CN102675328A - 从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法 - Google Patents

Abstract

从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，以喜树果实为原料经粉碎-乙醇溶液萃取-浓缩萃取液至浸膏-浸膏经石油醚超声萃取脱脂-弱碱性水溶液超声提取浸膏-强碱性水溶液超声提取残留浸膏-弱碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到喜树碱粗品，强碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到桦木酸粗品-喜树碱和桦木酸粗品分别重结晶后得到产品。本发明操作简单、易于规模化生产、且实现了桦木酸和喜树碱的同时生产。

Description

从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法

技术领域

本发明涉及从植物中提取天然有效成分领域，尤其涉及一种从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法。

背景技术

喜树碱(Camptothecin，CPT)，为淡黄色片状结晶，分子式：C₂₀H₁₆N₂O₄，分子量348.3，分子结构式：

喜树碱，是1966年由美国学者从我国特有树种喜树中提取得到的生物碱，并由此而命名。喜树碱具有广谱抗肿瘤活性，是目前已应用的喜树碱类抗肿瘤药物CPT-11(Irinotecan，获FDA批准用于治疗直肠/结肠癌)、TPT (Topotecan，获FDA批准用于治疗卵巢癌)、羟基喜树碱的母体化合物。

桦木酸(Betulinic acid，BA)，又名白桦脂酸，是一种五环三萜化合物，为针状结晶，分子式：C₃₀H₄₈O₃，分子量456.7，分子结构式：

桦木酸具有显著抗HIV-1活性和抗癌活性，因其无毒受到广泛关注。目前，桦木酸衍生物bevirimat作为抗艾滋病药物在美国已进入IIb期临床研究阶段。

国家知识产权局于1996年5月8日公开了一种喜树碱的提取方法，该发明专利是以喜树的果实或根皮为原料，采用磨粉→水煮→煮液浓缩→膏状物→乙醇分离树胶杂质→析出粗品→氯仿混合液多次重结晶得到产品的工艺路线。1999年12月22日又公开了一种喜树碱的生产方法，该发明专利以喜树叶和果实为原料，采用原料粉碎→乙醇渗漉→超临界二氧化碳萃取剩余物质→浓缩渗漉液和萃取液→大孔吸附树脂柱层析→重结晶后得到产品的工艺路线。2000年4月26日公开了另外一种喜树碱的生产方法，以喜树叶及果实为原料，采用原料粉碎→乙醇及水渗漉→浓缩渗漉液→大孔吸附树脂柱层析→重结晶后得到产品的工艺路线。2003年4月16日公开了一种喜树碱的生产工艺，以喜树叶为原料，经粉碎→乙醇或碱水萃取→萃取液浓缩至浸膏→溶剂萃取并结晶得粗品→重结晶后得到产品的工艺路线。2003年7月9日公开了一种喜树碱、10-羟基喜树碱的生产工艺方法，以2～40天的喜树幼苗或喜树果实为原料，经粉碎→乙醇渗漉萃取→萃取液浓缩至浓水溶液→大孔吸附树脂柱层析→不同溶剂解吸液浓缩分别得喜树碱和10-羟基喜树碱粗品→分别重结晶后得喜树碱和10-羟基喜树碱产品的工艺路线。2004年2月4日公开了一种喜树碱高效生产工艺，该工艺将喜树种子清洗去除杂质后与醇或酸醇提取溶剂混合-匀浆固液萃取-空化混旋固液萃取-过滤-提取液浓缩-空化混旋液液萃取-纯化-成品。2005年6月1日公开了又一种喜树碱的生产工艺，以喜树碱含量为8/10000～10/10000喜树果实为原料，经粉碎→乙醇渗漉→浓缩渗漉液→滤过得滤液→溶剂萃取→混合溶剂1重结晶纯化→混合溶剂2重结晶纯化得粗晶→混合溶剂3精制纯化得精品。2009年1月21日公开了一种喜树碱的分离提取方法，以喜树果、喜树叶为原料，经粉碎→稀氢氧化钠溶液浸提→浸提液酸沉除杂→微滤→超滤→纳滤→大孔吸附树脂柱层析→乙醇解吸，乙醇解吸液浓缩至浸膏→乙酸乙酯萃取，萃取液结晶，得到喜树碱粗品→乙酸乙酯-丙酮的混合溶液进行重结晶得到喜树碱精品。2009年3月25日又公开了一种喜树碱的高效分离纯化方法，从喜树果实、叶等组织中提取分离喜树碱，工艺步骤包括：A.喜树碱粗品的提取，B.喜树碱粗品经分离、纯化制半成品，C.喜树碱半成品经浓缩、结晶制产品。

上述各发明均只涉及喜树碱的生产，而不涉及桦木酸的生产。喜树果实中喜树碱的含量约0.1％左右，而桦木酸的含量可达到2％，因而上述各发明生产过程中造成天然生物质资源的严重浪费。

2008年7月16日，国家知识产权局公开了一种用清洁方法从喜树果中提取白桦脂酸等有效成分的发明专利，该发明以喜树果为原料，利用聚酰胺柱层析和乙醇洗脱的方法提取白桦脂酸、羟基喜树碱和喜树碱的方法。该方法处理样品量小，采用层析法操作复杂，且获得的桦木酸产品中含有羟基喜树碱，不能获得两种化合物的纯品。

