CN102703469A

CN102703469A - 金钗石斛开花素DnFT基因及其克隆方法和应用

Info

Publication number: CN102703469A
Application number: CN2012101469703A
Authority: CN
Inventors: 孙姝兰; 李瑞红; 王爱珂; 梁山; 王小菁; 李洪清
Original assignee: South China Normal University
Current assignee: South China Normal University
Priority date: 2012-05-14
Filing date: 2012-05-14
Publication date: 2012-10-03

Abstract

本发明公开了金钗石斛开花素DnFT基因及其克隆方法和应用。金钗石斛开花素DnFT基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，其所编码的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本发明还验证了金钗石斛开花素DnFT基因能够促进植物开花，为DnFT基因在金钗石斛的成花诱导过程中的作用提供理论基础，并为金钗石斛的开花诱导途径网络的建立提供理论依据，并可为将来利用DnFT基因来改良金钗石斛或其他花卉，得到生长周期缩短的花卉新品种提供新的基因资源。

Description

金钗石斛开花素DnFT基因及其克隆方法和应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及金钗石斛开花素DnFT基因及其克隆方法、含有DnFT基因的重组表达载体、DnFT基因编码的多肽，以及DnFT基因在促进植物提取开花中的应用。

背景技术

金钗石斛( Dlnobile Lindl) 是常用名贵中药材, 除了药用价值外，金钗石斛因其花形优美，花色变化多端，花姿优美，清香宜人，花期长，常作为盆栽供室内欣赏，用于桌饰、吊挂，也为良好的切花材料，很受各国人民的喜爱，而成为世界著名的观赏花卉，在国际花卉市场中占有重要的地位。但是其生长周期特别长，因此能够促进兰花开花就能够获得较大的市场价值。

拟南芥的四条开花诱导途径为：光周期途径、春化途径、自主途径和GA(赤霉素) 途径。光周期诱导途径包括：光受体基因，生理种基因，开花时间基因及分生组织决定基因。植物中的光受体主要可分为三类：光敏色素（photochromes）、隐花色素 (cryptochromes)、向光蛋白 (phototropin)。光敏色素PHYA（PHYTOCHROME A）等和光受体CRY2(CYRPTOCHROME2)等首先感受光信号，并将光信号传递给下游生物钟基因CCA1(CIRCADIAN CLOCK ASSOCIATED 1)、TOC1(TIMING OF CHLOROPHYLL A/B BING PROTEIN 1)和LHY( LATE ELONGATED HYPOCOTYL)等(Michaels，2005；Aaron , 2009)，生物钟基因调控下游基因CO(CONSTANS )基因表达，进而通过调控开花整合因子FT、SOC1等基因的表达而调控开花（Abe，2005；Bohlenius，2006；Moon, 2005）。

拟南芥FT是光周期途径、春化途径和自主途径这些开花诱导途径共同下游靶基因，可见FT基因不仅在高等植物光周期途径中起主要开花信号传导作用，还参与调节其他开花途径的开花信号传导到顶端诱导花芽分化，说明FT在开花诱导综合途径中起重要的枢纽整合作用，是影响拟南芥开花时间的关键基因。FT 基因就是人们所寻找的开花素基因，其编码蛋白含有磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)的结构域。光周期途径中，在LD(长日照)条件下，CO调节FT基因在韧皮部的伴细胞表达，FT蛋白的分子量为23KD的小蛋白，小于胞间连丝允许通过的蛋白分子量限制，意味着FT蛋白可以在韧皮部自由通行。FT蛋白通过筛管运输到茎尖分生组织SAM，与bZIP转录因子FD通过蛋白质互作形成复合体，激活下游分生组织特异基因AP1、AP2、LFY等促进开花及花形态建成。( Michaels，2005；Yoo，2005；Laurent，2007；Franziska. 2008)。

不同的植物可能采用与拟南芥类似或截然不同的分子机制来调控开花时间。水稻中的Hd3a与FT 同源，编码蛋白属PEBP家族基因， Hd3a 是水稻中的开花素基因，表达模式及功能与FT 基因相似，在叶片的韧皮部组织中表达，通过维管组织运输到SAM促进开花（Laurent，2007；Bohlenius，2006；Ryo，2005）。

