治疗癌性肿瘤和转移灶。
VEGF代表抗肿瘤治疗的一种靶标，因为它的表达在许多实体瘤中被增量调节。VEGF是血管生成（从预先存在的血管生长出新血管）的一种主要调节剂。该过程是实体瘤的生长的基础，其依赖于新血管的形成。某些小分子治疗剂能够靶向血管内皮生长因子受体（“VEGFR”）；小分子治疗剂的这种靶向可以导致抗癌效应。靶向VEGF受体的试剂通过抑制新血管形成来间接地阻断肿瘤生长。抑制VEGF诱发的血管生成可以发挥抗肿瘤效应或提高的抗肿瘤效应，而不显著抑制巨噬细胞、破骨细胞或破软骨细胞的VEGF刺激。
术语“肿瘤”在本文中用于表示表达内皮因子和/或VEGF的癌性组织（与相同类型的正常组织的表达相比）。肿瘤可以包括实体瘤和半实体瘤。肿瘤的非限制性实例包括：人白血病，包括非T细胞型（非-T）急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、粒单核细胞白血病；和人实体瘤和半实体瘤，它的周围脉管系统表达中等至高水平的内皮因子（与相同类型的正常组织的表达相比），包括血管肉瘤、乳癌、胃癌、结肠癌、霍杰金淋巴瘤、淋巴瘤、多形性胶质母细胞瘤（GBM）、肺癌、黑素瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、腮腺肿瘤、咽癌、前列腺癌、肝细胞癌、肾癌和直肠乙状结肠癌。
待治疗的癌性组织是，例如，表达异常水平的内皮因子和/或VEGF的内皮组织。
在没有肿瘤组织的新生血管形成的情况下，肿瘤组织不会获得需要的营养物，生长减慢，停止额外的生长，退化，并最终变得坏死，导致肿瘤的杀死。本文提供了通过抑制肿瘤血管生成来抑制肿瘤新生血管形成的方法。类似地，本文提供了抑制肿瘤生长的方法。
所述方法对转移灶的形成也是特别有效的，因为它们的形成需要原发性肿瘤的血管生成，所以转移性癌细胞可以离开原发性肿瘤，且它们在第二部位的建立需要新生血管形成来支持转移灶的生长。
应当明白，本发明的“遭受癌症/转移的受试者”可以表达突变蛋白（肿瘤相关抗原）或突变基因，且仍然没有疾病的症状。在结肠癌的一个非限制性实施例（其与突变型K-ras蛋白有关）中，在有些结肠细胞中具有突变型K-ras蛋白的受试者是要治疗的受试者，尽管该受试者可能仍然没有结肠癌的症状。“疾病的征象或征状”代表疾病的临床上识别的表现或指征。
“治疗”遭受肿瘤或转移的受试者是指，在治疗以后，受试者的征状部分减轻、完全减轻或保持静止。已经治疗的患者可以表现出肿瘤负荷的部分或完全减轻。这意图包括预防、治疗和治愈。在一个非限制性实施例中，治疗遭受高度转移性癌症（例如，乳腺癌）的受试者，其中额外的转移没有发生，或与没有接受治疗的受试者相比，转移的次数减少。在另一个非限制性实施例中，治疗受试者，其中受试者的实体癌的大小减小，或与与没有接受治疗的受试者相比，实体癌的大小没有增加。在另一个非限制性实施例中，与没有接受治疗的受试者的癌细胞的数目相比，治疗的受试者中的癌细胞的数目没有增加或减少。也可以将改善定义为，例如，细胞增殖的减少、细胞数目的减少、细胞凋亡的增加和/或受治疗的受试者的存活期的增加。
如本文另外使用的，癌症的治疗包括癌性生长或肿瘤的停滞、部分或完全消除。治疗或部分消除包括，例如，生长或肿瘤大小和/或体积的下述倍数减小：诸如约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约10倍、约20倍、约50倍或之间的任意倍数减小。类似地，治疗或部分消除可以包括生长或肿瘤大小和/或体积的下述减小百分比：约1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或之间的任意减小百分比。
要在本文所述的方法中治疗的肿瘤或癌症包括、但不限于：肺癌、妇科恶性肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、脑癌（例如，多形性胶质母细胞瘤、“GBM”或神经胶质瘤）胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、结直肠癌、前列腺癌、肾癌、头癌、肝癌（肝细胞癌）、颈癌、肾癌（肾细胞癌）、阴茎癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、肉瘤、癌、骨髓瘤和淋巴瘤。在一个实施方案中，要治疗的肿瘤是实体瘤或半实体瘤。在另一个实施方案中，要治疗的肿瘤是原发性肿瘤。在另一个实施方案中，要治疗的肿瘤是转移性肿瘤。在一个实施方案中，要治疗的肿瘤或癌症属于上皮起源。在另一个实施方案中，要治疗的癌症是骨髓瘤。在另一个实施方案中，要治疗的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，要治疗的癌症是肾/肾脏癌。在另一个实施方案中，要治疗的癌症是肝细胞癌/肝癌。
肺癌
在一个方面，本文提供了一种治疗肺癌的方法。最常见的肺癌类型是非小细胞肺癌（NSCLC），其占肺癌的大约80-85%，且分成鳞状细胞癌、腺癌和大细胞未分化癌。小细胞肺癌占肺癌的15-20%。
肺癌分期是癌症从它的原始来源传播的程度的评估。它是影响肺癌的预后和潜在治疗的一个重要因素。非小细胞肺癌被分期为IA（“1A”，最好的预后）至IV（“四”；最差的预后）。如果它被限制在胸部的四分之一，且在单一放射疗法场的范围内，则将小细胞肺癌分类为受限期；否则，它是扩散期。
使用EUS（内窥镜超声）或CT或MRI扫描或在外科手术时，可以对非小细胞肺癌分期，以根据TNM系统分类疾病的程度。这些受试者经历分期，作为考虑预后和治疗的过程的一部分。AJCC推荐TNM分期，继之以进一步分型。
原发性肿瘤（T）：TX：不能评估原发性肿瘤，或在痰或支气管肺泡灌洗液中存在恶性细胞，但是在成像或支气管镜检查时看不到；Tis：原位癌。T0：没有原发性肿瘤的证据。T1：肿瘤的最大尺寸小于3 cm，被肺或肺胸膜包围，支气管镜检查证实没有侵入主支气管中。T2：具有下述任一项的肿瘤：大尺寸超过3 cm；延伸进入主支气管（但是距离脊超过2 cm）和阻塞性肺炎（但是未累及整个肺）。T3：具有下述任一项的肿瘤：侵入胸壁、膈、纵隔胸膜或心包壁层；延伸进入主支气管，在脊的2 cm内，但是未累及脊；和整个肺的阻塞性肺炎。T4: 具有下述任一项的肿瘤：侵入纵隔、心脏、大血管、气管、食道、脊椎或脊；在同一叶中的单独的肿瘤结节；和恶性胸腔积液。淋巴结（N）：NX：不能评估淋巴结；N0：未累及淋巴结；N1：转移至同侧支气管周淋巴结或同侧肺门淋巴结；N2：转移至同侧纵隔淋巴结或脊下淋巴结；和N3：转移至下述任一处：同侧锁骨上淋巴结；同侧斜角肌淋巴结；和对侧淋巴结。远端转移（M）：MX：不能评估远端转移；M0：没有远端转移；和M1：存在远端转移。
子宫癌/妇科恶性肿瘤
子宫癌可以表示在子宫中发生的几种不同类型的癌中的任一种；即：子宫肉瘤（例如，子宫肌膜或子宫肌层的肉瘤是最常见的平滑肌肉瘤）；子宫内膜癌；和宫颈癌。
在另一个方面，本文提供了一种治疗子宫内膜癌的方法。子宫内膜癌是一种从子宫内膜（子宫的衬里）开始的癌症。子宫和子宫内膜癌的一些实例包括、但不限于：腺癌、腺棘皮瘤、腺鳞状癌、乳头状浆液性腺癌、透明细胞腺癌、子宫肉瘤、间质肉瘤、恶性混合性中胚层肿瘤和平滑肌肉瘤。
在另一个方面，所述方法治疗宫颈癌，优选宫颈上皮中的腺癌。该癌存在2种主要类型：鳞状细胞癌和腺癌。前者占所有宫颈癌的约80-90%，并形成在外宫颈（最靠近阴道的部分）和内宫颈（最靠近子宫的部分）连接处。后者形成在内宫颈的生产粘液的腺细胞中。有些宫颈癌具有这二者的特征，被称作腺鳞状癌或混合癌。
卵巢癌
在另一个方面，本文提供了一种治疗卵巢癌（包括上皮卵巢肿瘤）的方法。
根据在病理报告中得到的肿瘤组织学，对卵巢癌分类。表面上皮-间质肿瘤（也称作卵巢上皮癌）是卵巢癌的最典型的类型。它包括血清肿瘤, 子宫内膜肿瘤和粘液囊腺癌。性索-间质肿瘤（包括生产雌激素的粒层细胞瘤和男性化的塞尔托利-莱迪希细胞瘤或卵巢雄性细胞瘤）占卵巢癌的8%。胚细胞瘤占卵巢肿瘤的大约30%，但是仅占卵巢癌的5%，因为大部分胚细胞瘤是畸胎瘤，且大部分畸胎瘤是良性的。胚细胞瘤倾向于发生在年轻妇女和女孩中。预后取决于胚细胞瘤的具体组织学，但是总体上是良好的。混合瘤含有超过一种上述肿瘤组织学类别的要素。
卵巢癌也可以是继发性癌，即从原发性癌转移至体内别处的结果。常见的原发性癌是乳腺癌和胃肠道癌（在该情况下，卵巢癌是Krukenberg癌）。表面上皮-间质肿瘤可以源自腹膜（腹腔的衬里），在该情况下，卵巢癌相继于原发性的腹膜癌，但是治疗与累及腹膜的原发性表面上皮-间质肿瘤基本上相同。
卵巢癌分期是通过FIGO分期系统，并使用在外科手术以后得到的信息，所述外科手术可以包括经腹全子宫切除术、切除卵巢和输卵管、网膜和骨盆（腹膜）洗出液（用于细胞学）。AJCC阶段与FIGO阶段相同。
I期表示限于一侧或两侧卵巢的卵巢癌：IA–累及一侧卵巢；被膜完整；在卵巢表面上没有肿瘤；在腹水或腹膜洗出液中没有恶性细胞；IB - 累及两侧卵巢；被膜完整；在卵巢表面上没有肿瘤；阴性洗出液；和IC  -肿瘤限于卵巢，具有下述任一项：被膜破裂，在卵巢表面上有肿瘤，阳性洗出液。
II期表示骨盆延伸或植入：IIA - 延伸或植入到子宫或输卵管上；阴性洗出液；IIB - 延伸或植入到其它骨盆结构上；阴性洗出液；和IIC - 骨盆延伸或植入，阳性腹膜洗出液。
III期表示在骨盆以外的微小腹膜植入；或限于骨盆，延伸至小肠或网膜: IIIA–超过骨盆的微小腹膜转移灶; IIIB - 超过骨盆的肉眼可见的腹膜转移灶，大小小于2 cm；和IIIC -  > 2 cm的超过骨盆的腹膜转移灶，或淋巴结转移灶。
IV期表示远端转移至肝或腹腔以外。
主动脉旁淋巴结转移灶被认为是局部淋巴结（IIIC期）。
在有些实施方案中，本文所述的方法治疗选自下述的卵巢癌：在卵巢中的腺癌，和已经从卵巢转移至腹腔中的腺癌。
黑素瘤
黑素瘤是黑素细胞的一种恶性肿瘤，其主要见于皮肤中，但是也见于肠和眼中（眼色素层黑素瘤）。它是更罕见的皮肤癌类型之一，但是造成皮肤癌相关死亡中的大部分。恶性黑素瘤是由色素细胞（称作黑素细胞）的失控生长造成的一种严重类型的皮肤癌。黑素瘤也包括、但不限于：脉络膜黑素瘤、恶性黑素瘤、皮肤黑素瘤和眼内黑素瘤。
黑素瘤可以分成下述类型：恶性雀斑样痣、恶性雀斑样痣黑素瘤、表面扩散性黑素瘤、肢端雀斑样痣性黑素瘤、粘膜黑素瘤、结节性黑素瘤、息肉样黑素瘤、结缔组织增生性黑素瘤、无黑素性黑素瘤、软组织黑素瘤和眼色素层黑素瘤。黑素瘤阶段如下：
0期-  原位黑素瘤（Clark水平I）。
I/II期- 侵入性黑素瘤：T1a：小于1.00 mm原发灶，没有溃疡，Clark水平II-III；T1b：小于1.00 mm原发灶，具有溃疡，或Clark水平IV-V；和T2a：1.00-2.00 mm原发灶，没有溃疡。
II期- 高危性黑素瘤：T2b：1.00-2.00 mm原发灶，具有溃疡；T3a：2.00-4.00 mm原发灶，没有溃疡；T3b：2.00-4.00 mm原发灶，具有溃疡；T4a：4.00 mm或更大的原发灶，没有溃疡；和T4b：4.00 mm或更大的原发灶，具有溃疡。
III期-局部转移：N1：单个阳性淋巴结；N2：2-3个阳性淋巴结或局部皮肤/途径中转移；和N3：4个阳性淋巴结或淋巴结和局部皮肤/途径中转移灶。
IV期- 远端转移：M1a：远端皮肤转移，正常的LDH；M1b：肺转移，正常的LDH；和M1c：其它远端转移或任何远端转移，升高的LDH。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗黑素瘤。
结肠癌和结直肠癌
结直肠癌（也称作结肠癌或大肠癌）包括在结肠、直肠（肛门）和阑尾中的癌性生长。每年全世界有655,000例死亡，它是癌症的第三最常见形式，且是西方世界中癌症相关死亡的第二大主要原因。认为许多结直肠癌源自结肠中的腺瘤性息肉。这些蘑菇样生长通常是良性的，但是有些可能随时间发展成癌。
在另一个实施方案中，可以使用Dukes分类法，基于A-D期来分类结直肠癌。A期表示限于粘膜层的结直肠癌（即，尚未侵入肠壁）。B1期表示延伸进入固有肌层，但是没有穿透它（即，尚未侵入淋巴结）；而B2期癌已经渗入固有肌层，但是没有穿透它（即，尚未侵入淋巴结）。C1期表示延伸进入固有肌层但是没有穿透它的癌症（即，侵入淋巴结）；而C2期表示延伸进入固有肌层并穿透它的癌症（即，侵入淋巴结）。D期表示远端转移性扩散。根据本领域已知的常规方式，也可以使用TNM系统分期结直肠癌。
乳腺癌
存在几类可以通过本文所述的方法来治疗的乳腺癌。原位小叶癌和原位导管癌是这样的乳腺癌：所述乳腺癌已经分别在小叶和导管中形成，但是尚未扩散至乳房周围的脂肪组织或身体的其它区域。浸润性（或侵入性）小叶癌和导管癌是这样的癌：所述癌已经分别在小叶和导管中形成，且已经扩散至乳房的脂肪组织和/或身体的其它部分。在一个方面，本文提供了一种治疗乳腺癌的方法，所述乳腺癌例如在乳腺的导管组织中的导管癌、Her2-和/或ER-和/或PR-的乳腺癌。会从所述方法的治疗获益的其它乳癌是髓样癌、胶体癌、小管癌和炎性乳腺癌。
在一个实施方案中，根据TNM系统对乳腺癌分期。预后与分期的结果紧密相关，在临床试验和临床实践中还使用分期来将患者分配给治疗。
简而言之，用于分期的信息如下：TX：不能评估原发性肿瘤。T0：没有肿瘤的证据。Tis：原位癌，没有侵入；T1：肿瘤是2 cm或更小；T2：肿瘤超过2 cm，但是未超过5 cm；T3：肿瘤超过5 cm；T4：生长进入胸壁或皮肤中的任意大小的肿瘤，或炎性乳腺癌。NX：不能评估附近的淋巴结。N0：癌尚未扩散至局部淋巴结。N1：癌已经扩散至1-3个上颌淋巴结或1个乳房内淋巴结。N2：癌已经扩散至4-9个上颌淋巴结或多个乳房内淋巴结。N3：下述之一适用：癌已经扩散至10个或更多个上颌淋巴结，或癌症已经扩散至锁骨下淋巴结，或癌症已经扩散至锁骨上淋巴结，或癌症累及上颌淋巴结且已经扩散至乳房内淋巴结，或癌症累及4个或更多个上颌淋巴结且在前哨淋巴结活组织检查时在乳房内淋巴结中发现了很小量的癌。MX：不能评估远端扩散（转移）的存在。M0：没有远端扩散。M1：已经扩散至远端器官（不包括锁骨上淋巴结）。
胰腺癌
在另一个方面，本文提供了一种治疗选自下述的胰腺癌的方法：在胰管组织中的上皮样癌和在胰管中的腺癌。最常见的胰腺癌类型是腺癌，其发生于胰管的衬里中。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗胰腺癌。
前列腺癌
在一个其它方面，本文提供了一种治疗选自下述的前列腺癌的方法：腺癌或已经迁移至骨的腺癌。前列腺癌形成在男性的前列腺器官中，所述前列腺器官包围尿道的第一部分。前列腺具有几种细胞类型，但是99%的肿瘤是在负责产生精液的腺细胞中形成的腺癌。
通常使用2个方案来分期前列腺癌。最常见的方案是TNM系统，该系统评价肿瘤的大小、侵入的淋巴结的范围和任何转移（远端扩散）。与许多其它癌一样，经常将它们分成4个阶段（I-IV）。更少使用的另一个方案是Whitmore-Jewett分期。
简而言之，I期疾病是，当因为其它原因（诸如良性前列腺肥厚）切除前列腺组织时，偶然地在小部分样品中发现的癌，且所述细胞与正常细胞非常相似，指检感觉前列腺是正常的。在II期，累及更多的前列腺，且可以感觉到在前列腺内的肿块。在III期，肿瘤已经扩散穿过前列腺囊，且可以在前列腺表面上感觉到肿块。在IV期疾病中，肿瘤已经侵入附近的结构，或已经扩散至淋巴结或其它器官。分级是基于来自活组织检查（Gleason）的细胞内容物和组织结构，所述活组织检查会提供疾病的破坏潜力和最终预后的估测。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗前列腺癌。
头颈癌
头颈癌（例如，口部、喉部、鼻咽部、食管等）表示一组生物学上类似的癌，所述癌源自上呼吸消化道，包括唇、口腔（嘴）、鼻腔、鼻旁窦、咽和喉。大多数头颈癌是鳞状细胞癌，它们源自这些区域的粘膜衬里（上皮）。头颈癌经常扩散至颈部的淋巴结，且这经常是疾病在诊断时的首要（有时唯一）表现。头颈癌与某些环境因素和生活方式危险因素强烈相关，所述因素包括抽烟、饮酒和性传播的人乳头状瘤病毒的某些菌株。控制具有头颈癌的患者仍然是一项艰难的任务。使用本文所述的化合物，可以治疗癌症，例如，下咽癌、喉癌、鼻咽癌、鼻咽癌。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗头颈癌。
肾癌
在另一个方面，本文提供了一种治疗肾癌的方法。肾癌（也称作肾细胞癌症、肾细胞癌、肾腺癌和肾上腺样瘤）是这样的疾病：其中，恶性细胞存在于肾小管的衬里中。肾细胞癌是源自近端肾小管的肾癌的最常见形式。它是成年人中的肾癌的最常见类型，占病例的大约80%。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗肾癌。
肝癌
在另一个方面，本文提供了一种治疗原发性肝癌（从肝中开始的癌症）的方法。原发性肝癌可以发生于成年人和儿童中。肝癌的特征在于恶性肝肿瘤的存在——在肝表面上或内部的肿瘤或生长。它们可以在医学成像中被发现（甚至由于癌症自身以外的不同原因），或可以存在于患者中，作为腹部包块、腹痛、黄疸或一些其它肝功能障碍。存在几类肝癌。
