CN102675479A

CN102675479A - 一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法

Info

Publication number: CN102675479A
Application number: CN2012101546555A
Authority: CN
Inventors: 齐军茹; 廖劲松
Original assignee: PUYANG WEIBO BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd; South China University of Technology SCUT
Current assignee: PUYANG WEIBO BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd; South China University of Technology SCUT
Priority date: 2012-05-17
Filing date: 2012-05-17
Publication date: 2012-09-19

Abstract

本发明公开了一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。该方法将新鲜白灵菇原料切片、真空干燥、磨碎成干粉；干粉与蒸馏水按质量比为1∶10~1∶30混和，浸泡后，加白灵菇粉质量05~2%的复合酶，复合酶由纤维素酶和果胶酶按质量比为1∶1-3∶1混合，置50℃-70℃保温反应后，灭酶，于95~100℃水浴中浸提0.5~2h；离心，取上清液，浓缩，去除蛋白质，得脱蛋白酶解浓缩液，沉淀、干燥得白色白灵菇多糖。本发明从白灵菇采摘、加工中的废弃物中提取多糖，充分利用废弃物，不仅有利于规模化工业生产，而且找到了一种低耗能、高效的提取白灵菇多糖的方法。

Description

一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法

技术领域

本发明涉及白灵菇多糖的制备工艺，特别是涉及一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。

背景技术

白灵菇(Pleurotus eryngii var.nebroden-sis)，又称白阿魏蘑，隶属于伞菌目、侧耳科、侧耳属，为刺芹侧耳白色变种，因其菇体洁白、形似灵芝而得名，其肉质肥厚、细腻脆嫩、味道鲜美、个头大、口感好、商品性强，是继金针菇、香菇、猴头菇及竹荪之后又一种优质珍稀食用菌。据分析，白灵菇含蛋白质14.7%，脂肪4.31%，粗纤维15.4%，氨基酸总量为10.6%，此外还含有亚油酸、不饱和脂肪酸、多糖类、钙、铁、锌、锰等多种矿质元素和丰富的维生素C、E等，是一种食用和药用价值都很高的珍稀食用菌。所含丰富的真菌多糖，具有增强人体免疫力、调节人体生理平衡的作用。在国内外市场上十分畅销，属世界十大名菇之一，为天然绿色保健食品，开发前景非常广阔。现代药理学研究表明，白灵侧耳中所含的真菌多糖能增强人体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤、降低胆固醇含量、防止动脉硬化的作用。

由于培养环境条件与白灵菇生理特殊要求不相适应等原因，产生了一些白灵菇畸形菇，如菇体萎缩形，菇体偏黄变色等，降低了产品等级，畸形菇出现，究其原因关键在于出菇期温、湿、光、气协调不好，又由于长菇期管理不善等原因，导致菇蕾出现后逐步分化成子实体，在长菇期间常因温、光、气调节不好，导致菇体发育倚斜侧长，或驼背或盖面凹陷，或斑点麻脸、色变，以及采收过期，菇体超大，不符合等级，甚至失去商品价值，影响了栽培者的经济效益。随着白灵菇产业发展，白灵菇加工业也取得了一定进展，主要产品包括白灵菇保鲜产品、干品(干片)、速冻产品、罐头产品、盐渍产品、方便食品等。但是对于加工过程中的废弃物的开发应用目前国内还没有涉及，这是一种资源上的极大浪费。

以往的白灵菇多糖提取技术国内涉及很少，而传统的酸提、碱提、热水浸提等方法虽然都是提取多糖的经典方法，但热水浸提法时间长、效率低；而酸碱法又极易导致多糖的立体结构破坏及生物活性改变，因此，为探索更为高效、经济、可靠的提取方法具有现实意义。白灵菇子实体、菌丝体中除多糖外，还含有一定量的蛋白质、胶质和粗纤维等成分，如能采用有关酶类对白灵菇菌丝体和子实体进行预处理，将会有利于其糖类物质的溶出和分离，从而提高多糖的提取率。但是截至目前，利用复合酶解法提取白灵菇多糖的研究还没有报告，并且传统的提取方法提取率太低，活性成分损失较大，已经不能满足市场需求。

发明内容

本发明的目的克服现有技术的缺点，提供一种低耗能、高效的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。

本发明以白灵菇为原料，尤其是以白灵菇畸形菇、白灵菇加工中的废弃物，主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等为原料，通过原料浸泡处理、复合酶解、分离纯化以及干燥技术，得到一种低耗能、高效的提取白灵菇多糖的方法。提取到的白灵菇多糖，既可单独作为一种产品，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能食品。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，包括如下步骤和工艺条件：

(1)原料处理：将原料白灵菇洗净，沥干后，真空干燥，粉碎成80-100目白灵菇粉；

(2)纤维素酶和果胶酶复合酶解：白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为1∶10~1∶30混和，浸泡30~60min后，pH调至5.0-7.0，加所述白灵菇粉质量0.5~2%的复合酶，所述复合酶由纤维素酶和果胶酶按质量比为1∶1-3∶1混合；置50℃-70℃保温反应1.5-3h后，升温至95~100℃灭酶，并继续于95~100℃水浴中浸提0.5~2h；

（3）分离：将白灵菇多糖提取液于转速为3000~5000r/min离心15~30min，取上清液，真空浓缩至上清液体积的1/5~1/10；

（4）纯化：用Sevage法去除蛋白质3次，3000~5000r/min离心15~20min，取上清液，得脱蛋白酶解浓缩液，无水乙醇沉淀、真空干燥或喷雾干燥得白色白灵菇多糖。

为进一步实现发明目的，所述原料白灵菇包括白灵菇、白灵菇加工中的废弃物，所述废弃物主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根。

纤维素酶和果胶酶的质量比为1∶1-2∶1；

所述无水乙醇沉淀是用4倍无水乙醇沉淀白灵菇多糖。

所述纤维素酶的酶活为3.0╳10⁴u/g。

所述果胶酶的酶活为1.0╳10⁴u/g。

相对于现有技术，本发明具有如下优点和有益效果：

（1）本发明以白灵菇为原料，通过原料浸泡处理、复合酶解、分离纯化以及干燥技术提取白灵菇多糖；提取工艺合理有效，开创了从白灵菇以及加工废弃物提取多糖的工艺路线，极大限度地将白灵菇多糖提取出来；

（2）本发明采用酶处理提取白灵菇多糖，细胞破碎率高，多糖提取率高，反应条件温和，缩短了提取时间，确保了提取出的白灵菇多糖的生物活性，使最终白灵菇多糖营养性和功能性同时兼具；

（3）本发明的工艺路线不仅可以用以白灵菇为原料，而且能够用白灵菇加工中的废弃物，如白灵菇畸形菇、生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等，提高了经济效益，同时减少了环境的负担；

（4）本发明提取到的白灵菇多糖，即可单独作为一种产品，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能性食品，使保健食品的功能性日益多元化。

附图说明

图1为不同葡萄糖浓度的吸光值标准曲线图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表达的范围。

采用苯酚-硫酸法测定总糖含量：

苯酚硫酸法是测定总糖的常用方法。其基本原理是：选用乙醇除去样品中的单糖、低聚糖等干扰成分,然后用去离子水提取样品中所含的多糖类成分。多糖在浓硫酸作用下,水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物,然后用比色法测定其多糖含量。

标准曲线的制作：准确称取25mg葡萄糖于250mL容量瓶中加水至刻度线，摇匀，然后分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8（mL）于8支试管中，各加水补至2.0mL，然后缓慢地加入质量浓度为6%的苯酚液1.0mL及5.0mL浓硫酸，静置10分钟，摇匀，室温放置20分钟，以蒸馏水为对照，于495nm处测吸光值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，图1所示。其中该线性方程中y是函数（因变量吸光值），x是自变量（葡萄糖浓度），R是线性相关系数。R²=0.9971表明该线性方程高度线性相关。实验测定结果列入表1。

表1葡萄糖标准曲线的测定表

葡萄糖浓度C(μg)	40	60	80	100	120	140	160	180
									吸光度A	0.312	0.481	0.607	0.798	0.931	1.096	1.221	1.340

白灵菇多糖中总糖含量的测定：采用苯酚-硫酸法测定总糖含量，以葡萄糖为标准品，将白灵菇多糖25mg于250mL容量瓶中加水至刻度线，摇匀，然后吸取1.0mL于试管中，加水补至2.0mL，然后缓慢地加入质量浓度为6%的苯酚液1.0mL及5.0mL浓硫酸，静置10分钟，摇匀，室温放置20分钟，以蒸馏水为对照，于495nm处测吸光值，稀释后于495nm处测吸光值，对照标准曲线，计算出白灵菇多糖中总糖含量(纯度)。

计算公式：

总糖百分含量=（测量浓度X稀释倍数X提取液体积）/白灵菇多糖质量X100%;

得率=所得产品质量（g）/提取前白灵菇的质重(g)。

实施例1

一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，包括如下步骤：

（1）原料处理：将白灵菇畸形菇作为原料洗净，沥干后，真空干燥，粉碎成80目白灵菇干粉；该原料是白灵菇加工中的废弃物，包括白灵菇畸形菇、生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等；（2）纤维素酶和果胶酶复合酶解：白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为1∶30混和，浸泡30min后，质量浓度为0.5%稀盐酸调至pH为5.0，加入白灵菇粉质量2%的纤维素酶和果胶酶的复合酶，复合酶中纤维素酶与果胶酶的质量比为1∶1，置于70℃条件下保温反应1.5h后，立即升温至95℃灭酶，并继续于95℃水浴中浸提1h，得白灵菇多糖提取液。

（3）分离：将白灵菇多糖提取液于转速为4000r/min条件下离心30min，取上清液，真空浓缩至上清液体积的1/5。

（4）纯化：用Sevage法去除蛋白质3次，转速为5000r/min条件下离心15min，取上清液，得脱蛋白酶解浓缩液，4倍体积的质量浓度为99.5%的乙醇纯化处理，真空干燥得白色白灵菇多糖。经测定，多糖的得率为23.6%，纯度为72.5%。

传统的热水浸提白灵菇多糖，提取时间6~8h，多糖提取得率约5~8%，本实施例采用酶处理提取白灵菇多糖，与传统的热水浸提法相比，细胞破碎率高，多糖提取率高，反应条件温和，缩短了提取时间。

实施例2

（1）原料处理：将采摘后剩余的白灵菇根作为原料洗净，沥干后，真空干燥，粉碎成100目白灵菇干粉；该原料是白灵菇加工中的废弃物，包括白灵菇畸形菇、生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等；

（2）纤维素酶和果胶酶复合酶解：白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为1∶10混和，浸泡60min后，用质量浓度为0.5%稀盐酸调至pH为6.0，加白灵菇粉质量1%的复合酶，复合酶中纤维素酶与果胶酶的质量比为2∶1，置60℃保温反应3h后，立即升温至95℃灭酶，并继续于95℃水浴中浸提2h，得白灵菇多糖提取液。

（3）分离：将白灵菇多糖提取液于转速为3000r/min条件下离心15min，取上清液，真空浓缩至上清液体积的1/8。

（4）纯化：用Sevage法去除蛋白质3次，转速为4000r/min条件下离心20min，取上清液，得脱蛋白酶解浓缩液，4倍体积的质量浓度为99.5%的乙醇纯化处理，真空干燥得白色白灵菇多糖。经测定，多糖的得率为30.4%，纯度为72.8%。

实施例3

（1）原料处理：将破碎的白灵菇老边缘部或柄洗净，沥干后，真空干燥，粉碎成80目白灵菇干粉；该原料是白灵菇加工中的废弃物，包括白灵菇畸形菇、生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等；

（2）纤维素酶和果胶酶复合酶解：白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为1∶20混和，浸泡45min后，用质量浓度为0.5%稀盐酸调至pH为7.0，加白灵菇粉质量0.5%的复合酶，其中纤维素酶与果胶酶的质量比为3∶1，置50℃保温反应2.5h后，立即升温至100℃灭酶，并继续于100℃水浴中浸提0.5h，得白灵菇多糖提取液。

（3）分离：将白灵菇多糖提取液于5000r/min离心20min，取上清液，真空浓缩5倍至上清液体积的1/10。

（4）纯化：用Sevage法去除蛋白质3次，3000r/min离心20min，取上清液，得脱蛋白酶解浓缩液，4倍体积的质量浓度为99.5%的乙醇纯化处理，真空干燥得白色白灵菇多糖。经测定，多糖的得率为33.9%，纯度为73.7%。

Claims

1.一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于包括如下步骤和工艺条件：

2.根据权利要求1中所述利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于：所述原料白灵菇包括白灵菇、白灵菇加工中的废弃物，所述废弃物主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根。

3.根据权利要求1中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于：纤维素酶和果胶酶的比例为1∶1-2∶1；

4.根据权利要求1中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于：所述无水乙醇沉淀是用4倍无水乙醇沉淀白灵菇多糖。

5.根据权利要求1中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于：所述纤维素酶的酶活为3.0╳10⁴u/g。

6.根据权利要求1中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于：所述果胶酶的酶活为1.0╳10⁴u/g。