水稻的Hd1(Se1)是拟南芥CO的同源基因，在LD条件下水稻的Hd1抑制Hd3a的表达从而抑制开花（Izawa，2002；Kojima，2002），这与拟南芥的CO基因在LD下促进FT的表达从而促进开花完全相反。

FT同源基因并非都具有FT基因相同的功能。在拟南芥中FT的同源基因包括：FT，MFT（Mother of FT and TFL1）， ATC，BFT (Brother of FT )，TSF（Twins sister of FT），TFL1 (Terminal Flower 1 )六个家族成员。 TFL1与FT具有很高的同源性，但它是一个开花抑制因子，改变TFL1蛋白的一个氨基酸，就会把TFL1转变成开花激活因子，TFL1也可以像FT蛋白通过韧皮部运送到顶端分生组织中，但是TFL1在顶端分生组织中的大量表达，会抑制LFY和AP1/AP2的表达从而抑制拟南芥开花（Hanzawa，2005）。

不同的植物可能采用与拟南芥类似或截然不同的分子机制来调控开花时间，而且即便是在拟南芥中FT同源基因并非都具有FT基因相同的功能，因此，研究金钗石斛的FT基因（DnFT）在整个成花诱导综合调控网络中所起的作用，以及DnFT基因在成花诱导过程的作用，对于对将来利用DnFT基因来改良花卉得到生长周期缩短的花卉新品种具有十分重要的实践意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供金钗石斛开花素DnFT基因。

本发明的另一个目的在于提供由上述金钗石斛开花素DnFT基因编码的多肽。

本发明的另一个目的在于提供含有上述金钗石斛开花素DnFT基因的重组表达载体。

本发明的另一个目的在于提供上述金钗石斛开花素DnFT基因在促进植物提取开花中的应用。

本发明的另一个目的在于提供上述金钗石斛开花素DnFT基因的克隆方法。

本发明所采用的技术方案是：

金钗石斛开花素DnFT基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

金钗石斛开花素DnFT基因编码的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

含有金钗石斛开花素DnFT基因的重组表达载体。

所述重组表达载体中的载体为pCAMBIA1302表达载体。

金钗石斛开花素DnFT基因在促进植物提前开花中的应用。

所述植物为拟南芥。

金钗石斛开花素DnFT基因的克隆方法，包括如下步骤：

1）提取金钗石斛花芽总RNA，反转录得到cDNA；

2）利用3′RACE特异性引物进行3′RACE：

FT 3′-RACE 1st Primer：5′-CAACGACCAGCGCGACATTT-3′（SEQ ID NO:3），

FT 3′-RACE 2nd Primer：5′- AGTGTGCTATGAGAGCCCTC -3′（SEQ ID NO:4）；

3）利用5′RACE特异性引物与锚定引物，采用5′端加接头的方法进行5′RACE：

Ft5raceprimer1：5′-AAATGTCGCGCTGGTCGTTG-3′（SEQ ID NO:5），

Ft5raceprimer2：5′-TTGGACTTGGAGCATCTGGA-3′（SEQ ID NO:6），

锚定引物：5′-GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIGGGIGGGIIG -3′（SEQ ID NO:7）；

4）以引物qcFt upprimer：5′-AGATGAGTAGAGAGAGAGACCC-3′（SEQ ID NO:8），qcFtdownprimer：5′-CAGTCTTGCATTCTTCTTCCG-3′（SEQ ID NO:9）扩增DnFT基因的cDNA全长。

本发明的有益效果在于：

本发明克隆得到了金钗石斛的开花素DnFT基因，并且验证金钗石斛中的开花素DnFT基因确实能够起到促进开花的作用。本发明可以为DnFT基因在金钗石斛的成花诱导过程中的作用提供理论基础，并为金钗石斛的开花诱导途径网络的建立提供理论依据，这可为将来利用DnFT基因来改良金钗石斛或其他花卉，得到生长周期缩短的花卉新品种提供新的基因资源。