血管瘤：这些是良性肝肿瘤的最常见类型。它们起源于血管。大部分这样的肿瘤不会产生征状，它们不需要治疗。如果它是中度至严重的，有些可能出血，且需要去除。
肝腺瘤: 这些良性上皮肝肿瘤形成在肝中。在大多数情况下，它们位于右肝叶中，且经常单独发现。腺瘤的大小是在1-30 cm范围内。与肝腺瘤有关的征状都与可以造成强烈腹痛的大病灶有关。
局限性结节状增生: 局限性结节状增生（FNH）是第二最常见的肝肿瘤。该肿瘤是先天性动静脉畸形肝细胞应答的结果。该过程是这样的过程：其中肝的所有正常组分都存在，但是它们的呈现模式是异常的。尽管存在这些病症，肝看起来仍然表现在正常范围内。
肝细胞癌: 肝细胞癌（HCC）是最常见的肝癌。它与酒精滥用和乙型肝炎感染有关，且在亚洲特别流行。大部分HCC在通过外科手术切除不可能治愈时才被检测出；不能切除的HCC的全身治疗与小于1年的存活期有关。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗肝癌。
淋巴瘤
淋巴瘤是一类源自免疫系统的淋巴细胞的癌症。它们经常起源于淋巴结，呈现为结节（肿瘤）的扩大。淋巴瘤与淋巴性白血病密切相关，所述淋巴性白血病也源自淋巴细胞，但是通常仅累及循环血液和骨髓（在这里在称作造血的过程中产生血细胞），且通常不形成肿瘤。存在许多类型的淋巴瘤，反过来，淋巴瘤是称作血液肿瘤的一大类疾病的一部分。一些淋巴瘤形式是无痛的（例如小淋巴细胞淋巴瘤），与甚至没有治疗时的长寿命相容，而其它形式是侵袭性的（例如伯基特淋巴瘤），会造成快速恶化和死亡。
WHO分类法（在2001年公开，在2008年更新；http://en.wikipedia.org/wiki/Lymphoma - cite_note-isbn92-832-2411-6-2#cite_note-isbn92-832-2411-6-2）是淋巴瘤的最新分类法，且是基于在“修订的欧美淋巴瘤分类法”（Revised European-American Lymphoma classification，REAL）中公开的基础。该系统通过细胞类型（即，与肿瘤最相似的正常细胞类型）和定义表型特征、分子特征或细胞遗传特征来分组淋巴瘤。存在3个大组：B细胞、T细胞和天然杀伤细胞肿瘤。也认识到其它不太常见的组。何杰金淋巴瘤尽管在WHO（和先前的）分类法中单独考虑，现在被认为是成熟B细胞谱系的淋巴细胞的肿瘤（尽管是明显异常的）。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗淋巴瘤。
肉瘤
肉瘤是结缔组织（骨、软骨、脂肪）的一种癌症，其导致中胚层增殖。
这不同于具有上皮起源（乳房、结肠、胰腺和其它）的癌。但是，由于组织起源的进化理解，术语“肉瘤”有时适用于现在已知源自上皮组织的肿瘤。术语软组织肉瘤被用于描述软组织的肿瘤，所述软组织包括在结缔组织中但是并非源自结缔组织的组分（诸如肌肉和血管）。
基于肉瘤的起源组织的类型，给肉瘤赋予了许多不同的名称。例如，骨肉瘤源自骨，软骨肉瘤源自软骨，平滑肌肉瘤源自平滑肌。肉瘤会攻击所有年龄段的人，但是它们是非常罕见的，占所有癌症病例的仅1%。GIST是肉瘤的最常见形式，在美国每年有大约3000-3500个病例。这与乳腺癌相当，在北美每年有大约200,000个病例。
大约50%的骨肉瘤和20%的软组织肉瘤在低于35岁的人中诊断出。有些肉瘤（诸如平滑肌肉瘤、软骨肉瘤和胃肠道间质肿瘤（GIST））在成年人中比在儿童中更常见。大部分高级骨肉瘤（包括尤因肉瘤和骨肉瘤）在儿童和年轻的成年人中远远更常见。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗肉瘤。
癌
癌是源自上皮细胞的任意恶性癌。癌会侵入周围组织和器官，并可以转移或扩散至淋巴结和其它部位。
象所有瘤形成一样，通过它的组织病理学外观来分类癌。腺癌和鳞状细胞癌（肿瘤的2个常见描述性术语）反映了下述事实：即这些细胞分别可能具有腺状外观或鳞状细胞外观。严重的间变性肿瘤可能是未分化的，所以它们不具有独特的组织学外观（未分化癌）。
有时，通过推定的原发器官（例如，前列腺癌）或假定的起源细胞（肝细胞癌、肾细胞癌）来表示肿瘤。
腺癌是一种源自腺组织的上皮细胞并形成腺状结构的恶性肿瘤。这常见于肺（形成所有肺癌的30-40%）。它见于外围，源自杯状细胞或II型肺泡壁细胞。
鳞状细胞癌源自鳞状转移瘤。这占肺肿瘤的20-30%，且通常起源于肺门。
小细胞癌几乎确定地起因于吸烟。它们在早期转移，且可以分泌ADH（降低患者钠浓度）。
大细胞未分化癌占肺肿瘤的10-15%。它们是侵袭性的，且由于未分化性质而难以识别。它们最常见于肺中央。
鼻窦未分化癌。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗癌。
骨髓瘤
多发性骨髓瘤（也称作MM、骨髓瘤、浆细胞性骨髓瘤，或在Otto Kahler以后称作卡勒病）是浆细胞的一种癌症。这些免疫细胞在骨髓中形成，大量存在于在淋巴管中，并生成抗体。认为骨髓瘤是不可治愈的，但是用类固醇、化学疗法、沙利度胺和干细胞移植可以诱导减轻。骨髓瘤是称作血液恶性肿瘤的一大类疾病的一部分。
多发性骨髓瘤形成在后生发中心B淋巴细胞中。经常在具有多发性骨髓瘤的患者中观察到免疫球蛋白重链基因（在第14染色体上，基因座14q32）和癌基因（经常是11q13、4p16.3、6p21、16q23和20q11）之间的染色体易位。该突变导致癌基因的失调，这被认为是骨髓瘤的发病机制中的一个重要启动事件。结果是浆细胞无性系的增殖和导致其它突变和易位的基因组不稳定性。在所有骨髓瘤病例的约50%中，观察到染色体14异常。还在约50%的病例中观察到第13染色体（的部分）的缺失。
浆细胞的细胞因子（特别是IL-6）生产会造成许多它们的局限性破坏（诸如骨质疏松症），并建立恶性细胞在其中茁壮成长的微环境。血管生成（新血管的吸引力）增加。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗骨髓瘤。
胃癌
胃癌可以形成在胃的任意部分，且可以扩散至整个胃和其它器官；尤其是食道、肺和肝。胃癌每年在全世界造成约800,000人死亡。
转移发生于80-90%的具有胃癌的个体中，在早期诊断出的那些中，6个月存活率为65%，在晚期诊断出的那些中，6个月存活率小于15%。
胃癌经常是无症状的，或在它的早期仅造成非特异性的征状。在征状出现的时间之前，胃癌通常已经转移至身体的其它部分，这是它的预后不良的主要原因之一。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗胃癌。
甲状腺癌
甲状腺肿瘤或甲状腺癌通常表示甲状腺的4类恶性肿瘤中的任一种：乳头瘤、滤泡瘤、髓质瘤或间变性瘤。乳头瘤和滤泡瘤是最常见的。它们缓慢地生长，且可能复发，但是通常在45岁以下的患者中不是致命的。髓质瘤具有良好的预后（如果限于甲状腺）和更差的预后（如果发生转移）。间变性瘤快速地生长，且对治疗的应答较差。
甲状腺癌通常见于甲状腺机能正常的患者中，但是甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退的征状可能与大的或转移性的良好分化的肿瘤相关。当在低于20岁的那些人中发现它们时，特别关心结节。在该年龄呈现良性结节的可能性更低，因而恶性肿瘤的可能性远远更大。
根据它们的病理学特征，可以分类甲状腺癌。可以区分下述变体（在不同亚型中的分布可能表现出局部差异）：乳头状甲状腺癌（多达75%）；滤泡甲状腺癌（多达15%）；髓质甲状腺癌（多达8%）；和间变性甲状腺癌（小于5%）。滤泡型和乳头型可以一起分类为“分化的甲状腺癌”。这些类型具有比髓质型和未分化型更有利的预后。甲状腺腺瘤是甲状腺的一种良性肿瘤。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗甲状腺癌。
膀胱癌
膀胱癌表示膀胱的几类恶性生长中的任一种。它是这样的疾病：其中，异常细胞在膀胱中没有控制地繁殖。膀胱是一种用于储存尿的空心肌肉器官；它位于骨盆中。膀胱癌的最常见类型起源于衬在膀胱内侧的细胞，且被称作移行细胞癌（有时称作膀胱上皮细胞癌）。
90%的膀胱癌是移行细胞癌。其它10%是鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、小细胞癌和来自体内别处的癌的继发性沉积。
根据TNM（肿瘤、淋巴结和转移）分期系统，使用下述阶段来分类癌的位置、大小和扩散：0期：仅在膀胱衬里上发现癌细胞。I期：癌细胞已经增殖至超过膀胱衬里的层，但是没有增殖至膀胱的肌肉。II期：癌细胞已经增殖至膀胱壁中的肌肉，但是没有增殖至膀胱周围的脂肪组织。III期：癌细胞已经增殖至膀胱周围的脂肪组织和前列腺、阴道或子宫，但是没有增殖至淋巴结或其它器官。IV期：癌细胞已经增殖至淋巴结、骨盆壁或腹壁和/或其它器官。复发：在已经治疗以后，癌已经在膀胱中或在其它附近器官中复发。
根据1997 TNM系统，对膀胱TCC分期：Ta，非侵入性乳头瘤；T1，侵入性，但是没有远至膀胱肌肉层；T2，侵入肌肉层；T3，侵入超过肌肉层，进入膀胱外面的脂肪；和T4，侵入周围结构，如前列腺、子宫或骨盆壁。
在一个实施方案中，本文所述的方法治疗膀胱癌。
涉及血管生成的眼病
黄斑变性病和糖尿病视网膜病变
在一个方面，本发明提供了一种治疗患者的糖尿病视网膜病变、黄斑变性、脉络膜新血管生成或新生血管性青光眼的方法，其中给患者施用治疗有效量的一种或多种本文提供的组合物。
黄斑变性（AMD）是在负责高清晰度视觉的中央视网膜（称作黄斑）的一部分中的光感受器的丧失。黄斑变性与胞外基质组分和其它碎片在视网膜色素上皮和血管脉络膜指检的膜中的异常沉积有关。该碎片-样物质被称作玻璃疣。通过眼底镜眼检查，观察到玻璃疣。正常的眼可能具有没有玻璃疣的黄斑，而玻璃疣可能大量存在于视网膜周围。在没有任何黄斑视觉损失的情况下，软玻璃疣在黄斑中的存在，被视作早期的AMD。黄斑变性的特征在于脉络膜新血管生成（CNV），即在视网膜的视网膜色素上皮（RPE）层的下面形成异常血管。这些血管突破布鲁赫膜，破坏视网膜色素上皮，出血，并最终造成黄斑瘢痕形成，后者导致深度的中心视觉丧失（盘状瘢痕形成）。
除了其它眼障碍以外，脉络膜新血管生成（CNV）常见于黄斑变性中，且与脉络膜内皮细胞的增殖、胞外基质的过量生产和纤维血管视网膜下膜的形成有关。视网膜色素上皮细胞增殖和血管生成因子的生产似乎会影响脉络膜新血管生成。
糖尿病视网膜病变（DR）是在糖尿病中形成的特征在于过度血管生成的眼病，其原因是毛细血管基底膜增厚和缺少毛细血管的周细胞与内皮细胞之间的接触。周细胞的丧失会增加毛细血管的渗漏，并导致血液-视网膜屏障的破坏。糖尿病视网膜病变是微血管视网膜变化的结果。高血糖症诱导的周细胞死亡和基膜的增厚，会导致血管壁的机能不全。这些破坏会改变血液-视网膜屏障的形成，并也使视网膜血管变得渗透性更高。小血管（诸如眼中的那些）特别易受差的血糖（血液葡萄糖）控制的伤害。葡萄糖和/或果糖的过度积累会破坏视网膜中的微小血管。当受损的血管渗漏液体和脂质到黄斑上时，也可以形成黄斑水肿。这些液体使得黄斑肿胀，后者使视力模糊。该破坏也导致在视网膜处缺氧。
随着疾病进展，在视网膜中的缺氧会刺激沿着视网膜和在澄清的凝胶样玻璃体液（其填充在眼内）中的血管生成。如果不及时治疗，这些新血管可以出血，使视力模糊，并破坏视网膜。纤维血管增殖也可以造成牵引性视网膜脱离。新血管还可以生长进眼前房的角落中，并造成新生血管性青光眼。
增生性玻璃体视网膜病变与在玻璃体膜内以及在视网膜的表面上的细胞膜和纤维变性膜的细胞增殖有关。视网膜色素上皮细胞增殖和迁移常见于该眼病。与增生性玻璃体视网膜病变有关的膜含有胞外基质组分诸如胶原I、II和IV型和纤连蛋白，并逐渐变得纤维化。
在发达国家中，年龄相关性黄斑变性（AMD）和糖尿病视网膜病变是失明的2个主要原因。已经证实，最近批准的大分子LUCENTIS?、阿伐他汀?和MACUGEN?是AMD患者可利用的治疗选择。LUCENTIS?是一种Fab，阿伐他汀?是一种单克隆抗体。它们二者都结合血管内皮生长因子（VEGF），且迄今为止已经表现出最令人惊叹的治疗AMD的结果；但是，仅少数治疗的患者经历视敏度的明显改善。聚焦于除了VEGF以外的靶标上的抗血管生成疗法，可以克服与靶向VEGF途径的试剂有关的一些限制。
本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗或预防黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变。本文描述了通过施用本文所述的抗体来治疗或预防黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变的方法。本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以收缩血管、抑制与眼病有关的内皮细胞增殖、清除出血的征状、治疗视力模糊、提供视力损失的停滞和/或防止血管的渗漏。本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以用于药物中，所述药物用于治疗黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变。
另外，本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以与已知的用于治疗黄斑变性、CNV、糖尿病视网膜病变或增生性玻璃体视网膜病变的疗法和/或化合物联合使用。这样的化合物的实例包括、但不限于：贝伐单抗（阿伐他汀?）、ranibizumab（LUCENTIS?）、VEGF-Trap、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布、pazopanib或MACUGEN?。除了本文所述的给药模式以外，可以通过玻璃体内途径施用所述嵌合的抗-内皮因子抗体。玻璃体内给药模式的非限制性实例包括玻璃体内注射和玻璃体内植入物的使用。
可以评估患者的改善和对治疗的应答性。治疗包括、但不限于：减轻黄斑水肿、CNV面积的减小和视敏度的增加。征状的测量是本领域已知的，且在下面的实施例中进一步描述。
慢性炎性疾病
多种组织或包含机化组织的器官中的任一种可以在疾病状态下支持血管生成，包括皮肤、肌肉、肠、结缔组织、关节、骨等组织，血管可以在血管生成刺激以后侵入所述组织。因而，在一个实施方案中，待治疗的组织是发炎的组织，要抑制的血管生成是发炎的组织血管生成，其中存在发炎的组织的新生血管形成。
炎性肠病
血管生成在炎性肠病（IBD）中起重要作用。IBD是一组肠疾病或病症（包括克罗恩病和溃疡性结肠炎）的概括术语。克罗恩病通常特征在于小肠和大肠的炎症，而溃疡性结肠炎通常局限在结肠。异常的或病理性的血管生成是克罗恩病和溃疡性结肠炎的中心。两种疾病都涉及增加的微血管密度和微血管功能障碍，该血管生成与在两种疾病中发现的组织病理学和炎性循环短暂相关。已知内皮因子在这些组织中表达，且在IBD过程中在血管生成失调中起作用（Chidlow等人, Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 293:5-18（2007））。
本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗IBD。另外，所述嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗克罗恩病或溃疡性结肠炎。所述嵌合的抗-内皮因子抗体也可以与外科手术和/或已知的IBD、克罗恩病或溃疡性结肠炎疗法联合使用。这样的已知疗法的实例包括、但不限于：氨基水杨酸盐（例如，氨水杨酸）、皮质类固醇（例如，布地奈德、泼尼松等）、抗生素（例如，甲硝唑等）、免疫抑制药（例如，硫唑嘌呤、6-巯嘌呤、甲氨蝶呤、他克莫司和环孢菌素等）和生物药诸如蛋白和抗体（例如，英夫利昔单抗等）。
通过发炎组织的血管生成的减少，可以评估IBD的治疗。通过表征IBD的溃疡性病损的停滞、消退和/或治愈，也可以评估治疗。
糖尿病肾病和肾移植缺血
糖尿病肾病是1型和2型糖尿病的发病和死亡的一种主要原因。它是全世界末期肾病的主要原因。糖尿病肾病的特征在于，由增加的促血管生成因子合成导致的肾小球微血管损伤。这些促血管生成因子会造成增加的内皮细胞增殖和随后的血管生成，且已知内皮因子在慢性肾病中被增量调节。该血管生成导致肾小球的破坏，并最终导致肾衰竭。
在肾移植中观察到类似的效应，其导致移植的器官的缺血和衰竭。内皮因子的增量调节在肾中导致增量调节的血管生成和炎症。相反，使用没有内皮因子的小鼠的研究证实了在移植/缺血以后显著减少的肾损伤和增加的器官存活期。
本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗或预防糖尿病肾病、移植以后的肾衰竭和/或移植以后的缺血性肾损伤。
本文描述了通过施用本文所述的抗体来治疗或预防糖尿病肾病、移植以后的肾衰竭和/或移植以后的缺血性肾损伤的方法。本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以用于药物中，所述药物用于治疗糖尿病肾病、移植以后的肾衰竭和/或移植以后的缺血性肾损伤。另外，本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以与已知的用于治疗糖尿病肾病、移植以后的肾衰竭和/或移植以后的缺血性肾损伤的疗法和/或化合物联合使用。
通过例如肾功能的改善，可以在治疗效能方面评估患者。
类风湿性关节炎和骨关节炎
类风湿性关节炎的特征在于过度血管生成，在这点上得到良好理解。在滑液中发现的炎症和破坏与在周围组织和滑液组织中发现的增加的血管生成直接相关。许多促血管生成因子存在于类风湿性关节炎患者的受累组织中。
骨关节炎是一组影响滑膜关节的慢性致残性疾病。血管生成和炎症是该疾病的病理生理学的完整过程，它们会通过多种机理促进关节损伤，所述机理包括但不限于：MMP生产的刺激和软骨内成骨。另外，骨关节炎中的血管生成会进一步诱发神经支配，其形成反馈环，其中每个反馈环继续刺激其它反馈环。
本文所述的嵌合的抗-内皮因子抗体可以用于治疗或预防类风湿性关节炎和骨关节炎。本文描述了通过施用一种或多种本文所述组合物来治疗或预防类风湿性关节炎和骨关节炎的方法。本文所述的人源化的嵌合的抗-内皮因子抗体也可以用于药物中，所述药物用于治疗类风湿性关节炎和骨关节炎。
2种普遍接受的RA在试验中的改善的混合度量是：Paulus标准和美国风湿病学会（American College of Rheumatology）标准（ACR）。Paulus标准被定义为下述4种的改善：触痛的和肿大的关节计数、晨僵、疾病活性的患者评估、疾病活性和红细胞沉降率（ESR）的医师评估。将改善的水平设定为这些变量中的每一个的改善百分比，即Paulus 20分类指示这样的应答者：其已经表现出6个参数中的4个的20%改善。
使用美国风湿病学会（ACR）评分，也可以评估类风湿性关节炎。简而言之，通过下述因素中的5项或更多项在至少2个连续月中的存在，评估用于测定类风湿性关节炎的临床减轻的ACR分类标准：
a. 晨僵< 15分钟；
b. 没有疲劳；
c. 没有关节痛；
d. 没有关节触痛或活动性痛；
e. 没有关节或腱鞘的软组织肿胀；和
f. ESR（韦斯特格伦法）< 30 mm/小时（对于女性）或20 mm/小时（对于男性）。
排除可能发生，包括：活动性脉管炎、心包炎、肋膜炎或肌炎的临床表现，无法解释的近期体重减轻或可归因于类风湿性关节炎的发热会阻止完全临床减轻的指示（Pinals RS, 等人: Arthritis Rheum  24:1308, 1981）。另外，在类风湿性关节炎中的功能状态的ACR分类标准包括基于下述患者能力的分类：
I类：完全能够进行日常生活的惯常活动（自我护理、职业的和业余的）；
II类：能够进行惯常的自我护理和职业活动，但是在业余活动中受限；
III类：能够进行惯常的自我护理活动，但是在职业活动和业余活动中受限；和
IV类：有限的进行惯常自我护理、职业活动和业余活动的能力。
使用ACR评分，也可以评估骨关节炎。使用患者病史、体格检查和实验检查所见，评估髋的骨关节炎的ACR临床分类标准：评估患者的髋痛和下述项目之一：
（1）    小于15度的内髋旋转，和小于或等于45度mm/小时的ESR，或在ESR不可用的情况下，小于或等于115度的髋俯屈；或
（2）    小于15度的内髋旋转，与内髋有关的疼痛，小于或等于60分钟的髋晨僵，且患者超过50岁。
使用病史、体格检查、实验检查所见和放射摄影所见，传统形式是髋痛和下述指征中的2种：ESR小于20 mm/小时，放射摄影股骨和/或髋臼骨赘，或放射摄影关节间隙变窄（上部、轴向和/或中间）。分类树如下：髋痛膝痛结合下述2项：（1）放射摄影股骨和/或髋臼骨赘，或（2）ESR小于或等于20 mm/小时，且放射摄影轴向关节间隙变窄（Altman, R, 等人: Arthritis Rheum 34:505, 1991）。
膝骨关节炎的ACR临床分类标准
使用病史和体格检查，使用下述标准，评估膝骨关节炎的ACR临床分类标准：膝痛结合下述中的3项：
（1）    患者超过50岁；
（2）    晨僵小于30分钟；
（3）    主动运动时的摩擦音；
（4）    骨触痛；
（5）    骨膨大；和
（6）    没有可触及的滑膜温暖。
使用患者病史、体格检查和放射摄影所见，结合下述患者特征之一，可以评估膝痛：（1）患者超过50岁；（2）晨僵小于30分钟；和（3）主动运动时的摩擦音和骨赘。使用病史、体格检查和实验检查所见，结合下述患者特征中的5项，可以评估膝痛：
（1）    患者超过50岁；
（2）    晨僵小于30分钟；
（3）    主动运动时的摩擦音；
（4）    骨触痛；
（5）    骨膨大；
（6）    没有可触及的滑膜温暖；
（7）    ESF小于40 mm/小时；
（8）    类风湿因子（RF）小于1:40；和
（9）    骨关节炎的滑液（SF）征象。
参见，例如，Altman, R, 等人: Arthritis Rheum 29:1039, 1986。
可以如下评估手的骨关节炎的ACR临床分类标准：手的疼痛、酸痛或僵硬，结合下述项目中的3项：（1）下述关节（双手的第二和第三远侧指间关节、第二和第三近侧指间关节和第一腕掌关节）中的2个或更多个的硬组织增大；（2）2个或更多个远侧指间关节的硬组织增大；（3）小于3个肿大的MCP关节；和（4）上面在（1）中列出的关节中的至少一个的畸形。
联合治疗
根据本文所述的实施方案，本文所述的组合物可以单独施用，或与一种或多种额外的活性剂或惰性剂联合施用。当使用组合时，可以同时或相继施用嵌合的内皮因子抗体和抗-VEGF抗体（其抗原结合片段）。
根据需要，可以与一种或多种额外的治疗性处理联合地施用所述化合物，所述治疗性处理包括、但不限于：阿霉素、环磷酰胺、紫杉醇、培美曲塞、替莫唑胺、奥沙利铂、爱必妥、vectibix、索拉非尼、舒尼替尼、吉非替尼、厄洛替尼、5-氟尿嘧啶（5-FU）、伊立替康、托泊替康、亚叶酸、VELCADE?、来那度胺、沙利度胺、希罗达、泰素帝和本文所述的许多其它常规癌症疗法。本文使用的“辐射”表示，例如，微波、紫外线（UV）、红外线（IR）或α-、β-或γ-辐射。使用常规技术，可以“集中”或局部地递送辐射，以将辐射靶向一个或多个肿瘤部位，而不辐射整体身体。应当理解，下面列出的治疗方案的列表代表常规疗法，但是本发明包括在本文中没有具体公开的其它已知的治疗方案。
在一个实施方案中，所述癌症是卵巢癌，所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、化学疗法（例如，多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、吉西他滨、卢比替康和基于铂的化学疗法诸如顺铂、卡铂和奥沙利铂）、美法仑、拓扑异构酶I抑制剂诸如托泊替康和伊立替康、基于紫杉烷的疗法、激素、辐射疗法、全身低温、异衍生物诸如苯妥帝尔（Phenoxodial）、细胞毒性的大环内酯类诸如埃博霉素、血管生成抑制剂诸如贝伐单抗、信号转导抑制剂诸如曲妥单抗、基因疗法、RNAi疗法、免疫疗法、单克隆抗体、磷脂酰肌醇样激酶抑制剂诸如雷帕霉素或它们的任意组合。本文所述的抗体与卵巢癌疗法的联合治疗也可以提供任一种疗法或二者的更低剂量，这是由于共同施用所述疗法的协同效应。
在一个实施方案中，所述癌症是肾癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、化学疗法、pazopanib、干扰素-α或IL-2。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括上述的那些、ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。本文所述的抗体与肾癌疗法的联合治疗也可以提供任一种疗法或二者的更低剂量，这是由于共同施用所述疗法的协同效应。
在一个实施方案中，所述癌症是骨髓瘤，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、放射疗法、VELCADE?、来那度胺或沙利度胺。在一个实施方案中，所述额外试剂是VELCADE?。这些疗法中的任一种的剂量是本领域已知的，且可以在联合治疗中相应地进行调节。
在一个实施方案中，所述癌症是前列腺癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、放射疗法（例如，外线束或近距离放射疗法）、激素剥夺（雄激素抑制，包括使用阿比特龙）、热休克蛋白90（HSP90）抑制剂、化学疗法（例如，多西他赛、基于铂的化学疗法诸如顺铂、卡铂、沙铂和奥沙利铂、紫杉烷、雌莫司汀）、泼尼松或泼尼松龙、降低胆固醇的药物诸如他汀类药物、促黄体激素-释放激素（LHRH）激动剂、RNAi疗法、基于树突细胞的疗法、遗传修饰成分泌粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子（GM-CSF）的全肿瘤细胞（也称作GVAX）或它们的任意组合。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括：ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。
在一个实施方案中，所述癌症是肺癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、放射疗法（例如，胸放射疗法、使用带电颗粒的辐射疗法、尿嘧啶-替加氟和基于铂的化学疗法（例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂等）和长春瑞滨、厄洛替尼（TARCEVA?）、吉非替尼（IRESSA?）、抗-表皮生长因子受体抗体（例如，西妥昔单抗）、酪氨酸激酶的小分子抑制剂、在肺癌细胞增殖中涉及的蛋白的直接抑制剂、极光激酶抑制剂、激光诱导的温热疗法、RNAi疗法、遗传修饰成分泌粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子（GM-CSF）的全肿瘤细胞（也称作GVAX）或它们的任意组合。额外的治疗性处理包括泰素或培美曲塞。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。这些疗法中的任一种的剂量是本领域已知的，且可以在联合治疗中相应地进行调节。
在一个实施方案中，所述癌症是乳腺癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、单克隆抗体（例如，Her-2抗体、赫赛汀）、辅助化学疗法诸如单一试剂化学疗法或联合化学疗法（例如，基于蒽环类抗生素的和基于紫杉烷的多种化学疗法、泰素或靶物-特异性的曲妥单抗（有或没有内分泌操作，有或没有PMRT）、长春瑞滨）、阿霉素、环磷酰胺、希罗达、泰素帝、选择性的雌激素受体调节剂诸如他莫昔芬和雷洛昔芬、变构的雌激素受体调节剂诸如曲洛司坦、辐射（例如，间质近距离放射疗法、球囊装置、三维共形外辐射和外科手术中的放射疗法）、抑制全身合成的芳香酶抑制剂（例如，阿那曲唑、依西美坦和来曲唑）、RNAi疗法、免疫抑制性的和抗增殖的雷帕霉素的静脉内类似物诸如坦罗莫司（CCI779）或它们的任意组合。用于进行乳腺癌的三维体外组织培养模型的方法的综述，描述在：Kim等人, Breast Cancer Research Treatment 85（3）: 281-91（2004）。用于测试癌症的其它体内和体外模型是已知的，且可以用于测试本文所述的抗体。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括：ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、Axitinib、培加尼布和Pazopanib。这些疗法中的任一种的剂量是本领域已知的，且可以在联合治疗中相应地进行调节。
在一个实施方案中，所述癌症是结肠癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、辐射疗法和化学疗法（例如，5-氟尿嘧啶（5-FU）、左旋咪唑、亚叶酸或司莫司汀（甲基CCNU））、N-[2-（二甲氨基）乙基]吖啶-4-羧酰胺和其它有关的羧酰胺抗癌药；非-拓扑异构酶II抑制剂、伊立替康、脂质体托泊替康、紫杉烷类抗癌剂（例如，紫杉醇或多西他赛）、呫吨酮醋酸类化合物（例如，5,6-二甲基呫吨酮-4-乙酸PMAA）、昆布多糖、位点-选择性的环AMP类似物（例如，8-氯腺苷3',5'-环磷酸盐）、Cox-2的吡喃并吲哚抑制剂、Cox-2的咔唑抑制剂、Cox-2的四氢咔唑抑制剂、Cox-2的茚抑制剂、NSAIDS的局限抑制剂（例如，邻氨基苯甲酸、阿司匹林（5-阿司匹林）、奥柳氮钠、碳杂环酸、卡洛芬、苯丁酸氮芥、双氯苯胺酚乙酸、芬布芬、芬氯酸、非诺洛芬、氟芬那酸、氟比洛芬、氟洛芬、呋塞米、金硫丁二钠、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮洛芬、氯那唑酸、洛索洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美法仑、萘普生、青霉胺、苯乙酸、丙酸、水杨酸、柳氮磺吡啶、舒林酸、托美丁、布他酮保泰松扑灭津NSAID、美洛昔康、昔康类、吡罗昔康、费啶、吡罗昔康β环葡聚糖、替诺昔康、依托度酸和奥沙普秦）、HER-2/neu的抑制剂、RNAi疗法、GM-CSF、单克隆抗体（例如，抗-Her-2/neu抗体、抗-CEA抗体、A33（HB 8779）、100-210（HB 11764）和100-310（HB 11028））、爱必妥、vectibix、激素疗法、嘧啶胺类、喜树碱衍生物（例如，CPT- 11）、亚叶酸（FA）、吉西他滨、Ara-C、基于铂的化学疗法诸如顺铂、卡铂和奥沙利铂、cGMP-特异性的磷酸二酯酶抑制剂或它们的任意组合。在一个实施方案中，所述额外的治疗性处理是5-FU、亚叶酸和奥沙利铂的组合（FOLFOX）。在一个实施方案中，所述额外的治疗性处理是5-FU、伊立替康和亚叶酸的组合（IFL）。在一个实施方案中，所述额外试剂是爱必妥。在一个实施方案中，所述额外试剂是vectibix。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括：ranibizumab（LUCENTIS?）、aflibercept（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。这些疗法中的任一种的剂量是本领域已知的，且可以在联合治疗中相应地进行调节。
在一个实施方案中，所述癌症是胰腺癌，且所述一种或多种额外的治疗性处理是外科手术、辐射疗法（RT）、氟尿嘧啶（5-FU）和RT、全身疗法、支架、吉西他滨（GEMZAR?）、吉西他滨和RT、西妥昔单抗、厄洛替尼（TARCEVA?）、放化疗或它们的任意组合。在另一个实施方案中，所述额外试剂是VEGF受体抑制剂。VEGF受体抑制剂的非限制性实例包括：ranibizumab（LUCENTIS?）、afliberceipt（VEGF-Trap）、舒尼替尼（SUTENT?）、索拉非尼（NEXAVAR?）、axitinib、培加尼布和pazopanib。
可以在一个或多个不同的时间点，包括在治疗方案之前、过程中和之后，关于征状对患者进行评估。治疗可以导致该值受试者的病症，且可以通过测定是否已经发生下述因素中的一项或多项来进行评估：肿瘤大小的减小、细胞增殖的减少、细胞数目的减少、新生血管形成的减少、细胞凋亡的增加、或至少一部分构成细胞增殖障碍的细胞的存活期减小。在某些情况下，这些事件中的一个或多个可能导致癌症的部分或完全消除和患者存活期的延长。或者，对于末期癌症，治疗可能导致疾病的停滞、更好的生活质量和/或存活期的延长。
功能试验
可以在多种体外、体内和离体试验中评估本文所述的组合物。可以使用本领域技术人员已知的任意合适的试验来监测这样的效应。本文描述了几种这样的技术。
CD105信号传递和功能的测定
CD105（内皮因子）是由增殖中的内皮细胞表达的TGF-β受体家族的一个成员，内皮细胞增殖需要正常水平的CD105。CD105在实体瘤的血管生成脉管系统中强烈表达，涉入血管生成/血管发育，且是辅助性的转化生长因子β（TGF-β）受体。CD105是一种在白血病细胞和内皮细胞上表达的同源二聚体细胞膜糖蛋白。已经表征了CD105的2种亚型L-内皮因子（170 kDa）和S-内皮因子（160 kDa），它们的差别在于它们的细胞质尾巴的氨基酸序列。
CD105表达被细胞低氧增加（通过低氧诱导因子-1-α（HIF-1-α）的生产），并保护低氧细胞免于细胞凋亡。CD105的作用是调节TGF-β超家族的多种激酶受体复合物的信号传递，所述TGF-β超家族包括TGF-β受体（TGF-βR）、激活蛋白受体-样激酶（ALK）和激活蛋白受体。在没有CD105存在下，TGF-β受体的活化会导致SMAD蛋白的磷酸化，后者会抑制内皮细胞生长。但是，TGF-β对CD105的活化会调节SMAD蛋白磷酸化。最终结果是，TGF-β受体活化的生长抑制作用在内皮细胞上的释放。
抗-CD105抗体对CD105活化的阻止，与TGF-β协同地起抑制内皮细胞生长的作用。TGF-β可以刺激在内皮细胞中具有相反作用的2种独特的I型受体/SMAD信号传递途径。TGF-β/ALK5信号传递途径（A）会导致细胞增殖和迁移的抑制，而TGF-β/ALK1途径（B）会诱导内皮细胞增殖和迁移。在血管生成过程中高度表达的CD105（一种辅助性的TGF-β受体）是ALK1信号传递所必需的。在没有CD105存在下，TGF-β/ALK5信号传递占优势，并维持静止的内皮。高CD105表达会刺激ALK1途径，并间接地抑制ALK5信号传递，从而促进血管生成的活化状态。
在一个非限制性实施方案中，可以关于抑制血管生成和内皮细胞增殖来评估嵌合抗体。嵌合的抗-内皮因子抗体与HUVEC的结合不会阻止TGF-β与HUVEC的随后结合。因而，抗-内皮因子抗体对内皮细胞生长的直接抑制，代表在体内观察到的抗血管生成效应和肿瘤抑制效应的根本机制之一。在另一个实施方案中，可以关于阻断血管生成（通过阻止Smad1/5/8磷酸化和/或信号传递）来评估嵌合抗体。CD105通过TGF-β/ALK1的信号传递而参与促进血管生成，所述信号传递又涉及Smad2/3蛋白的磷酸化的减少和/或阻断。在另一个实施方案中，可以关于阻断血管生成（通过增强Smad2/3磷酸化和/或信号传递）来评估嵌合抗体。
用于测定本文提供的嵌合抗体对TGF-β/ALK1信号传递途径和/或Smad1/5的磷酸化的阻断或抑制作用的方法和技术包括、但不限于：已知的分子技术。作为实例，使用对TGF-β/ALK5或TGF-β/ALK1途径中的任一种蛋白特异性的抗体的蛋白印迹法，可以用于测定本文公开的嵌合的抗-内皮因子抗体对TGF-β/ALK5或TGF-β/ALK1途径的抑制作用和/或刺激作用。类似地，在TGF-β/ALK5或TGF-β/ALK1途径中涉及的蛋白的mRNA的检测或mRNA的调节，可以用于测定本文公开的嵌合抗体的抑制作用和/或刺激作用。用于测定TGF-β/ALK5或TGF-β/ALK1途径的细胞信号传递的其它方法是本领域已知的，且在本文中预见到。
使用本领域公知的试验，通过例如结合试验诸如ELISA、竞争性ELISA、表面等离子体共振和对HUVEC细胞的影响（在下面更详细地描述），可以评估本文公开的嵌合的抗-内皮因子抗体的活性。
VEGF信号传递和功能的测定
使用竞争和/或功能试验，可以评估特异性地抑制VEGF与VEGF受体VEGFR2（KDR/Flk-1）的结合的抗体。试验包括、但不限于：基于ELISA的竞争试验。在竞争试验中，预混合或混合VEGF与不同量的实验抗体（例如，100倍至1000倍摩尔过量），并测定实验抗体的减少VEGF与VEGFR2结合的能力。可以预标记VEGF，并直接地检测，或可以使用（第二）抗-VEGF抗体或第二和第三抗体检测系统进行检测。这样的竞争试验的ELISA形式是一种这样的形式，但是可以进行任意类型的免疫竞争试验。
在完全无关抗体（包括不阻断的抗-VEGF单克隆抗体）存在下VEGF与VEGFR2的结合，是这样的竞争试验中的对照高值（100%）。在测试试验中，在有实验抗体存在下VEGF与VEGFR2的结合的显著减少，指示显著抑制VEGF与VEGF受体VEGFR2（KDR/Flk-1）的结合的抗体。
用于鉴别和/或证实所述抗体抑制VEGF与VEGF受体VEGFR2（KDR/Flk-1）的结合的另一个结合试验是共沉淀试验。共沉淀试验在溶液中测试抗体的阻断VEGF与一种或多种受体的结合的能力。在这样的试验中，与合适形式的受体一起温育VEGF或可检测地标记的VEGF。
存在许多进行免疫沉淀或共沉淀试验的形式。在本发明的情况下，“合适形式的受体”可以是VEGFR2受体或所述受体的胞外结构域。除了标准试剂以外，免疫沉淀还需要存在针对VEGFR2受体或在所述受体的胞外结构域上的表位（不同于VEGF所结合的位点）的抗体。
不论合适的受体，与对照一起进行免疫沉淀或共沉淀试验。通过在没有抗-VEGF抗体存在下的沉淀，可以证实单独的VEGF的结合选择的受体的能力。可以在有或没有抗体（具有已知的结合性质，起对照的作用）存在下进行平行温育。可以平行地运行使用阻断对照和不阻断的对照抗体的试验。
然后免疫沉淀任何结合的免疫学物质，例如，通过与有效的免疫沉淀组合物（诸如蛋白A组合物或蛋白A琼脂糖珠子）一起温育。然后测试沉淀物中VEGF的存在。在初次温育中的VEGF是可检测地标记的VEGF（诸如放射标记的VEGF）的情况下，可以直接地检测免疫沉淀物中的任何VEGF。通过其它合适的方式，例如，通过凝胶分离和使用抗-VEGF抗体的免疫检测，可以检测免疫沉淀物中的任何未标记的VEGF。
在这样的共沉淀试验中，可以容易地定量抗体的阻断VEGF与VEGF受体（诸如VEGFR2）的结合的能力，尽管定性结果也是有价值的。通过直接测量标记的VEGF，或者例如通过免疫检测的VEGF的密度计分析，可以实现定量。因而可以检测到表现出可再现的（即，一致地观察到的）抑制VEGF与VEGFR2的结合的能力的抗体，且可以根据上述的定量标准来选择有用的抗体。
通过进行如上所述的共沉淀试验，但是使用VEGFR1而不是VEGFR2，也可以容易地鉴别出不会显著抑制VEGF与VEGF受体VEGFR1（Flt-1）的结合的抗-VEGF抗体。因此，使用这样的方法，也可以容易地鉴别出抑制VEGF与VEGF受体VEGFR2（KDR/Flk-1）的结合、但不显著抑制VEGF与VEGF受体VEGFR1（Flt-1）的结合的抗-VEGF抗体。
也可以使用用于鉴别和/或证实抗体显著抑制VEGF与VEGF受体VEGFR2（KDR/Flk-1）的结合的功能试验。这些通常与VEGFR2被鉴别为负责某些确定的生物应答的受体有关。尽管与前述竞争型试验（它们在无细胞系统中进行，且是最可再现的、最可靠的、最省力的和最节省成本的）相比通常更少地使用，下述试验仍然是有用的。
例如，通过测试抑制VEGF介导的内皮细胞生长（抑制VEGF的促有丝分裂活性）的能力，可以鉴别出阻断VEGFR2的抗-VEGF抗体。可以采用任意合适的试验，其中在有VEGF存在下（有或没有实验抗体），使用多种内皮细胞中的任一种。可以平行地运行双份试验，诸如没有VEGF的那些，和具有确定性质（阻断的和不阻断的）的对照抗体的那些。通过任意可接受的测定细胞数目的方法，包括比色测定法，可以测定内皮细胞生长，并准确地定量。
具有抑制VEGF介导的内皮细胞生长的能力的抗体通常表现出一致地观察到的约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、约95%等的VEGF介导的内皮细胞生长抑制。在这些范围内的抑制会指示具有足以抑制体内血管生成的性质的抗体。未从本发明中排除具有更显著的抑制活性的抗体。
用于鉴别抗体的其它功能试验包括：测试VEGF诱导的磷酸化的阻断的试验。可以采用任意合适的试验，其中使用表达天然的或重组的可磷酸化的VEGFR2的任意形式的多种内皮细胞中的任一种。在有或没有待测抗体存在下，用VEGF温育细胞合适的时间段。可以平行地运行双份试验，诸如没有VEGF的那些，和具有确定性质（阻断的和不阻断的）的对照抗体的那些。
用于鉴别根据本发明的阻断VEGFR2的抗-VEGF抗体的其它功能试验是，测试VEGF诱导的血管通透性的抑制的试验。尽管可以使用任意这样的试验，一种合适的试验是Miles通透性试验，其中给诸如豚鼠等动物注射染料，诸如伊文思蓝染料，并在有或没有实验抗体存在下提供VEGF以后，测定染料在动物皮肤中的出现。可以平行地进行双份研究，诸如没有VEGF的那些，和具有确定性质（阻断的和不阻断的）的对照抗体的那些。染料在动物皮肤中的出现通常是作为在动物后背上的斑，诸如青斑，可以对它们照相，并测量。
SCID / 裸鼠
用于测定肿瘤生长的一种方法如下使用SCID小鼠：收获亚汇合的人M21黑素瘤细胞，洗涤，重新悬浮于无菌的PBS中（20 x 106/mL）。给SCID小鼠皮下地注射100μL M21人黑素瘤细胞（2 x 106）悬浮液。在肿瘤细胞注射以后3天，不治疗小鼠，或用一种或多种对照或实验组合物静脉内地或腹膜内地治疗小鼠（例如，100μg/小鼠）。每天治疗小鼠，持续24天。使用测径器测量肿瘤大小，并使用公式V = （L x W2）/2估测体积，其中V等于体积，L等于长度，W等于宽度。
用于测定肿瘤生长的一种方法如下使用裸鼠：将在50μl PBS中的MDA-MB-435肿瘤细胞（0.4×106细胞/小鼠）正位地植入雌性裸鼠（5-6周龄）的乳房脂肪垫中。当肿瘤达到大约50-80 mm3的平均体积时，将小鼠随机化（至少10只/组），并开始使用下述剂量的一种或多种抗体的静脉内或腹膜内治疗，每周2次：在100 μl PBS中的1μg（0.05 mg/kg）/剂、10μg（0.5 mg/kg）、100μg（5 mg/kg）或200μg（10 mg/kg）或100 μg对照抗体，或媒介物PBS 100μl。在有些研究中，也可以评价未治疗组。使用测径器测量肿瘤大小，并使用公式V = （L x W2）/2估测体积，其中V等于体积，L等于长度，W等于宽度。
BALB/c同源小鼠模型
或者，也可以使用BALB/c同源小鼠模型来评估肿瘤生长和本文所述抗体对肿瘤生长的抑制，如例如Tsujie等人, Int. J. Oncology, 29: 1087-1094（2006）所例证的。
嵌合小鼠
另一个试验测量嵌合小鼠:人小鼠模型中的血管生成，并被称作嵌合小鼠试验。所述试验已经由其他人进行了详细描述，并进一步已经在本文中描述用于测量血管生成、新生血管形成和肿瘤组织的消退。参见Yan, 等人（1993）J. Clin. Invest. 91:986-996。
嵌合小鼠试验是体内血管生成的有用的试验模型，因为移植的皮肤移植物在组织学上非常类似于正常的人皮肤，且整个组织的新生血管形成正在发生中，其中实际的人血管正在从移植的人皮肤生长进在移植的人皮肤的表面上的人肿瘤组织中。通过用人特异性的内皮细胞标志物对新血管系统的免疫组织化学染色，可以证实新生血管形成在人移植物中的起源。
嵌合小鼠试验会证实新生血管形成的消退，这基于新血管生长的量和消退程度。此外，可以容易地监测对移植在移植的皮肤上的任何组织（诸如肿瘤组织）的生长的影响。最后，所述试验是有用的，因为在所述试验系统中存在毒性的内部对照。将嵌合小鼠暴露于任何实验试剂，此后小鼠的健康会指示毒性。本文所述的和本领域已知的其它动物模型也可以用于本文所述的方法中。
兔眼试验
血管生成的另一种度量是体内兔眼模型，并被称作兔眼试验。所述兔眼试验已经由其他人进行了详细描述，并已经被用于测量在有血管生成抑制剂存在下的血管生成和新生血管形成，如D’Amato等人（1994）Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91（9）: 4082-4085所例证的。
兔眼试验是公认的体内血管生成的试验模型，因为通过眼的天然透明角膜，可以容易地观察新生血管形成过程，该过程由兔血管从角膜边缘向角膜中的生长来证实。另外，可以容易地随时间监测新生血管形成的刺激或抑制的程度和量或新生血管形成的消退。
最后，将兔暴露于任何实验试剂，此后兔的健康会指示实验试剂的毒性。
简而言之，进行鸡绒毛尿囊膜（CAM）试验，在植入含有一种或多种对照或实验化合物的0.5%羧甲纤维素团粒以后48小时，记录对发育中的脉管系统的影响。由植入的聚（甲基丙烯酸羟乙酯）的团粒（Hydron; Interferon Sciences, New Brunswick, NJ）诱导角膜新生血管化，所述团粒含有650 ng与硫糖铝（蔗糖硫酸铝; Bukh Meditec, Copenhagen）结合的有效的血管生成蛋白碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。硫糖铝向团粒中的添加，会保护bFGF免于降解，并提供它的缓慢释放，从而生成一致的侵袭性血管生成，其比单独的bFGF / Hydron诱导的血管生成更显著。在形成团粒以后多达4天，可以在体外检测到bFGF从含有硫糖铝/Hydron的团粒的释放，与此相比，对于只含有Hydron的团粒，仅1天。如下制备团粒：混合110μl含有12μg重组bFGF（Takeda, Osaka）的盐水和40 mg硫糖铝；将该悬浮液加入80μl在乙醇中的12% （wt/vol）Hydron中。然后将该混合物的等分试样（10μl）吸量到特氟隆椿（Teflon pegs）上，并允许干燥，生成大约17个团粒。
将团粒植入麻醉的雌性新西兰白兔的每只眼的角膜微袋中，离边缘2 mm，随后在角膜的表面上单次局部施用红霉素软膏。连续几天的组织学检查证实了角膜中向团粒的渐进性血管生长，仅观察到罕见的炎症细胞。使用全身辐照的严重免疫抑制不会改变该血管生成应答，只含有硫糖铝的团粒不会诱导血管生成。新血管主要由bFGF（而不是炎症）诱导。从植入以后2天，每天通过胃灌洗给动物饲喂悬浮于0.5% 羧甲纤维素中的一种或多种化合物或单独的媒介物。在即将植入团粒之前，免疫抑制的动物接受6辐射吸收剂量单位（Gy）的全身辐射6分钟。该剂量的辐射会导致显著的白血球减少，在第2天之前白细胞计数减少>80%，在第3天之前白细胞计数减少>90%，所述结果与以前的报道相一致。
相同的角膜专科医生（M.S.L.）每隔日以掩蔽方式用裂隙灯检查动物。通过用分划板测量血管离边缘的长度（L）和涉及的边缘的时钟小时数（C），确定角膜新生血管形成的面积。使用公式来确定环形带段的面积：C/12 x 3.1416 [r2 - （r - L）2]，其中r = 6 mm，即测量的兔角膜的半径。测量邻近团粒的新生血管形成的均匀连续带，因而，可以评估新生血管形成的总抑制。
小鼠基质胶塞血管生成试验
为了证实组合物对血管生成的影响，可以使用小鼠基质胶塞血管生成试验。将不同的生长因子（例如，IGF-1、bFGF或VEGF）（250 ng）和肝素（0.0025单位/mL）与以前所述的生长因子还原的基质胶相混合（Montesano, 等人, J. Cell Biol. 1983, 97:1648-1652; Stefansson, 等人, J. Biol. Chem. 2000, 276:8135-8141）。可以将本文所述的组合物或对照抗体包含在基质胶制品中，其中使用动物的一个或多个剂量组。在对照实验中，在没有生长因子存在下，制备基质胶。给小鼠皮下地注射0.5 mL基质胶制品，并温育1周。在温育时段以后，处死小鼠，通过外科手术取出聚合的基质胶塞。通过2种确定的方法（包括免疫组织化学分析和血红蛋白含量），定量在基质胶塞内的血管生成（Furstenberger, 等人, Lancet. 2002, 3:298-302; Volpert, 等人, Cancer Cell 2002, 2（6）:473-83；和Su, 等人, Cancer Res. 2003, 63:3585-3592）。对于免疫组织化学分析，将基质胶塞嵌入OCT中，快速冷冻，并制备4μm切片。在甲醇/丙酮（1:1）中固定冷冻的切片。用针对CD31的多克隆抗体，将冷冻的切片染色。通过在20高倍（200X）显微场内的微血管密度计数，定量血管生成。
可以如以前所述，定量血红蛋白含量（Schnaper, 等人, J. Cell Physiol. 1993, 256:235-246; Montesano, 等人, J. Cell Biol. 1983, 97:1648-1652; Stefansson, 等人, J. Biol. Chem. 2000, 276:8135-8141；和Gigli, 等人, J. Immunol. 1986, 100:1154-1164）。在干冰上快速冷冻基质胶植入物，并低压冻干过夜。将干燥的植入物重新悬浮于0.4 mL 1.0% 皂苷（Calbiochem）中1小时，并通过剧烈吸液来破碎。在14,000 X g离心制品15分钟，以去除任何颗粒。然后通过在405 nm测量吸光度，并与纯化的血红蛋白的标准浓度相对比，直接地测定上清液中的血红蛋白浓度。
测定细胞迁移的方法
细胞迁移试验已经被描述在文献中，例如，Brooks, 等人, J. Clin. Invest 1997, 99:1390-1398，用于测量细胞迁移的方法是本领域技术人员已知的。在本文所述的一种测量细胞迁移的方法中，用底物（在这里，内皮因子和/或VEGF）包被来自透明孔（Transwell）迁移室的膜，洗涤透明孔，并用BSA封闭非特异性的结合位点。收获来自分汇合培养物的肿瘤细胞，洗涤，并在有或没有试验抗体存在下重新悬浮于迁移缓冲液中。在允许肿瘤细胞迁移至包被的透明孔膜的下侧以后，去除剩余在膜上侧的细胞，并用结晶紫将迁移至下侧的细胞染色。然后通过每个显微场的直接细胞计数，定量细胞迁移。
测定细胞增殖的方法
通过本领域技术人员已知的方法，可以测定细胞增殖。可以将本文所述的亚汇合的人内皮细胞（HUVEC）重新悬浮于含有低（5.0%）血清的增殖缓冲液（在有或没有来自ECV或ECVL细胞的CM（25μL）存在下）中，并允许内皮细胞增殖24小时。通过使用可商业得到的WST-1试验试剂盒（Chemicon）测量线粒体脱氢酶活性，可以定量增殖。另外，通过使用标准方法测量3H掺入（She等人, Int. J. Cancer, 108: 251-257（2004）），可以定量本文所述的增殖。
评估细胞增殖的其它方法是本领域已知的，且在本文中预见到。在实施例中更详细地描述了其它非限制性实例。
诱导CDC、ADCC和调理素作用的方法
