CN102703374A - 贴壁型细胞培养方法 - Google Patents
贴壁型细胞培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102703374A CN102703374A CN2012101400619A CN201210140061A CN102703374A CN 102703374 A CN102703374 A CN 102703374A CN 2012101400619 A CN2012101400619 A CN 2012101400619A CN 201210140061 A CN201210140061 A CN 201210140061A CN 102703374 A CN102703374 A CN 102703374A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- layer
- cell culture
- culture
- adherent type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 42
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 27
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 20
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 11
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 7
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims description 4
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- -1 and As time goes on Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 101100230376 Acetivibrio thermocellus (strain ATCC 27405 / DSM 1237 / JCM 9322 / NBRC 103400 / NCIMB 10682 / NRRL B-4536 / VPI 7372) celI gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920004935 Trevira® Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124724 hepatitis-A vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012007 large scale cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一种贴壁型细胞培养方法，包括如下步骤：a、接种，通过蠕动泵循环将细胞接种瓶内的细胞接种液送入贴壁型细胞培养装置内，让细胞接种液纵向穿过细胞成长层与细胞截留层，使细胞与细胞生长层紧密接触，在恒温环境中静置一段时间，细胞粘附到细胞生长层上；b、培养，在稳定培养条件下，通过蠕动泵使培养液流动方向平行于细胞成长层，在给细胞提供营养的同时，将细胞代谢的产物带走；c、消化。本发明设备需求简单，操作方便，在需要扩大培养规模时，只需将多个培养器串联或并联即可，较容易实现。本发明的贴壁型细胞培养方法可广泛应用于细胞的种子筛选、培养液开发、基因药物表达及生产、疫苗的研究及生产的多个领域，它具有极大的市场价值。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种用于大规模体外培养哺乳类动物细胞、昆虫细胞、植物细胞及人类细胞的贴壁型细胞培养方法。
背景技术
采用大规模体外培养技术培养细胞是生产生物制品的有效方法。20世界60-70年代，用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术就已创立。近数十年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，采用传统的生物化学技术从动物组织中获取生物制品的量已远远不能满足需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，细胞大规模培养技术逐渐趋于成熟。
所谓细胞大规模培养技术(large-scale culture technology)是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等)，在细胞生物反应器(bioreactor)中高密度大量培养用于生产生物制品的细胞的技术。目前可大规模培养的细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢)细胞、BHK-21(仓鼠肾细胞)、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞，它是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。