附图说明

图1是 DnFT cDNA片段3′RACE扩增产物电泳图（M：DNA DL 2000分子量标准；1：PCR产物；2：PUC19质粒；3：重组质粒；4：重组质粒EcoR I/Hind Ⅲ酶切产物）；

图 2 是DnFT cDNA片段5′RACE扩增产物电泳图（M：maker；1：5′RACE产物）；

图3是表达载体质粒酶切鉴定图（M： Marker; 1，2：重组质粒酶切）；

图 4是 17d的35S::DnFT拟南芥表型（a，e：Col；b，f：35S::DnFT-3；c，g：35S::DnFT-10；d，h：35S::DnFT-24）；

图5是 25d的35S::DnFT拟南芥表型。（从左到右依次为：Col，35S::DnFT-3，35S::DnFT-10，35S::DnFT-24）；

图6 是15d35S::DnFT拟南芥的DnFT，AP1，LFY表达水平的RT-PCR检测结果图（1：col；2：35S::DnFT-3；3：35S::DnFT-10；4：35S::DnFT-24）。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

以下实施例中所采用的分子生物学实验技术包括PCR扩增、质粒提取、质粒转化、DNA片段连接、酶切、凝胶电泳等都采用常规的方法，具体可参见《分子克隆实验指南》(第三版) (Sambrook J, Russell DW，Janssen K, Argentine J.黄培堂等译，2002，北京：科学出版社)。

实施例1

一、金钗石斛DnFT基因的克隆

1、引物设计

已构建的cDNA文库经测序、比对验证其中有两个FT同源序列，根据已得到的cDNA片段序列，利用生物软件Primer Premier 5.0，在靠近片段序列的3′端设计2条特异引物FT 3′-RACE 1st Primer和FT 3′-RACE 2nd Primer，在靠近片段序列的5’端设计2条特异引物Ft5raceprimer1和Ft5raceprimer2（表1）。

2、金钗石斛DnFT基因3′RACE 和5′RACE

（1）3′RACE：

利用CTAB方法提取的金钗石斛花芽总RNA，反转录得到cDNA，3′末端使用Takara 3′Full RACE Core Set Kit 试剂盒巢式法进行扩增，引物为FT 3′-RACE 1st Primer（SEQ ID NO:3）和FT 3′-RACE 2nd Primer（SEQ ID NO:4）。PCR反应条件如下：