发明内容

本发明旨在提供一种不需要使用层析法、易于规模化生产、操作简单且能同时生产桦木酸和喜树碱的方法。

为了达到上述目的，本发明以喜树果实为原料，经粉碎-乙醇溶液萃取-浓缩萃取液至浸膏-浸膏经石油醚超声萃取脱脂-弱碱性水溶液超声提取浸膏-强碱性水溶液超声提取残留浸膏-弱碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到喜树碱粗品，强碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到桦木酸粗品-喜树碱和桦木酸粗品分别重结晶后得产品的工艺路线。

本发明的优点是：

1.本发明不使用层析法，易于规模化生产。

2.通过不同强度的碱性水溶液分离喜树碱和桦木酸，操作简单。

3.生产过程中不使用有毒溶剂，环境友好。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作进一步详细描述：

从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，以喜树果实为原料经粉碎-乙醇溶液萃取-浓缩萃取液至浸膏-浸膏经石油醚超声萃取脱脂-弱碱性水溶液超声提取浸膏-强碱性水溶液超声提取残留浸膏-弱碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到喜树碱粗品，强碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到桦木酸粗品-喜树碱和桦木酸粗品分别重结晶后得到产品的工艺路线。

所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，乙醇溶液体积浓度是60％～100％。

所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，超声提取时间10～120分钟，超声波频率20～40千赫兹。

所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，弱碱性水溶液是碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、乙酸钠。

所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，强碱性水溶液是氢氧化钠、氢氧化钾。

所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，喜树碱重结晶溶剂是乙酸、乙醇、二氯甲烷，桦木酸重结晶溶剂是乙醇。

实施例1

喜树果粉20千克，加入80％乙醇溶液200升萃取过夜，过滤后再以80％乙醇100升萃取一次，合并萃取液浓缩至浸膏，浸膏经石油醚在20千赫兹下超声萃取90分钟脱脂后，以0.5％碳酸钠水溶液在40千赫兹下超声提取浸膏3次，每次30分钟，合并提取液，残留浸膏再以0.5％氢氧化钠水溶液在20千赫兹下超声提取3次，每次10分钟。碳酸钠水溶液酸化至pH 5，放置过夜析出沉淀过滤得到喜树碱粗品。氢氧化钠水溶液酸化至pH 3，放置过夜析出沉淀、过滤得桦木酸粗品。喜树碱粗品以乙酸重结晶，得到喜树碱产品7.6克，产品纯度97％。桦木酸粗品经乙醇重结晶后得到桦木酸产品200克，产品纯度95％。

实施例2

喜树果粉20千克，加入60％乙醇溶液200升萃取过夜，过滤后再以80％乙醇100升萃取一次，合并萃取液浓缩至浸膏，浸膏经石油醚在40千赫兹下超声萃取60分钟脱脂后，以1％乙酸钠水溶液在40千赫兹下超声提取浸膏3次，每次120分钟，合并提取液，残留浸膏再以1％氢氧化钾水溶液在20千赫兹下超声提取3次，每次10分钟。乙酸钠水溶液酸化至pH 5，放置过夜析出沉淀过滤得到喜树碱粗品。氢氧化钾水溶液酸化至pH 3，放置过夜析出沉淀、过滤得桦木酸粗品。喜树碱粗品以乙醇重结晶，得到喜树碱产品8克，产品纯度97％。桦木酸粗品经乙醇重结晶后得到桦木酸产品180克，产品纯度94％。

实施例3

喜树果粉20千克，加入95％乙醇溶液200升萃取过夜，过滤后再以60％乙醇100升萃取一次，合并萃取液浓缩至浸膏，浸膏经石油醚在40千赫兹下超声萃取120分钟脱脂后，以0.2％磷酸氢二钠水溶液在40千赫兹下超声提取浸膏3次，每次120分钟，合并提取液，残留浸膏再以0.3％氢氧化钾水溶液在40千赫兹下超声提取3次，每次60分钟。磷酸氢二钠水溶液酸化至pH 5，放置过夜析出沉淀过滤得到喜树碱粗品。氢氧化钾水溶液酸化至pH 3，放置过夜析出沉淀、过滤得桦木酸粗品。喜树碱粗品以二氯甲烷重结晶，得到喜树碱产品6.5克，产品纯度96％。桦木酸粗品经乙醇重结晶后得到桦木酸产品210克，产品纯度95％。

Claims (6)

1.从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于以喜树果实为原料经粉碎-乙醇溶液萃取-浓缩萃取液至浸膏-浸膏经石油醚超声萃取脱脂-弱碱性水溶液超声提取浸膏-强碱性水溶液超声提取残留浸膏-弱碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到喜树碱粗品，强碱性提取液酸化、析出沉淀、过滤得到桦木酸粗品-喜树碱和桦木酸粗品分别重结晶后得到产品的工艺路线。

2.按照权利要求1所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于乙醇溶液体积浓度是60％～100％。

3.按照权利要求1所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于超声提取时间10～120分钟，超声波频率20～40千赫兹。

4.按照权利要求1所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于弱碱性水溶液是碳酸钠、碳酸氢二钠、磷酸氢钠、乙酸钠。

5.按照权利要求1所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于强碱性水溶液是氢氧化钠、氢氧化钾。

6.按照权利要求1所述的从喜树果实中提取桦木酸和喜树碱的方法，其特征在于喜树碱重结晶溶剂是乙酸、乙醇、二氯甲烷，桦木酸重结晶溶剂是乙醇。