第一代细胞培养技术使用转瓶(roller bottle)进行贴壁细胞的培养。转瓶培养技术具有劳动强度大、占地空间大、单位体积提供细胞生长的表面积小、细胞生长密度低、产品质量不均一、培养时监测和控制环境条件受限的缺点。随着生物技术的不断发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足细胞数量及其分泌产物的需求。
自70年代以来，采用微载体技术培养细胞及其生物反应器(Bioreactor)得到了较快的发展，生物反应器的种类越来越多，规模越来越大，较常见的细胞培养生物反应器有空气提升反应器、中空纤维管反应器、无泡搅拌反应器及篮式生物反应器等。八十年代以来，人们逐渐开始采用微载体技术以生物反应器培养代替鼠腹水的方法获得单克隆抗体。
动物细胞是一种无细胞壁的真核细胞，生长缓慢，对培养环境十分敏感。采用传统的生物化工技术进行动物细胞大量培养，除了要满足培养过程必需的营养要求外，有必需建立合理的控制模型，进行pH和溶氧(DO)的最佳控制。细胞生物反应器可通过微机有序地定量地控制加入动物细胞培养罐内的空气、氧气、氮气和二氧化碳四种气体的流量，使其保持最佳的比例来控制细胞培养液中的pH值和溶氧水平，使系统始终处于最佳状态，以满足动物细胞的生长对pH值和溶解氧的需要。如为提高或达到一定的溶氧水平可改变通入培养罐内气体中氧气和氮气的比例来实现控制DO值的目的。细胞生物反应器采用二氧化碳/碳酸氢钠(CO2/NaHCO3)缓冲液系统来控制培养液的pH值。目前微载体培养广泛应用于培养多种类型细胞，如293细胞、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞，但由于微载体对细胞有一定要求，仍有多种细胞无法采用微载体技术进行培养。
现在，细胞培养技术在规模和可靠性方面都有不断的发展，并且从中得到的蛋白质也被证明是安全有效的，人们对细胞培养的态度也已经发生了改变。许多人用和兽用的重要蛋白质药物和疫苗，尤其是那些相对较大、较复杂或糖基化(glycosylated)的蛋白质来说，细胞培养是首选的生产方式。
60年代初，英国AVRI研究所在贴壁细胞系BHK21中将口蹄疫病毒培养成功后，从最初的200ml和800ml玻璃容器开始，很快就放大到30L和100L不锈钢罐的培养规模。使用的是基于Eagle’s配方的培养液，补充5％成年牛血清和蛋白胨。1967年以后，Wellcome(现为Cooper动物保健)集团分布于欧洲、非洲和南美洲8个国家的生产厂商，应用此项技术工业规模化生产口蹄疫疫苗和兽用狂犬疫苗，已掌握了5000L的细胞罐大规模培养技术。
目前，国内很多企业仍然采用转瓶技术进行生产，然而由于转瓶技术具有不能大规模制备产品、生产批次间质量差异大、产品无法监控的缺点，新的生产线已经不允许采用转瓶技术。
由于微载体技术工艺操作复杂，对细胞生物反应器的要求高，设备完全依赖进口。目前国内企业对微载体技术的工艺不能完全掌握，只有少数企业可以做到300L的培养规模，国际上也仅有少数企业掌握了1000L以上的培养技术，无法超过5000L的培养规模，严重制约了疫苗及生物工程药物的研究及生产。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的缺陷，提供一种设备需求简单、操作方便、能满足大规模细胞培养的贴壁型细胞培养方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种贴壁型细胞培养方法，包括如下步骤：
a、接种
通过蠕动泵循环将细胞接种瓶内的细胞接种液送入贴壁型细胞培养装置内，贴壁型细胞培养装置设置有细胞成长层和设置于细胞成长层下方的细胞截留层，让细胞接种液纵向穿过细胞成长层与细胞截留层，增加细胞成长层上的细胞数量，同时细胞与细胞生长层紧密接触，在恒温环境中静置一段时间，细胞即可粘附到细胞生长层上；
b、培养
在保证贴壁型细胞培养装置的稳定培养条件下，通过蠕动泵将培养液注入贴壁型细胞培养装置中，采用切向流过滤技术，使培养液流动方向平行于细胞成长层，在给细胞提供营养的同时，将细胞代谢的产物带走；
c、消化
培养结束后，将贴壁型细胞培养装置中的培养液快速排干，加入消化液，静置后，使消化液穿过细胞成长层后排出，再加入新鲜培养液，新鲜培养液的流动方向平行于细胞成长层，从贴壁型细胞培养装置排出的培养液中收集细胞。
本发明的有益效果是：本发明的贴壁型细胞培养方法设备需求简单，操作方便，在需要扩大培养规模时，只需将多个培养器串联或并联即可，较容易实现。本发明的贴壁型细胞培养方法可广泛应用于细胞的种子筛选、培养液开发、基因药物表达及生产、疫苗的研究及生产的多个领域，它具有极大的市场价值。
附图说明
图1是贴壁型细胞培养装置的结构示意图；
图2是贴壁型细胞培养装置的俯视图；
图3是贴壁型细胞培养系统的结构示意图；
图4是本发明的贴壁型细胞培养方法及生产疫苗应用的流程框图。
在图1、图2中：1-壳体；2-细胞生长层；3-过滤层；4-支撑层；5-上部空腔；6-流道；7-下部空腔；8-进液口；9-出液口；10-透过液口；11-挡板。
在图3中：12-贴壁型细胞培养装置；13-透过液容器；14-储液装置；15-循环泵。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作详细描述。