不同的疗法已经指向增强身体对转化的细胞的天然免疫应答。常规的效应物方法包括补体依赖性的细胞溶解（“CDC”）、抗体依赖性的细胞的细胞毒性（“ADCC”）和吞噬作用（在免疫球蛋白包被靶细胞以后，网状内皮系统进行清除）。已知，在抗体存在下，某些效应细胞（诸如具有表面结合的、抗体Fc区的受体的淋巴样细胞）会介导针对靶细胞的抗体依赖性的细胞的细胞毒性（“ADCC”）反应。借助于ADCC，这些效应细胞发挥针对这样的靶细胞的细胞溶解活性。
已经在体外证实了两类ADCC反应。在经典的ADCC反应中，效应细胞结合到抗体包被的靶细胞上，随后造成靶细胞的细胞溶解（A. H. Greenberg等人, “Characteristics Of The Effector Cells Mediating Cytotoxicity Against Antibody-Coated Target Cells,”Immunology, 21,第719页（1975））。效应细胞和靶细胞之间的这种结合，源自包被靶细胞的抗体的Fc区和效应细胞的Fc受体之间的相互作用。这类ADCC反应的一个缺点是，它可受到循环的抗原-抗体复合物的阻碍，所述复合物经常与不同的疾病有关，它们与靶细胞结合的抗体竞争效应细胞的Fc受体（I. C. M. MacLennan, “Competition For Receptors For Immunoglobulin On Cytotoxic Lymphocytes,”Clin. Exp. Immunol., 10,第275页（1972））。由于经典的ADCC的这种缺点，可以使用第二类ADCC反应，即抗体指导的ADCC。在抗体指导的ADCC中，首先使靶物特异性的抗体与效应细胞结合，然后使得到的复合物通过抗体“指向”在靶细胞表面上的它的特异性抗原。有利地，抗体指导的ADCC可能不受在宿主系统中循环的抗原-抗体复合物的存在的影响。通过Fc区/Fc受体结合实现的抗体和效应细胞之间的相互作用通常较弱。并且，在某些情况下，抗体不会保持与效应细胞结合足以允许靶细胞裂解的时间段。考虑到该潜在的问题，必须使用聚乙二醇和邻苯二甲酸酯油混合物进行预处理，使抗体结合效应细胞（J. F. Jones和D. M. Segal, “Antibody-Dependent Cell Mediated Cytolysis (ADCC) With Antibody-Coated Effectors: New Methods For Enhancing Antibody Binding And Cytolysis,”J. Immunol., 125,第926-33页（1980））。但是，在抗体-效应细胞复合物上的任何聚乙二醇和邻苯二甲酸酯油残余物可能具有的对身体的毒效应，可能减少该方法用于体内治疗的适用性。
或者，已经提出了通过使用细胞毒性药物的辅助化学疗法来增强抗体指导的ADCC的方法（I. R. Mackay等人, “Effect On Natural Killer And Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Of Adjuvant Cytotoxic Chemotherapy Including Melphalan In Breast Cancer,”Cancer Immunol. Immunother., 16,第98-100页（1983））。用于测试ADCC的试验是本领域众所周知的，例如，美国专利号5,756,097。
因此，本发明的实施方案提供了这样的抗体：所述抗体可以结合在新生血管形成或血管生成中起作用的细胞，或所述抗体可以增强所述细胞的吞噬作用和杀死，从而增强体内保护。也提供了具有相同效应的其它抗体和其功能片段，它们特异性地结合或优先结合这样的抗体可以结合的结合位点或表位，或可与其发生免疫反应。
所述抗体也可以是在新生血管形成或血管生成中起作用的细胞（例如，内皮细胞）的调理素，或表现出调理素活性。本领域技术人员会认识到，“调理素活性”表示调理素（通常是抗体或血清因子C3b）的下述能力：所述调理素结合抗原或细胞受体，以促进抗原或细胞受体与吞噬细胞的结合，并从而增强吞噬作用。当被调理素抗体包被时，某些细胞会变得对吞噬细胞（诸如嗜中性粒细胞和巨噬细胞）非常有吸引力，且它们从血流中的清除速率会显著增加。以例如在美国专利号6,610,293中所述的任意常规方式，可以测量调理素活性。
在另一个非限制性实施方案中，具有新生血管障碍或血管生成依赖性的障碍的患者会从血管生成脱落抗原/肽（例如，内皮因子）。这些抗原/肽可以是“肿瘤相关抗原”。可以给这样的患者全身地施用针对所述抗原/肽（例如，内皮因子）的抗体，且可以开始本文所述的任意途径，以诱导CDC、ADCC、调理素作用或任意其它形式的细胞介导的杀死。
其它试验
本领域已知的其它试验也可以用于测试本文所述组合物（例如，在下面的实施例中描述的那些）的效应。
包装和试剂盒
在其它实施方案中，本申请涉及与上述化合物一起使用的试剂盒。可以在试剂盒中提供优先结合内皮因子的嵌合抗体和优先结合VEGF的抗体。所述试剂盒可以包括一个或多个合适的容器装置。
所述试剂盒的容器装置通常包括至少一个管形瓶、试管、烧瓶、瓶子、注射器和/或其它容器装置，其中可以放置至少一种多肽，和/或优选地，适当地等分。所述试剂盒可以包括用于容纳至少一种融合蛋白、可检测部分、报告分子的装置和/或任意其它试剂容器，其在用于商业销售的密闭范围内。这样的容器可以包括注射剂和/或吹模制的塑料容器，其中保留希望的管形瓶。试剂盒也可以包括关于使用试剂盒中的物质的印制材料。
包装和试剂盒可以额外地包括在制剂中的缓冲剂、防腐剂和/或稳定剂。可以将试剂盒的每种组分包封在单个容器中，且所有不同的容器可以在单个包装内。可以将试剂盒设计成用于冷藏或室温贮存。
另外，所述制品可以含有稳定剂，以增加试剂盒的贮存期限，所述稳定剂包括，例如，牛血清白蛋白（BSA）。在低压冻干组合物的情况下，所述试剂盒可以含有其它溶液制品，以重构低压冻干的制品。可接受的重构溶液是本领域众所周知的，且包括，例如，药学上可接受的磷酸盐缓冲盐水（PBS）。
另外，本文提供的包装或试剂盒可以另外包括：本文提供的其它部分中的任一种，例如，一种或多种报告分子和/或一种或多种可检测部分/试剂。
包装和试剂盒可以另外包括：一种或多种用于试验（例如，ELISA试验）的组分。本申请中要测试的样品包括，例如，血液、血浆、组织/肿瘤切片和分泌物、尿、淋巴和它们的产物。包装和试剂盒可以另外包括：一种或多种用于收集样品的组件（例如，注射器、杯子、拭子等）。
包装和试剂盒可以另外包括：标签，所述标签指示例如产品描述、给药模式和/或治疗适应症。本文提供的包装可以包括本文所述的任意组合物。所述包装可以另外包括：用于治疗不同形式的癌症和它们的转移灶的标签。
术语“包装材料”是指容纳试剂盒组分的物理结构。包装材料可保持成分无菌，并可由通常用于此目的材料（例如，纸、波纹纤维、玻璃、塑料、箔、安瓿等）制成。标签或包装说明书可包括适当的书面说明。因此，本发明的试剂盒还可包括标签或使用说明书，用于以本发明所述的任何方法使用试剂盒组分。试剂盒可包含处于包装或分散装置中的化合物，以及关于在本文所述的方法中施用所述化合物的说明书。
另外提供了利用本文所述的诊断方法和试验的试剂盒。在有些实施方案中，试剂盒包含用于检测一个或多个基因的试剂，所述基因的表达水平已经与对来自患者的癌细胞样品中的血管生成抑制剂的敏感性或抗性相关联。在有些实施方案中，所述一个或多个基因选自VEGF、VEGF受体和CD105。在有些实施方案中，所述试剂盒包含VEGF。在有些实施方案中，所述试剂盒包含VEGF受体。在有些实施方案中，所述试剂盒包含CD105。在有些实施方案中，所述试剂盒包含VEGF、VEGF受体和CD105中的至少2种。在有些实施方案中，所述试剂盒包含至少2种已经与对血管生成抑制剂的敏感性相关联的基因。在有些实施方案中，所述试剂盒包含至少2种已经与对血管生成抑制剂的抗性相关联的基因。在有些实施方案中，所述试剂盒包含至少一个已经与对血管生成抑制剂的敏感性相关联的基因和一个已经与对血管生成抑制剂的抗性相关联的基因。
在其它实施方案中，试剂盒包含：用于检测来自待治疗的患者的肿瘤细胞样品中的VEGF、VEGF受体和CD105表达水平的试剂；和一个或多个剂量的抑制剂，包括但不限于本文所述的抗体，所述抑制剂在多种剂型中，诸如胶囊、囊片、凝胶帽、用于悬浮的粉末等。另外预见到，含有于检测来自待治疗的患者的肿瘤细胞样品中的VEGF、VEGF受体和CD105表达水平的试剂的试剂盒，另外包含试剂盒的任一个前述实施方案，用于与至少一种额外的血管生成抑制剂共同施用。
说明可包括用于实施本文所述的任何方法（包括治疗方法）的说明。说明还可包括对于满意的临床终点或可能发生的任何不良症状的指示，或管理机构如FDA对用于人受试者要求的其它信息。
说明可以是在“印刷品”上，如在纸或薄纸板（在试剂盒中或附在试剂盒上）上，或在标签上，所述标签贴在试剂盒或包装材料上或粘贴在含有试剂盒组分的管形瓶或试管上。说明还可被包括在计算机可读介质上，例如磁盘(软盘或硬盘)、光学CD如CD-或DVD-ROM/RAM、磁带、电子储存介质如RAM和ROM、IC接头和它们的杂合体如磁/光储存介质。
本申请的化合物和方法的实施方案意图是例证性的，而不是限制性的。本领域技术人员考虑到上面的教导（特别是可能与嵌合抗体中的改变有关的那些，所述嵌合抗体结合在描述的修饰周围的内皮因子，同时在内皮因子的结合方面维持在功能上几乎天然的），可以做出修改和变化。因此，应当理解，可以在公开的具体实施方案中做出变化，它们仍然在描述的本发明的范围内。
实施例
参考下面的非限制性实施例，可以更好地理解本申请，所述实施例作为本申请的示例性实施方案而提供。提供下述实施例，以便更充分地例证示例性实施方案，但是，不应解释为限制本申请的宽范围。尽管在本文中已经证实和描述了本申请的某些实施方案，显而易见，这样的实施方案仅作为实施例而提供。可以做出许多变化、改变和置换；应当理解，对本文所述的实施方案的不同改变可以用于实践本文所述的方法。
实施例1
BIAcore（表面等离子体共振: SPR）分析
嵌合的抗-内皮因子抗体结合
使用例如BIAcore分析，使用标准方案，可以评估抗体的亲和力。简而言之，将抗-组氨酸标签抗体偶联至BIAcore芯片上，所述BIAcore芯片用于捕获His-标记的重组人内皮因子，后者又用于测量嵌合的抗-内皮因子抗体的结合。在最少2个芯片制备批次和8个分析批次中，进行SPR试验的开发。在所述试验的开发中，评估下述参数：
（a）抗-his抗体与CM5芯片的偶联
通过常规的胺化学法，使用EDC/NHS，将抗-his标签抗体偶联到BIAcore CM5芯片上。将优化反应条件（浓度和pH）。
（b）人内皮因子的结合和Biosensor芯片的再生
使用不同的缓冲剂（基于以前的经验）来洗脱结合的抗体，测试人内皮因子结合和再生芯片的条件。一旦已经开发出用于再生的候选方法，在至少25个循环内测量单个芯片表面的结合容量和背景。目标是，得到< 10 RU/循环的平均背景增加和< 1%/循环的平均容量减小。
（c）人内皮因子的结合
测量人内皮因子的剂量响应，以便确定适合接近最大结合的的浓度。
（d）嵌合的抗-内皮因子抗体的结合
测量嵌合的抗-内皮因子抗体的剂量响应，以便确定动力学实验或平衡结合实验（其可以包括对比相对动力学常数ka和kd，或通过平行线方法对比相对功效）的合适范围。
（e）验证前实验
使用不同的芯片、不同的流动池和在不同的场合，在选择的条件下重复结合实验至少3次，以便得到关于测量的精确度和准确度的初步信息。在25 ℃在HBS-EP运行缓冲液中进行所有BIAcore实验。
抗-VEGF抗体结合
使用例如BIAcore分析，使用标准方案，可以评估抗体的亲和力。简而言之，将抗-组氨酸标签抗体偶联至BIAcore芯片上，所述BIAcore芯片用于捕获His-标记的重组人VEGF，后者又用于测量抗-VEGF抗体的结合。在最少2个芯片制备批次和8个分析批次中，进行SPR试验的开发。在所述试验的开发中，评估下述参数：
（a）抗-his抗体与CM5芯片的偶联
通过常规的胺化学法，使用EDC/NHS，将抗-his标签抗体偶联到BIAcore CM5芯片上。将优化反应条件（浓度和pH）。
（b）人VEGF的结合和Biosensor芯片的再生
使用不同的缓冲剂（基于以前的经验）来洗脱结合的抗体，测试人VEGF结合和再生芯片的条件。一旦已经开发出用于再生的候选方法，在至少25个循环内测量单个芯片表面的结合容量和背景。目标是，得到< 10 RU/循环的平均背景增加和< 1%/循环的平均容量减小。
（c）人VEGF的结合
测量人VEGF的剂量响应，以便确定适合接近最大结合的的浓度。
（d）抗- VEGF抗体的结合
测量嵌合的抗-VEGF抗体的剂量响应，以便确定动力学实验或平衡结合实验（其可以包括对比相对动力学常数ka和kd，或通过平行线方法对比相对功效）的合适范围。
（e）验证前实验
使用不同的芯片、不同的流动池和在不同的场合，在选择的条件下重复结合实验至少3次，以便得到关于测量的精确度和准确度的初步信息。在25 ℃在HBS-EP运行缓冲液中进行所有BIAcore实验。
实施例2
用于嵌合的抗-内皮因子抗体结合的ELISA
ELISA可以用于测定嵌合的抗-内皮因子抗体与内皮因子的结合。简而言之，根据下述步骤，进行ELISA：
1. 以100 μl/孔，用MAB9811-01（多克隆抗-内皮因子抗体，在PBS中，1500 ng/ml）包被Nunc Maxisorp平板。用密封器覆盖平板，并在4 ℃温育过夜（16-24小时）。
2. 用200 μl  PBS（没有吐温）洗涤平板2次。
3. 加入200 μl/孔的BSA封闭溶液（1% BSA），并在室温温育60分钟。
4. 使用BioTek平板洗涤器，用含有吐温的PBS（PBS-T）洗涤平板3次。
5. 加入100 μl/孔的CD105（R&D Systems目录1097-EN，在含有0.1% BSA的PBS-T中，100 ng/ml），并在室温温育60分钟。
6. 使用BioTek平板洗涤器用PBS-T洗涤平板3次。
7. 在实验孔中：加入100 μl/孔的在20、10、4、2、1、0.5和0.2 ng/ml（在含有0.1% BSA的PBS-T中稀释）的嵌合的抗-内皮因子抗体，并在室温温育60分钟。在阴性对照孔中：加入100 μl/孔的同种型匹配的对照抗体。
8. 使用BioTek平板洗涤器用PBS-T洗涤平板3次。
9. 向所有孔中加入100 μl/孔的与HRP（Jackson Immunoresearch）缀合的山羊抗-人IgG（在含有0.1% BSA的PBS-T中1:10000稀释）；在室温温育30-60分钟。
10. 使用BioTek平板洗涤器用PBS-T洗涤平板5次。
11. 加入100 μl/孔的TMB底物溶液，并在暗处无遮盖地温育15分钟。
12. 通过加入100 μl/孔的TMB停止溶液，停止反应。
一式三份地运行样品，并读出光密度，以构建标准曲线，并测定结合常数。使用Student氏t-检验或另一种标准检验，进行统计分析。
应当理解，可以使用类似的方案来测试抗体与VEGF的结合。
实施例3
抗体亲合力和在表达内皮因子的细胞上可利用的表位的数目
使用斯卡恰特作图分析，使用标准方案，可以评估抗体亲合力和在表达内皮因子的细胞上可利用的表位的数目。
简而言之，进行放射性标记的嵌合的抗-内皮因子抗体与表达内皮因子的KM-3白血病细胞和亚汇合的增殖中的HUVEC的直接结合的斯卡恰特作图分析。使用Iodo-Gen，并根据本领域技术人员已知的标准方法，用125I单个地放射性地标记纯化的抗-内皮因子抗体。关于每个IgG分子中的平均碘原子数，分别测定放射性标记的嵌合的抗-内皮因子抗体。使用固定量（0.1 μg）的每种125I-标记的mAb和2倍系列增量的表达内皮因子的KM-3或HUVEC细胞，进行滴定实验，以测定抗原结合活性。根据已知的方法，进行结合数据的斯卡恰特作图分析。通过该分析，估测平衡常数和每个细胞结合的mAb的平均最大数目。
实施例4
阻断活性的蛋白印迹试验
通过蛋白印迹，可以测试嵌合的抗-内皮因子抗体的阻断CD105刺激的、表达CD105的细胞的活化的能力，以检测在CD105信号传递途径中涉及的蛋白的磷酸化。
根据已知的蛋白印迹技术，进行蛋白印迹分析，以鉴别磷酸化的Smad1/5/8或Smad2。PSmad1和PSmad2抗体特异性地识别未转染的内皮细胞中的磷酸化的Smad1/5或磷酸化的Smad2。使用针对Smad1、Smad2、Smad5、Id1（Santa Cruz）和内皮因子的第一抗体，检测样品中的分子。通过增强的化学发光（ECL），进行检测。
实施例5
HUVEC生长的抑制和3H-胸苷掺入试验
许多试验可用于评估细胞生长的抑制。
在一个实施例中，在CO2培养箱中，在37 ℃，在亚汇合的条件下，在75-cm2烧瓶（Falcon, Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ）中培养HUVEC。通过用汉克平衡盐溶液（含有15 mM EDTA，在25 mM HEPES缓冲液pH 7.3中）在37 ℃温育15 min，使细胞脱离。用冰冷的PBS洗涤2次以后，以25,000细胞/ml的浓度，将细胞重新悬浮于内皮细胞生长培养基中。在其它实验中，在不含有FBS和牛脑提取物的内皮细胞生长培养基中，悬浮和培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。将细胞悬浮液的200 μl等分试样接种至96-孔培养板的每个孔中。在CO2培养箱中在37 ℃培养细胞过夜，然后一式三份地加入嵌合的抗-内皮因子抗体、抗-VEGF抗体、嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体的组合、对照IgG或TGF-β1。将培养板在培养箱中保持72小时，在这期间，每24小时更换新鲜培养基和抗体或对照。将3H-胸苷（1 μCi）加入每个孔中，将平板温育20小时。用PBS洗涤细胞，随后用100 μl/孔的胰蛋白酶-EDTA（0.05% 胰蛋白酶, 0.53 mM EDTA）在37 ℃处理15 min。使用Harvester 96（TOMTEC, Hamden, CT），将细胞收获到玻璃纤维过滤器（Wallac Printed FiltermatA）上，并在Trilux 1540 MicroBeta液体闪烁和发光计数器（Wallac, Turku, 芬兰）中测定3H-放射性。
实施例6
通过MTS试验测定HUVEC生长的抑制
许多试验可用于评估内皮细胞生长的抑制。
在一个实施例中，在CO2培养箱中，在37 ℃，在亚汇合的条件下，在96孔板（Falcon, Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ）中，以5,000细胞/孔，在含有0.5%胎牛血清和30 ng/mL VEGF的EGM-2培养基（Clonetics, Walkersville, MD）中，培养HUVEC。使细胞附着培养瓶至少24小时，然后用抗-VEGF抗体（有或没有嵌合的抗-内皮因子抗体）温育。将培养板在培养箱中保持72小时，在这期间，每24小时更换新鲜培养基和抗体或对照。在用抗体处理3天以后，将MTS四氮唑化合物加入孔中1小时，并根据生产商的说明书（Cell Titer 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega），在490 nm定量吸光度。一式三份地运行所有样品。
实施例7
细胞迁移抑制试验
使用博伊登室来测量迁移（化学激活），作为细胞增殖和活化的度量。
简而言之，如下评估细胞迁移：在4 ℃用纤连蛋白包被Costar核孔滤纸（8 mm孔）过夜。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤该室，用DMEM（有或没有血清，有或没有TGF-β3）填充下室。用胰蛋白酶处理细胞，并在有对照抗体、嵌合的抗-内皮因子抗体、抗-VEGF抗体或它们的组合存在下，以50,000细胞/ml的终浓度悬浮于DMEM中。将细胞悬浮液的150 μl等分试样加入上室中，并在37 ℃温育。在16小时以后，洗涤细胞，擦干上表面，以去除未迁移的细胞。在甲醇中固定膜，用水洗涤，染色，并计数在下表面上存在的细胞的数目。
实施例8
ADCC试验
使用例如下述的方案，可以关于它们的产生IL-2活化的天然杀伤（NK）细胞和诱导ADCC的能力，评估本文所述的抗体。
NK分离和IL-2活化的NK细胞的产生
分离外周血单核细胞（PBMC），并在含有10% FBS的RPMI中在4 ℃静置24小时。然后将PBMC放入含有2% FBS的RPMI中（总体积= 50 mL），将10mL细胞悬浮液在培养皿中铺平板。在37 ℃温育PBMC 2小时，收集未贴壁的细胞。以8 X 106/mL，用1000 U/mL的IL-2培养NK细胞48小时，随后正常培养5-8天，然后用于试验中。
天然的细胞毒性和ADCC试验
从培养物中刮出NK细胞，并收集在50mL锥形管中。用RPMI完全培养基洗涤细胞1次，并在1200 rpm离心10分钟。然后将NK细胞重新悬浮于5mL RPMI完全培养基中，并计数。在进行试验之前，将NK细胞计数标准化为10:1的效应物:靶物之比。将标准化的NK细胞铺平板，并将10 μL嵌合的抗-内皮因子抗体加入指定的孔中，在37 ℃温育30分钟。对照样品包括未处理的或对照抗体处理过的细胞群体。
收集目标靶细胞（HUVEC细胞），洗涤，在1200 rpm离心10分钟，并重新悬浮于5 mL RPMI完全培养基中。再次洗涤靶细胞，并重新悬浮于无血清的RPMI中，至1 x 106细胞/mL的终浓度。然后用终浓度为5ug/mL的钙黄绿素AM在37 ℃标记靶细胞1小时，随后用RPMI完全培养基洗涤2次。然后重新悬浮靶细胞，并加入NK细胞孔中。在37 ℃温育靶细胞/NK细胞组合4小时。温育以后，在1200 rpm离心平板5分钟，洗涤细胞，并重新悬浮于DPBS中。使用450/530 nm的激发/发射，读出荧光，所述发射是由抗体介导的细胞杀死的度量。
实施例9
给药剂量
使用本领域公认的和如上所述的方法，可以确定本文所述的抗体的最佳剂量。
在一个非限制性实施方案中，可以在不同的给药量和在不同的时间范围内，将本文所述的抗体施用给受试者。非限制性的剂量包括约0.01 mg/kg、约0.05 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1 mg/kg、约5 mg/kg、约10 mg/kg、约20 mg/kg、约30 mg/kg或之间的任意整数。另外，可以如下施用抗体的剂量：每周2次、每周1次、每2周1次、每3周1次、每4周1次、每6周1次、每8周1次、每12周1次或它们之间的任意周组合。也预见到给药循环，例如，每周1次或2次地施用抗体，持续4周，继之以不治疗的2周。在本发明内也预见到额外的给药循环，包括例如：本文描述的剂量和每周循环的不同组合。
在另一个实施方案中，可以基于下述剂量和方案来施用贝伐单抗（阿伐他汀?）：
Figure 2010800468401100002DEST_PATH_IMAGE001
实施例10
内皮因子（CD105）在实体瘤类型上的表达
使用免疫组织化学，评估了内皮因子在实体瘤上的表达。使冷冻的和丙酮固定的人癌样品与抗-内皮因子抗体SN6j腹水或同种型匹配的对照IgG腹水的10,000倍稀释液反应，并用DAKO染色试剂盒染色。用苏木素进行复染色。SN6j与肿瘤内的血管结合，而同种型匹配的对照IgG没有表现出任何染色。测试的所有肿瘤类型表现出在肿瘤脉管系统内的内皮因子表达。
实施例11
在移植到SCID小鼠中的人皮肤中进行的人乳腺癌肿瘤的抗血管生成疗法
可以关于它们对在移植到SCID小鼠中的人皮肤中进行的人乳腺癌肿瘤的抗血管生成作用，评估本文所述的抗体的作用。
简而言之，当移植物没有表现出炎症、收缩或排斥的征象时，将MCF-7细胞（8 x 106细胞，在0.1 ml PBS中）真皮内地移植到人全层皮肤（其移植入SCID小鼠中）中。在出现明显的可触知的肿瘤（在大多数情况下，直径为3-6 mm）之前，不治疗小鼠。将具有明显肿瘤的小鼠分组，用于治疗研究。用含有小鼠血清白蛋白（0.05% 终浓度）的无菌PBS，稀释每种含有下述物质的溶液（组合物）：（1）嵌合的抗-内皮因子抗体，（2）贝伐单抗（阿伐他汀?），（3）嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）的组合，或（4）同种型匹配的对照IgG。对于mAb疗法，通过小鼠的尾静脉，静脉内地（i.v.）施用200 μg/0.2 mL实验抗体或对照IgG。每2-3天进行给药。
在治疗期间，每天监测小鼠的肿瘤大小和发病率。使用电子天平（OHAUS?GT210型），每周称量小鼠2次。使用OptoDemo?软件（Fowler Co.），使用与电脑相连的电子测径器（PRO-MAX 6英寸测径器; Fowler Co., Newton, Mass.），每周测量肿瘤大小3次。使用例如下式，将测量的肿瘤直径转化成肿瘤体积：V=长度x宽度x高度x pi/6。使用Student氏t-检验，进行数据的统计分析，用于对比不同的小鼠组。
实施例12
卵巢癌的小鼠模型
为了测定嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体的治疗卵巢癌的能力，可以在SCID、转基因小鼠或裸鼠中使用卵巢癌细胞系。
简而言之，将卵巢癌细胞植入SCID、转基因小鼠或裸鼠中，以产生卵巢肿瘤。通过静脉内施用递增剂量（从1.8 mg/kg体重开始）的嵌合的抗-内皮因子抗体、贝伐单抗（阿伐他汀?）、嵌合的抗-内皮因子单克隆抗体（mAb）和贝伐单抗（阿伐他汀?）的组合或对照IgG，治疗携带建立的肿瘤的小鼠组。每周进行治疗2或3次。可以在所有组中使用化学疗法。监测小鼠，并测量肿瘤生长，每周2或3次。
实施例13
肾癌的小鼠模型
为了测定嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体的治疗肾癌的能力，可以在SCID、转基因小鼠或裸鼠中使用肾癌细胞系。
简而言之，将肾癌细胞植入SCID、转基因小鼠或裸鼠中，以产生肾肿瘤。通过静脉内施用递增剂量（从1.8 mg/kg体重开始）的嵌合的抗-内皮因子抗体、贝伐单抗（阿伐他汀?）、嵌合的抗-内皮因子单克隆抗体（mAb）和贝伐单抗（阿伐他汀?）的组合或对照IgG，治疗携带建立的肿瘤的小鼠组。每周进行治疗2或3次。可以在所有组中使用化学疗法。监测小鼠，并测量肿瘤生长，每周2或3次。
实施例14
结直肠癌的小鼠模型
为了测定嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体的治疗结直肠癌的能力，可以在SCID、转基因小鼠或裸鼠中使用乳腺癌细胞系。
简而言之，将乳腺癌细胞植入SCID、转基因小鼠或裸鼠中，以产生结直肠肿瘤。通过静脉内施用递增剂量（从10 mg/kg体重开始）的嵌合的抗-内皮因子抗体、贝伐单抗（阿伐他汀?）或嵌合的抗-内皮因子单克隆抗体（mAb）和贝伐单抗（阿伐他汀?）的组合，治疗携带建立的肿瘤的小鼠组。给对照动物施用对照IgG。每周进行治疗2或3次。可以在所有组中使用化学疗法。监测小鼠，并测量肿瘤生长，每周2或3次。
实施例15
脑癌的小鼠模型
为了测定嵌合的抗-内皮因子抗体和抗-VEGF抗体的治疗脑癌的能力，可以在SCID、转基因小鼠或裸鼠中使用多形性胶质母细胞瘤细胞系。
简而言之，将多形性胶质母细胞瘤癌细胞植入SCID、转基因小鼠或裸鼠中，以产生乳房肿瘤。通过静脉内施用递增剂量（从10 mg/kg体重开始）的嵌合的抗-内皮因子抗体、贝伐单抗（阿伐他汀?）或嵌合的抗-内皮因子单克隆抗体（mAb）和贝伐单抗（阿伐他汀?）的组合，治疗携带建立的肿瘤的小鼠组。给对照动物施用对照IgG。每周进行治疗2或3次。可以在所有组中使用化学疗法。监测小鼠，并测量肿瘤生长，每周2或3次。
实施例16
结直肠癌的联合治疗临床试验
该实施例描述了随机化的、隐蔽的、安慰剂对照的、多中心的、II期或III期研究，所述研究用于提供在结直肠癌患者中组合嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）的安全性和效能的初步评估。招募了大约约100至约800位患者，将约50至约400位患者分配至治疗组，将约50至约400位患者分配至安慰剂组。所述试验包括：每1-3周，静脉内施用重复剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体（约0.1至约10 mg/kg）或安慰剂，与此相组合，每2-3周，在第1天静脉内地施用约5 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），持续6-10个循环。可以在所有组中使用化学疗法。估测的研究时间范围是约6个月至约5年，在初步研究结束时，指示应答者的后续疗法。额外的结果度量如下：
主要结果度量：总应答率。研究的一个目标是证实，总应答率从使用贝伐单抗（阿伐他汀?）+安慰剂时的约40% 增加至使用贝伐单抗（阿伐他汀?）+嵌合的抗-内皮因子抗体时的约60% （或更高）。
可以评估的次要结果度量包括：应答持续时间、肿瘤进展时间、总存活率、严重的和不严重的不利事件。例如，治疗可以阻止疾病的进展（即，停滞），或可以导致改善。替代地或额外地，可以关于下述的一项或多项，测量其它目的：肿瘤负荷减小、新生血管形成减少、副作用减少、不良反应减少和/或患者顺应性增加。
实施例17
肾癌的联合治疗临床试验
该实施例描述了随机化的、隐蔽的、安慰剂对照的、多中心的、II期或III期研究，所述研究用于提供在具有肾细胞癌（肾癌）的患者中组合嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）的安全性和效能的初步评估。招募了大约约100至约800位患者，将约50至约400位患者分配至治疗组，将约50至约400位患者分配至安慰剂组。所述试验包括：每1-3周，静脉内施用重复剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体（约0.1至约30 mg/kg）或安慰剂，与此相组合，每2周，施用约2.5至约15 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），持续3-6个循环，或直到进展。也可以在2个治疗组中使用干扰素。估测的研究时间范围是约6个月至约5年，在初步研究结束时，指示应答者的后续疗法。额外的结果度量如下：
主要结果度量：无进展存活。研究的一个目标是证实，无进展存活从贝伐单抗（阿伐他汀?）+安慰剂组中的约9-13个月增加至贝伐单抗（阿伐他汀?）+嵌合的抗-内皮因子抗体组中的约14-18个月（或更多）。
可以评估的次要结果度量包括：应答持续时间、肿瘤进展时间、总存活率、严重的和不严重的不利事件。例如，治疗可以阻止疾病的进展（即，停滞），或可以导致改善。替代地或额外地，可以关于下述的一项或多项，测量其它目的：肿瘤负荷减小、新生血管形成减少、副作用减少、不良反应减少和/或患者顺应性增加。
实施例18
肝细胞癌的联合治疗临床试验
该实施例描述了随机化的、隐蔽的、安慰剂对照的、多中心的、II期或III期研究，所述研究用于提供在具有肝细胞癌（肝癌）的患者中组合嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）或索拉非尼的安全性和效能的初步评估。招募了大约约100至约800位患者，将约50至约400位患者分配至治疗组，将约50至约400位患者分配至安慰剂组。所述试验包括：每1-3周，静脉内施用重复剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体（约0.1至约30 mg/kg）或安慰剂，与此相组合，每2-3周，施用约2.5至约15 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），或每天施用约400mg的索拉非尼，持续3-6个循环，或直到进展。估测的研究时间范围是约6个月至约5年，在初步研究结束时，指示应答者的后续疗法。额外的结果度量如下：
主要结果度量：无进展存活。研究的一个目标是证实，无进展存活从贝伐单抗（阿伐他汀?）（或索拉非尼）+安慰剂组中的约3-9个月增加至贝伐单抗（阿伐他汀?）（或索拉非尼）和嵌合的抗-内皮因子抗体组中的约6-12个月（或更多）。
可以评估的次要结果度量包括：应答持续时间、肿瘤进展时间、总存活率、严重的和不严重的不利事件。例如，治疗可以阻止疾病的进展（即，停滞），或可以导致改善。替代地或额外地，可以关于下述的一项或多项，测量其它目的：肿瘤负荷减小、新生血管形成减少、副作用减少、不良反应减少和/或患者顺应性增加。
实施例19
卵巢癌的联合治疗临床试验
该实施例描述了随机化的、隐蔽的、安慰剂对照的、多中心的、II期或III期研究，所述研究用于提供在具有卵巢癌的患者中组合嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）的安全性和效能的初步评估。招募了大约约100至约800位患者，将约50至约400位患者分配至治疗组，将约50至约400位患者分配至安慰剂组。所述试验包括：每1-3周，静脉内施用重复剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体（约0.1至约30 mg/kg）或安慰剂，与此相组合，在第1天静脉内地施用约15 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），每21天静脉内地施用15 mg/kg，持续5个循环。也可以在两个治疗组中使用化学疗法。估测的研究时间范围是约6个月至约5年，在初步研究结束时，指示应答者的后续疗法。额外的结果度量如下：
主要结果度量: 无进展存活。研究的一个目标是证实，无进展存活从贝伐单抗（阿伐他汀?）+安慰剂组中的约3-6个月增加至贝伐单抗（阿伐他汀?）+嵌合的抗-内皮因子抗体组中的约4-12个月（或更多）。研究的一个目标是证实，总应答率从从贝伐单抗（阿伐他汀?）+安慰剂组中的约20% 增加至贝伐单抗（阿伐他汀?）+嵌合的抗-内皮因子抗体中的约30% （或更多）。
可以评估的次要结果度量包括：应答持续时间、肿瘤进展时间、总存活率、严重的和不严重的不利事件。例如，治疗可以阻止疾病的进展（即，停滞），或可以导致改善。替代地或额外地，可以关于下述的一项或多项，测量其它目的：肿瘤负荷减小、新生血管形成减少、副作用减少、不良反应减少和/或患者顺应性增加。
实施例20
多形性胶质母细胞瘤的联合治疗临床试验
该实施例描述了随机化的、隐蔽的、安慰剂对照的、多中心的、II期或III期研究，所述研究用于提供在具有多形性胶质母细胞瘤（脑癌）的患者中组合嵌合的抗-内皮因子抗体和贝伐单抗（阿伐他汀?）的安全性和效能的初步评估。招募了大约约100至约800位患者，将约50至约400位患者分配至治疗组，将约50至约400位患者分配至安慰剂组。所述试验包括：每1-3周，静脉内施用重复剂量的嵌合的抗-内皮因子抗体（约0.1至约30 mg/kg）或安慰剂，与此相组合，每2-3周施用约2.5至约15 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），持续3-6个循环，或直到进展。估测的研究时间范围是约6个月至约5年，在初步研究结束时，指示应答者的后续疗法。额外的结果度量如下：
主要结果度量: 无进展存活。研究的一个目标是证实，无进展存活从贝伐单抗（阿伐他汀?）+安慰剂组中的约3-9个月增加至贝伐单抗（阿伐他汀?）+嵌合的抗-内皮因子抗体组中的约4-12个月（或更多）。
可以评估的次要结果度量包括：应答持续时间、肿瘤进展时间、总存活率、严重的和不严重的不利事件。例如，治疗可以阻止疾病的进展（即，停滞），或可以导致改善。替代地或额外地，可以关于下述的一项或多项，测量其它目的：肿瘤负荷减小、新生血管形成减少、副作用减少、不良反应减少和/或患者顺应性增加。
实施例21
在食蟹猴中的全身毒理学研究
在研究中使用食蟹猴，以研究与贝伐单抗（阿伐他汀?）相组合的嵌合的抗-内皮因子抗体的毒理学。
简而言之，每周给食蟹猴施用10.0 mg/kg、30.0 mg/kg或100.0 mg/kg的嵌合的抗-内皮因子抗体和2.5、5、7.5、10或15 mg/kg的贝伐单抗（阿伐他汀?），持续3周。以相同的时间表，给安慰剂动物施用没有抗体的适当溶液。所述剂量作为静脉内快速推注在30-60分钟施用，并在每个剂量水平施用至少6只动物。通过下述指征中的一项或多项，评估毒理学：体重测量、基础生理学临床测量、系列血清化学、血液学评价和组织病理学评价。
实施例22
在食蟹猴中的局部毒理学研究
在研究中使用食蟹猴，以研究与ranibizumab（LUCENTIS?）相组合的嵌合的抗-内皮因子抗体当通过玻璃体内注射施用时的毒理学。
简而言之，每周通过玻璃体内注射，给食蟹猴施用0.25、1.25和2.5 mg嵌合的抗-内皮因子抗体和0.5 mg ranibizumab（LUCENTIS?），持续6周。以相同的时间表，给安慰剂动物施用没有抗体的适当溶液。所述剂量作为玻璃体内注射施用，并在每个剂量水平施用至少6只动物。通过下述指征中的一项或多项，评估毒理学：体重测量、基础生理学临床测量、系列血清化学、血液学评价和组织病理学评价。
实施例23
管网络形成
可以在管形成的二维体外模型中测试血管生成。
在一个实施例中，在CO2培养箱中，在37 ℃，在亚汇合的条件下，在烧瓶（Falcon, Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ）中，在有抗-VEGF抗体、嵌合的抗-内皮因子抗体或抗-VEGF和嵌合的抗-内皮因子抗体二者存在下，在含有5%胎牛血清和生长因子的EGM-2培养基（Clonetics, Walkersville, MD）中，培养HUVEC 8小时。包括无关的IgG抗体，作为单独的对照。然后，用胰蛋白酶轻轻处理HUVEC细胞，将10、000-15、000个细胞接种到聚合的ECMatrix凝胶（体外血管生成试验试剂盒, Chemicon）上。在过夜温育以后，在显微镜下观察细胞，计数封闭多边形的数目，测量连续的内皮细胞的长度，并拍照。一式三份地测试所有实验条件。
实施例24
出芽试验
可以在出芽的三维体外模型中测试血管生成。
从脐带分离出HUVEC，并在3℃和5% CO2下，在补充了10% 胎牛血清（FBS）（GIBCO, Carlsbad, CA）和内皮细胞生长添加物（ECGS）（BD Biosciences, Bedford, MA）的M199中培养。将第2-4代HUVEC用于所有实验（第0代是原代培养物）。在37 ℃和5% CO2下，在补充了10% FBS的DMEM（GIBCO, Carlsbad, CA）中常规地培养肺成纤维细胞（LF），并在P10和P15之间使用。也可以使用可从ATCC得到的其它成纤维细胞系。
制备细胞
在M199/10% FBS/Pen-Strep（1: 100）中繁殖HUVEC和成纤维细胞1-2天，然后珠连。对于HUVEC，在珠连前一天，将培养基更换为EGM-2（Clonetics, Walkersville, MD）。对于成纤维细胞，在包埋前一天，将培养基更换为EGM-2。珠连需要大约400 HUVEC/珠子。以20,000细胞/孔，将成纤维细胞用于24-孔板。也可以使用96-孔板，相应地放大数量。
Cytodex 3珠子制备
例如，可以在试验中使用Cytodex 3微载体珠子（Amersharn Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ）。
在室温（RT），在50-ml试管中，在50 ml PBS（pH = 7.4）中，水合和溶胀干燥的珠子（0.5 g）至少3小时，并把它置于振荡器上。
允许珠子沉降（约15 min）。抛弃上清液，在新鲜的PBS（50 ml）中洗涤珠子几分钟。
抛弃洗涤PBS，用新鲜的PBS替换：
将珠子悬浮液置于硅化处理的玻璃瓶（来自例如，Windshield Wiper或Sigrnacote）中。在115 ℃高压灭菌珠子15 min，然后在4 ℃储存。
试剂
纤维蛋白原溶液
通过将2 mg/ml纤维蛋白原溶解DPBS（在37 ℃水浴中）中，制备纤维蛋白原溶液。然后通过反转试管（而不是涡旋），混合该溶液。可以测定可凝结的蛋白的百分比，并相应地调节。然后使所述溶液穿过0.22-μm过滤器，以除菌。
抑肽酶
可以在去离子水中以4 U/ml重构低压冻干的抑肽酶，并无菌过滤。制备1 ml各自的等分试样，并在-20 ℃储存。
凝血酶
在无菌水中以50 U/ml重构凝血酶。制备0.5 ml的等分试样，并在-20 ℃储存。
用HUVEC包被珠子（第1天）
用胰蛋白酶处理HUVEC细胞。允许珠子沉降（不离心），抽吸上清液，在1 ml温暖的EGM-2培养基中简短地洗涤珠子。在FACS试管中，将珠子（2500）与在1.5 ml温暖的EGM-2培养基中的1 x 106 HUVEC混合，并垂直放入培养箱（其对于大约10个孔而言足够；如果需要，可以进行放大）中。
在37 ℃温育混合物4小时，每20 min反转和混合试管（在珠连以后，珠子应当看起来象微型高尔夫球，这指示足够出芽的包被）。
在4小时以后，将包被的珠子转移至T25组织培养瓶（Falcon, Bedford, MA），并在37 ℃和5% CO2下在5 ml EGM-2培养基中温育过夜。
将包被的珠子包埋在纤维蛋白凝胶中（第0天）
如上所述，制备2.0 mg/ml纤维蛋白原溶液，将0.15单位/ml的抑肽酶加入纤维蛋白原溶液中。
将包被的珠子转移至15 mL锥形管，并使珠子沉降。
将珠子重新悬浮于1 ml EGM-2培养基中，并转移至1.5-ml离心试管。用1 ml EGM-2培养基洗涤珠子3次，通过用P1000吸液管缓慢地上下抽吸进行混合。在盖玻片上计数珠子，并以500珠子/ml的浓度重新悬浮于纤维蛋白原溶液中。
将凝血酶（0.625单位/ml）加入24-孔板的每个孔中。将纤维蛋白原/珠子悬浮液（0.5 ml）加入每个孔，对于每个孔，更换吸液管尖头。
通过轻轻地上下抽吸约4-5次，混合凝血酶和纤维蛋白原/珠子；避免在纤维蛋白凝胶中产生气泡。在没有抗体或一种或多种对照抗体存在下，处理对照样品。用单独的抗-内皮因子抗体、单独的抗-VEGF抗体或它们的组合，处理实验样品。可以测试试剂的多个浓度。使纤维蛋白原/珠子溶液在室温凝结5分钟，然后在37 ℃/ 5% CO2凝结15 min。重要的是，在凝结的前5 min内不要扰动平板，以使对纤维蛋白的剪切最小化，所述剪切可以导致减少的出芽。
将EGM-2（1 mL）逐滴加入每个孔中。以20,000细胞/孔的浓度，将肺成纤维细胞接种到凝块的上面。每隔天用新鲜的EGM-2培养基替换培养基，直到达到希望的生长。
当形成纤维蛋白凝胶时，可能在凝胶中存在微小的气泡；它们将在3-4天内消失。出芽将出现在第2天至第4天之间。腔形成在大约第4-5天开始，且芽继续伸长。新形成的管在大约第4-6天开始分支。在第6-7天之前，微血管样结构开始与邻近的管融合；增加珠子/孔的数目会导致更早的融合。
使用接种在胶原中的HUVEC球状体，嵌合的TRC105会以剂量依赖性的方式（N=3）抑制VEGF诱导的出芽，如图3所示。
此外，尽管嵌合的TRC105阻断了VEGF诱导的出芽（对角线阴影），它没有抑制bFGF诱导的HUVEC球状体（N=2）的出芽（菱形阴影），如图4所示。
当与VEGF抑制剂阿伐他汀?（菱形阴影）组合时，会增强嵌合的TRC105对VEGF诱导的出芽的抑制作用（对角线阴影），如图5所示。
图6表明，当与激酶抑制剂PTK787（菱形阴影）组合时，没有增强嵌合的TRC105对VEGF诱导的出芽的抑制作用（对角线阴影）。
实施例25
体外血管生成芽的免疫细胞化学
为了内皮细胞（EC）核染色，用1 X PBS洗涤纤维蛋白凝胶2次，然后在2% 低聚甲醛中固定过夜。在用1 X PBS洗涤另外2次以后，然后用4', 6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）（Sigma, St. Louis, MO）对凝胶染色。
为了免疫染色，首先通过用10X胰蛋白酶简单地处理凝胶，去除LF。一旦去除所有成纤维细胞，立即用血清停止消化。然后用1X HBSS（Cellgro, Herndon, VA）充分地洗涤凝胶。然后在10% 福尔马林中固定培养物10分钟，并用0.5% Triton X-100渗透化处理5分钟。用在PBS中的5% BSA溶液阻断非特异性结合2小时。
以在封闭缓冲液中的1/100稀释度，使用第一抗体，并在4 ℃温育过夜。充分洗涤以后，通过在1/1000稀释度的物种-特异性的Alexa Fluor 488-缀合的或Alexa Fluor 568-缀合的第二抗体（Molecular Probes, Carlsbad, CA），检测结合的抗体。同种型-特异性的未结合的抗体用作对照。如果发生高背景，可以降低第一抗体或第二抗体的浓度，如果必要的话，可以增加温育和/或洗涤时间。以0.2μM的浓度，用TRITC-鬼笔环肽（Sigma, St. Louis, MO）对F-肌动蛋白染色。
在与数字照相机连接的IX70 Olympus显微镜上，捕获相差图像和荧光图像。在双光子Carl Zeiss MicroImaging LSM 510 Meta显微镜上，捕获荧光Z-系列图像堆，并用Metamorph软件（Universal Imaging Corporation, Downingtown PA）编译成三维表现。因而，可以容易地检测不同标志物的表达。
可以捕获沿着培养物的z-轴的荧光光学图像堆，以建立血管的三维表现。用DAPI（绿色）对核染色，并用波形蛋白（橙色）对血管壁染色。宽的空心腔是明显可见的，周围是单层内皮细胞。这些图像证实，在体外试验中存在的腔是细胞间的（不是细胞内的）裂缝，正如在基质胶试验中经常看到的。此外，可以证实，HUVEC是极化的，因为它们具有顶膜（朝向腔）和基底膜（在富含胶原IV的基膜和纤维蛋白凝胶附近）。
实施例26
脉络膜新血管生成的抑制
尽管动物本身没有形成年龄相关的黄斑变性（AMD），使用激光可以生成与在AMD中看到的那些类似的脉络膜新血管生成，以产生在布鲁赫膜和重叠的视网膜色素上皮（RPE）中的局部破裂。该损伤会刺激下面的脉络膜毛细血管异常生长进RPE层和视网膜下间隙。布鲁赫膜的破裂是所有形式的脉络膜新血管生成（CNV）共有的，包括湿型AMD特有的那些。
在激光诱导的脉络膜新血管生成模型中，在激光损伤前1天，和在激光损伤以后第2、5、8和11天，通过皮下（sc）注射下述抗体，治疗9或10只小鼠的组：（1）单独的嵌合的抗-内皮因子抗体，（2）单独的抗-VEG抗体，（3）在相同的组合物或不同的组合物中与抗-VEGF抗体组合的嵌合的抗-内皮因子抗体，或（4）对照抗体。在激光损伤以后14天，用荧光素-标记的葡聚糖（50 mg）静脉内地注射小鼠，安乐死，快速地解剖眼，进行脉络膜平展计数，或在最佳切割温度包埋化合物中冷冻并切片，进行病灶评价。
实施例27
还在成年食蟹猴中评价了本文所述组合物对激光诱导的脉络膜新血管生成的影响。
在该实验中，通过静脉内注射或玻璃体内注射，施用：（1）单独的嵌合的抗-内皮因子抗体，（2）单独的抗-VEGF抗体，（3）在相同的组合物或不同的组合物中与抗-VEGF抗体组合的嵌合的抗-内皮因子抗体，或（4）对照抗体。每只动物接受9或10次对每个视网膜的激光烧伤，在即将开始治疗之前，和在激光处理后15、20和29天，通过荧光素血管造影术，评估活跃的脉络膜新生血管病灶的发展。从激光损伤之前1周开始，每周1次地静脉内地施用组合物。从激光损伤之前1周开始，或在激光损伤后马上、2周（在此时，活跃的CNV病灶已经形成），每2周进行玻璃体内注射1次。从激光损伤之前1周开始，对照动物接受每周1次静脉内的或每2周1次玻璃体内的安慰剂注射。
通过荧光素血管造影术，观察CNV病灶，并根据标准规程分级。
实施例28
年龄相关性黄斑变性的治疗
第一研究
通过玻璃体内注射下述抗体：（1）单独的嵌合的抗-内皮因子抗体，（2）单独的ranibizumab，（3）在相同的组合物或不同的组合物中与ranibizumab组合的嵌合的抗-内皮因子抗体，或（4）对照抗体，治疗表现出年龄相关性黄斑变性的患者，以减轻或防止新生血管形成、黄斑疾病和视网膜损伤的发展。
作为治疗的第一步，患者接受全眼检查，以建立眼健康的基线。眼检查包括：检眼镜间接检查法、裂隙灯活组织显微镜检查、周边视网膜检查、眼内压测量、视敏度（独立的和最佳校正的）征候学、眼底照相术、荧光素血管造影术、光学相干体层摄影术、视网膜电描记术和A型扫描测量。
在初步检查以后，将如上所述的玻璃体内注射施用给患者的表现出AMD的受累眼。如果双眼都受累，可以单独地治疗它们。用眼用溶液注射待治疗的眼。
治疗后，在第1天、第2天、第7天、第15天、第30天和第60天，和此后2年每个月，检查患者的眼。因为复发的可能性，患者应当在此后每个月返回进行定期检查。在每个检查日，监测患者的玻璃质液化。另外，使用具有巩膜压陷的检眼镜间接检查法，监测患者的后玻璃体脱离。最后，通过周边视网膜检查、光学相干体层摄影术和荧光素血管造影图片，连续地监测患者呈现的AMD的程度，以监测视网膜下积液、血液、渗出物、RPE脱离、囊性视网膜变化的存在，或灰绿色视网膜下新生血管膜的存在。如果观察到复发新生血管形成的迹象，可能需要额外的治疗。可以每周或每月施用额外的治疗。在一个优选的实施方案中，在初次治疗以后，间隔1-6个月进行后续治疗。
第二研究
目的：证实玻璃体内的嵌合的抗-内皮因子抗体和ranibizumab用于治疗新生血管的年龄相关性黄斑变性（AMD）的效能。
方法：具有源自AMD的窝下鳞脉络膜新血管生成（CNV）的50-500位患者（50-500只眼）在批准的位点参与研究。
再次注射的标准是，黄斑中存在液体、中央视网膜厚度（CRT）增加了至少100微米、与黄斑中增加的液体有关的至少5个字母视力损失、新类型的CNV或新的黄斑出血。主要结果度量是，在12个月以后少于15个字母的视力损失的比例。在1周、1个月时，然后在5-12个月内每个月，进行最佳校正的视敏度测量和临床眼检查。
与基线相对比，测量平均视敏度和平均CRT。记录眼的和/或全身的副作用。
实施例29
损伤诱导的角膜新生血管形成的抑制
通过在间质内放置3根尼龙缝线，或通过角膜上皮的化学损伤（NaOH）和机械清创术，在雄性C57BL/6小鼠中诱导角膜新生血管形成。进行多个实验，其中腹膜内地施用下述抗体1次，或在即将损伤之前或损伤之后不久的多个时间点施用：（1）单独的嵌合的抗-内皮因子抗体，（2）单独的抗-VEGF抗体，（3）在相同的组合物或不同的组合物中与单独的抗-VEGF抗体组合的嵌合的抗-内皮因子抗体，或（4）对照抗体。
通过裂隙灯显微镜检查和组织学评价，评价角膜新生血管的生长。用内皮细胞特异性的荧光素缀合的凝集素标记脉管系统，并使用PECAM免疫组织化学，在角膜平展计数中以及在横断面中评价新生血管形成。使用裂隙灯显微镜检查，评价角膜水肿的存在，并在横截面中测量角膜厚度；角膜厚度的增加会反映水肿的量。通过分别使用HEMA-3或大鼠抗-小鼠F4/80单克隆抗体染色横截面，测定多形核白细胞（PMN）和巨噬细胞的数目。
可以以其它形式或其它方式实现本文所述的实施方案的方面，而不脱离其精神或基本特征。因此，在例证的所有方面考虑本公开内容，且不是限制性的，意图在其中包括落入等效方案的含义和范围内的所有变化。
                               序列表
 
<110> TRACON PHARMACEUTICALS, INC.
 
<120> 使用抗-内皮因子抗体和抗-VEGF剂联合治疗癌症
 
<130> 35882-712.601
 
<140> PCT/US2010/045651
<141> 2010-08-16
 
<150> 61/234,574
<151> 2009-08-17
 
<160> 12   
 
<170> PatentIn version 3.5
 
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 1
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
            20                  25                  30         
 
 
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
        35                  40                  45             
 
 
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65                  70                  75                  80 
 
 
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
                85                  90                  95     
 
 
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
            100                 105    
 
 
<210> 2
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 2
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
        35                  40                  45             
 
 
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
    50                  55                  60                  
 
 
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65                  70                  75                  80 
 
 
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
                85                  90                  95     
 
 
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105    
 
 
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 3
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
            20                  25                  30         
 
 
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
 
 
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Ser Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Tyr Cys Thr Arg Trp Arg Arg Phe Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110        
 
 
Thr Leu Thr Val Ser Ser
        115            
 
 
<210> 4
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 4
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45             
 
 
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95     
 
 
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110        
 
 
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125            
 
 
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140                
 
 
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
 
 
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175    
 
 
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190        
 
 
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205            
 
 
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220                
 
 
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225                 230                 235                 240
 
 
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270        
 
 
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285            
 
 
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300                
 
 
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330
 
 
<210> 5
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
 
<400> 5
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Gln Pro Gly Glu
1               5                   10                  15     
 
 
Thr Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
        35                  40                  45             
 
 
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
 
 
Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                85                  90                  95     
 
 
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
 
 
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120             
 
 
<210> 6
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
 
 
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80 
 
 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
 
 
Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val
            100                 105                 110        
 
 
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120            
 
 
<210> 7
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45             
 
 
Ser Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80 
 
 
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95     
 
 
Ala Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
            100                 105                 110        
 
 
Ser
   
 
 
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
 
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Asp Arg Val Ile Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30          
 
 
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
 
 
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                  
 
 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
 
 
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
        35                  40                  45             
 
 
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
                85                  90                  95     
 
 
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 10
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的多肽
 
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45             
 
 
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60                  
 
 
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Trp
                85                  90                  95     
 
 
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
            100                 105            
 
 
<210> 11
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
 
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30         
 
 
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45             
 
 
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95     
 
 
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110        
 
 
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125            
 
 
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140                
 
 
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
 
 
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175    
 
 
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190        
 
 
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205            
 
 
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220                
 
 
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225                 230                 235                 240
 
 
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270        
 
 
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285            
 
 
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300                
 
 
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330
 
 
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 人工序列的描述： 合成的6xHis标签
 
<400> 12
His His His His His His                                         
1               5   

Claims (28)

1. 一种抑制VEGF诱导的出芽的方法，其中使细胞接触包含嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物和包含VEGF拮抗剂的组合物；
所述嵌合的抗-内皮因子抗体包含：具有SEQ ID NO: 1所述的氨基酸序列的轻链可变区（VL）；具有SEQ ID NO: 2所述的氨基酸序列的轻链恒定区（CL）；具有SEQ ID NO: 3所述的氨基酸序列的重链可变区（VH）；和具有SEQ ID NO: 4所述的氨基酸序列的恒定区（Fc）。
2. 一种抑制受试者的癌症生长的方法，所述方法包括：施用包含嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物和包含VEGF拮抗剂的组合物；
所述嵌合的抗-内皮因子抗体包含：具有SEQ ID NO: 1所述的氨基酸序列的轻链可变区（VL）；具有SEQ ID NO: 2所述的氨基酸序列的轻链恒定区（CL）；具有SEQ ID NO: 3所述的氨基酸序列的重链可变区（VH）；和具有SEQ ID NO: 4所述的氨基酸序列的恒定区（Fc）。
3. 一种治疗受试者的血管生成相关疾病的方法，所述方法包括：施用包含嵌合的抗-内皮因子抗体的组合物和包含VEGF拮抗剂的组合物；
所述嵌合的抗-内皮因子抗体包含：具有SEQ ID NO: 1所述的氨基酸序列的轻链可变区（VL）；具有SEQ ID NO: 2所述的氨基酸序列的轻链恒定区（CL）；具有SEQ ID NO: 3所述的氨基酸序列的重链可变区（VH）；和具有SEQ ID NO: 4所述的氨基酸序列的恒定区（Fc）。
4. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物另外包含可接受的载体或赋形剂。
5. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中另外用治疗标记、诊断标记或二者标记所述抗-内皮因子抗体。
6. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中另外用治疗标记、诊断标记或二者标记所述VEGF拮抗剂。
7. 如权利要求3-6中任一项所述的方法，其中所述血管生成相关疾病是癌症或转移。
8. 如权利要求2-7中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
9. 如权利要求7所述的方法，其中所述癌症是基于上皮的肿瘤。
10. 如权利要求7所述的方法，其中所述癌症选自：肺癌、妇科恶性肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、结直肠癌、前列腺癌、肾癌、头癌、胰腺癌、肝癌（肝细胞癌）、子宫癌、颈癌、肾癌（肾细胞癌）、肉瘤、骨髓瘤和淋巴瘤。
11. 如权利要求3-6中任一项所述的方法，其中所述血管生成相关疾病是特征在于血管生成/新生血管形成的眼病、糖尿病肾病、炎性肠病（IBD）、类风湿性关节炎、骨关节炎、癌症或转移。
12. 如权利要求11所述的方法，其中所述眼病是黄斑变性。
13. 如权利要求11所述的方法，其中所述眼病是糖尿病视网膜病变。
14. 如权利要求11所述的方法，其中所述血管生成相关疾病是炎性肠病（IBD）。
15. 如权利要求11所述的方法，其中所述血管生成相关疾病是类风湿性关节炎。
16. 如权利要求11所述的方法，其中所述血管生成相关疾病是骨关节炎。
17. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中嵌合的抗-内皮因子抗体以约0.01 mg/kg、约0.05 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1 mg/kg、约5 mg/kg、约10 mg/kg、约20 mg/kg、约30 mg/kg的量存在于组合物中。
18. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂以约2.5 mg/kg、约5 mg/kg、约7.5 mg/kg、约10 mg/kg或约15 mg/kg的量存在于组合物中。
19. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂存在于相同组合物中。
20. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂存在于不同组合物中。
21. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相继地施用所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂。
22. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中同时地施用所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂。
23. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在相同部位施用所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂。
24. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在不同部位施用所述嵌合的抗-内皮因子抗体和所述VEGF拮抗剂。
25. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述VEGF拮抗剂是抗-VEGF抗体。
26. 如权利要求25所述的方法，其中所述抗-VEGF抗体是贝伐单抗。
27. 如权利要求2-26中任一项所述的方法，所述方法另外包括：施用一种或多种血管生成抑制剂。
28. 如权利要求27所述的方法，其中所述血管生成抑制剂是化学疗法、VEGF受体抑制剂或其组合。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112426526A (zh) * 2021-01-25 2021-03-02 北京达熙生物科技有限公司 一种nk细胞的制备方法及其在治疗癌症中的应用

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102325550B (zh) * 2008-12-16 2016-10-26 Qlt公司 光动力学疗法和抗vegf剂在治疗有害的脉络膜新血管系统中的联合应用
US8221753B2 (en) 2009-09-30 2012-07-17 Tracon Pharmaceuticals, Inc. Endoglin antibodies
EP2804620A4 (en) * 2012-01-18 2016-04-13 Neumedicines Inc IL-12 FOR RADIATION PROTECTION AND RADIATION-RELATED TOXICITY WEAKENING
UA115789C2 (uk) * 2012-09-05 2017-12-26 Трейкон Фармасутікалз, Інк. Композиція антитіла до cd105 та її застосування
JP6211380B2 (ja) * 2012-10-17 2017-10-11 丸善製薬株式会社 Ｔｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US9926375B2 (en) 2014-11-12 2018-03-27 Tracon Pharmaceuticals, Inc. Anti-endoglin antibodies and uses thereof
JP2017537084A (ja) 2014-11-12 2017-12-14 トラコン ファーマシューティカルズ、インコーポレイテッド 抗エンドグリン抗体及びその用途
IL290457B1 (en) 2015-12-30 2024-10-01 Kodiak Sciences Inc Antibodies and their conjugates
WO2018067819A1 (en) * 2016-10-06 2018-04-12 Tracon Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of cancers
EP3731865A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 F. Hoffmann-La Roche AG Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
MX2020009152A (es) 2018-03-02 2020-11-09 Kodiak Sciences Inc Anticuerpos de il-6 y constructos de fusion y conjugados de los mismos.
TW202019476A (zh) * 2018-07-26 2020-06-01 日商參天製藥股份有限公司 伴隨視網膜纖維化之眼部疾病之藥劑
WO2020127864A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for improving inhibition of vegf-binding to vegf-r1 of an anti-vegf antibody
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
CN115991773B (zh) * 2022-08-15 2023-11-17 营龄(武汉)生物科技有限公司 一种含有人血白蛋白的药物组合物
WO2024163905A1 (en) * 2023-02-03 2024-08-08 Genzyme Corporation Hsc-specific antibody conjugated lipid nanoparticles and uses thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5928641A (en) * 1996-05-31 1999-07-27 Health Research Inc. Anti-endoglin monoclonal antibodies and their use in antiangiogenic therapy
US20030129193A1 (en) * 2001-09-27 2003-07-10 Board Of Regents, The University Of Texas System And Peregrine Pharmaceuticals, Inc. Combined methods for tumor vasculature coaguligand treatment
US20040023313A1 (en) * 2002-04-05 2004-02-05 Boyle William J Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors
US20060292643A1 (en) * 2003-01-23 2006-12-28 Steffen Goletz Recognition molecules for the treatment and detection of tumours
US20070072797A1 (en) * 2005-05-03 2007-03-29 Ucb S.A. Epitopes

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US928641A (en) * 1908-10-09 1909-07-20 Levi E Edmunds Clasp for pilings.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5308626A (en) 1985-06-28 1994-05-03 Toni N. Mariani Lymphokine activated effector cells for antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) treatment of cancer and other diseases
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
GB9022788D0 (en) 1990-10-19 1990-12-05 Cortecs Ltd Pharmaceutical formulations
EP0617706B1 (en) 1991-11-25 2001-10-17 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US6190660B1 (en) 1996-05-31 2001-02-20 Health Research, Inc. Anti-endoglin monoclonal antibodies and their use in antiangiogenic therapy
US6610293B1 (en) 1997-06-16 2003-08-26 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Opsonic and protective monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of gram positive bacteria
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ATE336514T1 (de) 2000-02-11 2006-09-15 Merck Patent Gmbh Steigerung der zirkulierenden halbwertzeit von auf antikörpern basierenden fusionsproteinen
US20050053973A1 (en) 2001-04-26 2005-03-10 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
US20050089932A1 (en) 2001-04-26 2005-04-28 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
US20040175756A1 (en) 2001-04-26 2004-09-09 Avidia Research Institute Methods for using combinatorial libraries of monomer domains
US20050048512A1 (en) 2001-04-26 2005-03-03 Avidia Research Institute Combinatorial libraries of monomer domains
ATE472609T1 (de) 2001-04-26 2010-07-15 Amgen Mountain View Inc Kombinatorische bibliotheken von monomerdomänen
US7371849B2 (en) 2001-09-13 2008-05-13 Institute For Antibodies Co., Ltd. Methods of constructing camel antibody libraries
US7217798B2 (en) 2003-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of Fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis
US7097836B1 (en) 2002-10-23 2006-08-29 Health Research, Inc. Method for increasing the efficacy of anti-tumor agents by anti-endoglin antibody
MXPA05012723A (es) * 2003-05-30 2006-02-08 Genentech Inc Tratamiento con anticuerpos anti-vgf.
EP1675878A2 (en) 2003-10-24 2006-07-05 Avidia, Inc. Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
US8007797B2 (en) * 2006-09-28 2011-08-30 Merck Serono S.A. Junctional adhesion molecule-C (JAM-C) binding compounds and methods of their use
CA2689913C (en) * 2007-06-06 2014-10-07 Research Development Foundation Rtef-1 variants and the use thereof for inhibition of angiogenesis
WO2009033581A1 (en) * 2007-09-14 2009-03-19 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Substituted tricyclic compounds and methods of use thereof
TWI468417B (zh) * 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
WO2009091810A1 (en) * 2008-01-14 2009-07-23 Genentech, Inc. Methods for inhibiting angiogenesis using egfl8 antagonists
US20100082438A1 (en) * 2008-10-01 2010-04-01 Ronnie Jack Garmon Methods and systems for customer performance scoring

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5928641A (en) * 1996-05-31 1999-07-27 Health Research Inc. Anti-endoglin monoclonal antibodies and their use in antiangiogenic therapy
US20030129193A1 (en) * 2001-09-27 2003-07-10 Board Of Regents, The University Of Texas System And Peregrine Pharmaceuticals, Inc. Combined methods for tumor vasculature coaguligand treatment
US20040023313A1 (en) * 2002-04-05 2004-02-05 Boyle William J Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors
US20060292643A1 (en) * 2003-01-23 2006-12-28 Steffen Goletz Recognition molecules for the treatment and detection of tumours
US20070072797A1 (en) * 2005-05-03 2007-03-29 Ucb S.A. Epitopes

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROSEN,L.S.，ET AL: "EARLY EVIDENCE OF TOLERABILITY AND CLINICAL ACTIVITY FROM A PHASE 1 STUDY OF TRC105(ANT-CD105 ANTIBODY) IN PATIENTS WITH ADVANCED REFRACTORY CANCER", 《URL:HTTP//WWW.TRACONPHARMA.COM/PDFS/105ST101_TRC105_EORTC_NCI_AACR_POSTER.PDF》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112426526A (zh) * 2021-01-25 2021-03-02 北京达熙生物科技有限公司 一种nk细胞的制备方法及其在治疗癌症中的应用

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