反转录反应：

10×RNA PCR Buffer 1μl

Mgcl₂ (25mM) 2μl

dNTP Mixture (10Mm) 1μl

AMV reverse transcriptasexl 0.5μl

RNase inhitor(40u/μl) 0.25μl

Oligo dT-3site Adaptor Primer (2.5μm) 0.5μl

20 d 花芽RNA 0.5μl

RNase Free dH₂O 4.25μl

Total 10μl

按以下条件进行RT反应：

30℃ 10min

50℃ 30min

95℃ 5min

5℃ 5min

PCR反应：采用巢式PCR

第一次PCR反应体系如下：

10×Ex Taq Buffer 5μl

5U/μl Ex Taq （TaKaRa） 0.25μl

20μmol/L FT 3′-RACE 1st Primer 0.5μl

20μmol/L 3 site Adaptor Primer 0.5μl

反转录反应液 10μl

ddH₂O 33.75μl

第一次PCR反应液稀释10-100倍后作为模板，用3′二回巢式引物进行第二次PCR反应。

第二次PCR反应体系如下：

10×Ex Taq Buffer 5μl

5U/μl Ex Taq （TaKaRa） 0.25μl

10mmol/L dNTP 1μl

20μmol/L FT 3′-RACE 2nd Primer 0.5μl

20μmol/L 3 site Adaptor Primer 0.5μl

1次PCR反应产物稀释50倍 10μl

ddH₂O 32.75μl

3′RACE克隆电泳结果如图1所示，目的基因片段用Takara的回收纯化试剂盒回收。

（2）5′RACE

5′RACE采用5′端加接头的方法进行扩增。PCR反应条件如下：

反转录反应：

模板RNA 1μl

dNTP Miture (10Mm) 1μl

Oligd(T)16 Primer (2.5μm) 1μl

ddH₂O 7μl

65℃ 反应5min，冰浴2 min。

上述反应体系 10μl

5×primer script Tm Buffer 4μl

RNase inhitor 0.5μl

Primer script Reverse Transcriptase 1μl

ddH₂O 4.5μl

按以下条件进行RT反应：

50℃ 30min

70℃ 15min

cDNA纯化，加接头：

cDNA 25μl

5×TdT Buffer 10μl

0.1%BSA 5μl

10mMdCTP 2.5μl

TdT 2μl

ddH₂O 5.5μl

37℃反应1h之后产物进行纯化。

采用5′RACE引物Ft5raceprimer1（SEQ ID NO:5）、Ft5raceprimer2（SEQ ID NO:6）与锚定引物：5′-GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIGGGIGGGIIG -3′（SEQ ID NO:7，序列中I表示次黄嘌呤），进行巢式扩增，将3’RACE 的Adaptor Primer换成锚定引物，其余步骤同3′RACE。

5′RACE克隆电泳结果如图2所示，目的基因片段用Takara的回收纯化试剂盒回收。

（3）扩增全长

根据3′RACE、 5′RACE结果拼接得到的序列，分析后分别在3′UTR和5′UTR设计两对特异引物（qcFt upprimer和qcFtdownprimer）用来扩增全长。

qcFt upprimer：5′-AGATGAGTAGAGAGAGAGACCC-3′（SEQ ID NO:8）

qcFtdownprimer：5′-CAGTCTTGCATTCTTCTTCCG-3′（SEQ ID NO:9）

克隆步骤同cDNA 3′RACE第一次PCR反应。DnFT序列大小528 bp（SEQ ID NO：1），编码176个氨基酸（SEQ ID NO：2），在氨基酸水平上与文心兰的FT基因同源性达到90%，与欧洲山杨FT基因同源性达到83%。

二、DnFT植物表达载体重组子的构建和拟南芥转化

DnFT用包含BglⅡ酶切位点的特异引物进行PCR扩增，引物序列如下：

BglⅡFT upprimer：5′-AAAAGATCTATGAGTAGAGAGAGAGACCC-3′（SEQ ID NO:10）

BglⅡIFT downprimer: 5′-AAAAGATCTCAGTCTTGCATTCTTCTTCCG-3′（SEQ ID NO:11）

PCR产物直接用BglⅡ限制性内切酶进行酶切，用Takara回收试剂盒回收产物。

pCAMBIA1302表达载体用BglⅡ限制性内切酶进行酶切，1%琼脂糖凝胶回收大片段。利用T4DNA连接酶将FT序列插入到pCAMBIA1302表达载体。经酶切鉴定（图3），重组子再转化农杆菌LBA4404，采用花序轴浸泡法将重组质粒转化拟南芥。

三、转基因植株纯合子的筛选、纯合

将经重组子转化的T₀代拟南芥种子均匀铺布于含Hyg（25 mg/L）的MS培养基上进行筛选，得到抗性苗。抗性苗转移到土壤中成熟结实后得到T₁代种子，将其均匀铺布于含Hyg（25 mg/L）的MS培养基筛选，统计并选出抗性苗与非抗性苗的分离比3：1的即为单位点插入，移栽至土壤中，成熟后单株收种得T₂代种子。将单位点插入的T₂代种子种植在含Hyg（25 mg/L）的MS培养基的平板上继续筛选直至不再出现抗性与非抗性苗的分离，全部为抗性苗的即为纯合子。本次试验得到28个转基因株系，依次编号为35S::DnFT-1～28，随机挑选其中的3个单拷贝插入株系（35S::DnFT-3，35S::DnFT-10，35S::DnFT-24）用于下面的表型分析及基因表达分析，野生型拟南芥Col作为对照。