如图4所示，一种贴壁型细胞培养方法，包括如下步骤：
a、接种
通过蠕动泵循环将细胞接种瓶内的细胞接种液送入贴壁型细胞培养装置内，贴壁型细胞培养装置设置有细胞成长层和设置于细胞成长层下方的细胞截留层，让细胞接种液纵向穿过细胞成长层与细胞截留层，增加细胞成长层上的细胞数量，同时细胞与细胞生长层紧密接触，在恒温环境中静置一段时间，细胞即可粘附到细胞生长层上；
b、培养
在保证贴壁型细胞培养装置的稳定培养条件下，通过蠕动泵将培养液注入贴壁型细胞培养装置中，采用切向流过滤技术，使培养液流动方向平行于细胞成长层，在给细胞提供营养的同时，将细胞代谢的产物带走；
c、消化
培养结束后，将贴壁型细胞培养装置中的培养液快速排干，加入消化液，静置后，使消化液穿过细胞成长层后排出，再加入新鲜培养液，新鲜培养液的流动方向平行于细胞成长层，从贴壁型细胞培养装置排出的培养液中收集细胞。
对于疫苗生产，可在培养结束后加入病毒，待病毒达到收获密度后，收集病毒。
如图1所示，本发明的方法中用到的贴壁型细胞培养装置，包括中部具有空腔的壳体1，该壳体1的空腔内水平设置有细胞生长层2、过滤层3和支撑层4，细胞生长层2位于过滤层3的上方，支撑层4位于过滤层3的下方，细胞生长层2、过滤层3、支撑层4三者将壳体1的内部空腔分割为位于细胞生长层2的上方的上部空腔5和位于支撑层4下方的下部空腔7，上部空腔5内设置有一个狭长的流道6，壳体1的上部设置有与该上部空腔5连通的至少一个进液口8和至少一个出液口9，下部空腔7为透过液流道，壳体1的下部设置有与该下部空腔7连通的至少一个透过液口10。
传统死端过滤技术液体的流动方向垂直于过滤膜，随着时间的推移，颗粒会逐渐在滤膜表面堆积，最终造成堵塞。由于细胞在培养过程中不可避免的会有部分细胞老化死亡，从而产生细胞碎片，造成滤膜的堵塞，故本发明运用了切向流过滤技术，切向流技术将液体流动方向平行于过滤膜，因而液体在流动的同时会将大量的颗粒从滤膜表面带走，避免了堵塞的情况。
由于细胞生长的过程中需要消耗大量的营养，也会产生大量的代谢废物，因此在细胞培养过程中不断的换培养液才能保证细胞的正常生长。同时，蛋白或病毒也存在于培养液中，及时的收获才能得到最大的设备利用率。因而，利用切向流技术进行换液非常适合细胞培养工艺。
如图2所示，壳体1的上部空腔5内设置有多块纵向的挡板11，这些挡板11均匀的水平排开，相邻的挡板11交错与壳体1的左壁、右壁连接，相邻挡板11相互平行且相邻挡板11之间留有间隙，这些挡板11与壳体1的内壁之间构成了迂回的狭长的流道6，进液口8设置于该流道6的起始处，出液口9设置于该流道6的终止处。培养液在狭长的流道6内流动，将营养物带给细胞，同时，将代谢废物带走。
在贴壁型细胞培养装置中，细胞生长层2为细胞亲和性良好的一层或两层以上的疏松多孔结构或细胞生长层2具有带透液孔的光滑表面，这可以在有限空间内提供最大的细胞接触表面，培养液可自由穿透该细胞生长层2到达过滤层3，该细胞生长层2可采用纤维素及其衍生物、聚酯纤维(尼龙)、壳聚糖及其衍生物、胶原蛋白、明胶、聚乳酸、聚乙烯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚氨酯泡沫微载体、海藻酸盐、葡聚糖、玻璃、陶瓷等材料或上述材料相结合制成。过滤层3为设置有过滤孔的细胞截留层，其中，过滤孔的孔径小于40um，在保证培养液透过的同时，保证细胞不会穿过该过滤层3。支撑层4保证过滤层3不会在压力下破损。
如图3所示，本发明的方法中用到的贴壁型细胞培养系统，包括透过液容器13、贴壁型细胞培养装置12以及通过补液调节该贴壁型细胞培养装置12的细胞培养条件的储液装置14，贴壁型细胞培养装置12的透过液口10通过管路与透过液容器13连接，贴壁型细胞培养装置12的出液口9通过管路与储液装置14的进液口8连接，贴壁型细胞培养装置12的进液口8通过管路与储液装置14的出液口9连接，贴壁型细胞培养装置12与储液装置14之间的管路设置有循环泵15。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (1)
1.一种贴壁型细胞培养方法，其特征在于所述贴壁型细胞培养方法包括如下步骤：
a、接种
通过蠕动泵循环将细胞接种瓶内的细胞接种液送入贴壁型细胞培养装置内，贴壁型细胞培养装置设置有细胞成长层和设置于细胞成长层下方的细胞截留层，让细胞接种液纵向穿过细胞成长层与细胞截留层，增加细胞成长层上的细胞数量，同时细胞与细胞生长层紧密接触，在恒温环境中静置一段时间，细胞即可粘附到细胞生长层上；
b、培养
在保证贴壁型细胞培养装置的稳定培养条件下，通过蠕动泵将培养液注入贴壁型细胞培养装置中，采用切向流过滤技术，使培养液流动方向平行于细胞成长层，在给细胞提供营养的同时，将细胞代谢的产物带走；
c、消化
培养结束后，将贴壁型细胞培养装置中的培养液快速排干，加入消化液，静置后，使消化液穿过细胞成长层后排出，再加入新鲜培养液，新鲜培养液的流动方向平行于细胞成长层，从贴壁型细胞培养装置排出的培养液中收集细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210140061.9A CN102703374B (zh) | 2012-05-07 | 2012-05-07 | 贴壁型细胞培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210140061.9A CN102703374B (zh) | 2012-05-07 | 2012-05-07 | 贴壁型细胞培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102703374A true CN102703374A (zh) | 2012-10-03 |
| CN102703374B CN102703374B (zh) | 2014-04-02 |
Family
ID=46896429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210140061.9A Active CN102703374B (zh) | 2012-05-07 | 2012-05-07 | 贴壁型细胞培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102703374B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107488699A (zh) * | 2017-09-18 | 2017-12-19 | 江苏大学 | 一种对细胞培养粘附材料的粘附性能比较的装置及方法 |
| CN108485973A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-09-04 | 上海长海医院 | 一种细胞共培养平板流动腔及其流体切应力刺激方法 |
| CN111304151A (zh) * | 2020-03-06 | 2020-06-19 | 广州洁特生物过滤股份有限公司 | 一种大规模细胞培养的方法 |
| CN112586675A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-02 | 江汉大学 | 纳豆自动化生产系统 |
| CN114317395A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种贴壁细胞大规模培养工艺 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1373800A (zh) * | 1997-01-16 | 2002-10-09 | 耶路撒冷希伯来语大学依苏姆研究开发公司 | 一种进行液体的生物学改变的装置和方法 |
-
2012
- 2012-05-07 CN CN201210140061.9A patent/CN102703374B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1373800A (zh) * | 1997-01-16 | 2002-10-09 | 耶路撒冷希伯来语大学依苏姆研究开发公司 | 一种进行液体的生物学改变的装置和方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| KIM等: "microfluidic biomechanical device for compressive cell stimulation and lysis", 《SENSORS AND ACTUATORS B:CHEMICAL》 * |
| 李峻城 等: "中空纤维细胞培养技术", 《国外医学：预防.诊断.治疗用生物制品分册》 * |
| 王立新 等: "动物细胞培养及应用", 《黄牛杂志》 * |
| 石凯 等: "固定化动物细胞大规模培养技术研究进展", 《化工进展》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107488699A (zh) * | 2017-09-18 | 2017-12-19 | 江苏大学 | 一种对细胞培养粘附材料的粘附性能比较的装置及方法 |
| CN108485973A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-09-04 | 上海长海医院 | 一种细胞共培养平板流动腔及其流体切应力刺激方法 |
| CN111304151A (zh) * | 2020-03-06 | 2020-06-19 | 广州洁特生物过滤股份有限公司 | 一种大规模细胞培养的方法 |
| CN112586675A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-02 | 江汉大学 | 纳豆自动化生产系统 |
| CN112586675B (zh) * | 2020-12-29 | 2022-02-08 | 江汉大学 | 纳豆自动化生产系统 |
| CN114317395A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种贴壁细胞大规模培养工艺 |