四、表型分析：开花时间的统计

开花标准用Boyes等（2001）所分时期的5.10期，即第一个花芽可见时期（抽薹）。采用绝对时间（播种至抽薹的天数）和相对时间（抽薹时莲座叶的数目）统计分析。

通过对35S::DnFT转基因植株和野生型Col的相对开花时间与绝对开花时间进行统计分析，发现35S::DnFT转基因植株出现特别明显的早花表型。35S::DnFT-3，35S::DnFT-10，35S::DnFT-24分别在14d，17d，13d时抽薹开花（图4 ），比野生型Col分别提前12d，9d，13d开花，开花莲座叶数分别是5片，7片，5片，比野生型Col少5-6片真叶（表2）。野生型Col在25天抽薹时，35S::DnFT-3，35S::DnFT-10，35S::DnFT-24已经出现了果荚（图5）。

五、半定量RT-PCR检测转基因植株中FT基因，LEY基因和AP1基因的表达水平

为了进一步研究35S::DnFT转基因植株出现特别明显的早花表型的原因，对野生型Col和转基因植株35S::DnFT-3，35S::DnFT-10， 35S::DnFT-24进行了目的基因DnFT，拟南芥的FT下游开花基因AP1，LFY的表达水平进行检测。

具体方法如下：参照Invitrogen 生物公司提供的使用说明用TRIZOL试剂提取总RNA。采用Invitrogen M-MLV逆转录酶进行 cDNA链的合成。使用以下PCR引物进行反应：

Actin-Fw：5’- CTACGAGCAGGAACTCGAGA-3’（SEQ ID NO:12）

Actin-Re：5’-GATGGACCTGACTCGTCATAC-3’（SEQ ID NO:13）

DnFTFw：5’-GCCAAGCCTAGGCATACATCGC-3’（SEQ ID NO:14）

DnFTRe：5’-CAGTCTTGCATTCTTCTTCCGCC-3’（SEQ ID NO:15）

LFY-Fw：5’-GCTAAAGACCGTGGCGAA-3’（SEQ ID NO:16）

LFY-Re ：5’-GCATCCACCACGTCCAGA-3’（SEQ ID NO:17）

AP1-Fw：5’-ATGGGAAGGGGTAGGGTTCAATTG-3’（SEQ ID NO:18）

AP1-Re：5’-ATGCTGTTTTGCTCCTGTATGG-3’（SEQ ID NO:19）

共同反应程序：

　 94℃ 2 min

　　 94℃ 30sec

　　 TM 30sec

　　72℃ 1 min

　　72℃ 10 min

　　26 cycles

12℃ store

检测结果见图6。从图中可以看出15d的拟南芥中，目的基因DnFT在野生型Col无表达，在35S::DnFT-3，35S::DnFT-10, 35S::DnFT-24均过量表达；拟南芥的FT下游开花基因AP1，LFY在野生型Col均无表达，而在35S::DnFT-3，35S::DnFT-10, 35S::DnFT-24均出现不同程度的表达，其中35S::DnFT-3，35S::DnFT-24的表达量比较高，35S::DnFT-10的表达量较低，这与35S::DnFT-3，35S::DnFT-24的开花时间特别早为14d，而35S::DnFT-10的开花时间为17d相一致。因此认为DnFT在野生型Col中异位超表达引起了拟南芥FT下游开花基因AP1，LFY的提前过量表达，使拟南芥提前结束了营养生长进入生殖生长，进而使拟南芥出现了特别明显的早花表型。由此可见，DnFT基因具有促进拟南芥提前开花的功能。

<110> 华南师范大学

<120> 金钗石斛开花素DnFT基因及其克隆方法和应用

<130>

<160> 19

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 531

<212> DNA

<213> 金钗石斛( Dlnobile Lindl)

<400> 1

atgagtagag agagagaccc tttgactgta ggaagagtga taggcgatgt gcttgatccc 60

ttcacaaggc gcgtttctct caaggttact tacaattcaa aagatgtcac taatggctta 120

gagctgaagc cctcagcagt ggtggagcag ccaagagttg aagttggagg gaatgatctc 180

aggactttct acactcttgt catggtcgat ccagatgctc caagtccaag tgatcctcag 240

cttagagagt acttacactg gttggtcaca gatatccccg caacgaccag cgcgacattt 300

ggcagtgaga tagtgagcta tgagagccca cggccaagcc taggcataca tcgcttcata 360

tttgttctct ttcatcagct cggccggcag acggtttacg cccccggctg gcgtcagaat 420

ttcaataccc gagacttcgc cgagctatat aatctgggtt cgccggtggc cgcggtctac 480

ttcaactgcc agagagaagc cggctccggc ggaagaagaa tgcaagactg a 531

<210> 2

<211> 176

<212> PRT

<213> 金钗石斛( Dlnobile Lindl)

<400> 2

Met Ser Arg Glu Arg Asp Pro Leu Thr Val Gly Arg Val Ile Gly Asp

1 5 10 15

Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Arg Val Ser Leu Lys Val Thr Tyr Asn

20 25 30

Ser Lys Asp Val Thr Asn Gly Leu Glu Leu Lys Pro Ser Ala Val Val

35 40 45

Glu Gln Pro Arg Val Glu Val Gly Gly Asn Asp Leu Arg Thr Phe Tyr

50 55 60

Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Gln

65 70 75 80

Arg Thr Phe Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro

85 90 95

Ser Asp Pro Gln Gly Ser Glu Ile Val Ser Tyr Glu Ser Pro Arg Pro

100 105 110

Ser Leu Gly Ile His Arg Phe Ile Phe Val Leu Phe His Gln Leu Gly

115 120 125

Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg

130 135 140

Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val Tyr

145 150 155 160

Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ala Gly Ser Gly Gly Arg Arg Met Gln Asp

165 170 175

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

caacgaccag cgcgacattt 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

agtgtgctat gagagccctc 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

aaatgtcgcg ctggtcgttg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ttggacttgg agcatctgga 20

<210> 7

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 次黄嘌呤

<222> (24)..(24)

<223> i表示次黄嘌呤

<220>

<221> 次黄嘌呤

<222> (28)..(28)

<223> i表示次黄嘌呤

<220>

<221> 次黄嘌呤

<222> (32)..(33)

<223> i表示次黄嘌呤

<400> 7

ggccacgcgt cgactagtac gggigggigg giig 34

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

agatgagtag agagagagac cc 22

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cagtcttgca ttcttcttcc g 21

<210> 10

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

aaatctagaa tgagtagaga gagagaccc 29

<210> 11

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

aaaggatccc agtcttgcat tcttcttccg 30

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ctacgagcag gaactcgaga 20

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

gatggacctg actcgtcata c 21

<210> 14

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

gccaagccta ggcatacatc gc 22

<210> 15

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

cagtcttgca ttcttcttcc gcc 23

<210> 16

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

gctaaagacc gtggcgaa 18

<210> 17

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

gcatccacca cgtccaga 18

<210> 18

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

atgggaaggg gtagggttca attg 24

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

atgctgtttt gctcctgtat gg 22

Claims

1.金钗石斛开花素DnFT基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的金钗石斛开花素DnFT基因编码的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.含有权利要求1所述的金钗石斛开花素DnFT基因的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中的载体为pCAMBIA1302表达载体。

5.权利要求1所述的金钗石斛开花素DnFT基因在促进植物提前开花中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为拟南芥。

7.权利要求1所述金钗石斛开花素DnFT基因的克隆方法，包括如下步骤：

1）提取金钗石斛花芽总RNA，反转录得到cDNA；

2）利用3′RACE特异性引物进行3′RACE：

FT 3′-RACE 1st Primer：5′-CAACGACCAGCGCGACATTT-3′（SEQ ID NO:3），

FT 3′-RACE 2nd Primer：5′- AGTGTGCTATGAGAGCCCTC -3′（SEQ ID NO:4）；

Ft5raceprimer1：5′-AAATGTCGCGCTGGTCGTTG-3′（SEQ ID NO:5），

Ft5raceprimer2：5′-TTGGACTTGGAGCATCTGGA-3′（SEQ ID NO:6），