| CN114317395B (zh) * | 2021-12-31 | 2024-04-02 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种贴壁细胞大规模培养工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102703374B (zh) | 2014-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106047707B (zh) | 贴壁/悬浮型细胞培养单元、装置、系统及方法 | |
| CN101555455B (zh) | 一种微藻的培养/收获方法和系统 | |
| CN102703319B (zh) | 贴壁型细胞培养装置及贴壁型细胞培养系统 | |
| CN102703374B (zh) | 贴壁型细胞培养方法 | |
| TW200302274A (en) | Cell-cultivating device | |
| JPH09500818A (ja) | 細胞培養に使用される粒子沈降タンク | |
| EP2524962A1 (en) | Algae culture system | |
| CN103626290B (zh) | 一种厌氧颗粒污泥快速驯化反应器及快速驯化方法 | |
| CN103773741A (zh) | 笼式通气搅拌生物反应器制备流感疫苗的方法 | |
| CN102071137A (zh) | 连续灌注生物反应器/罐袋系统制备干细胞装置和方法 | |
| CN202576436U (zh) | 贴壁型细胞培养装置及贴壁型细胞培养系统 | |
| CN203625382U (zh) | 摆动式大规模悬浮细胞培养装置 | |
| CN104003775A (zh) | 一种有机肥的发酵方法 | |
| CN206033776U (zh) | 贴壁/悬浮型细胞培养单元、装置及系统 | |
| CN102002482B (zh) | 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒的生产方法 | |
| CN100397980C (zh) | 一种用于培养丹参不定根的气升式生物反应器 | |
| CN1232169C (zh) | 上升流贝类幼虫培育装置及培育方法 | |
| CN112592948A (zh) | 动物细胞的灌流培养方法 | |
| CN104974933B (zh) | 一种大规模连续多次悬浮瞬转表达重组蛋白的装置和方法 | |
| CN108862610A (zh) | 一种污水养殖微藻装置及其制作方法 | |
| CN107988053B (zh) | 一种实现固定化培养及废水深度净化的微藻培养系统 | |
| CN107460129A (zh) | 生物质与培养液分离的工业化微藻培养方法 | |
| CN109251847A (zh) | 利用阳光培养光合微生物的装置及方法 | |
| CN108342344A (zh) | 一种增大藻丝螺距和长度提高螺旋藻生长固碳速率的方法 | |
| CN102703325A (zh) | 一种低成本生产衣藻的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20151023 Address after: 510430, B1 factory building, third floor, Hengda Industrial Park, No. 3 Nanpu Avenue, Panyu, Guangdong, Guangzhou, China, B Patentee after: Guangzhou Saibotai Biological Technology Co. Ltd. Address before: 510000, No. 902, sports west building, No. 7, Sports West Road, Guangzhou, Guangdong, Tianhe District Patentee before: Dun Zhenyi |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Guangzhou Saibotai Biological Technology Co. Ltd. Document name: Notification of Passing Examination on Formalities |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210511 Address after: 215000 building A4, Yuewang wisdom Valley, 1463 Wuzhong Avenue, Yuexi street, Wuzhong Economic and Technological Development Zone, Suzhou City, Jiangsu Province Patentee after: Jiangsu Puxin biomedical Co.,Ltd. Address before: 510430 No.3, country Avenue, Nanpu, Guangzhou, Guangdong Province Patentee before: GUANGZHOU CELBIOTECH Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |